BG107448A - Използване щамове на parapoxvirus ovis за получаване на противовирусни лекарства и лекарства срещу рак - Google Patents

Използване щамове на parapoxvirus ovis за получаване на противовирусни лекарства и лекарства срещу рак Download PDF

Info

Publication number
BG107448A
BG107448A BG107448A BG10744803A BG107448A BG 107448 A BG107448 A BG 107448A BG 107448 A BG107448 A BG 107448A BG 10744803 A BG10744803 A BG 10744803A BG 107448 A BG107448 A BG 107448A
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
preparation
strains
pharmaceutical formulations
medicaments
cells
Prior art date
Application number
BG107448A
Other languages
English (en)
Inventor
Olaf Weber
Tobias Schlapp
Angela Siegling
Andreas Knorr
Claudia Hirth-Dietrich
Gudrun Theiss
Original Assignee
Bayer Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE10122451A external-priority patent/DE10122451A1/de
Application filed by Bayer Aktiengesellschaft filed Critical Bayer Aktiengesellschaft
Publication of BG107448A publication Critical patent/BG107448A/bg

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/12—Keratolytics, e.g. wart or anti-corn preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24211—Parapoxvirus, e.g. Orf virus
    • C12N2710/24232—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретението се отнася до приложението на щамовена Parapoxvirus ovis като имунотерапевтик при имунна недостатъчност от инфекциозно или неинфекциозно естество, за лечение на туморни заболявания, вирусни инфекции и съпровождащите ги заболявания, както и за получаването на лекарствени средства за хуманната и ветеринарната медицина.

Description

Област на техниката
Настоящото изобретение се отнася за приложението на щамове на Parapoxvirus ovis като имунотерапевтици при слабост на имунната защита от инфекциозно или неинфекциозно естество, както и за приложението на щамове на Parapoxvirus ovis за лечение на туморни заболявания, вирусни инфекции и свързани с тях заболявания, както и за приложението на щамове на Parapoxvirus ovis за получаването на лекарствени средства за използване от хора и животни.
Настоящото изобретение се отнася по-нататък за приложението на щамове на Parapoxvirus ovis и получените от тях лекарствени форми като имунотерапевтици или имунопрофилактици при стрес-метафилаксия за възпрепятстване и предотвратяване на инфекциозни заболявания след стрес (например операции), за приложението при инфекциозна профилактика за възпрепятстване и предотвратяване на инфекциозни заболявания чрез приемане на доза преди операции или интервенции (например преди имплантация на протези или преди зъболекарски интервенции), за приложението при инфекциозна метафилаксия или терапия на остри или хронични вирусни инфекции например на дихателния тракт, вирусни инфекции на папилома, инфекция с херпес вируси, HIV-инфекция, вирусна инфекция на вътрешни органи като например инфекция с хепатитни вируси, за приложението при лечение на рани за ускоряване на оздравителните процеси и за приложението за поддържане на лечението на бавно или незаздравяващи рани (например Ulcus cruris), за приложението при заболявания като мултипна склероза, астма, брадавици и други нови образувания на кожата, приложението при заболявания на алергичните форми, приложението за възпрепятстване на поява на системни алергии както и приложението при токсични алергии и приложението за подобряване на общото състояние например при възрастни, при което в рамките на изобретението като щамове на Parapoxvirus ovis се използват щамовете NZ2, NZ-7, NZ-10 и orf-
11.
По-нататък могат да се използват получени чрез пасаж и/или адаптация на определени клетки например WI-38, MRC-5 или vero-клетки производни на тези щамове съответно части или частички от вируси на тези щамове или тяхни производни. Под части се разбират отделени посредством подходящи вектори например Vaccinia в подходящи системи например фибробластни клетъчни култури геномни или субгеномни фрагменти. Под частички се разбират получени чрез биохимично пречистване например чрез хроматография фракции на обработени физически например чрез въздействие на ултразвук частици.
По-нататък настоящото изобретение се отнася за приложението на посочените щамове на Parapoxvirus ovis за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания. Освен това изобретението се отнася за приложението на посочените щамове на Parapoxvirus ovis в комбинация с други средства за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания за антивирусна и антиракова терапия.
Предшестващо състояние на техниката
Известно е, че латентно и хронично устойчиви вирусни инфекции могат чрез имуносупресия да се активират съответно реактивират, или обратно, че имунната система потиска остро заболяване, което може да се причини от вирус, който е латентен (например възбуждане на латентна инфекция с херпесен вирус при имуносупресия: мехурчета върху устните при стрес или приемане на кортизон). По-нататък е известно, че хронично устойчиви и латентни вирусни инфекции трудно или въобще не се влияят от обичайни антивирусни субстанции на нискомолекулна основа.
Една причина за това може да бъде липсващата вирусна ензимна активност при такива инфекции (например липсата на вирусна полимераза-активност, която трябва първо да вгради един нуклеозиден инхибитор във вирусната нуклеинова киселина, за да може да доведе например до прекъсване на веригата във вирусната DNA; например липсата на вирусна тимидинкиназа-активност, която например първо трябва да фосфорилира едно антивирусно съединение, за да може да стане активно) или липсващото разпознаване на инфектирани или изродени клетки например ракови клетки или вирусни антигени от имунната система на стопанина.
Също така е известно, че при хронични устойчиви вирусни инфекции една суперинфекция с друг вирус може да доведе до антивирусни, насочени срещу хронично устойчивия вирус ефекти.15 Зависимостта на този ефект от интерферони като IFN-γ и TNF-α, които се отделят от Т-клетки, естествени клетки-убийци (NK) и макрофаги е показана от авторите.15
Резултатите на тези автори потвърдиха друга по-раншна работа, в която е показано, че клас-1-рестриктирани цитотоксични Т-клетки могат да потискат хепатоцелуларната HBV-генна експресия при трансгенни HBV-мишки, че този процес протича без разрушаване на чернодробните клетки и че процесът е предизвикан от TNF-α и IFN-γ.
В медицинската практика на работа с животни от подълго време се използва терапевтично, мета- и профилактично един продукт за индукция на параспецифичен имунитет така наречения парамунитет-индуктор. Парамунитет-индукторът се състои от например химически инактивиран Parapoxvirus ovis, щам D 1701 (DE 3 504 940). Един произведен на базата на този вирус (Parapoxvirus ovis, щам D 1701) продукт е BAYPAMUN®.
Инактивираният Parapoxvirus индуцира в животното неспецифична защита спрямо инфекции от най-различни причинители. Приема се, че тази защита се предава посредством различни механизми от присъщата на организма защитна система.
Към тези механизми се отнасят индукцията на интерферон, активирането на естествените клетки-убиици (NK), индукцията на колонии стимулиращата активност (CSA), както и стимулирането на лимфоцитната пролиферация. По-раншни изследвания върху механизма на действие показват стимулация на интерлевкин 2 и интерферон-а.3)
Техническа същност на изобретението
На този фон възниква задачата да се подобрява понататък терапевтичната полезност на отличното действие на Parapoxvirus ovis, което качествено повишава и подобрява горе описаната генерализирана така наречена индукция на параспецифичния имунен отговор на Parapoxvirus ovis, щам D 1701, което чрез включване на ниски дози може да постигне по-добро антивирусно или антитуморно действие. Допълнително това води до по-слаб на странични действия терапевтичен ефект.
Затова задача на изобретението бе да се подобри имунологичното действие на Parapoxvirus ovis. Задачата се решава посредством приложение на горе посочените щамове Parapoxvirus ovis вместо обичайно използвания щам D 1701.
Настоящото изобретение се отнася за употребата на вируси, които таксономично принадлежат към един от щамовете NZ2, NZ-7, NZ-10 или orf-11 на Parapoxvirus ovis, за получаването на лекарствени средства срещу вирусни инфекции и рак при хора и животни.
По-нататък изобретението се отнася за приложението на получени чрез пасаж или адаптация на подходящи клетъчни системи като например човешки клетки като WI-38, MRC-5, маймунски клетки например веро-клетки, говежди клетки като например BK-KI13A47/Reg или MDBK и овчи клетки като MDOK, получени производни на щамовете съгласно изобретението за получаване на лекарствени средства срещу вирусни инфекции и рак при хора и животни; и по-нататък за приложението на части или частички на посочените щамове и тяхните варианти чрез пасаж и адаптация, при което под части се разбират експресирани чрез подходящи вектори като Vaccinia-вирус в подходящи системи като фибробластни клетъчни култури геномни или субгеномни фрагменти и под частички получените чрез биохимично пречистване като хроматография фракции на експресирани или физически включени вирусни частици за получаване на лекарствени средства срещу вирусни инфекции и рак при хора и животни; и по-нататък за приложението на един от щамовете на Parapoxvirus ovis и както по-горе посочено на получените производни за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания като имунни терапевтици или имунни профилактици при автоимунни заболявания и при остри и хронични вирусни инфекции на дихателния тракт и вътрешните органи; и понататък за приложението на един от щамовете и получените производни за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания за стресметафилаксия и за избягване или предотвратяване на инфекциозни заболявания след стрес както и при инфекциозна профилактика в рамките на операции и зъболекарски интервенции; и по-нататък за приложението на един от щамовете и получените производни за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания за приложение при инфекциозна метафилаксия или терапия на остри и хронични вирусни инфекции например на дихателния тракт, на вирусна инфекция с папилом, на инфекция с вируси от херпесната група, на HIV-инфекция, на вирусна инфекция на вътрешните органи като например инфекция с хепатитни вируси както и приложението при заболявания като мултипна склероза, астма, брадавици и други новообразувания на кожата; и по-нататък за приложението на един от щамовете и получените производни за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания за приложение при рани за ускоряване на лечебния процес и приложението за поддържане на лечението при лоши и незаздравяващи рани и Ulcus cruris; и по-нататък за приложението на един от щамовете и получените производни за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания за приложени при заболявания от кръга на алергиите, псориазиса, невродермит, други автоимунни заболявания като например Lupus erythematodes както и за приложението за поддържане на доброто състояние например при възрастни; и по-нататък за приложението на един от щамовете и получените производни за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания за приложение срещу възпалителни, дегенеративни и пролиферативни заболявания на вътрешни органи например Morbus Crohn, на кожата, на кръвта, на централната нервна система и нейните разклонения включително окото, включително рак; и по-нататък за приложението на един от щамовете и получените от него производни в комбинация с други средства за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания за антивирусна и антиракова терапия при хора и животни.
Един предпочитан предмет на изобретението е приложението на един от щамовете на Parapoxvirus ovis в комбинация с други средства за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания за орална апликация и/или като устойчиво на стомашния сок формулиране за орална употреба.
Посоченият тук като пример Parapoxvirus ovis NZ-2 бе депозиран на 10. юли 2001 г. в European Collection of Cell w
Cultures, Centre for Applied Microbiology and Research, Porton Down, Salisbury, Wiltshire, SP4 OJG, United Kingdom. Номерът на депозита е.......................
Примерно бе установено:
1. Доказателство за терапевтична ефективност при Hepatitis В Virus в трансгенни мишки
За опита proof of concept бе използван хепатит В вирус в трансгенни мишки (щам HBV 1.3 Xtg). На група се падаха по мъжки животни на възраст от 8 до 10 седмици. Апликацията на различните дози ставаше интерперитонеално в обем от 0.15 ml първия ден (начало на експеримента) и четвъртия ден.
За апликацията бяха изготвени следните разреждания на
всеки един от вирус-щамовете за различните групи доза:
1. доза 1.5 х 106 TCIDso
2. доза 5 х 105 TCIDso
3. доза 1.5 х 105 TCIDso
4. доза 5 х 104 TCIDso
Като рлацебо-контрола служеше стерилен свободен от пирогени PBS.
** Нагласяването на концентрацията на вирусите бе извършено по следния начин: 500 ml горна течна фаза на Parapoxvirus ovis, щам NZ2 (титър са. 2х105 TCID50/ml) и Parapoxvirus ovis, щам D 1701 (титър lxlO7 TCID50/ml) се нагласяват на един и същ вирусен титър. За това се използва ултрацентрофуга Beckmann (ротор SW28 при 28000 об/мин 3 часа 4 °C). След центрофугирането пелетите се нагласяват със съответни обеми разреждащо средство на титър от 1х107 TCIDso/ml.
Аликвоти на съответните дозировки бяха използвани за контролиращо обратно титриране, което потвърди титрите на тези дозировки. Съответните дози след изваждане на контролния аликвот бяха инактивирани 1 час при 56 °C.
Разреждащо средство:
ml ЕМЕМ 10х
2.7 ml бикарбонат 2д/1 ml глутамин 1%
86.3 ml бидестилирана вода
На 5-ия ден животните бяха убити безболезнено и извадени черният дроб и кръвта. 20 mg черен дроб на животно бяха обработени с QIAamp Tissue Kit (Qiagen, Hilden), бе определена фотометрично концентрацията на DNA и контролиран електрофоретично интегритетът в 1%-ен агарозе-гел. DNA бе хибридизирана по метода Dot-Blot с HBVспецифична сонда. Преди това DNA бе третирана с RNAse А (Qiagen, Hilden), за да се изключат причинени от RNA сигнали. 200 μΙ DNA (10 μg) бяха поставени върху Nylon-мембрана (Boehringer Mannheim), третирани 4 пъти за по 3 мин. с Soak I (0.5 N NaOH, 1 М NaCI) и два пъти с Soak II (3 М NaCI; 0.5 М Tris-HCI, pH 7.4), нагряти при 120 °C за половин час и на края прехибридизирани със стандартен хибридизиращ буфер (5xSSC, N-лауроилсаркозин, 0.1% w/v; SDS, 0.02%; Blocking reagent, lx и 100 pg/ml fish sperm DNA) без сонда 30 мин. при 60 °C. В края на тази стъпка следваше хибридизирането със заредена с random-Oligonukleotid сонда, която съдържа целия HBV-геном (20-40 ng/ml хибридизиращ буфер). След това филтърът бе промит 10 мин. при 64 °C в 4xSSC/0.1%SDS, 2xSSC/0.1%SDS и lxSSC/0.1%SDS.
Имунологичното детектиране се извършваше с CDP-Star®System (Boeheringer Mannheim) в съответствие с предписанията на производителя. За изчислението бе използван Lumilmager® (Boeheringer Mannheim). Определянето на количеството на HBV-специфичната DNA в кръвта се извършваше посредством количествена PCR. Първо бе отделяна плазмата чрез центрофугиране на EDTA-кръв. DNA бе пречистена чрез HighPure 16 System Viral Nucleic Add Kits (Boehringen Mannheim) и изследвана върху HBV-специфични сигнали чрез количествена PCR с ABI PRISM™ 7700 Sequence
Detection System (PE Applied Biosystems). Бяха използвани следните праймер и сонда:
ayw-570f(sense) 5'-CTGTACCAAACCTTCGGACGG-3' ayw-670r(antisense) 5'-AGGAGAAACGGGCTGAGGC-3' сонда:
ayw-613t 5'-CCATCATCCTGGGCTTTCGGAAAATT-3' DNA бе усилена в 50 μΙ реакционен обем (реакцията съдържаше 1.4 mM от всяко dNTP„ 4.75 mM MgCi2, 15 pmol от всеки праймер и сондата, 5 μΙ 10-кратен PCR-буфер [всички PCR-реактиви произхождат от TaqMan core reagent kit; Perkin Eimer/Roche Molecular Systems Inc.] и 1.25 U Taq DNAполимераза и 0.25 U Amp Erase. След една начална стъпка на денатуриране (10 мин. при 95 °C) пробите бяха подложени на 40 цикъла денатуриране (95 °C, 30 сек.) и анелиране/екстензия (56 °C, 1 мин.). Анализът на продуктите се извърши с ABI PRISM™ 7700 Sequence Detection System стандартен софтуер.
Бе извършен хистохимически анализ посредством антитела срещу Hepatitis В Virus core Antigen (Dako). За целта бяха фиксирани за през нощта части от черен дроб в 4% формалдехид, положени в парафин и разрязани (5 pm). След отделяне на парафина и рехидратация ендогенната активност на пероксидазата бе потисната с 3% Н2О2 в продължение на 20 мин. Неспецифичната връзка бе блокирана с нормален овчи серум. На края срезовете бяха инкубирани 30 мин. при стайна температура с 1:500 разредено антитяло. Всички следващи стъпки бяха извършени с Vectastain ABC Kit (Vector Laboratories) както е предписано от производителя.
Имунната реакция бе визуализирана с 3.3 диаминобензидинтетрахлорид и водороден пероксид. Срезовете бяха противоположно оцветени с хематоксилин/еозин.
Статистическите анализи на резултатите се извършиха с вариационен анализ и post hoc сравнение.
Изненадващо в резултата бе установено, че чрез използване на щама NZ2 се постига засилване на антивирусното действие в сравнение с известния Parapox ovis щам D 1701. С това за първи път става възможно с помощта на Parapoxvirus ovis да се индуцира комплексния капацитет на имунната система със сила, която значително се различава от ефективността на известните до сега индуктори на парамунитет.
Изненадващо бяха получени следните резултати:
Черен дроб: При третираните с NZ2 животни в сравнение с третираните с D 1701 животни бе установена значително посилна редукция на HBV-специфичната DNA. В сравнение с D 1701 NZ2 е по-потентен: в най-високата дозисна група прилагането на NZ2 редуцира HBV-специфичната DNA с повече от фактора 45 по-добре от прилагането на същото количество D 1701, в най-ниската дозисна група с фактора 57. В плазмата прилагането на NZ2 редуцира HBV-специфичната DNA в найниската група дозиране с повече от фактор 10 по-добре от прилагането на същото количество D 1701. С това бе показано, че терапевтичната ефективност на Parapoxvirus ovis щам NZ2 е значително по-добра от тази на щам D 1701.
Във фигурите се представя редукцията на HBVспецифичните сигнали в сравнение с плацебо групата (тя бе приета за 100%).
Фигура 1 показва резултати от третирането на HBVтрансгенни мишки с щам D 1701 или NZ2. HBV-специфичната DNA в черния дроб се редуцира значително при всички дозисни групи на двата щама в сравнение с плацебо групата, обаче по-силно с щама NZ2. При двете най-ниски дозирания на NZ2 има значително по-силна редукция на HBV-специфичната DNA отколкото при еквивалентните групи дозирания на D 1701. Във фигура 2 се показва резултатът от третирането на HBV-трансгенни мишки с щам D 1701 или NZ2 в плазма. HBVспецифичната DNA се редуцира в плазмата във всички дозисни групи на двата щама значително в сравнение с плацебо групата, обаче по-силно чрез щам NZ2. За разлика от найниското дозиране на NZ2 при щам D 1701 минималното дозиране не действа повече значимо антивирусно.
2. Индукция на цитокини до 8 седмични женски Balb/c мишки бяха държани при стерилни условия и използвани за опита. Животните бяха случайно подбрани и разделени на групи от по б животни. Бе приложена следващата схема на тритиране: група 1: плацебо група 2: Parapoxvirus ovis щам D 1701; 5х104 ТСЮ50/доза група 3: Parapoxvirus ovis щам NZ2; 5x104 ТСЮ50/доза група 4: плацебо група 5: Parapoxvirus ovis щам D 1701; 5х104ТСЮ50/доза група 6: Parapoxvirus ovis щам NZ2; 5х104 ТСЮ50/доза
Апликационният обем бе 10 ml/kg, апликацията ставаше интерперитонеално.
часа след апликацията бяха убити животните от групи 1 до 3,12 часа след апликацията животните от групи 4 до 6, извлечени перитонеалните клетки чрез лаваж с ледено студен PBS и изолирани портални и мезитериални лимфни възли.
Перитонеалните клетки бяха концентрирани чрез стъпка на центрофугиране (5 мин. при 3000 об/мин при стайна температура в Eppendorf-Tischzentrifuge), след това прибавени към 0.2 ml Lysis-буфер (Lysis разтвор: 25 mM натриев цитрат, 4М гуанидиниумизотиоцианат, 0.5% N-Lauroyl-Sarcosin), шоково замразени и съхранявани при -75 °C до RNAпрепарирането.
Препарирането на тоталната RNA се извършваше с кисела фенол/хлороформ-екстракция. За целта замразените в Lysis-буфера проби бяха размразени при стайна температура и за екстракцията бяха прибавени към следните разтвори: 1/10 обем Lysis буфер 2т натриев ацетат (pH 4.0), 1 обем Lysisбуфер водонаситен фенол, 1/5 обем Lysis-буфер хлороформ/изоамилалкохол (24:1). Този набор бе смесен върху вортекс за 10 сек. И след това темпериран 10 мин. върху лед. Разделянето на фазите става чрез центрофугиране при 15365 g и 4 °C за 30 мин. След това водната фаза бе прехвърлена в нов съд и за изолирането на намиращата се в тази фаза RNA бе прибавено 8 ml RNA-MATRIX от Rnaid™ плюс кит (DIANOVA) и бе инкубирано при стайна температура 15 мин. Образуваният RNA/RNA-MATRIX-комплекс се пелетира чрез центрофугиране при 7000 g и надстоящата фаза се отстранява. След това пелетът бе промит 2 пъти с по 250 ml RNA-WASH (DIANOVA) и след последното промиване изсушен чрез вакуумно центрофугиране. RNA бе елюирана чрез прибавяне на 20-30 ml свободна от RNAse дестилирана вода чрез темпериране при 55 °C за 15 мин. След центрофугиране при 7000 g и стайна температура за 1 мин. бе отделена матрицата чрез прехвърляне на RNA-разтвора в нов съд.
Качеството на RNA бе контролирано чрез гелелектрофорезал. RNA се съхраняваше при -70 °C.
Синтезът на cDNA се извършваше чрез обратна транкрипция на mRNA при използването на олиго(сГГ)праймери като молекули-стартери за полимеризацията. В набора за синтеза бяха налични следните компоненти: 200 ng2 цд тотална RNA, 2 μΙ обратна транскриптаза M-MLV (200 U/μΙ) (GIBCO/BRL), 1 μΙ DTT (0.1М) (GIBCO/BRL), 4 μΙ dNTP (2.5 mM) (SIGMA), 2 μΙ олиго(сГТ)12-18-праймер (100 μΟ/ΓηΙ) (PROMEGA), 1 μΙ човешки плацентен RNAse-инхибитор (10000 U/ml) (GIBCO/BRL) и вода ad 40 μΙ общ обем. Наборът бе темпериран 10 мин. при стайна температура и след това инкубиран 45 мин. при 37 °C, след това загрят за 3 мин. до 95 °C и веднага охладен върху лед. Синтезираната по този начин cDNA бе съхранявана при -20 °C.
Количествата cDNA бяха стандартизирани с housekeeping гени (р-актин). Количествената PCR бе извършена с ABI PRISM™ 7700 Sequence Detection System (РЕ Applied Biosystems). Бяха използвани следните праймери: р-актин sense 5'-TGG AAT ССТ GTG GCA ТСС ATG AAA С-3' antisense 5'-ТАА AAC GCA GCT CAG TAA CAG ТСС G-3' IFN-γ sense 5'-AGCGGC TGA CTG AAC TCA GAT TGT AG-3' antisense 5'-GTC ACA GTT TTC AGC TGT ATA GGG-3' TNF-α sense 5'-GGC AGG TCT ACT TTG GAG TCA TTG C-3' antisense 5'-ACA TTC GAG GCT CCA GTG AAT TCG G-3' IL-15 sense 5'-GCC AAC TGG ATA GAT GTA AGA TAT GAC CT-3' antisense 5'-CGT GTT GAT GAA CAT TTG GAC AAT GCG TAT-3'
DNA бе усилена в 25 μΙ реакционен обем (реакцията съдържаше 1.4 mM от всяко dNTP, 4 mM MgCh, 3 μΓποΙ от всеки праймер и сондата, 2.5 μΙ 10-кратен PCR-буфер с SYBR зелено [всички PCR реагенти са от SYBR Green PCR core reagent kit; Perkin Elmer/Roche Molecular Systems Inc.] и 1.25 U Taq DNA полимераза и 0.25 U Amp Erase). След една начална денатурираща стъпка (95 °C за 10 мин.) пробите бяха подложени на 40 цикъла денатуриране (95 °C, 30 сек.) и анелиране/екстензия (60 °C, 1.30 мин.). Анализът на продуктите се извършваше с ABI PRISM™ 7700 Sequence Detection System Standard Software. Статистическите анализи на резултатите се извършваха с вариационен анализ и post hoc сравнение.
Изненадващо бяха получени следните резултати:
1. Експресията на интерферон γ се индуцира след третиране с щам D 1701 или щам ΝΖ2 6 и 12 часа след апликацията (фигура 3). Тази индукция при щам ΝΖ2 е както значително по-висока спрямо плацебо, така също и спрямо щам D 1701. Наблюдаваната след прилагане на D 1701 височина на интерферон γ експресията не е значима спрямо плацебо контролата. Представени са стойностите, които бяха измерени в получените чрез перитонеален лаваж клетки.
2. Експресията на TNF а се индуцира след третиране с щам D 170112 часа и след третиране с щам ΝΖ2 6 и 12 часа след апликацията (при което след 12 часа може да се установи понижение в сравнение с 6-часовата стойност; фигура 4). Тази индукция е 6 часа след апликацията при щам ΝΖ2 значително по-висока в сравнение спрямо щам D 1701. Представени са стойностите, които са измерени в получени чрез перитонеален лаваж клетки.
3. Експресията на IL-15 се индуцира 6 и 12 часа след апликацията при третиране с щам D 1701 или с щам ΝΖ2 (фигура 5). Тази индукция е 6 часа след апликацията при щам ΝΖ2 значително по-висока в сравнение с тази при щам D 1701 или плоцебо. Наблюдаваната след прилагане на D 1701 височина на IL-15-експресията не е значима спрямо плацебо контролата. Представени са стойностите, които са измерени в получени чрез перитонеален лаваж клетки.
3. Доказване на терапевтичната ефективност в имащи тумор голи мишки
MDA-MB231 клетки (АТСС#НТВ26) бяха култивирани в пълна среда (DMEM 885, FBS 10%, пеницилин/стрептомицин 1%, L-глутамин 1% (всеки от Gibco Life Technologies)) при 37 °C и 5% СО2 в инкубатор. В деня на трансплантацията клетките бяха събрани до са. 70%. Клетките бяха трипсинизирани, промити с HBSS, преброени и нагласени на 2.5х107 клетки/ml в предварително охладен PBS. Бяха използвани женски NCr голи мишки (taconic). Мишките бяха на възраст между 8 и 10 седмици и тежаха са. 22 д. Всички манипулации върху животните бяха извършени при стерилни условия. 5х106 клетки в общ обем от 0.2 ml бяха инжектирани подкожно в областта на слабините. След това мишките бяха оставени още 7 дена докато туморите достигнат средна маса от са. 80 mg. Туморите бяха измерени и мишките на принципа на случайността разделени на три групи от по десет животни. Отделните групи получиха приложено както следва: група 1: плацебо (PBS) група 2: Parapoxvirus ovis щам D 1701 група 3: Parapoxvirus ovis щам NZ2
D 1701 бе приложен в доза от 2.5х105 TCID50, NZ2 в доза от lxlO5 TCIDso общо на четири пъти с интервал от по три дни. Туморите се измерваха два пъти седмично. Значимите изменения бяха определени с теста на Student.
Фигура 6 показва средната големина на туморите (в милиграми) в животните в групите 1 до 3 в хода на експерименталното време (в дни). (Символи: група 1, кръгчета; група 2, триъгълници; група 3, квадрати).
Изненадващо в експерименталната система бе установена една в сравнение с контролната група значителна насочена срещу тумори ефективност (р < 0.05). При това щамът NZ2 се оказа значимо по-потентен от щама D 1701. За постигане на еднакъв ефект бе необходимо приблизително половината количество NZ2 в сравнение с D 1701.
Този резултат подкрепя ясно терапевтичната ефективност на вирусните препарати съгласно изобретението в имащи тумор голи мишки.
Голите мишки са имунодефицитни и не разполагат с функционални Т-клетки. Насочената срещу тумори активност в експерименталната система се обуславя вероятно от естествени клиентели (NK), други клетки и директно действие на цитокини/хемокини. Би могло да се предположи, че при пълна и интактна имунна система по-добрата ефективност на NZ2 би била още по-ясно установима.
4. По-нататъшни биологични разлики между NZ2 и D1701
Бе установено, че Parapox Virus NZ2 противоположно на щам D 1701 може да бъде пасажиран продължително в човешки клетъчни линии. Това показва принципни разлики в репликационното поведение и/или във вирусните рецептори при NZ2 и D 1701.
Адаптацията към човешки клетъчни линии е важна предпоставка за произвеждането на вирусни щамове в човешки клетъчни линии.
4.а) Продължителен пасаж в човешки MRC-5 клетки
Един опит на адаптацията на щамовете NZ2 и D 1701 към човешката диплоидна клетъчна линия MRC-5 е представен във фигура 7. MRC-5 е подходяща за производството на биологични активни вещества и вещества за ваксиниране. Щамовете бяха заложени с еднакъв изходен титьр и съответните клетъчни култури-надстояща фаза бяха прекарани през 5 пасажа в MRC-5 клетки. Представено е изтитрирането на проби от надстоящата фаза на съответно инфектирани MRC-5 клетки в ТСЮ5о спрямо номера на пасажа. Само щамът NZ2, но не и D 1701 бе обратно титрируем върху говежди бъбречни клетъчни култури (ВК Кюп За). Това говори за принципни биологични разлики на двата щама в инфекциозното и репликационно поведение. Едновременно този резултат показва, че NZ2 могат да бъдат репродуцирани в по-широк спектър от клетки отколкото D 1701, от където следва възможността за основаващ се на човешки клетки метод на произвеждане.
4.Ь) Пасажируемост на NZ2 и D1701 в WI-38-клетки и ВК Кюп За клетки
Съществени биологически разлики между NZ2 и D 1701 стават ясни също чрез представените във фигура 8 и фигура 9 експерименти. Фигура 8 показва вирусния титьр в опитите с пасаж на D 1701 в говежди ВК Кюп За клетки и в човешки WI38 клетки спрямо броя на пасажите. Видимо е, че D 1701 в ВК Кюп За клетки е продължаващо пасажируем, но в човешки WI38 клетки обаче не е.
Друг е въпросът е щама NZ2. Този щам е в продължение на повече дни както в ВК Кюп За клетки, така и в WI-38 клетки продължително пасажируем (фигура 9).
Също и тези резултати показват ясни разлики в инфекционното и репликационното поведение на NZ2 и D1701.
4.с) Зависимо от дозата действие на NZ2 в HerpesvirusChallenge Test след пасаж върху WI-38
За изследване на имуностимулиращите свойства на NZ2 щамове, които са пасажирани върху WI-38 клетки, са извършени Herpesvirus Challenge тестове върху мишки. Бяха третирани три групи от по 10 опитни животни с по 1х104 TCID5o, 5х104 TCID50 и lxlO5 TCID5o. Една контролна група получи плацебо. Ратата на оживелите от четирите опитни групи е представена във фигура 10 спрямо времето след заразяването с херпес вирус. Изненадващо бе установено, че NZ2 не е загубил своите имуносгимулиращи свойства поради пасажа върху WI-38 клетки.
Всички експериментални резултати на този пример показват принципни биологични разлики в инфекционното и репликационното поведение на NZ2 и D 1701. Изненадващо бе установено, че получаването на NZ2 за приложение като имуномодулатор за разлика от D 1701 не е свързано с клетки от говежди бъбреци като произвеждаща клетъчна линия.
Имайки предвид известната зависимост от влиянието на Thl имунния отговор върху латентни и хронични перзистиращи вирусни инфекции4,5) както и пролиферативни заболявания например рак8,9) и по-добрите в сравнение с Parapoxvirus ovis щам D 1701 имуностимулаторни свойства на щам NZ2 е възможно използването на имуномодулатори на базата на Parapoxvirus ovis щам NZ2 или един от по-горе посочените щамове като монотерапия, или в комбинация с биологично активни например антивирусни нискомолекулни съединения, при хора и животни и е от терапевтична полза при антивирусна терапия на инфекции с хепатит В вирус, хепатит С вирус или всички други причинители от групата на хепатита както и на други вирусни инфекции на вътрешните органи както и на инфекции в съпровод на други заболявания, с различните типове на херпес симплекс вирус (HSV), с различните типове човешки папилом-вирус (HPV), с човешкия имунодефицитен вирус (HIV), с варицела Зостер вирус, с човешкия цитомегало вирус (HCMV) както и със съответните вирусни заболявания при животни.
По-нататък с посочените по-горе щамове на Parapoxvirus ovis на базата на показания механизъм на действие могат да се извършват многообещаващо по-специално следните профилактични или терапевтични лечения:
Предотвратяване на рекуренции при инфекции с херпес вирус, метафилаксия, т.е. предотвратяване на етаблирането на вирусни инфекции (например HIV), когато непосредствено след експозицията се третира със средсгво7). На базата на механизма на действие е възможно също лечението на рак8,9).
Според клиничното поставяне на въпроса терапевтикът на базата на Parapoxvirus се прилага системно, следователно например интрамускулно, подкожно, интраперитонеално, интравенозно, през устата или локално. При това Parapoxvirus е или пречистен и лиофилизиран и/или се суспендира непосредствено преди приложението в подходящ разтворител или е в друго подходящо формулиране или е в резистентна на стомашен сок или друга орална форма на приложение.
Подходящи формулирания могат да бъдат получени също от получени чрез пасаж и/или адаптация на определени клетки, например WI-38, MRC-5 или Vero-клетки, производни на NZ2 и на другите посочени щамове съответно части или частички на NZ2 и на други посочени щамове или тяхните производни. Под части се разбират експериментирани чрез подходящи вектори например Vaccinia в подходящи системи например фибробластни клетъчни култури геномни или субгеномни фрагменти. Под частички се разбират получени чрез биохимично пречистване например хроматография фракции физически например чрез въздействие на ултразвук преработени частици.
При това може да са необходими повече апликации или дълготрайно третиране според времеви схеми, които съответстват на изискванията на клиничното поставяне на въпроса.
При терапията на рака се оказва особено многообещаващо например (без ограничение) приложението на следната схема:
Интрамускулна апликация на по 106 до 107 TCID50 (Tissue Culture Infective Dosage) в продължение на 4 седмици на всеки трети ден следвано от 2 седмици пауза; отново интрамускулна 4efc=·-· _ апликация от по 10 до 10 TCID50 в продължение на 4 седмици на всеки трети ден следвано от 2 седмици пауза; отново интрамускулна апликация от по 106 до 107 TCID50 в продължение на 4 седмици на всеки трети ден следвано от 2 седмици пауза; в зависимост от сложността на случая и лечебният успех тези цикли могат да се разширят с допълнителни цикли; алтернативно може да се индуцира също схема, при която формулирането се аплицира всеки 4-ти и 5-ти ден най-малко 3 месеца.
При хронична вирусна инфекция се аплицират например 10б до 107 TCID5o от формулирането подкожно в областта на корема или интрамускулно в областта на делтоида или квадрицепса всеки 3-ти ден общо 5 пъти. Отклонения от тази схема могат да се предприемат според изискванията, които следват от заболяването. За профилактика от простудяване се прави гаргара с формулирането и това приложение се повтаря ежедневно, докато съществува риск от заразяване.
За избягване на инфекции след орална хирургическа интервенция (например зъбна операция) непосредствено преди нея се прави гаргара 1-2 минути.

Claims (11)

1. Приложение на вируси, които таксономично принадлежат към един от щамовете NZ2, NZ-7, NZ-10 или orf11 на Parapoxvirus ovis за получаването на лекарствени средства срещу вирусни инфекции и рак при хора и животни.
2. Приложение на получени чрез пасаж или адаптация към подходящи клетъчни системи, като например човешки клетки като WI-38, MRC-5, Vero-клетки, говежди клетки като BK-K13A47/Reg или MDBK и овчи клетки като MDOK, производни навирусите съгласно претенция 1 за получаването на лекарствени средства срещу вирусни инфекции и рак при хора и животни.
3. Приложение на части или частички от вируси съгласно претенция 1 и 2, при което под части се разбират експресирани чрез подходящи вектори, като Vaccinia-вируси в подходящи системи като например фибробласгни клетъчни култури, геномни или субгеномни фрагменти и под частички се разбират получени чрез биохимично пречистване като хроматография фракции на експресирани или физически обработени вирусни частици, за получаването на лекарствени средства срещу вирусни инфекции и рак при хора и животни.
4. Приложение на един от щамовете на Parapoxvirus ovis съгласно претенция 1-3 за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания като имунотерапевтици или имунопрофилактици при автоимунни заболявания и при остри и хронични вирусни инфекции на дихателния тракт и вътрешните органи.
5. Приложение на един от щамовете съгласно претенция 1-3 за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания за стресова метафилаксия и за предотвратяване или избягване на инфекциозни болести след стрес както и за инфекциозната профилактика в рамките на операции и зъболекарски интервенции.
6. Приложение на един от щамовете съгласно претенция 1-3 за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания за приложение при инфекциозна метафилаксия или терапия на остри вирусни инфекции например на дихателния тракт, вирусни инфекции на папилома, инфекция с херпес вируси, HIV-инфекция, вирусна инфекция на вътрешните органи като например инфекция с вируси на хепатита както и за приложение при заболявания като мултипна склероза, астма, брадавици и други нови образувания на кожата.
7. Приложение на един от щамовете съгласно претенция 1-3 за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания за приложение при рани за ускоряване на оздравителните процеси и за приложение за поддържане на лечението на лоши или незарастващи рани и Ulcus cruris.
8. Приложение на един от щамовете съгласно претенция 1-3 за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания за приложение при заболявания на алергичния формен кръг, псориазис, невродермит, други автоимунни заболявания като например Lupus erythematodes както и за подобряване на общото състояние например при възрастни.
9. Приложение на един от щамовете съгласно претенция 1-3 за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания за приложение срещу възпалителни, дегенеративни и пролиферативни заболявания на вътрешните органи (например Morbus Crohn), кожата, кръвта, централната нервна система и нейните допълнителни разклонения включително окото, включително рак.
10. Приложение на един от щамовете на Parapoxvirus ovis съгласно претенция 1-3 в комбинация с други средства за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания за антивирусна и антиракова терапия при хора и животни.
11. Приложение на един от щамовете на Parapoxvirus ovis съгласно претенция 1-3 в комбинация с други средства за получаването на лекарствени средства и фармацевтични формулирания за орална апликация и/или за устойчиво на стомашен сок формулиране за орална апликация.
BG107448A 2000-07-11 2003-01-08 Използване щамове на parapoxvirus ovis за получаване на противовирусни лекарства и лекарства срещу рак BG107448A (bg)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE10033582 2000-07-11
DE10122451A DE10122451A1 (de) 2000-07-11 2001-05-09 Verwendung von Stämmen des Parapoxvirus ovis zur Herstellung von antiviralen Arzneimitteln und Arzneimitteln gegen Krebs
PCT/EP2001/007991 WO2002004002A2 (de) 2000-07-11 2001-07-11 Verwendung von stämmen des parapoxvirus ovis zur herstellung von antiviralen arzneimitteln und arzneimitteln gegen krebs

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BG107448A true BG107448A (bg) 2003-11-28

Family

ID=26006335

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG107448A BG107448A (bg) 2000-07-11 2003-01-08 Използване щамове на parapoxvirus ovis за получаване на противовирусни лекарства и лекарства срещу рак

Country Status (36)

Country Link
US (1) US6685950B2 (bg)
EP (1) EP1303286B1 (bg)
JP (1) JP5037775B2 (bg)
CN (1) CN1455674B (bg)
AR (1) AR029954A1 (bg)
AT (1) ATE324115T1 (bg)
AU (2) AU7063101A (bg)
BG (1) BG107448A (bg)
CA (1) CA2415397C (bg)
CY (1) CY1105408T1 (bg)
CZ (1) CZ200371A3 (bg)
DE (1) DE50109630D1 (bg)
DK (2) DK1303286T3 (bg)
EE (1) EE200300018A (bg)
ES (1) ES2262663T3 (bg)
FI (1) FI20030037A7 (bg)
GB (1) GB2381454B8 (bg)
HK (1) HK1054329B (bg)
HR (1) HRP20030096A2 (bg)
HU (1) HUP0400479A3 (bg)
IL (1) IL153643A0 (bg)
LT (1) LT5079B (bg)
LU (1) LU90997B1 (bg)
LV (1) LV12990B (bg)
MA (1) MA26927A1 (bg)
MX (1) MXPA03000279A (bg)
NO (1) NO20030082L (bg)
NZ (1) NZ523534A (bg)
PL (1) PL366397A1 (bg)
PT (1) PT1303286E (bg)
RU (1) RU2003104525A (bg)
SE (1) SE0300034L (bg)
SI (1) SI21122A (bg)
SK (1) SK362003A3 (bg)
UY (1) UY26832A1 (bg)
WO (1) WO2002004002A2 (bg)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19922407A1 (de) * 1999-05-14 2000-11-16 Bayer Ag Organ-, gewebs- und zellspezifisches Immuntherapeutikum für chronische virale Infektionen, sowie entzündliche, degenerative und proliferative Erkrankungen insbesondere der Leber sowie Krebs auf der Basis von rekombinantem Parapoxvirus
PL212047B1 (pl) * 2000-11-23 2012-08-31 Bavarian Nordic As Zmodyfikowany wirus krowianki szczepu Ankara MVA-BN i jego pochodna, genom i zawierające je kompozycja farmaceutyczna, zwłaszcza szczepionka oraz ich zastosowania
US7628980B2 (en) * 2000-11-23 2009-12-08 Bavarian Nordic A/S Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates
US7097842B2 (en) * 2000-11-23 2006-08-29 Bavarian Nordic A/S Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates
NZ512341A (en) * 2001-06-13 2004-02-27 Bayer Ag Polynucleotides between 15 and 100 base pairs in length coding for parapoxvirus ovis (PPVO)/vaccinia virus recombinant (VVOV) viral genome fragments
US6844000B2 (en) * 2001-12-07 2005-01-18 Bayer Pharmaceuticals Corporation Use of Parapox B2L protein to treat cancer and modify immune responses
NZ536592A (en) * 2002-04-19 2007-01-26 Bavarian Nordic As Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates
JP2005537793A (ja) * 2002-09-05 2005-12-15 バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ 無血清条件下で初代細胞を培養する方法及びウイルスを増幅させる方法
CA2573204C (en) * 2004-07-13 2011-09-20 Aicuris Gmbh & Co. Kg Parapoxviruses in combination with other antiviral agents for the treatment of hiv/aids
PT1951274E (pt) * 2005-11-24 2009-12-14 Aicuris Gmbh & Co Kg Parapoxvírus em combinação com agentes quimioterapêuticos citotóxicos clássicos como bioquimioterapia para o tratamento de cancro
JP5004990B2 (ja) * 2009-03-31 2012-08-22 アイキュリス・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング・ウント・コムパニー・コマンディットゲゼルシャフト パラポックスウイルス・オヴィスの組換えタンパク質およびそれ由来の医薬組成物
NZ599677A (en) * 2009-12-18 2014-10-31 Bavarian Nordic As Production of ifn-lambda by conventional dendritic cells and uses thereof
JP5699093B2 (ja) * 2012-01-05 2015-04-08 アイキュリス・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング・ウント・コムパニー・コマンディットゲゼルシャフトＡｉＣｕｒｉｓ ＧｍｂＨ ＆ Ｃｏ． ＫＧ パラポックスウイルス・オヴィスの組換えタンパク質およびそれ由来の医薬組成物
TW201919675A (zh) * 2017-09-07 2019-06-01 德商艾庫瑞斯公司 使用羊副痘疹病毒(Parapoxvirus ovis；PPVO)及至少一種額外抗病毒藥之經B型肝炎病毒(HBV)感染之個體之組合療法
WO2023083943A1 (en) * 2021-11-10 2023-05-19 Aicuris Gmbh & Co. Kg Parapoxvirus for preparing for and treatment of respiratory virus infections in combination with antivirals
WO2023083950A1 (en) * 2021-11-10 2023-05-19 Aicuris Gmbh & Co. Kg Parapoxvirus for preparing for and treatment of respiratory virus infections in combination with immunomodulators

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2714665A1 (de) * 1977-04-01 1978-10-05 Mayr Anton Praeparat zur behandlung von herpes zoster und anderen herpes-infektionen, sowie verfahren zu seiner herstellung
DE3504940C2 (de) * 1984-02-17 1997-11-06 Bayer Ag Multipotente Paramunitätsmediatoren, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Mediatoren enthaltende Arzneimittel
US5443964A (en) * 1987-08-10 1995-08-22 Duke University Poxvirus insertion/expression vector
DE4405841C1 (de) * 1994-02-23 1995-01-05 Mayr Anton Prof Dr Med Vet Dr Multipotente Paramunitätsinducer auf der Basis von Kombinationen von Pockenviruskomponenten, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
US5648101A (en) * 1994-11-14 1997-07-15 Tawashi; Rashad Drug delivery of nitric oxide
CA2247336C (en) * 1996-02-28 2008-06-17 Bayer Aktiengesellschaft Parapoxviruses containing foreign dna, their production and their use in vaccines
EP0904393A4 (en) * 1996-03-29 1999-09-08 Univ Otago PARAPOXVIRUS VECTORS
DK0885013T3 (da) * 1996-04-15 2001-11-05 Anton Prof Dr Med Vet Dr Mayr Anvendelse af multipotente paramunitetsinducere fra svækkede, ikke-immunogene poxvirus eller parapoxvirus til fremstilling af lægemidler
SE9700617D0 (sv) * 1997-02-21 1997-02-21 Kjell Alving New composition
DE19843222A1 (de) * 1998-09-22 2000-03-30 Hassan Jomaa Verwendung von phosphororganischen Verbindungen zur therapeutischen und prophylaktischen Behandlung von Infektionen
AU775956B2 (en) * 1998-11-02 2004-08-19 Otago Innovation Limited Vascular endothelial growth factor-like protein from ORF virus NZ2 binds and activates mammalian VEGF receptor-2

Also Published As

Publication number Publication date
SE0300034L (sv) 2003-03-03
NZ523534A (en) 2005-02-25
SK362003A3 (en) 2003-07-01
ATE324115T1 (de) 2006-05-15
GB0302630D0 (en) 2003-03-12
AR029954A1 (es) 2003-07-23
FI20030037L (fi) 2003-03-10
HK1054329B (zh) 2005-10-07
CA2415397A1 (en) 2002-01-17
GB2381454A (en) 2003-05-07
NO20030082D0 (no) 2003-01-08
NO20030082L (no) 2003-01-08
JP2004517807A (ja) 2004-06-17
HUP0400479A2 (hu) 2004-06-28
AU7063101A (en) 2002-01-21
LT2003009A (en) 2003-08-25
WO2002004002A3 (de) 2002-10-31
EP1303286B1 (de) 2006-04-26
AU2001270631B2 (en) 2005-07-07
US20030021769A1 (en) 2003-01-30
DK1303286T3 (da) 2006-08-28
MXPA03000279A (es) 2004-04-05
SE0300034D0 (sv) 2003-01-10
PL366397A1 (pl) 2005-01-24
HK1054329A1 (en) 2003-11-28
PT1303286E (pt) 2006-08-31
HRP20030096A2 (en) 2005-02-28
CN1455674A (zh) 2003-11-12
DE50109630D1 (de) 2006-06-01
FI20030037A7 (fi) 2003-03-10
MA26927A1 (fr) 2004-12-20
CA2415397C (en) 2011-04-26
IL153643A0 (en) 2003-07-06
GB2381454B8 (en) 2007-10-23
CN1455674B (zh) 2019-03-29
UY26832A1 (es) 2002-01-31
CZ200371A3 (cs) 2003-04-16
LT5079B (lt) 2003-12-29
ES2262663T3 (es) 2006-12-01
HUP0400479A3 (en) 2006-02-28
EP1303286A2 (de) 2003-04-23
DK200300015A (da) 2003-03-07
SI21122A (sl) 2003-08-31
GB2381454A8 (en) 2007-10-23
CY1105408T1 (el) 2010-04-28
WO2002004002A2 (de) 2002-01-17
GB2381454B (en) 2004-11-24
LU90997B1 (en) 2003-01-08
LV12990B (en) 2003-08-20
JP5037775B2 (ja) 2012-10-03
US6685950B2 (en) 2004-02-03
RU2003104525A (ru) 2004-06-27
EE200300018A (et) 2004-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BG107448A (bg) Използване щамове на parapoxvirus ovis за получаване на противовирусни лекарства и лекарства срещу рак
US10596173B2 (en) Combination therapy of an HBV capsid assembly inhibitor and an interferon
CN111714621A (zh) 转铁蛋白、转铁蛋白受体及其抗体在制备抗SARS-CoV-2病毒的药物中的应用
US8075877B2 (en) Broad spectrum immune and antiviral gene modulation by oral interferon
CA2644670A1 (en) Broad spectrum immune and antiviral gene modulation by oral interferon
WO2013189003A1 (zh) J亚群禽白血病病毒的肽核酸及其应用
KR100805996B1 (ko) 항-바이러스 의약 및 항암 의약을 제조하기 위한파라폭스바이러스 오비스 균주의 용도
JP3568208B2 (ja) 弱毒化された非免疫原性ポックスウイルスまたはパラポックスウイルスからの多種有効性パラポックス免疫誘導剤の薬剤としての使用のための新規薬効
JP2000007578A (ja) Ｃ型肝炎ウイルスの陰性化のための投薬システム
JP5699093B2 (ja) パラポックスウイルス・オヴィスの組換えタンパク質およびそれ由来の医薬組成物
HK1060063A (en) Use of strains of the parapox ovis virus for producing antiviral pharmaceuticals and anticancer pharmaceuticals
WO2024077509A1 (zh) 用于预防和治疗痘病毒感染及其引发的疾病的药物组合物及其用途
CN116870134A (zh) θ-防御素在制备抗猫杯状病毒感染药物中的应用
CN114099482A (zh) β-石竹烯在预防和治疗病毒感染中的应用
JPWO2020117590A5 (bg)
CN101503442A (zh) 核酸分子si-cypj-2及其在制备抗癌药物中的应用
CN1628846A (zh) 用病毒类疫苗治疗病毒性疾病