CA1156167A

CA1156167A - Procede d'immobilisation de cellules microbiennes globulaires par adhesion a un support solide

Info

Publication number: CA1156167A
Application number: CA000383781A
Authority: CA
Inventors: Paul G. Rouxhet
Original assignee: REGION WALLONNE REPRESENTEE PAR L'EXECUTIF REGIONAL WALLON
Current assignee: REGION WALLONNE REPRESENTEE PAR L'EXECUTIF REGIONAL WALLON
Priority date: 1980-08-22
Filing date: 1981-08-13
Publication date: 1983-11-01
Also published as: JPS57129688A; AU553060B2; AU7442381A; FI812492L; BE884877A; GR75836B; ES504309A0; FI67724B; ES8300853A1; NZ198010A; NO812335L; FI67724C

Abstract

Procédé d'immobilisation de cellules microbiennes globulaires sur un support solide, caractérisé en ce que, préalablement à l'immobilisation, les cellules ou le support solide sont traités de manière à former une couche unique de particules colloïdales sur les cellules ou le support solide.

Description

1:l56~

Demande de R E V E T D' I N V E N T I O N
pour "Procédé d'i~nobilisation de cellules microbiennes globulaires par _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ . _ _ _ _ _ _ .. _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ . _ _ _ .. _ _ _ _ _ _ .. _ _ _ _ _ _ _ _ _, _ _ _ _ _ _ _ _ _ adhésion à un support solide".
____________________________ L'invention a pour objet un procédé d'immobilisation de cel-lules microbiennes globulaires distribuées sous forme d'une couche régu-lière sur un support solide, par l'intermédiaire de particules collo~da-les.
L'invention a également pour objet la couche ~e cellul~s microbiennes ain-si obtenues '~

, ,, , ~ . ' , ~:.
:
, o 7 On connait déj~ des procédé6 d'im~nobilisation de cellules mi-microbiennes, faisant appel à la fixation sur un support, à la forn~ation de flocon.s ou à l'inclusion dans une matrice. L'immobilisation par fixation, également appelée adsorpLion ou adhésion, sur un support solide présente par rapport aux autres procédés l'avantage de maintenir un contact dlrect de l'ensemble de la population microbienne avec le milieu liquide et, en conséquence, de réduire la lirnitation par les phénomènes diffusionnels du transfert des substances nutritives ou des substances produites par les mi-croorganismes. Elle présente également l'avantage de fournir un système dont la géométrie ne peut pas se modifier au cours de l'utilisation.
Le procédé faisant l'objet du brevet bel~e 80~.502 est rela-tif à l'obtention de flocons de cellules microbiennes par la formation de chélate entre les cellules et des hydroxydes métalliques. Il présente l'inconvénient de ne pas maintenir un contact direct de l'ensemble de la population microbienne immobilisée avec le mi].ieu liquide. Le brevet USA
4.115.198~ visant principalement l'immobilisation d'en~ymes sur un support mais mentionnant la possibilité d'immobiliser des cellules entières, fait appel à un recouvrement du support par précipitation sur ce dernier d'un oxyde métallique hydraté. Il est souligné dans l'exposé de ce brevet que le mélange des particules de support avec l'oxyde métallique déjà précipi-té ne donne pas un matériau sur lequel peut se réaliser l'immobilisationj la fixation des substances bi.ologiquement actives est attribuée à la for-mation de chélate. Ce procédé présente l'inconvénient de former nécessai-rement des précipités en présence du support, ce qui exige la manipulation de réactifs chimiques et lie la reproductibilité des résultats à un contr8-le rigoureux de la composition chimique de la solution mise en pr~sence du support.
Un des objets de la présente invention est de développer un procédé d'immobilisation des cellules microbiennes par un procédé simple et efficace ne nécessitant pas de modes opératoires compliqués.
La présente invention a pour but de fixer une couche cellu-]aire unique, distribuée régulièrement sur toute la surface du support, adhérant fortement au support, par l'intermédiaire de particules colloi-dales.

. , , : ' " . ' .

,: :

B1~

Les cel]ules immobilisées suivant le procédé de la présente invention pré-sentent un degré de viabilité élevé, c'est-à-dire qu'une proportion élevée d'entre elles conserve la capacité de réaliser notamment des réactions en~
zymatiques et de se reproduire dans un milieu approprié.
Un autre but de l'invention est d'obtenir des complexes sta-bles formés d'une couche cellulaire unique et du support pouvant ~etre uti-lisés directement dans des réacteurs, par exemple de feLmentation. Par com-plexes stables,on comprend également des complexes de nature différente (support et/ou cellule microbienne) pouvant etre combinés et uti.lis~s par exemple sous forme de couches lamellaires multiples. On peut par exemple - superposer sur un même support des couches cellulaires immobilisées de dif-Eérents microorganismes, ou superposer une série de complexes constitués chacun d'un support auquel est fixée une couche cellulaire, les microorga-nismes étant de nature identique ou différente d'une couche à l'autre ou au sein de la même couche Toutes les combinaisons sont possibles tout en ne sortant pas du cadre de la présente invention.
L'invention, telle que caractérisée dans les revendications, consiste à traiter, préalablement à l'immobilisation, les cellules ou le support solide par des particules colloidales, de manière à former une cou-che régulière de particules collo~dales sur les cellules ou le support so-lide. Le lien particule collo~dale-support et particule collo~dale-cellu-le s'explique par une résultante Eavorable des interactions aux interfaces.
Parmi ces interactions on peut distinguer les interactions électrostatiques (charge-charge et charge-dip~le), les interactions de Van der Waals, les liaisons hydrogène.
Etant donné l'importance des interactions électrostatiques charge-charge, le fait que le collo~de aie une charge superficielle opposée à celle de la cellule et à celle du support est un élément très favorable; il n'est ce-pcndAnt pas indispensable. On peut ~dsor~er sur le support lcs particules collo~dales form~es indépendamment et mcttre ensuite les cellules en con-tact avec le support ainsi traité. On peut adsorber sur les cel]ules les particules co]]b~dales formées indépendamment et ensuite adsorber les cel-lules ainsi traitées sur le support.

1 1 $ ~

Par particules colloidales formées indépendamment, on comprend des parti-cules colloidales qui ont été obtenues en absence des cellules et du sup-port. Dans le cas d'utilisation d'un support métallique, on peut traiter superficiellement le métal, de manière à former à S8 surface une couche régulière de particules collo~dales de ce métal et mettre ensuite les cel-lules microbiennes en contact avec le support ainsi traité.
Les supports solides utilisés suivant la présente invention comprennent des matériaux solides minraux et organiques. Le support à utiliser peut être poreux ou non; pour ccrtaineæ applications il peut être pr~férable dlutiliser un support non poreux et ne présentant pas des alvéoles en sur-face., de manière à ce que toutes les cellules immobilisées puissent etre directement exposées au flux d'un liquide. Parmi les composés minéraux, citons l'utilisation de silice, de silicates et d'aluminosilicates, d'oxy-des métalliques~ de métaux et de leurs alliages etc... On peut utiliser par exemple le verre, une céramique, le laitier, le sable.
Parmi les composés organiques, citons l'utilisation de polymères et/ou co-polymères synthétiques, par exemple les polyamides, les polyesters, les polyoléfines, les composés vinyliques.
Les composés minéraux et organiques cités ci-avant ne constituent que des exemples de supports pouvant être utilisés suivant la présente invention et ne sont nullement limitatifs. Pour le choix du support, on tiendra compte à la fois de considérations physiques et mécaniques, économiques et opérationnelles.
Les supports utilisés peuvent se présenter sous des formes très diverses, par exemple de granules, poudre, billes, plaques, tubes, films, membranes, tissus, tricots, fils, fibres, profilés quelconques.
Par cellules microbiennes globulaires,on comprend les micro-organismes unicellulaires et les assemblages de microorganismes du type, par exemple, des levures, des bactéries, des microchampignons.
Par couche cellulaire,on comprend unc couche cellulaire uni-que ou monocouche présentant sur la surface du support approximativement une assise cell~laire, qui peut ~tre caract~risée par un nombre de cellu-les par unité de surface, désigné par le terme densité de cellules immobi-li~sées.

. ~ .

' .

) 7 l~es particules collo~da]es utilLsées suivant la présente in-vention pour le traitement des cellules ou du support solide sont utili-sées sous forme d'une suspension, par exemple dans l'eau. Toutefois pour le traitement du support on peut utiliser une suspension en milieu non aqueux, par exemple dans un solvant organique tel qu'un alcool.
Parmi les particules colloidales utilisées on utilisera de préférence cel-les qui, dans la zone de p~l des solutions, soit de la suspension collo`ida-le, soit de la suspension cellulaire, possèdent une charge superficielle dù signe contraire de la charge des cellules et/ou du support. A titre d'exemple citons les oxydes et hydroxydes métalliques et les colloides or-ganiques Parmi les hydroxydes métalliques~ citons à titre d'exemple l'oxyde et l'hy-droxyde de fer et d'aluminium et leurs combinaisons amorphes ou cristalli-nes, la silice, les aluminosilicates.
Parmi les collo~des organiques, citons à titre d'exemple les suspensions de type latex naturel ou synthétique.
Dans le cas du traitement du support solide par une suspension de particules collo~dales formées indépendamment, les conditions opératoi-res doivent permettre aux particules collo~dales d'entrer en contact avec le support et de le recouvrir de manière à obtenir une couche régulière de particules collo~dales sur celui-ci. Le moyen le plus simple et non limi-tatif pour réaliser ce contact est d'utiliser la sédimentation d'une sus-pension de volume et de concentration suffisantes. L'hommc de l'art fera le choix du pH, de la concentration, de la température pour obtenir les ef-fets recherchés.
Suivant une var;ante de la présente invention on tra;Le super-ficiellement le support solide constitué d'ull métal de manière à former à
sa surface une couche régulière de particules co]lo~dales d'oxyde e~ou d'hy-droxyde de ce m~tal et on met ensuite les ce]lules microbiennes en contact avec le support ainsi traité.
Divers matériaux métalliques peuvent convenir pour ce traitement superfi-ciel, en vue de Eormer à leur surface des particules collo~dales. A titre d'exemple, citons l'aluminium, le fer, le titane et leurs al]iages.

, ,.

G ~ ~ 7 L'homme de l'art fera choix du type de traitement, chirnique, électrochimi-que etc..., en tenant compte de la nature du support metallique en vue d'obtenir cette couche régulière de particules collo~idales Dans le cas de l'aluminium, on peut créer cette couche unique de particu-les collo~dales par un simple traitement à la soude caustique, par exemple par utilisation de ~aOH (lN) à une ternpérature de 22C pendant 5 minutes On obtient de cette manière une surface matte très régulière. Par ce trai-tement, on forme à la surface de l'aluminium des particules collo~dales d'oxyde hydraté d'Al.
Suivant cette invention il n'est pas nécessaire d'effectuer un séchage du support, même après la Eixation des particules collo~dales formées antérieurement Suivant une autre variante du procédé, les cellules microbiennes peuvent etre traitées préalablement à leur immobilisation sur un support solide, par une suspension de particules collo~dales. Les particules collo~dales peuvent être introduites dans la suspension cellulaire soit telles quelles, soit sous forme d'une suspension aqueuse ou autre. Eventuellement, les cellules peuvent être dispersées dans la suspension de particules collo~-dales. Le temps de contact et les quantités de cellules et de particules collo~dales mises en présence doivent être tels que les cellules puissent être recouvertes d'une couche de particules collo~dales.
L'immobilisation des cellules microbiennes est obtenue par mi-se en contact de la cellule avec le support, l'un des deux étant couvert de particules collo~dales. Cette immobilisation est obtenue par la mise en présence avec le support d'une suspension aqueuse de cellules microbiennes, d'une concentration suffisante pour réaliser la couche cellulaire. Après un temps de contact de quelques heures et l'élimination par lavage des cel-lules non fixées, on constate la fixation d'une couche cellulaire sur le support. Cette durée de contact doit être suffisante et est en générald'en-viron 4 heures. Ceci n'exclut pas des durées plus courtes ou plus longues.
D.ans le cas d'un temps de contact trop prolongé, par exemple de 24 heures, entre la suspencion cellulaire et le support, on constate une proportion de viabilité des cellules plus faible.

.

... ,:

' s , , :. , ,: :
, ~13~1~)7 Les avantages obtenus gr~ce à cette invention sont l'obtention d'une assise unique de cellules fixées au support, d'une quantité élev~e de cellules imrnobilisées par unité de surface du support, d'une distribution régulière des cellules sur la surface du support, d'une forte adhésion des cellules au support.
L'immobilisation de cellules en une assise unique et régulière adhérant for--tement au support présente l'avantage d'éliminer la diffusion, à travers un lit de cellules, des substances nutrit:ives et des métabolites produits, de permettre l'utilisation d'un flux ~levé de liquide au contact des cellules et donc une diminution des limitations diffusionnelles à proximlté de cel-les-ci, de permettre une régénération homogène de toute la population irnrno-bili.sée, de permettre l'utilisation des cellules immobilisées sur support aussi bien en lit agité qu7en lit fixe Ces avantages sont particulière-ment précieux pour certaines utilisations de ces cellules i~nobilisées,tel-les que l'assimilation ou la production de susbstances de poids moléculai-re élevé, la réalisation d'un dispositif d'ensemencement en continu ou d'un dispositif permettant de récolter des cellules de première génération~n'ayant pas donné de cellules filles. Le fait de ne pas impliquer l'utilisation de solutions de sels hydrolysables, est également un avantage.
La présente invention sera mieux comprise à l'aide des exem-ples non limitatifs ci-après Exemple l On dispose d'une suspension aqueuse d'hydroxyde d'aluminium préparée suivant ~race et Matijevic (J. Inorganic Nuclear Chemistry, 35, 3641, 1973); les particules ont la forme de sphères dont le diamètre moyen est de 0~247jum. On verse une suspension aqueuse d'une concentration de

2.0 à 3.0 109 particules/ml et de pll9,1 ~température ambiante dans un ré-cipient au fond duquel est placée une plaque de verre; le niveau de la sus-pension est à 1 cm au-dessus de la surEace du verre. On laisse sédimenter les particules d'alumine pendant 12 à 15 heures. Ensuite on lave la lame de verre par un flux laminaire d'eau de Z mm d'épaisseur. Après 30 minu-tC9 dc lava,e ~ une vitesse moycnne de 10 cm/sec., on arrive ~ un nomhre stationnaire de particules fixées égal à environ 1~5 109 particules/cm2,ce ,:

i.

. . . ' .
~L ~ i

- 3 -1 1~61û7 qui correspond bien à une eouche unique et assez dense de particules d'hy-droxyde dlaluminium sur le verre.
La plaque de verre ainsi condLtionnée est placée dans un ré-cipient dans lequel on verse une suspension de Saccharom~ces cerevisiae d'une concentration de 30 à 50.106 eellules/ml, à un pH eompris entre 4 et 9; le niveau de la suspension cellulaire est à 0 5 cm au-dessus de la sur-face du verre. Après 3 à 4 heures de c:ontaet, on lave la lame de verre dans un flux d'eau de 2 rnm d'épaissellr, à UllC vltesse de 20 em/see.~ pen-dant 15 à 20 minutes.
Les eellules inrrnobilisées sont exarninées en microscopLe optique ~t comptées.
Les cellules immobilisées sont distribuées de manière régullère, formant une couehe cellulaire homogène dont la densité est donnée au tableau I.

TABLE~U.I

pH initial de la suspension cellu- Densité de cellules immobilisées laire (cellules/mm2) 3,9 28600 6,0 32800 8,1 30400 9,1 31900 Une proportion d'au moins 90 % des eellules immobilisées ne se colorent pas par le bleu de méthylène et gardent done la eapaeité de réduire spontanément eelui-ei. Les eellules ainsi immobilisées gardent la eapacité
de se multiplier.
Un essai comparatif a été réalisé dans les mêmes conditions que ei-dessus mais sans traitement du support par des particules eollo~dales; les résul-tats montrent que la densite de eellules immobilisées est inférieure à 600 eellules/mm2. Les eellules sont distribuées de manière irrégulière et ne forment pas une eouehe eellulaire homogène.

s ~ . :

, 115~

Exemp1e.2 On dispose d'une suspension d'hématlte (Fe203) préparée sui-vant Matijevic et Scheiner (J. Colloid Interface Sci., 63, 509, 1978); les particules ont la forme de cubes dont les angles sont arrondis et dont la dimension moyenne est de 0150tum On verse une suspension aqueuse d'une concentration d'au moins 8.108 particules/ml3 à température ambiante dans un récipient au fond duquel est placée une plaque de verre; le niveau de la suspension est de I cm au-dessus de la surface du verre. Apr~s une at-tente de 22 heures, qu-L permet aux particuLes de sédimenter, les plaques sont lavées par un Elux laminaire d'eau de 2mm d'épaisseur. Un lavage à
une vitesse moyenne de ~1 cm/sec pendant 10 minutes conduit à un nombre stationnaire de particules fixées, égal environ 4.108 particuLes/cm2, ce qui correspond bien à une couche unique de particu]es d'hématite serrées les unes contre les autres.
On prépare une suspension de Saccharomyces cerevisiae d'une concentration de 250.106 cellules/ml et l'on ajoute le pH à la valetlr dé-sirée (4 ou 6). On verse cette suspension dans un récipient dans lequel se trouvent des plaques de verre recouvertes d'une couche d'hématite com-me décrit ci-dessus; le niveau de la suspension est a 1 cm au-dessus de la surface du verre Après avoir laissé reposer durant ~ heures, on lave les plaques par un flux laminaire d'une solution de mame pH que le pH de la suspension cellulaire; le liquide de lavage a une épaisseur de 2 mm et une vitesse moyenne de 14 cm/sec.; le lavage est poursuivi durant un temps donné (10, 30 ou 60 minutes).
Les plaques sont examinées en microscopie optique et les cel-lules fixées sont comptées. Les cellules immobilisées sont distribuées de manière régulière formant une couche cellulaire homogène dont la densité
est donnée au tableau II.
La densité de cellules immobilisées est plus faible que dans l'exemple 13 ce qui s'explique par la dimension plus grande des particules d'hématite, qui donne au joint entre les cellules et le support des propriétés diffé-r en te s .

- . ~
. .
.
: :
.: ,:
~ L ~

' , ' '`' . .: .

- 1.0 -J. :1~6~6P~

T 13LF.AU.II
Immobilisation de Saccharomyces cerevisiae sur du verre tapissé d'une C~U_ che de particules d'hén1atite, Temps de lavage du pll de la suspen~l DensLté de cellu- Proportion des ce~
dép~t cellula;re. cellulaire mise en 1.es immobilisées. luLes ne se colo-(minute). oeuvre. (cellules/mn12). rant pas au bleu de méthylène (%).
__ _ _ __ __~

4 20000 80-9 6 20800 _ 70 Les cellules ainsi immobilisées gardent la capacité de se mul-tiplier. Les résultats du test au bleu de méthylène sont également présen-tés au tableau II. Il faut souligner que la perte de la capacité de rédui-re le bleu de méthylène de la part d'une certaine proportion de cellules n'est pas due à leur immobilisation. L~examen des cellules libres conser-vées dans l'eau pendant 4 heures donne des résultats semblables à ceux rap-portés au tableau II.
Exemple.3 Une tale d'aluminium est dégraissée par une solution de poly-éthylène glycol (0.5 ~/0); elle est ensuite immergée dans NaO11 (lN) pendant

5 minutes à température ambiante puis rincée ~ l'eau. La t~le ainsi trai-tée est maintenue au contact d'eau chaude à 9~C pendant lO à 15 minutes.
On obtient ainsi une surface matte très régulière.
La t~le ainsi conditionnée est placée dans un récipient dans lequel on verse une suspension de Saccharomyces cerevisiae d'une concentra-tion de 30 à 50.lO6 cellules/ml, dont le pH est compris entre 4 et 9. Cette , .

.

': ; . ' :
: ~ .

. - .~ ~ , .

', .

1 6 ~

opération et le lavage ultérieur sont réalisés de la manière décrite dalls l'exemple 1 Les cellules immob;~isées sont distribuées de man1ère régulière formant une couche cellulaire homogène dont la densité est donnée au tableau III.

TABLEAU.III
Immobilisation de S _c r_myces cerevlsi_e sur une tOle d'aluminiual dégraLs--ée~ puis traitée à la soude et à l'eau chaude.

pH initial de la suspension cellu-Densité de cellules im~nobilisées laire. (cellules/mm7).
4,1 34.830

6,0 36.580 8,0 35.210 9,1 35.670 Une proportion d'au moins 90 % des cellules immobilisées gar-dent la capacité de réduire le bleu de méthylène. Les cellules ainsi immo-bilisées gardent la capacité de se mu]tinlier La quantité de cellules immobilisées est plus élevée que dans l'exemple 1, en raison de la texture différente du joint entre la cellule et le support.
IJn essai comparatif a été réalisé dans les memes conditions que ci-dessus, en dégraissant seulement la t~le d'aluminium et en la lavant à l'eau distil-lée; les résultats montrent que la densité de cellules immobilisées est né-gligeable.
Exemple.4 Une tole d'aluminium est traitée à la soude (lN) puis rincéeà l'eau à 22C. La t~le ainsi conditionnée est placée dans un récipient dans lequel on verse une suspension de Saccharomyces cerevisiae à pH com-pris entre 4 et 9. Cette opération et le lavage ultérieur sont réalisés de la manière décrite à l'exemple l. On obtient ainsi la fixation de 33700 celluleslmm2~quel que soit le pH.
Les résultats du test au bleu de méthylène et du test de mul-tiplication cellulaire sont les mêmes qu'à l'exemple 3.
..~

:' ; ~ . .

: .

- 12 - .
1 ~ ; 7 _xem~5 On dispose de la suspension d'hydroxyde d'aluminium utilisée pour l'exemple 1. On dispose d'une suspension de cellules de Saccharomyces cerevisiae. On mélange une certaine quantité de la suspension d'hydroxyde d'aluminium et une certaine quantité de la suspension cellulaire dans des tubes en polypropylène, de manière ~ obtenir 40 ml du mélange a une concen-tration cellulaire de 106 cellules/ml et une concentration d'hydroxyde d'a-luminium variable. Les tubes sont ensuite agités pendant un temps donné à
température ambiante.
Une partie des particules d'hydroxyde d'aluminium s'adsorbe sur les cellules de levure. Pour mesurer la quantlté d'hydroxyde d'alumi~
nium adsorbé on laisse sédimenter les cellules à température ambiante; on dose les particules restant en suspension par turbidimétrie; on dose les particules adsorbées par analyse de l'aluminium par absorption atomique après traitement acide du sédiment de cellules.
Un examen de l'évolution de la quantité fixée en fonction du temps de contact entre les cellules et les particules collo~dales, à pH 6, montre que l'on obtient une valeur stationnaire après 15 heures.
Des expériences répétées pour différentes concentrations ini-tiales en hydroxyde d'aluminium permettent d'obtenir une courbe donnant la quantité de particules colloidales fixées en fonction de leur concentration en suspension et ce, pour des pH de 4, 6 et 8. Les résultats obtenus mon-trent que l'on peut fixer 1580 particules d'aluminium par cellule de lew -re. Sachant que les cellules utilisées ont un diamètre moyen de 5J7 ~m,on peut estimer que la surface moyenne d'une cellule Eait 1/02 10-1~ m2 et que l'adsorption d'une couche serrée de particules d'hydroxyde d'aluminium cor-respondrait à 1780 particules par cellule. Les cellules peuvent donc être recouvertes d'une couche de particules collo~dales.
Après ce traitement les cellules peuvent ~tre Eixées sur une plaque de verre par une opération de sédimentatLon suivie d'un lavage des cellules excédentaires.
Les cellules ainsi conditionnées ont gardé la capacité de se multiplier.

, '

Claims

Les réalisations de l'invention, au sujet des-quelles un droit exclusif de propriété ou de privilège est revendiqué, sont définies comme il suit:

1. Procédé d'immobilisation de cellules micro-biennes globulaires sur un support solide, caractérisé en ce que, préalablement à l'immobilisation, les cellules ou le support solide sont traités de manière à former une cou-che unique de particules colloïdales sur les cellules ou le support solide.

2. Procédé suivant la revendication 1, caracté-risé en ce que, préalablement à l'immobilisation, les cellules ou le support solide sont traités par des particu-les colloïdales obtenues indépendamment.

3. Procédé suivant la revendication 2, caracté-risé en ce que les particules colloïdales sont constituées d'oxydes et/ou d'hydroxydes métalliques ou de particules colloïdales organiques.

4. Procédé suivant la revendication 1, 2 ou 3, caractérisé en ce que les particules colloïdales sont constituées d'oxyde et/ou d'hydroxyde de fer, d'aluminium.

5. Procédé suivant la revendication 1, carac-térisé en ce que le support solide est choisi parmi les composés minéraux et organiques.

6. Procédé suivant la revendication 5, caracté-risé en ce que le support solide est un solide silicieux, un métal ou un polymère synthétique.

7. Procédé suivant la revendication 1, 5 ou 6, caractérisé en ce que le support solide est du verre, de l'aluminium, du fer et leurs alliages.

8. Procédé suivant la revendication 1 ou 3, caractérisé en ce que, préalablement à l'immobilisation, les cellules ou le support solide sont traités par une suspension colloïdale de particules d'oxydes et/ou d'hydro-xydes métalliques de manière à former une couche unique de particules colloïdales sur les cellules ou le support solide.

9. Procédé suivant la revendication 1, caracté-risé en ce que l'on traite superficiellement le support solide constitué d'un métal de manière à former à sa surface une couche de particules colloïdales d'oxyde et/ou d'hydroxyde de ce métal et l'on met ensuite les cellules microbiennes en contact avec le support ainsi traité.

10. Procédé suivant la revendication 9, caracté-risé en ce que le métal est choisi parmi l'aluminium, le fer, le titane et leurs alliages.

11. Procédé suivant la revendication 1, caracté-risé en ce que les cellules microbiennes globulaires proviennent de cellules de Saccharomyces cerevisiae.

12. Cellules microbiennes globulaires, immobili-sées à l'aide de particules colloïdales, réparties réguliè-rement sous forme d'une assise unique à la surface d'un support solide.

13. Complexes stables formés de couches lamellai-res multiples de cellules microbiennes globulaires immobi-lisées à l'aide de particules colloïdales réparties régu-lièrement sous forme d'une assise unique à la surface d'un support solide.