CN104788427A - 3-(2-嘧啶氨基)苯基丙烯酰胺类化合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种式(I)结构的3-(2-嘧啶氨基)苯基丙烯酰胺类化合物或者其药学上接受的盐或立体异构体或前药分子。本发明涉及的化合物或者其药学上接受的盐，可以有效抑制多种肿瘤细胞的生长，并对EGFR、Her家族其他蛋白酶产生抑制作用，可用于制备抗肿瘤药物，并可以克服现有药物吉非替尼，厄洛替尼等诱发的耐药性。

Description

3-(2-嘧啶氨基)苯基丙烯酰胺类化合物及其应用

技术领域

本发明属于抗肿瘤药物技术领域，具体涉及3-(2-嘧啶氨基)苯基丙烯酰胺类化合物及其制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

在过去30年里，肺癌死亡率上升了465％，发病率每年增长26.9％，已代替肝癌成为我国首位恶性肿瘤死亡原因。这种死亡率最高的一种疾病，严重威胁着人类的健康。其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占所有肺癌的80％以上，仅有三分之一的NSCLC患者存在手术治疗的机会，约70％的患者在就诊时已属局部晚期或是出现远处转移，失去了手术治疗机会。在这种情况下，药物治疗显得尤其重要。

在传统的癌症治疗过程中，化疗为主要的治疗手段；化疗药物非特异性地阻断细胞分裂从而使细胞死亡，它们在杀死肿瘤细胞的同时，也大大破坏了人体正常细胞的生长，带来许多不良反应。很多人因为担忧化疗的严重副作用而使心情悲观甚至放弃治疗，再加上化疗药物的耐药性，使NSCLC的化疗不容乐观，而延长化疗的周期只增加了毒副作用，并没有增加疗效。同时非小细胞肺癌的癌细胞对化疗、常规化疗不敏感，总缓解率也只有25％左右；由于这些原因的限制，非小细胞肺癌患者五年生存率低于20％。

在50％-80％的NSCLC病人中，他们的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)都过度表达，从而引起癌变。靶向EGFR药物主要有两类：一类是作用于受体胞内区的小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI)；另一类是作用于受体胞外区的单克隆抗体(MAb)。已经应用于临床的第一代EGFR抑制剂如易瑞沙，埃罗替尼，拉帕替尼等，它们对于NSCLC肺癌的治疗取得了很大的成功，非小细胞肺癌患者五年生存率提高。同时，与化疗相比，它们的优势在于不会产生骨髓抑制，恶心和神经毒性等副作用；但它们 在单独治疗时药效较低，且有非常明显的皮疹和腹泻等副作用，而且在使用一年后，患者对药物出现耐药性。研究认为EGFR基因T790M位点的突变是此类药物耐药的主要诱因，有临床案例数据显示，大约有50％的患者获得性耐药都源于T790M位点的突变所致。进一步研究证实，由于EGFR基因T790M突变，即编码的苏氨酸转变为甲硫氨酸，从而造成了空间位阻阻碍了抑制剂与ATP结合区结合最终导致了抑制剂活性丧失。目前也有研究显示T790M位点的突变不是直接影响抑制剂与EGFR的亲和性，而是突变导致EGFR与ATP的亲和性大大增加，使得抑制剂与EGFR的亲和性相对的大大降低了(抑制剂与ATP是竞争性结合)。第二代抑制剂如阿法替尼、Dacomitinib，它们优于第一代的特征在于对EGFR的识别性增加，可以辨别肿瘤细胞和正常细胞，这样副作用就会减少；但这些分子对EGFRT790M突变体的选择性差，造成药物临床耐受剂量较低，在其最大耐受剂量(MTD)下，药物无法在体内达到其有效浓度而使得对多数耐药病人无效。

总之，目前的EGFR-TKI仍不能解决药物耐药性所引起的临床压力，而且现有的药物多是以喹唑啉或者喹啉胺类为基本母核的EGFR可逆或不可逆抑制剂，其对野生型细胞的选择性差带来的毒副作用也是不可避免的。因此，迫切的需要新类型的，尤其是新颖骨架的化合物来解决耐药性、选择性差等问题。

发明内容

本发明的目的是，提供具有通式结构的3-(2-嘧啶氨基)苯基丙烯酰胺类化合物及其制备抗肿瘤药物的应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的3-(2-嘧啶氨基)苯基丙烯酰胺类化合物具有通式(I)的结构：

其中，R选自吡唑、4-氟吡唑、1-甲基吡唑、1-甲基-3-三氟甲基吡唑、咪唑，该R基团通过环上的N或C与嘧啶基团连接；

R₁选自H、Cl、CF₃；

R₂和R₃独立选自氢、烷基、取代烷基，或者R₂、R₃与N原子一起形成取代的单环、螺环或桥环。

优选地，所述的3-(2-嘧啶氨基)苯基丙烯酰胺类化合物为以下结构的化合物：

下列是本说明书中所使用术语的定义。除非另外指出，本文提供的基团或术语的最初定义单独或作为其它基团的一部分应用于本说明书中。

术语“烷基”是指直链或支链烷烃基，包含1-12个碳原子，尤其指1-4个碳原子。典型的“烷基”包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基等等。

“取代烷基”是指烷基中的一个或多个位置被取代，尤其是1-4个取代基，可在任何位置上取代。典型的取代包括但不限于一个或多个以下基团：卤素(例如，单卤素取代基或多卤素取代基)、三氟甲基、三氟甲氧基、环烷基、OR_a、S(＝O)R_a、S(＝O)₂R_a、S(＝O)₂OR_a,、NR_bR_c、S(＝O)₂NR_bR_c、C(＝O)OR_a、C(＝O)NR_bR_c、OC(＝O)R_a、OC(＝O)NR_bR_c、NR_dC(＝O)OR_a,NR_aC(＝O)NR_bR_c、NR_aS(＝O)₂NR_bR_c、NR_dC(＝O)R_a，其中在此出现的R_a、R_d可以独立表示氢、1-4个碳原子的烷基、3-8个碳原子的环烷基、杂环；R_b和R_c可以独立表示氢、1-4个碳原子的烷基、3-8个碳原子的环烷基、杂环，或者说R_b和R_c与N原子一起可以形成杂环；上述典型的取代基，如烷基、环烷基、杂环可以任选取代。

术语“环烷基”是指完全饱和的环状烃类化合物基团，包括1-4个环，每个环中含有3-8个碳原子。

术语“杂环”是指完全饱和的、或部分不饱和的、或完全不饱和的包括芳环(如杂芳环)的环状基团(如4-7元单环，7-11元双环，或8-16元三环系统)，其中至少有一个杂原子存在于至少有一个碳原子的环中。每个含有杂原子的杂环可以带有1，2，3或4个杂原子，这些杂原子选自氮原子、氧原子或硫原子，其中氮原子或硫原子可以被氧化，氮原子也可以被季铵化。(术语“杂芳环离子”是指含有季碳的、带正电荷的杂芳环基团。)杂环基团可以连接到环或环系分子的任何杂原子或碳原子的残基上。典型的单环杂环包括氮杂环丁烷基、吡咯烷基、吡咯基、吡唑基、氧杂环丁烷基、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、异噁唑烷基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、呋喃基、四氢呋喃基、噻嗯基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代吖庚因基、吖庚因基、六氢吖庚因基、4-哌啶酮基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三氮嗪基、三氮唑基、四氮唑基、四氢吡喃基、吗啡啉基、硫代吗啡啉基、硫代吗啡啉亚砜基、硫代吗啡啉砜基、1,3-二噁烷基和四氢 -1,1-二氧噻吩等等。典型的双环杂环包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻唑基、苯并恶唑基、苯并氧二唑基、苯并噻吩基、苯并[d][1,3]二氧烷基、2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧烷基、奎宁基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、二氢吲哚基、苯并呋喃基、苯并二氢呋喃基、色满基、香豆素基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基(如呋喃并[2,3-c]吡啶基，呋喃并[3,2-b]吡啶基或呋喃并[2,3-b]吡啶)、二氢异吲哚基、二氢喹唑啉基(如3,4-二氢-4-氧代喹唑啉基)、三氮杂吖庚因基、四氢喹啉基等等。典型的三环杂环包括咔唑基、苯并吲哚、菲咯啉基、吖啶基、菲啶基、占吨基等等。术语“杂环”可能包括取代的杂环。

术语“R₂和R₃可以与N原子一起形成取代的单环、螺环或桥环”，是指R₂和R₃通过碳原子、氮原子、或者硫原子的组合连接成为饱和或部分饱和的单环、螺环或桥环等。

本发明中的化合物可能形成的盐也是属于本发明的范围。除非另有说明，本发明中的化合物被理解为包括其盐类。在此使用的术语“盐”，指用无机或有机酸和碱形成酸式或碱式的盐。此外，当本发明中的化合物含一个碱性片段时，它包括但不限于吡啶或咪唑，含一个酸性片段时，包括但不限于羧酸，可能形成的两性离子(“内盐”)包含在术语“盐”的范围内。药学上可接受的(即无毒，生理可接受的)盐是首选，虽然其他盐类也有用，例如可以用在制备过程中的分离或纯化步骤。本发明的化合物可能形成盐，例如，通式(I)的化合物与一定量如等当量的酸或碱反应，在介质中盐析出来，或在水溶液中冷冻干燥得来。

本发明中的化合物含有的碱性片段，包括但不限于胺或吡啶或咪唑环，可能会和有机或无机酸形成盐。可以成盐的典型的酸包括醋酸盐(如用醋酸或三卤代醋酸，如三氟乙酸)、己二酸盐、藻朊酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二甘醇酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、羟基乙磺酸盐(如，2-羟基乙磺酸盐)、乳酸盐、 马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐(如，2-萘磺酸盐)、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、苯丙酸盐(如3-苯丙酸盐)、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐，水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(如与硫酸形成的)、磺酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲磺酸盐如对甲苯磺酸盐、十二烷酸盐等等。

本发明的化合物含有的酸性片段，包括但不限于羧酸，可能会和各种有机或无机碱形成盐。典型的碱形成的盐包括铵盐、碱金属盐如钠、锂、钾盐，碱土金属盐如钙、镁盐，和有机碱形成的盐(如有机胺)，如苄星、二环已基胺、海巴胺(与N,N-二(去氢枞基)乙二胺形成的盐)、N-甲基-D-葡糖胺、N-甲基-D-葡糖酰胺、叔丁基胺，以及和氨基酸如精氨酸、赖氨酸等等形成的盐。碱性含氮基团可以与卤化物季铵盐，如小分子烷基卤化物(如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物及碘化物)，二烷基硫酸盐(如，硫酸二甲酯、二乙酯，二丁酯和二戊酯)，长链卤化物(如癸基、十二烷基、十四烷基和十四烷基的氯化物、溴化物及碘化物)，芳烷基卤化物(如苄基和苯基溴化物)等等。

本发明中化合物的前药及溶剂化物也在涵盖的范围之内。此处术语“前药”是指一种化合物，在治疗相关疾病时，经过代谢或化学过程的化学转化而产生本发明中的化合物、盐、或溶剂化物。本发明的化合物包括溶剂化物，如水合物。根据本发明中3-(2-嘧啶氨基)苯基丙烯酰胺类化合物的结构式，结合现有技术中制备前药的方法获取的前药化合物，也在本发明的保护范围之内。

本发明中的化合物、盐或溶剂化物，可能存在的互变异构形式(例如酰胺和亚胺醚)。所有这些互变异构体都是本发明的一部分。

所有化合物的立体异构体(例如，那些由于对各种取代可能存在的不对称碳原子)，包括其对映体形式和非对映形式，都属于本发明的设想范围。本发明中的化合物独立的立体异构体可能不与其他异构体同时存在(例如，作为一个纯的或者实质上是纯的光学异构体具有特殊的活性)，或者也可能是混合物，如消旋体，或与所有其他立体异构体或其中的一部分形成的混合物。本发明的手性中心有S或R两种构型，由理论与应用化学国际联合会(IUPAC) 1974年建议定义。外消旋形式可通过物理方法解决，例如分步结晶，或通过衍生为非对映异构体分离结晶，或通过手性柱色谱法分离。单个的光学异构体可通过合适的方法由外消旋体得到，包括但不限于传统的方法，例如与光学活性酸成盐后再结晶。

本发明中的化合物，依次通过制备、分离纯化获得的该化合物其重量含量等于或大于90％，例如，等于或大于95％，等于或大于99％(“非常纯”的化合物)，在正文描述列出。此处这种“非常纯”本发明的化合物也作为本发明的一部分。

本发明的化合物所有的构型异构体都在涵盖的范围之内，无论是混合物、纯的或非常纯的形式。在本发明化合物的定义包含顺式(Z)和返式(E)两种烯烃异构体，以及碳环和杂环的顺式和反式异构体。

在整个说明书中，基团和取代基可以被选择以提供稳定的片段和化合物。

特定官能团和化学术语定义都详细介绍如下。对本发明来说，化学元素与Periodic Table of the Elements,CAS version,Handbook of Chemistry and Physics,75th Ed.中定义的一致。特定官能团的定义也在其中描述。此外，有机化学的基本原则以及特定官能团和反应性在“Organic Chemistry”,Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito:1999，也有说明，其全部内容纳入参考文献之列。

本发明的某些化合物可能存在于特定的几何或立体异构体形式。本发明涵盖所有的化合物，包括其顺式和反式异构体、R和S对映异构体、非对映体、(D)型异构体、(L)型异构体、外消旋混合物和其它混合物。另外不对称碳原子可表示取代基，如烷基。所有异构体以及它们的混合物，都包涵在本发明中。

按照本发明，同分异构体的混合物含有异构体的比率可以是多样的。例如，对于只有两个异构体的混合物可以有以下组合：50:50，60:40，70:30，80:20，90:10，95:5，96:4，97:3，98:2，99:1，或100:0，异构体的所有比率都在本发明范围之内。本专业内一般技术人员容易理解的类似的比率，及为更复杂的异构体的混合物的比率也在本发明范围之内。

本发明还包括同位素标记的化合物，等同于原始化合物在此公开。不过实际上对一个或更多的原子被与其原子量或质量序数不同的原子取代通常会出现。可以列为本发明的化合物同位素的例子包括氢，碳，氮，氧，磷，硫，氟和氯同位素，分别如如²H、³H、¹³C、¹¹C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、 ³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。本发明中的化合物，或对映体，非对映体，异构体，或药学上可接受的盐或溶剂化物，其中含有上述化合物的同位素或其他同位素原子都在本发明的范围之内。本发明中某些同位素标记化合物，例如³H和¹⁴C的放射性同位素也在其中，在药物和底物的组织分布实验中是有用的。氚，即³H和碳-14，即¹⁴C，它们的制备和检测比较容易，是同位素中的首选。此外，较重同位素取代如氘，即2H，由于其很好的代谢稳定性在某些疗法中有优势，例如在体内增加半衰期或减少用量，因此，在某些情况下可以优先考虑。同位素标记的化合物可以用一般的方法，通过用易得的同位素标记试剂替换为非同位素的试剂。

如果要设计一个本发明的化合物特定的对映体的合成，它可以不对称合成制备，或用手性辅剂衍生化，将所产生的非对映混合物分离，再除去手性辅剂而得到纯的对映体。另外，如果分子中含有一个碱性官能团，如氨基酸，或酸性官能团，如羧基，可以用合适的光学活性的酸或碱的与之形成非对映异构体盐，再通过分离结晶或色谱等常规手段分离，然后就得到了纯的对映体。

如本文所述，本发明中的化合物可与任何数量取代基或官能团取而扩大其包涵范围。通常，术语“取代”不论在术语“可选”前面或后面出现，在本发明配方中包括取代基的通式，是指用指定结构取代基，代替氢自由基。当特定结构中的多个在位置被多个特定的取代基取代时，取代基每一个位置可以是相同或不同。本文中所使用的术语“取代”包括所有允许有机化合物取代。从广义上讲，允许的取代基包括非环状的、环状的、支链的非支链的、碳环的和杂环的，芳环的和非芳环的有机化合物。在本发明中，如杂原子氮可以有氢取代基或任何允许的上文所述的有机化合物来补充其价态。此外，本发明是无意以任何方式限制允许取代有机化合物。本发明认为取代基和可变基团的 组合在以稳定化合物形式在疾病的治疗上是很好的，例如传染病或增生性疾病。此处术语“稳定”是指具有稳定的化合物，在足够长的时间内检测足以维持化合物结构的完整性，最好是在足够长的时间内都在效，本文在此用于上述目的。

本发明还公开了所述通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其前药分子在制备抗肿瘤药物中的应用。

在一个实施方案中，本发明所述通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其前药分子可以用于治疗或控制非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠间质瘤、白血病、组织细胞性淋巴癌、鼻咽癌等过度增值性疾病。

本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐的代谢产物，以及可以在体内转变为本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐的结构的前药，也包含在本申请的权利要求中。

本发明通式(I)的化合物可以与已知的治疗或改进相似病状的其他药物联用。联合给药时，原来药物的给药方式和剂量保持不变，而同时或随后服用式(I)的化合物。当式(I)化合物与其它一种或几种药物同时服用时，优选使用同时含有一种或几种已知药物和式(I)化合物的药用组合物。药物联用也包括在重叠的时间段服用式I化合物与其它一种或几种已知药物。当式(I)化合物与其它一种或几种药物进行药物联用时，式(I)化合物或已知药物的剂量可能比它们单独用药时的剂量低。

可以与式(I)化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限于以下物质：雌激素受体调节剂、雄激素受体调剂、视网膜受体调节剂、细胞毒素/细胞抑制剂、抗增殖剂、蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、HIV蛋白激酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、血管生成抑制剂、细胞增殖及生存信号抑制剂、干扰细胞周期关卡的药物和细胞凋亡诱导剂，细胞毒类药物、酪氨酸蛋白抑制剂、EGFR抑制剂、VEGFR抑制剂、丝氨酸/苏氨酸蛋白抑制剂、Bcr-Abl抑制剂，c-Kit抑制剂、Met抑制剂、Raf抑制剂、MEK抑制剂、MMP抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、组氨酸去乙酰化酶抑制剂、蛋白体酶抑制剂、 CDK抑制剂、Bcl-2家族蛋白抑制剂、MDM2家族蛋白抑制剂、IAP家族蛋白抑制剂、STAT家族蛋白抑制剂、PI3K抑制剂、ATK抑制剂、整联蛋白阻滞剂、干扰素、白介素-I2、COX-2抑制剂、P53、P53激活剂、VEGF抗体、EGF抗体等。

在一个实施方案中，可以与式(I)化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限于以下物质：阿地白介素、阿仑膦酸、干扰素、阿曲诺英、别嘌醇、别嘌醇钠、帕洛诺司琼盐酸盐、六甲蜜胺、氨基格鲁米特、安磷汀、安柔比星、安丫啶、阿纳托唑、多拉司琼、aranesp、arglabin、三氧化二砷、阿诺新、5-氮胞苷、硫唑嘌呤、卡介苗、或tice卡介苗、贝他定、醋酸倍他米松、倍他米松磷酸钠抑制剂、贝沙罗汀、硫酸博来霉素、溴尿甘、bortezomb、白消安、降钙素、阿来佐单抗注射剂、卡培他滨、卡铂、康士得、cefesone、西莫白介素、柔红霉素、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯屈磷酸、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、柔红霉素脂质体、地塞米松、磷酸地塞米松、戊酸雌二醇、地尼白介素2、狄波美、地洛瑞林、地拉佐生、乙烯雌酚、大扶康、多西他奇、去氧氟尿苷、阿霉素、屈大麻酚、钦-166-壳聚糖复合物、eligrand、拉布立酶、盐酸表柔比星、阿瑞吡坦、表阿霉素、阿法依伯汀、红细胞生成素、依铂、左旋咪唑片、雌二醇抑制剂、17-β-雌二醇、雌莫司汀磷酸钠、雌炔醇、氨磷汀、羟磷酸、凡毕复、依托泊甙、法倔唑、他莫西芬制剂、非格司亭、非那司提、非雷司替、氟尿苷、氟康唑、氟达拉滨、5-氟脱氧尿嘧啶核苷一磷酸盐、5-氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、福麦斯坦、1-β-D阿糖呋喃糖胞噻啶-5’-硬质酰磷酸酯、福莫司汀、氟维司琼、丙种球蛋白、吉西他滨、吉妥单抗、甲磺酸伊马替尼、卡氮芥糯米纸胶囊、戈舍林瑞、盐酸拉格尼西陇、组胺瑞林、和美新、氢化可的松、赤型-羟基壬基腺嘌呤、羟基脲、替坦异贝莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、干扰素α、干扰素α-2、干扰素α-2A、干扰素α-2B、干扰素α-nl、干扰素α-n3、干扰素β、干扰素γ-la、白细胞介素-2，内含子A、易瑞沙、依立替康、凯特瑞、硫酸香菇多糖、来曲唑、甲酰四氢叶酸、亮丙瑞林、亮丙瑞林醋酸盐、左旋四咪唑、左旋亚叶酸钙盐、左甲状腺素钠、左甲状腺素钠制剂、洛莫司汀、氯尼达明、屈大麻酚、 氮芥、甲钴胺、甲羟孕酮醋酸酯、醋酸甲地孕酮、美法仑，酯化雌激素、6-巯基嘌呤、美司钠、氨甲喋呤、氨基乙酰丙酸甲酯、来替福新、美满霉素、丝裂霉素C、米托坦、米托葱醌、曲洛司坦、柠檬酸阿霉素脂质体、奈达铂、聚乙二醇化非格司亭、奥普瑞白介素、neupogen、尼鲁米特、三苯氧胺、NSC-631570、重组人白细胞介素1-β、奥曲肽、盐酸奥丹西隆、去氢氢化可的松口服溶液剂、奥沙利铂、紫杉醇、泼尼松磷酸钠制剂、培门冬酶、派罗欣、喷司他丁、溶链菌制剂、盐酸匹鲁卡品、毗柔比星、普卡霉素、卟吩姆钠、泼尼莫司汀、司替泼尼松龙、泼尼松、倍美力、丙卡巴脐、重组人类红细胞生成素、雷提曲赛、利比、依替磷酸铼-186、美罗华、力度伸-Α、罗莫肽、盐酸毛果芸香碱片剂、奥曲肽、沙莫司亭、司莫司汀、西佐喃、索布佐生、唬钠甲强龙、帕福斯酸、干细胞治疗、链佐星、氯化锶-89、左旋甲状腺素钠、他莫昔芬、坦舒洛辛、他索那明、tastolactone、泰索帝、替西硫津、替莫唑胺、替尼泊苷、丙酸睾酮、硫鸟嘌呤、噻替哌、促甲状腺激素、替鲁磷酸、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、曲奥舒凡、维A酸、甲胺碟呤片剂、三甲基密胺、三甲曲沙、乙酸曲普瑞林、双羟萘酸曲普瑞林、优福啶、尿苷、戊柔比星、维司力农、长春碱、长春新碱、长春酰胺、长春瑞滨、维鲁利秦、右旋丙亚胺、净司他丁斯酯、枢复宁、紫杉醇蛋白稳定制剂、aco lbifene/干扰素γ-lb、affinitak、氨基碟呤、阿佐昔芬、asoprisnil、阿他美坦、BAY43-9006、阿瓦斯丁、CCI-779、CDC-501、西乐葆、西妥昔单抗、克拉那托、环丙孕酮醋酸酯、地西他滨、DN-101/阿霉素-MTC、dSLIM、度他雄胺、edotecarin、依氟鸟氨酸、依喜替康、芬维A胺、组胺二盐酸盐、组胺瑞林水凝胶植入物、钬-166DOTMP、伊班磷酸，干扰素γ、内含子PEG、ixabepilone、匙孔形血蓝蛋白、L-651582、兰乐肽、拉索昔芬、libra、lonafamib、米泼昔芬、米诺屈酸酯、MS-209、脂质体MEP-PE、MX-6、那法瑞林、奈莫柔比星、新伐司他、诺拉曲特、奥利默森、onco-TCS、osidem、紫杉醇聚谷氨酸酯、帛米酸钠、PN-401、OS-21、夸西洋、R-1549、雷洛昔芬、豹蛙酶、13-顺维A酸、沙铂、西奥骨化醇、T-138067、tarceva、二十二碳六烯酸紫杉醇、胸腺素α、嘎唑呋林、tipifarnib、替拉孔明、TLK-286、托瑞米芬、反式MID-lo7R、伐司朴达、 伐普肽、vatalanob、维替泊芬、长春氟宁、Z-100和唑来磷酸或他们的组合。

本发明还提供了一种药物组合物，该药物组合物包括所述式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其前药分子，以及溶剂化物或药学上可接受的载体。该药物组合物用于治疗或控制非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠间质瘤、白血病、组织细胞性淋巴癌、鼻咽癌等过度增值性疾病。

这里所用的短语“药学上可接受的载体”是指药学接受的材料、成份或介质，如液体或固体填料、稀释剂、辅料、溶剂或封装材料，包括从一个器官或身体的某部分到另一个器官或身体的某部分携带或运输主要药学试剂。每个载体必须是“可以接受”，能兼容其他形式的药物成份而对病人不造成伤害。一些可作为药学上可以接受的载体的例子包括：糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖糖；淀粉，如小麦淀粉和马铃薯淀粉淀粉；纤维素及其衍生物，如钠羧甲基纤维素、乙基纤维素、醋酸纤维素，粉状西黄蓍胶、麦芽、明胶、滑石粉；辅料，如可可黄油和栓剂蜡；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；甘醇，如丁二醇；多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；生理盐水；林格氏液；乙醇；磷酸盐缓冲液，以及其他无毒的应用在药物制剂的可兼容物质。

润湿剂，乳化剂和润滑剂，如十二烷基硫酸钠、硬脂酸镁、聚乙烯氧化物与聚丁烯氧化物的共聚物，以及着色剂、脱模剂、涂层剂、甜味剂、香料和薰香剂、防腐剂和抗氧化剂也可存在于所述药物组合物中。

本发明的药物配方包括那些合适的口腔、鼻腔、外用(包括口腔和舌下)、直肠、阴道和静脉治疗。该配方可以方便地成为单元剂型，并可由药学上任何已知的方法制备。活性成份的剂量可以与一个载体材料相结合产生单一的剂型，会因受体的治疗方式、特定服用模式的不同而不同。有效成份的剂量可与载体材料相结合产生单一的剂型，一般将作为该化合物产生治疗的剂量。一般来说，100％之外，这一剂量的活性成份 介于约1％-99％之间，最好是从约5％-70％左右，最优是约10％-30％左右。

本发明中制备这些配方或化学成份的方法包括化合物进入并结合一个或多个载体和辅剂成份的步骤。在一般情况下，配方制备成均匀能、能密切地与本发明中的载体结合，如液体载体、固体细末载体、或两者兼而有之。然后，如有必要塑造成产品。

本发明的适合口服的制剂可以有以下的形式，如胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、含片(通常是蔗糖和金合欢或西黄蓍胶，有一定的味道)、粉剂、颗粒剂，或作为一个溶液或悬浮在水中的非水性液体，或作为油包水或水包油的乳状液体，或作为酏剂或糖浆，或粒状(使用诸如明胶和甘油，蔗糖和金合欢的惰性基质)和/或漱口水之类，每个都包含本发明化合物作为活性成份的一个预定剂量。本发明化合物也可作为大药丸，膏剂或粘贴膏药。

在发明的口服固体制剂(胶囊、片剂、丸剂、糖衣丸、粉末、颗粒等)，其有效成份与一个或多个药学上可接受的载体混合，如柠檬酸钠或磷酸氢钙，和/或任何以下内容：填料或填充剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇；和/或硅酸，例如粘合剂、羧甲基纤维素钠、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖和/或阿拉伯树胶，保湿剂，如甘油；崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸盐、碳酸钠、乙醇和淀粉钠；解缓凝剂，如石蜡，吸收促进剂，如季铵盐化合物；润湿剂，如十六醇，甘油单硬脂酸酯和聚环氧乙烷，聚氧化共聚物；吸收剂，如高岭土粘土，膨润土，润滑剂，如滑石粉，硬脂酸钙，硬脂酸镁，固体聚乙二醇，十二烷基硫酸钠及其混合物；和着色剂。在胶囊、片剂、丸剂的情况下，药物组合可能还包括缓释剂。相似的固体类型成份可使用辅料成为软填充和硬填充胶囊，如乳糖或牛奶糖，以及超高分子量聚乙烯乙二醇之类的填充物。

片剂可以选择一个或多个辅助成份压缩或成型。压缩片剂可用粘结剂制备(如明胶或羟基丁基甲基纤维素)，润滑油，惰性稀释剂，保鲜剂， 崩解剂(如乙醇或淀粉钠交联羧甲基纤维素钠)，表面活性或分散剂。模型片剂可能通过粉末状化合物与惰性液体稀释液的混合物，在一个合适的注塑机上的注塑而成。

活性成分可以用上述的辅料微胶囊化。片剂以及本发明的其他固体制剂的药物组合，如糖衣丸，胶囊剂，丸剂，颗粒剂，可以选择地用涂层和外壳制备或塑形，如肠溶涂层，以及已知的其他制药形式的涂层。也可能提供缓慢或控制释放的活性成份的制剂，例如，羟基丁基甲基纤维素在不同的情况下提供所需的释放曲线，其他聚合物基质，脂质体和/或微纤维素。他们可能可以消毒，例如，通过一个过滤细菌挡过滤器，或合并杀菌试剂和无菌的固体成份，它们可溶于无菌水中，或一些无菌可注射介质中。这些成份也可能含有乳浊剂的成份，或者缓慢释放的活性物质的成份，或优先在胃肠道的某些部分形成一种延迟的方式。嵌入成份可以使用的物质包括聚合物和蜡。活性成分也可以采用一个或多个辅料制备成微胶囊形式。

对本发明的化合物口服液剂型包括药学上可接受的乳液，微乳液，溶液，悬浮液，糖浆和酏剂。除了活性成分，剂型的液体可能含有药学上常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，溶解试剂和乳化剂，如乙醇，异丁醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苯甲醇，苯甲酸苄酯，丁烯乙二醇，1,3-丁二醇，油(特别是棉籽油，花生油，玉米胚芽油，橄榄油，蓖麻油，芝麻油)，甘油，四氢呋喃醇，聚乙二醇和脂肪酸酯类山梨醇及其混合物。此外，环糊精，如羟丁基-beta-环糊精，也可用于溶解的化合物。

除了惰性稀释剂，口服成份还可以包括如润湿剂，乳化和悬浮剂，甜味剂，香精，色素，保鲜剂和防腐剂。

除了活性化合物，悬浮液可能含有悬浮剂，例如异硬脂酸乙酯，聚氧乙烯山梨醇和山梨醇酯，微晶纤维素，铝金属氢氧化物，膨润土，琼脂和西黄蓍胶及其混合物。

本发明治疗直肠或阴道药物组合物配方可以是栓剂，它可以由一个或多个发明的化合物混合与一个或多个合适的无刺激性赋形剂或载体包 括准备主办，例如，可可脂，聚乙二醇，一栓剂蜡或水杨酸，并在室温下是固体，但体温的液体，因此，将融化在直肠或阴道腔和释放活性药剂的发明。

本发明的配方是适于治疗阴道类疾病，包括含有药学中已知载体如子宫套，棉球，膏剂，凝胶，膏状，泡沫或喷雾制剂。

对于本发明化合物的局部或透皮给药剂型包括粉剂，喷雾剂，软膏，油膏，面霜，乳液，凝胶，溶液，膏药和吸入剂。在活性化合物无菌条件下与药学接受的载体，及任何防腐剂，缓冲剂，或可能需要混合。

除了本发明中的活性化合物外，药膏，油膏，软膏和凝胶中可能包含如动物和植物脂肪的辅料，油，蜡，石蜡，淀粉，西黄蓍胶，纤维素衍生物，聚乙二醇，有机硅，有机膨润土活性化合物，硅酸，滑石粉，氧化锌，或它们的混合物。

除了本发明中的活性化合物外，粉末和喷剂可以包含的辅料如乳糖，滑石，硅酸，氢氧化铝，钙硅酸盐和聚酰胺粉，或这些物质的混合物。喷剂可能添加常用的，如氟氯烃和挥发性无取代的碳氢化合物，如丁烷和丁烯。

本发明中化合物的贴剂对药物在身体中可控制的分布有额外的好处。这种剂型可通过溶解或分散在缓冲介质中的药剂而形成。吸收促进剂也可用于增加对皮肤本发明中的药剂的通量。这种变化率可以通过任何一方提供的速率控制膜或分散在聚合物基体或凝胶化合物得到控制。

眼科制剂，眼药膏，粉末，溶液等等，也属于本发明的范围之内。

本发明合适的一个或多个化合物的药物组合在肠外治疗中包括与一个或多个药学上可接受的无菌生理水溶液或非水溶液，分散剂，悬浮剂或乳液，或无菌粉末。它们可能重组为无菌注射或优先使用的分散剂，可能含有抗氧化剂，缓冲器，抑菌剂，能使制剂与预期接受人的血液或悬浮剂或增稠剂等渗溶合。

在某些情况下，为了延长药效，可以延缓药物从皮下或肌肉注射的吸收。这可以通过一个具有结晶或无定形物质的不良的水溶解度的悬浊 液来完成。对药物的吸收率则取决于其溶解速率，同时可能要取决于晶粒尺寸和晶型。另外，延迟一个肠外治疗剂型的吸收是通过溶解或悬浮在油介质中药物来实现的。其中储藏式注射策略包括使用聚乙烯氧化物-聚丁烯氧化物，其中使用的介质在室温是流动，在体温时凝固。

储藏式注射剂型是由主体化合物在生物可降解的聚合物，如聚胶酯-聚乙醇酸胶酯下形成微胶囊而制成的。根据药物与聚合物的比例，和特殊的聚合物的性质，药物释放率是可以控制的。其他生物降解聚合物聚的例子包括多聚原酸酯和多聚酸酐。储藏式注射剂型还可以通过将药物包埋在脂质体或微乳液而制备，这与人体组织是相容的。

当本发明的化合物作为药剂给人类和动物进行治疗时，它们可以本身或作为药物组合物而给药。例如，包含0.1％-99.5％(优选是0.5％-90％)的活性成分和药学上可接受的载体。

本发明中的化合物和药物组合物可以应用于组合疗法，即化合物和药物组合物可同时前或后，一个或多个所需的药物使用的治疗或医疗程序。这种应用在组合规则的特定的组合疗法(治疗或程序)将考虑到实现所需的治疗兼容性和/或程序和理想的治疗效果。此疗法的应用对相同的疾病可实现所需要的效果(例如，本发明的化合物可能与另一个抗HCV试剂同时起作用)，或者有可能达到不同的效果(如控制任何不良影响)。

本发明的化合物可通过静脉注射，肌肉注射，腹腔注射，皮下注射，外用，口服，或其他可接受的办法来治疗疾病。这些化合物可用于治疗关节炎的条件哺乳动物(例如，人类，家畜和家养动物)，鸟类，蜥蜴，和任何可以兼容这些化合物其他生物。

本发明还提供了药品包装或套件，包括一个或多个的包装，其中含有对本发明中一个或多个成分的药物组合。可选的此类包装以公告的形式由政府机构规范生产，以生产法规中许可的公开方法使用或销售药品或生物制品，使用或销售对人的治疗制剂。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

1，本发明涉及的通式(I)化合物或其药学上接受的盐，可以抑制多种肿瘤细胞，尤其是能够选择性作用于EGFR L858R/T790M以及EGFR E745_A750/T790M肺癌细胞。对比野生型癌细胞，该类化合物的IC50要高10倍甚至100倍的数量级差别。该类化合物是一类新颖的能够克服现有EGFR-TKI的耐药性并具有选择性的蛋白酶抑制剂。

2，本发明涉及的通式(I)化合物或其药学上可接受的盐，可以抑制多种肿瘤细胞的生长，并对EGFR，Her家族其他蛋白酶产生抑制作用，可用于有效抑制制备抗肿瘤药物，并可以克服现有药物吉非替尼，厄洛替尼等诱发的耐药。如本领域技术人员所理解的，本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐可用于制备治疗人类及其他哺乳动物的肿瘤等过渡增殖性疾病。

本发明中涉及的缩略语具体含义如下：

ACN  乙腈

EA  乙酸乙酯

DMF  N,N-二甲基甲酰胺

PE  石油醚

DCM  二氯甲烷

DMF  N,N-二甲基甲酰胺

MeOH  甲醇

THF  四氢呋喃

K₂CO₃  碳酸钾

TEA  三乙胺

DIPEA  二异丙基乙基胺

DMAP  N,N-二甲基-4-胺基吡啶

TFA  三氟乙酸

NMP  N-甲基吡咯烷酮

Boc  叔丁氧羰基

Tris  三羟甲基氨基甲烷

BSA  牛血清白蛋白

DTT  二硫苏糖醇

ATP  腺嘌呤核苷三磷酸

具体实施方式

本发明的一些方面和实施方案可以通过以下的具体实施例加以进一步说明。本发明中涵盖的化合物可以通过已知的传统技术合成。这些化合物可以从方便可用的起始原料便利地合成。以下是本发明合成的化合物一般合成方案。此处公开的这些方案是描述性的，并不表示限制本领域的技术人员使用其它可能的方法合成化合物。各种方法都是本领域中的常规技术。另外，不同的合成步骤可以应用在不同的方案中合成目标化合物。在此引用的所有文献都以参考文献的方式并入本文之中。

具有通式(I)的化合物可以通过以下方案1和方案2合成。方案1和2描述了合成这些中间体的不同方法，这些方法可以应用在本发明专利中具有通式I-IV结构的化合物的制备上。本领域的技术人员可以通过这些方法的各种修饰来完成作者下面所描述的相似化合物的合成。

具体实施例制备路线中出现的基团符号：该基团符号即表示本发明通式(I)结构中的R基团。

其中的R选自吡唑、4-氟吡唑、1-甲基吡唑、1-甲基-3-三氟甲基吡唑、咪唑，该R基团通过环上的N或C与嘧啶基团连接；

其中的R₁表示H、Cl或CF₃；R₂和R₃独立表示氢、烷基、取代烷基，或者R₂、R₃与N原子一起形成取代的单环、螺环或桥环。

方案1：具有通式(I)的化合物制备路线如下所示：

上述制备路线的具体步骤如下：

步骤1：以THF为溶剂，化合物II与含氮杂环在碱NaH的存在下，通过芳香取代反应得到III。

步骤2：中间体III与4-氟-2甲氧基-5-硝基苯胺在对甲苯磺酸作用下得到IV。

步骤3：以1,4-二氧六环为溶剂，中间体IV和有机胺(IIIa)在碳酸钾的作用下反应得到中间体V。

步骤4：以乙醇和水作为溶剂，氯化铵存在下，以还原铁粉为还原剂，将中间体V还原为中间体VI。

步骤5：以DCM为溶剂，吡啶作为碱，在低温下，中间体VI与丙烯酰氯反应得到最终产品(I)化合物。

方案2：具有通式I的化合物制备路线如下所示：

上述制备路线的具体步骤如下：

步骤1：以DMF为溶剂，对甲苯磺酸存在下，II和4-氟-2甲氧基-5-硝基苯胺反应得到中间体VII。

步骤2：以1,4-二氧六环为溶剂，四三苯基膦钯为催化剂，中简体VII和硼酸酯(IIb)反应得到中间体VIII。

步骤3：以DMF为溶剂，碳酸钾作碱，中简体VIII和有机胺IIIa反应得到中间体IX。

步骤4：以乙醇和水作为溶剂，氯化铵存在下，以还原铁粉为还原剂，将中间体IX还原为中间体X。

步骤5：以DCM为溶剂，吡啶作为碱，在低温下，中间体X与丙 烯酰氯反应得到最终产品(I)化合物。

下面有代表性的例子旨在帮助阐述本发明，而不是有意也不应该被解释为限制本发明的范围。事实上，除了那些出现和描述于此的以外，本发明中文件的全部内容，包括依据此处引用的科技文献和专利的例子，以及由此产生的各种修饰和许多进一步变化对本专业内一般技术人员都是清晰明白的。还应当明白，这些参考文献的引用有助于陈述本文内容。下面的例子包含了重要的补充信息、范例和指导，可适应于本发明中各种变化及类似情况。

实施例1

N-(5-((5-氯-4-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基)丙烯酰胺

合成路线如下：

上述合成路线的具体合成步骤如下：

步骤1：2,5-氯-4-(1H-吡唑-1-基)嘧啶(化合物3)的合成

NaH(400mg,16.67mmol)悬浮在无水四氢呋喃(30mL)中，室温下加吡唑(340mg,5mmol)。反应在室温下搅拌10分钟，冷却到-30℃～-40℃。2,4,5-三氯嘧啶(1.82g,10mmol)溶于四氢呋喃(5mL)配成溶液，一次性加入。反应在-30℃下搅拌20分钟，倒入冰水(50g)中，乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚:乙酸乙酯(100:1～50:1)得白色固体产品(589mg,产率：55.1％)。

步骤2：5-氯-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-胺(化合物5)的制备

2,5-氯-4-(1H-吡唑-1-基嘧啶(550mg,2.57mmol),4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(478mg,2.57mmol)和对甲苯磺酸一水合物(489mg,2.57mmol)溶于乙腈(10mL)，搅拌状态下，反应瓶开口加热到30℃，蒸干溶剂后，再搅拌20分钟。蒸干过程重复两次。反应液冷到室温，加入水(30mL),乙酸乙酯萃取(30mL x 2)。有机层先后用用0.1M稀HCl(30mL x 4)和饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝15:1～3:1)得黄色油状产物(100mg,产率：58.8％)。

步骤3：N1-(5-氯-4-(1H-吡唑-1-基嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯基-1,4-二胺(化合物7)的制备

5-氯-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-胺(100mg,0.275mmol),N1,N1,N2-三甲基乙烷-1,2-二胺(56mg,0.549mmol)和碳酸钾(114mg,0.825mmol)混合于N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中，反应加热至80℃保持1小时。冷却至室温，加入水(50mL)。乙酸乙酯(50mL x 2)萃取。有机层用饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，得黄色油状粗品(120mg,)，不纯化直接投下一步。

步骤4：N4-(5-氯-4-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-基)-N1-(2-(二乙氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(化合物8)的制备

N1-(5-氯-4-(1H-吡唑-1-基嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯基-1,4-二胺(120mg,0.269mmol),铁粉(150mg,2.68mmol)和NH4Cl(150mg,2.80mmol)溶于EtOH/H2O＝2/1(8mL)中，加热至90℃反应1小时。反应冷到室温，二氯甲烷(20mL)加入，硅藻土过滤。滤液用水稀释，再用20毫升二氯甲烷萃取一次。有机层合并，饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1到二氯甲烷:甲醇＝15:1加0.2％体积三乙胺)黄色固体产物(100毫克,产率：89.4％)。LC-MS:m/z 417[M+H]⁺。

步骤5：N-(5-((5-氯-4-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基)丙烯酰胺(化合物9)的制备

N4-(5-氯-4-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-基)-N1-(2-(二乙氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(100mg,0.0240mmol)溶于二氯甲烷(40毫升)中，冷却到-40℃，加入吡啶(0.2mL)，丙烯酰氯(0.1mL)。反应在-40℃下搅拌十分钟，倒入20毫升水和40毫升饱和食盐水得混合溶剂中。水层分出，再用30毫升二氯甲烷萃取一次。有机层用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1到二氯甲烷:甲醇＝15:1加0.2％体积的三乙胺)得不纯化合物，酸性高效液相(添加0.1％体积甲酸)分离，得25mg黄色固体产物(产率：22.2％)。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.72(brs,1H),9.54(s,1H),9.10(brs,1H),8.52-8.58(m,2H),7.78-7.87(m,2H),6.65-6.72(m,2H),6.46-6.54(m,2H),5.73(dd,J＝10.0,1.6Hz,1H),3.88(s,3H),3.09(t,J＝5.2Hz,2H),2.75(t,J＝5.6Hz,2H),2.66(s,3H),2.53(s,6H).LC-MS:m/z 471[M+H]⁺. 

实施例2

N-(5-((5-氯-4-(4-氟1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基)丙烯酰胺

合成方法参考实施例1。

合成的终产物的¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ9.53(s,1H),9.42(s,1H),8.49(s,1H),7.82(s,1H),7.73(d,J＝4.2Hz,1H),6.73(s,1H),6.56(d,J＝1.4Hz,1H),5.75(d,J＝11.7Hz,1H),3.90(s,3H),3.13(m,2H),2.88–2.40(m,10H).LC-MS:m/z 489[M+H]⁺. 

实施例3

N-(5-((5-氯-4-(1H-咪唑-1-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲胺基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺

合成方法参考实施例1。

合成的终产物的¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)9.74(s,1H),δ9.70(brs, 1H),8.92(brs,1H),8.8.24-8.26(m,2H),8.05(s,1H),7.17(s,1H),6.54-6.77(m,3H),5.76(d,J＝8.8Hz,1H),3.94(s,3H),3.12(t,J＝5.2Hz,2H),2.80(t,J＝5.2Hz,2H),2.68(s,3H),2.56(s,6H).LC-MS:m/z 471[M+H]⁺. 

实施例4

N-(5-((5-三氟甲基-4-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基)丙烯酰胺

上述制备路线的具体合成步骤如下：

步骤1：2-氯-5-三氟甲基-4-(1H-吡唑-1-基)嘧啶的合成

在N₂保护下，NaH(2.35g,58.75mmol)溶于THF，降温至-10℃，吡唑(1g,14.68mmol)溶于THF逐滴加入反应瓶中。该反应体系室温搅拌10分钟，后降温至-40℃。2,4,-二氯-5-三氟甲基-嘧啶(3.49g,16.15mmol)溶于5ml THF中，一次性加到上述反应体系中。该反应体系在-40℃ 下搅拌20分钟。然后将反应体系倒入冰水中，EA萃取，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na₂SO₄干燥，过滤，旋干。残留物经柱层析(PE:EA＝50:1)得到白色固体产品(647mg,产率:16％)。LC-MS:m/z 249[M+H]⁺. 

步骤2：5-三氟甲基-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-胺

中间体2-氯-5-三氟甲基-4-(1H-吡唑-1-基)嘧啶(647mg,2.61mmol)，4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(485.3mg,2.61mmol)和一水合对甲基苯磺酸(496.5mg,2.61mmol)溶于10ml乙腈中，反应器敞口置于油浴中，在130℃加热至溶剂挥发完全。同样的操作重复两次。反应体系降到室温，用30ml水稀释，过滤得粗产品。粗产品经PE/EA＝10：1打浆得到干净的黄色固体产品(524mg,产率:52％)。LC-MS:m/z 399[M+H]⁺. 

步骤3：N1-(5-三氟甲基-4-(1H-吡唑-1-基嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯基-1,4-二胺

中间体5-三氟甲基-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-胺(524mg,1.72mmol)，N1,N1,N2-三甲基乙二胺(194mg,1.9mmol)和K₂CO₃(357mg,2.58mmol)溶于10ml二氧六环中。反应体系在80℃搅拌1小时。反应体系降到室温，50ml水稀释，EA(50ml x 2)萃取,有机相饱和NaCl溶液洗涤，无水Na₂SO₄干燥，过滤，旋干。残留物经柱层析(PE:EA＝DCM:MeOH＝40:1to 20:1)得到黄色油状产品(500mg,产率:61％)。LC-MS:m/z 481[M+H]⁺. 

步骤4：N4-(5-三氟甲基-4-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-基)-N1-(2-(二乙氨 基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺

中间体N1-(5-三氟甲基-4-(1H-吡唑-1-基嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲基氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯基-1,4-二胺(800mg,1.67mmol)，还原Fe粉(466.5mg,8.33mmol)和NH4Cl(446mg,8.33mmol)溶于8mlEtOH/H₂O(EtOH/H₂O＝2/1)的混合溶液中。反应体系在90℃搅拌1小时。反应体系降到室温，20ml DCM加入体系中，通过硅藻土过滤，DCM洗涤。加入20ml饱和NaCl溶液，DCM(50ml x 2)萃取,饱和NaCl溶液洗涤，无水Na₂SO₄干燥，旋干得到黄色固体产品(200mg，产率：20％)直接用于下一步。LC-MS:m/z 451[M+H]⁺. 

步骤5：N-(5-((5-三氟甲基-4-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基)丙烯酰胺

在氮气保护下，中间体N4-(5-三氟甲基-4-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-基)-N1-(2-(二乙氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(100mg,0.0240mmol)，吡啶(0.2ml)溶于15ml DCM，降温至-40℃，然后丙烯酰氯(0.1mL)溶于1ml DCM缓慢加入上述混合体系中。反应体系在-40℃搅拌10分钟，然后倾倒入20ml冰水中。DCM萃取，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na₂SO₄干燥，旋干。残留物经制备HPLC纯化得到黄色固体产物(15mg，产率:10％)。

1H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ9.58(s,1H),9.22(d,J＝1.6Hz,1H),8.55(s,1H),7.92(s,1H),7.75(s,1H),6.68(s,1H),6.45(d,J＝1.7Hz,2H),5.74–5.66(m,1H),3.86(s,3H),3.17–3.07(m,2H),2.91–2.76(m,2H), 2.67(s,4H),2.63–2.48(m,6H).LC-MS:m/z(ES+):505[M+H]⁺.

实施例5

N-(5-((5-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰胺

上述制备路线的具体合成步骤如下：

步骤1：4,5-二氯-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯)嘧啶-2-氨基

将2,4,5-三氯嘧啶(1.5g,8.1mmol)，4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(500mg,2.7mmol)和一水合对甲苯磺酸(616mg,3.2mmol)溶于DMF(45mL)中，然后加热至105℃反应5小时。然后反应液用冰的饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，EA(30ml x 2)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗3次，干燥过滤，浓缩。粗产品经硅胶柱纯化得到黄色固体4,5-氯-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯)嘧啶-2-氨基(300mg,产率：34％)。LC-MS:m/z 332(M+H)⁺. 

步骤2：5-氯-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-氨基

将4,5-氯-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯)嘧啶-2-氨基(166mg,0.5mmol)，1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(156mg,0.75mmol),Pd(PPh3)4(115.5mg,0.1mmol),Na₂CO₃(2M溶液0.8ml)and LiCl(4.3mg,0.1mmol)溶于1,4-二氧六环(15mL)，然后氮气保护下加热至95℃反应6小时。之后反应液加水，DCM(30ml x 2)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥过滤，浓缩。粗产品经硅胶柱纯化得到黄色固体5-氯-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-氨基(110mg,产率：58％)。LC-MS:m/z 379(M+H)⁺。

步骤3：N1-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺

将5-氯-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-氨基(110mg,0.29mmol)，N,N,N'-三甲基乙二胺(44mg,0.44mmol)和K₂CO₃(80mg,0.58mmol)溶于DMF(5mL)。然后氮气保护下加热至80℃反应1小时。之后反应液加水，EA(30ml x 2)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥过滤，浓缩。粗产品经硅胶柱纯化得到红色固体N1-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺(100mg,产率：75％)。LC-MS:m/z 461(M+H)⁺. 

步骤4：N4-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺

N1-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲氨基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺(100mg,0.22mmol),还原铁粉(121mg,2.2mmol)和NH₄Cl(115mg,2.2mmol)溶于10ml EtOH/H₂O(v/v＝1/1)。然后加热至80℃反应1小时。之后反应液过滤，滤液用二氯甲烷(30ml x 2)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥过滤，浓缩。粗产品经硅胶柱纯化得到黄色固体N4-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(80mg,产率：80％)。LC MS:m/z 454(M+H)⁺. 

步骤5：N-(5-((5-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-苯甲氧基)丙烯酰胺

N4-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(80mg,0.19mmol)溶于DCM(50mL)，然后冷却到-30℃，加入吡啶(0.2ml)，然后缓慢加入丙烯酰氯(51.3mg,0.57mmol)。反应液在-30℃反应15分钟然后加入冰水淬灭。二氯甲烷(30ml x 2)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤，干燥过滤，浓缩。粗品经硅胶板纯化得到粗产品，粗产品经制备HPLC分离得到白色固体N-(5-((5-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-苯甲氧基)丙烯酰胺(30mg,产率：32％)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),9.94(s,1H),9.16(s,1H),8.29(s,1H),8.18(s,1H),8.04(s,1H),7.22(s,2H),6.69(s,1H),6.50(m,2H),5.74(m, 2H),4.02(s,3H),3.93(s,3H),3.74(s,3H),2.97(m,2H),2.69(s,3H),2.47(m,2H),2.48-2.37(m,6H).LC-MS:m/z 486(M+H)⁺. 

实施例6

N-(5-((5-氯-4-(1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)胺)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧苯基)丙烯酰胺

合成方法参考实施例5

合成的终产物的¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.06(s,1H),9.79(s,1H),9.38(s,1H),8.38(s,1H),8.02(s,1H),6.79(s,1H),6.59(m,1H),6.42(d,J＝15.2Hz,1H),5.72(d,J＝8.0Hz,1H),4.07(s,3H),3.94(s,3H),3.00(t,J＝5.2Hz,2H),2.70(s,3H),2.55(m,2H),2.41(s,6H).LC-MS:m/z 553(M+H)⁺. 

上述实施例1-6制备的化合物的生物活性测试

此类化合物对EGFR野生型和EGFR-T790M突变的激酶IC50测试：

EGFR(WT)为野生型表皮生长因子受体，EGFR(T790M)为带有第790位氨基酸由苏氨酸突变为甲硫氨酸的表皮生长因子受体，RGFR(L858R)为带有第858位氨基酸由亮氨酸突变为精氨酸的表皮生长因子受体，EGFR(L858R/T790M)为同时带有第858位氨基酸由亮氨酸突变为精氨酸及第790位氨基酸由苏氨酸突变为甲硫氨酸的表皮生长因子受体。

激酶活性检测：这个测试使用的是Kinase-Glo Plus luminescence kinase assay kit(Promega)。它通过定量分析激酶促反应后残留ATP含量来检测激酶活性。测试中的荧光信号与现有ATP含量相关。

配置50uL的反应液，包括40mM Tris,pH 7.4,10mM MgCl₂,0.1 mg/ml BSA,1mM DTT,0.2mg/ml Poly(Glu,Tyr)substrate,10M ATP and EGFR。将待测化合物配成10％DMSO溶液，取5uL稀释到50uL上述反应液中得到最终DMSO浓度为1％的反应液。所有酶催化反应都在30℃下进行35分钟。对于30分钟预孵化的反应，酶先和抑制剂孵化30分钟，然后加入ATP和底物开始反应。酶催化反应结束后，反应液中加入50uL Kinase-Glo Plus Luminescence kinase assay solution(Promega)，继续在室温孵化5分钟。荧光信号时由BioTek Synergy 2microplate reader测量。IC50是用GraphPadPrism5.00(四参数逻辑斯谛方程)计算得到。表1为实例1-6的生物活性测试数据结果

表1，生物活性测试数据

本发明的3-(2-嘧啶氨基)苯基丙烯酰胺类化合物与ATP的竞争试验中，由于存在与蛋白半胱氨酸位点形成不可逆迈克尔加成反应，所以对激酶都体现出较高的抑制活性。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其前药分子，

其中，R选自吡唑、4-氟吡唑、1-甲基吡唑、1-甲基-3-三氟甲基吡唑、咪唑，该R基团通过环上的N或C与嘧啶基团连接；

R₁选自H、Cl、CF₃；

R₂和R₃独立选自氢、烷基、取代烷基，或者R₂、R₃与N原子一起形成取代的单环、螺环或桥环。

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或其前药分子，其特征在于，所述化合物为：

3.权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐或其前药分子在制备抗肿瘤药物中的应用。

4.如权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐或其前药分子在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物是治疗以下任一种肿瘤疾病的药物：非小细胞肺癌，小细胞肺癌，肺腺癌，肺鳞癌，胰腺癌，乳腺癌，前列腺癌，肝癌，皮肤癌，上皮细胞癌，胃肠间质瘤，白血癌，组织细胞性淋巴癌，鼻咽癌。

5.如权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐或其前药分子在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述化合物或其药学上可接受的盐或其前药分子作为抗癌药物时，能够与其他抗癌药物联合用药。

6.一种药物，其特征在于：该药物的活性组分为权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐或其前药分子。

7.如权利要求6所述的一种药物，其特征在于：该药物为组合物，该药物组合物包括权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐或其前药分子，以及溶剂化物或药学上可接受的载体。

8.如权利要求6或7所述的药物，其特征在于：所述药物或药物组合物用于治疗或控制非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠间质瘤、白血病、组织细胞性淋巴癌、鼻咽癌。

9.如权利要求6或7所述的药物，其特征在于，所述药物或药物组合物的剂型为：胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、含片、粉剂、颗粒剂、喷雾剂、软膏、油膏、面霜、乳液、凝胶、溶液、膏药、吸入剂，或作为悬浮在水中的非水性液体，或作为油包水或水包油的乳状液体，或作为酏剂或糖浆或漱口水。

10.如权利要求6或7所述的药物，其特征在于：所述药物的活性组分在药物中的重量百分比为5％-70％。