CZ265299A3

CZ265299A3 - Stabilizovaná směs obsahující fibrinogen

Info

Publication number: CZ265299A3
Application number: CZ19992652A
Authority: CZ
Inventors: Israel Nur; Lilliana Bar; Oded Lieberman
Original assignee: Omrix Biopharmaceuticals S. A.
Priority date: 1998-01-30
Filing date: 1998-01-30
Publication date: 2000-03-15

Abstract

Stabilizovaný roztok vzorků obsahujících fibrinogen, zejména stabilizovaný roztok biologicky aktivní složky (BAC), která obsahuje proteiny, odvozené z krevní plazmy obsahující fibrinogen, kyselinu tranexamovou a arginin nebo lysin nebo směsi argininu a lysinu,jejich farmaceutickypřijatelné soli, látky tvořící pufrovaný roztok ve vodnémprostředí.

Description

Stabilizovaná směs obsahující fibrinogen

Oblast techniky¹

Vynález se týká směsi obsahující fibrinogen, zejména stabilizovaného roztoku biologicky aktivní složky (BAC), dvousložkové tkáňové klihoviny obsahující samostatné složky A a B, stejně jako fibrinového koagula, získate1ného smísením složky A a složky B.

Dosavadní stav techniky:

použity pro řadu kli hov i nách nebo složka (BAC) je

Vzorky obsahující fibrinogen mohou být aplikací, jako ve dvousložkových tkáňových fibrinových koagulech. Biologicky aktivní viskózní roztok proteinů obsahující fibrinogen, typicky v množstvích kolem 50 mg fibrinogenu na ml, který byl odvozen z kryoprecipitáce plazmy. Taková BAC je popsána ve HO 94/22503. Jelikož postupy, používané pro inaktivaci virů, a koncentrace zapříčiňují zvýšení proteolytické aktivity v kryoprecipitátu, je požadována stabilizace finálního produktu antiproteolytickým činidlem. Některé z těchto proteolytických enzymů jsou ve formě zymogenu (proenzym) a jejich aktivace je promotována nepatrným množstvím aktivovaných enzymů přítomných v kryoprecipitátu. Bylo zjištěno, že teplotní rozmezí používané v průběhu separace kryoprecipitátu zvyšuje aktivaci prekurzorů proteolytických enzymů. Tato aktivace podle všeho nastává kaskádovou“ aktivují formy prekurzorů jiných včetně generování fybrinolytíckého z plasminogenu prekursoru. Bylo zjištěno, že inhibice fibrinolýzy a Jiné proteolytické aktivity snižuje degradaci faktoru VIII a jiných koagulačních a adhezivnlch proteinů. Může dojít k tomu, že BAC koaguluje spontánně již sekvencí, kdy proteazy proteolytických enzymů, plasminu po uložení na jeden den při 2 až 6 °C. Při nižších teplotách • · · · φ φ * ·

		• · · φ a · » • · · ♦ Φ φ · >	• 4 · Φ Φ Φ · · 4
		*-> · · · · · » ···· ««,» e·	• · ·♦ 4 9
je tento postup	pomalejší; to	umožňuje skladování	po řadu
měs i ců při -18	°C; BAC bez	dalšího zpracování	tvoří po

rozmražení pevné koagulum a nemusí být rekonstituována. Stejný jev byl pozorován s nepurifikovaným kryoprecipitatem.

Během výrobního postupu jsou plasminogen a další proteazy závislé na vitaminu K odstraňovány adsorpcí na hydroxidu hlinitém. Avšak některé proteázy jsou ponechány ve finálním produktu.

Je požadováno stabilizovat fibrínogen obsažený ve směsi, zejména roztok BAC, aby se zajistila bezpečná využitelnost, pokud se aplikuje při klinických operacích.

Podstata vynálezu!

Překvapivě nyní bylo tohoto předmětu dosaženo směsí obsahující fibrínogen,

4-( aminomethyl)cyklohexan-karboxylovou kyselinu, stejně jako arginin, lysin , nebo jejich kombinaci. Výhodně je směs přítomna jako roztok fibrinogenu, tranexamové kyseliny ( 4-( aminomethyl)-cyklohexan-kyrboxylově kyseliny), stejně jako argini nu, lysinu nebo jejich kombinací. Ve výhodném provedení obsahuje vynález roztok biologicky aktivní složky (BAC), která byla stabilizována v kombinaci s fyziologicky přijatelnými solemi tranexamové kyseliny a argininu nebo lysinu nebo kombinacemi lysinu a argininu. Výhodně je roztok napufrován na fyziologicky přijatelné hodnoty pH. Tranexamová kyselina je proteázovýn inhibitorem, a jejím přesným názvem je 4-( aminomethyl)cyklohexan-karboxylová kyselina Podle vynálezu se dává přednost pufru, který obsahuje výhodně glycin.

Arginin, stejně jako lysin, může být použit podle vynálezu jako běžná sůl, například jako hydrochlorid. BAC se přednostně získal z koncentrovaného kryoprecipitátu po jeho zpracování, jak je popsáno v EP-A-534 178.. Arginin byl popsán «··« *· ·· ·· ··

ve stavu techniky jako stabilizátor koncentrátů terapeutických proteinů. Nicméně synergický účinek, zajištěný kombinací tranexamové kyseliny a argininu stejně jako lysinu, je překvapuj ící.

Přednostně je množství tranexamové kyseliny v roztoku BAC od asi 1 do 20 % hmotnostních. Množství argininu nebo lysinu

- hydrochloridu je přednostně od asi O,1 do 4 % hmotnostních. Ještě výhodnější jsou množství tranexamové kyseliny od asi 5 do 15 % hmotnostních, zejména výhodně od asi 8 do 12 % hmotnostních. Obvykle se používá kolem 10 % hmotnostních. Množství hydrochloridu argininu nebo lysinu je výhodněji v rozmezí od asi 1 do 3 % hmotnostních, zejména výhodné jsou asi 2 % hmotnostní.

Vzorek obsahující fibrinogen, zejména v roztoku BAC, je přednostně odvozen z kryoprecipitátu, který byl koncentrován ultrafi 1trací, jak je popsáno ve HO-A-94-22503. BAC má přednostně obsah fibrinogenu od asi 15 do 150 mg/ml, zejména od 20 do 80 mg/ml. Obsah fibrinogenu lze změřit postupem podle Claussovy metody (Clausse, A., Gerinnungsphysio1ogishe

Schmellmethode zur Bestimmung des Fibrinogens, Acta. Haematol., 17, 237-247, 1957).

Použití BAC odvozeného z koncentrovaného kryoprecipitátu je výhodné, jelikož taková frakce obsahuje namísto fibrinogenu také významné složky krve, které hrají důležitou roli při srážení krve, když se proteolytickýn enzym, jako je lidský trombin, uvede do kontaktu s roztokem BAC. Významnými složkami jsopu faktor VIII, faktor XIII, fibronektin, vitronektin, von Wilebrandův faktor (vHF), atd.

Přednostně jsou složky odvozeny z kryoprecipitátu, zejména koncentrovaného kryoprecipitátu. Nicméně je také možné, aby byly složky fibrinogen, faktor VIII, faktor XIII, fibronektin, von Hillebrandův faktor (vHF), vitronektin, připraveny rekombinantními postupy. Tyto přípravy, například ···· 9«

9 9 <· faktoru VIII, jsou komerčně dostupné.

Bylo zjištěno, že kombinace tranexamové kyseliny a argininu nebo lysinu stabilizuje směs obsahující fibrinogen, zejména roztok biologicky aktivní složky BAC (při 2 až 6 °C po alespoň 14 dní zachováním alespoň 50 % aktivity fibrinogenu). Pokud se použila pouze jedna ze složek, byl vzorek výrazně více nestabilní.

Dále je překvapivé, že použití tranexamové kyseliny a hydrochloridu argininu nebo lysinu naopak neovlivňuje vlastnosti krevního koagula, získaného z BAC stabilizované podle vynálezu. Například maximální protažení koagula bylo udrženo po 14 dní skladování konkrétních vzorků, a stejně tak byla také pevnost v tahu udržena na stejné úrovni. Také faktor VIII aktivity v BAC nebyl negativně ovlivněn, když byla přidána tranexamová kyselina a arginin nebo lysin.

Zejména je stabilizovaný roztok biologicky aktivní složky BAC podle vynálezu vhodný pro přípravu dvousložkové tkáňové klihoviny. Tkáňová klihovina podle vynálezu je chápána jako systém, který může být aplikován pacientovi, nebo na pacienta, který to potřebuje, například k zabránění velkého krvácení v průběhu chirurgických operací. Tkáňová klihovina je také označována jako fibrinová klihovina a je v podstatě analogická přirozené kaskádě srážení krve. Tkáňová klihovina vycház í, před použ i t i m př i chem i ckých operac í ch, ze dvou složek. Jedna složka obsahuje fibrinigen, který při podrobení se působení proteolytickému enzymu, jako je lidský trombín, tvoří fibrin, což je polymer tvořící základní materiál z přirozeného krevního koagula. Při chirurgické operaci jsou dvě složky aplikovány například dvěma injekčními stříkačkami, které jsou současně vyprazdňovány za míšení obou složek tak rychle, jak je to potřebné, a tím se brání blokování přívodních drah. Roztok podle předloženého vynálezu je výhodný pro přípravu dvousložkové fibrinové klihoviny, jelikož roztok fibrinogenu nemůže být čerstvě připravován, ale může být skladován v lednici při -18 °C, jinak ztrácí nejen svou srážecí schopnost, ale i své ostatní mechanické vlastnosti. Stupeň aktivity fibrinogenu muže být vyvažován poskytnutím větších množství fibrinogenu v roztoku tak, že vlastní použití roztoku obsahujícího fibrinogen (BAC) není zdržováno.

Proto je předmětem předloženého vynáelzu také dvousložková tkáňová klihovi na obsahující samostatné složky A a B, kde složka A obsahuje roztok podle provedení popsaného v patentových nárocích 1 až 10 a složka B obsahuje roztok proteolytického enzymu, který je schopný reagovat s fibrinogenem (nebo BAC, přesněji) za vzniku fibruinu.

Přednostně je proteolytickým enzymem lidský trombin, zejména který má aktivitu od asi 2 do 4000 IU/ml. Aktivita trombinu je měřena testem na srážení (Evropský lékopis). Pro odborníka v dané oblasti techniky je zřejmé, že fibrinogenová klihov ina má být definována, namísto svým obsahem proteinu schopného srážení, definováním na bázi fibrinogenu schopného srážen í.

Aby bylo možné poskytnout vyvážený roztok smíchaných složek A a B, může být výhodné přidat do složky B přibližně stejnou koncentraci tranexamové kyseliny a argininu.

Výhodně se složky A a B aplikují takovým způsobem, že se smísí stejné objemy dvou složek a aplikují se pacientovi na straně příslušné rány. Je samozřejmě zřejmé, že dvousložková tkáňová klihovina může být použita nejen v průběhu chirurgických operací, ale také v jiných případech, kdy je třeba zastavit krvácení. Obě složky jsou přednostně aplikovány v poměru 1:1.

Následující příklady dokládají výhody stabilizující kombinace tranexamové kyseliny a argininu. Tyto příklady však nejsou míněny v žádném případě jako omezující, ale pouze ·· ·· • · · • · « • · · vysvětlující vynález podrobněji.

Příklady provedeni vynálezu:

Příklad 1

Příprava testované látky

Bezprostředně po získání vzorku z produkční linie se k 800 ml vzorku přidá do objemu 0,8 g azidu sodného (0,1%) ve formě prášku, aby se reguloval růst bakterií. Přidání bakteriostatu je nezbytné k zabránění kontaminace, jelikož je obtížné filtrovat vysokou koncentraci fibrinogenu ve vzorku.

Každá testovaná koncentrace se připraví podle receptu přidáním směsi dvou pevných složek do lOOml podílu vzorku. Přidávání tranexamové kyseliny a argininu-HCl se provádí v kádince za mírného míchání ( vícebodová magnetická míchací deska) po 10 min. Všechna testovaná složení se připraví paralerně a jejich koncentrace fibrinogenu se upraví na 50 mg/ml přidáním pufru B.

skup.	BAC	Tranexamová	Arginin	Pufr B	Výsledný
č.	(ml)	kys. (g)	(g)	(ml)	objem
A	100	0	0	20	120
B	100	0	2.4	17.6	120
C	100	6	2.4	11.6	120
D	100	12	2.4	5.6	120
E	100	12	0	8	120
F	100	12	1.2	6.8	120
G	100	12	4.8	3.2	120

••0 • *

Po dalších 5 minutách míchání byly lOml křemičitanové skleněné ampulky naplněny 5ml podíly. Všechny ampulky byly současně zmrazený a uskladněny při -80 °C do doby použití. Před experimentem se uloží na teplotu 2-6 °C (den “O, doba základní linie).

Dvě ampule z každé skupiny se uchovávají při -80 °C jako pozitivní kontrolní vzorky. Všechny experimenty se provádějí duplicitně a ampulky se označí podle koncentrace stabilizátoru následujícícm způsobem:

SKUPINA A: nestabi1izované ampule A1-A20

SKUPINA B: O % tranexamové kyseliny a 2 % arginin-mono hydrochloridu, ampulky B1-B20

SKUPINA C^; 5 % tranexamové kyseliny a 2 % arginin-mono hydrochloridu, ampulky C1-C20

SKUPINA D^: 10 % tranexamové kyseliny a 2 % arginin-mono hydrochloridu, ampulky DÍ-D20

SKUPINA E: 10 % tranexamové kyseliny a O % arginin-mono hydrochloridu, ampulky E1-E20

SKUPINA F: 10 % tranexamové kyseliny a 1 % arginin-mono hydrochloridu, ampulky F1-F20

SKUPINA G: 10 % tranexamové kyseliny a 4 % arginin-mono hydrochloridu, ampulky G1-G20

Další množství vzorků jsou uchovávána jako retenční vzorky a jsou použity, pokud je to potřeba.

Před testováním se všechny na -80 °C zmrazené ampule přenesou na dobu 15 minut na 37 °C a dále se uchovávají při 2-6 °C (den 0). Z každé skupiny se dvě ampule válcují při teplotě místnosti po 15 minut v den 0 a provedou se testy na jejich mechanické vlastnosti a biologické testy, a provede se jejich hodnoceni. Stejné postupy se opakují ve dnech 2, 4, 7, 9, 11, 14 a 30.

» * · · • · · • · • « • · ···· ·♦ pozměněná strana

Mechanické vlastnosti

Test na prodloužení fibrinové klihoviny se provádí na tažném zařízení CHATILLON MODEL TCD-200 s CHATILLON měřidlem silou 1000 g. Data se uchovávají v počítačovém programu.

Tímto zařízením je motorem řízená tažná a lisovací zkoušečka určená pro testování 'pamětí hmoty, mezí průtažnosti a mezi pevnosti (v lomu) různých produktů a materiálů.

K výrobě standardizovaných sraženin ze sol idifi kované klihoviny ve formě, kterou lze snadno upevnit do tažného testovacího zařízení, byly určeny specielní odlitky. Ty sestávají ze dvou konických hliníkových forem, každá vysoká

2,5 cm, které jsou vloženy na vrchol další (viz obr. 1). Kapalné složky klihoviny jsou injikovány do odlitku, kde tuhnou na standardní sraženinu 12,7 mm x 5 mm.

Obr. 1 znázorňuje specielní odlitek určený k udržení kapalné klihoviny, než ztuhne.

Potom zařízení klihoviny jsou odlitky zakotveny do a měří se pevnost v tahu v odlitku tažením obou částí tažného testovacího a prodloužení válce odli tku.

Počítačový program monitoruje tažnou sílu a prodloužení každých 0,2 s. Body jsou vynášeny graficky na dvě osy, prodloužení proti síle v gramech v každém daném čase.

Postup testování

Ampulky obsahující BAC byly inkubovány při 37 °C po 15 minut a potom válcovány při teplotě místnosti po 15 minut. Určené hliníkové odlitky (jak byly popsány výše) byly naplněny kombinovaným roztokem 0,5 ml BAC a 0,5 ml trombinu (8 IU/ml).

4* 49 • · 9 4 • 4 4 ♦ 44

4

pozměněná strana

Odlitky byly ponechány při teplotě místnosti po 45 minut, aby klihovina ztuhla, a potom byly upevněny na měřidlo a získané sraženiny byly testovány na schopnost maximálního prodloužení a jejich pevnost v tahu ( síla tahu požadovaná k přetržení sraženiny).

Provedení biochemických testů

Byla testována stabilita následujících proteinů popsanými postupy =

Srážecí aktivita fibrinogenu:

Fibrinogen byl měřen kvantitativně metodou sráženi podle Clausse.

/P

Vliv různých koncentrací kyseliny tranexamové a argininu -HC1 na sílu/mm (sklon) sraženiny

Skupina G _1	10% TEA	4% Arg.		00 X o	1,83	CO i \| 1	LO	Tt ι/γ 4 <
Skupina F	10% TEA	1% Arg.		í 3,26	CN CO	3,17	3,12	3,21	Ch t—( Co	3,08
Skupina E	10% TEA	0 % Arg.		3,92	Tt CO	3,49	3,49	r- cO^ co^	3,34	r~- cO^ co
Skupina D	10 % TEA	2 % Arg.		co	3,17	3,02	2,79	2,71 1	CO Γγ <N	2,82
Skupina C	5 % TEA	2% Arg.		Ch Tt Co	3,3	3,24	2,95 !	2,92	2,94	2,86
Skupina B	0 % TEA	2% Arg.		i 3,55	Ογ	1,13
Skupina A	0 % TEA	0 % Arg. \|		Tt co CN	θ'	0,5
			inkubace-dny	o	-	Tt		O\	-	Tt

(D i-.

o

-rt

N rt •4—» cc

S)

O

X) >N

O rt ·*—> ><u rt

CU <υ • — rt rt c

<υ >N rt u

<Z)

C rt o

>N £

ΕΛ c

o s

cň

U ·—> 3 >yi >

N <

w

H o

XI <u c

ti)

u.

<

T3

X £

<u

N lε

N eu >o >

N oo >N •3• >u.

CU

O

U rt

-O rt rt

UD

O o

rt« rt rt o

>N rt

U.

w cn

O rt >

o

Cu rt rt <u rt >Q

-rt c

>o rt

N rt

-4—» <Λ

-rt ε

<

w

H •ta ' tata ♦ « ta ta «« ta ta· ta · · • ta ta ta .« * · • ta ta·* ·♦ ta· ♦ * * 4 ta · ta · •·· ··· • · ♦ · «· <rH tí

O >N l-i

O

Λ tí

Ch

O

X5

O w

pj c

<D

ÓD

O s

’μ<

X>

G

X5 oj w

X)

O c3

O r—4

O ffi

I d

.s '3 • fH 00 cJ σ3

-O >

O a

cá

X o

C cá t-<

-*->

£*s c

o

CZ3

FX

Příklad 3

O d

í-4 •Μ c

o σ

«

O rC

O

C

N <a »-4

Skupina G

10% TEA

[ 4% Arg.

39,46

41,65

39,2

SO xř θ' xř

38,5

37,61

37,28

40,79

37,15

Skupina F

ob

r—4

1—4 <5

o xř

,56

o

8

SO xř

CO Tt

CO MO

o r— (

T 4

es Tf

CO Tt·

O

39,

o

co

os co

00 co

Os CO

oj)

W σ! d

1 % 01

0%A

41,79

40,99

39,82

37,08

41,04

39,28

CO r- l> co

40,49

40,47

Skupí

naD

H

oč

F~H Ch

SO xř

i—4 O

CO O

ΜΊ es

O

Os co

00 co

CO »—4

o r-H

CS

40,

00

i—H xř

xř

n Xř

o

os co

Os co

OS co

• rH I CO

na C

á H ŽČ

1? 2?

OO i—4

CO Os

00 co

CO o

oo o

f™4 so

es 00

<s co

Tfr es

VO

ř)

i——1

o xr

i—4 Xř

<s xř

o co

Os CO

Γ- co

Os co

<n co

Skupí

naB

oč 2^

es es

i—4 O

t>

i 1 xř

o

Tt

00 vo

F 4 co

Tt es

O

ČS

co

Tť co

eS CO

t—4 Π

oo

00 f ¹ *4

co τ—1

00 r '4

co 4-M

Skupí

na A

0 % TEA

I³ o

31,96 1

35,2

26,23

vo rí CO

xf CO

23,37

20,16

23,91

22,13

Skupí

[ožení při -

O

-dny

o o

Lkubace

o

Os

*—1 1—4

xř »—4

30

d

c <u o

c « T-4 1-H x>

» fH M-4 c

cu o

Λ σ

ω «•fH c

o >N *σ3

1-4

CZ3

O

N • fH

X>

ctf +-» «3 w

H

U ><D >

N • ·

·*

Příklad 4 >

fl

H

O

-♦->

L cd ta

L cl cd fl

O

W fl fl

H cd cd >Q >

O a

cd

X

1) fl cd

H

4->

L c

• rfl o

ΙΛ řo ta o

ci

H fl

1)

O fl o

ta ta o

fl

N »fl l->

Skupina G	10% TEA	4% Arg.	m r“-4		10,67	6,85	tn i—fl <3\	11,73	[ 7,23 1	r—1 cn o?	8,46
Skupina F	10 % TEA	i T—A	13,51		10,52	r—4 *—( OO	co Os oo'	SO t-fl 1—<	n i—1 OO	Γ- i—4 <h	1 8,09
Skupina E	10 % TEA	•&v % o	12,87		cm oo	r—4 OS Cxď	8,68	8,84	1 8,69 1	Ol ry σ·Γ	8,66
Skupina D 1 1_	10% TEA	2 % Arg. \|	15,26		11,87	10,15	10,28	r·^ CO τ—fl	1 10,19	\| 10,16	10,13
Skupina C l	5 % TEA	2% Arg.	13,98		11,22	9,79	1 4 σΓ	8,98 I	1 7,77	v> ι/γ oo*'	8,89
Skupina B	0 % TEA	2% Arg.	11,15		Ch .—1 Ch	OO co^ cn	cm co^ scf	i—4 M0 tr?	00 τζ cí	CO r·—4 co	co^ σί
Skupina A	0 % TEA	0 % Arg.	co T—A o\		8,77	6,54	4,78	6,19	1 3,62	1 4,27	i—1 \O ta
			uložení při 70 °C	inkubace -dny	o	-	Tf	r-	Ch	d—4 i—4	fl r—4

oo

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Směs obsahující fibrinogen, 4-(aminomethyl)-cyklohexankarboxylovou kyselinu (kyselinu tranexamovou), stejně jako arginin, lysin nebo jejich kombinaci, kde obsah tranexamové kyseliny je od asi 1 % do 20 % hmotnostních a obsah argininu nebo lysinu je od asi O,1 % do 4 % hmotnostních hydrochloridu argininu nebo lysinu.
2. Směs podle nároku 1 vyznačující se tím, že obsahuje roztok fibrinogenu, tranexamové kyseliny stejně jako argininu, lysinu a/nebo jejich kombinace.
3. Směs podle nároku 2 vyznačující se tím, že roztok obsahuje biologicky aktivní složku (BAC), kterou je roztok proteinů odvozený z krevní plasmy obsahující fibrinogen, tranexamovou kyselinu a arginin nebo lysin nebo směsi argininu a lysinu, jejich farmaceuticky přijatelné soli, stejně jako, popřípadě, látky tvořící pufrovaný roztok ve vodném prostředí.
4. Směs podle některého z nároků 2 až 3 vyznačující s e t i m, že obsah tranexamové kyseliny je od asi 5 % do 15 % hmotnostních a obsah hydrochloridu argininu nebo lysinu je od asi 1 % do 3 % hmotnostních.
5. Směs podle nároku 3 vyznačující se tím, ž e BAC je odvozena z koncentrovaného kryoprecipitátu.
6. Směs podle některého z nároků 2 až 5 vyznaču jící se tím, že BAC obsahuje fibrinogen v obsahu od asi 15 do 150 mg/ml.

• · • · »·· ···· ·· pozměněná strana
7. Směs podle kteréhokoliv z nároků 2 až 6 vyznačující se tím, že BAC dále obsahuje faktor VIII, faktor XIII, fibronektin, von Willebrandův faktor (vWF), vitronektin.
8. Směs podle nároku 7 vyznačující se tím, že faktory VIII, XIII, fibronektin, von Willebrandův faktor (vWF), vitronektin jsou připraveny rekombinantnimí postupy.
9. Směs podle některého z vyznačuj ící se glycinový pufr.

nároků 2 až 8 tím, že pufrovým roztokem je
10. Dvousložková složky A a B, kde tkáňová klihovina obsahuj ící samostatně složka A obsahuje směs podle jednoho z nároků 2 až 9, a složka B obsahuje roztok proteolytického enzymu, který je schopný tvorby fibrinu, když reaguje s fibrinogenem.
11. Dvousložková tkáňová klihovina podle nároku 10 vyznačující se tím,že složka B obsahuje lidský trombin s aktivitou od asi 2 do 4000 mezinárodních jednotek na mililitr, měřeno metodou podle Clausse.
12. Dvousložková tkáňová klihovina podle některého z nároků 10 nebo 11 vyznačující se tím,že složka B je stabilizována tranexamovou kyselinou a argininem.

·· ··

4 9 9 · • · · • · · · • · « • •♦e ·· ·· ·· ·· • · · · • · · · ··· ··· • · «· β· pozměněná strana
13. Fibrinová sraženina získaná smísením složky A podle nároku 10 a složky B z dvousložkové fibrinové klihoviny podle nároku 10 ve vhodném poměru, výhodně 1:1.