DK166386B

DK166386B - Diastereoisomer a af 2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-1,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxylsyre-3-(1-benzylpyrrolidin-3-yl)ester-5-methylester, den hoejredrejende optiske isomer heraf, fremgangsmaader til fremstilling af forbindelserne og farmaceutiske praeparater indeholdende disse

Info

Publication number: DK166386B
Application number: DK169185A
Authority: DK
Inventors: Kazuharu Tamazawa; Tadao Kojima; Hideki Arima; Yukiyasu Murakami; Yasuo Isomura; Minoru Okada; Kiyoshi Takanobu; Toichi Takenaka
Original assignee: Yamanouchi Pharma Co Ltd
Priority date: 1984-04-16
Filing date: 1985-04-15
Publication date: 1993-05-10
Also published as: KR860008162A; ES551767A0; IE57811B1; EP0160451A2; AU569618B2; ATE66677T1; MX7363E; CA1289565C; ES8704866A1; NL990023I2; CA1273930A; ES8608512A1; IE850985L; NO159594B; NL990023I1; ES8707522A1; NO159594C; DK169185D0; ES8704937A1; ES551769A0

Description

i

DK 166386 B

Opfindelsen angår den hidtil ukendte diastereoisomer A af YM-09730, den højredrejende optiske isomere heraf og farmaceutisk acceptable syreadditionssalte heraf. Opfindelsen angår yderligere fremgangsmåder til fremstilling af 5 disse forbindelser og farmaceutiske præparater indeholdende disse forbindelser.

YM-09730 er et dihydropyridin-3,5-dicarboxylsyreesterde-rivat med følgende kemiske formel, hvis kemiske betegnel-10 se er 2,6-dimethyl-4- (3-nitrophenyl) -1,4-dihydropyridin- 3,5-dicarboxylsyre-3-( l-benzylpyrrolidin-3-yl )ester-5-me-thylester.

SN02 C00 -jj?—j cw *'· CH, ^

Uo 20 YM-09730 er den forbindelse, der først er blevet fremstillet, og det er angivet, at forbindelsen er i besiddelse af vasodilaterende virkning og en hypotensiv virk-25 ning, og også at forbindelsen har lang varighed med hensyn til disse virkninger (US patentskrift nr. 4 220 649 og GB patentskrift nr. 2 014 134).

YM-09730 har to asymmetriske carbonatomer, og set ud fra 30 et stereokemisk synspunkt findes der isomere, der er baseret på disse asymmetriske carbonatomer, men der findes ingen beskrivelser af disse isomere i ovennævnte patenter, og eksistensen af sådanne isomere er ikke bekræftet.

35 Man har nu været i stand til at adskille diastereoisomere A og B af YM-09730, og man har fundet, at isomer A (den diastereoisomere A og den højredrejende optiske isomer 2 "

DK 166386 B

heraf omtales sammen som Isomer A, med mindre andet specielt er angivet) udviser betydelig bedre farmaceutiske egenskaber end isomer B (den diastereoisomere B og den optisk isomere heraf betegnet sammen som isomer B, med 5 mindre andet specielt er angivet), eller end en blanding (YM-09730) af begge isomere A og B. Smeltepunkt af hydro-chloridet af diastereomer A er 200 til 206 °C (dekompo-nering), og smeltepunkt af hydrochloridet af den højredrejende optiske isomer heraf er 223 til 230 °C (dekompo-10 nering). Den omhandlede forbindelse er således isomer A, der er specificeret ved smeltepunktet af forbindelsens hydrochlorid, af YM-09730 og de farmaceutisk acceptable syreadditionssalte heraf.

15 Opfindelsen angår således diastereoisomer A af 2,6-dime-thyl-4- (3-nitrohpenyl) -1,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxyl-syre-3-(l-benzylpyrrolidin-3-yl)ester-5-methylester, hvis hydrochlorid har smeltepunkt 200-206 eC (dekomp.), den højre-drejende isomer heraf, hvis hydrochlorid har smel-20 tepunkt 223-230 °C (dekomp.) og farmaceutisk acceptable syreadditionssalte heraf.

Fremgangsmåderne ifølge opfindelsen er ejendommelige ved det i krav 4's og 5's kendetegnende del anførte.

25

Præparaterne ifølge opfindelsen er ejendommelige ved det i krav 6's kendetegnende del anførte.

De omhandlede farmaceutisk acceptable syreadditionssalte 30 omfatter malonater, oxalater, p-nitrobenzoater, 2-keto-glutarater, maleater, £-malater, hydrochlorider, sulfater, p-toluensulfonater, phosphater og succinater.

Som påvist i de efterfølgende beskrevne farmakologiske 35 forsøg udviser den omhandlede isomer A og farmaceutisk acceptable syreadditionssalte heraf en virkning, der er 15 til 18 gange virkningen af diastereoisomer B og 14 til 3

DK 166386 B

35 gange virkningen af en tilsvarende blanding af disse diastereoisomere med hensyn til en stigende coronar blodstrøm ved direkte administrering i coronar arterierne, hvilket angiver en kraftig virkning af den omhandlede 5 isomer A på de coronare arterier.

På den anden side udviste isomer B næsten samme virkning som den tilsvarende blanding af de isomere. Dette betyder, at den farmakologiske virkning af YM-09730 ikke er 10 en simpel gennemsnitsværdi af de fysiske blandingsforhold af de isomere. Det er også en ny farmakologisk erkendelse, at isomer A og de farmaceutisk acceptable syreadditionssalte heraf har kraftig virkning på de coronare arterier .

15

Fremgangsmåder til fremstilling af den omhandlede isomer A eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte heraf er beskrevet nedenfor.

20 I. Fremstilling af diastereoisomer A

Som angivet oven for findes der ingen beskrivelser med hensyn til isomererne af YM-09730 i tidligere omtalte OS patentskrift nr. 4 220 649 og i GB patentskrift nr.

25 2 014 134, og fremstillingen af disse isomere er ikke an givet nogetsteds i litteraturen.

Man fremstillede derfor YM-09730 ved hjælp af Hantzch's syntesemetode for dihydropyridin (Ann. Chem., 215, 1 30 (1882) som angivet i referenceeksemplet, og det viste sig, at YM-09730 var en lige blanding af diastereoisomer A og diastereoisomer B.

Som et resultat af forskellige undersøgelser over metoder 35 til at fremstille diastereoisomer A ud fra blandingen af de isomere opnåedes diastereoisomer A på følgende måde.

o i

DK 166386 B

4

(a) Blandingen af de diastereoisomere underkastes søjlekromatografi under anvendelse af silicagel som bærestof og en blandet opløsning af ethylacetat og eddikesyre som elueringsmiddel, og diastereoisomer A

5 opnåedes fra det første eluat og diastereoisomer B

fra det senere eluat. Disse to isomere er ikke tidligere beskrevne forbindelser.

En hvilken som helst silicagel, der almindeligvis an-10 vendes til søjlekromatografi, kan anvendes uden re striktioner. Der er heller ingen særlige restriktioner med hensyn til blandingsforholdet mellem ethylacetat og eddikesyre i det blandede opløsningsmiddel til anvendelse som elueringsmiddel, men sædvanligvis 15 anvendes et blandet opløsningsmiddel indeholdende en ringe mængde eddikesyre. Blandingsforholdet er fortrinsvis 30 til 50 rumfang/rumfang for ethylacetat og ca. 1 til 10 rumfang/rumfang for eddikesyre, og dersom indholdet af eddikesyre sænkes, forlænges elue-20 ringstiden for den ønskede forbindelse. Elueringshas- tigheden og behandlingstemperaturen kan udvælges på passende måde.

(b) Ved en anden metode end den ovennævnte var man i 25 stand til at frembringe syreadditionssaltet af di astereoisomer A ved at behandle blandingen af de di-astereomere med særlige syrer, og underkaste blandingen en fraktioneret omkrystallisation.

30 Syreadditionssalte til anvendelse herved er malonat, p-nitrobenzoat, maleat og lignende.

Disse syreadditionssalte er krystallinske salte, og opløseligheden i et organisk opløsningsmiddel er forskellig 35 for diastereoisomer A og diastereoisomer B. Disse egenskaber kan anvendes til at frembringe diastereoisomer A ved fraktioneret omkrystallisation. Et særligt velegnet

DK 166386 B

5 syreadditionssalt er malonat. Dersom man anvender malona-tet, kan krystaller med et meget højt indhold af diaste-reoisomer A fås ved én omkrystallisation. Som opløsningsmiddel ved fremstillingen anvendes f.eks. methanol, etha-5 nol, acetone, acetonitril eller lignende.

Syreadditionssaltet af diastereoisomer A af YM-09730 fremstillet ved ovennævnte metode kan syre-ombyttes til et ønsket syreadditionssalt ved at overføre saltet til en 10 fri form og omsætte med en anden syre.

II. Fremstilling af højredrejende optisk isomer A

Den højredrejende optiske isomer af diastereoisomer A kan 15 fås ved at omsætte de blandede fri baser af diastereoiso-mererne A og B eller den fri base af diastereoisomer A af YM-09730 fremstillet ved fremstillingsmetode I beskrevet ovenfor med L-(-)-æblesyre og herefter underkaste forbindelsen optisk adskillelse på almindelig måde.

20 L-(-)-æblesyre kan også anvendes til udskillelse af den højredrejende optiske isomer af diastereoisomer A ved omkrystallisation, da L-(-)-malatet af den højredrejende optiske isomer af diastereoisomer A af YM-09730 er kry-25 stallinsk. Som opløsningsmiddel til den fraktionerede om krystallisation kan anvendes methanol, ethanol, acetone, acetonitril og lignende.

L-(-)-malatet af den højredrejende optiske isomer af di-30 astereoisomer A fremstillet på denne måde kan anvendes som lægemiddel som sådan, men kan omdannes til acetatet eller et andet passende salt, dersom det ønskes, ved behandling af L-(-)-malat med en base til dannelse af den frie form og behandling af denne forbindelse med en pas-35 sende syre.

6

DK 166386 B

De farmakologiske virkninger, den akutte toxicitet og de kliniske doser af isomer A er angivet nedenfor.

(1) Coronar vasodilaterende virkning hos bedøvede hunde: 5 I hunde med åben brystkasse, bedøvet med 30 mg/kg intravenøst natriumpentobarbital, ledes det arterielle blod fra den carotide arterie til den omgående gren af venstre coronararterie ved hjælp af en ekstracorporeal slynge. En 10 servokontrolleret pumpe (model 1215D, Harvard Apparatus) blev tilsluttet kredsløbet for at opretholde et konstant perfusionstryk på 120 mmHg ved hjælp af en pumpekontrolanordning (SCS-22, Data Graph Co., Tokuya Tukada et al., Folia Pharmacol. Japon, 74, 59p, 1978). En elektromagnets tisk gennemstrømningssonde af ekstracorporeal type (MF-25, Nihon Koden) var også tilsluttet kredsløbet for at registrere den coronare blodstrøm. En dosis på 1 ug af forbindelsen administreredes direkte i den coronare arterie, og den coronare blodstrøm kontrolleredes, indtil 20 blodstrømmen var vendt tilbage til værdien før behandlingen. Herefter beregnedes arealet under kurven for den procentige stigning i coronarblodstrømmen som funktion af tiden efter intracoronar injektion af 1 ug af forbindelsen og anvendtes som et indeks på den totale forøgelse af 25 den coronare strøm. Resultaterne er vist i tabel 1.

30 35 TABEL 1 7

DK 166386 B

Coronar vasodilaterende virkning hos bedøvede hunde 5 Total forøgelse Varighed i coronar blod- af strøm ved 1 μg virkning (%) (min)

Diastereoisomer A (dl form) 1U hydrochlorid 1816 + 377 60

Diastereoisomer A (d form) hydrochlorid 4559 + 894 120 15

Diastereoisomer A (1 form) hydrochlorid 120+21 5

Diastereoisomer B (dl form) hydrochlorid 120 + 28 5 Ækvivalent blanding af hydrochlorider af diastereoisomer A (dl form) og 25 B (dl form) 129 + 47 10 30 35 8

DK 166386 B

Når der direkte administreredes i den coronare arterie, var den totale forøgelse i coronarblodstrømmen efter 1 ug af isomer A hydrochlorid omtrent 15 til 38 gange højere end forøgelsen efter den samme dosis af isomer B hydro-5 chlorid og den ækvivalente blanding af disse isomerer, hvilket tydede på, at isomer A hydrochloridet er i besiddelse af en særdeles kraftig virkning på den coronare arterie. Yderligere var varigheden af den coronare vasodi-laterende virkning efter isomer A hydrochloridet klart 10 længere end varigheden efter isomer B hydrochloridet og den ækvivalente blanding af disse isomerer. En sådan høj virkning på den coronare arterie og lang varighed indicerer, at isomer A hydrochlorid er værdifuldt ved behandlingen af coronare arteriesygdomme som f.eks. angina pec-15 toris.

(2) Hypotensiv virkning hos bedøvede rotter:

Blodtrykket måltes i urethanbedøvede rotter. Forbindel-20 serne administreredes intravenøst i en stigende dosis med 20 min mellemrum. Dosen af forbindelserne, der krævedes for at sænke gennemsnitsblodtrykket med 30 mmHg (ED 30 mmHg) beregnedes ud fra dosis-respons kurverne og er angivet i tabel 2.

25 30 s> 35 TABEL 2 9

DK 166386 B

Hypotensiv virkning hos bedøvede rotter 5 ED30 mmHg (mg/kg i.v.)

Diastereoisomer A (dl form) hydrochlorid 0,002 10

Diastereoisomer B (dl form) hydrochlorid 0,14 15 Som det fremgår af tabel 2, var den hypotensive virkning af den diastereoisomere A hydrochloridforbindelse ca. 70 gange kraftigere end virkningen af diastereoisomer B hy-drochloridet.

20 (3) Akut toxicitet hos mus:

Seks uger gamle han ICR mus, der vejede fra 27 til 29 g, anvendtes. Forbindelsen opslæmmedes i 0,5% methylcellulo-seopløsning og administreredes peroralt til musene. LDgg 25 værdierne for forbindelserne beregnedes som angivet af Litchfield & Wilcoxon (Journal of Pharmacol. & Exp. Therap., 96, 99-113, 1949) og er angivet i tabel 3.

30 35 TABEL 3 10

DK 166386 B

iff

Akut toxicitet hos mus 5 LD50 (mg/kgp.o.)

Diastereoisomer A (dl form) hydrochlorid 295 (242-360)

Diastereoisomer A (d form) hydrochlorid 190 (158-228) (4) Kliniske doser: 15

De kliniske doser af de omhandlede forbindelser afhænger af legemsvægten og patientens tilstand. Optimale doser er sædvanligvis 0,1 til 2 mg til intravenøs injektion og 5-20 mg en eller to gange dagligt ved peroral administre- 20 ring* I det efterfølgende belyses opfindelsen nærmere. Fremstilling af en blanding af diastereoisomer A og diastereoisomer B, der anvendes som råmateriale, er angivet i referenceeksemplet.

2d

Referenceeksempel 1 5 ml isopropanol opløstes 1,51 g (0,01 mol) 3-nitro- benzaldehyd, 2,61 g (0,01 mol) l-benzyl-3-acetoacetoxy-oli pyrrolidin og 1,5 g (0,01 mol) 3-aminocrotonsyremethyl-ester, den fremstillede opløsning opvarmedes 8 timer med tilbagesvaling. Herefter afdestilleredes opløsningsmidlet under reduceret tryk, og den tilbageblevne remanens op- 35 11

DK 166386 B

løstes i chloroform, opløsningen vaskedes først med fortyndet saltsyre, herefter med vand, derefter med mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning og tørredes over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet afdestillere-5 des under reduceret tryk, hvorved der opnåedes 4,91 g 2, 6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-1,4-dihydropyridin-3,5-di-carboxylsyre-3-(l-benzylpyrrolidin-3-yl)ester-5-methyl-ester som en slags karamel.

10 Dannelsesforholdet af de diastereomere i den rå base analyseredes ved omvendt fase ion-par væskechromatografi med stor ydeevne (HPLC) under de nedenfor angivne betingelser. Forholdet mellem diastereoisomer A (tilbageholdelsestid 28 min) : diastereoisomer B (tilbageholdelses-15 tid 29 min) var 1:1.

Søjle: 4,6 mm x 300 mm pakket med "Nucleosil" 5 C^g, søjletemperatur: 30 °C, mobil fase: acetonitril-0,05 mol ka-liumdihydrogenphosphat (pH 3) (20:80 rumfang/rumfang) in-20 deholdende tetra-n-pentylammoniumbromid (3 mmol) som indikatorion, strømningshastighed: 0,9 ml/min, kontrol: ultraviolet detektor (λ 254 nm).

Herudover bekræftedes ved kernemagnetisk resonansanalyse, 25 at diastereoisomer A og diastereoisomer B havde et forskelligt kemisk skrift med hensyn til methylenprotonerne i N-benzylgruppen i YM-09730. Ved måling i tung methanol d^ (CD3OD) med Jeol NMR-spektrometer FX-90Q, viser isomer A og isomer B singletsignaler svarende til to protoner 30 ved henholdsvis 4,40 ppm og 4,30 ppm.

Produktionseksempler på diastereoisomer A

EKSEMPEL 1 35 I 25 ml chloroform opløses 4,91 g af den urensede fri base af YM-09730 fremstillet i referenceeksemplet, og her- p· 12

DK 166386 B

efter tilsattes 15 ml 10% saltsyre, hvorefter der omrør-tes grundigt, og den organiske fase fraskiltes. Det organiske lag behandledes atter på samme måde som ovenfor med 10 ml 10% saltsyre, hvorefter den organiske fase tørredes 5 med vandfrit magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet af destilleredes under reduceret tryk. Remanensen opløstes i 10,4 ml acetone, og opløsningen henstod til opnåelse af 3,5 g af hydrochloridet af YM-09730 i form af krystaller. Forbindelsen opløstes i 1,8 ml methanol, og der omkry-10 stalliseredes under tilsætning af 8 ml acetone. Ved atter at gentage behandlingen opnåedes 2,38 g af hydrochloridet af YM-09730. Forholdet mellem diastereoisomer A : diaste-reoisomer B i form af hydrochloridet var 65,6 : 34,4 bestemt ved HPLC. I 25 ml chloroform opløstes 2,5 g af sal-15 tet, og opløsningen vaskedes to gange med 15 ml mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning, og det organiske lag fraskiltes og tørredes over vandfrit magnesiumsulfat. Herefter afdestilleredes opløsningsmidlet under reduceret tryk, og 2 g af den fremstillede fri base behandledes ved 20 silicagel søjlechromatografi (søjle: "LiChroprep“ Si60, C størrelse, elueringsmiddel ethylacetat-eddikesyre = 30 : 5 rumfang/rumfang), hvorved der opnåedes det olieagtige acetat af diastereoisomer A.

25 Forbindelsen opløstes i 10 ml chloroform, opløsningen vaskedes først med 10 ml mættet vandig natriumhydrogen-carbonatopløsning, herefter med 10 ml vand og endelig med 10 ml 10% saltsyre, og der tørredes over vandfrit magnesiumsulfat. Dernæst afdestilleredes opløsningsmidlet un-30 der reduceret tryk, og remanensen behandledes med 0,8 ml acetone, hvorved der opnåedes 0,4 g af hydrochloridet af diastereoisomer A.

35

DK 166386 B

13 EKSEMPEL 2 I 15 ml acetonitril opløstes 4,91 g af den urensede fri base af YM-09730 fremstillet i referenceeksemplet og 1,04 5 g malonsyre, og opløsningen henstod natten over ved 0 til 5 °C. De dannede krystaller frafiltreredes, der vaskedes med en ringe mængde kold acetonitril, hvorved der opnåedes 2,03 g af malonatet af YM-09730. (Forhold mellem dia-stereoisomer A : B var 89,1 : 10,9). Forbindelsen omkry-10 stalliseredes to gange, hver gang med 25 gange rumfanget methanol, hvorved der opnåedes 1,0 g af malonatet af 100% diastereoisomer A af YM-09730.

EKSEMPEL 3 15 I 15 ml methanol opløstes 4,91 g af den urensede fri base af YM-09730 fremstillet i referenceeksemplet og 1,04 g malonsyre ved opvarmning, og den dannede opløsning henstod natten over ved 0 til 5 °C. De aflejrede krystaller 20 frafiltreredes, vaskedes med methanol og tørredes under reduceret tryk, hvorved der opnåedes 1,88 g af malonatet af YM-09730. Forholdet mellem diastereoisomer A:B af de opnåede krystaller var 90,7:9,3. Krystallerne omkrystalliseredes to gange med methanol, hvorved der opnåedes ma-25 lonatet af diastereoisomer A, der ikke indeholdt nogen isomer B.

EKSEMPEL 4 30 Ved at arbejde som beskrevet i eksempel 3 under anvendelse af acetonitril i stedet for methanol opnåedes 2,03 g af et malonat. Forholdet mellem diastereoisomer A:B var 89,1:10,9. Produktet omkrystalliseredes med 25 gange rumfanget methanol, hvorved der opnåedes 1,57 g af malonatet 35 af diastereoisomer A og B i et forhold på 99,5:0,5. Yderligere omkrystallisation af forbindelsen med 25 gange rumfanget methanol gav 1,27 g af malonatet af YM-09730, 14

DK 166386 B

hvor der ikke kunne afsløres tilstedeværelse af diaste-reoisomer B ved væskekroraatografi med høj ydeevne. I 5 ml chloroform opslæmmedes 1,27 g malonat, chloroformsuspensionen behandledes først to gange med mættet vandig na-5 triumcarbonatopløsning, derefter to gange med 2,5 ml vand og endelig med to gange 2,5 ml 10% saltsyre, chlorof ormopløsningen tørredes over vandfrit magnesiumsulfat, fil-treredes og inddampedes til tørhed under reduceret tryk.

Den fremkomne remanens opløstes i 2 ml acetone, og opløs-10 ningen henstod, hvorved der aflejredes 1,09 g af .hydro-chloridet af diastereoisomer A af YM-09730.

EKSEMPEL 5 15 I 5 ml chloroform opslæmmedes 595 mg af malonatet af diastereoisomer A af YM-09730, og den fremstillede suspension behandledes to gange, hver gang med 2,5 ml af en mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning, og herefter to gange, hver gang med 5 ml vand. Chloroformopløs-20 ningen tørredes over vandfrit magnesiumsulfat og inddampedes til tørhed under reduceret tryk, hvorved der opnåedes 491 mg af den fri base af diastereoisomer A som en karamelagtig forbindelse. Forbindelsen og 126 mg oxalsy-rédihydrat opløstes i 3 ml acetone, den fremstillede op-25 løsning henstod ved 4 °C, og de aflejrede krystaller fra-filtreredes, hvorved der opnåedes 400 mg af oxalatet af diastereoisomer A af YM-09730.

EKSEMPEL 6 30

Ved at arbejde på samme måde under anvendelse af 146 mg 2-ketoglutarsyre i stedet for oxalsyren i eksempel 5 opnåedes 250 mg 2-ketoglutarat af diastereoisomer A af YM-09730.

35 15

DK 166386 B

EKSEMPEL 7

Ved at arbejde på samme måde som beskrevet i eksempel 5 under anvendelse af 167 mg p-nitrobenzoesyre i stedet for 5 oxalsyre opnåedes 530 mg p-nitrobenzoat af diastereoiso- mer A af YM-09730.

EKSEMPEL 8 10 Ved at arbejde som beskrevet i eksempel 5 under anvendelse af 116 mg maleinsyre i stedet for oxalsyren fremstilledes 300 mg af maleatet af diastereoisomer A af YM-09730.

15 EKSEMPEL 9 I 2 ml acetone opløstes 491 mg diastereoisomer A af YM-09730, og efter tilsætning af 1 ml af en methanolisk opløsning af 1 mol phosphorsyre henstod opløsningen ved 4 20 °C. De aflejrede krystaller frafiltreredes, hvorved der blev opnået 480 mg af phosphatet af diastereoisomer A af YM-09730.

Egenskaberne af de fremstillede forbindelser i eksempler-25 ne 1 til 9 er angivet i følgende tabel.

30 35

16 DK 166386 B

dP O H

^ cn n H *- *·

O CO (O

P* Φ

Φ -H

CO CO CM 00 VO CM 03 in CM N o\ COCO 00 CO

>i dp cn o ocn coco οοσν in in cn co cm o μ μ H V « SK * * KV VK fc. v a) $ (0 2 (DIN COIN 00 00 (OVD (O CD cD CD IN IN -H > C Ό ίο μ a) i-ι ffi Ό (0 > a) μ a d φ cn 5 Φ coco Η η O -tf σι (Ν 00 00 OM O Næ CO)

G dp min n n omom -tf -tf -tf in con com Ό P

Q) '*—»«' N ·. V V V V VS SV V V VS Ch(D

η x in in in in in in in in to in into in in s cq m ^ • · .. +j

•P CQ

co μ o oo cn cm o o o co coco cp ίο cn o μ φ ^ oo h tn -tf mm -tf cm oo om h co oom ο ό dp *»» ·* ·· v fc. < V t. K V V ^0) -1 π ^ -tf -tf HH HH HH O O O O tt O 02 Αυ O mm co co co co coco coco coco mco ww m -—s *.

15 co m · η σι h O cm· • H O Di m CO CO 00 OOOi

DiCM OM 6 Η Η Η Η HE

El I O i I I I 10 co cq co co Λ! o co o σι m x H H OCDtn CO CO N ^ φ OM CM TD Η Η Η Η HT3 ^ CO w i—! 20

O

CM

O X

O) CM

d te -tf •H \

C CO CM CO CO H CO CO CO CO

·ρο·νο 0*0 O O O

ffi 00 H 00 CO -tf CO 00 00 00 CO 2· 2 20 2-tf2C0 2-tf2-tf „ d cn -tf cn cn 2 en O en o en o eno 25 Φ CM O CM CMin CM -tf CM -tf CM M CM -tf

E XX X H XX XX XX xx XX

E N 00 NO NN N -M* Nm N CM N CO

<Q CM X CM X CM O CM O CM O CM O CM O

co o· o· o· o· ϋ· υ· υ· 30

+> -P

(0 (0 *0 0 μ •μ φ -η ν (d φ cq μ d μ HH Ο Φ 0 Η Φ μ Η Λ Η η *ο to λ ο en μ Λ μ d .d ο μ μ ο μ ιο 35 η η ο· . ο μ ο μ <ο d Ε Λ CO μ Η Φ φ η ο Φ Ρ 0 *0 2 Η X (0 Η μ ο £ ίχ ι ο ι « ο

fo «Η fo X Ο, 2 CM Ο S

Hydrochloric!: NMR (i CD^OD, TMS indre standard, sppm) 17

DK Ί66386 B

1,80-2,70 (2H, broad m, C4I-H2) 2,32, 2,34 (6H, s, C2 g-CHg) ζΎ 5 3,0-4,0 (4H, m, C2, 3,63 (3H, s, -COOChI) β „ . 4 . co 4,40 (2H, s, -CH2-0) 3 2 JT ^ΓΊ4.

5,08 (IH, s, C4-H) H30^6§^0Η3 2’S 5' 5,30 (IH, m, C3,-H) 0Η2-ψ 10 7,30-8,20 (9H, m, H af benzenring) HC1 EKSEMPEL 10 1 5 ml chloroform opslæmmedes 1,5 g af malonatet af di-15 astereoisomer A fremstillet i eksempel 2 eller 3, og suspensionen behandledes først to gange med 3 ml mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning pr. gang og herefter to gange med 3 ml vand pr. gang. Chloroformopløsningen tørredes over vandfrit magnesiumsulfat, og opløs-20 ningsmidlet af destilleredes under reduceret tryk. Til remanensen sattes 6 ml ethanol, og blandingen henstod natten over ved 5 °C, hvorved der opnåedes 0,86 g krystaller af den fri base af diastereoisomer A af YM-09730 med smeltepunkt 145 til 148 °C.

25

Elementaranalyse for (C27H29N3°6^ C(%) H(%) N(%)

Beregnet: 65,98 5,95 8,55 30 Fundet: 66,04 6,00 8,53 35 NMR (i CDClg, TMS indre standard, 6 ppm): 18

DK 166386 B

1,40 til 2,96 (6H, m, C2, 4, 5,-H2) 2,34, 2,36 (6H, s, C2 g-CHg/ 5 3,65 (5H, s, -COOCH3 og -CH2ø) 5,10 (IH, s, C4-H) 5,12 (IH, m, C3,-H) 5,78 (IH, broad s, NH) 7,18 til 8,25 (9H, m, H af benzenring) 10 0Γ2 15 H3C02C'l|jV'C02-^L_A.

H3C^6H^CH3 2'St 5' ca2-<j> 20

Produktion af højredrejende isomer Å EKSEMPEL 11 • 25 (1) I 15 ml acetonitril opløstes 4,91 g af den urensede fri base fremstillet i referenceeksemplet og 1,04 g ma-lonsyre, og opløsningen henstod natten over ved 0 til 5 °C. De aflejrede krystaller frafiltreredes (2,03 g) og omkrystalliseredes to gange, hver gang med 25 gange rum-30 fanget af methanol, hvorved der opnåedes 1,27 g af malo-natet af den diastereoisomere A af YM-09730, der ikke indeholdt diastereoisomer B. Smeltepunktet var 181,5 til 182.5 °C (dekomponering). I 5 ml chloroform opslæmmedes 1,27 g af det fremstillede malonat, og suspensionen vas- 35 kedes først to gange, hver gang med 2,5 ml mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning og herefter én gang med 2.5 ml vand og endelig derefter to gange, hver gang med

DK 166386 B

19 2,5 ml af en vandig 10% saltsyreopløsning. Chloroformopløsningen tørredes over vandfrit magnesiumsulfat og inddampedes til tørhed under reduceret tryk. Den dannede remanens opløstes i 2 ml acetone, og opløsningen henstod, 5 hvorved der opnåedes 1,09 g af hydrochloridet af diaste-reoisomer A af YM-09730.

(2) Ved behandling af 4,67 g af hydrochloridet af diaste-reoisomer A af YM-09730 fremstillet ovenfor med mættet 10 vandigt natriumhydrogencarbonat opnåedes 4,35 g af den fri base, og herefter opløstes 4,35 g af den fri base og 1,18 g af L-(-)-æblesyre i 28 ml ethanol under opvarmning, og opløsningen henstod natten over ved 0 til 5 °C.

De aflejrede krystaller frafiltreredes og tørredes, hvor-15 ved der opnåedes 2,43 g L-(-)-malat af den højredrejende optiske isomer af diastereoisomer A af YM-09730. Krystallerne omkrystalliseredes med 85 ml ethanol, hvorved der opnåedes 2,21 g L-(-)-malat. Den specifikke drejning 90 [a] D var +82,2° (c = 0,5, methanol). Når forbindelsen 20 omkrystalliseredes med ethanol sås ingen forandring af den specifikke drejning. Smeltepunkt 190 til 191 °C (dekomponering).

Elementaranalyse for (C2yH2gN20g.C^Hg0g) 25 C(%) H(%) N(%)

Fundet; 59,72 5,80 6,73

Beregnet: 59,51 5,64 6,72 30 EKSEMPEL 12 I 25 ml acetone opløstes 4,91 g af den urensede fri base af YM-09730 fremstillet i referenceeksemplet og 1,34 g L-(-)-æblesyre, og opløsningen omrørtes 48 timer ved 0 til 35 5 °C. De af lej rede krystaller frafiltreredes og vaskedes med en ringe mængde kold acetone, hvorved der opnåedes 0,57 g L-(-)-malat af den højredrejende optiske isomer af 20

DK 166386 B

diastereoisomer A af YM-09730. Den specifikke drejning 20 [a] var +78,3° (c = 0,5, methanol). Den specifikke υ 20 drejning [a] af 0,44 g af krystallerne opnået ved omkrystallisation af forbindelsen med 50 gange rumfanget 5 af ethanol var +82,2° (c = 0,5, methanol). Smeltepunkt 190 til 191 °C (dekomponering).

EKSEMPEL 13 10 I 8 ml chloroform opslæmmedes 2,21 g af L-(-)-malatet af den højredrejende optiske isomer af diastereoisomer A af YM-09730 fremstillet i eksempel 11, og suspensionen behandledes først to gange med 4,3 ml af en mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning, derefter med 4,3 ml 15 vand og endelig to gange med 4,3 ml 10% saltsyre. Chlo-roformopløsningen tørredes over vandfrit magnesiumsulfat, og efter filtrering inddampedes opløsningen til tørhed under reduceret tryk. Den fremkomne remanens opløstes i 3,5 ml acetone, og opløsningen henstod, hvorved der op-20 nåedes 1,64 g af hydrochloridet af den højredrejende optiske isomer af diastereoisomer A af YM-09730.

Den specifikke drejning [«]20/D var +116,5° (c = 0,5, methanol), smeltepunkt 223 til 225 °C (dekomponering).

25

Elementaranalyse for (HC1) C(%) H(%) N(%) Cl(%)

Fundet: 61,35 5,55 8,01 6,96 30 Beregnet: 61,42 5,73 7,96 6,71 v 35 NMR (1 CDgOD, TMS Indre standard, 6ppm): 21

DK 166386 B

1,80-2,70 (2H, broad m, C4,-H2) 2,32, 2,34 (6H, s, C2 g-CHg) 5 3,0-4,0 (4H, m, C2, 3,64 (3H, s, -COOCHg) 4,42 (2H, s, -CH2ø) 5,08 (IH, s, C4-H) 5,30 (IH, m, C3,-H) 10 7,30-8,20 (9H, m, H af benzenring) EKSEMPEL 14 I 5 ml chloroform opslæmmedes 1,25 g af L-( - )-malatet af 15 den højredrejende optiske isomer af diastereoisomer A af YM-09730, og den fremstillede suspension behandledes først to gange, hver gang med 3 ml mættet vandig natrium-hydrogencarbonat og herefter to gange med 3 ml vand pr. gang. Chloroformopløsningen tørredes over vandfrit magne-20 siumsulfat, og herefter afdestilleredes opløsningsmidlet under reduceret tryk. Remanensen tilsattes 6 ml ethanol, og blandingen henstod natten over ved 5 °G, hvorved der opnåedes 0,84 g af krystaller af den fri base af den højredrejende optiske isomer A af YM-09730 med smeltepunktet 25 138 til 140 °C.

Elementaranalyse for (C^H^N^Og) C(%) H(%) N(%) 30 Beregnet: 65,98 5,95 8,55

Fundet: 66,04 5,96 8,51 35 NMR (i CDClg, TMS indre standard, ppm) 22

DK 166386 B

1,40 til 3,0 (6H, m, 2,34, 2,36 (6H, s, C2 g-CHg) 5 3,65 (5H, s, -COOCHg og -CH2ø) 5,10 (IH, s, C4-H) 5,12 (IH, m, C3,-H) 5,78 (IH, broad s, -NH) 7,16 til 8,24 (9H, m, H af benzenring) 10

Præparateksempel 1 (tablet)

En tablet 5000 tabletter 15 Isomer A hydrochlorid 10,0 mg 50 g

Lactose 101,0 mg 502 g

Majsstivelse 25,3 mg 126,5 g

Hydroxypropylcellulose 3,0 mg .15 g

Magnesiumstearat 0,7 mg 3,5 g 20 - 140 mg 700 g

Til en ensartet blanding af 50 g af hydrochloridet af 25 isomer A, 502 g lactose og 126,5 g majsstivelse sattes 150 g vandig 10% hydroxypropylcellulose, og blandingen æltedes og granuleredes. Efter tørring tilsattes 3,5 g magnesiumstearat til granulerne, og der blandedes grundigt og herefter blev slået til tabletter på 140 mg pr.

30 tablet.

35 23 UK IbbciSb b

Præparateksempel 2 (kapsler)

En kapsel 1000 kapsler 5 Isomer A hydrochloric! 10,0 mg 10 g

Krystallinsk lactose 189,0 mg 189 g

Magnesiumstearat 1,0 mg 1 g 200 mg 200 g 10 ------ ----------------

Ovenstående komponenter blandedes grundigt, og 200 mg fyldtes i hver kapsel til opnåelse af kapselpræparater.

15 Præparateksempel 3 (injektion)

Isomer A hydrochlorid 1 mg D-sorbitol 100 mg 20

Ovennævnte bestanddele opløstes i destilleret vand til injektionsformål, og pH indstilledes til 4 ved tilsætning af saltsyre, hvorefter der tilsattes destilleret vand til injektionsformål til ialt 2 ml.

25 30 o 35

Claims

1. Diastereoisomer A af 2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)- 5 1,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxylsyre-3-(1-benzylpyrroli- din-3-yl)ester-5-methylester, hvis hydrochlorid har smeltepunkt 200-206 °C (dekomp.), den højre-drejende isomer heraf, hvis hydrochlorid har smeltepunkt 223-230 °C (dekomp. ) og farmaceutisk acceptable syreadditionssalte her-10 af.

2. Syreadditionssalt ifølge krav 1, kendetegnet ved, at syreadditionssaltet er malonatet, oxalatet, p-ni-trobenzoatet, 2-ketoglutaratet, maleatet, phosphatet, hy- 15 drochloridet, sulfatet eller p-toluensulfonatet af diastereoisomer A og L-(-)-malatet eller hydrochloridet af den højre-drejende isomer heraf.

3. Syreadditionssalt ifølge krav 1, kendetegnet 20 ved, at syreadditionssaltet er hydrochloridet.

4. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1 eller et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf kendetegnet ved, at man under- 25 kaster en blanding af diastereoisomere A og B af 2,6-di-methyl-4-(3-nitrophenyl)-1,4-dihydropyridin-3,5-dicarbox-ylsyre-3-(l-benzylpyrrolidin-3-yl)ester-5-methylester søjlechromatografi under anvendelse af silicagel som et bærestof og en blanding af ethylacetat og eddikesyre som 30 et elueringsmiddel, at man herefter fraskiller acetatet af diastereoisomer A fra eluatet, at man behandler acetatet med en base til opnåelse af den frie diasteroisomer A og om ønsket behandler den fremstillede diastereoisomer A med en farmaceutisk acceptabel syre til fremstilling af 35 syreadditionssaltet af diastereoisomer A, eller til opnåelse af den højre-drejende forbindelse omsætter den fremstillede diastereoisomer A med L-(-)-æblesyre til op- DK 166386 B nåelse af L-(-)-malatet af den højre-drejende optiske isomer af diastereoisomer A, hvorefter man, om ønsket, behandler L-(-)-malatet med en base, hvorefter man, om ønsket behandler den fremstillede højre-drejende optiske 5 isomer med en farmaceutisk acceptabel syre til opnåelse af det tilsvarende syreadditionssalt.

5. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1 eller et farmaceutisk acceptabelt syreaddi- 10 tionssalt heraf kendetegnet ved, at man fraktioneret omkrystalliserer en blanding af malonater af diastereoisomer A og B af 2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-1,4-dihydropyridin-3,5-dicarboxylsyre-3-(1-benzylpyrroli-din-3-yl) ester-5-methylester til fremstilling af malona-15 tet af diastereoisomer A, hvorefter man a) om ønsket behandler det fremstillede salt med en base til opnåelse af den frie diastereoisomer A eller b) til fremstilling af den højre-drejende optiske isomere heraf behandler malo-natet med en base, at man omsætter den fremstillede dia-20 stereoisomer A med L-(-)-æblesyre til opnåelse af L— (—) — malatet af den højre-drejende optiske isomer af diastereoisomer A, hvorefter man, om ønsket, behandler L-(-)-malatet med en base hvorefter man, om ønsket, behandler en fremstillet forbindelse med en farmaceutisk acceptabel 25 syre til fremstilling af det tilsvarende syreadditions-salt.

6. Farmaceutisk præparat kendetegnet ved, at det indeholder en effektiv mængde af en diastereoisomer

30 A, den højre-drejende isomer heraf eller et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt heraf ifølge krav 1 og et terapeutisk acceptabelt bærestof. 35