ES2910791T3

ES2910791T3 - Derivados de tiazina como inhibidores de beta-secretasa y métodos de uso

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Publication number: ES2910791T3
Application number: ES17822985T
Authority: ES
Inventors: Matthew P Bourbeau; Paul E Harrington; Qingyian Liu
Original assignee: Amgen Inc
Current assignee: Amgen Inc
Priority date: 2016-12-15
Filing date: 2017-12-13
Publication date: 2022-05-13
Anticipated expiration: 2037-12-13
Also published as: MX388697B; MA54100A; US20200062743A1; JP2020503292A; AU2017376444B2; EP3555084A1; JP7149272B2; WO2018112083A1; CA3047288A1; AU2017376444A1; US10889579B2; MX2019007102A; EP3555084B1

Abstract

Un compuesto de Fórmula I **(Ver fórmula)** o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde R1 y R1' son, independientemente, H, alquilo C1-6, -C(O)O(alquilo C1-6), -C(O)NH(alquilo C1-6) o -C(O)- heterocicloalquilo, donde el alquilo C1-6 y las porciones de alquilo C1-6 de -C(O)O(alquilo C1-6) y -C(O)NH(alquilo C1-6) están opcionalmente sustituidos con de uno a tres sustituyentes fluoro; R2 y R2' son H; b es un enlace sencillo, si R1, R1', R2 y R2' están presentes; b es un doble enlace si uno de los grupos R1 y R1' y uno de los grupos R2 y R2' no está presente; R3 es alquilo C1-4; R4 es halógeno; R5 es H o F; y uno de los grupos R6 y R7 es F o H y el otro de los grupos R6 y R7 es un heteroarilo de 6 miembros que contiene nitrógeno, donde el heteroarilo está opcionalmente sustituido con halógeno, -CN o 2-propiniloxi, donde al menos uno de los grupos R5, R6 o R7 es F.

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de tiazina como inhibidores de beta-secretasa y métodos de uso

CAMPO

La presente divulgación se refiere, en general, a compuestos farmacéuticamente activos y a composiciones farmacéuticas de estos para la modulación de la actividad de la enzima de escisión de la proteína precursora de amiloide en el sitio beta (BACE). En la presente se proporcionan estos compuestos y composiciones farmacéuticas de estos para su uso en el tratamiento de trastornos y/o afecciones que se relacionan con la formación y deposición de placas de beta-amiloides, como resultado de la actividad biológica de BACE. Tales trastornos mediados por BACE incluyen, por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer, déficits cognitivos, deterioros cognitivos y otras afecciones del sistema nervioso central.

ANTECEDENTES

La enfermedad de Alzheimer (EA) afecta a más de 12 millones de personas mayores en todo el mundo y es importante tener en cuenta que el número de afectados continúa creciendo. La EA es la responsable de la mayoría de las demencias diagnosticadas clínicamente después de los 60 años. La EA se caracteriza generalmente por la pérdida progresiva de memoria, razonamiento, criterio y orientación. A medida que la enfermedad avanza, se ven afectadas las capacidades motoras, sensoriales y vocales hasta que se produce un deterioro global de múltiples funciones cognitivas. La pérdida de la función cognitiva se produce gradualmente. Los pacientes con deterioro cognitivo grave y/o a los que se les ha diagnosticado EA en fase terminal generalmente están postrados en la cama, presentan incontinencia y dependen de una atención asistencial. El paciente con EA acaba falleciendo en aproximadamente de nueve a diez años, en promedio, después del diagnóstico inicial. Debido a los efectos incapacitantes, generalmente humillantes y en última instancia fatales de la EA, existe la necesidad de tratar la EA de forma eficaz tras su diagnóstico.

La EA se caracteriza por dos cambios fisiológicos importantes en el cerebro. El primer cambio, la formación de placas de beta amiloide, confirma la "hipótesis de cascada amiloide" que transmite la creencia de que la EA está provocada por la formación de depósitos característicos de péptido beta amiloide (Ap) en el cerebro (denominados de forma común "placas" o "depósitos de placas" de Ap) y en los vasos sanguíneos cerebrales (angiopatía beta amiloide). Infinidad de pruebas sugieren que el Ap y la formación de placas amiloides que lo acompañan es fundamental para la patofisiología de la EA y es probable que intervenga en las primeras fases de este trastorno neurodegenerativo intratable. Yan etal., LancetNeurol.

13(3):319-329 (2014). El segundo cambio en la EA es la formación de ovillos intraneuronales, que consisten en una forma agregada de la proteína tau de unión a microtúbulos. Además de encontrarse en pacientes con EA, los ovillos intraneuronales también se encuentran en otros trastornos que inducen demencia. Joachim et al., Alzheimer. Dis. Assoc. Disord. 6(1):7-34 (1992).

Varias líneas de pruebas indican que la deposición cerebral progresiva de péptido Ap juega un papel central en la patogénesis de la EA y puede preceder a síntomas cognitivos en años o incluso décadas. Selkoe, Neuron 6(4):487-498 (1991). Se ha demostrado la liberación de péptido Ap por parte de células neuronales desarrolladas en cultivo y la presencia de péptido Ap en el líquido cefalorraquídeo (LCR) tanto de individuos normales como de pacientes con EA. Seubert et al., Nature 359:325-327 (1992). Las autopsias de pacientes con EA han revelado grandes números de lesiones que comprenden péptidos Ap y tau en áreas del cerebro humano que se consideran importantes para la memoria y la cognición.

En los cerebros de los seres humanos de mayor edad que no tienen EA clínica se han encontrado menores números de estas lesiones en una distribución anatómica más restringida. También se han encontrado placas que contienen amiloide y angiopatía amiloide vascular en los cerebros de individuos con síndrome de Down, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis de tipo holandés (HCHWA-D, por sus siglas en inglés) y otros trastornos neurodegenerativos.

Se ha propuesto la hipótesis de que la formación del péptido Ap es un precursor o factor causante en el desarrollo de la EA. Más específicamente, se cree que la deposición de péptido Ap en áreas del cerebro responsables de la cognición es un factor fundamental en el desarrollo de la EA. Las placas de Ap están compuestas principalmente de péptido Ap. El péptido Ap se obtiene por la escisión proteolítica de una proteína precursora de amiloide (APP) transmembranal grande y es un péptido compuesto de aproximadamente 39-42 restos aminoacídicos. Se cree que el Ap 1-42 (de 42 aminoácidos de longitud) es el componente principal de estos depósitos de placas en los cerebros de los pacientes con EA. Citron, Trends Pharmacol. Sci. 25(2):92-97 (2004).

Aparecen placas similares en algunas variantes de demencia con cuerpos de Lewy y en miositis por cuerpos de inclusión, una enfermedad muscular. Los péptidos Ap también forman agregados que revisten vasos sanguíneos cerebrales en la angiopatía amiloide cerebral. Estas placas están compuestas de agregados de Ap fibrilares que presentan una estructura de lámina p característica, un plegamiento de proteína compartido por otros péptidos tales como priones asociados con enfermedades de plegamiento erróneo de proteínas. La investigación en ratas de laboratorio sugiere que la forma dimérica soluble del péptido es un agente causante en el desarrollo de la EA y es la especie sinaptotóxica más pequeña de oligómero de beta amiloide soluble. Shankar etal., Nat. Med. 14(8):837-842 (2008).

Varias aspartil proteasas, entre las que se incluyen la p-secretasa y la Y-secretasa, están implicadas en el procesamiento o escisión de la APP, lo que da como resultado la formación de péptido Ap. La p-secretasa (BACE, también denominada comúnmente memapsina) es la primera en escindir APP para generar dos fragmentos: (1) un primer fragmento N-terminal (sAPPP) y (2) un segundo fragmento C-99, que posteriormente es escindido por la Y-secretasa para generar el péptido Ap. También se ha observado que la APP es escindida por una a-secretasa para producir sAPPa, una forma secretada de APP que no ocasiona formación de placas de Ap. Esta ruta alternativa impide la formación de péptido Ap. Puede encontrarse una descripción de los fragmentos del procesamiento proteolítico de APP, por ejemplo, en las Patentes de EE. UU. n.os 5441 870, 5712130 y 5942400.

BACE es una enzima aspartil proteasa que comprende 501 aminoácidos y es responsable del procesamiento de APP en el sitio de escisión específico de la p-secretasa. BACE está presente en dos formas, BACE 1 y BACE 2, denominadas de este modo dependiendo del sitio de escisión específico de APP. Se describe la p-secretasa en Sinha et al., Nature 402:537-540 (1999) y en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional n.° WO2000/017369. Se ha propuesto que el péptido Ap se acumula como resultado del procesamiento de APP iniciado por BACE. Además, se cree que el procesamiento in vivo de APP en el sitio de escisión de la p-secretasa es una etapa limitante de la velocidad en la producción de péptido Ap. Sabbagh et al., Alzhelmer's Disease Revlew3:1-19 (1997). Por lo tanto, la inhibición de la actividad de la enzima BACE es deseable para el tratamiento de la EA.

Ciertos estudios han demostrado que la inhibición de BACE puede estar asociada con el tratamiento de la EA. La enzima BACE es esencial para la generación del péptido Ap. Los ratones con supresión génica de BACE no producen péptido Ap y están exentos de patologías asociadas con la EA, entre las que se incluyen la pérdida neuronal y ciertos déficits de memoria. Cole et al., Molecular Neurodegeneration 2:22, páginas 1-25 (2007). Cuando se cruzan con ratones transgénicos que sobreexpresan APP, la progenie de los ratones deficientes en BACE muestra cantidades reducidas de péptido Ap en extractos cerebrales en comparación con animales de control. Luo et al., Nat. Neurosci. 4(3):231-232 (2001). El hecho de que BACE inicie la formación de péptido Ap y la observación de que los niveles de BACE sean elevados en esta enfermedad proporcionan razones directas y convincentes para desarrollar terapias dirigidas a la inhibición de BACE, para reducir de esta manera la formación de péptido Ap y sus toxicidades asociadas. Con este fin, la inhibición de la actividad p-secretasa y una reducción correspondiente del péptido Ap en el cerebro deberían proporcionar un método terapéutico para el tratamiento de la EA y otros trastornos relacionados con placas o con el péptido Ap.

Por consiguiente, la estrategia de regular o reducir la formación y deposición de péptido Ap como posible tratamiento de la EA ha recibido una enorme atención, apoyo y compromiso tanto por parte de los investigadores como por parte de los inversores. Un inhibidor de la Y-secretasa de bajo peso molecular, LY450139 ("Semagacestat"), un agente reductor del péptido Ap, ha avanzado hasta ensayos clínicos de fase III para el tratamiento de la EA. Se evaluaron la farmacocinética de semagacestat en plasma, así como los niveles de péptido Ap en plasma y en líquido cefalorraquídeo (LCR) como respuestas farmacodinámicas a la administración de semagacestat en sujetos humanos sanos con dosis individuales y múltiples, y también se evaluaron los cambios farmacocinéticos y farmacodinámicos en pacientes con EA de leve a moderada en dos (2) ensayos clínicos (Henley et al., Expert Opin. Pharmacother. 10(10):1657-1664 (2009); Siemers et al., Clin. Neuropharmacol. 30(6): 317-325 (2007); y Siemers et al., Neurology 66(4):602-604 (2006)). Se han emprendido otras estrategias con la intención de tratar la EA y trastornos relacionados con placas. Remítase, por ejemplo, a Yan et al., Lancet Neurology 13(3):319-329 (2014).

Además, cada una de las siguientes publicaciones de solicitudes de patente ilustrativas describe inhibidores de BACE, útiles para tratar la EA y otros trastornos mediados por la p-secretasa: WO2014/098831, WO2014/099794, WO2014/099788 WO2014/097038, WO2014/093190, WO2014/066132, WO2014/065434, WO2014/062553, WO2014/062549, WO2014/045162, WO2014/013076, WO2013/182638, WO2013/164730, WO2013/030713, WO2013/028670, WO2013/004676, WO2012/162334, WO2012/162330, WO2012/147762, WO2012/139425, WO2012/138734, US2012/0245157, US2012/0245154, US2012/0238557, WO2011/029803, WO2011/005738, US2011/0152253 WO2010/013794, WO2010/013302, US2010/0160290, US2010/0075957, WO2009/151098, WO2009/134617, US2009/0209755, US2009/0082560, EP2703401 (equivalente de WO2012/146762) y EP1942105.

La aspártico proteasa lisosómica Catepsina D (CatD) se expresa de manera ubicua en organismos eucariotas. La actividad CatD es esencial para realizar la proteolisis extensiva o parcial dependiente de ácido de sustratos proteicos dentro de compartimentos endosómicos y lisosómicos que han entrado en estos sitios a través de endocitosis, fagocitosis o autofagocitosis. La CatD también puede actuar a pH fisiológico sobre sustratos de pequeño tamaño en el citosol y en el medio extracelular. Los modelos de supresión génica de CatD de mosca de la fruta y de ratón han destacado los múltiples papeles fisiopatológicos de la CatD en la homeostasia de tejidos y en el desarrollo de órganos.

La inhibición de la proteína CatD se ha relacionado con efectos secundarios indeseables. Por ejemplo, se cree que la inhibición de CatD está relacionada con el desarrollo adverso de la retina y la atrofia de la retina. Particularmente, en ratones se observó que la CatD es esencial para el mantenimiento metabólico de células fotorreceptoras de la retina y que su deficiencia induce la apoptosis de las células, mientras que la pérdida de neuronas de la capa nuclear interna (CNI) está mediada por la liberación de óxido nítrico desde células de la microglía. Sin embargo, en los mismos ratones, también se observó que no se detectaba ningún cambio atrófico en la retina de ratones deficientes en Catepsina B o L. Koike et al., Mol. Cell Neuroso!. 22(2):146-161 (2003). Además, los modelos animales de deficiencia de CatD se caracterizan por un fenotipo neurodegenerativo progresivo e implacable similar al observado en lipofuscinosis neuronal ceroidea (LNC), un grupo de enfermedades pediátricas neurodegenerativas conocidas colectivamente como enfermedad de Batten. Se ha demostrado que la deleción dirigida de la molécula proapoptótica Bax previene la aparición de marcadores apoptóticos, pero no la muerte de células neuronales ni la neurodegeneración inducida por deficiencia en CatD, lo que sugiere que ciertas alteraciones en la ruta de degradación de macroautofagia-lisosómica pueden mediar la muerte de células neuronales en LNC/enfermedad de Batten en ausencia de apoptosis. Shacka et al., Autophagy 3(5):474-476 (2007). Finalmente, un efecto adverso de la inhibición de CatD es evidente a partir de los datos presentados en Folio et al., PLoS One 6(7):e21908 (2011). Los autores del artículo PLoS One observaron que la atenuación de CatD afecta al epitelio del pigmento de la retina, perjudica la ontogénesis de la vejiga natatoria y causa muerte prematura en el pez cebra. Las alteraciones fenotípicas principales producidas por la atenuación de CatD en el pez cebra fueron: 1. desarrollo anómalo del ojo y del epitelio del pigmento de la retina; 2. ausencia de la vejiga natatoria; 3. hiperpigmentación de la piel; 4. crecimiento reducido y muerte prematura. Los experimentos de rescate confirmaron la implicación de CatD en los procesos del desarrollo que llevan a estas alteraciones fenotípicas.

Además, estos descubrimientos de toxicidad, según la bibliografía, pueden haber intervenido en la terminación de un ensayo clínico sobre la EA humana mediada por BACE. Eli Lilly suspendió un ensayo clínico de fase I de LY 2811376 después de que estudios de toxicología en rata mostraran que una mayor dosis de compuesto administrada durante tres meses dañaba el epitelio del pigmento del ojo de la rata. La capa retiniana tenía inclusiones y lesiones extensas. Se suspendió el ensayo de dosificación de fase I y las personas incluidas para evaluaciones oculares no mostraron ninguna anomalía. (Noticias del Alzheimer's Research Forum, 31-3-2011 sobre la presentación de Martin Citron en la conferencia AD/PD 3-2011 en Barcelona, España). El documento EP2151435A1 describe una composición farmacéutica para tratar la enfermedad de Alzheimer que comprende compuestos que actúan como inhibidores de BACE.

Por lo tanto, es deseable proporcionar compuestos que modulen la actividad de y sean selectivos para BACE, y que al mismo tiempo no sufran los efectos secundarios indeseables posiblemente debidos a la intervención con o la reducción y/o inhibición directa o indirecta de la expresión y/o función de otras proteínas o rutas biológicas.

COMPENDIO

Los compuestos descritos en la presente son útiles para la modulación de la actividad de la p-secretasa y como tratamiento de la EA. En particular, los compuestos proporcionados en la presente son útiles para la regulación o reducción de la formación de péptido Ap y, por consiguiente, la regulación y/o reducción de la formación de placas de Ap tanto en el cerebro como en el SNC. Para este fin, los compuestos son útiles para el tratamiento de la EA y otros trastornos mediados y/o relacionados con placas y/o la p-secretasa. Por ejemplo, los compuestos son útiles para la profilaxis y/o el tratamiento, agudo y/o crónico, de la EA y otras enfermedades o afecciones que implican la deposición o acumulación del péptido Ap, y la formación de placas, en el cerebro.

En primer lugar, en la presente se proporciona un compuesto de Fórmula I

o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde R1 y R1’ son, independientemente, H, alquilo C^1-6, -C(O)O(alquilo C^1-6), -C(O)NH(alquilo C^1-6) o -C(O)-heterocicloalquilo, donde el alquilo C^1-6y las porciones de alquilo C^1-6de -C(O)O(alquilo C^1-6) y -C(O)NH(alquilo C^1-6) están opcionalmente sustituidos con de uno a tres sustituyentes fluoro;

R2 y R2’ son H;

b es un enlace sencillo, si R1, R1', R2 y R2' están presentes;

b es un doble enlace si uno de los grupos R1 y R1' y uno de los grupos R2 y R2' no está presente;

R3 es alquilo C^1-4;

R4 es halógeno;

R5 es H o F; y

uno de los grupos R6 y R7 es F o H y el otro de los grupos R6 y R7 es un heteroarilo de 6 miembros que contiene nitrógeno, donde el heteroarilo está opcionalmente sustituido con halógeno, -CN o 2-propiniloxi, donde al menos uno de los grupos R5, R6 o R7 es F.

En segundo lugar, en la presente se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula I y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En tercer lugar, en la presente se proporcionan compuestos de Fórmula I o composiciones farmacéuticas de estos para su uso como medicamento.

En cuarto lugar, en la presente se proporcionan compuestos de Fórmula I o composiciones farmacéuticas de estos para su uso en la reducción de los niveles de péptido beta amiloide en el líquido cefalorraquídeo de un sujeto.

En quinto lugar, en la presente se proporcionan compuestos de Fórmula I o composiciones farmacéuticas de estos para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, deterioro cognitivo o una combinación de estos en un sujeto. Además, en la presente se proporcionan compuestos de Fórmula I o composiciones farmacéuticas de estos para su uso en el tratamiento de un trastorno neurológico seleccionado entre deterioro cognitivo leve, síndrome de Down, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis de tipo holandés, angiopatía amiloide cerebral, demencia degenerativa, demencia asociada con la enfermedad de Parkinson, demencia asociada con parálisis supranuclear, demencia asociada con degeneración basal cortical, tipo de enfermedad de Alzheimer con cuerpos de Lewy difusos, o una combinación de estos en un sujeto.

En sexto lugar, en la presente se proporcionan compuestos de Fórmula I o composiciones farmacéuticas de estos para su uso en la reducción de la formación de placas en el cerebro de un sujeto.

A continuación se hará referencia en detalle a realizaciones de la presente divulgación. Aunque se describirán ciertas realizaciones de la presente divulgación, se sobreentenderá que no se pretende limitar las realizaciones de la presente divulgación a las realizaciones descritas. Por el contrario, se pretende que la referencia a realizaciones de la presente divulgación cubra realizaciones alternativas a la extensión que están incluidas en el alcance de

DESCRIPCIÓN DETALLADA

En la presente se proporciona como Realización 1 un compuesto de Fórmula I

o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde

R1 y R1’ son, independientemente, H, alquilo C^1-6, -C(O)O(alquilo C^1-6), -C(O)NH(alquilo C^1-6) o -C(O)-heterocicloalquilo, donde el alquilo C^1-6y las porciones de alquilo C^1-6de -C(O)O(alquilo C^1-6) y -C(O)NH(alquilo C^1-6) están opcionalmente sustituidos con de uno a tres sustituyentes fluoro;

R2 y R2’ son H;

b es un enlace sencillo, si R1, R1', R2 y R2' están presentes;

R3 es alquilo C^1-4;

R4 es halógeno;

R5 es H o F; y

En la presente se proporciona como Realización 1 alternativa un compuesto de Fórmula I

R2 y R2’ son H;

b es un enlace sencillo, si R1, R1', R2 y R2' están presentes;

R3 es alquilo C^1-4;

R4 es halógeno;

R5 es H o F; y

uno de los grupos R6 y R7 es F o H y el otro de los grupos R6 y R7 es un heteroarilo de 6 miembros que contiene nitrógeno, donde el heteroarilo está opcionalmente sustituido con -CN o 2-propiniloxi, donde al menos uno de los grupos R5, R6 o R7 es F.

En la presente se proporciona como Realización 2 el compuesto de acuerdo con la Realización 1, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde el compuesto de Fórmula I es un compuesto de Fórmula II

o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde el compuesto de Fórmula I es un compuesto de Fórmula IIIA

En la presente se proporciona como Realización 4 el compuesto de acuerdo con la Realización 1, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde el compuesto de Fórmula I es un compuesto de Fórmula IIIB

En la presente se proporciona como Realización 5 el compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1,2 y 4, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde

R1' es H o metilo.

En la presente se proporciona como Realización 6 el compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1,2, 4 y 5, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde R1' es metilo.

En la presente se proporciona como Realización 7 el compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1-6, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde R3 es metilo.

En la presente se proporciona como Realización 8 el compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1-7, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde R4 es F.

En la presente se proporciona como Realización 9 el compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1-8, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde R6 y R7 es F o H y el otro de los grupos R6 y R7 es piridilo o pirazinilo, donde el piridilo o pirazinilo está opcionalmente sustituido con Cl, -CN o 2-propiniloxi.

En la presente se proporciona como Realización 10 el compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1-8, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde R6 y R7 es F o H y el otro de los grupos R6 y R7 es piridilo o pirazinilo, donde el piridilo o pirazinilo está opcionalmente sustituido con -CN o 2-propiniloxi.

En la presente se proporciona como Realización 11 el compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1-9, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde uno de los grupos R6 y R7 es

En la presente se proporciona como Realización 12 el compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1-10, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde uno de los grupos R6 y R7 es

En la presente se proporciona como Realización 13 el compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1 -12, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde

R5 es F; y

R6 es H.

En la presente se proporciona como Realización 14 el compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1-12, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde

R5 es F; y

R7 es H.

En la presente se proporciona como Realización 15 el compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1-12, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde

R5 es H; y

R6 es F.

En la presente se proporciona como Realización 16 el compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1-12, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde

R5 es H; y

R7 es F.

En la presente se proporciona como Realización 17 el compuesto de la Realización 1, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, que se selecciona entre

(S,Z)-4-(5-(2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-4H-1,3-tiazin-2-amina;

(S,Z)-6-(2-(3-(2-amino-4-metil-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo;

(S,Z)-4-(5-(2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-2-amina;

(S,Z)-6-(2-(3-(2-amino-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo;

(4S,6fi)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo;

(45.65) -2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo;

(45.65) -2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo;

(4S,6fi)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo;

(4S,6fi)-2-amino-4-(5-((Z}-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo;

(45.65) -2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo;

6-((Z)-2-(3-((4S,6S)-2-amino-4,6-dimetil-6-(morfolin-4-carbonil)-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo;

6-((Z)-2-(3-((4S,6fi)-2-amino-4,6-dimetil-6-(morfolin-4-carbonil)-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo;

(4S,6fi)-2-amino-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(2-propin-1-iloxi)-2-pirazinil)etenil)fenil)-A/,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida;

(45.65) -2-amino-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(2-propin-1-iloxi)-2-pirazinil)etenil)fenil)-W,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida;

((4S,6S)-2-amino-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(prop-2-in-1-iloxi)pirazin-2-il)vinil)fenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-il)(morfolino)metanona;

(45.65) -2-amino-W-(2,2-difluoroetil)-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(prop-2-in-1-iloxi)pirazin-2-il)vinil)fenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida; o

(45.65) -2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-A/,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida.

En la presente se proporciona como Realización 18 el compuesto de la Realización 1, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, que se selecciona entre

(4S,6fi)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo;

(45.65) -2-amino-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(2-propin-1-iloxi)-2-pirazinil)etenil)fenil)-A/,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida;

(45.65) -2-amino-A/-(2,2-difluoroetil)-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(prop-2-in-1-iloxi)pirazin-2-il)vinil)fenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida; o

(45.65) -2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-W,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida.

En la presente se proporciona como Realización 19 una composición farmacéutica que comprende el compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1-18, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En la presente se proporciona como Realización 20 un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1-18, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, o la composición farmacéutica de acuerdo con la Realización 19 para su uso como medicamento.

En la presente se proporciona como Realización 21 un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1-18, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, o la composición farmacéutica de acuerdo con la Realización 19 para su uso en la reducción de los niveles de péptido beta amiloide en el líquido cefalorraquídeo de un sujeto.

En la presente se proporciona como Realización 22 un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1-18, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, o la composición farmacéutica de acuerdo con la Realización 19 para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, deterioro cognitivo o una combinación de estos en un sujeto.

En la presente se proporciona como Realización 23 un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1-18, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, o la composición farmacéutica de acuerdo con la Realización 19 para su uso en el tratamiento de un trastorno neurológico seleccionado entre deterioro cognitivo leve, síndrome de Down, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis de tipo holandés, angiopatía amiloide cerebral, demencia degenerativa, demencia asociada con la enfermedad de Parkinson, demencia asociada con parálisis supranuclear, demencia asociada con degeneración basal cortical, tipo de enfermedad de Alzheimer con cuerpos de Lewy difusos o una combinación de estos en un sujeto.

En la presente se proporciona como Realización 24 un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Realizaciones 1-18, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, o la composición farmacéutica de acuerdo con la Realización 19 para reducir la formación de placas en el cerebro de un sujeto.

Si se proporciona una realización alternativa para una realización determinada, se considerará que una referencia a la realización determinada también será una referencia a la alternativa de dicha realización determinada proporcionada, cuando proceda.

Lo anterior simplemente resume ciertos aspectos de esta divulgación y de ningún modo pretende ser, ni debería interpretarse como, limitante de la divulgación en modo alguno.

DEFINICIONES

Las siguientes definiciones se proporcionan para facilitar la comprensión del alcance de esta divulgación.

A menos que se indique lo contrario, se pretende que todos los números que expresan cantidades de ingredientes, condiciones de reacción y demás en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones estén modificados en todos los casos por el término "aproximadamente". Por consiguiente, a menos que se indique lo contrario, los parámetros numéricos expuestos en la siguiente memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas son aproximaciones que pueden variar dependiendo de la desviación estándar que se encuentre en sus respectivas mediciones de ensayo.

Como se utiliza en la presente, si cualquier variable aparece más de una vez en una fórmula química, su definición en cada caso es independiente de su definición en cualquier otro caso. Si la estructura química y el nombre químico entran en conflicto, la estructura química es determinante de la identidad del compuesto.

Estereoisómeros

Los compuestos de la presente divulgación pueden contener, por ejemplo, dobles enlaces, uno o más átomos de carbono asimétricos y enlaces con una rotación impedida y, por lo tanto, pueden existir en forma de estereoisómeros, tales como isómeros de doble enlace (es decir, isómeros geométricos (E/Z)), enantiómeros, diastereómeros o atropoisómeros. Por consiguiente, se debe sobreentender que el alcance de la presente divulgación incluye todos los estereoisómeros posibles de los compuestos ilustrados, que incluyen la forma estereoisoméricamente pura (por ejemplo, geométricamente pura, enantioméricamente pura, diastereoméricamente pura y atropoisoméricamente pura) y mezclas estereoisoméricas (por ejemplo, mezclas de isómeros geométricos, enantiómeros, diastereómeros y atropoisómeros) de cualesquiera estructuras químicas descritas en la presente (en su totalidad o en parte). Esta divulgación también incluye las composiciones farmacéuticas que comprenden formas estereoisoméricamente puras y el uso de formas estereoisoméricamente puras de cualesquiera compuestos descritos en la presente. Además, esta divulgación también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden mezclas de estereoisómeros de cualesquiera compuestos descritos en la presente y el uso de dichas composiciones farmacéuticas o mezclas de estereoisómeros. Estos estereoisómeros o sus mezclas pueden sintetizarse de acuerdo con métodos muy conocidos en la técnica y métodos descritos en la presente. Las mezclas de estereoisómeros se pueden resolver utilizando técnicas estándar tales como columnas quirales o agentes de resolución quiral. Remítase, por ejemplo, a Jacques etal., Enantiomers, Racemates andResolutions (Wiley-Interscience, Nueva York, 1981); Wilen et al., Tetrahedron 33:2725; Eliel, Stereochemistry of Carbón Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); y Wilen, Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions, página 268 (Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972).

El término "estereoisómero" o compuesto "estereoisoméricamente puro", tal como se utiliza en la presente, se refiere a un estereoisómero (por ejemplo, isómero geométrico, enantiómero, diastereómero y atropoisómero) de un compuesto que está sustancialmente exento de otros estereoisómeros de ese compuesto. Por ejemplo, un compuesto estereoisoméricamente puro que tenga un centro quiral estará sustancialmente exento del enantiómero que es una imagen especular del compuesto y un compuesto estereoisoméricamente puro que tenga dos centros quirales estará sustancialmente exento de otros enantiómeros o diastereómeros del compuesto. Un compuesto estereoisoméricamente puro típico comprende más de aproximadamente un 80% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente un 20% en peso de otros estereoisómeros del compuesto, más de aproximadamente un 90% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente un 10% en peso de los otros estereoisómeros del compuesto, más de aproximadamente un 95% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente un 5% en peso de los otros estereoisómeros del compuesto, o más de aproximadamente un 97% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente un 3% en peso de los otros estereoisómeros del compuesto. Si la estereoquímica de una estructura o parte de una estructura no se indica, por ejemplo, con líneas discontinuas o en negrita, se debe interpretar que la estructura o parte de la estructura engloba todos sus estereoisómeros. Un enlace representado con una línea ondulada indica que se engloban ambos estereoisómeros. Esto no debe confundirse con una línea ondulada trazada perpendicular a un enlace, que indica el punto de unión de un grupo al resto de la molécula.

Tautómeros

Según saben los expertos en la técnica, ciertos compuestos descritos en la presente pueden existir en una o más formas tautoméricas. Debido a que solo se puede utilizar un estructura química para representar una forma tautomérica, se sobreentenderá que, por conveniencia, la referencia a un compuesto de una fórmula estructural determinada incluye otros tautómeros de dicha fórmula estructural. Por ejemplo, lo siguiente es ilustrativo de tautómeros de los compuestos de Fórmula I:

Por consiguiente, se debe sobreentender que el alcance de la presente divulgación engloba todas las formas tautoméricas de los compuestos descritos en la presente.

Compuestos marcados isotópicamente

Además, el alcance de la presente divulgación incluye todos los compuestos farmacéuticamente aceptables marcados isotópicamente de los compuestos descritos en la presente, tales como los compuestos de Fórmula I, donde uno o más átomos están reemplazados por átomos que tienen el mismo número atómico, pero una masa atómica o número másico diferente de la masa atómica o número másico que se encuentra normalmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos adecuados para su inclusión en los compuestos descritos en la presente incluyen isótopos de hidrógeno, tales como 2H y 3H, carbono, tales como 11C, 13C y 14C, cloro, tales como 36Cl, flúor, tales como 18F, yodo, tales como 123I y 125I, nitrógeno, tales como 13N y 15N, oxígeno, tales como 15O, 17O y 18O, fósforo, tales como 32P, y azufre, tales como 35S. Ciertos compuestos marcados isotópicamente de Fórmula I, por ejemplo, los que incorporan un isótopo radiactivo, son útiles en estudios de distribución de fármacos y/o sustratos en tejidos. Los isótopos radiactivos tritio (3H) y carbono-14 (14C) son particularmente útiles para este propósito en vista de su facilidad de incorporación y medios sencillos de detección. La sustitución con isótopos tales como deuterio (2H) puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, mayor semivida in vivo o menos requisitos de dosificación y, por lo tanto, puede ser ventajosa en algunas circunstancias. La sustitución con isótopos emisores de positrones, tales como 11C, 18F, 15O y 13N, puede ser útil en estudios de topografía de emisión de positrones (PET), por ejemplo, para examinar la ocupación de dianas. Los compuestos marcados isotópicamente de los compuestos descritos en la presente pueden prepararse generalmente utilizando técnicas convencionales conocidas por los expertos en la materia o procesos análogos a los descritos en los Esquemas sintéticos generales y Ejemplos adjuntos utilizando reactivos marcados isotópicamente adecuados en lugar del reactivo no marcado empleado previamente.

Solvatos

Como se ha analizado anteriormente, los compuestos descritos en la presente y los estereoisómeros, tautómeros y formas marcadas isotópicamente de estos o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores pueden existir en formas solvatadas o no solvatadas.

El término "solvato", tal como se utiliza en la presente, se refiere a un complejo molecular que comprende un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable de este como se describe en la presente y una cantidad estequiométrica o no estequiométrica de una o más moléculas de disolvente farmacéuticamente aceptables. Si el disolvente es agua, el solvato se denomina "hidrato".

Por consiguiente, se debe sobreentender que el alcance de la presente divulgación engloba todos los disolventes de los compuestos descritos en la presente y los estereoisómeros, tautómeros y formas marcadas isotópicamente de estos o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores.

Formas amorfas y cristalinas

En ciertas realizaciones, los compuestos descritos en la presente y los estereoisómeros, tautómeros, formas marcadas isotópicamente de estos o sales farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores o solvatos de cualquiera de los anteriores pueden existir en diferentes formas, tales como formas amorfas y formas cristalinas (polimorfos). Por consiguiente, se debe sobreentender que el alcance de la presente divulgación engloba todas estas formas.

Definiciones diversas

Esta sección definirá términos adicionales utilizados para describir el alcance de los compuestos, composiciones y usos que se describen en la presente.

La expresión "alquilo Cx-y", tal como se utiliza en la presente, se refiere a un hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que contiene de x a y átomos de carbono, por ejemplo, de 1 a 4 y de 1 a 6 átomos de carbono. Los ejemplos representativos de alquilo C^1-4incluyen, sin carácter limitante, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo y ferf-butilo. Los ejemplos representativos de alquilo C^1-6incluyen, sin carácter limitante, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, secbutilo, isobutilo, ferf-butilo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo y n-hexilo.

El término "cicloalquilo", tal como se utiliza en la presente, se refiere a un sustituyente carbocíclico obtenido al eliminar un hidrógeno de una molécula carbocíclica saturada donde el esqueleto cíclico tiene de 3 a 8 carbonos. Un "cicloalquilo" puede ser un anillo monocíclico, cuyos ejemplos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo.

El término "halógeno", tal como se utiliza en la presente, se refiere a -F, -CI, -Br o -I.

La expresión “heteroarilo de 6 miembros que contiene nitrógeno”, tal como se utiliza en la presente, se refiere a un anillo de heteroarilo que tiene 6 átomos anulares seleccionados entre carbono o nitrógeno, donde de uno a cuatro de los átomos anulares son nitrógeno. Los ejemplos de heteroarilos de 6 miembros que contienen nitrógeno incluyen, sin carácter limitante, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo y piridazinilo.

El término “heterocicloalquilo”, tal como se utiliza en la presente, se refiere a un cicloalquilo según se ha definido anteriormente, donde al menos uno de los átomos de carbono anulares se ha reemplazado por un heteroátomo seleccionado entre nitrógeno, oxígeno o azufre. Los ejemplos de heterocicloalquilo de seis miembros incluyen, sin carácter limitante, piperidina, piperazina y morfolina.

La expresión "farmacéuticamente aceptable", tal como se utiliza en la presente, se refiere a que se ha reconocido por lo general para su uso en sujetos, particularmente en seres humanos.

La expresión "sal farmacéuticamente aceptable", tal como se utiliza en la presente, se refiere a una sal de un compuesto que es farmacéuticamente aceptable y que posee la actividad farmacológica deseada del compuesto precursor. Dichas sales incluyen: (1) sales de adición de ácido, formadas con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares; o formadas con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido propiónico, ácido hexanoico, ácido ciclopentanopropiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido malónico, ácido succínico, ácido málico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido 3-(4-hidroxibenzoil)benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico y similares; o (2) sales formadas cuando un protón ácido presente en el compuesto precursor se reemplaza por un ion metálico, por ejemplo, un ion de metal alcalino, un ion alcalinotérreo o un ion de aluminio; o se coordina con una base orgánica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, W-metilglucamina, diciclohexilamina y similares. Pueden encontrarse ejemplos adicionales de dichas sales en Berge ef al., J. Pharm. Sci. 66(1):1 -19 (1977). Remítase también a Stahl ef al., Pharmaceufical Salfs: Properfies, Selecfion, and Use, 2.a edición revisada (2011).

La expresión "excipiente farmacéuticamente aceptable", tal como se utiliza en la presente, se refiere a una amplia gama de ingredientes que pueden combinarse con un compuesto o sal que se describe en la presente para preparar una formulación o composición farmacéutica. Habitualmente, los excipientes incluyen, sin carácter limitante, diluyentes, colorantes, vehículos, antiadherentes, deslizantes, disgregantes, agentes saborizantes, recubrimientos, aglutinantes, edulcorantes, lubricantes, sorbentes, conservantes y similares.

El término "sujeto", tal como se utiliza en la presente, se refiere a seres humanos y mamíferos, que incluyen, sin carácter limitante, primates, vacas, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos, conejos, ratas y ratones. En una realización, el sujeto es un ser humano.

El término "tratar", tal como se utiliza en la presente, se refiere no solo a tratar a un sujeto para aliviar al sujeto de uno o más signos y síntomas de una enfermedad o afección o eliminar uno o más de dichos signos y síntomas, sino también a tratar profilácticamente a un sujeto asintomático para prevenir el comienzo de la enfermedad o afección o prevenir, ralentizar o revertir el progreso de la enfermedad o afección.

La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz", tal como se utiliza en la presente, se refiere a la cantidad de un compuesto descrito en la presente que provocará la respuesta biológica o médica de un tejido, un sistema o un sujeto, que se esperada por un investigador, veterinario, médico u otro facultativo. La expresión también incluye la cantidad de un compuesto descrito en la presente que evitará o reducirá el riesgo de que ocurra el evento biológico o médico que un investigador, veterinario, médico u otro facultativo espera evitar en un tejido, un sistema o un sujeto.

PROCEDIMIENTOS SINTÉTICOS GENERALES

Los compuestos proporcionados en la presente pueden sintetizarse de acuerdo con los procedimientos descritos en esta sección y en las siguientes secciones. Los métodos sintéticos descritos en la presente son meramente ilustrativos y los compuestos descritos en la presente también pueden sintetizarse mediante rutas alternativas utilizando estrategias sintéticas alternativas, como apreciarán los expertos en la técnica. Debe apreciarse que los procedimientos sintéticos generales y los ejemplos específicos proporcionados en la presente son meramente ilustrativos y no deben considerarse de ninguna manera como limitación del alcance de la presente divulgación.

En general, los compuestos de Fórmula I pueden sintetizarse de acuerdo con los siguientes esquemas. Cualesquiera variables utilizadas en los siguientes esquemas son las variables que se han definido para la Fórmula I, a menos que se indique lo contrario. Todos los materiales de partida se pueden adquirir de proveedores comerciales, por ejemplo, de Sigma-Aldrich Chemical Company, Inc., St. Louis, MO, Ee . UU., o son conocidos en la técnica y pueden sintetizarse empleando procedimientos conocidos utilizando técnicas ordinarias. El material de partida también puede sintetizarse por los procedimientos descritos en la presente.

Esquema 1

El alqueno iv puede sintetizarse como se muestra en el Esquema 1. El material de partida R7-Br se hace reaccionar con 2-bromo-2,2-difluoroacetato de etilo para obtener el éster i. A continuación, el éster i se reduce, por ejemplo, con borohidruro sódico, para obtener el alcohol ii. A continuación, el grupo OH del alcohol ii se transforma en un grupo yodo, para proporcionar el compuesto iii mediante la transformación del grupo OH en un grupo saliente seguida de una sustitución nucleófila, por ejemplo, haciendo reaccionar el alcohol ii con anhídrido tríflico en presencia de una base, tal como piridina, y a continuación llevando a cabo una reacción con I-, proveniente de, por ejemplo, yoduro sódico. A continuación, se obtiene el alqueno iv haciendo reaccionar el compuesto iii con una base tal como fert-butóxido potásico.

Esquema 2

transforma en un grupo saliente, por ejemplo, haciendo reaccionar R7CH²OH con cloruro de metanosulfonilo en presencia de una base, tal como trimetilamina, para obtener el compuesto v. A continuación, el compuesto v se hace reaccionar con 3,5-bis(trifluorometil)bencenotiol en presencia de una base, tal como hidróxido sódico, para obtener el compuesto vi. Como alternativa, R7CH²X, donde X es Cl, Br o I, puede hacerse reaccionar directamente con 3,5-bis(trifluorometil)bencenotiol en presencia de una base, tal como carbonato potásico, para obtener el compuesto vi. La sulfona vii se obtiene haciendo reaccionar el compuesto vi en condiciones oxidantes utilizando, por ejemplo, peróxido de hidrógeno. La sulfona viii se obtuvo haciendo reaccionar la sulfona vii con un agente de fluoración electrófilo, tal como A/-fluorodibencenosulfonimida, en presencia de una base tal como diisopropilamiduro de litio.

Esquema 3

El compuesto final xii puede sintetizarse como se muestra en el Esquema 3. En primer lugar, el grupo amino libre del compuesto ix, donde X es Cl, Br o I, se protege adecuadamente, por ejemplo, mediante una reacción con dicarbonato de di-tert-butilo en presencia de una base tal como A,A-diisopropiletilamina (base de Hünig). A continuación, el compuesto adecuadamente protegido x se transforma en el ácido borónico xi, por ejemplo, haciendo reaccionar bis(pinacolato)diboro en presencia de una base, tal como acetato potásico, y un catalizador de paladio adecuado tal como [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II). El compuesto final xii se obtiene haciendo reaccionar el ácido borónico xi con el compuesto iv en condiciones de Suzuki, en presencia de, por ejemplo, bis(di-tert-butil(4-dimetilaminofenil)fosfina)dicloropaladio (II) y una base, tal como fosfato potásico, y a continuación realizando una desprotección del grupo amino haciendo reaccionar el producto de Suzuki con, por ejemplo, ácido trifluoroacético, si se empleó una estrategia de protección de di-BOC.

Esquema 4

Los compuestos finales xv y xvi pueden sintetizarse como se muestra en el Esquema 4. En primer lugar, el grupo amino libre del compuesto ix se protege adecuadamente, por ejemplo, mediante una reacción con anhídrido benzoico en presencia de una base tal como trimetilamina. A continuación, el compuesto adecuadamente protegido x se transforma en el alqueno xiii haciendo reaccionar el compuesto x con, por ejemplo, viniltrifluoroborato potásico en presencia de una base, tal como acetato potásico, y un catalizador de paladio adecuado tal como bis(di-íe/f-butil(4-dimetilaminofenil)fosfina)dicloropaladio (II). El aldehído xiv se obtiene sometiendo el alqueno xiii a condiciones oxidantes utilizando, por ejemplo, tetróxido de osmio, N-óxido de 4-metilmorfolina y peryodato potásico. A continuación, el aldehído xiv se hace reaccionar con el compuesto viii en presencia de una base, tal como bis(trimetilsilil)amiduro de litio, y después se somete a unas condiciones para eliminar el grupo o grupos protectores del grupo amino utilizando, por ejemplo, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU), si se empleó una estrategia de protección de benzoílo, para obtener el compuesto o compuestos finales xv y/o xvi.

Esquema 5

Los compuestos finales xviii y xix pueden sintetizarse como se muestra en el Esquema 5. El compuesto adecuadamente protegido x se transforma en el éster borónico xvii haciendo reaccionar el compuesto x con, por ejemplo, bispinacolatodiboro en presencia de una base, tal como acetato potásico, y un catalizador de paladio adecuado tal como bis(di-tert-butil(4-dimetilaminofenil)fosfina)dicloropaladio (II). A continuación, el éster borónico xvii se acopla con un yoduro de vinilo adecuado, por ejemplo, en presencia de una base, tal como acetato potásico, y un catalizador de paladio adecuado tal como bis(di-tert-butil(4-dimetilaminofenil)fosfina)dicloropaladio (II). El yoduro de vinilo puede sintetizarse mediante métodos conocidos en la técnica. Aplicando unas condiciones para eliminar el grupo o grupos protectores del grupo amino utilizando, por ejemplo, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU), si se empleó una estrategia de protección de benzoílo, pueden obtenerse el compuesto o compuestos finales xviii y/o xix.

Como puede apreciar el experto, no se pretende que los esquemas sintéticos y ejemplos representativos anteriores comprendan una lista exhaustiva de todos los medios mediante los que pueden sintetizarse los compuestos descritos y reivindicados en esta solicitud. Otros métodos serán evidentes para los expertos en la técnica. Adicionalmente, los diferentes pasos sintéticos descritos anteriormente se pueden llevar a cabo en una secuencia u orden alternativo para obtener los compuestos deseados.

Por ejemplo, en estos procedimientos, los pasos pueden ir precedidos por, o seguidos de, pasos adicionales de protección/desprotección, según sea necesario. En particular, si uno o más grupos funcionales, por ejemplo, grupos carboxi, hidroxi, amino o mercapto, están o es necesario que estén protegidos en la preparación de los compuestos descritos en la presente, debido a que no se desea que tomen parte en una reacción o transformación química específica, pueden utilizarse varios grupos protectores convencionales conocidos. Por ejemplo, pueden utilizarse grupos protectores que se emplean habitualmente en la síntesis de compuestos naturales y sintéticos, incluidos péptidos, ácidos nucleicos, derivados de estos y azúcares, que tienen múltiples centros reactivos, centros quirales y otros sitios potencialmente sensibles a los reactivos y/o condiciones de reacción.

Las transformaciones de química sintética y las metodologías de grupos protectores (protección y desprotección) útiles para sintetizar los compuestos descritos en la presente son conocidas en la técnica e incluyen, por ejemplo, las descritas en R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene y P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3.a edición, John Wiley and Sons (1999); L. Fieser y M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); A. Katritzky y A. Pozharski, Handbook of Heterociclic Chemistry, 2.a edición (2001); M. Bodanszky, A. Bodanszky, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin Heidelberg (1984); J. Seyden-Penne, Reductions by the Alumino- and Borohydrides in Organic Synthesis, 2.a edición, Wiley-VCH, (1997); y L. Paquette, editor, Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995).

Todos los procedimientos sintéticos descritos en la presente puede realizarse en condiciones de reacción conocidas, favorablemente en las descritas en la presente, en ausencia o presencia (normalmente) de disolventes. Como apreciarán los expertos en la técnica, los disolventes deben ser inertes con respecto a, y deben ser capaces de disolver, los materiales de partida y otros reactivos utilizados. Los disolventes deben ser capaces de solubilizar parcial o totalmente los reactivos en ausencia o presencia de catalizadores, agentes de condensación o agentes neutralizantes, por ejemplo, intercambiadores de iones, habitualmente intercambiadores de cationes, por ejemplo, en forma de H+. La capacidad del disolvente para permitir y/o ejercer una influencia sobre el avance o la velocidad de la reacción depende generalmente del tipo y propiedades del disolvente o disolventes, condiciones de reacción, que incluyen temperatura, presión, condiciones atmosféricas tales como en una atmósfera inerte de argón o nitrógeno, y concentración, y de los propios reactivos.

Los disolventes adecuados para realizar reacciones con el fin de sintetizar los compuestos proporcionados en la presente incluyen, sin carácter limitante, agua; ésteres, que incluyen alcanolatos inferiores de alquilo inferior, por ejemplo, EtOAc; éteres, que incluyen éteres alifáticos, por ejemplo, Et²O y éter dimetílico del etilenglicol o éteres cíclicos, por ejemplo, THF; hidrocarburos aromáticos líquidos, por ejemplo, benceno, tolueno y xileno; alcoholes, por ejemplo, MeOH, EtOH, 1-propanol, iPrOH, n- y t-butanol; nitrilos, por ejemplo, CH³CN; hidrocarburos halogenados, por ejemplo, CH²Cl², CHCh y CCl⁴; amidas ácidas, por ejemplo, DMF; sulfóxidos, por ejemplo, DMSO; bases, que incluyen bases nitrogenadas heterocíclicas, por ejemplo, piridina; ácidos carboxílicos, por ejemplo, ácidos alcanocarboxílicos inferiores, por ejemplo, AcOH; ácidos inorgánicos, por ejemplo, HCl, HBr, HF y H²SO⁴; anhídridos de ácidos carboxílicos, por ejemplo, anhídridos de ácidos de alcanos inferiores, por ejemplo, anhídrido acético; hidrocarburos cíclicos, lineales o ramificados, por ejemplo, ciclohexano, hexano, pentano e isopentano; y mezclas de cualquiera de estos disolventes, tales como combinaciones de disolventes puramente orgánicos o combinaciones de disolventes que contienen agua, por ejemplo, soluciones acuosas. Estos disolventes y mezclas de disolventes también se pueden utilizar para “tratar” la reacción así como para procesar la reacción y/o aislar el producto o productos de reacción, tal como en la cromatografía.

Los métodos de purificación son conocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, cristalización, cromatografía (por ejemplo, en fase líquida y gaseosa), extracción, destilación, lavado con disgregación y HPLC de fase inversa. Las condiciones de reacción tales como temperatura, duración, presión y atmósfera (gas inerte, ambiente) son conocidas en la técnica y pueden ajustarse según sea adecuado para la reacción.

La divulgación engloba además compuestos "intermedios", que incluyen estructuras producidas a partir de los procedimientos sintéticos descritos, ya sean aisladas o generadas in-situ y no aisladas, antes de obtener el compuesto deseado finalmente. Las estructuras resultantes de llevar a cabo pasos a partir de un material de partida transitorio, las estructuras resultantes de la divergencia del método o métodos descritos en cualquier etapa, y las estructuras que forman materiales de partida en las condiciones de reacción son todas "intermedios" que se incluyen en el alcance de esta divulgación.

Además, también se sobreentiende que los procesos para preparar y hacer reaccionar adicionalmente estos intermedios están englobados en el alcance de esta divulgación.

En la presente también se proporcionan nuevos materiales de partida y/o intermedios, así como procesos para su preparación. En realizaciones seleccionadas, se utilizan tales materiales de partida y se seleccionan las condiciones de reacción para obtener de este modo el compuesto o compuestos deseados. Los materiales de partida o bien son conocidos, se pueden adquirir de proveedores comerciales o se pueden sintetizar de forma análoga a, o de acuerdo con, métodos que se conocen en la técnica. Numerosos materiales de partida pueden prepararse de acuerdo con procesos conocidos y, en particular, pueden prepararse utilizando procesos descritos en los ejemplos. En la síntesis de materiales de partida, cuando sea necesario, pueden protegerse grupos funcionales con grupos protectores adecuados. Los grupos protectores, su introducción y eliminación se han descrito anteriormente.

EJEMPLOS

Esta sección proporciona ejemplos específicos de compuestos de Fórmula I y métodos de preparación de los mismos.

Lista de abreviaturas

Tabla 1

Métodos generales analíticos y de purificación

En esta sección se proporcionan descripciones de los métodos generales analíticos y de purificación utilizados para preparar los compuestos específicos proporcionados en la presente.

Cromatografía:

A menos que se indique otra cosa, los residuos que contenían producto crudo se purificaron haciendo pasar el concentrado o material crudo o a través de una columna de gel de sílice de marca Biotage o Isco (preempaquetada o empaquetada individualmente con SiO²) y eluyendo el producto de la columna con un gradiente de disolventes como se indica. Por ejemplo, una descripción de (330 g de SiO², 0-40% de EtOAc/hexano) significa que el producto se obtuvo por elución a partir de la columna empaquetada con 330 gramos de sílice, con un gradiente de disolventes de un 0% a un 40% de EtOAc en hexanos.

Método de HPLC preparativa:

Cuando así se indique, los compuestos descritos en la presente se purificaron mediante HPLC de fase inversa utilizando uno de los siguientes instrumentos: Shimadzu, Varian, Gilson; empleando una de las dos columnas de HPLC siguientes: (a) una Phenomenex Luna o (b) una columna Gemini (5 micrómetros o 10 micrómetros, C18, 150x50 mm).

Una ejecución típica a través del instrumento incluyó: elución a 45 mL/min con un gradiente lineal de un 10% (v/v) a un 100% de MeCN (0.1% v/v de TFA) en agua (0.1% de TFA) durante 10 minutos; las condiciones se pueden modificar para conseguir separaciones óptimas.

Espectros de RMN de protón:

A menos que se indique otra cosa, todos los espectros de 1H RMN se registraron en un instrumento de RMN Bruker a 300 MHz o 400 MHz. Cuando se caracterizaron de este modo, todos los protones observados se indican como partes por millón (ppm) en campos decrecientes respecto al tetrametilsilano (TMS) u otra referencia interna en el disolvente adecuado indicado.

Espectros de 19F RMN:

A menos que se indique otra cosa, todos los espectros de 19F RMN se registraron en un instrumento de RMN Bruker a 376 MHz. Todos los protones observados se indican como partes por millón (ppm) en campos decrecientes.

Espectros de masas (MS)

A menos que se indique otra cosa, todos los datos de espectros de masas para los materiales de partida, intermedios y/o compuestos ilustrativos se indican como masa/carga (m/z), con un ion molecular (M+H+). El ion molecular indicado se obtuvo mediante un método de detección por electronebulización (comúnmente denominado ESI MS) utilizando un instrumento de MS PE SCIEX API 150EX o un sistema de LC/MSD Agilent de serie 1100. Los compuestos que tienen un átomo isotópico, tal como bromo y similares, se indican generalmente de acuerdo con el patrón isotópico detectado, como apreciarán los expertos en la técnica.

Nombres de los compuestos

Los compuestos divulgados y descritos en la presente se han nombrado utilizando o bien (1) la convención de nomenclatura proporcionada por el software Chem-Draw Ultra 12.0.3, disponible en Chem Office, o (2) el software de la base de datos ISIS (software Advanced Chemistry Design Labs o ACD).

Ejemplos específicos

En esta sección se proporcionan los procedimientos para sintetizar ejemplos específicos de los compuestos proporcionados en la presente. A menos que se indique lo contrario, todos los materiales de partida o bien se pueden adquirir de proveedores comerciales, en la empresa química Sigma-Aldrich, Inc., St. Louis, MO, EE. UU., o son conocidos en la técnica y pueden sintetizarse empleando procedimientos conocidos utilizando técnicas ordinarias.

Intermedios

Intermedio 1: (Z)-5-cloro-2-(1-fluoro-2-yodovinil)piridina.

Preparación de 2-(5-cloropiridin-2-il)-2,2-difluoroacetato de etilo (1a).

Se añadió lentamente 2-bromo-2,2-difluoroacetato de etilo (105 g, 520 mmol) a una suspensión de cobre (0) en polvo (66.0 g, 1039 mmol) en DMSO (1.2 L) en una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se añadió en una porción 2-bromo-5-cloropiridina (Shanghai Fchemicals Technology Co., Ltd., Shanghai, China) (50.0 g, 260 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Se filtró a través de un lecho de celite y el filtrado se repartió entre acetato de etilo (1 L) y cloruro de amonio saturado (100 mL) y agua (100 mL). Se separó la fase orgánica y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 mL). La solución orgánica combinada se lavó con agua (2 x 100 mL), se secó con Na²SÜ⁴y se concentró. La purificación del residuo mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 10% de acetato de etilo en hexanos) proporcionó 1a (60 g, rendimiento de un 64%) como un líquido transparente. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 236.0. 1H RMN (400 MHz, Cloroformo-a) ó 8.63 - 8.59 (m, 1H), 7.85 (dt, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.70 (dt, J = 8.4, 0.9 Hz, 1H), 4.11 (c, J = 7.1, 1.0 Hz, 2H), 1.26 (t, J = 7.1, 1.0 Hz, 3H).

Preparación de 2-(5-cloropiridin-2-il)-2,2-difluoroetan-1-ol (1b).

A una solución de 1a (47.0 g, 199 mmol) en etanol (600 mL) a 0 °C se le añadió en porciones borohidruro sódico (7.5 g, 199 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se desactivó con agua (500 mL) y se concentró a presión reducida. El material crudo se diluyó con agua (500 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 500 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron con Na2SÜ4 y se concentraron. La purificación del residuo mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 10% de acetato de etilo en hexanos) proporcionó 1b (35 g, rendimiento de un 91%) como un sólido de color amarillo claro. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 194.2. 1H RMN (400 MHz, Cloroformo-a) ó 8.64 - 8.58 (m, 1H), 7.86 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.70 (dt, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 4.24 (t, J = 12.4 Hz, 2H). Nota: No se observó el protón del OH.

Preparación de 5-cloro-2-(1,1-difluoro-2-yodoetil)piridina (1c).

A una solución de 1b (31 g, 160 mmol) en DCM (500 mL) a 0 °C se le añadió trietilamina (49.1 mL, 352 mmol) seguida de la adición gota a gota de cloruro de metanosulfonilo (23.7 mL, 304 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con agua (500 mL) y se extrajo con DCM (2 x 500 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (250 mL), se secaron con Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo se disolvió en W,A/-dimetilacetamida (600 mL) y se trató con yoduro sódico (96 g, 641 mol) en porciones. La mezcla de reacción se calentó a 110 °C durante 36 horas. Se enfrió hasta temperatura ambiente, se diluyó con agua (500 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 500 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (500 mL), se secaron con Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 10% de acetato de etilo en hexanos) para obtener 1c (30 g, rendimiento de un 60%) como un sólido marrón. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 303.9. 1H RMN (400 MHz, Cloroformo-a) ó 8.59 (s, 1H), 7.87 - 7.84 (m, 1H), 7.27 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.27 (t, J = 12.4 Hz, 2H).

Preparación de (Z)-5-cloro-2-(1-fluoro-2-yodovinil)piridina (1).

A una solución de 1c (30 g, 99 mmol) en DMSO (50 mL) a 0 °C se le añadió una solución de KOH (19.4 g, 346 mmol) en agua (50 mL) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 horas. Se diluyó con agua (150 mL) y se agitó durante 15 minutos. Los sólidos precipitados se recolectaron mediante filtración, se lavaron con agua (2 x 100 mL) y se secaron para proporcionar (Z)-5-cloro-2-(1-fluoro-2-yodovinil)piridina (1, 24.7 g, rendimiento de un 87%) como un sólido cristalino blanco. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 284.0. 1H RMN (400 MHz, Cloroformo-a) ó 8.54 - 8.51 (m, 1H), 7.74 (dd, J = 8.5, 2.4 Hz, 1H), 7.50 (ddd, J = 8.5, 1.8, 0.8 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 34.3 Hz, 1H).

Intermedio 2: (Z)-6-(1-fluoro-2-yodovinil)nicotinonitrilo.

Preparación de 2-(5-cianopiridin-2-il)-2,2-difluoroacetato de etilo (2a).

A una suspensión de cobre en polvo (0) (Spectrochem PVT. LTD., Mumbai, India) (413 g, 6557 mmol) en sulfóxido de dimetilo (6 L) se le añadió gota a gota 2-bromo-2,2-difluoroacetato de etilo (Matrix Scientific, Columbia, SC, EE. UU.) (665 g, 3279 mmol) en una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se añadió en porciones 2-bromo-5-cianopiridina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU.) (300 g, 1639 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Se filtró a través de un lecho de celite y el filtrado se repartió entre acetato de etilo (3 L) y una solución saturada de cloruro de amonio (2.5 mL). Se separó la fase orgánica y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 2 L). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (2 x 2 L), se secaron con Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (de un 0 a un 10% de acetato de etilo en hexanos) para obtener 2a (320 g, rendimiento de un 86%) como un aceite incoloro. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 227.1.1H r Mn (400 MHz, Cloroformo-a) 5D8.93 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.18 (dd, J = 8.2, 2.1 Hz, 1H), 7.90 (dd, J = 8.1, 1.0 Hz, 1H), 4.39 (c, J = 7.1 Hz, 2H), 1.34 (t, J = 7.1 Hz, 3H).

Preparación de 6-(1,1-difluoro-2-hidroxietil)nicotinonitrilo (2b).

A una solución de 2a (105 g, 464 mmol) en THF (1.5 L) se le añadió en porciones borohidruro sódico (10.5 g, 279 mmol) a -20 °C. La mezcla de reacción se agitó a -20 °C durante 30 minutos y se añadió gota a gota metanol (525 mL) a -20 °C. La mezcla de reacción se agitó a -20 °C durante 1 hora y se desactivó con agua (500 mL). Se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (0.5 L) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 1 L). La solución orgánica combinada se secó con Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (de un 0 a un 25% de acetato de etilo en hexanos) para proporcionar 2b (43.0 g, rendimiento de un 50%) como un sólido de color amarillo claro. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 185.1. 1H RMN (400 MHz, Cloroformo-a) 58.97 - 8.90 (m, 1H), 8.18 (dd, J = 8.2, 2.1 Hz, 1H), 7.89 (dd, J = 8.3, 0.9 Hz, 1H), 4.29 (t, J = 12.4 Hz, 2H). Nota: No se observó el protón del OH.

Preparación de 6-(1,1-difluoro-2-yodoetil)nicotinonitrilo (2c).

A una solución de 2b (87 g, 472 mmol) en acetonitrilo (1.3 L) se le añadió piridina (74.7 g, 945 mmol) seguida de la adición gota a gota de anhídrido trifluorometanosulfónico (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU.) (240 g, 850 mmol) a -10 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. Se enfrió hasta 0 °C y se añadió yoduro sódico (354 g, 2362 mmol) en porciones. La mezcla de reacción se calentó a 60 °C durante 2 horas. Se enfrió hasta temperatura ambiente, se diluyó con agua (2 L) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 3 L). La solución orgánica combinada se secó con Na2SO4 y se concentró a presión reducida. El material crudo se purificó mediante una columna de gel de sílice (de un 0 a un 10% de acetato de etilo en hexanos) para proporcionar 2c (107 g, rendimiento de un 77%) como un sólido de color amarillo claro. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 295.0. 1H RMN (400 MHz, Cloroformoa) 58.95 (s, 1H), 8.17 - 8.14 (m, 1H), 7.87 - 7.85 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.97 (t, J = 14.4 Hz, 2H).

Preparación de 6-(1,1-difluoro-2-yodoetil)nicotinonitrilo (2).

A una solución de 2c (58 g, 197 mmol) en THF (580 mL) se le añadió en porciones íerí-butóxido potásico (26.6 g, 237 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2 horas y se desactivó con NH⁴Cl acuoso sat. (100 mL) y agua (100 mL). Se extrajo con acetato de etilo (3 x 700 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron con Na2SO4 y se concentraron. La purificación del residuo mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 5% de acetato de etilo en hexanos) proporcionó 6-(1,1-difluoro-2-yodoetil)nicotinonitrilo (2, 33 g, rendimiento de un 61%) como un sólido de color amarillo claro. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 274.9. 1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 59.04 (dd, J = 2.1, 1.0 Hz, 1H), 8.45 (dd, J = 8.3, 2.1 Hz, 1H), 7.81 (dt, J = 8.3, 1.1 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 36.4 Hz, 1H).

Intermedio (3): (Z)-2-cloro-5-(1-fluoro-2-yodovinil)pirazina.

Preparación de 2-(5-cloropirazin-2-il)-2,2-difluoroacetato de etilo (3a).

A una suspensión de cobre (0) en polvo (244 g, 3877 mmol) en DMSO (5 L) se le añadió 2-bromo-2,2-difluoroacetato de etilo (394 g, 1939 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se añadió en porciones 2-bromo-5-cloropirazina (Shanghai Fchemicals Technology Co., Ltd., Shanghai, China) (250 g, 1292 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y a continuación se desactivó con cloruro de amonio acuoso sat. (2.0 mL). La mezcla se filtró a través de un lecho de celite y el filtrado se extrajo con acetato de etilo (2 x 2 L). Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2SÜ4 y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 2% de acetato de etilo en hexanos) para proporcionar 3a (215 g, rendimiento de un 70%) como un líquido viscoso incoloro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) ó 9.05 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.98 (dd, J = 1.4, 0.7 Hz, 1H), 4.39 - 4.34 (m, 2H), 1.24 (t, J = 7.1 Hz, 3H).

Preparación de 2-(5-cloropirazin-2-il)-2,2-difluoroetanol (3b).

A una solución de 3a (215 g, 909 mmol) en etanol (400 mL) se le añadió en porciones borohidruro sódico (34.4 g, 909 mmol) a 0 °C. Después de agitar la mezcla de reacción durante 30 minutos a 0 °C, se desactivó con agua (200 mL) y la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con agua (750 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 1.0 L). La solución orgánica combinada se secó con Na2SO4 y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 10% de acetato de etilo en hexanos) para proporcionar 3b (130 g, rendimiento de un 73%) como un líquido incoloro. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 195.0. 1H RMN (300 MHz, DMSO-afe) ó 8.97 (dt, J = 1.4, 0.7 Hz, 1H), 8.82 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 5.70 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.01 (td, J = 13.8, 6.4 Hz, 2H).

Preparación de 2-cloro-5-(1,1-difluoro-2-yodoetil)pirazina (3c).

A una solución de 3b (130 g, 668 mmol) en acetonitrilo (1.3 L) a 0 °C se le añadió piridina (54.0 mL, 668 mmol) seguida de la adición gota a gota de anhídrido tríflico (147 mL, 869 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 30 minutos y a continuación a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se trató con yoduro sódico (300 g, 2004 mmol) en porciones a temperatura ambiente y a continuación se agitó a 70 °C durante 2 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la reacción se desactivó con una solución acuosa saturada de tiosulfato sódico (2.0 L) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 2.0 L). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2.0 L), se secaron con Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (2% de acetato de etilo en hexanos) para proporcionar 3c (150.0 g, rendimiento de un 71%) como un sólido amarillo 1H RMN (300 MHz, DMSO-afe) ó 8.96 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 4.07 (t, J = 16.4 Hz, 2H).

Preparación de (Z)-2-cloro-5-(1-fluoro-2-yodovinil)pirazina (3).

A una solución de 3c (150 g, 493 mmol) en DMSO (900 mL) se le añadió una solución acuosa de NaOH 5.0 M (148 mL, 740 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2 horas, a continuación se desactivó con agua (100 mL) y se extrajo con EtOAc (2 x 200 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (300 mL), se secaron con Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 5% de acetato de etilo en hexanos) para proporcionar (Z)-2-cloro-5-(1-fluoro-2-yodovinil)pirazina (3, 78 g, rendimiento de un 54%) como un sólido blanco. 1H Rm N (400 MHz, Cloroformo-a) ó 8.59 (c, J = 1.4 Hz, 1H), 8.54 (c, J = 1.4 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 34.1, 1.3 Hz, 1H).

Ejemplos

Ejemplo 100: (S,Z)-4-(5-(2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-4H-1,3-tiazin-2-amina Preparación de (S)-(4-(2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-metil-4HL1,3-tiazin-2-il)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)carbamato de ferf-butilo (100b).

Una mezcla de (S)-(4-(5-bromo-2-fluorofenil)-4-metil-4H-1,3-tiazin-2-il)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)carbamato de ferf-butilo (100a, preparado de acuerdo con los métodos descritos en WO 2016022724) (1.07 g, 2.01 mmol), dioxano (11 mL), bis(pinacolato)diboro (0.66 g, 2.62 mmol) y acetato potásico (592 mg, 6.04 mmol) se purgó con argón durante 5 minutos y a continuación se trató con un complejo de [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) con diclorometano (0.12 g, 0.14 mmol). La mezcla se calentó hasta 85 °C durante 1.5 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla se filtró a través de un lecho de celite y la masa húmeda retenida sobre el filtro se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar (S)-(4-(2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-metil-4H-1,3-tiazin-2-il)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)carbamato de ferf-butilo (100b) como un aceite de color marrón oscuro, el cual se utilizó como crudo asumiendo un rendimiento teórico. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 579.

Preparación de (S,Z)-(4-(5-(2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-4H-1,3-tiazin-2-il)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil) carbamato de ferf-butilo (100c).

Una mezcla de (S)-(4-(2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-metil-4H-1,3-tiazin-2-il)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)carbamato de ferf-butilo (100b, 0.100 g, 0.173 mmol), (Z)-5-cloro-2-(1-fluoro-2-yodovinil)piridina (1, 000000000003220020.073 g, 0.259 mmol), Pd(Amphos)Cl²(Sigma-Aldrich) (0.012 g, 0.017 mmol), K³PO⁴(110 mg, 0.519 mmol) en dioxano (1.5 mL) y agua (0.25 mL) se purgó con argón durante 5 minutos y a continuación se calentó a 80 °C durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La solución orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 100% de EtOAc en heptano) para proporcionar (S,Z)-(4-(5-(2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-4H-1,3-tiazin-2-il)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil) carbamato de ferf-butilo (100c, 58.4 mg, rendimiento de un 56%) como un sólido blanco. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 608.

Preparación del Ejemplo 100.

Una mezcla de (S,Z)-(4-(5-(2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-4H-1,3-tiazin-2-il)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)carbamato de ferf-butilo (100c, 58.4 mg, 0.096 mmol), ácido p-toluenosulfónico monohidratado (0.055 g, 0.288 mmol) y dioxano (1.5 mL) se calentó hasta 80 °C durante 2.5 horas. La mezcla se diluyó con una solución acuosa saturada de Na2CO3 y se extrajo con EtOAc. La solución orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice dos veces (utilizando la primera vez de un 0 a un 100% de EtOAc/EtOH (3:1) en heptano como gradiente y utilizando la segunda vez de un 0 a un 100% de EtOAc en DCM como gradiente) para proporcionar (S,Z)-4-(5-(2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-4H-1,3-tiazin-2-amina (Ejemplo 100, 22 mg, rendimiento de un 60%) como un sólido blanquecino. m S (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 378.1H RMN (400 MHz, Cloroformo-a) 68.54 (s, 1H), 7.72 (ddd, J = 2.15, 5.33, 7.97 Hz, 2H), 7.57-7.64 (m, 1H), 7.54 (dd, J = 0.98, 8.41 Hz, 1H), 6.92-7.10 (m, 2H), 6.23-6.35 (m, 2H), 4.46 (s a, 2H), 1.74 (s, 3H).19F RMN (376 MHz, Cloroformo-a) 6 -110.77 (d, J = 1.73 Hz, 1F), -124.20 (d, J = 1.73 Hz, 1F).

Ejemplo 101: (S,Z)-6-(2-(3-(2-amino-4-metil-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo.

Este compuesto (32 mg, rendimiento global de un 69%) se preparó como un sólido blanco de manera similar a la descrita para el Ejemplo 100, partiendo en este caso del éster borónico 100b (106 mg, 0.18 mmol) y el yoduro de vinilo 2 (65 mg, 0.24 mmol). MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 369. 1H RMN (400 MHz, Cloroformo-a) 68.82 (d, J = 0.98 Hz, 1H), 8.01 (dd, J = 2.05, 8.31 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 2.15, 7.82 Hz, 1H), 7.60-7.71 (m, 2H), 7.23 (d, J = 36.39 Hz, 1H), 7.07 (dd, J = 8.61, 11.35 Hz, 1H), 6.25-6.34 (m, 2H), 1.74 (s, 3H). El grupo NH²no se vio claro en la RMN. 19F RMN (376 MHz, Cloroformoa) 6 -109.27 (d, J = 2.60 Hz, 1F), -125.67 (d, J = 2.60 Hz, 1F).

Ejemplo 102: (S,Z)-4-(5-(2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-2-amina.

En un matraz de fondo redondo de 500 mL de 3 bocas dotado de un agitador magnético, una entrada de nitrógeno gaseoso y una sonda de temperatura, se introdujo 1-(5-bromo-2-fluorofenil)-1-etanona (9.8 g, 45.2 mmol, AAT Pharmaceuticals) y Me-THF (100 mL). La mezcla se enfrió hasta -20 °C y se le añadió lentamente cloruro de vinilmagnesio, solución 1.6 M en tetrahidrofurano (39.5 mL, 63.2 mmol, Sigma Aldrich), de modo que se controló la temperatura para que se mantuviera por debajo de -10 °C. A continuación, la reacción se calentó hasta 0 °C y se agitó durante 2 horas. La reacción se enfrió hasta 0 °C y se desactivó con 40 mL de una solución de NH4Cl al 5% p. La mezcla se agitó a temperatura ambiente y se separaron las dos fases. La fase orgánica se lavó con salmuera (300 mL) y se concentró para proporcionar 2-(5-bromo-2-fluorofenil)but-3-en-2-ol (12.0 g, rendimiento de ~ 100%) como un aceite.

A una mezcla de 2-(5-bromo-2-fluorofenil)but-3-en-2-ol (58.04 g, 237 mmol) y tiourea (36.02 g, 473 mmol) a temperatura ambiente se le añadió ácido acético (475 mL, 237 mmol) seguido de HCl acuoso 5 M (48 mL, 240 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 50 °C durante 3 días y se concentró. El residuo se diluyó con tolueno (200 mL) y se concentró al vacío para obtener el clorhidrato del carbamimidotioato de (£)-3-(5-bromo-2-fluorofenil)but-2-en-1-ilo (80.0 g, 236 mmol) como un sólido blanquecino que se utilizó como crudo.

A una solución del clorhidrato del carbamimidotioato de (E)-3-(5-bromo-2-fluorofenil)but-2-en-1-ilo (80.0 g, 236 mmol) en ácido trifluoroacético (470 mL, 236 mmol) se le añadió ácido metanosulfónico (61 mL, 940 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 60 °C durante 2.5 días y a continuación se concentró al vacío. El residuo se arrastró con EtOAc y a continuación se basificó mediante una adición gota a gota de NaOH acuoso 5 M hasta obtener un pH >10. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO4, se filtraron y se concentraron. La purificación del residuo mediante cromatografía en gel de sílice (de un 10 a un 50% de EtOAc (10% de MeOH [NH³2 M]) en hexano) proporcionó 4-(5-bromo-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-2-amina (102a, 47.6 g, rendimiento de un 67%) como un sólido de color marrón pálido. El material se sometió a SFC quiral para proporcionar (S)-4-(5-bromo-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-2-amina (primer pico eluido) como un aceite de color naranja pálido, que se convirtió en la sal clorhídrica de (S)-4-(5-bromo-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-2-amina (102b, 24.98 g) como un sólido blanquecino. m S (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 303/305. Condiciones de SFC: columna CHIRALPAK AS-H (5 pM, 21 x 250 mm, S/N = 5172); longitud de onda = 224 nmM; fase móvil = (30% de MeOH con un 0.2% de dietilamina, 70% de dióxido de carbono); tasa de flujo = 60 mL/min; presión = 172 Bar; T = 40 °C.

Preparación de (S)-WL(4-(5-bromo-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-2-il)benzamida (102c).

A una mezcla del clorhidrato de (S)-4-(5-bromo-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-2-amina (102b, 1.50 g, 4.42 mmol) en DMF (15 mL) en atmósfera de N²se le añadió trietilamina (1.54 mL, 11.04 mmol) y anhídrido benzoico (1.34 g, 5.92 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche, a continuación se diluyó con Na2CO3 acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. La solución orgánica se lavó con agua seguida de salmuera, se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 60% de EtOAc en heptano) para obtener (S)-A/-(4-(5-bromo-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-2-il)benzamida (102c, 1.66 g, rendimiento de un 92%) como un sólido blanco. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 407, 409.1H RMN (400 m Hz, Cloroformo-d) 612.04-12.59 (m, 1H), 8.23 (d, J = 7.24 Hz, 2H), 7.36-7.55 (m, 5H), 6.92-7.06 (m, 1H), 2.84-2.99 (m, 2H), 2.63-2.79 (m, 1H), 2.06-2.19 (m, 1H), 1.80 (s, 3H). 19F RMN (376 MHz, Cloroformo-d) 6 -113.63 (s).

Preparación del Ejemplo 102.

Una mezcla de (S)-W-(4-(5-bromo-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-2-il)benzamida (102c, 0.84 g, 2.06 mmol), bis(pinacolato)diboro (0.68 g, 2.68 mmol) y acetato potásico (0.61 g, 6.19 mmol) en 1,4-dioxano (15 mL) se purgó con argón y a continuación se añadió un complejo de [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) con diclorometano (0.084 g, 0.103 mmol). La mezcla se calentó a 100 °C durante 2.5 horas, se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró a través de celite y la masa húmeda retenida sobre el filtro se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró al vacío para obtener (S)-A/-(4-(2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-2-il)benzamida (102d), la cual se utilizó como crudo. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 455.

Una mezcla de 102d (0.300 g, 0.66 mmol), yoduro de vinilo (1, 0.187 g, 0.66 mmol), Pd(Amphos)Cl²(0.023 g, 0.033 mmol) y fosfato potásico tribásico (420 mg, 1.98 mmol) en dioxano (1.5 mL) y agua (0.25 mL) se purgó con argón y a continuación se calentó hasta 80 °C durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La solución orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 100% de EtOAc en heptano) para obtener (S,Z)-W-(4-(5-(2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-2-il)benzamida (171 mg, rendimiento de un 54%) como un sólido amarillo. MS (ESI de ión vo) m/z:

[M+1] = 484.

Una mezcla de (S,Z)-A/-(4-(5-(2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-2-il)benzamida (170 mg, 0.35 mmol), clorhidrato de O-metilhidroxilamina (0.29 g, 3.51 mmol) y piridina (0.278 g, 3.51 mmol) en EtOH (3 mL) se calentó hasta 70 °C durante 1 hora. La mezcla se concentró al vacío. El residuo se diluyó con Na²CO³acuosos saturado y se extrajo con EtOAc. La solución orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 100% de EtOAc/EtOH (3:1) en heptano) para proporcionar (S,Z)-4-(5-(2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-2-amina (Ejemplo 102, 78 mg, rendimiento de un 58%) como un sólido blanquecino. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 380.1H RMN (400 MHz, Cloroformoai) 68.54 (s, 1H), 7.72 (dd, J = 2.45, 8.51 Hz, 1H), 7.59-7.70 (m, 2H), 7.53-7.58 (m, 1H), 6.96-7.11 (m, 2H), 2.95 (ddd, J = 3.72, 6.26, 12.13 Hz, 1H), 2.70 (dt, J = 3.52, 11.64 Hz, 1H), 2.47 (ddd, J = 3.52, 6.06, 13.89 Hz, 1H), 1.89 (ddd, J = 3.52, 10.76, 14.08 Hz, 1H), 1.64 (s, 3H). El grupo NH2 no se vio claro en la RMN. 19F RMN (376 MHz, Cloroformo-d) 6 -111.21 (s, 1F), -124.00 (s a, 1F).

Ejemplo 103: (S,Z)-6-(2-(3-(2-amino-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo.

En un vial de 20 mL, se introdujo el Ejemplo 102 (58 mg, 0.15 mmol), cianuro de zinc (54 mg, 0.45 mmol), 2 (diciclohexilfosfino)-2',6'-dimetoxi-1, 1 '-bifenilo (19 mg, 0.046 mmol), Pd2(dba)3 (21 mg, 0.023 mmol) y DMA (3 mL). El vial se purgó con argón y se selló. La mezcla se calentó a 120 °C durante 3.5 horas, se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró a través de un lecho de celite y la masa húmeda retenida sobre el filtro se lavó con EtOAc. El filtrado se lavó con agua y salmuera, se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 100% de EtOAc/EtOH (3:1) en heptano) para obtener el compuesto del título (Ejemplo 103, 40.8 mg, rendimiento de un 72%) como un sólido amarillo. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 371.1H RMN (400 MHz, Cloroformo-d) 68.83 (s, 1H), 8.01 (dd, J = 2.05, 8.31 Hz, 1H), 7.69 (t, J = 7.04 Hz, 3H), 7.25 (d, J = 39.32 Hz, 1H), 7.04-7.12 (m, J = 8.71, 11.83 Hz, 1H), 2.97 (dt, J = 3.72, 6.06 Hz, 1H), 2.70 (dt, J = 3.52, 11.44 Hz, 1H), 2.45 (ddd, J = 3.62, 6.31, 13.94 Hz, 1H), 1.92 (ddd, J = 3.62, 10.71, 14.04 Hz, 1H), 1.64 (s, 3H). El grupo NH2 no se vio claro en la RMN. 19F RMN (376 MHz, Cloroformo-a) 6 -109.73 (d, J = 1.73 Hz, 1F), -125.55 (s a, 1F).

Ejemplo 104: (4S,6fí)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo y

Ejemplo 105: (4S,6S)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo.

Preparación de (4S)-4-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-((ferf-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (104b).

Una mezcla de (S)-4-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-((ferf-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-metil-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (104a, preparado de acuerdo con los métodos descritos en w O 2016022724) (3.58 g, 6.07 mmol) e hidruro de tributilestaño (Sigma-Aldrich) (5.72 mL, 21.25 mmol) en metanol (12 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 3 días y a continuación se concentró al vacío. El residuo se disolvió en DMF (10 mL) y se añadió carbonato potásico (0.42 g, 3.04 mmol) seguido de yodometano (0.38 mL, 6.07 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, a continuación se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (3 x). La solución orgánica se secó con Na²SO⁴y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 25% de EtOAc en heptano) para obtener 2 componentes eluidos: el 1.er componente eluido fue el 104a recuperado (1.48 g) como un aceite incoloro, MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 589/591; el 2.° componente eluido fue (4S)-4-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-((fertbutoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (104b, 1.17 g, rendimiento de un 33%, como una mezcla de dos diastereómeros) como un aceite incoloro, MS (ESI de ión vo) m/z:

[M+1] = 591/593.

Preparación de (4S)-2-((ferf-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-(2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (104c).

Una mezcla de (4S)-4-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-((ferf-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (104b, 1.17 g, 1.98 mmol), bis(pinacolato)diboro (0.66 g, 2.61 mmol) y acetato potásico (0.58 g, 5.93 mmol) en 1,4-dioxano (20 mL) se purgó con argón y a continuación se añadió un complejo de [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) con diclorometano (0.097 g, 0.119 mmol). La mezcla se calentó hasta 90 °C durante 1 hora, se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró a través de un lecho de celite y la masa húmeda retenida sobre el filtro se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró al vacío para obtener (4S)-2-((fert-butoxicarbonil)((2(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-(2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (104c), el cual se utilizó como crudo. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 639.

Preparación de (4S)-2-((ferf-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (104d).

Una mezcla del éster borónico 104c crudo (1.26 g, 1.98 mmol), yoduro de vinilo (1, 1.12 g, 3.96 mmol), bis(di-tert-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloropaladio (II) (0.14 g, 0.20 mmol) y fosfato potásico tribásico (1.32 g, 6.00 mmol) en 1,4-dioxano (12 mL) y agua (2 mL) se purgó con argón y a continuación se calentó hasta 80 °C durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La solución orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 70% de EtOAc en heptano) para proporcionar (4S)-2-((tertbutoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (104d, 1.11 g, rendimiento de un 84% en dos pasos) como un sólido beige. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 668.

Preparación de los Ejemplos 104 y 105.

Una mezcla de (4S)-2-((tert-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (104d, 0.572 g, 0.856 mmol) y ácido 4-metilbencenosulfónico hidratado (0.407 g, 2.141 mmol) en 1,4-dioxano (5 mL) se calentó hasta 90 °C durante 1 hora. La mezcla se concentró al vacío y el residuo se trató con unas gotas de ácido sulfúrico conc. (se formaron burbujas). La mezcla se neutralizó con Na²CO³acuso saturado y se extrajo con EtOAc. La solución orgánica se secó con Na²SO⁴y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 100% de EtOAc en DCM) para obtener una mezcla diastereomérica de 104 y 105 (153 mg, rendimiento de un 41%).

Una pequeña cantidad de la mezcla diastereomérica se sometió a HPLC de fase inversa para proporcionar los Ejemplos 104 y 105. La estereoquímica relativa se asignó arbitrariamente. (4S,6fi)-2-Amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (104): MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 438. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 68.54 (d, J = 2.35 Hz, 1H), 7.91 (dd, J = 1.96, 8.02 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 2.45, 8.51 Hz, 1H), 7.65 (ddd, J = 2.25, 4.60, 8.41 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 1.27, 8.51 Hz, 1H), 6.98-7.13 (m, 2H), 4.24-4.31 (m, 1H), 3.67 (s, 3H), 2.67 (dd, J = 4.11, 13.89 Hz, 1H), 1.87-2.01 (m, 1H), 1.60 (s, 3H). El grupo NH²no se vio claro. 19F RMN (376 MHz, Cloroformo-a) 6 -111.32 (s, 1F), -124.18 (s a, 1F). (4S,6S)-2-Amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (105): MS (e S i de ión vo) m/z: [M+1] = 438. 1H RMN (400 MHz, Cloroformo-a) 68.51-8.57 (m, 1H), 7.73 (dd, J = 2.45, 8.51 Hz, 1H), 7.67 (ddd, J = 2.35, 4.65, 8.46 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 1.37, 8.41 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 2.15, 8.02 Hz, 1H), 6.93-7.12 (m, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.60 (dd, J = 3.52, 12.72 Hz, 1H), 3.07 (dd, J = 3.62, 13.99 Hz, 1H), 1.73-1.83 (m, 1H), 1.71 (d, J = 0.78 Hz, 3H). El grupo NH²no se vio claro. 19F RMN (376 MHz, CLOROFORMO-d) 6 -110.96 (s, 1F), -123.74 (s a, 1F).

Ejemplo 106: (4S,6S)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1.3- tiazin-6-carboxilato de metilo y

Ejemplo 107: (4S,6fí)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1.3- tiazin-6-carboxilato de metilo.

A una solución de (4S)-2-((tert-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (104d, 0.55 g, 0.82 mmol) en THF (10 mL) a -78 °C se le añadió gota a gota diisopropilamiduro de litio (1.64 mL de una solución 2 M en THF/heptano/etilbenceno, 3.29 mmol). La mezcla se agitó durante 1 hora, a continuación se añadió yoduro de metilo (0.31 mL, 4.94 mmol) y la mezcla se calentó gradualmente hasta temperatura ambiente. La reacción se desactivó con una solución acuosa saturada de NH⁴Cl y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 50% de EtOAc en heptano) para obtener (4S)-2-((tertbutoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (106a, 0.23 g, rendimiento de un 41%) como un sólido blanco. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 682.

Una mezcla de 106a (0.23 g, 0.33 mmol) y ácido sulfúrico (0.09 mL, 1.67 mmol) se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, a continuación se enfrió hasta 0 oC y se neutralizó con Na2CO3 acuoso saturado. La mezcla se extrajo con EtOAc. La solución orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante HPLC de fase inversa para proporcionar el Ejemplo 106 (48 mg, rendimiento de un 32%) y 107 (33 mg, rendimiento de un 22%). La estereoquímica relativa se confirmó mediante estudios exhaustivos de RMN. (4S,6S)-2-Amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (106): MS ^{( E S i}de ión vo) m/z:

[M+1] =452. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ó 8.54 (d, J = 2.35 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 2.45, 8.51 Hz, 1H), 7.62 (ddd, J = 2.35, 4.55, 8.36 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 1.27, 8.51 Hz, 1H), 7.45 (dd, J = 2.15, 8.02 Hz, 1H), 6.93-7.07 (m, 2H), 4.63 (s a, 2H), 3.32 (d, J = 14.48 Hz, 1H), 3.01 (s, 3H), 1.72 (d, J = 14.48 Hz, 1H), 1.67 (d, J = 0.78 Hz, 3H), 1.58 (s, 3H). 19F RMN (376 MHz, Cloroformo-a) ó -109.53 (d, J = 2.60 Hz, 1F), -124.20 (s a, 1F). (4S,6fí)-2-Amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (107): ^{m S}(ESI de ión vo) m/z:

[M+1] =452. 1H RMN (400 MHz, Cloroformo-a) ó 8.54 (d, J = 2.35 Hz, 1H), 7.69-7.77 (m, 2H), 7.63-7.68 (m, 1H), 7.56 (dd, J = 1.27, 8.51 Hz, 1H), 6.96-7.10 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 2.63 (d, J = 14.48 Hz, 1H), 1.70 (s a, 1H), 1.59 (s, 3H), 1.36 (s, 3H). El grupo NH²no se vio claro. 19F RMN (376 MHz, Cloroformo-a) ó -111.03 (s a, 1F), -123.91 (s a, 1F).

Ejemplo 108: (4S,6fí)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4HL 1.3- tiazin-6-carboxilato de metilo y

Ejemplo 109: (4S,6S)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1.3- tiazin-6-carboxilato de metilo.

Preparación de (4S)-4-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-((ferf-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (108a).

A una mezcla de (4S)-4-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-((tert-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (104b, 1.54 g, 2.60 mmol) en THF (20 mL) a -78 °C se le añadió diisopropilamiduro de litio (solución 2.0 M en THF/heptano/etilbenceno, 1.95 mL, 3.90 mmol). La mezcla amarilla se agitó durante 30 minutos, a continuación se añadió yoduro de metilo (0.81 mL, 13.02 mmol) y la mezcla se calentó gradualmente hasta 0 °C. Después de agitar a 0 °C durante 1 hora, la reacción se desactivó con una solución acuosa saturada de NH4Cl y se extrajo con EtOAc. La solución orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 25% de EtOAc en heptano) para proporcionar (4S)-metil 4-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-((tert-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (108a, 1.48 g, rendimiento de un 94%) como un aceite amarillo. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 605/607.

Preparación de (4S)-2-((ferf-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-(2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (108b).

Una mezcla de (4S)-4-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-((tert-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (108a, 1.48 g, 2.44 mmol), bis(pinacolato)diboro (0.81 g, 3.17 mmol) y acetato potásico (0.72 g, 7.32 mmol) en dioxano (25 mL) se purgó con argón y a continuación se añadió un complejo de [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) con diclorometano (0.12 g, 0.15 mmol). La mezcla se calentó hasta 90 °C durante 2.5 horas, se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró a través de celite. La masa húmeda retenida sobre el filtro se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar (4S)-2-((tert-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-(2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (108b), el cual se utilizó como crudo. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 653.

Preparación de los Ejemplos 108 y 109.

Una mezcla del éster borónico 108b (0.500 g, 0.766 mmol), yoduro de vinilo 2 (0.315 g, 1.149 mmol), bis(di-tert-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloropaladio (II) (0.054 g, 0.077 mmol) y fosfato potásico tribásico (505 g, 2.298 mmol) en 1,4-dioxano (6 mL) y agua (1 mL) se purgó con argón y a continuación se calentó hasta 80 °C durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La solución orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 50% de EtOAc en heptano) para obtener (4S)-2-((tertbutoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (108c, 0.397 g, rendimiento de un 77%) como un sólido beige. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 673.

Una mezcla de (4S)-2-((tert-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (108c, 52.5 mg, 0.078 mmol) y ácido ptoluenosulfónico monohidratado (39 mg, 0.207 mmol) en 1,4-dioxano (0.5 mL) se calentó hasta 80 °C durante 2 horas, a continuación se enfrió hasta temperatura ambiente y se desactivó con Na2CO3 acuso saturado. La mezcla se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se lavó con agua seguida de salmuera, se secó con Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía flash en gel de sílice (de un 0 a un 100% de EtOAc:EtOH (3:1) en heptano) para proporcionar 2 compuestos: el Ejemplo 108 (12 mg, rendimiento de un 35%) como un sólido blanco y el Ejemplo 109 (20 mg, rendimiento de un 58%) como un sólido blanco. La estereoquímica relativa se asignó mediante una comparación de los datos de RMN con los de los Ejemplos 106 y 107. (4S,6fí)-2-Amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (108): ^{m S}(ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 443. 1H RMN (400 MHz, Cloroformo-a) 68.82 (s, 1H), 8.01 (dd, J = 2.05, 8.31 Hz, 1H), 7.60-7.74 (m, 2H), 7.51 (dd, J = 2.15, 8.02 Hz, 1H), 7.14-7.25 (m, 1H), 7.00-7.08 (m, 1H), 4.28-4.88 (m, 2H), 3.31 (d, J = 14.28 Hz, 1H), 3.01 (s, 3H), 1.72 (d, J = 14.48 Hz, 1H), 1.66 (d, J = 0.78 Hz, 3H), 1.58 (s, 3H). 19F RMN (376 MHz, Cloroformo-a) 6 -108.03 (s, 1F), -125.68 (s, 1F). (4S,6S)-2-Amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (109): ^{M s}(ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 443. 1H RMN (400 MHz, Cloroformo-a) 68.82 (d, J = 0.98 Hz, 1H), 8.01 (dd, J = 2.05, 8.31 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 2.05, 7.92 Hz, 1H), 7.63-7.73 (m, 2H), 7.15-7.28 (m, 1H), 7.07 (dd, J = 8.51, 11.84 Hz, 1H), 4.56 (s a, 2H), 3.79 (s, 3H), 2.66 (d, J = 14.28 Hz, 1H), 2.28 (d, J = 14.48 Hz, 1H), 1.57 (s, 3H), 1.37 (s, 3H). 19F RMN (376 MHz, Cloroformo-a) 6 -109.48 (d, J = 1.73 Hz, 1F), -125.51 (d, J = 1.73 Hz, 1F).

Ejemplo 110: 6-((Z)-2-(3-((4S,6S)-2-amino-4,6-dimetil-6-(morfolin-4-carbonil)-5,6-dihidro-4HL1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo.

Una mezcla de 108c (0.300 g, 0.446 mmol) e hidróxido de litio hidratado (0.037 g, 0.892 mmol) en THF (3 mL) y agua (3 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se neutralizó con HCl 1 N (3 mL) y a continuación se concentró al vacío para obtener el ácido 110a, el cual se utilizó como crudo.

Se añadió hexafluorofosfato de (1-ciano-2-etoxi-2-oxoetilidenaminooxi)dimetilaminomorfolinocarbenio (COMU) (Acros Organics) (0.520 g, 1.214 mmol) a una solución de 110a crudo y morfolina (0.317 mL, 3.64 mmol) en DMF (3 mL) a temperatura ambiente. Después de 2 horas, la mezcla de reacción se diluyó con Na2CO3 acuoso saturado y EtOAc. La fase orgánica se lavó con agua seguida de salmuera, se secó con Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío. El aceite amarillo resultante se arrastró con 1,4-dioxano (3 mL) y se trató con ácido p-toluenosulfónico monohidratado (0.289 g, 1.518 mmol). La mezcla se calentó hasta 80 °C durante 2 horas y se diluyó con Na2CO3 acuoso saturado y EtOAc. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice: 0-100% de EtOAc en heptano. El producto se obtuvo como un semisólido blanquecino. El producto se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa de fase inversa (columna Gemini (5 micras, C18, 150x30 mm) eluyendo a 45 mL/min con un gradiente lineal de un 10% (v/v) a un 100% de MeCN (0.1% v/v de TFA) en agua (0.1% de TFA) durante 20 minutos) para proporcionar 6-((Z)-2-(3-((4S,6S)-2-amino-4,6-dimetil-6-(4-morfolinilcarbonil)-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluoroetenil)-3-piridinocarbonitrilo (110, 11 mg, rendimiento de un 4%) como un sólido blanco. La estructura se confirmó mediante análisis tanto de RMN 2D como de rayos X. MS (ESI de ión vo) m/z:

[M+1] = 498. 1H RMN (400 MHz, Cloroformo-d) 58.82 (s, 1H), 8.01 (dd, J = 2.05, 8.31 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 2.05, 7.92 Hz, 1H), 7.62-7.70 (m, 2H), 7.15-7.26 (m, 1H), 7.06 (dd, J = 8.51, 11.84 Hz, 1H), 3.59-3.74 (m, 8H), 2.73 (d, J = 14.87 Hz, 1H), 2.42 (d, J = 14.87 Hz, 1H), 1.66 (s, 3H), 1.26 (s, 3H). El grupo NH²no se vio claro. 19F RMN (376 MHz, Cloroformo-d) 5 -108.90 (s, 1F), -125.45 (s, 1F). La estereoquímica relativa del Ejemplo 110 se confirmó mediante la estructura cristalina por rayos X y estudios de RMN.

Ejemplo 111: 6-((Z)-2-(3-((4S,6fi)-2-amino-4,6-dimetil-6-(morfolin-4-carbonil)-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo.

Una mezcla de (4S,6fi)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (108, 38 mg, 0.086 mmol) e hidróxido de litio hidratado (12 mg, 0.274 mmol) en THF (0.3 mL), acetonitrilo (0.3 mL) y agua (0.2 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, a continuación se trató con HCl (0.3 mL de una solución 1 M) y se concentró al vacío. Se añadió éter y la mezcla se concentró para obtener el ácido (4S,6fí)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxílico (37 mg, 100%) como un sólido amarillo, el cual se utilizó como crudo. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 429.

Una mezcla del ácido (4S,6fi)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxílico (37 mg, 0.086 mmol), una solución de anhídrido propilfosfónico (Sigma-Aldrich) (al 50% p en acetato de etilo, 0.22 mL, 0.345 mmol) y morfolina (0.10 mL, 1.123 mmol) en DMA (2 mL) se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La mezcla se filtró y la masa húmeda retenida sobre el filtro se lavó con MeOH. El filtrado se concentró y el residuo se purificó mediante HPLC de fase inversa (0-80% de agua en MeCN con un 0.1% de TFA). Las fracciones se neutralizaron con NaOH 1 N y se extrajeron con DCM. La solución orgánica se concentró para obtener 6-((Z)-2-(3-((4S,6fi)-2-amino-4,6-dimetil-6-(morfolin-4-carbonil)-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo (Ejemplo 111, 10 mg, rendimiento de un 23%) como un sólido blanco. MS (ESI de ión vo) m/z:

[M+1] = 498. 1H RMN (400 MHz, Cloroformo-a) 68.82 (s, 1H), 8.01 (dd, J = 2.15, 8.22 Hz, 1H), 7.58-7.73 (m, 3H), 7.15 7.27 (m, 1H), 7.06 (dd, J = 8.22, 11.93 Hz, 1H), 4.57 (s a, 2H), 3.44-3.58 (m, 4H), 3.31 (s a, 4H), 3.02 (d, J = 14.48 Hz, 1H), 1.99 (d, J = 14.48 Hz, 1H), 1.70 (s, 6H). 19F RMN (376 MHz, Cloroformo-a) 6 -108.05 (s a, 1F), -125.98 (s, 1F). La estereoquímica relativa del Ejemplo 111 se estableció mediante estudios de RMN y en comparación con los datos de RMN del Ejemplo 110.

Ejemplo 112: (4S,6fí)-2-amino-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(2-propin-1-iloxi)-2-pirazinil)etenil)fenil)-W,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida y

Ejemplo 113: (4S,6S)-2-amino-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(2-propin-1-iloxi)-2-pirazinil)etenil)fenil)-W,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida.

Preparación de (4S)-2-((ferf-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-(5-((Z)-2-(5-cloropirazin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (112a).

Una mezcla del éster borónico 108b (3.11 g, 4.76 mmol), yoduro de vinilo 3 (2.51 g, 8.81 mmol), bis(di-fert-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloropaladio (II) (0.30 g, 0.43 mmol) y K³PO⁴(3.14 g, 14.28 mmol) en 1,4-dioxano (24 mL) y agua (4 mL) se purgó con argón y a continuación se calentó hasta 80 °C durante 1 hora. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La solución orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 50% de EtOAc en heptano) para proporcionar (4S)-2-((fert-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-(5-((Z)-2-(5-cloropirazin-2-il)-2-fluorovinil}-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo (112a, 3.12 g, rendimiento de un 96%) como un sólido amarillo. MS (ESI de ión vo) m/z:

[M+1] = 683.

Preparación del ácido (4S)-2-((tert-butoxicarbonil)((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)amino)-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(prop-2-in-1 -iloxi)pirazin-2-il)vinil)fenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxílico (112b).

Una mezcla de 112a (1.02 g, 1.49 mmol), alcohol propargíllco (0.924 mL, 15.630 mmol) y carbonato de ceslo (1.455 g, 4.470 mmol) en THF (8 mL) se calentó a 70 °C durante toda la noche, a continuación se enfrió hasta temperatura ambiente y se neutralizó con HCl (10 mL de una solución 1 M). La mezcla se extrajo con EtOAc. La solución orgánica se secó con Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 100% de (EtOAc/EtOH = 3/1) en DCM) para obtener el ácido 112b (0.30 g, rendimiento de un 29%) como un sólido amarillo. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 689. La relación de los dos diastereómeros fue de aproximadamente 1:6, a juzgar por la integración de LC.

Preparación de los Ejemplos 112 y 113.

Una mezcla del ácido 112b (50.4 mg, 0.073 mmol), una solución del anhídrido cíclico del ácido propanofosfónico (al 50% p en acetato de etilo, 0.10 mL, 0.146 mmol) y metanamina (solución 2.0 M en THF, 0.18 mL, 0.366 mmol) en d Cm (0.5 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción se desactivó con NaHCO3 acuoso saturado y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 100% de EtOAc en heptano) para proporcionar la amida 112c (36.8 mg, 72%) como un sólido blanco. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 702.

Una mezcla de la amida 112c (32.8 mg, 0.047 mmol) y el ácido p-toluenosulfónico monohidratado (17 mg, 0.089 mmol) en 1,4-dioxano (1 mL) se calentó a 80 °C durante 1 hora. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla se neutralizó con Na2CO3 acuso saturado y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (de un 0 a un 100% de EtOAc/EtOH (3:1) en heptano) para proporcionar 2 compuestos: el 1.er compuesto eluido fue el Ejemplo 112 (2 mg, rendimiento de un 9%) como un sólido blanco; el 2.° compuesto eluido fue el Ejemplo 113 (12 mg, rendimiento de un 55%) como un sólido blanco. La estereoquímica se asignó basándose en estudios de RMN. (4S,6ñ)-2-Amino-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(2-propin-1-iloxi)-2-pirazinil)etenil)fenil)-A/,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida (112): MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 472. 1H RMN (400 MHz, Cloroformo-d) 58.38 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.55 (ddd, J = 2.25, 4.45, 8.36 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 2.15, 7.82 Hz, 1H), 7.02 (dd, J = 8.41, 11.74 Hz, 1H), 6.72-6.86 (m, 1H), 6.51 (d, J = 4.69 Hz, 1H), 5.00-5.06 (m, 2H), 5.00 5.06 (m, 2H), 3.52 (d, J = 14.28 Hz, 1H), 2.81 -2.87 (m, 1H), 2.49-2.56 (m, 1H), 2.08 (d, J = 4.70 Hz, 3H), 1.66 (s, 3H), 1.55 (s, 3H). 19F RMN (376 MHz, Cloroformo-d) 5 -108.28 (s a, 1F), -126.46 (d, J = 40.75 Hz, 1 F). (4S,6S)-2-Amino-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(2-propin-1-iloxi)-2-pirazinil)etenil)fenií)-N,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida (113): MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 472. 1H RMN (400 MHz, Cloroformo-d) 58.38 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.76 (dd, J = 2.15, 7.82 Hz, 1H), 7.61 (ddd, J = 2.25, 4.60, 8.41 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 8.51,11.64 Hz, 2H), 6.74-6.93 (m, 1H), 5.03 (d, J = 2.35 Hz, 2H), 3.09 (d, J = 14.09 Hz, 1H), 2.85 (d, J = 4.89 Hz, 3H), 2.53 (t, J = 2.35 Hz, 1H), 1.69 (d, J = 14.09 Hz, 1H), 1.50 (s, 3H), 1.49 (s a, 3H). El grupo NH²no se vio claro. 19F RMN (376 MHz, Cloroformo-d) 5 -110.85 (s a, 1F), -125.90 (d, J = 39.88 Hz, 1F).

Ejemplo 114: ((4S,6S)-2-amino-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(prop-2-in-1-iloxi)pirazin-2-il)vinil)fenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-il)(morfolino)metanona.

Este compuesto (10 mg, rendimiento global de un 26%) se preparó como un sólido blanco de manera similar a la descrita para el Ejemplo 113, partiendo en este caso de morfolina (13 mg, 0.146 mmol) y el ácido 112b (50 mg, 0.073 mmol). MS (ESI de Ión vo) m/z: [M+1 ] = 528. 1H RMN (400 MHz, Cloroformo-d) 58.37 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.58-7.69 (m, 2H), 7.04 (dd, J = 8.31, 11.84 Hz, 1H), 6.75-6.92 (m, 1H), 5.03 (d, J = 2.35 Hz, 2H), 3.66 (dd, J = 4.21, 17.31 Hz, 8H), 2.77 (d, J = 14.67 Hz, 1H), 2.53 (t, J = 2.35 Hz, 1H), 2.37 (d, J = 14.87 Hz, 1H), 1.66 (s, 3H), 1.25 (s, 3H). El grupo NH²no se vio claro.

19F RMN (376 MHz, Cloroformo-d) 5 -110.82 (s a, 1F), -125.57 (d, J = 39.88 Hz, 1F). La estereoquímica relativa se confirmó mediante RMN 2D en un método análogo al del Ejemplo 110.

Ejemplo 115: (4S,6S)-2-amino-W-(2,2-difluoroetil)-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(prop-2-in-1-iloxi)pirazin-2-il)vinil)fenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida.

Este compuesto (13 mg, rendimiento global de un 34%) se preparó como un sólido blanco de manera similar a la descrita para el Ejemplo 113, partiendo en este caso de 2,2-difluoroetilamina (Matrix Scientific) (30 mg, 0.366 mmol) y el ácido 112b (50 mg, 0.073 mmol). MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 522. 1H Rm N (400 MHz, Cloroformo-a) ó 8.38 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.77 (dd, J = 1.86, 7.92 Hz, 1H), 7.57-7.65 (m, 1H), 7.26-7.30 (m, 1H), 7.05 (dd, J = 8.41, 11.74 Hz, 1H), 6.76-6.91 (m, 1 h ), 5.69-6.07 (m, 1H), 4.94-5.10 (m, 2H), 5.03 (d, J = 2.35 Hz, 2H), 3.55-3.76 (m, 2H), 3.08 (d, J = 14.09 Hz, 1H), 2.53 (t, J = 2.35 Hz, 1H), 1.71 (d, J = 14.09 Hz, 1H), 1.51 (s, 3H), 1.49 (s, 3H). 19F RMN (376 MHz, Cloroformo-a) ó -111.09 (s a, 1F), -123.18 - -122.72 (m, 1F), -125.83 (d, J = 39.88 Hz, 1F). La estereoquímica relativa se confirmó mediante RMN 2D en un método análogo al del Ejemplo 110.

Ejemplo 116: (4S,6S)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-W,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida.

Este compuesto se preparó siguiendo un protocolo de 2 pasos similar al descrito para el Ejemplo 111, partiendo en este caso del éster 109. MS (ESI de ión vo) m/z: [M+1] = 442. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 9.07 (s, 1H), 8.44 (dd, J = 2.05, 8.31 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 6.85 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 8.22 Hz, 2H), 7.69 (s a, 1H), 7.15-7.35 (m, 2H), 6.05 (s a, 2H), 3.28 (s, 1H), 2.62 (d, J = 4.50 Hz, 3H), 2.54 (d, J = 4.69 Hz, 1H), 1.37 (s, 3H), 1.24 (s, 3H). 19F RMN (376 MHz, DMSO-da) ó -109.64 (s a, 1F), -124.59 (d, J = 39.88 Hz, 1F).

Evaluación biológica

En esta sección se proporciona la evaluación biológica de los ejemplos específicos proporcionados en la presente. En particular, la Tabla 2 contiene los datos de actividad biológica. Los datos presentados en la Tabla 2 proporcionan los valores de CI⁵⁰(pM) para los ejemplos específicos obtenidos en un ensayo enzimático de BACE1, ensayo celular de BACE1, ensayo enzimático de BACE2 y ensayo de CatD.

Tabla 2

Los resultados presentados en la Tabla 2 se han generado con los ensayos in vitro que se describen a continuación. Estos ensayos pueden utilizarse para analizar cualquiera de los compuestos descritos en la presente con el fin de evaluar y caracterizar la capacidad de un compuesto para modular la actividad de BACE y para regular la escisión de la proteína precursora de Ap, con lo que se reduce o inhibe de este modo la producción de proteína Ap.

Ensayos FRET (transferencia de energía por resonancia de fluorescencia) in vitro enzimáticos de BACE1 y BACE2

Los ADNc para BACE1 y 2 recombinantes humanas con etiquetas de 6-His C-terminales se clonaron en vectores de expresión de proteínas transitorios, que posteriormente se transfectaron en líneas celulares de mamífero. Estas proteínas recombinantes se purificaron adicionalmente utilizando cromatografía de afinidad Ni-NTA (Qiagen). El tampón de ensayo utilizado en estos cribados fue acetato 0.05 M, pH 4.5, 8% de DMSO final, genapol 100 pM (que es un detergente no iónico, por debajo de su concentración micelar crítica). Se le añadió la enzima p-secretasa (0.02 nM para BACE1 y 0.64 nM para BACE2), que se preincubó durante una hora con el compuesto de ensayo, normalmente en aproximadamente 1 uL de DMSO de acuerdo con una dilución en serie. El ensayo se inició en la práctica mediante la adición de sustrato de FRET (50 nM) y la combinación se incubó durante una hora. El ensayo FRET se terminó mediante la adición de tampón tris, que elevó el pH hasta un valor neutro, y se determinó la fluorescencia. El sustrato de FRET era un péptido con fluoróforo y desactivador, que se pueden adquirir de proveedores comerciales, en lados opuestos del sitio de escisión de BACE. El sustrato específico de FRET utilizado en este ensayo fue fabricado por Amgen internamente. Los sustratos de FRET que se pueden adquirir de proveedores comerciales, por ejemplo, el sustrato de FRET que se ofrece con el kit de ensayo FRET de BACE1 comercializado por ThermoFisher Scientific (número de catálogo P2985), se pueden utilizar en este ensayo con las modificaciones adecuadas, que se encuentran dentro de las competencias de un experto en la técnica. La escisión proteolítica del sustrato de FRET desencadenó la desactivación de la fluorescencia (excitación a 488 nm y emisión a 590 nm).

En la Tabla 2 se proporcionan los datos enzimáticos de FRET para BACE in vitro de cada uno de los Ejemplos.

Ensayo basado en células de BACE1 in vltro

El ensayo basado en células mide la inhibición o reducción de Ap40 en medio acondicionado de células tratadas con compuesto de ensayo que expresan la proteína precursora de amiloide. Se sembraron en placas células que expresaban de manera estable la proteína precursora amiloidea (APP) con una densidad de 45K células/pocillo en placas de 384 pocillos (Corning/BioCoat 354663). A continuación, los compuestos de ensayo se añadieron a las células con concentraciones de respuesta a la dosis de 22 puntos, siendo la concentración de partida 62.5 |jM. Los compuestos se diluyeron a partir de soluciones madre en DMSO y la concentración final de DMSO de los compuestos de ensayo en las células fue de un 0.625%. Las células se cultivaron durante toda la noche a 37 °C y con un 5% de CO²en DMEM complementado con un 10% de FBS. Después de 24 h de incubación con los compuestos de ensayo, se recolectó el medio acondicionado y se determinaron los niveles de Ap40 utilizando HTRF (fluorescencia homogénea resuelta en el tiempo). La CI⁵⁰del compuesto se calculó a partir del porcentaje de control o del porcentaje de inhibición de Ap40 en función de la concentración del compuesto de ensayo.

La HTRF para detectar Ap40 se realizó en placas de 384 pocillos (Costar 3658). El par de anticuerpos que se utilizaron para detectar Ap40 en los sobrenadantes celulares fueron el anticuerpo ConfAb40 (interno de Amgen) y 6E10 biotinilado (BIOLEGEND). Como alternativa a ConfAb40, en este ensayo se puede utilizar un anticuerpo disponible en el mercado, el anticuerpo anti-beta amiloide 1-40 [BDI350] de Abcam, Cambridge, MA 02139-1517 (Código del producto: ab20068). Las concentraciones fueron 0.35 jg/mL de anticuerpo ConfAb40 y 1.33 jg/mL de anticuerpo 6E10-biotinilado, así como 4.5 jg/mL de conjugado de estreptavidina y aloficocianina (ThermoFisher Scientific) en tampón de HTRF (Hepes 1 M pH 7.5, NaCl 1 M, 1% de BSA, 0.5% de Tween 20).

El medio acondicionado se incubó con los anticuerpos anteriores y conjugado de estreptavidina y aloficocianina durante 30-60 minutos a 23°C. La lectura final se realizó en Envision de PerkinElmer.

En la Tabla 2 se proporcionan los datos basados en células de BACE in vitro para cada uno de los Ejemplos.

Ensayo enzimático FRET de catepsina D (CatD) in vltro

Se expresó CatD recombinante en células CHO. El tampón de ensayo para CatD fue citrato 0.05 M de pH 3.5, 10% de DMSO final, CHAPS 5 mM. A este se le añadió la enzima CatD (9 nM) preincubada durante una hora con inhibidores, normalmente en aproximadamente 1 uL de DMSO de acuerdo con una dilución en serie. Los ensayos se iniciaron en la práctica mediante la adición de diferentes sustratos de FRET (20 nM para CatD) y la combinación se incubó durante una hora. El ensayo de FRET se terminó mediante la adición de tampón tris, que eleva el pH hasta un valor neutro, y se determinó la fluorescencia. El sustrato de FRET era un péptido con fluoróforo y desactivador, que se pueden adquirir de proveedores comerciales, en lados opuestos del sitio de escisión de CatD. La secuencia peptídica del sustrato de CatD se basó en la secuencia n° 1 de la Tabla 1 de Gulnik et al., FEBS Lett. 413(2):379-384 (1997). La escisión proteolítica del sustrato de FRET desencadenó la desactivación de la fluorescencia (excitación de CatD a 500 nm y emisión a 580 nm).

Como alternativa, también se puede realizar un ensayo de CatD de acuerdo con el procedimiento descrito en Yasuda et al., J. Biochem. 125(6): 1137-1143 (1999). Además, en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional n.° WO2011069934 se describen ensayos de CatD y Catepsina E.

En la tabla 2 se proporcionan los datos del ensayo de FRET de CatD in vitro para cada uno de los Ejemplos, realizados mediante el primer procedimiento descrito anteriormente. Como muestran los datos de CatD de alta concentración micromolar (muy poco activos o inactivos frente a CatD), los compuestos descritos en la presente poseen la propiedad inesperada de tener una capacidad escasa o nula para inhibir la actividad de CatD. Por lo tanto, con este sorprendente perfil de selectividad, se considera que los compuestos proporcionados en la presente minimizan, reducen o eliminan completamente cualquier riesgo de atrofia de la retina y desarrollo anómalo del ojo y del epitelio pigmentado de la retina relacionado con la función y actividad normal de CatD.

Inhibición de B-secretasa in vivo

Se pueden utilizar varios modelos animales, entre los que se incluyen ratón, rata, perro y mono, para investigar la inhibición de la actividad B-secretasa in vivo después de la administración de un compuesto de ensayo. Este procedimiento se puede utilizar para demostrar que los compuestos proporcionados en la presente reducen la formación y/o deposición de péptido Ap en el líquido cefalorraquídeo (LCR) así como en el cerebro. Los animales que se han de utilizar en este experimento pueden ser de origen natural, transgénicos o animales con supresión génica de ciertos genes. Por ejemplo, el modelo de ratón Tg2576, preparado y llevado a cabo como se describe en Hsiao et al., Science 274:99-102 (1996), y otros animales no transgénicos o con supresión génica de ciertos genes son útiles para analizar la inhibición in vivo de la producción de péptido Ap en presencia de compuestos de ensayo.

En general, a ratones Tg2576 de 2 a 18 meses de edad, a ratones con supresión génica de ciertos genes o a animales no transgénicos se les administran compuestos de ensayo formulados en vehículos, tales como ciclodextrina, tampones fosfato, hidroxipropilmetilcelulosa u otros vehículos adecuados. De una a veinticuatro horas después de la administración del compuesto, los animales se sacrifican y los cerebros, así como el líquido cefalorraquídeo (LCR) y el plasma se retiran para el análisis de los niveles de Ap y las concentraciones del compuesto de ensayo (Dovey et al., J. Neurochem., 76(1 ):173-181 (2001)). A partir del momento 0, a los animales se les administra por sonda oral u otros medios de suministro, tales como inyección intravenosa, un compuesto de ensayo inhibidor de hasta 100 mg/kg en una fórmula convencional estándar, tal como hidroxipropilmetilcelulosa al 2%, Tween80 al 1%. Un grupo distinto de animales recibe hidroxipropilmetilcelulosa al 2%, Tween80 al 1% únicamente, que no contiene compuesto de ensayo, y sirve como grupo de control de vehículo. Al final del periodo de ensayo, los animales se sacrifican y se recogen tejidos cerebrales, plasma o líquido cefalorraquídeo. Los cerebros se homogeneizan o bien en 10 volúmenes (p/v) de dietilamina (DEA) al 0.2% en NaCl 50 mM (Best et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 313(2):902-908 (2005)) o en 10 volúmenes de TritonX-100 al 0.5% en solución salina tamponada con Tris (pH de aproximadamente 7.6). Los homogeneizados se centrifugan a 355000 g, 4 °C durante 30 minutos. A continuación, se analiza en los sobrenadantes de cerebro o LCR la presencia de Ap mediante ensayos específicos ELISA de tipo sándwich basados en la tecnología de ECL (electroquimioluminiscencia). Por ejemplo, el Ap40 de rata se mide usando 4G8 biotinilado (Signet) como anticuerpo de captura y Fab40 (un anticuerpo interno específico para el extremo C-terminal de Ap40) como anticuerpo de detección. Por ejemplo, 4 horas después de la administración de una dosis oral de 30 mg/kg del compuesto de ensayo en hidroxipropilmetilcelulosa al 2%, Tween80 al 1% (pH 2.2) a ratas Sprague Dawley macho de 200 g, se miden los niveles de péptido Ap con respecto a la reducción en X% e Y% en líquido cefalorraquídeo y cerebro, respectivamente, en comparación con los niveles medidos en los ratones tratados con vehículo o de control. Como alternativa, en este ensayo se puede utilizar el anticuerpo comercializado con el Kit de péptido V-PLEX abeta40 (4G8), que se puede adquirir del proveedor Meso Scale Diagnostics (MSD), Rockville, Mariland 20850-3173 (N.° de catálogo K150SJE-1).

Este procedimiento se puede utilizar para demostrar que los compuestos proporcionados en la presente reducen la formación y/o deposición de péptido Ap en el líquido cefalorraquídeo (LCR) así como en el cerebro de un ratón o rata con concentraciones de dosificación de 3 mpk, 10 mpk o 30 mpk (mpk = mg de compuesto por kg de peso del animal) después de 4 h.

MÉTODOS DE USO

De acuerdo con la hipótesis de cascada amiloide, la deposición cerebral de péptido beta amiloide (Ap) es crítica para la patogénesis de la enfermedad de Alzheimer (EA). La generación del péptido Ap se inicia cuando la p-secretasa (BACE1) escinde la proteína precursora de amiloide. De Meyer et al. reafirman el supuesto papel que desempeña la acumulación de péptido Ap en el líquido cefalorraquídeo (LCR) de un sujeto en la progresión de los síntomas, que se manifiestan inicialmente como un deterioro cognitivo leve que en última instancia conduce a la EA. Arch Neurol. 67(8):949-956 (2010). Los péptidos Ap generados a partir de la proteína precursora de amiloide (APP) por escisión proteolítica, tal como por enzimas aspartil proteasas, entre las que se incluyen la p-secretasa (BACE) y la Y-secretasa, probablemente juegan un papel causante en la patogénesis de la EA (Tanzi et al., Cell 120(4):545-555 (2005); Walsh et al., Neuron 44(1):181 -193 (2004)). Aunque no están claros los mecanismos exactos de toxicidad del Ap, las formas oligoméricas de Ap pueden contribuir al deterioro cognitivo mediante la alteración de la función y la estructura sináptica (Palop et al., Nat. Neurosci.

13(7):812-818 (2010); Selkoe, Behav. Brain Res. 192(1):106-113 (2008); Shankar et al., Nat. Med. 14(8):837-842 (2008)). Los modelos de ratón transgénico que sobreexpresan APP mutada y producen altos niveles de Ap muestran deposición de placas amiloides, déficits sinápticos, deterioro del aprendizaje y la memoria y otras anomalías conductuales (Games et al., Nature 373:523-527 (1995); Gótz et al., Mol. Psychiatry 9(7):664-683 (2004); Hsia et al., Proc. Natl. Academy of Science USA (96): 3228-3233, 1999; Hsiao et al., Science (274): 99-102, 1996, que cita a Harris et al, Neuron (68): 428-441,2010).

Ya hace muchos años que BACE1 ha sido una diana principal para el diseño de fármacos con el fin de prevenir o tratar la EA. Vassar et al., Lancet Neurol. 13:319-329 (2014). Varias empresas farmacéuticas están investigando actualmente inhibidores de BACE1 en ensayos clínicos humanos. Id. en el resumen.

Por ejemplo, MK-8931, un inhibidor de BACE1 de bajo peso molecular, fue la primera molécula que entró en ensayos clínicos de fase I. Yan, Transl. Neurodegener. 5(13):1-11 (2016) en la página 4. Se demostró que MK-8931 tiene un perfil de seguridad excelente sin efectos secundarios detectables inmediatamente. Id. Merck pudo demostrar que MK-8931 entra en el cerebro y bloquea la p-secretasa demostrando que MK-8931 reducía significativamente las concentraciones de péptido Ap del LCR de una manera sostenida y dependiente de la dosis. Vassar et al., Lancet Neurol. 13:319-329 (2014) en la página 323. MK-8931 se está evaluando actualmente en ensayos clínicos de fase II/IN con el fin de evaluar la eficacia y seguridad del compuesto para el tratamiento de pacientes con EA con deterioro cognitivo leve amnésico (EA prodrómica). Yan, Transl. Neurodegener. 5(13):1-11 (2016) en la página 4.

Además, E2609, un inhibidor de BACE identificado por Eisai, mostró una reducción significativa en los niveles de péptido Ap en el LCR y plasma en primates no humanos. Yan, Transí. Neurodegener. 5(13):1-11 (2016) en la página 7. E2609 no mostró problemas clínicos significativos de seguridad después de dosis repetidas de hasta 200 mg en un ensayo clínico de fase I. Id. Después de una dosificación de 14 d, la reducción del nivel de péptido Ap en el LCR fue estadísticamente significativa en comparación con el nivel de referencia (46.2% (25 mg), 61.9% (50 mg), 73.8% (100 mg), 79.9% (200 mg)). Id. En noviembre de 2014, Eisai indicó que se realizará un estudio de establecimiento de la dosis de fase II en pacientes con deterioro cognitivo leve (DCL) debido a EA o EA prodrómica y una exploración PET de amiloide positivo en colaboración con Biogen.

Además, ciertas empresas también están desarrollando terapias dirigidas a pacientes asintomáticos. Se demostró que JNJ-54861911, que fue desarrollado por primera vez por Shionogi & Co. en Japón y posteriormente en colaboración con Janssen, tenía la capacidad de atravesar la barrera hematoencefálica y de reducir la concentración de péptido Ap en función de la dosis. Yan, Transí. Neurodegener. 5(13):1-11 (2016) en las páginas 5-7. Por ejemplo, una dosis oral de 95 mg una vez al día consiguió una reducción de péptido Ap de hasta un 95% en el LCR. Id. En octubre de 2015, Janssen y Shionogi emprendieron un ensayo de fase iI/III dirigido a sujetos asintomáticos que corren el riesgo de desarrollar demencia de Alzheimer. Id.

De forma análoga, Amgen y Novartis anunciaron a finales de 2015 una colaboración para desarrollar conjuntamente el inhibidor de BACE de Novartis CNP520. Yan, Transí. Neurodegener. 5(13):1-11 (2016) en la página 8. El estudio tiene el objetivo de, entre otras cosas, demostrar que CNP520 "puede ralentizar la aparición y la progresión de los síntomas clínicos asociados con la enfermedad de Alzheimer (EA) en participantes con riesgo de desarrollar síntomas clínicos basándose en su edad y genotipo". https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02565511 (última visita 23 de octubre de 2016).

Se ha demostrado que los compuestos descritos en la presente modulan e inhiben específicamente la actividad de las enzimas p-secretasa como se muestra en la Tabla 2 para ejemplos específicos descritos en la presente, con lo que reducen la generación de péptido Ap. Por consiguiente, los compuestos proporcionados en la presente son útiles para, por ejemplo, la prevención o tratamiento de enfermedades relacionadas con la p-secretasa, entre las que se incluyen, sin carácter limitante, la EA. Los compuestos proporcionados en la presente tienen la capacidad de modular la actividad de la enzima p-secretasa, con lo que regulan de esta manera la producción de péptido Ap y reducen la formación y deposición de péptido Ap tanto en el líquido cefalorraquídeo como en el cerebro, lo que da como resultado una reducción de placas de Ap en el cerebro.

Más específicamente, se proporcionan los siguientes usos para los compuestos descritos en la presente:

Se proporcionan los compuestos descritos en la presente para su uso en la reducción de los niveles de péptido beta amiloide en el líquido cefalorraquídeo de un sujeto.

Se proporcionan los compuestos descritos en la presente para su uso en el tratamiento de la EA, deterioro cognitivo o una combinación de estos en un sujeto. En una realización, los compuestos proporcionados en la presente son útiles para el tratamiento de diversas fases y grados de la EA, que incluyen, sin carácter limitante, la EA leve, moderada y grave. En otra realización, los compuestos proporcionados en la presente son útiles para el tratamiento de la EA preclínica, deterioro cognitivo leve (DCL) debido a la EA y demencia debida a la EA. En otra realización más, los compuestos proporcionados en la presente pueden utilizarse para tratar sujetos prodrómicos.

Se proporcionan los compuestos descritos en la presente para su uso en el tratamiento de un trastorno neurológico seleccionado entre deterioro cognitivo leve, síndrome de Down, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis de tipo holandés, angiopatía amiloide cerebral, demencia degenerativa, demencia asociada con la enfermedad de Parkinson, demencia asociada con parálisis supranuclear, demencia asociada con degeneración basal cortical, tipo de EA con cuerpos de Lewy difusos o una combinación de estos en un sujeto.

Se proporcionan los compuestos descritos en la presente para su uso en la reducción de la formación de placas en el cerebro de un sujeto.

Como se ha analizado anteriormente, en ciertas realizaciones, se debe sobreentender que los compuestos descritos en la presente incluyen todos los estereoisómeros, tautómeros, formas marcadas isotópicamente de estos o sales farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores o solvatos de cualquiera de los anteriores o formas amorfas y cristalinas (polimorfos) de cualquiera de los anteriores. Por consiguiente, se debe sobreentender que el alcance de los métodos y usos proporcionados en la presente divulgación engloba también métodos y usos que emplean todas estas formas.

Además de ser útiles para el tratamiento humano, los compuestos proporcionados en la presente pueden ser útiles para el tratamiento veterinario de animales de compañía, animales exóticos y animales de granja, entre los que se incluyen mamíferos, roedores y similares. Por ejemplo, pueden tratarse con compuestos proporcionados en la presente animales entre los que se incluyen caballos, perros y gatos.

DOSIFICACIÓN, FORMULACIÓN Y VÍA DE ADMINISTRACIÓN

La cantidad de compuesto(s) que se administra(n) y la pauta posológica para el tratamiento de trastornos neurológicos y enfermedades mediadas por p-secretasa con los compuestos y/o composiciones que se describen en la presente dependen de una diversidad de factores, entre los que se incluyen la edad, peso, sexo y condición médica del sujeto, el tipo de enfermedad, la gravedad de la enfermedad, la vía y frecuencia de administración y el compuesto particular empleado. Puede ser apropiada una dosis diaria de aproximadamente 0.01 a 500 mg/kg o, en algunas realizaciones, entre aproximadamente 0.01 y aproximadamente 50 mg/kg, y en otras realizaciones adicionales, entre aproximadamente 0.01 y aproximadamente 30 mg/kg de peso corporal. En otras realizaciones más, puede ser apropiada una dosis diaria de entre aproximadamente 0.1 y aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal y debería ser útil para todos los usos descritos en la presente. La dosis diaria puede administrarse varias veces al día, tal como de una a cuatro dosis al día.

Aunque es posible administrar un compuesto descrito en la presente solo en los usos descritos, el compuesto administrado normalmente estará presente como un principio activo en una composición farmacéutica. Por lo tanto, en otra realización, en la presente se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto descrito en la presente combinado con un excipiente farmacéuticamente aceptable tal como diluyentes, portadores, adyuvantes y similares y, si se desea, otros principios activos. En una realización, una composición farmacéutica puede comprender una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto descrito en la presente.

El compuesto o compuestos descritos en la presente pueden administrarse mediante cualquier vía adecuada en forma de una composición farmacéutica adaptada a dicha vía y en una dosis eficaz para el tratamiento deseado. Los compuestos y composiciones presentes en este documento pueden administrarse, por ejemplo, por vía oral, mucosa, tópica, rectal, pulmonar, tal como mediante un espray de inhalación, o por vía parenteral que incluye la vía intravascular, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular, intraesternal y por técnicas de infusión, en formulaciones de dosificación unitarias que contienen excipientes farmacéuticamente aceptables tales como portadores, adyuvantes y vehículos.

Para administración oral, la composición farmacéutica puede estar en forma de, por ejemplo, un comprimido, cápsula, suspensión o líquido. La composición farmacéutica se fabrica normalmente en forma de una unidad de dosificación que contiene una cantidad particular del principio activo. Son ejemplos de dichas unidades de dosificación los comprimidos o las cápsulas. Por ejemplo, estos pueden contener una cantidad de principio activo de aproximadamente 1 a 2000 mg, de aproximadamente 1 a 500 mg y de aproximadamente 5 a 150 mg.

Para fines terapéuticos, los compuestos proporcionados en la presente normalmente se combinan con uno o más diluyentes u otros "excipientes" apropiados para la vía de administración indicada.

Si se administran por vía oral por dosis, los compuestos proporcionados en la presente pueden mezclarse con lactosa, sacarosa, almidón en polvo, ésteres de celulosa de ácidos alcanoicos, ésteres alquílicos de celulosa, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácidos fosfóricos y sulfúricos, gelatina, goma arábiga, alginato sódico, polivinilpirrolidona y/o alcohol polivinílico, para formar la formulación final. Por ejemplo, el compuesto o compuestos activos y el excipiente o excipientes pueden comprimirse o encapsularse mediante métodos conocidos y aceptados para una administración conveniente. Los ejemplos de formulaciones adecuadas incluyen, sin carácter limitante, píldoras, comprimidos, cápsulas de gel de cubierta blanda y dura, trociscos, formas que pueden disolverse por vía oral y formulaciones de liberación retardada o controlada de estas. Particularmente, las formulaciones de cápsulas o comprimidos pueden contener uno o más agentes de liberación controlada, tales como hidroxipropilmetilcelulosa, como dispersión con el compuesto o compuestos activos.

Las formulaciones para administración parenteral pueden estar en forma de soluciones o suspensiones para inyección estériles isotónicas acuosas o no acuosas. Estas soluciones y suspensiones pueden prepararse a partir de polvos o gránulos estériles utilizando uno o más de los portadores o diluyentes mencionados para su uso en las formulaciones para administración oral o utilizando otros agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados. Los compuestos pueden disolverse en agua, polietilenglicol, propilenglicol, etanol, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuate, aceite de sésamo, alcohol bencílico, cloruro sódico, goma de tragacanto y/o diversos tampones. Otros excipientes y modos de administración son muy conocidos en la técnica farmacéutica. El principio activo también puede administrarse por inyección como una composición con excipientes adecuados que incluyen solución salina, dextrosa o agua y que comprenden opcionalmente uno o más de los siguientes: un codisolvente tal como propilenglicol o un emulsionante tal como, por ejemplo, Tween 80. Estas formulaciones también pueden incluir compuestos tales como una ciclodextrina (por ejemplo, Captisol).

El preparado inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente atóxico aceptable para la vía parenteral, por ejemplo, como una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse se encuentran el agua, la solución de Ringer y una solución isotónica de cloruro sódico. Además, convencionalmente se emplean aceites no volátiles estériles como disolvente o medio de suspensión. Para este fin, puede emplearse cualquier aceite no volátil suave, incluidos los mono- o diglicéridos sintéticos. Además, en la preparación de inyectables encuentran utilidad los ácidos grasos tales como el ácido oleico.

El principio activo también puede administrarse por inyección como una composición con portadores adecuados entre los que se incluyen solución salina, dextrosa o agua. La pauta posológica parenteral diaria será de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 30 mg/kg de peso corporal total y, en algunas realizaciones, puede ser de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 10 mg/kg.

Para administración pulmonar, la composición farmacéutica puede administrarse en forma de un aerosol o con un inhalador que incluye aerosol en polvo seco.

Las composiciones farmacéuticas pueden someterse a operaciones farmacéuticas convencionales tales como esterilización y/o pueden contener excipientes convencionales tales como conservantes, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, tampones etc. Además, pueden prepararse comprimidos y píldoras con recubrimientos entéricos. Estas composiciones también pueden comprender excipientes tales como agentes humectantes, edulcorantes, aromatizantes y perfumes. Por consiguiente, en otra realización más de la presente divulgación, se proporciona un método de fabricación de un medicamento, comprendiendo el método combinar una cantidad de un compuesto de acuerdo con la Fórmula I con un diluyente farmacéuticamente aceptable para fabricar el medicamento.

En otra realización más, en la presente se proporciona un método de fabricación de un medicamento para el tratamiento de la EA, comprendiendo el método combinar una cantidad de un compuesto proporcionado en la presente con un excipiente farmacéuticamente aceptable para fabricar el medicamento.

COMBINACIONES

Aunque los compuestos descritos en la presente pueden dosificarse o administrarse como un solo agente farmacéutico activo, también pueden utilizarse combinados con uno o más compuestos proporcionados en la presente o junto con otros agentes. Cuando se administran como una combinación, los agentes terapéuticos pueden formularse como composiciones separadas que se administran simultánea o secuencialmente en diferentes momentos, o los agentes terapéuticos pueden administrarse como una única composición.

Se pretende que la expresión "coterapia" (o "terapia combinada"), cando se define el uso de un compuesto proporcionado en la presente y otro agente farmacéutico, englobe la administración de cada agente de una manera secuencial en un régimen que proporcionará efectos beneficiosos de la combinación de fármacos y también se pretende que englobe la coadministración de estos agentes de una manera sustancialmente simultánea, tal como en una sola cápsula que tiene una relación fija de esos agentes activos o en múltiples cápsulas distintas para cada agente.

Específicamente, la administración de los compuestos proporcionados en la presente puede realizarse junto con terapias adicionales conocidas por los expertos en la técnica en la prevención o tratamiento de p-secretasa, Y-secretasa y/u otros reactivos conocidos por ejercer una influencia sobre la formación y/o deposición de péptido Ap, que por lo demás es el responsable de la formación de placas en el cerebro.

Si se formulan como una dosis fija, dichos productos combinados emplean los compuestos descritos en la presente dentro de los intervalos de dosificación aceptados. Los compuestos proporcionados en la presente también pueden administrarse secuencialmente con otros agentes medicinales conocidos. Esta divulgación no está limitada en cuanto a la secuencia de administración; los compuestos proporcionados en la presente pueden administrarse antes, simultáneamente o después de la administración del agente antiinflamatorio conocido.

La descripción anterior es meramente ilustrativa y no se pretende que limite la divulgación a los compuestos, composiciones y métodos descritos. Se pretende que variaciones y cambios, que son obvios para un experto en la técnica, queden dentro del alcance y la naturaleza de la invención siempre que esté dentro del alcance como se define en las reivindicaciones adjuntas. A partir de la descripción anterior, un experto en la técnica puede determinar fácilmente las características esenciales de esta invención, y sin alejarse del alcance de esta, puede realizar diversos cambios y modificaciones de la invención para adaptarla a diversos usos y condiciones, siempre que esté dentro del alcance de la invención como se define en las reivindicaciones adjuntas.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de Fórmula I

o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde

R1 y R1’ son, independientemente, H, alquilo C^1-6, -C(O)O(alquilo C^1-6), -C(O)NH(alquilo C^1-6) o -C(O)-heterocicloalquilo, donde el alquilo C^1-6y las porciones de alquilo C^1-6de -C(O)O(alquilo C^1-6) y -C(O)NH(alquilo C^1-6) están opcionalmente sustituidos con de uno a tres sustituyentes fluoro;

R2 y R2’ son H;

b es un enlace sencillo, si R1, R1', R2 y R2' están presentes;

b es un doble enlace si uno de los grupos R1 y R1' y uno de los grupos R2 y R2' no está presente;

R3 es alquilo C^1-4;

R4 es halógeno;

R5 es H o F; y

uno de los grupos R6 y R7 es F o H y el otro de los grupos R6 y R7 es un heteroarilo de 6 miembros que contiene nitrógeno, donde el heteroarilo está opcionalmente sustituido con halógeno, -CN o 2-propiniloxi, donde al menos uno de los grupos R5, R6 o R7 es F.

2. El compuesto de acuerdo con la Reivindicación 1, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde el compuesto de Fórmula I es un compuesto de fórmula II

dicho compuesto o tautómero, donde el compuesto de Fórmula I es un compuesto de fórmula IIIA

4. El compuesto de acuerdo con la Reivindicación 1, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde el compuesto de Fórmula I es un compuesto de fórmula IIIB

5. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1, 2 y 4, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde

R1' es H o metilo; opcionalmente donde R1’ es metilo.

6. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1-5, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde R3 es metilo; y/o donde R4 es F.

7. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1-6 o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde los grupos R56 y R7 es F o H y el otro de los grupos R6 y R7 es piridilo o pirazinilo, donde el piridilo o pirazinilo está opcionalmente sustituido con Cl, -CN o 2-propiniloxi; o Donde los grupos R6 y R7 es F o H y el otro de los grupos R6 y R7 es piridilo o pirazinilo, cuyo piridilo o pirazinilo es opcionalmente sustituido con -CN o 2-propiniloxi.

8. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7,o un tautómero de este, o una sal farmacéticamene aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde uno de los grupos R6 y R7 es

opcionalmente donde uno de los grupos R6 y R7 es

9. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1-8, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, donde

(i) R5 es F; y R6 es H;

(ii) R5 es F; y R7 es H;

(iii) R5 es H; y R6 es F; o

(iv) R5 es H; y R7 es F;

10. El compuesto de la Reivindicación 1, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, seleccionado entre

(S,Z}-4-(5-(2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-4H-1,3-tiazin-2-amina;

(S,Z)-6-(2-(3-(2-amino-4-metil-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo;

(S,Z)-4-(5-(2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-2-amina;

(S,Z)-6-(2-(3-(2-amino-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo;

(4S,6fi)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo;

(45.65) -2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo;

(45.65) -2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo;

(4S,6fi)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cloropiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo;

(4S,6fi)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo;

(45.65) -2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo;

6-((Z)-2-(3-((4S,6S)-2-amino-4,6-dimetil-6-(morfolin-4-carbonil)-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo;

6-((Z)-2-(3-((4S,6fi)-2-amino-4,6-dimetil-6-(morfolin-4-carbonil)-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo;

(4S,6fi)-2-amino-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(2-propin-1-iloxi)-2-pirazinil)etenil)fenil)-W,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida;

(45.65) -2-amino-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(2-propin-1-iloxi)-2-pirazinil)etenil)fenil)-A/,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida;

((4S,6S)-2-amino-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(prop-2-in-1-iloxi)pirazin-2-il)vinil)fenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-il)(morfolino)metanona;

(45.65) -2-amino-W-(2,2-difluoroetil)-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(prop-2-in-1-iloxi)pirazin-2-il)vinil)fenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida; o

(45.65) -2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-A/,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida.

11. El compuesto de la Reivindicación 1, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, seleccionado entre

(S,Z)-6-(2-(3-(2-amino-4-metil-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo;

(S,Z)-6-(2-(3-(2-amino-4-metil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo;

(4S,6fi)-2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo;

(45.65) -2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxilato de metilo;

6-((Z)-2-(3-((4S,6S)-2-amino-4,6-dimetil-6-(morfolin-4-carbonil)-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo;

6-((Z)-2-(3-((4S,6fi)-2-amino-4,6-dimetil-6-(morfolin-4-carbonil)-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-4-il)-4-fluorofenil)-1-fluorovinil)nicotinonitrilo;

(4S,6fi)-2-amino-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(2-propin-1-iloxi)-2-pirazinil)etenil)fenil)-W,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida;

(45.65) -2-amino-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(2-propin-1-iloxi)-2-pirazinil)etenil)fenil)-W,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida;

((4S,6S)-2-amino-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(prop-2-in-1-iloxi)pirazin-2-il)vinil)fenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-il)(morfolino)metanona;

(45.65) -2-amino-A/-(2,2-difluoroetil)-4-(2-fluoro-5-((Z)-2-fluoro-2-(5-(prop-2-in-1-iloxi)pirazin-2-il)vinil)fenil)-4,6-dimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida; o

(45.65) -2-amino-4-(5-((Z)-2-(5-cianopiridin-2-il)-2-fluorovinil)-2-fluorofenil)-A/,4,6-trimetil-5,6-dihidro-4H-1,3-tiazin-6-carboxamida.

12. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1 -11, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

13. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1-11, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, o la composición farmacéutica de acuerdo con la Reivindicación 12 para su uso como medicamento.

14. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1-11, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, o la composición farmacéutica de acuerdo con la Reivindicación 12 para su uso en la reducción de los niveles de péptido beta amiloide en el líquido cefalorraquídeo de un sujeto.

15. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1-11, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, o la composición farmacéutica de acuerdo con la Reivindicación 12 para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, deterioro cognitivo o una combinación de estos en un sujeto.

16. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1-11, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, o la composición farmacéutica de acuerdo con la Reivindicación 12 para su uso en el tratamiento de un trastorno neurológico seleccionado entre deterioro cognitivo leve, síndrome de Down, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis de tipo holandés, angiopatía amiloide cerebral, demencia degenerativa, demencia asociada con la enfermedad de Parkinson, demencia asociada con parálisis supranuclear, demencia asociada con degeneración basal cortical, tipo de enfermedad de Alzheimer con cuerpos de Lewy difusos o una combinación de estos en un sujeto.

17. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1-11, o un tautómero de este, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o tautómero, o la composición farmacéutica de acuerdo con la Reivindicación 12 para su uso en la reducción de la formación de placas en el cerebro de un sujeto.