FR2948021A1 - Utilisation cosmetique de polypeptides de type lacritine - Google Patents

Abstract

La présente invention a pour objet l'utilisation, notamment cosmétique, d'une quantité efficace d'au moins un polypeptide de type Lacritine, d'un analogue de celui-ci ou d'un fragment de celui-ci, d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ce polypeptide, ou d'au moins un agent modulateur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression de ce polypeptide, ou de son interaction avec le syndecan-1, à titre d'agent utile pour le soin de la peau et de ses annexes.

Description

La présente invention se rapporte au domaine des marqueurs protéiques de la peau et de ses annexes et à leur mise en oeuvre à titre de cibles ou d'actifs cosmétiques ou thérapeutiques pour la prévention et/ou le traitement de troubles. En particulier, la présente invention a pour objet l'utilisation, notamment cosmétique ou thérapeutique, d'une quantité efficace d'au moins un polypeptide de type Lacritine, d'un analogue de celui-ci ou d'un fragment de celui-ci, d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ce polypeptide, ou d'au moins un agent modulateur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression de ce polypeptide, ou de son interaction avec le syndecan-1, à titre d'agent utile pour le soin de la peau et de ses annexes. L'invention concerne également l'utilisation d'au moins un polypeptide de type Lacritine, d'un analogue de celui-ci ou d'un fragment de celui-ci, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ce polypeptide, à titre d'outil de caractérisation in vitro ou ex vivo d'un état de la peau. L'épiderme, partie superficielle de la peau, est un tissu dont les cellules sont jointives et solidaires les unes des autres et reposent sur une membrane basale. Il forme un revêtement externe comprenant des glandes sébacées ou sudoripares. Plus précisément, l'épiderme est une structure dont l'homéostasie résulte de la mise en oeuvre d'un ensemble, finement régulé, de signaux intracellulaires et extracellulaires agissant à toutes les étapes de la prolifération, de la migration, de la différenciation cellulaire, ainsi que de la synthèse des différents composants de la matrice extracellulaire. Ces signaux peuvent, notamment, résulter de l'action de facteurs produits par les kératinocytes. L'épiderme est conventionnellement divisé en une couche basale de kératinocytes contenant, notamment, des cellules souches cutanées et constituant la couche germinative de l'épiderme, une couche dite épineuse constituée de plusieurs couches de cellules polyhédriques disposées sur la couche basale, une couche dite granuleuse comprenant une à trois couches dites de cellules aplaties contenant des inclusions cytoplasmiques distinctes, les grains de kératohyaline, et enfin, un ensemble de couches supérieures, appelé couche cornée, ou Stratum Corneum, constituée de kératinocytes au stade terminal de leur différenciation appelés cornéocytes.

Le Stratum Corneum, la partie la plus externe de la peau qui assure la fonction barrière entre l'organisme et l'environnement, et la tige pilaire, partie émergente du follicule pileux qui constitue la chevelure, représentent tous deux l'aboutissement du processus de différenciation des kératinocytes. La différenciation épidermique suit un processus de maturation dans lequel des kératinocytes de la couche basale se différencient et migrent pour aboutir à la formation des cornéocytes, cellules mortes totalement kératinisées. Cette différenciation est la résultante de phénomènes parfaitement coordonnés qui vont conduire au maintien d'une épaisseur constante et assurer ainsi l'homéostasie de l'épiderme. De nombreux troubles ou pathologies cutanés peuvent résulter d'un dysfonctionnement de l'homéostasie de l'épiderme, et notamment de la prolifération et/ou du renouvellement des cellules terminales de la peau et/ou du follicule pileux, et en particulier des kératinocytes. Il est connu aujourd'hui que ces dysfonctionnements peuvent être notamment associés à une modulation différente de l'expression et/ou de l'activité biologique de certaines protéines exprimées dans le Stratum Corneum. De manière surprenante, les inventeurs ont observé pour la première fois l'expression de la Lacritine, et notamment de trois peptides issus de la Lacritine figurés par les séquences SEQ ID NO : 7, SEQ ID NO : 8 et SEQ ID NO : 9, au niveau cutané, et en particulier une diminution de son expression, et notamment des trois peptides précités, dans la peau âgée et/ou sèche. Ainsi, contre toute attente, la Lacritine s'avère être un marqueur de l'état physiologique de la peau, notamment sur le plan du vieillissement et/ou de la sécheresse cutanée. En outre, il a été également observé que le protéoglycane syndecan-1 ainsi que l'Héparanase 1, tel que décrit ci-après, tout deux impliqués dans l'activité biologique de la Lacritine décrite au niveau des yeux, sont fortement exprimés au niveau de l'épiderme et du follicule pileux.

Il a encore été observé par les inventeurs que l'administration d'un actif composé d'un lysat de bactéries probiotiques, notamment de l'espèce Bifidobacterium longum, et d'un dérivé de phytosphingosine-salicylate permet avantageusement de restaurer l'expression de la Lacritine au niveau d'une peau âgée et/ou sèche. En conséquence, selon un de ses premiers aspects, la présente invention a pour objet une utilisation cosmétique, ou encore non thérapeutique, d'une quantité efficace d'au moins un polypeptide de séquence d'acides aminés représentée par SEQ ID NO : 4, un analogue de celui-ci ou un fragment de celui-ci, d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ce polypeptide, ou d'au moins un agent modulateur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression de ce polypeptide, ou de son interaction avec le syndecan-1, à titre d'agent utile pour le soin de la peau et de ses annexes.

La Lacritine est une glycoprotéine comprenant dans sa forme préprotéine 138 acides aminés et présentant un poids moléculaire d'environ 14,2 kDa pour le polypeptide non glycosylé. La Lacritine est connue pour être exprimée dans les granules sécrétrices des cellules acinaires des glandes lacrymales et salivaires. Les propriétés de la Lacritine ont été largement décrites au niveau de l'oeil et des cellules épithéliales de la cornée et celle-ci a été proposée dans différents traitements ophtalmiques, comme par exemple dans WO 2005/119899, WO 2008/105454, US 7,0167,372, US 7,207,522 et EP 1 766 768. La Lacritine possède une activité mitogène sur les cellules épithéliales de la cornée, et a également été caractérisée comme favorisant la sécrétion des larmes. Une diminution de l'expression de la Lacritine a été observée chez les patients atteints de blépharite, une inflammation du revêtement cutané des paupières, ou dans certains cas dits de dry-eyes (Sanghi et al., J. Mol. Biol., 2001, 310(29):127-139 ; Nakajima et al., Exp. Eye Res., 2007, 85(15):652-658 ; McKnown et al., Exp. Eye Res., 2008 : 1-11). Au niveau ophtalmique, ce polypeptide présente également une activité antimicrobienne (WO 2008/033477 ou WO 2006/129867) et favorise les sécrétions lipidiques (WO 2007/058383). L'activité de la Lacritine nécessiterait notamment l'association de son extrémité C-terminale avec la partie N-terminale du protéoglycane syndecan-1 (SDC1) préalablement déglycosylé par l'Héparanase-1, une enzyme destinée à dégrader l' Heparane-sulfate. Au sens de la présente invention, on entend par peau également désigner le cuir chevelu. Au regard de la peau, le terme annexes s'entend plus particulièrement comme désignant les ongles, les poils ou les cheveux. Par soin de la peau et de ses annexes , on entend plus particulièrement stimuler une prolifération et/ou un renouvellement des cellules terminales de la peau et/ou du follicule pileux, et encore plus particulièrement prévenir et/ou traiter un trouble cutané et/ou capillaire.

En particulier, la présente invention vise à prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement, notamment pour prévenir et/ou traiter un amincissement d'un épiderme et/ou une perte de fermeté, d'élasticité, de densité et/ou de tonicité d'un épiderme et/ou la formation de rides et ridules, à prévenir et/ou traiter les signes cutanés de sécheresse, en particulier prévenir et/ou traiter une déshydratation de la peau, à prévenir et/ou traiter les troubles cutanés dus à un déséquilibre des propriétés de barrière de la peau, en particulier pour stimuler les défenses antimicrobiennes cutanées, et notamment pour le traitement et/ou la prévention de l'acné et/ou des pellicules, à réguler la sudation ou les sécrétions sébacées de la peau, notamment pour prévenir et/ou traiter les troubles cutanés liés respectivement à une hypersudation ou une hyposudation, ou encore à une hyperséborrhée ou une hyposéborrhée, et à stimuler la pousse des poils et des cheveux. Par réguler , on entend, au regard d'un effet donné, l'action de stimuler ou d'inhiber cet effet pour lui conférer une intensité physiologique. Au sens de l'invention, on entend désigner par utilisation cosmétique une utilisation destinée, principalement, à procurer un effet esthétique et/ou du confort. Selon un autre de ses aspects, la présente invention a également pour objet une utilisation d'une quantité efficace d'au moins un polypeptide de séquence d'acides aminés représentée par SEQ ID NO : 4, un analogue de celui-ci ou un fragment de celui-ci, d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ce polypeptide, ou d'au moins un agent modulateur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression de ce polypeptide, ou de son interaction avec le syndecan-1, pour la préparation d'une composition thérapeutique pour le soin de la peau et de ses annexes. Au sens de l'invention, on entend par composition thérapeutique une composition destinée à procurer un effet prophylactique ou curatif au regard de troubles 25 épidermiques, reconnus comme traduisant un état pathologique. Au sens de la présente invention, on entend par l'expression quantité efficace la quantité minimale nécessaire à l'observation de l'effet attendu, à savoir un effet cosmétique ou un effet thérapeutique, étant entendu que les quantités efficaces nécessaires à l'obtention d'un effet cosmétique ou d'un effet thérapeutique peuvent être, le 30 cas échéant, identiques ou différentes. Au sens de la présente invention, on entend par prévenir ou prophylaxie la suppression totale ou partielle d'un risque de manifestation d'un évènement ou phénomène. Dans le cas où la suppression est partielle, le risque de manifestation de l'événement ou du phénomène donné est diminué comparativement audit risque avant la mise en oeuvre de la présente invention. Selon un autre aspect, la présente invention concerne également l'utilisation d'au moins un polypeptide ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil de criblage de composés biologiques ou chimiques ou de traitements physiques susceptibles de moduler l'activité biologique, la stabilité et/ou l'expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques, ou l'interaction dudit polypeptide avec le syndecan-1.

En particulier, la présente invention concerne un procédé de criblage de composés biologiques ou chimiques ou de traitements physiques susceptibles de moduler l'expression d'un polypeptide selon l'invention, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, comprenant au moins les étapes consistant à : a) mettre en contact au moins une cellule isolée apte à exprimer ledit polypeptide ou ladite séquence d'acides nucléiques avec au moins un composé chimique ou biologique à tester, ou à exposer ladite cellule isolée au traitement physique à tester, dans des conditions propices à l'expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques, b) effectuer une mesure qualitative ou quantitative dudit polypeptide ou de 20 ladite séquence d'acides nucléiques, et c) comparer ladite mesure à une mesure de référence. Une mesure de référence , au regard d'un paramètre donné, est une mesure qualitative ou quantitative de ce paramètre effectuée dans des conditions contrôles, à savoir en l'absence du facteur dont l'effet sur le paramètre est évalué. 25 Par exemple, pour un procédé de criblage d'un composé biologique ou chimique ou d'un traitement physique, une mesure de référence peut être obtenue en effectuant une mesure du polypeptide, ou de la séquence d'acides nucléiques codant pour le polypeptide, qualitative, à savoir une absence ou une présence dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques, ou quantitative, à savoir une teneur du polypeptide ou 30 de la séquence d'acides nucléiques, en l'absence du composé ou du traitement physique testé.

Dans le cas d'un procédé de caractérisation d'un état de la peau, comme détaillé ci-après, une mesure de référence peut être obtenue en effectuant une mesure du polypeptide, ou de la séquence d'acides nucléiques codant pour le polypeptide, qualitative ou quantitative, dans un échantillon de peau distinct de celui faisant l'objet de la caractérisation, et pouvant être qualifié de peau normale au regard de la peau évaluée, c'est-à-dire satisfaisante sur le plan physiologique, à l'image par exemple d'une peau jeune et dénuée de signes de sécheresse cutanée. De préférence, une mesure de référence est une mesure statistique, c'est à dire ayant été répétée sur différents échantillons de sorte à obtenir une moyenne.

La mesure de référence peut être effectuée parallèlement ou séquentiellement à la mesure test, qui est, par exemple, la mesure définie à l'étape b) du procédé décrit ci-dessus. Elle peut également être une mesure historique , c'est-à-dire effectuée antérieurement à la mesure test, et stockée, par exemple dans une base de données, en vue d'une utilisation ultérieure.

La comparaison de la mesure test à la mesure de référence, et l'observation d'une déviation ou d'une absence de déviation entre les deux mesures, permet de tirer une information quant à l'effet du facteur évalué, par exemple l'effet d'un composé biologique ou chimique ou d'un traitement physique sur l'expression de la Lacritine, ou quant au caractère âgée ou sec d'une peau.

L'invention se rapporte également à un procédé de criblage de composés biologiques ou chimiques susceptibles de moduler l'activité biologique d'un polypeptide conforme à l'invention, comprenant au moins les étapes consistant à : a) mettre en contact au moins un polypeptide isolé conforme à l'invention avec au moins un composé chimique ou biologique à tester, dans des conditions propices à la manifestation de l'activité biologique dudit polypeptide, b) effectuer une mesure qualitative ou quantitative de ladite activité biologique, et c) comparer ladite mesure à une mesure de référence. Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne également l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil de caractérisation in vitro ou ex vivo d'un état de la peau.

Plus précisément, la présente invention concerne, selon un autre de ses aspects, un procédé de caractérisation d'un état de la peau comprenant au moins les étapes consistant à : a) effectuer, dans un échantillon isolé de ladite peau, une mesure qualitative ou quantitative d'un polypeptide conforme à l'invention, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, et b) comparer ladite mesure effectuée à l'étape a) à une mesure de référence. Comme il ressort de la description qui suit, les procédés selon l'invention sont particulièrement avantageux dans la mesure où leur mise en oeuvre ne requiert pas d'opération invasive. Les procédés de l'invention peuvent être effectués in vitro ou ex vivo. En effet, la localisation par les inventeurs du nouveau biomarqueur de la peau âgée et/ou de la peau sèche qu'est la Lacritine, dans le Stratum Corneum, rend possible une caractérisation quantitative ou qualitative de l'expression de cette protéine par simple prélèvement topique. La méthode de prélèvement peut par exemple être une technique de type stripping consistant à appliquer sur l'épiderme considéré une portion de ruban adhésif. En décollant ce ruban adhésif, une fraction de la surface de la peau est prélevée. Après extraction protéique, celle-ci est ensuite analysée par des méthodes conventionnelles, telles que le dosage immuno-enzymatique ELISA ou une analyse Western-Blot, ou plus particulièrement par la méthode de protéomique différentielle iTRAQ telle que définie ci- après. La présente invention vise, selon encore un autre de ses aspects, l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, pour caractériser l'efficacité d'un traitement cosmétique pour le soin de la peau et de ses annexes, notamment pour caractériser l'efficacité d'un traitement d'un trouble cutané tel que défini précédemment. La présente invention vise, selon un autre de ses aspects, l'utilisation d'une quantité efficace d'au moins un polypeptide conforme à l'invention ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, d'au moins un agent modulateur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques, ou de l'interaction dudit polypeptide avec le syndecan-1, pour la préparation et/ou l'amélioration d'un modèle cellulaire épithélial pluristratifié, en particulier un modèle de peau reconstruite.

ETATS CUTANÉS Les états cutanés ou épidermiques concernés par l'invention relèvent des épidermes présentant des signes résultant de troubles de la prolifération et/ou du renouvellement des cellules terminales de la peau et/ou du follicule pileux.

Ces états cutanés peuvent relever d'une utilisation, et en particulier d'une méthode de traitement et/ou de prévention, cosmétique et/ou thérapeutique. Plus particulièrement, les états cutanés concernés par l'invention peuvent être comme décrit ci-après.

Signes cutanés du vieillissement Par signes cutanés du vieillissement , on entend toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau dues au vieillissement qu'il soit chronobiologique et/ou photo-induit, comme par exemple les rides et ridules, la peau flétrie, le manque d'élasticité et/ou de tonus de la peau, l'amincissement du derme et/ou la dégradation des fibres de collagène, ce qui entraîne l'apparence de peau molle et ridée. On entend également toutes les modifications internes de la peau qui ne se traduisent pas systématiquement par un aspect extérieur modifié, comme par exemple toutes les dégradations internes de la peau, particulièrement des fibres d'élastine, ou fibres élastiques, consécutives à une exposition aux rayonnements ultra-violets.

En particulier, les signes cutanés du vieillissement visés par l'invention concernent toutes les modifications de l'aspect extérieur de la peau dues au vieillissement qu'il soit chronologique et/ou photo-induit, comme par exemple un amincissement d'un épiderme et/ou une perte de fermeté, d'élasticité, de densité et/ou de tonicité d'un épiderme et/ou la formation de rides et ridules.

Signes cutanés de sécheresse Par signes cutanés de sécheresse , on entend toutes les modifications de l'aspect extérieur de la peau dues à une déshydratation de l'épiderme. Une peau sèche apparaît rugueuse au toucher et apparaît couverte de squames et se manifeste pour l'essentiel par une sensation de tiraillements et/ou de tension. L'origine de la sécheresse cutanée peut être de type constitutionnel ou acquis.

Dans le cas de la peau sèche constitutionnelle, on peut distinguer deux catégories : les peaux pathologiques et les peaux non pathologiques. Les peaux sèches constitutionnelles pathologiques sont essentiellement représentées par la dermatite atopique et les ichthyoses. Elles sont quasiment indépendantes des conditions extérieures et ont pour origine des modifications génétiques connues ou inconnues. Dans le cas des peaux sèches constitutionnelles non pathologiques, la sévérité de l'état de sécheresse peut, pour sa part, dépendre de facteurs extérieurs. Rentrent dans cette catégorie de peau, la peau sénile, notamment caractérisée par une diminution générale du métabolisme cutané avec l'âge, la peau fragile, pouvant se caractériser par une peau très sensible aux facteurs extérieurs et souvent accompagnée d'érythème et de rosacée et la xérose vulgaire, d'origine génétique probable et se manifestant en priorité sur le visage, les membres et le dos des mains. Quelle qu'en soit l'origine, une peau atteinte de sécheresse cutanée présente, 15 généralement, les signes suivants, à savoir un aspect rugueux au toucher et écailleux, ainsi qu'une souplesse et une élasticité diminuées. La peau sèche, également dénommée xérose , peut apparaître à n'importe quel âge, et n'être pas liée à une condition pathologique. On parlera dans ce cas de sécheresse acquise . 20 Bien qu'aucune étude n'ait démontré une incidence de la sécheresse sur l'origine et la formation des rides et ridules qui sont essentiellement attribuables au vieillissement, sur le plan visuel, une peau sèche rend celles-ci plus apparentes. Par ailleurs, sur le plan sensoriel, la sécheresse cutanée est caractérisée par une sensation de tiraillements et/ou de démangeaisons. Pour des raisons évidentes, ces 25 manifestations sont non seulement source d'inconforts, voire de douleurs, mais également d'une apparence inesthétique.

Troubles de la barrière cutanée La fonction barrière est principalement assurée par la couche la plus 30 superficielle de l'épiderme, à savoir la couche cornée, appelée le Stratum Corneum. Elle constitue une barrière contre les agressions extérieures, notamment chimiques, mécaniques ou infectieuses, et à ce titre un certain nombre de réactions de défense contre les facteurs environnementaux, tels que par exemple le climat, les rayons ultraviolets, ou le tabac et/ou les xénobiotiques, comme par exemple les micro-organismes, se produisent à son niveau. Une altération de la barrière cutanée peut se produire en présence d'agressions externes de type agents irritants, tels que par exemple les détergents, acides, bases, oxydants, réducteurs, solvants concentrés, gaz ou fumées toxiques, sollicitations mécaniques, telles que par exemple les frottements, chocs, abrasion, arrachement de la surface, projection de poussières, de particules, rasage ou épilation, les déséquilibres thermiques ou climatiques, tels que par exemple le froid, sécheresse, radiations, xénobiotiques, notamment les micro-organismes indésirables, allergènes ou d'agressions internes de type stress psychologique. Les troubles de la barrière cutanée peuvent notamment se traduire par un inconfort cutané, des phénomènes sensoriels et notamment des phénomènes désagréables, notamment des picotements, des tiraillements, des échauffements, et des démangeaisons.

Troubles du cuir chevelu Les états pelliculaires sont des états chroniques, fréquents, récidivants, et socialement invalidants du fait de leur caractère inesthétique manifeste. De nombreux facteurs peuvent amplifier ces phénomènes et conduire à l'apparition de troubles supplémentaires tels que des états inflammatoires du cuir chevelu générant des sensations de démangeaison ou prurit, conduisant à des comportements de grattage amplifiant le phénomène d'apparition des pellicules. Les états pelliculaires du cuir chevelu peuvent être de type gras ou de type sec. Les états pelliculaires secs du cuir chevelu se manifestent plus fréquemment et sont amplifiés lors de troubles de l'hydratation de la peau, et notamment lors de sécheresse importante de l'épiderme du cuir chevelu. Les états pelliculaires secs traduisent une xérose du cuir chevelu, le cas échéant associée à un renouvellement excessivement rapide de son Stratum Corneum. Les pellicules sèches sont généralement de petites tailles, blanches ou grises, et se répartissent sur le cuir chevelu et les vêtements générant un effet visuel inesthétique.

Par ailleurs, une sécrétion excessive de sébum favorise l'apparition d'un état pelliculaire gras du cuir chevelu ou pellicules grasses. Elles ont tendance à être plus facilement prurigineuses. Les états pelliculaires gras sont une des formes de dermites séborrhéiques. Les sujets qui en sont atteints ont un cuir chevelu érythémateux couvert par des squames larges, gras et jaunes qui s'accumulent pour former des paquets. Ils ont un scalp prurigineux, et ont souvent des sensations de brûlure sur les zones atteintes. En outre, un cuir chevelu présentant une sécheresse excessive ou une sécrétion excessive de sébum, peut manifester un prurit et/ou une inflammation de l'épiderme.

Troubles capillaires La croissance des cheveux et leur renouvellement sont principalement déterminés par l'activité des follicules pileux et de leur environnement matriciel. Leur activité est cyclique et comporte essentiellement 3 phases à savoir la phase anagène, la phase catagène et la phase télogène. A la suite de la phase terminale ou télogène, qui dure quelques mois, les cheveux tombent et un autre cycle recommence. La chevelure se renouvelle donc en permanence et sur les 150 000 cheveux environ que comporte une chevelure, à chaque instant, 10 % environ sont au repos et seront remplacés en quelques mois. La chute ou perte naturelle des cheveux peut être estimée, en moyenne, à quelques cent cheveux par jour pour un état physiologique normal. Ce processus de renouvellement physique permanent subit une évolution naturelle au cours du vieillissement, les cheveux deviennent plus fins et leurs cycles plus courts. En revanche, dans certaines dermatoses du cuir chevelu à caractéristique inflammatoire, telles que par exemple le psoriasis ou les dermatites séborrhéiques, la chute des cheveux peut être fortement accentuée et les cycles de renouvellement des follicules peuvent être fortement perturbés. En outre, différentes causes peuvent entraîner une perte importante, temporaire ou définitive, des cheveux. Il peut s'agir de chute et d'altération des cheveux au cours d'une grossesse (post partum), au cours d'états de dénutrition ou de déséquilibres alimentaires ou encore au cours d'états d'asthénie ou de dysfonctionnement hormonal comme cela peut être le cas au cours ou au décours de la ménopause. Il peut également s'agir de chute ou d'altérations des cheveux en relation avec des phénomènes saisonniers. Il peut également s'agir d'une alopécie qui est essentiellement due à des perturbations du renouvellement capillaire qui entraîne dans un premier temps l'accélération de la fréquence des cycles au détriment de la qualité des cheveux puis de la quantité. Le terme alopécie recouvre aussi toute une famille d'atteintes du follicule pileux ayant pour conséquence finale la perte définitive, partielle ou générale des cheveux. I1 s'agit plus particulièrement de l'alopécie androgénique. Dans un nombre important de cas, la chute précoce des cheveux survient chez des sujets prédisposés génétiquement, il s'agit alors d'alopécie andro-chrono-génétique ; cette forme d'alopécie concerne notamment les hommes.

Troubles de la cicatrisation Une bonne cicatrisation implique une coopération entre fibroblastes dermiques et kératinocytes épidermiques par l'intermédiaire de cytokines favorisant la prolifération, la migration cellulaire et la synthèse des composants de la matrice extracellulaire permettant de combler la cicatrice dans un premier temps puis l'élaboration d'une fonction barrière épidermique renouvelée par une régulation fine de la différentiation kératinocytaire dans un second temps. La Lacritine peut agir de façon positive à ces différentes étapes.

Troubles sécrétoires, notamment de type sudoripare et sébacé Les sécrétions contribuent fortement à l'état d'hydratation de la peau par leur apport à la surface épidermique d'éléments hydratants, tels que par exemple l'Urée, les Lactates, les sels, ou les composés lipophiles s'opposant à la perte en eau. Cet état hydraté est soit souhaitable, par exemple pour combattre la sécheresse cutanée, soit source de développements microbiens non souhaités à l'origine de mauvaises odeurs, et ce, particulièrement au niveau des aisselles et/ou de désordre de la desquamation et de la fonction barrière, en particulier au niveau du scalp. Ces sécrétions et leurs éléments constitutifs sont aussi largement responsables de l'aspect du film hydrolipidiques de surface et leur modulation peut être souhaitable par exemple pour combattre l'aspect de peau grasse. La Lacritine peut avantageusement réguler ces sécrétions.

Troubles des défenses antimicrobiennes Les couches superficielles de l'épiderme constituent une barrière contre la pénétration de microorganismes. Cette barrière est non seulement physique mais aussi biochimique et notamment par l'intermédiaire de molécules antimicrobiennes telles que des peptides antimicrobiens. Dans certains désordres cutanés tels que la dermatite atopique, l'acné, la rosacée, le déséquilibre de ces défenses a été mis en cause. La Lacritine par ses propriétés antimicrobiennes propres et/ou sa capacité à réguler la synthèse de molécules à propriétés antimicrobiennes peut avantageusment corriger ces désordres.

Selon un mode de réalisation, une utilisation cosmétique selon l'invention s'adresse plus particulièrement à la prévention et/ou traitement d'un état cutané choisi parmi les signes cutanés du vieillissement, notamment l'amincissement d'un épiderme et/ou la perte de fermeté, d'élasticité, de densité et/ou de tonicité d'un épiderme et/ou la formation de rides et ridules, les signes cutanés de sécheresse, en particulier la déshydratation de la peau, les troubles cutanés dus à un déséquilibre des propriétés de barrière de la peau, en particulier des défenses antimicrobiennes cutanées, et notamment à l'acné et/ou aux pellicules, les troubles de la sudation ou de la sécrétions sébacée, notamment les troubles cutanés liés respectivement à une hypersudation ou une hyposudation, et à une hyperséborrhée ou une hyposéborrhée, et les troubles de la pousse des poils et des cheveux. En particulier, une utilisation cosmétique selon l'invention s'adresse plus particulièrement à la prévention et/ou traitement d'un état cutané choisi parmi la xérose, la parakératose, l'hyperkératose, la peau grasse, l'odeur cutanée, un dérèglement de la sudation ou de la sébogénèse, l'alopécie, l'hirsutisme, l'acné ou les pellicules sèches ou grasses. Selon un mode de réalisation, une utilisation thérapeutique ou dermatologique selon l'invention s'adresse plus particulièrement à la prévention et/ou traitement d'un état cutané choisi parmi l'ichtyose, la rosacée, le lichen, la dermite séborrhéique, la kératodermie palmo-plantaire, un trouble de la cicatrisation ou un trouble cutané impliquant des phénomènes de sécrétion et de processus d'invasion cellulaire, notamment dans le cadre de néoplasies malignes ou bénignes, le psoriasis, l'atopie cutanée, la dermatite atopique, une pelade ou alopecia areata.

POLYPEPTIDE Selon un mode de réalisation, un polypeptide convenant à l'invention est un polypeptide de séquence d'acides aminés représentée par SEQ ID NO : 4, un analogue de celui-ci, ou un fragment de celui-ci.

Au sens de la présente invention, on entend désigner de manière générale, sauf indication contraire, par la Lacritine la séquence SEQ ID NO : 4, ayant ou non subi des modifications post-traductionnelles, de type glycosylation sur le résidu asparagine en position 119, susceptibles ou non de modifier son poids moléculaire apparent ou son point isoélectrique, ainsi que les variants résultant d'un épissage alternatif. Par analogue d'un polypeptide , on entend désigner tout polypeptide présentant une identité de séquence, en particulier vis-à-vis d'une des séquences caractéristiques dudit polypeptide, ainsi qu'une activité biologique de même nature. Par séquence caractéristique du polypeptide , on entend viser notamment au regard de la Lacritine, la séquence représentée par SEQ ID NO : 4. Cet analogue peut être un agent peptidomimétique. L'identité de séquence peut être d'au moins 85 %, par exemple d'au moins 90 %, et par exemple d'au moins 95 %. L'identité de séquence peut être déterminée par comparaison visuelle ou au moyen de tout outil informatique généralement utilisé dans le domaine, tel que les programmes BLAST disponibles sur www.ncbi.nlm.nih.gov et utilisés avec les paramètres configurés par défaut. Un analogue d'un polypeptide de l'invention peut résulter de modifications issues de mutation ou de variation dans les séquences des peptides selon l'invention provenant soit de la délétion ou de l'insertion d'un ou plusieurs acides aminés, soit de la substitution d'un ou plusieurs acides aminés dans les séquences caractéristiques d'un polypeptide selon l'invention. Plusieurs de ces modifications peuvent être combinées. Avantageusement, un analogue d'un polypeptide de l'invention peut comprendre des substitutions conservatrices par rapport à la séquence d'acides aminés du polypeptide naturel.

A titre d'exemple de mutations que l'on peut considérer dans la présente invention, il peut être mentionné, de manière non exhaustive, le remplacement d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés par des résidus d'acides aminés ayant un indice hydropathique similaire sans pour autant affecter de manière sensible les propriétés biologiques du polypeptide. L'indice hydropathique est un indice attribué aux acides aminés en fonction de leur hydrophobicité et de leur charge (Kyte et al. (1982), J. Mol. Biol., 157 : 105).

Un polypeptide ou analogue également visé par la présente invention peut être un polypeptide ayant subi une ou plusieurs modification(s) post-traductionnelle(s). Par modification(s) post-traductionnelle(s) , on entend englober l'ensemble des modifications qu'un peptide ou une protéine est susceptible de subir à l'issue de sa synthèse dans une cellule, telle que par exemple une ou des phosphorylation(s), une ou des thiolation(s), une ou des acétylation(s), une ou des glycosylation(s), une ou des lipidation(s), telles qu'une farnésylation ou une palmitoylation, un réarrangement structural de type formation de ponts disulfures et/ou de type clivage à l'intérieur de la séquence peptidique.

L'analogue présente, par ailleurs, sensiblement la même activité biologique que le polypeptide naturel. Il est par ailleurs connu que la séquence primaire d'un polypeptide, c'est-à-dire l'enchaînement des acides aminés, détermine des sites spécifiquement reconnus par des enzymes de type protéase, telles que la trypsine, qui, une fois la reconnaissance de ces sites effective vont induire le clivage du polypeptide par protéolyse. Cette protéolyse résulte en la génération de divers peptides, ou fragments de protéolyse, de la Lacritine. En conséquence, l'invention s'étend également aux fragments de la Lacritine, issus le cas échéant de sa protéolyse. Au sens de l'invention, on entend par fragment de polypeptide toute portion d'un polypeptide conforme à l'invention comprenant au moins 3, de préférence au moins 8, voire au moins 10, et plus particulièrement au moins 12 acides aminés consécutifs dudit polypeptide, et une activité biologique sensiblement similaire. Comme détaillé dans les exemples, les inventeurs ont détecté la présence de fragments peptidiques de la Lacritine dans le Stratum Corneum humain.

Ainsi, selon un mode de réalisation, un polypeptide convenant à l'invention peut être un polypeptide de séquence d'acides aminés représentée par SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 6, SEQ ID NO : 7, SEQ ID NO : 8, SEQ ID NO : 9 ou SEQ ID NO : 10, un analogue de celui-ci, ou un fragment de celui-ci. De manière préférée, un polypeptide convenant à l'invention peut être un 30 polypeptide de séquence d'acides aminés représentée par SEQ ID NO : 7, SEQ ID NO : 8, SEQ ID NO : 9 ou SEQ ID NO : 10, un analogue de celui-ci, ou un fragment de celui-ci.

De manière encore plus préférée, un polypeptide convenant à l'invention peut être un polypeptide de séquence d'acides aminés représentée par SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO : 8, ou SEQ ID NO : 9, un analogue de celui-ci, ou un fragment de celui-ci. Selon un autre mode de réalisation, un polypeptide convenant à l'invention peut également être un polypeptide naturel ou synthétique, le cas échéant susceptible d'être obtenu après lyse enzymatique ou chimique de la Lacritine ou par synthèse chimique ou biologique ou par extraction à partir d'un tissu biologique, comme par exemple la peau, exprimant naturellement ce polypeptide ou après transfection de celui-ci, ainsi que les différentes formes post-traductionnelles de celui-ci, ou encore tout polypeptide naturel ou synthétique dont la séquence comprend totalement ou partiellement (en tout ou partie) une séquence d'acides aminés précitée, par exemple les variants et les analogues. L'homme de l'art peut obtenir un polypeptide conforme à l'invention au moyen de procédés à base d'ADN recombinant, comme par exemple, ceux décrits dans le manuel Molecular Cloning - A Laboratory Manual (2ème édition), Sambrook et al., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY, (Sambrook). Avantageusement, un polypeptide de l'invention peut être codé par une séquence d'acides nucléiques représentée par SEQ ID NO : 1, SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO : 3, un analogue de celle-ci ou un fragment de celle-ci.

Selon un autre mode de réalisation, un polypeptide convenant à la mise en oeuvre de l'invention peut également être un polypeptide tel que défini précédemment, fusionné avec un autre polypeptide, un agent de ciblage hydrophile ou hydrophobe, un précurseur de bio-conversion, un agent de marquage luminescent, radioactif ou colorimétrique.

De manière non limitative, on peut citer comme exemple de composés susceptibles d'être couplés avec un polypeptide conforme à l'invention des protéines fluorescentes comme la Green Fluorescent Protein , des composés chimiques fluorescents, tels que la rhodamine, la fluorescéine, ou le Texas Red , des composés phosphorescents, des éléments radioactifs, tels que 3H, 14C 35S 1211 ou 125I, ou des agents de marquage colorimétrique comme les substrats chromogènes sensibles à l'action de la galactosidase, de la peroxydase, de la chloramphénicol acétyltransférase, de la luciférase ou de la phosphatase alcaline.

Selon la nature des composés susceptibles d'être couplés avec un polypeptide conforme à l'invention, le couplage peut être opéré par des procédés chimiques, notamment au moyen de fonctions chimiques réactives ou par des procédés de biologie moléculaire connus de l'homme de l'art.

ACIDES NUCLEIQUES Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne également des séquences d'acides nucléiques codant pour un polypeptide de l'invention et leur mise en oeuvre dans les différentes utilisations et procédés conformes à l'invention.

Ainsi, la présente invention se rapporte également à l'utilisation de séquence d'acides nucléiques, notamment d'acides désoxyribonucléiques, ou d'acides ribonucléiques, représentée par SEQ ID NO : 1, un analogue de celle-ci ou un fragment de celle-ci. Au sens de la présente invention, on entend par fragment de séquence d'acides nucléiques , une séquence d'acides nucléiques codant pour un polypeptide conforme à l'invention, notamment tel que défini précédemment, et en particulier une séquence d'acides nucléiques représentée par SEQ ID NO : 2 ou SEQ ID NO : 3, ou un analogue de celle-ci. Par analogue d'une séquence d'acides nucléiques , on entend désigner toute séquence d'acides nucléiques, éventuellement résultant de la dégénérescence du code des acides nucléiques, et codant pour un polypeptide conforme à l'invention, notamment tel que défini précédemment. Les séquences d'acides nucléiques peuvent être de toutes origines possibles, à savoir soit animale, en particulier de mammifères et encore plus particulièrement humaine, soit végétale, soit de micro-organismes, tels que par exemple virus, phages, ou bactéries entre autres, ou encore de champignons, sans préjuger du fait qu'elles soient présentes de manière naturelle ou non dans ledit organisme d'origine. Selon un mode de réalisation, l'invention se rapporte également aux séquences d'acides nucléiques isolées et purifiées codant pour les polypeptides considérés selon 30 l'invention, ainsi qu'à leurs analogues et fragments.

Une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention peut comprendre une séquence sens, anti-sens ou interférentielle correspondant à une séquence codant pour un polypeptide conforme à l'invention. L'invention a également pour objet des séquences d'acides nucléiques, notamment d'acides ribonucléiques ou désoxyribonucléiques, comprenant une séquence sens ou anti-sens, notamment small interferent RNA (siRNA), correspondant au moins à une séquence codant pour un polypeptide de l'invention ou une séquence d'acides nucléiques représentée par SEQ ID NO : 1, SEQ ID NO : 2 ou SEQ ID NO : 3, ou un analogue de celle-ci, ou un fragment de celle-ci.

CRIBLAGE Procédé de criblage Selon un de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil de criblage de composés biologiques ou chimiques ou de traitements physiques susceptibles de moduler l'activité biologique, la stabilité et/ou l'expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques, ou l'interaction dudit polypeptide avec le syndecan-1. Un procédé de criblage de composés biologiques ou chimiques ou de traitements physiques susceptibles de moduler l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, peut comprendre au moins les étapes consistant à : a) mettre en contact au moins une cellule isolée apte à exprimer ledit polypeptide ou ladite séquence d'acides nucléiques avec au moins un composé chimique ou biologique à tester, ou à exposer ladite cellule isolée au traitement physique à tester, dans des conditions propices à l'expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acide nucléiques, et b) effectuer une mesure qualitative ou quantitative dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et c) comparer ladite mesure à une mesure de référence. Une mesure de référence peut être obtenue en réitérant les étapes a) et b) en l'absence de composés biologiques ou chimiques, ou de traitements physiques à tester.

Une séquence d'acide nucléique convenant à la mise en oeuvre d'un procédé selon l'invention peut être avantageusement une séquence d'acides nucléiques codant pour la Lacritine, par exemple de type ARNm. La mesure qualitative ou quantitative de l'expression d'une séquence d'acides 5 nucléiques peut être déterminée, par exemple, au moyen de sondes oligonucléotidiques, par tout protocole connu de l'homme de l'art. A titre d'exemple de méthodes de détection de séquence d'acides nucléiques, il peut être fait mention de la réaction de polymérisation en chaîne (PCR), quantitative (Q-PCR) ou non, en présence ou non de transcriptase inverse (RT-PCR ou Q-RT-PCR), du 10 Northern-blot, de la méthode ribonuclease protection assay , des méthodes avec des puces à ADN, des méthodes avec des puces transcriptomiques, des méthodes avec des puces à oligonucléotides, des méthodes d'hybridation in situ. A titre d'exemple d'agents convenant à la détection d'une séquence d'acides nucléiques, et en particulier d'ARNm, il peut être fait mention de sondes d'acides 15 nucléiques marquées pouvant s'hybrider à une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention. Une telle sonde d'acide nucléique peut être aisément obtenue par toute méthode connue de l'homme de l'art. Ainsi, les séquences d'acides nucléiques conformes à l'invention peuvent être 20 utilisées pour réaliser des amorces oligonucléotidiques sens et/ou anti-sens, qui s'hybrident dans des conditions de forte stringence à au moins une des séquences SEQ ID NO : 1, SEQ ID NO : 2 ou SEQ ID NO : 3, un analogue de celle-ci, ou un fragment celle-ci. L'expression d'une séquence d'acide nucléique peut également être déterminée, de manière indirecte, par la détermination de l'expression du polypeptide codé 25 par ladite séquence, au moyen de toute technique connue dans le domaine, telle que le Western-Blot, l'ELISA, la méthode de Bradford ou de Lowry, ou comme indiqué ci-après. La mesure qualitative ou quantitative, notamment une teneur, d'un polypeptide conforme à l'invention peut être effectuée au moyen de toute méthode connue de l'homme de l'art. 30 A titre de méthodes de détection d'un polypeptide, il peut être fait mention du Western-blot, du Slot-blot, du Dot-blot, des méthodes ELISA (Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay) de type singleplex ou multiplex, des méthodes de protéomique ou de glycomique, de coloration de polypeptides dans un gel de polyacrylamide par un colorant à base d'Argent, par le bleu de Coomassie ou par le SYPRO, de l'immunofluorescence, de l'absorption UV, de méthodes immunohistochimiques en microscopie classique, électronique ou confocale, de FRET (fluorescence resonance energy transfer/transfert d'énergie par résonance de fluorescence), des méthodes de TR-FRET (time resolved FRET/FRET en résolution de temps), des méthodes de FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy/imagerie par microscopie en temps de fluorescence), des méthodes de FSPIM (fluorescence spectral imaging microscopy/imagerie par microscopie en spectre de fluorescence), des méthodes de FRAP (fluorescence recovery after photobleaching/recouvrement de fluorescence après photoblanchiment), des méthodes par gène rapporteur, des méthodes d'AFM (atomic force microscopy/microscopie par force atomique), des méthodes de résonance plasmonique de surface, des méthodes de microcalorimétrie, des méthodes de cytométrie en flux, des méthodes de biosenseurs, des méthodes de radioimmuno-essais (RIA), des méthodes de focalisation isoélectrique, et des tests enzymatiques, des méthodes mettant en oeuvre des puces à peptides, des puces à sucre, des puces d'anticorps, des méthodes de spectrométrie de masse, des méthodes de spectrométrie de type SELDI-TOF (Ciphergen). De façon plus générale, des méthodes de dosage immunoenzymatiques à partir de solutions de protéines, plus quantitatives et sensibles peuvent en particulier être utilisées. Ces méthodes de type ELISA associent des couples d'anticorps de capture et de détection spécifique de l'antigène ciblé. Des anticorps commerciaux ou des anticorps polyclonaux, monoclonaux ou recombinants développés spécifiquement peuvent être utilisés. Des techniques ELISA multiplexes de grande capacité peuvent également être mises en oeuvre. On peut ainsi citer l'approche multiplexe de type anticorps sur billes Luminex (par exemple Bioplex de Bio-Rad), de type anticorps sur surface plane ( antibodies-arrays ) (par exemple approche proposée par la société MesoScale Discovery). En particulier, il peut être avantageux de détecter la présence d'un polypeptide conforme à l'invention au moyen d'un anticorps, le cas échéant sous une forme marquée.

Un tel anticorps peut être marqué au moyen d'une substance détectable directement ou détectable par réaction avec un autre réactif.

Par anticorps , on entend désigner de manière générale des anticorps monoclonaux ou polyclonaux, ainsi que des fragments d'immunoglobuline susceptibles de lier un antigène et qui peuvent être produits par toute technique de génie génétique connue de l'homme de l'art ou par coupure enzymatique ou chimique d'anticorps intact.

Un anticorps susceptible d'être utilisé à titre d'outil d'évaluation d'un état d'un épiderme peut être obtenu par tout procédé connu de l'homme de l'art, tel que décrit dans Antibodies: A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990).

Selon un autre mode de réalisation, un procédé de criblage de composés biologiques ou chimiques susceptibles de moduler l'activité biologique d'un polypeptide conforme à l'invention, comprenant au moins les étapes consistant à : a) mettre en contact au moins un polypeptide isolé conforme à l'invention avec au moins un composé chimique ou biologique à tester, dans des conditions propices à la manifestation de l'activité biologique dudit polypeptide, b) effectuer une mesure qualitative ou quantitative de ladite activité biologique, et c) comparer ladite mesure à une mesure de référence. Une mesure de référence peut être obtenue en réitérant les étapes a) et b) en 20 l'absence de composés biologiques ou chimiques à tester. Selon un mode de réalisation, un polypeptide isolé peut être mis en oeuvre, dans un système acellulaire, i.e. dans un système ne comprenant pas de cellules mais reproduisant des fonctions cellulaires, ou dans un échantillon cellulaire isolé. Selon un autre mode de réalisation, un système acellulaire peut également 25 convenir pour un procédé de criblage de composés biologiques ou chimiques ou de traitements physiques susceptibles de moduler l'expression d'une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention.

Par activité biologique , on entend désigner notamment au regard de la 30 Lacritine, une activité biologique du polypeptide représenté par SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO : 5 ou SEQ ID NO : 10, ayant subi ou non une glycosylation, et notamment une activité biologique de type liaison au syndecan-1, mitogénique, anti-inflammatoire de cicatrisation, de régulation de la séborrhée ou de la sudation, ou de stimulation des défenses anti-microbiennes. Selon un mode de réalisation, l'activité biologique d'un polypeptide de l'invention peut notamment être son activité de stimulation de la prolifération et/ou du renouvellement des cellules terminales de la peau et/ou du follicule pileux, et peut être déterminée par toute méthode connue de l'homme de l'art, par exemple sur des kératinocytes en culture.

Selon un mode de réalisation, le criblage d'un composé biologique ou chimique susceptible de moduler l'activité biologique d'un polypeptide conforme à l'invention peut se faire par mesure de l'activité biologique ou de l'expression d'une molécule cible appartenant aux voies de signalisation ou de métabolisme dans lesquelles peut être impliqué ledit polypeptide, tel que par exemple un système de gène reporteur. Ainsi, un procédé de l'invention concerne un procédé de criblage de composés biologiques ou chimiques susceptibles de moduler l'interaction, ou liaison, d'un polypeptide conforme à l'invention avec le syndecan-1, comprenant au moins les étapes consistant à : a) mettre en contact au moins une molécule de syndecan-1, au moins un polypeptide conforme à l'invention, et au moins un composé chimique ou biologique à tester dans des conditions propices à une liaison entre ledit polypeptide et ladite molécule de syndecan-1, et b) mesurer la liaison entre ledit polypeptide et ladite molécule de syndecan-1, c) comparer ladite mesure à une mesure de référence. La mesure de référence peut être obtenue en réitérant les étapes a) et b) en 25 l'absence de composés à tester. L'interaction ou la liaison entre un polypeptide de l'invention et une molécule de syndecan-1 peut être effectuée par toute méthode connue de l'homme de l'art. Par exemple, l'interaction ou la liaison entre un polypeptide de l'invention et une molécule de syndecan-1 peut être évaluée par mesure du polypeptide lié par rapport au 30 polypeptide total mis en oeuvre. Dans une telle mise en oeuvre, le syndecan-1 peut être fixé sur un support et le polypeptide utilisé peut être marqué, par exemple par un radioisotope ou un marqueur fluorescent. Après incubation du polypeptide marqué en présence du syndecan-1 fixé à un support et du composé à tester, le support est lavé pour éliminer le polypeptide libre, et le polypeptide fixé au syndecan-1 est mesuré par détection d'un signal de radioactivité ou de fluorescence, qui peut être quantifié. A titre de méthode convenant en particulier pour l'invention pour la détection d'une interaction entre deux polypeptides, il peut être fait mention de 1'HTRF (Homogeneous time resolved fluorescence/ fluorescence homogène en temps résolu) ou de la SPR (Surface Plasmon Resonance/Résonance Plasmonique de Surface), de Biacore.

L'expression du polypeptide ou de la séquence d'acides nucléiques, ou l'activité biologique du polypeptide, ou son interaction avec le syndecan-1 peut ne pas être affectée par le composé ou le traitement testé ou, en revanche, être inhibée ou stimulée. Dans l'hypothèse où une stimulation de l'expression, de l'activité biologique ou de l'interaction du polypeptide avec le syndecan-1 est constatée, le composé ou le traitement physique testé est susceptible d'être utilisé pour, par exemple, stimuler une prolifération et/ou un renouvellement des cellules terminales de la peau et/ou du follicule pileux, prévenir et/ou traiter un trouble cutané et/ou capillaire, prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement, notamment prévenir et/ou traiter un amincissement d'un épiderme et/ou une perte de fermeté, d'élasticité, de densité et/ou de tonicité d'un épiderme et/ou la formation de rides et ridules, prévenir et/ou traiter les signes cutanés de sécheresse, en particulier prévenir et/ou traiter une déshydratation de la peau, prévenir et/ou traiter les troubles cutanés dus à un déséquilibre des propriétés de barrière de la peau, stimuler les défenses antimicrobiennes cutanées, favoriser la cicatrisation de la peau, stimuler la sudation ou les sécrétions sébacées de la peau et ainsi prévenir et/ou traiter, respectivement, un trouble cutané lié à l'hyposudation ou l'hyposéborrhée.

Dans l'hypothèse où une inhibition de l'expression, de l'activité biologique ou de l'interaction du polypeptide avec le syndecan-1 est constatée, le composé ou le traitement physique testé est susceptible d'être utilisé pour, par exemple, réduire et/ou inhiber les sécrétions sébacées de la peau ou la sudation et ainsi prévenir et/ou traiter, respectivement, un trouble cutané lié à une hyperséborrhée ou à une hypersudation.

Un procédé conforme à l'invention peut être effectué sur un échantillon cellulaire isolé, un échantillon acellulaire ou sur un polypeptide isolé, obtenu soit d'une biopsie cutanée, soit à partir de cellules en culture, notamment à partir d'un modèle épidermique, ou d'un prélèvement de surface cutané non-invasif, notamment par adhésif ( tape stripping ) de Stratum Corneum ou par simple lavage, comme décrit ci-après. Avantageusement, à titre d'échantillon cellulaire convenant à l'invention, on peut mentionner un échantillon de kératinocytes ou tout autre type cellulaire de la peau exprimant la Lacritine. Avantageusement, un polypeptide mis en oeuvre dans un procédé selon la présente invention peut être la Lacritine.

Agent modulateur Au sens de la présente invention, on entend par l'expression agent modulateur ou composé biologique ou chimique ou traitement physique susceptible de moduler l'expression et/ou l'activité biologique d'un polypeptide conforme à l'invention et/ou son interaction avec le syndecan-1 , tout composé ou phénomène physique susceptible d'agir, directement ou indirectement, sur au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou une séquence d'acides nucléiques codant pour celui-ci, ou sur un élément d'une voie de signalisation intra ou extra-cellulaire, ou d'une voie métabolique impliquant ledit polypeptide, ou sur un élément impliqué dans la régulation de la transcription et/ou la traduction d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide. Au sens de l'invention, on entend par moduler , au regard d'un effet donné, l'action de stimuler ou d'inhiber cet effet, aux fins, notamment, de lui conférer une intensité physiologique. Les composés biologiques ou chimiques, ou les traitements physiques, issus d'un procédé de criblage selon l'invention, peuvent être avantageusement mis en oeuvre à des fins cosmétiques ou thérapeutiques, notamment au regard de troubles cutanées ou capillaires, esthétiques ou pathologiques.

Ainsi, la présente invention permet avantageusement le criblage de nouveaux actifs, i.e. composés biologiques ou chimiques, pour le soin cosmétique de la peau et de ses annexes, plus particulièrement pour stimuler une prolifération et/ou un renouvellement des cellules terminales de la peau et/ou du follicule pileux, de préférence pour prévenir et/ou traiter un trouble cutané et/ou capillaire.

Avantageusement, l'invention permet le criblage de nouveaux actifs cosmétiques pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement, notamment pour prévenir et/ou traiter un amincissement d'un épiderme et/ou une perte de fermeté, d'élasticité, de densité et/ou de tonicité d'un épiderme et/ou la formation de rides et ridules, pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés de sécheresse, en particulier pour prévenir et/ou traiter une déshydratation de la peau, pour prévenir et/ou traiter les troubles cutanés dus à un déséquilibre des propriétés de barrière de la peau, en particulier pour stimuler les défenses antimicrobiennes cutanées, pour réguler les sécrétions sébacées de la peau, notamment pour prévenir et/ou traiter les troubles cutanés liés à l'hyperséborrhée ou l'hyposéborrhée, pour réguler la sudation, notamment pour prévenir et/ou traiter les troubles cutanés liés à une hyposudation ou une hypersudation, et pour stimuler la pousse du poil et des cheveux.

La présente invention permet avantageusement le criblage de nouveaux actifs, i.e. composés biologiques ou chimiques, pour le soin thérapeutique de la peau et de ses annexes, plus particulièrement pour favoriser la cicatrisation de la peau.

Selon un mode de réalisation, un agent modulateur, biologique ou chimique, convenant à l'invention peut être un agent stimulateur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression dudit polypeptide, ou de son interaction avec le syndecan-1. En particulier, un agent modulateur peut être un agent stimulateur tel que le mélange composé d'un lysat de Bifidobacterium longum et de phytosphingosine-salicylate. Un tel mélange peut être en particulier une composition comprenant un sérum composé à 10 % de lysat de Bifidobacterium longum (Bifidiobiotic complexe CLR) et 0,002 % de Phytosphingosine-SLC. Selon un autre mode de réalisation, un agent modulateur, biologique ou chimique, convenant à l'invention peut être un agent inhibiteur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression dudit polypeptide, ou de son interaction avec le syndecan-1.

En particulier, un agent modulateur peut être un agent inhibiteur choisi parmi les peptides ou peptidomimétiques issus de la Lacritine, les protéases ou activateurs de protéolyse de la Lacritine, les aptamers peptidiques ou nucléotidiques et les ARN interférents. Parmi les peptides ou peptidomimétiques sont plus particulièrement considérés 30 au moins une des séquences choisie parmi SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO : 9 ou SEQ ID NO : 10.

COMPOSITIONS La présente invention a pour objet une utilisation d'une quantité efficace d'au moins un polypeptide de séquences d'acides aminés représentée par SEQ ID NO : 4, un analogue de celui-ci ou un fragment de celui-ci, d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ce polypeptide, ou d'au moins un agent modulateur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression de ce polypeptide, ou de son interaction avec le syndecan-1, à titre d'agent utile pour le soin de la peau et de ses annexes. Avantageusement, de tels polypeptide, séquences d'acides nucléiques ou agents modulateurs peuvent être mis en oeuvre dans une composition cosmétique.

Selon un autre mode de réalisation, la présente invention a pour objet une utilisation d'une quantité efficace d'au moins un polypeptide de séquences d'acides aminés représentée par SEQ ID NO : 4, un analogue de celui-ci ou un fragment de celui-ci, d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ce polypeptide, ou d'au moins un agent modulateur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression de ce polypeptide, ou de son interaction avec le syndecan-1, pour la préparation d'une composition thérapeutique pour le soin de la peau et de ses annexes. Les compositions cosmétiques et thérapeutiques de l'invention sont plus particulièrement dédiées à la prévention et/ou au traitement des états cutanés, des états des follicules pileux, des poils ou des cheveux tels que définis précédemment.

Il est entendu que l'ensemble des compositions cosmétiques ou thérapeutiques considérées selon l'invention, mettent en oeuvre un milieu physiologiquement acceptable. Au sens de la présente invention, on entend désigner par milieu physiologiquement acceptable , un milieu convenant à l'application d'une composition sur la peau, le cuir chevelu, les lèvres et les fibres kératiniques comme les cheveux, les ongles et les poils, ou le cas échéant par voie orale ou parentérale. D'une manière générale, toute composition de l'invention peut être appliquée sur la peau, notamment sur toute zone cutanée du corps, ou ses annexes, en particulier les poils et cheveux. Une composition cosmétique selon l'invention peut contenir des adjuvants habituels dans le domaine cosmétique, tels que des gélifiants hydrophiles ou lipophiles, des additifs hydrophiles ou lipophiles, des conservateurs, des antioxydants, des solvants, des parfums, des charges, des filtres, des absorbeurs d'odeurs et des matières colorantes.

Les quantités des différents constituants des compositions selon l'invention sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés. La quantité de composé chimique ou biologique, de polypeptide, de séquence d'acides nucléiques ou d'agent modulateur conforme à l'invention contenue dans une composition selon l'invention, encore dite quantité efficace est, bien entendu, fonction de la nature du composé et de l'effet recherché et peut donc varier dans une large mesure. Pour donner un ordre de grandeur, une composition peut contenir un agent modulateur conforme à l'invention ou un polypeptide en une quantité représentant de 0,00001 % à 50 % du poids total de la composition, en particulier en une quantité représentant de 0,001 % à 10 % du poids total de la composition, et plus particulièrement en une quantité représentant de 0,1 % à 1 % du poids total de la composition. Selon un autre mode de réalisation, une composition cosmétique ou thérapeutique conforme à l'invention peut comprendre, en outre, au moins un agent actif cosmétique et/ou thérapeutique additionnel.

Actifs additionnels Comme exemples d'agents actifs additionnels utilisables dans le cadre de la présente invention, il peut être fait mention d'huiles cosmétiques, telles que les huiles de silicone, les huiles végétales de type triglycérides, les huiles hydrocarbonées telles que l'huile de Parleam et les esters d'acides gras et d'alcool gras. Il peut également être possible d'utiliser d'autres agents actifs permettant d'améliorer l'état de la peau et/ou de ses annexes, tels que des actifs hydratants ou humidifiants ou des agents actifs permettant d'améliorer la barrière lipidique naturelle, tels que des céramides, des sulfates de cholestérol et/ou des acides gras, et leurs mélanges.

Il peut également être possible d'utiliser des enzymes ayant une activité sur la peau et/ou de ses annexes, telles que des protéases, des lipases, des glucosidases, des amidases, des cérébrosidases et/ou des mélanases, et leurs mélanges. Comme autres exemples d'agents actifs convenant à la mise en oeuvre de la présente invention figurent : des actifs analgésiques, des actifs anti-levures, des actifs antibactériens, des actifs antiparasitaires, des actifs antifongiques, des actifs antiviraux, des actifs anti-inflammatoires stéroïdiens, des actifs anesthésiques, des actifs antiprurigineux, des actifs kératolytiques, des actifs anti-radicaux libres, des actifs anti-séborrhéiques, des actifs antipelliculaires, des actifs anti-acnéiques, des actifs visant à prévenir le vieillissement de la peau et/ou à améliorer son état, des actifs anti-dermatites, des actifs anti-irritants, des actifs immuno-modulateurs, des actifs pour le traitement de la peau sèche, des actifs anti-transpirants, des actifs anti-psoriatiques, des actifs protecteurs contre les UV, des actifs antihistaminiques, des actifs cicatrisants, des actifs auto-bronzants, des antioxydants tels que le thé vert ou des fractions actives de celui-ci, la glycérine, la laponite, la caféine, des huiles essentielles aromatiques, des colorants, des actifs dépigmentants, des lipo-régulateurs, des actifs adoucissants, rafraîchissants, déodorants, insensibilisants, blanchissants, nourrissants, des actifs diminuant la différenciation et/ou la prolifération et/ou la pigmentation cutanée, et leurs mélanges.

EVALUATION DE L'ETAT D'UN EPIDERME Selon un autre aspect, la présente invention concerne également l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil de caractérisation in vitro ou ex vivo d'un état de la peau. Les états cutanés considérés par l'invention sont notamment tels que définis précédemment. A titre d'exemple, il est possible de caractériser selon l'invention un état de la peau choisi parmi la sècheresse cutanée, telle que la xérose, le vieillissement cutané, notamment chronologique et/ou photo-induit, la peau grasse, l'atopie cutanée, la dermatite atopique, la pelade ou alopecia areata, l'ichtyose, le psoriasis, la rosacée, le lichen, l'acné, la dermite séborréhique, la kératodermie palmo-plantaire, ou la néoplasie maligne ou bénigne.

De manière préférée, l'utilisation permet de caractériser un état de la peau choisi parmi la sècheresse cutanée ou le vieillissement cutané chronologique et/ou photo-induit. Selon un mode de réalisation, un procédé de caractérisation d'un état de la peau comprend au moins les étapes consistant à : a) effectuer, dans un échantillon isolé de ladite peau, une mesure qualitative ou quantitative d'un polypeptide conforme à l'invention, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, et b) comparer ladite mesure effectuée à l'étape a) à une mesure de référence. Une mesure de référence peut être obtenue à partir d'un échantillon de peau qualifié de normal sur le plan physiologique, tel qu'une peau jeune et normalement hydratée. L'observation d'une déviation entre la mesure de référence et la mesure test, notamment la mesure de l'étape a), peut être indicative d'un éventuel trouble cutané qui peut être corrigé par l'utilisation de composés de l'invention. Un procédé de l'invention permet avantageusement de caractériser un état de la peau tel que défini précédemment, et en particulier choisi parmi la sècheresse cutanée ou le vieillissement cutané chronologique et/ou photo-induit.

La présente invention concerne, selon un autre de ses aspects, l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, pour caractériser l'efficacité d'un traitement cosmétique pour le soin de la peau et de ses annexes, notamment pour caractériser l'efficacité d'un traitement d'un trouble cutané tel que défini précédemment.

De préférence, l'utilisation de l'invention permet de caractériser l'efficacité d'un traitement cosmétique d'un trouble cutané en particulier choisi parmi la sècheresse cutanée ou le vieillissement cutané chronologique et/ou photo-induit. La présente invention concerne également un procédé cosmétique, ou encore non thérapeutique, pour mettre en évidence un effet d'un traitement cosmétique susceptible de faire régresser un trouble cutané chez un individu, comprenant au moins les étapes consistant à : a) effectuer, avant la mise en oeuvre du traitement ou procédé cosmétique, au moins une première mesure, dans un premier échantillon d'épiderme prélevé chez ledit individu, d'une activité biologique et/ou de l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention, ou de l'expression d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, b) effectuer, après la mise en oeuvre du traitement ou procédé cosmétique, au moins une seconde mesure, dans un second échantillon d'épiderme prélevé chez ledit individu, de ladite activité biologique et/ou de ladite expression dudit polypeptide ou de ladite expression de ladite séquence d'acides nucléiques déterminées à l'étape a), et c) comparer les première et deuxième mesures, notamment afin d'en déduire une information relative à un effet au moins de la mise en oeuvre du traitement cosmétique.

Les mesures effectuée aux étapes a) et/ou b) des procédés ci-dessus peuvent être réalisées au moyen de toute méthode connue de l'homme de l'art et, par exemple selon l'une des méthodes précédemment décrites. De manière préférée, le procédé de l'invention permet de mettre en évidence un effet d'un traitement cosmétique susceptible de faire régresser un trouble cutané tel que défini précédemment, en particulier choisi parmi la sécheresse cutanée ou le vieillissement cutané chronologique et/ou photo-induit. Les procédés de l'invention sont particulièrement avantageux dans la mesure où leur mise en oeuvre ne nécessite pas de recourir à une technique invasive. Un échantillon d'épiderme peut ainsi être obtenu par des techniques dites de stripping et directement analysé par une technique d'analyse conventionnelle, notamment telle que décrite précédemment. Ces strippings sont des surfaces collantes appliquées à la surface de l'épiderme comme le Blenderm de 3M, le D'squam (adhésif commercial de CuDERM), la colle cyanoacrylate ou la méthode du stripping vernis. Grâce à ces strippings , les cornéocytes adhérents et le contenu de leurs espaces intercellulaires peuvent être prélevés et soumis par la suite à une extraction permettant d'avoir accès au contenu protéique. Le prélèvement d'un échantillon convenant à un procédé de l'invention peut aussi être effectué de façon plus directe par lavages de la surface cutanée, au moyen par exemple d'accessoires de type turbine à ailette, de type cellule à spirale (tel que décrit dans le brevet FR 2 667 778) associée à un circuit fluidique, ou simplement par ajout/prélèvement d'une goutte de tampon à la surface de la peau. A titre indicatif, d'autres méthodes de prélèvement adaptées à la mise en oeuvre de l'invention peuvent être mentionnées, telles que des méthodes par grattage de la partie supérieure du Stratum Corneum au moyen d'un système bilames. Cette technique permet de recueillir des squames qui peuvent ensuite être directement analysés par différentes techniques pour déterminer les taux en minéraux, aminoacides ou lipides. Un procédé selon l'invention peut également être effectué sur un échantillon d'épiderme, prélevé à partir d'un modèle cellulaire épidermique, ou d'une peau isolée 30 reconstruite afin d'en qualifier l'état.

Comme indiqué précédemment, les utilisations et procédés de l'invention sont avantageusement effectués in vitro ou ex vivo. Toutefois, ces utilisations ou procédés peuvent également être mis en oeuvre in vivo sur des mammifères non humains ou sur des humains, notamment au travers d'essais cliniques, afin par exemple d'évaluer l'efficacité clinique ou l'innocuité de différents traitements de troubles cutanés, par exemple comme définis ci-dessus.

Selon un autre aspect, la présente invention se rapporte à un procédé de traitement cosmétique d'un trouble cutané comprenant au moins une étape consistant à appliquer sur une partie au moins de la peau, des poils et/ou des cheveux, au moins une composition cosmétique conforme à l'invention. Avantageusement, un procédé de l'invention permet de traiter un trouble cutané tel que défini précédemment, et en particulier choisi parmi la sécheresse cutanée ou le vieillissement cutané chronologique et/ou photo-induit.

Selon un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'une quantité efficace d'au moins un polypeptide conforme à l'invention ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, d'au moins un agent modulateur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques, ou de l'interaction dudit polypeptide avec le syndecan-1, pour la préparation et/ou l'amélioration d'un modèle cellulaire épithélial pluristratifié, notamment de type épidermique ou muqueux, et en particulier un modèle de peau reconstruite. L'intérêt de développer des modèles organotypiques les plus proches de conditions in-vivo est grand pour l'évaluation sécurité et efficacité des actifs et formules à 25 applications cosmétiques et dermatologiques. L'utilisation de Lacritine dans un milieu de culture est susceptible d'améliorer la qualité des modèles développés.

Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de préparation 30 d'une peau reconstruite isolée comprenant au moins l'étape de mettre en contact au moins une quantité efficace d'au moins un polypeptide conforme à l'invention ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, ou d'au moins un agent modulateur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques, ou de l'interaction dudit polypeptide avec le syndecan-1, avec des cellules susceptibles de générer une peau reconstruite isolée, et notamment des kératinocytes.

Au sens de l'invention, on entend désigner par modèle de peau reconstruite , un modèle dans lequel sont associés différents types cellulaires, tels que notamment les constituants naturels de la peau, à l'image par exemple des kératinocytes, des fibroblastes, des cellules de Langerhans et des mélanocytes. Les cellules de type fibroblastes peuvent être irradiées ou non.

De tels modèles et leur préparation sont connus de l'homme de l'art.

Au sens de la présente invention, un doit se comprendre, sauf indication contraire, au sens de au moins un . Les exemples et figures ci-après sont présentés à titre illustratif et non limitatif de l'invention.

FIGURES Figure 1 : représente les séquences d'acides nucléiques SEQ ID NO : 1, SEQ ID NO : 2 et SEQ ID NO : 3.

Figure 2 : représente les séquences d'acides aminés SEQ ID NO : 4, SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 6, SEQ ID NO : 7, SEQ ID NO : 8 , SEQ ID NO : 9 et SEQ ID NO : 10.

Exemple 1 : Mise en évidence de l'expression de la Lacritine au niveau de la 25 peau a) Protocole Des prélèvements in-vivo de type stripping-vernis, effectués selon le protocole décrit dans Mehul et al. J Biol Chem., 2000, 275(17):12841-7, sont réalisés au niveau des deux avant-bras (face postérieure), sur une surface de 90 cm', de deux groupes de sujets : 30 1) Groupe Peau Jeune : 30-40 ans, 20 sujets, peau sèche ; 2) Groupe Peau Agée : 60 -65 ans, 20 sujets, peau sèche.

Ces prélèvements de peau (stripping vernis de Stratum Corneum) sont ensuite analysés par protéomique au moyen d'une technique dite de marquage isobarique , pour évaluer l'expression de différentes protéines entre une peau âgée versus une peau jeune. Cette technique dite de marquage isobarique ou iTRAQTM repose sur le marquage des peptides tryptiques avec une série de réactifs, dits isobariques car possédant tous une masse moléculaire de 145 Da, et formant un lien covalent avec les amines primaires de l'extrémité amino-terminale de la chaîne latérale des résidus lysine. Les peptides marqués sont détectés par spectrométrie de masse avec la masse intrinsèque du peptide + 145 Da, provenant du réactif. A l'étape de fragmentation du peptide, la contribution de chacun des réactifs est appréciée par la libération d'ions (fragments) ayant des masses différentes spécifiques. Une telle méthode est précisément décrite par Zieske (J. Exp. Bot., 2006, 57 :1501) ou Wiese et al. (Proteomics, 2007, 7 :340). Le protocole utilisé, à savoir iTRAQ Reagents Multiplex kit (4352135), d'Applied Biosystems, a été mis en oeuvre conformément aux instructions du fabricant. L'évaluation de l'expression des protéines des échantillons prélevés est effectuée au moyen de deux études iTRAQ réalisées en parallèle.

b) Résultats Une analyse par protéomique différentielle basée sur les peptides de séquences d'acides aminés représentées par SEQ ID NO : 7, SEQ ID NO : 8 et SEQ ID NO : 9 montrent que la Lacritine humaine (uniprotKB/swissprot : Q9GZZ8 ou SEQ ID NO : 4) est identifiée pour tous les échantillons décrits ci-dessus. Des ratios peau âgée/peau sèche sont ainsi déterminés et les résultats de quantification pour la Lacritine indiquent un ratio moyen âgée/jeune égal à 0,38 (Ecart type = 0,33), ce qui prouve que la Lacritine est non seulement exprimée au niveau du Stratum Corneum d'un épiderme humain mais qu'elle est en plus majoritairement exprimée dans le groupe peau jeune et a tendance à être sous exprimée avec l'âge. La Lacritine, au regard de ces résultats, peut donc être mise à profit en tant que 30 nouveau marqueur d'un état de la peau, notamment de la peau âgée.

Exemple 2 : Evaluation de l'effet d'une composition contenant 10 % de lysat de Bifidobacterium longum et 0,002 % de phytosphingosine SLC sur le niveau d'expression de la Lacritine a) Protocole La présente étude porte sur des prélèvements de type stripping-vernis, effectués comme décrit dans Mehul et al. J Biol Chem., 2000, 275(17):12841-7, d'une surface de 90 cm réalisée au niveau de l'avant-bras, face postérieure, de 24 sujets femmes entre 40 et 45 ans, et présentant une caractéristique peau sèche . 16 de ces sujets sont traités par voie topique au niveau d'un seul des deux bras, 2 fois par jour, matin et soir, pendant 56 jours, soit 2 mois, avec une composition cosmétique caractérisée par un sérum composé à 10 % de lysat de Bifidobacterium longum (Bifidiobiotic complexe CLR) et 0,002 % de Phytosphingosine-SLC. Parmi les sujets testés avec la composition cosmétique, chacun est son propre témoin dans la mesure où les deux bras sont prélevés mais un seul bras est traité.

Le complexe CLR est un lysat enregistré sous le nom INCI : Bifidat ferment Lysate, sous le nom EINECS : Bifidobacterium longum, sous le N° EINECS : N° 306-168-4, et sous le N° CAS : N° 96507-89-0. Un tel lysat est notamment commercialisé sous la dénomination Repair Complex CLR par la société K. RICHTER GmbH.

Le dérivé phytosphingosine-salicylate est celui commercialisé par la société EVONICK GOLDSCHMIDT sous la dénomination Phytosphingosine SLC . Des prélèvements sont ainsi réalisés à JO et J56 sur chacun des 24 sujets, permettant ainsi de comparer quatre conditions, à savoir JO, J56, sujets Non Traité et sujets Traité .

La Lacritine présente au sein de ces prélèvements est ensuite quantifiée au moyen d'une analyse protéomique différentielle telle que décrite en exemple 1.

bl Résultats Pour chaque condition sujets Traité et Non traité , une moyenne des 30 ratios J56/J0 est obtenue, permettant ainsi d'évaluer l'effet du traitement lié au produit cosmétique. Les ratios J56/J0 sont calculés selon la formule suivante : % effet du traitement = 100 * ratio J56/JO Traité ù ratio J56/JO Non Traité ratio J56/J0 Non Traité La comparaison des moyennes des ratios J56/J0 des sujets Traité et Non traité montre une augmentation de l'expression de la Lacritine chez les sujets Traité de 491 % 220 après 2 mois de traitement topique avec la composition testée. Cette étude, attestant des propriétés de stimulation de l'expression de la Lacritine de ladite composition, a donc permis de démontrer que la Lacritine est effectivement un outil de criblage de composés biologiques ou chimiques, et en outre un outil efficace de caractérisation de l'efficacité d'un traitement cosmétique pour le soin de la peau et ses annexes.

Claims (22)

1. REVENDICATIONS1. Utilisation cosmétique d'une quantité efficace d'au moins un polypeptide de séquence d'acides aminés représentée par SEQ ID NO : 4, un analogue de celui-ci ou un fragment de celui-ci, d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ce polypeptide, ou d'au moins un agent modulateur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression de ce polypeptide, ou de son interaction avec le syndecan-1, à titre d'agent utile pour le soin de la peau et de ses annexes.
2. 2. Utilisation selon la revendication précédente, pour stimuler une 10 prolifération et/ou un renouvellement des cellules terminales de la peau et/ou du follicule pileux.
3. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, pour prévenir et/ou traiter un trouble cutané et/ou capillaire.
4. 4. Utilisation selon l'une quelconques des revendications 1 à 3, pour prévenir 15 et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement, notamment pour prévenir et/ou traiter un amincissement d'un épiderme et/ou une perte de fermeté, d'élasticité, de densité et/ou de tonicité d'un épiderme et/ou la formation de rides et ridules.
5. 5. Utilisation selon l'une quelconques des revendications 1 à 3, pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés de sécheresse, en particulier pour prévenir et/ou traiter une 20 déshydratation de la peau.
6. 6. Utilisation selon l'une quelconques des revendications 1 à 3, pour prévenir et/ou traiter les troubles cutanés dus à un déséquilibre des propriétés de barrière de la peau, en particulier pour stimuler les défenses antimicrobiennes cutanées.
7. 7. Utilisation selon l'une quelconques des revendications 1 à 3, pour réguler 25 les sécrétions sébacées de la peau, notamment pour prévenir et/ou traiter les troubles cutanés liés à l'hyperséborrhée ou l'hyposéborrhée.
8. 8. Utilisation selon l'une quelconques des revendications 1 à 3, pour réguler la sudation, notamment pour prévenir et/ou traiter les troubles cutanés liés à une hypersudation ou à une hyposudation. 30
9. 9. Utilisation selon l'une quelconques des revendications 1 à 3, pour stimuler la pousse du poil et des cheveux.
10. 10. Utilisation d'une quantité efficace d'au moins un polypeptide de séquence d'acides aminés représentée par SEQ ID NO : 4, un analogue de celui-ci ou un fragment de celui-ci, d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ce polypeptide, ou d'au moins un agent modulateur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression de ce polypeptide, ou de son interaction avec le syndecan-1, pour la préparation d'une composition thérapeutique pour le soin de la peau et de ses annexes.
11. 11. Utilisation selon la revendications précédente, dans laquelle la composition thérapeutique est destinée à la prévention et/ou traitement d'un état cutané choisi parmi l'ichtyose, la rosacée, le lichen, la dermite séborrhéique, la kératodermie palmo-plantaire, un trouble de la cicatrisation ou un trouble cutané impliquant des phénomènes de sécrétion et de processus d'invasion cellulaire, notamment dans le cadre de néoplasies malignes ou bénignes, le psoriasis, l'atopie cutanée, la dermatite atopique, l'acné, une pelade ou alopecia areata.
12. 12. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ledit polypeptide est un polypeptide de séquence d'acides aminés représentée par SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 6, SEQ ID NO : 7, SEQ ID NO : 8, SEQ ID NO : 9 ou SEQ ID NO : 10, un analogue de celui-ci ou un fragment de celui-ci.
13. 13. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ledit polypeptide est codé par une séquence d'acides nucléiques représentée par SEQ ID NO : 1, SEQ ID NO : 2 ou SEQ ID NO : 3, un analogue de celle-ci ou un fragment de celle-ci.
14. 14. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle l'agent modulateur est un agent stimulateur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression dudit polypeptide, ou de son interaction avec le syndecan-1, en particulier un agent stimulateur tel qu'un mélange composé d'un lysat de Bifidobacterium longum et de phytosphingosine-salicylate.
15. 15. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, dans laquelle l'agent modulateur est un agent inhibiteur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression dudit polypeptide, ou de son interaction avec le syndecan-1, en particulier un agent inhibiteur choisi parmi les peptides ou peptidomimétiques issus de la Lacritine, les protéases ou activateurs de protéolyse de la Lacritine, les aptamers peptidiques ou nucléotidiques et les ARN interférents.
16. 16. Utilisation d'au moins un polypeptide tel que défini selon la revendication 1, 12 ou 13, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil de criblage de composés biologiques ou chimiques ou de traitements physiques susceptibles de moduler l'activité biologique, la stabilité et/ou l'expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques, ou l'interaction dudit polypeptide avec le syndecan-1.
17. 17. Procédé de criblage de composés biologiques ou chimiques ou de traitements physiques susceptibles de moduler l'expression d'un polypeptide tel que défini en revendication 1, 12 ou 13, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, comprenant au moins les étapes consistant à : a) mettre en contact au moins une cellule isolée apte à exprimer ledit polypeptide ou ladite séquence d'acides nucléiques avec au moins un composé chimique ou biologique à tester, ou à exposer ladite cellule isolée au traitement physique à tester, dans des conditions propices à l'expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques, b) effectuer une mesure qualitative ou quantitative dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et c) comparer ladite mesure à une mesure de référence.
18. 18. Procédé de criblage de composés biologiques ou chimiques susceptibles de 20 moduler l'activité biologique d'un polypeptide tel que défini en revendication 1, 12 ou 13, comprenant au moins les étapes consistant à : a) mettre en contact au moins un polypeptide isolé tel que défini en revendication 1, 12 ou 13 avec au moins un composé chimique ou biologique à tester, dans des conditions propices à la manifestation de l'activité biologique dudit polypeptide, 25 b) effectuer une mesure qualitative ou quantitative de ladite activité biologique, et c) comparer ladite mesure à une mesure de référence.
19. 19. Utilisation d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une des revendications 1, 12 ou 13, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour 30 ledit polypeptide, à titre d'outil de caractérisation in vitro ou ex vivo d'un état de la peau.
20. 20. Procédé de caractérisation d'un état de la peau comprenant au moins les étapes consistant à :a) effectuer, dans un échantillon isolé de ladite peau, une mesure qualitative ou quantitative d'un polypeptide tel que défini selon l'une des revendications 1, 12 ou 13, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, et b) comparer ladite mesure effectuée à l'étape a) à une mesure de référence.
21. 21. Utilisation d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une des revendications 1, 12 ou 13, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, pour caractériser l'efficacité d'un traitement cosmétique pour le soin de la peau et de ses annexes, notamment pour caractériser l'efficacité d'un traitement d'un trouble cutané tel que défini selon l'une quelconques des revendications 3 à 11.
22. 22. Utilisation d'une quantité efficace d'au moins un polypeptide tel que défini selon l'une des revendications 1, 12 ou 13 ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, d'au moins un agent modulateur de l'activité, de la stabilité ou de l'expression dudit polypeptide ou de ladite séquence d'acides nucléiques, ou de l'interaction dudit polypeptide avec le syndecan-1, pour la préparation et/ou l'amélioration d'un modèle cellulaire épithélial pluristratifié, en particulier un modèle de peau reconstruite.