JP2004129663A

JP2004129663A - キシメニン酸またはそのエステルまたは塩を含有するブレンド、食品および食品補助剤、キシメニン酸またはそのエステルまたは塩のコンセントレ−ト、前記化合物およびこれらの組成物およびブレンドの使用、ならびにキシメニン酸を含む油の抽出方法および濃縮方法

Info

Publication number: JP2004129663A
Application number: JP2003336285A
Authority: JP
Inventors: Marco Eggink; マルコ　エギンク; Wiro Stam; ウィロ　スタム; Ulrike Schmid; ウルリーケ　シュミット; Claudia Koenen; クラウディア　クーネン; Julia Rogers; ジュリア　ロジャース; Anne Peilow; アン　ペイロウ; John Bosley; ジョン　ボスレイ
Original assignee: Loders Croklaan BV
Current assignee: Loders Croklaan BV
Priority date: 2002-09-27
Filing date: 2003-09-26
Publication date: 2004-04-30
Also published as: US20040115331A1; EP1402786A1

Abstract

【課題】キシメニン酸の食品への適用に適した新規ブレンドを提供する。
【解決手段】０．１〜９９．９質量％の天然物質から得られるキシメニン酸またはそのアルキルエステル、グリセロールエステル、ワックスエステルまたは食品的に認容性の塩と
０．１〜９９．９質量％、他の脂肪酸またはこれらのエステルまたは塩またはグリセリドを含有する新規ブレンドを提供する。
【選択図】なし

Description

　本発明は、キシメニン酸またはそのエステルまたは塩を含有するブレンド、食品および食品補助剤、キシメニン酸またはそのエステルまたは塩のコンセントレ−ト、前記化合物およびこれらの組成物およびブレンドの使用、ならびにキシメニン酸を含む油の抽出方法および濃縮方法に関する。

　樹木からのシードナッツオイル、たとえばキシメニア　アメリカーナ（Ximenia Americana）（マウンテンプラムまたはＭａｎｚｅｎｅｌｌａまたはＣａｇａｌｅｒａまたはＭａｎｚａｎａｄｅｌ　ｄｉａｂｏｌｏまたはタロウウッドとしても知られている）またはキシメニア　アフリカーナ（Ximenia Africana）またはサンタルム　スピクトウム（Santalum spictum）またはサンタルム　アクミナトウム（Santalum acuminatum）（Ｄｅｓｅｒｔ　ｑｕａｎｄｏｇまたはサンダルウッドまたはＫａｔｕｎｇａまたはＢｕｒｎ−ｂｕｒｎまたはＭａｎｇａｔａｉｓとしても公知である）またはサンタラム　アルブム（Santalum album）は、キシメニン酸（Ximenynic acid）（またはオクタデカ−トランス−１１−エン−９−イノック酸、９ａｌｌｔ−１８：２）と呼称されるアセチレン型天然脂肪酸を含有することが知られている。

　油は、次のような多くの健康における効果を有することが知られている：
ロイコトリエンＢ４インヒビターとしての活性
ホスホリパーゼＡ２インヒビターとしての活性
末梢血管障害に対する活性
頭痛に対する活性
腎不全または心不全に対する活性
皮膚の潰瘍に対する活性。
（Biochem Biophys Acta 921 (1987) p.621-624 および EP 304603 およびインターネットにより入手可能な情報を参照のこと）
　しかしながら、酸およびこれらの誘導体の入手可能性および適用可能性は、酸が、これらの樹木のシードオイルの多くにおいて、制限された量でのみ存在するといった事実によって制限される。さらに、これまで酸は、商業的適用に適していないクロマトグラフィー技術によってのみ単離されていた。したがって、これらの酸を、食品中で適用可能な形、好ましくは、食品に直接適用可能な系中に溶解された形にする必要がある。さらに、酸を、これまでに可能であったものに比べてより濃縮された形で入手可能にする必要があり、かつ、食品中に適用可能な形で、酸を濃縮するための新規方法を見出す必要があった。

　前記課題について研究した結果、キシメニン酸またはその誘導体を、炭素原子１〜１１個を有するアルキルエステルの形、グリセロールエステルの形（モノ−、ジ−、またはトリ−グリセリドまたはこれらの混合物）、酸が１２個またはそれ以上の炭素原子を有するアルコールでエステル化されたワックスエステルの形でか、あるいは食品的に認容性の塩として（たとえば、Ｎａ、ＫおよびＣａ塩）、食品への適用に適した量で含有する新規ブレンドを見出した。

　前記課題を解決する、食品への適用に適した新規ブレンドが要求される。

　本発明による課題は、次のようにして解決された。

　本発明は、第１に、キシメニン酸またはこれらのアルキルエステル、グリセロールエステル、ワックスエステルまたは食品的に認容性の塩、およびグリセリドを含有する、ブレンドに関し、この場合、このブレンドは、
（ｉ）０．１〜９９．９質量％、好ましくは１〜９９質量％、より好ましくは２〜９８質量％の天然物質から得られるキシメニン酸またはそのアルキルエステル、グリセロールエステル、ワックスエステルまたは食品的に認容性の塩と
（ｉｉ）０．１〜９９．９質量％、好ましくは１〜９９％、より好ましくは、２〜９８質量％の他の脂肪酸またはこれらのエステルまたは塩またはグリセリド、特にトリグリセリドを含有し、この場合、（ｉｉ）は、天然物質から得られるキシメニン酸とは類似しないものである。

　キシメニン酸の源とは類似しないグリセリドの存在は、ブレンドを、直接的に食品中に適用可能な形にすることを可能にする。

　さらに、キシメニア源から得られたブレンドはネルボン酸を含有し、すなわち、本発明によるブレンドは、ブレンド中のキシメニン酸とネルボン酸との質量比が、０．５〜５．０、好ましくは０．７５〜４．０、より好ましくは１．２〜３．５であることを特徴とする。特定の適用において、ブレンド中にさらにネルボン酸が存在することが有利であると見出された。

　キシメニン酸の濃縮された形は、以下に示すような方法によって製造された。これらのコンセントレートは、グリセリド中にキシメニン酸またはこれらのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたは食品的に認容性の塩を含有し、かつ、少なくとも１５％のキシメニン酸またはそのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたは塩誘導体、好ましくは少なくとも２０％のキシメニン酸と、少なくとも０．５％のネルボン酸またはこれらのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたはその塩、好ましくは、少なくとも５％のネルボン酸またはその誘導体とを含有する。

　適用することができる他のグリセリドは、食品用グリセリド、特に植物性グリセリド（vetable glycerides）、より好ましくはトリグリセリドの広範囲の群から選択することができる。他のグリセリドを使用することが好ましく、たとえば、ヤシ油、ココアバター、ココナッツ油、ヤシ殻油；ＣＬＡ−グリセリド、大豆油、オリーブ油、ヒマワリ油、ナタネ油、ベニバナ油、コーン油、綿実油、ココアバター等価物またはココアバター代替物；魚油；ルリヂザ油、松果油；コリアンダーオイル；菌油（fungal oil）、またはこれらの高オレイン変異体またはこれらの画分、またはこれらの硬化変異体または硬化変異体の画分または１個またはそれ以上のこれらの油および脂肪の混合物から成る群から選択される。しかしながら、さらに本発明のブレンド、特に遊離キシメニン酸との組合せ物中で、これらグリセリドの加水分解された脂肪酸残基に相当する遊離脂肪酸を使用することも可能である。さらに、遊離脂肪酸としてＣＬＡ（＝共役リノール酸）を使用することができる。

　適したブレンドは、食品中での特別な適用のために５℃および３５℃で、好ましいＮ−値を示すように設定される。Ｎ−値は、混合物上でのＮＭＲ−パルスによって測定されるような固体の脂肪含量を意味し、したがって安定ではない（すなわち、混合物は、最初に６０〜８０℃で融解され、０℃に冷却され、かつ３０分に亘って０℃に維持され、ここで、３０分に亘って維持される測定温度に加熱し、その後に、Ｎ−値を測定する）。好ましいブレンドは、非安定化ブレンド上のＮＭＲパルスによって測定された固体脂肪含量を示し、示された温度で、Ｎ_５＝５〜８０、好ましくは１０〜７０およびＮ_３５＝２０未満、好ましくは１〜５である。

　酸は、好ましくは、キシメニア種またはサンタラム種から単離された。グリセリドは、適した技術、たとえば、溶剤抽出法または圧搾法を用いて、種子から抽出することによって得られる。キシメニン酸エステルは、酵素的経路または化学的経路を用いて、必要とされるアルコール（グリセロールを含む）でエステル化することによって製造することができる。食品用の塩は、酸を相当する塩基で中和することによって得ることができる。

　さらに、酸化安定化剤の存在によって、酸および酸を含有するブレンドの貯蔵性を延長しうることが見出された。いくつかの場合において、さらに、酸安定化剤が、酸の健康作用上で相乗効果を有することが見出された。したがって、天然または合成のトコフェロール、ＢＨＴ、ＴＢＨＱ、ＢＨＡ、プロピルガレート；フリーラジカルスカベンジャー、抗酸化特性を有する酵素および脂肪酸アスコルビルエステルから成る群から選択された、酸化安定化剤の効果的な量を含有するブレンドを適用することが好ましい。効果的な量は化合物毎に異なっており、さらに、異なる健康的効果に対しても異なっていてもよい。しかしながら、効果的な量は、簡単に、わずかな試験によって測定することができる。一般に、抗酸化剤の量は、０．０５〜１５質量％（ブレンド上で）、特に、０．１〜５質量％で変化していてもよい。

　本発明の他の態様によれば、食品に関し、したがって本発明は、さらに効果的な量の健康成分を含有する食品を包含し、その際、健康成分は、キシメニン酸、またはこれらのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたはこれらの食品的に認容性の塩である。

　また、効果的な量は、過度の試験の必要なく、当業者によって簡単に決定することができる。一般に、０．５〜１０質量％の量が極めて効果的である。

　好ましい食品組成物は、マーガリン、脂肪相（fat continuous）または水相（water continuous）−または二相（bicontinuous）のスプレッド、低脂肪スプレッド、菓子、たとえばチョコレートまたはチョコレートコーティングまたはチョコレート充填物またはパンの具、アイスクリーム、アイスクリームコーティング、アイスクリーム封入物、ドレッシング、マヨネーズ、チーズ、クリーム代替物、乾燥スープ、飲料、シリアルバー、ソースおよびスナックバーである。

　本発明の新規ブレンドおよびコンセントレートの適用は、食品を制限するものではない。さらにこれらは、食品補助剤中で適用することもできる。したがって、本発明の一部は、キシメニン酸またはその誘導体の効果的な量を、包接材料または顆粒または粉末の形で含有する食品補助剤である。特別な補助剤において、酸をゼラチン、澱粉、改質化澱粉、小麦粉、改質化小麦粉、糖、特にショ糖、乳糖、ブドウ糖および果糖から成る群から選択された包接材料中に包接することが好ましい。

　さらに、キシメニン酸またはその誘導体が、他の新規の健康的効果を有していることが見出され、これはまた、本発明の一部である。特に、キシメニン酸およびその誘導体は、健康的効果を有する食品組成物または食品補助剤の製造のための使用に極めて適しており、その際、キシメニン酸またはそのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたはこれらの食品的に認容性の塩は、以下のような少なくとも１個の健康的効果を有する食品組成物または食品補助剤の製造のために使用される：
ｉ）体重の減少または調節
ｉｉ）インスリン耐性またはインスリン関連性の疾病、たとえば糖尿病の予防または治療
ｉｉｉ）アルツハイマー病の発症に関連する症状の開始の遅延、
ｉｖ）記憶機能の改善
ｖ）血液脂質レベルの低下
ｖｉ）皮膚の老化防止作用
ｖｉｉ）抗癌作用。

　さらに、キシメニン酸は、満腹（satiety）における有利な効果を有する。

　しかしながら、酸は、さらに化合物系、特に食品系における使用に極めて適した特性を示すように、硬さ、きめ、空気混和性、スプレッド特性、経口特性、口ざわり、フレーバーインパクト（flavour impact）、色、粘度および加工容易性を改善する。

　本発明の最終的な実施態様は、濃縮されたキシメニン酸コンセントレートを製造するための新規方法に関する。この方法は、以下の工程を含むキシメニン酸を含む油の抽出および濃縮のための方法を包含する：
（ｉ）キシメニア　アメリカーナ　ナッツを砕き、かつ、溶剤中で沸騰させる。
（ｉｉ）エクストラクトを固体から分離除去する。
（ｉｉｉ）溶剤を油から除去する。
（ｉｖ）このようにして得られた油を、リパーゼ、好ましくはカンジダ　ルゴザ（Candida rugosa）　リパーゼで部分的に加水分解し、
（ｖ）部分的に加水分解した生成物を、物理的分離技術によって、高濃度のキシメニン酸画分と、低濃度のキシメニン酸画分とに分離した。

例１
キシメニア　アメリカーナからの油の抽出
　５００ｇのキシメニア　アメリカーナ　果実殻を、ブレンダー中で激しく砕いた。砕いた殻を、３ｌの丸底フラスコ中に入れ、かつ、１．５ｌのアセトンまたはヘキサンを添加した。混合物を、３時間に亘って還流しながら沸騰させた。その後に、固体を濾別し、かつ溶剤を、真空下での蒸発によって得られる抽出液から除去した。得られる油（１８０ｇ）は不透明であり、かつ加熱しても透明にはならなかった。油をその脂肪酸組成について分析した（第Ｉ表　参照）。

例２
キシメニア　アメリカーナ中のキシメニン酸の酵素分析
　キシメニア　アメリカーナ油　２０ｇ（アセトンで抽出したもの）および脱イオン水　７ｍｌを、１００ｍｌのスクリューキャップガラス容器に入れた。１ｍｌの脱イオン水中の０．１ｇ　カンジダ　ロゴザ　リパーゼを添加し、かつ混合物をゆっくりとホモジナイズした。容器をシェーカー（１５０ｒｐｍ）上３５℃に置いた。一定の時点で、混合物試料を取り出した。これらの試料中で、部分的に加水分解された油およびＦＦＡをイソオクタンで抽出し、かつイソオクタンをＮ_２流によって除去した。試料中のＦＦＡ％を、電位差滴定によって測定した。ＦＦＡを固定化された第３アミン上で吸収し、かつ得られた油をその脂肪酸組成上で、ＦＡＭＥ分析によって分析した（第ＩＩ表）。

例３
アセチルコリン　エステラーゼの活性上でのサンタラム　アクミナトウム添加の効果
　アセチルコリンエステラーゼ活性を、エルマン法（Ellmans method）に基づく９６穴マイクロプレートリーダーを用いて測定した（G.I. Ellman, D. Courtney, V. Anderes Jr., R.M. Featherstone Boichem. pharmacol. 7 (1961) 88）。

　この画分の１ｇを、エタノール　１．５ｍｌｓおよび水　０．５ｍｌｓ中で水酸化カリウム０．２ｇを用いて、１時間に亘って還流することによって、遊離脂肪酸に加水分解した。カリウム塩を、塩酸の添加によって遊離脂肪酸に変換し、その後にヘキサン中で抽出した。サンタラム　アクミナトウム　殻のヘキサンヘキストラクトおよびヘキサンエクストラクトの鹸化画分を、１００ｍｇ／ｍｌの濃度で、エタノール／テトラヒドロフラン／アセトン　６０／２０／２０の混合物中に溶解した。必要である場合にはその後何倍かに希釈した。これらの溶液をさらに、５０ｍＭ　トリス−ＨＣｌバッファーｐＨ８　サンタラム　アクミナトウム　溶液（２０μｌ）、アセチルチオコリンヨウ化物（２５μｌ、１５ｍＭ／水）、５，５’−ジチオビス−２−ニトロ安息香酸（１２５μｌ　０．１Ｍ　ＮａＣｌおよび０．０２Ｍ　ＭｇＣｌ_２・６Ｈ_２Ｏを含有する５０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ８中３ｍＭ　１２５μｌ）、トリス−ＨＣｌバッファー（５０μｌ　０．１％ウシ血清アルブミンを含有するｐＨ８、５０ｍＭ）を、デンキウナギ（タイプ　ＶＩ−ｓ　凍結乾燥粉末）からのアセチルコリンエステラーゼと一緒にウェル中に入れた（２０μｌ　１．５μｇ／ｍｌ　０．１％のウシ血清アルブミンを含有する５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ　ｐＨ８バッファー）。

　吸収度を、それぞれ１３Ｓ毎に８回に亘って、４１０ｎｍで測定した。試験試料のＯＤの変化の割合を、ブランク溶液と比較した。

　結果を図１に示した。
例４
アセチルコリンエステラーゼの活性におけるキシメニア油鹸化画分の添加の効果
　アセチルコリンエステラーゼ活性を、Ｅｌｌｍａｎｓ法（G.I Ellman, D. Courtney, V. Andres Jr., R.M. Festherstone Biochem. Pharmacol. 7 (1961) 88）に基づく９６−穴マイクロプレートリーダーを用いて測定した。

　キシメニア油を、エタノール　１．５ｍｌｓおよび水　０．５ｍｌｓ中で、水酸化カリウム０．２ｇを用いて、１時間に亘って還流することによって加水分解した。カリウム塩を、塩酸塩の添加によって遊離脂肪酸に変換し、その後にヘキサン中で抽出した。

　キシメニア油の鹸化画分を、エタノール／テトラヒドロフラン／アセトン　６０／２０／２０の混合物中に、１００ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解した。その後に、必要であれば数倍に希釈した。これらの溶液をさらに、５０ｍＭ　トリス−ＨＣｌバッファーｐＨ８キシメニア溶液（２０μｌ）、アセチルチオコリンヨウ化物（２５μｌ　１５ｍＭ／水）、５，５’−ジチオ−ビス−２−ニトロ安息香酸（１２５μｌ　０．１ＮａＣｌおよび０．０２Ｍ　ＭｇＣｌ_２・６Ｈ_２Ｏを含有する５０ｍＭ　トリス−ＨＣｌバッファーｐＨ８）、トリス−ＨＣｌバッファー（５０μｌ　５０mＭ　０．１％ウシ血清アルブミンを含有する　ｐＨ８）を、デンキウナギ（タイプＶＩ−ｓ　凍結乾燥した粉末）からのアセチルコリンエステラーゼと一緒にウェル中に入れた（０．１％ウシ血清アルブミンを含有する、２０μｌの１．５μｇ／ｍｌ　５０ｍＭトリス−ＨＣｌ　ｐＨ８バッファー）。

　吸光度を、１３Ｓ毎に８回に亘って４１０ｎｍで測定した。試験材料のＯＤの変化の割合をブランク溶液と比較した。

　結果を図２に示した。
例５
膵臓リパーゼの活性上でのサンタラム　アクミナトウム添加の効果
　サンタラム　アクミナトウム　ナッツをヘキサンを用いて抽出し、脂質画分を得た。この画分１ｇを、エタノール　１．５ｍｌｓおよび水　０．５ｍｌｓ中で、水酸化カリウム　０．２ｇを用いて、１時間に亘って還流することによって、遊離脂肪酸に加水分解した。カリウム塩を、塩酸の添加によって遊離脂肪酸に変換し、その後にヘキサン中で抽出した。　基質エマルジョン（トリブチリン　１ｍｌ、乳化剤　３．３ｍｌｓ（塩化ナトリウム　０．０６ｇ、ＫＨ_２ＰＯ_４　０．００１３ｇ、水　１．５ｍｌｓ、グリセロール　１．８ｍｌ、アラビアゴム　０．０２ｇ）、水　１５．６７ｍｌｓ、タウロコール酸ナトリウム　０．０２７ｇを、ピペットで、自動滴定容器に、キシメニア油鹸化画分（０．００５ｇ〜０．０５ｇのレベルで添加した）と一緒に入れた。混合物をホモジナイズし、その後に３０℃の温度に平衡化し、かつｐＨを約６．５に調整した。

　ブタの膵臓リパーゼ溶液（０．５ｍｇ／ｍｌ水　０．５ｍｌｓ）を添加し、かつ、ｐＨ７に維持するために必要とされる水酸化ナトリウムの消費量を、６分間に亘ってモニタリングした。その後に、平均滴定速度が、２〜６分の最も適当な直線から得られた。

　結果は図３に示した。
例６
膵臓リパーゼの活性におけるキシメニア油鹸化画分の添加効果
　キシメニア油１ｇを、エタノール　１．５ｍｌｓおよび水　０．５ｍｌｓ中の水酸化カリウム０．２ｇを用いて、１時間に亘って還流することによって、遊離脂肪酸に加水分解した。カリウム塩を、塩酸を添加することによって遊離脂肪酸に変換し、かつヘキサン中で抽出した。

　基質エマルション（トリブチリン　１ｍｌ、乳化剤　３．３ｍｌｓ（塩化ナトリウム０．０６ｇ、ＫＨ_２ＰＯ_４０．００１３ｇ、水１．５ｍｌｓ、グリセロール１．８ｍｌｓ、アラビアゴム０．０２ｇ）、水　１５．６７ｍｌｓ、タウロコール酸ナトリウム　０．０２７ｇ）を、ピペットを用いて、自動滴定容器中に、キシメニアオイル鹸化画分と一緒に添加した（０．００５〜０．０５ｇのレベルで添加した）。その後に混合物をホモジナイズし、３０℃の温度に平衡化し、かつｐＨを約６．５に調整した。

　ブタ膵臓リパーゼ溶液（０．５ｍｇ／ｍｌ水　０．５ｍｌｓ）を添加し、かつｐＨ７に維持するために必要とされる水酸化ナトリウムの消費量を６分間に亘ってモニタリングした。その後に平均滴定速度を、２〜６分の最も適当な直線から得た。

　結果を図４に示した。
例７
　ＰＰＡＲ∀上でのキシメニア油およびサンタラム油鹸化性（ｓａｐｓ）の効果（レポーター遺伝子アッセイ）
細胞培養およびレポーター遺伝子アッセイ
　Ｃｏｓ−７細胞（ＥＣＡＣＣ　Ｎｏ．８７０２１３０２）を通常の方法で、１０％ＦＣＳ（ウシ胎児血清）を含むＤＭＥＭ中で、３７℃、５％ＣＯ_２で成長させ、８０％コンフルエントにした。一過性のトランスフェクション（Transient transfections）を、製品（Gibco BRL）に示されているように実施した。すなわち、細胞をウェルあたり５００００細胞で、２４ウェルにプレーティングし、かつ、１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ中で、３７℃で、５％ＣＯ_２で、一晩に亘ってインキュベートした。その後に細胞を、リポフェクトアミン試薬を用いてトランスフェクトした。それぞれのウェルに関して、ＤＮＡｍｉｘ（ｐＰＰＲＥ_３ＴＫ−ｌｕｃ　０．４０μｇ；ｐＲＬ−ＴＫ　０．０４μｇ；ｐｃＤＮＡ３．１（−）／ＰＰＡＲα　０．０３μｇ；ｐＲＳＶ／ＲＸＲα　０．０３μｇ／２５μｌ　ＤＭＥＭ中）　０．５μｇを、リポフェクトアミン１μｌと一緒にインキュベートし、さらにＤＭＥＭ２５μｌ中で４５分間に亘ってインキュベートした。その後に混合物を、ウェルあたり２５０μｌにし、かつ細胞に添加し、この場合、これらは、１ｍｌのＤＭＥＭで洗浄した。その後に細胞を、５時間に亘って、３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートし、かつ２０％ＳＢＣＳを含むＤＭＥＭ２５０μｌを添加した（木炭ストリッピング（charcoal stripped）したウシ胎児血清；Ｓｉｇｍａ）。細胞を、処理前に、３７℃で、５％ＣＯ_２で、１８時間に亘ってインキュベートした。トランスフェクションミックスを、細胞から除去し、かつトリートメントミックス（特定の濃度でのＤＭＳＯまたは鹸化油）で置換し、かつ、３７℃で、５％ＣＯ_２で、２４時間に亘ってインキュベートした。鹸化油（Ximenia americana, Santalum acuminatum）を、ＤＭＳＯ中のストックとして作製し、かつ、細胞に添加する直前に、１０％ＳＢＣＳを含有するＤＭＥＭ中に、１０００倍で希釈した（ウェル当たり５００μｌ）。それぞれの処理を三重反復的におこなった。その後に細胞を、ＰＢＳ　１ｍｌ（カルシウムまたはマグネシウム不含）で洗浄し、ウェル当たり１ｘパッシブライシスバッファー（Passive Lysis Buffer）（Ｄｕａｌ　Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　ａｓｓａｙ　ｋｉｔ　プロメガ社）１００μｌで溶解した。溶解を１５分に亘っておこない、その後に溶解物を、ホタルおよびウミシイタケルシフェラーゼに関してアッセイした。アッセイに関しては、溶解物２０μｌを取り出し、かつＭＬＸ　マイクロタイタープレートルミノメーターを用いて、キットの取り扱い説明書にしたがってアッセイをおこなった（Dynex）。

　図５および図６に示されたように、キシメニアｓａｐｓおよびサンタラムｓａｐｓの双方はＰＰＡＲαリガンドである。ＰＰＡＲα活性化と関連する健康効果とは、最適化された脂質代謝、癌の予防および治療、抗炎症性作用および皮膚の状態および老化防止に関する効果を含む。
例８
ＰＰＡＲ上でのサンタラム油鹸化性（ｓａｐｓ）の効果（レポーター遺伝子アッセイ）
レポーター遺伝子アッセイ
　このアッセイは、Ｋｌｉｅｗｅｒ　ｅｔ　ａｌ（Nature358 771-774 1992）によって記載されたものに基づく。すなわち、ｃｏｓ−７細胞（ECACC No. 87021302）を、０．３２５ｘ１０^５細胞／ウェルの濃度で、２４−ウェルプレート中に接種した。細胞を、３７℃／５％ＣＯ_２で、１０％ＦＣＳ、２ｍＭ　Ｌ−グルタミン、１００ｉＵ／ｍｌペニシリンおよび１００ｇ／ｍｌストレプトマイシンを含有するＤＭＥＭ中で成長させた。細胞をトランスフェクション媒体（２ｍＭ　Ｌ−グルタミンを含有するＤＭＥＭ）で洗浄し、その後に、一過的に４個のプラスミドにトランスフェクトした：ＰＰＡＲ−応答性ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子（ｐＰＰＲＥ３ＴＫ−ｌｕｃ）；ヒトＰＰＡＲ_γ１およびＲＸＲαｃＤＮＡｓをそれぞれ含有する哺乳類発現プラスミド（ｐｃＤＮＡ３／ｈＰＰＡＲγ１およびｐＲＳＶ／ｈＲＸＲα）および構造的にウミシイタケ（ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼ遺伝子を発現するコントロールプラスミド（ｐＲＬＴＫ，Ｐｒｏｍｅｇａ）。トランスフェクションを、リポフェクトアミン（Gibco Brl）を用いて、製品に示されたようにしておこなった。トランスフェクトされた細胞を、６時間に亘って、３７℃／５％　ＣＯ_２でインキュベートし、その後に、リガンド（油ｓａｐｓ）の存在下または不在下で、さらに４６時間に亘ってインキュベートした。４６時間の後に、細胞溶解物を製造し、かつホタルルシフェラーゼおよびウミシイタケルシフェラーゼのレベルを、Ｄｕａｌ　ルシフェラーゼアッセイシステム（プロメガ社）およびＭＬＸ　マイクロタイタープレートルミノメーター（Ｄｙｎｅｘ）を用いて測定した。ホタルルシフェラーゼ（ウミシイタケルシフェラーゼコントロールに対してノーマライズされたもの）は、レポーター遺伝子活性の尺度となる。これは、その後に、ＰＰＡＲ_γ活性のレベルに反映される。

　図７は、サンタラムｓａｐｓによる良好な活性を例証するものである。これは、短期間では慢性疲労、認知障害（記憶障害）および気分変動を含む症状の範囲内での利点を有していてもよい。長期間に亘っての利点は、心臓血管系疾病（脂質の低下）、ＩＩ型糖尿病（通常、老齢で生じるもの）および多のう胞性卵巣症候群に関する。
例９
　満腹感におけるキシメニン酸の効果を評価するために、我々は、エンテロエンドセリン　Ｌ−細胞による、満腹感を誘発するペプチド（excretion of satiety inducing peptides）（ＣＣＫ−８およびＧＬＰ−１　Ｌ）を測定した。試験の２日前に、１ｘ１０^６を、１２ウェル培養プレート中で培養した。試験日において、上清を、コントロールまたは試験物質を含む、Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ　重炭酸塩緩衝液（ＫＲＢ）で置き換えた。添加前に、溶液をｐＨ７．２に調整した。細胞を、３７℃で２時間に亘ってインキュベートした。インキュベーション後に、上清を回収し、かつ、ラジオイムノアッセイによって、分泌されたＣＣＫ−８またはＧＬＰ−１の量を測定した。この試験において、キシメニン酸でのＬ−細胞のインキュベーションは、等量のパルミチン酸でインキュベートした場合よりも、著しく優れたＣＣＫ−８およびＧＬＰ−１の放出を含む。この結果から、キシメニン酸の満腹感誘発能力は、パルミチン酸よりも著しく高いと推断した。
例１０
　シグナルペプチドコレシストキニン（ＣＣＫ）は、たとえば、脂肪酸のような食品成分に呼応して、腸中のエンドセリン細胞によって分泌された。ＣＣＫは、満腹感を生じさせるシグナルペプチドである。脂肪酸が、ＣＣＫ分泌を誘発することによるシグナルトランスダクション経路は、細胞内カルシウムの上昇に付随する。本発明の試験において、マウス由来のエンテロエンドセリン細胞系（ＳＴＣ−１細胞）のカルシウム応答上での、サンタラム油の効果を試験した。
方法
　ＳＴＣ−細胞を、１５％ウマ血清、２．５％ウシ胎児血清およびペニシリン（５０単位／ｍｌ）およびストレプトマイシン（５００μｇ／ｍｌ）を含有するＤｕｌｂｅｃｏ’ｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅｓ’ｓ培地（ＤＭＥＭ）中で、湿性の雰囲気下で、３７℃、５％ＣＯ_２で成長させた。

　細胞内カルシウム、［Ｃａ^２＋］_ｉを、カルシウム感受性蛍光色素Ｆｕｒａ−２を用いて、デュアル波長比イメージング技術（dual wavelength ratio imaging technique）を用いて測定した。細胞を、使用前に２４〜４８時間で、２４ウェルプレート中で、０．０２５％ポリ−Ｌ−リシンで被覆したカバースリップ上で、１〜２ｘ１０^１５細胞／ｃｍ^２の濃度でプレーティングした。その後に、カバースリップをＰＢＳで洗浄し、その後に、ＤＭＳＯ中に溶解した２μｌのＦｕｒａ−２（１μｇ／μｋ）および６μｌのプルロニック酸（０．０２５％）で、３７℃で、２０分に亘ってローディングした。その後に細胞を、３回に亘って、ＨＥＰＥＳ緩衝塩溶液（１４０　ＮａＣｌ、４．５　ＫＣｌ、１．２　ＣａＣｌ_２、１　ＭｇＳＯ_４、１０　ＨＥＰＥＳ酸、１０　ＨＥＰＥＳ塩および１０ｍＭ　グルコース、ｐＨ７．４）中で洗浄し、細胞外の染料を除去し、かつ使用のために灌流チャンバーに移した。高カリウムＲｉｎｇｅｒ’ｓ溶液（７０ｍＭ　Ｋ^＋）をカルシウム代謝およびＣＣＫ分泌の公知のレセプター非依存的刺激として使用した。５１０ｎｍの波長でのフルオレセンスマイクログラフは、３４０ｎｍおよび３８０ｎｍでの励起波長で、倒立エピフルオレセンスマイクロスコープ（inverted epifluorescence microscope）（Nikon Diaphot, Chiyoda, Japan）および徐冷したスキャンＣCDカメラ（Digital Pixel Ltd, Brighton, UK）を用いて捕獲した。画像を、２０秒のインターバルで獲得し、かつ、バックグランドを引いた後に、３４０／３８０の比を算定した。結果を、ｆｕｒａ−２　３４０ｎｍ：３８０ｎｍ蛍光色素比として示した。
結果
　図８および９から、サンタラム油（約５００μＭのキシメニン酸を含有する、３２１Ｃ−０１）が、ＳＴＣ１細胞中での細胞内カルシウム濃度を上昇させることが示された。これは、サンタラム油が、ＣＣＫの放出を刺激することによって満腹感を誘発することを示唆している。
食品試験
パネリング
　キシメニン酸を含有する食品を、キシメニン酸不含で参考のために製造された食品と比較した。キシメニン酸に富む製品と、参考製品とを、製造工程および製品の種々の物理的パラメータに関して比較した。

　感覚的スコアシートは、それぞれの属性に関するラインスケールを含む。スケールの範囲は０〜３であり、かつ以下のレベルによって特徴付けられた：
３．０＝大きく異なる
２．５＝極めて明らかに異なる
２．０＝明らかに異なる
１．５＝極めて識別可能な程度に異なる
１．０＝識別可能な程度に異なる
０．５＝わずかに異なる
０＝同等
キシメニア油／サンタラム油の製造
　キシメニア油／サンタラム油の製造を、以下のように実施した：
キシメニア／サンタラムナッツの殻を除去し、
キシメニア／サンタラムナッツを砕き、
還流下のアセトン中で、キシメニア／サンタラムナッツを抽出し、油を得て、
混合物を濾過し、
アセトンを蒸発させる。
結合混合物（Binding mixture）
結合混合物の製造

　約２９％の脂肪を、スキムミルクの粉末、結晶糖、ヨーグルト粉末およびレシチンと一緒に、ボールミル中で４０分に亘って混合した。キシメニア油を均一に、撹拌することによって結合混合物と混合した。参考製品については、結合混合物を２０％のエクストラビーン油と一緒に混合した。
ムースリバーの製造
　バーを、結合混合物　５５％と、ムースリ混合物（スーパーマーケットタイプ）　３５％、およびライスクリスプ１０％を混合することによって製造した。その後に、混合物を鋳型中で加工し、冷却し、離型し、被覆し、かつ冷却した。
結果のパネリング
　ムースリバーの製造における、参考製品とキシメニア製品との差異は見出されなかった。参考充填物を含有するバーは、ラインスケール上で“０”を示した。バーを以下の属性によって評価した。

考察
　パネリングの結果から、以下の考察が導かれる：
　キシメニア濃縮結合混合物を含有するバーのクランチ感、全体のきめおよび全体的な見た目は、参考例のバーに匹敵する。

　結合混合物へのキシメニアオイルの添加は、製造方法において影響がなかった。
コーティング
コーティングの製造方法

　脂肪およびレシチンを除くすべての成分は、ホバートミキサー（Hobart mixer）中で混合した。可能な限り少ないヤシ油を、ドウが形成されるまで極めてゆっくりと混合物中に添加した。その後に、ドウを精製し、かつコンチングし、全部で２５．６％までの残存するヤシ油を添加することによってコンチングした。最終的にレシチンを、コンチング工程が終了する前１５分に添加した。この混合物に、参考製品の場合には２０％のヤシ油を、かつキシメニア製品の場合には２０％のキシメニア油を添加した。
ムースリバーの製造
　バーは、結合混合物　５５％、ムースリ混合物　２５％（スーパーマーケットタイプ）、ビスケット再加工品（biscuit rework）　１０％およびライスクリスプ　１０％を混合することによって製造した。混合物をその後に鋳型中でプレスし、冷却し、離型し、被覆し、かつ冷却した。
結果のパネリング
　コーティング工程中において、キシメニアコーティングと参考のコーティングとの差異はみられなかった。参考のコーティングを用いて、コーティングされたバーを参考例とし、かつ、ラインスケール上で“０”と示した。バーを以下の属性について評価した：

考察
　パネリングの結果から、以下の考察を導くことができる：
　コーティングミックスへのキシメニア油の添加は、コーティングの製造およびコーティング工程において、コーティングミックスの性質に影響することはない。

　キシメニン酸に富むバーの全体のきめおよび全体の見た目は、参考例のバーに匹敵する。
スプレッド
脂肪をベースとするスプレッドの製造

　脂肪を、全乳粉末、スキムミルク粉末、結晶糖、およびレシチンと一緒に、ボールミル中で４０分に亘って混合した。参考例のスプレッドには、５％、１０％、１５％および２０％のエクストラビーン油を撹拌しながら添加した。キシメニアスプレッドに関しては、５％、１０％、１５％および２０％のキシメニア油を添加し、かつこれらのスプレッドは、参考例の製品に匹敵する。

　キシメニア油を含有する配合の他に、さらにスプレッドは、１０％のサンタラムアカミナツム油を含有するように製造された。
キシメニア油を含有するスプレッドのパネリングの結果

硬さの平均：
スティーブンズ　テクスチャー分析器の設定：距離：５ｍｍ　速度：０．５ｍｍ／秒

サンタラム　アクミナトウム油（Santalu, acuminatum oil）を含有するスプレッドのパネリングの結果

考察
パネリングの結果から、以下の考察が導かれる：
　キシメニア油およびサンタラム油に富む、脂肪をベースとするスプレッドの全体的なきめ、スプレッディング特性および全部的な見た目は、参考製品よりも良好である。

　キシメニン酸を含有するスプレッドは、すべての濃度において１７℃で良好な硬さを有することが見出された。５℃では、２０％のキシメニア油を有するスプレッドのみが、参考例のものよりも硬い。

本発明による実施例３の結果を示すグラフ図。

本発明による実施例４の結果を示すグラフ図。

本発明による実施例５の結果を示すグラフ図。

本発明による実施例６の結果を示すグラフ図。

本発明による実施例７の結果を示すグラフ図。

ＰＰＡＲの良好な活性を与えるサンタラムｓａｐｓを示す図。

ＳＴＣ−１細胞におけるカルシウム代謝を示す図。

Claims

　ブレンドが、
（ｉ）天然物質から得られるキシメニン酸またはそのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたは食品的に認容性の塩　０．１〜９９．９質量％、好ましくは１〜９９質量％、最も好ましくは２〜９８質量％、および
（ｉｉ）他の脂肪酸またはグリセリド、特にトリグリセリド　０．１〜９９．９質量％、好ましくは１〜９９質量％、最も好ましくは２〜９８質量％、この場合、これらはキシメニン酸の天然物質中において存在するものとは非類似である
を含む、キシメニン酸、そのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたはその食品的に認容性の塩、およびグリセリドを含有するブレンド。
　ブレンドの成分（ｉ）が、ネルボン酸を含有し、かつ、その際、ブレンド中のキシメニン酸とネルボン酸との質量比が０．５〜５．０、好ましくは０．７５〜４．０、最も好ましくは１．２〜３．５である、請求項１に記載のブレンド。
　少なくとも１５質量％のキシメニン酸またはそのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたは塩、好ましくは少なくとも２０質量％のキシメニン酸と、少なくとも０．５質量％のネルボン酸またはそのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたはその塩、好ましくは少なくとも５％のネルボン酸またはその誘導体とを有する、グリセリド中のキシメニン酸またはそのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたはその塩のコンセントレート。
　他のグリセリドまたはその誘導体が、ヤシ油、ココアバター、ココナッツ油、ヤシ殻油、ＣＬＡ−グリセリド、大豆油、オリーブ油、ヒマワリ油、ナタネ油、ベニバナ油、コーン油、綿実油、ココアバター等価物またはココアバター代替物、魚油、ルリジザ油、松果油、コリアンダー油、菌油、またはこれらの高オレイン変異体またはこれらの画分、またはこれらの硬化変異体または硬化変異体の画分、またはこれらの油および脂肪の一つまたはそれ以上の混合物、またはこれらの遊離脂肪酸または遊離ＣＬＡ酸から成る群から選択される、他のグリセリドを含有する、請求項１または２に記載のブレンド。
　ブレンドが、示された温度で、非安定化ブレンド上でＮＭＲによって測定された、Ｎ_５＝５〜８０、好ましくは１０〜７０、およびＮ_３５＝２０未満、好ましくは１〜５の固体脂肪含量を示す、請求項４に記載のブレンド。
　キシメニン酸またはその誘導体を、キシメニア種またはサンタラム種から単離する、請求項１から５までのいずれか１項に記載のブレンド。
　ブレンドが、好ましくは、天然または合成のトコフェロール、ＢＨＴ、ＴＢＨＱ、ＢＨＡ、プロピルガレート、フリーラジカルスカベンジャー、抗酸化特性を有する酵素および脂肪酸アルコルビルエステルから成る群から選択された、酸化安定化剤の効果的な量を含有する、請求項１から６までのいずれか１項に記載のブレンド。
　健康成分が、キシメニン酸またはそのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたはその食品的に許容性の塩である、効果的な量の健康成分を含有する食品。
　食品組成物、好ましくは脂肪をベースとした組成物が、マーガリン、脂肪相または水相または二相スプレッド、低脂肪スプレッド、菓子、たとえばチョコレートまたはチョコレートコーティングまたはチョコレート充填物またはパンの具、アイスクリーム、アイスクリームコーティング、アイスクリーム封入物、ドレッシング、マヨネーズ、チーズ、クリーム代替物、乾燥スープ、飲料、シリアルバー、ソースおよびスナックバーから成る群から選択される、請求項８に記載の食品。
　キシメニン酸またはその誘導体を、包接材料または顆粒または粉末の形で、効果的な量で含有する、食品補助剤。
　包接材料が、ゼラチン、澱粉、改質化澱粉、小麦粉、改質化小麦粉、糖、特にショ糖、乳糖、ブドウ糖および果糖から成る群から選択される、請求項１０に記載の食品補助剤。
　少なくとも一つの以下の健康的効果：
ｉ）体重の減少または調節
ｉｉ）インスリン耐性またはこれに関連する疾病、たとえば糖尿病の予防または治療
ｉｉｉ）アルツハイマー病の発症に関連する症状の開始の遅延
ｉｖ）記憶機能の改善
ｖ）血液脂質レベルの低下
ｖｉ）抗ガン作用
ｖｉｉ）皮膚の老化防止作用
を有する食品組成物または食品補助剤を製造するための、キシメニン酸、またはそのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたはその食品的に許容可能な塩を活性成分として含有する組成物の使用。
　キシメニン酸を含む油を抽出し、かつ濃縮するための方法において、以下の工程：
（ｉ）キシメニア　アメリカーナ　ナッツを砕き、かつ溶剤と一緒に沸騰させ、
（ｉｉ）エクストラクトを固体から分離し、
（ｉｉｉ）溶剤を油から除去し、
（ｉｖ）このようにして得られた油をリパーゼで、好ましくはカンジタ　ロゴサ　リパーゼで部分的に加水分解し、
（ｖ）部分的に加水分解された生成物を、物理的分離技術によって、キシメニン酸の高濃度画分とキシメニン酸の低濃度画分とに分離することを特徴とする、キシメニン酸を含む油を抽出し、かつ濃縮するための方法。
　化合物系、特に食品系において、硬さ、きめ、空気混和性、スプレッド特性、経口特性、口触り、フレーバーインパクト、色、粘度および加工容易性を、改善させるか／増強させるための、キシメニン酸またはその誘導体の使用。
　哺乳類において、満腹感を誘発するかおよび／または早めるか、および／また満腹感を増強させるかおよび／または延長させるための、キシメニア油またはサンタラム油、または他のキシメニン酸含有油またはキシメニン酸、またはそのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたはその食品的に許容可能な塩の使用。
　哺乳類において、満腹感を誘発するかおよび／または早めるか、および／または満腹感を増強させるかおよび／または延長させるための、
（ｉ）天然物質から得られるキシメニン酸またはそのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたは食品的に認容性の塩　０．１〜９９．９質量％、好ましくは１〜９９質量％、最も好ましくは２〜９８質量％、および
（ｉｉ）他の脂肪酸またはグリセリド、特にトリグリセリド　０．１〜９９．９質量％、好ましくは１〜９９質量％、最も好ましくは２〜９８質量％、この場合、これらは、キシメニン酸の天然物質中に存在するものとは非類似である
を含有するブレンド中での、キシメニン酸またはそのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたはその食品的に認容性の塩の使用。
　ブレンドの成分（ｉ）がネルボン酸を含有し、かつ、ブレンド中のキシメニン酸とネルボン酸との質量比が、０．５〜５．０、好ましくは０．７５〜４．０、最も好ましくは１．２〜３．５である、請求項１６に記載のブレンド。
　哺乳類において、満腹感を誘発するかおよび／または早めるか、および／または満腹感を増強させるかおよび／または延長させるための、少なくとも１５質量％のキシメニン酸またはそのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたはそれらの塩、好ましくは少なくとも２０質量％のキシメニン酸と、少なくとも０．５質量％のネルボン酸またはそのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたは塩、好ましくは少なくとも５質量％のネルボン酸またはその誘導体とを含有する、グリセリド中でのキシメニン酸またはそのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルのコンセントレートの使用。
　他のグリセリドまたはその誘導体が、ヤシ油、ココアバター、ココナッツ油、ヤシ殻油、ＣＬＡ−グリセリド、大豆油、オリーブ油、ヒマワリ油、ナタネ油、ベニバナ油、コーン油、綿実油、ココアバター等価物またはココアバター代替物、魚油、ルリジサ油、松果油、コリアンダーオイル、菌油、またはこれらの高オレイン変異体またはこれらの画分、またはこれらの硬化変異体または硬化変異体の画分、またはこれらの油および脂肪の一つまたはそれ以上の混合物、またはこれらの遊離脂肪酸または遊離ＣＬＡ酸から成る群から選択される、他のグリセリドを含有する、請求項１６または１７に記載のブレンド。
　示された温度で、非安定化ブレンド上のＮＭＲパルスによって測定された固体脂肪含量が、Ｎ_５＝５〜８０、好ましくは１０〜７０であり、かつＮ_３５＝２０未満、好ましくは１〜５である、請求項１９に記載のブレンド。
　キシメニン酸またはその誘導体が、キシメニア種またはサンタラム種から単離された、請求項１６から２０までのいずれか１項に記載のブレンド。
　ブレンドが、好ましくは、天然または合成のトコフェロール、ＢＨＴ、ＴＢＨＱ、ＢＨＡ、プロピルガレート、フリーラジカルスカベンジャー、抗酸化特性を有する酵素および脂肪酸アスコルビルエステルから成る群から選択された、効果的な量の酸化安定化剤を含有する、請求項１６から２１までのいずれか１項に記載のブレンド。
　哺乳類において、満腹感を誘発するかおよび／または早めるか、および／または満腹感を増強させるかおよび／または延長するための、健康成分として、キシメニン酸またはそのアルキルエステルまたはグリセロールエステルまたはワックスエステルまたは食品的に認容性の塩を効果的な量で含有する食品組成物の使用。
　食品組成物、好ましくは脂肪をベースとする組成物が、マーガリン、脂肪相または水相または二相のスプレッド、低脂肪スプレッド、菓子、たとえばチョコレートまたはチョコレートコーティングまたはチョコレート充填物またはパンの具、アイスクリーム、アイスクリームコーティング、アイスクリーム封入物、ドレッシング、マヨネーズ、チーズ、クリーム代替物、乾燥スープ、飲料、シリアルバー、ソースおよびスナックバーから成る群から選択される、請求項２３に記載の食品組成物。
　哺乳類において、満腹感を誘発するか、および／または早めるか、および／または満腹感を増強させるか、および／または延長させるための、キシメニン酸またはその誘導体を効果的な量で、包接材料または顆粒または粉末の形で含有する食品補助剤の使用。
　包接材料が、ゼラチン、澱粉、改質化澱粉、小麦粉、改質化小麦粉、糖、特にショ糖、乳糖、ブドウ糖および果糖から成る群から選択される、請求項２５に記載の食品補助剤。