JP2902122B2 - カラム充填剤及びその製造方法 - Google Patents
カラム充填剤及びその製造方法Info
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- JP2902122B2 JP2902122B2 JP2405804A JP40580490A JP2902122B2 JP 2902122 B2 JP2902122 B2 JP 2902122B2 JP 2405804 A JP2405804 A JP 2405804A JP 40580490 A JP40580490 A JP 40580490A JP 2902122 B2 JP2902122 B2 JP 2902122B2
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Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、カラム充填剤および
その製造方法に関するものである。上記カラム充填剤
は、例えば液体クロマトグラフィーによる生体試料の分
離または除蛋白に用いることができる。
その製造方法に関するものである。上記カラム充填剤
は、例えば液体クロマトグラフィーによる生体試料の分
離または除蛋白に用いることができる。
【０００２】
【従来の技術】生体試料中の物質（例えば薬物）の分析
に、クロマトグラフィー、例えば高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）技術を用いることは周知である。し
かし、血清のように多量の蛋白質を含む生体試料の分析
に際しては、試料をクロマトグラフィーにかける前に除
蛋白の操作が必要とされた。ところが、除蛋白の操作は
繁雑であり、また分析精度に悪影響を及ぼすという欠点
があった。
に、クロマトグラフィー、例えば高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）技術を用いることは周知である。し
かし、血清のように多量の蛋白質を含む生体試料の分析
に際しては、試料をクロマトグラフィーにかける前に除
蛋白の操作が必要とされた。ところが、除蛋白の操作は
繁雑であり、また分析精度に悪影響を及ぼすという欠点
があった。
【０００３】そこで、除蛋白操作を行なうことなく、直
接生体試料を処理できるクロマトグラフィー用充填剤の
開発が望まれた。このような充填剤としては、多孔性担
体の細孔の内面と外面に異なる性質を付与し、小さな分
子を細孔内面に吸着させ、蛋白のような巨大分子は吸着
させずに素通りさせるものが提案されている。これに属
するものとしては下記のようなものがあるが、何れも欠
点を有しており、まだ満足できるものではなかった。
接生体試料を処理できるクロマトグラフィー用充填剤の
開発が望まれた。このような充填剤としては、多孔性担
体の細孔の内面と外面に異なる性質を付与し、小さな分
子を細孔内面に吸着させ、蛋白のような巨大分子は吸着
させずに素通りさせるものが提案されている。これに属
するものとしては下記のようなものがあるが、何れも欠
点を有しており、まだ満足できるものではなかった。
【０００４】（ｉ）内外面に疎水性基を導入した後、細
孔内に侵入できない酵素を用いて外面の疎水性基を切断
除去し、ついで外面に親水性基を結合させたもの（特開
昭６１−６５１５９号および特開平１−１２３１４５
号）。これは、酵素反応を利用するので工程が複雑化
し、また品質がばらつき易い。
孔内に侵入できない酵素を用いて外面の疎水性基を切断
除去し、ついで外面に親水性基を結合させたもの（特開
昭６１−６５１５９号および特開平１−１２３１４５
号）。これは、酵素反応を利用するので工程が複雑化
し、また品質がばらつき易い。
【０００５】（ii）と上記（ｉ）と同様の方法におい
て、酵素の代りにプラズマを用いて製造したもの（特開
昭６２−１５８１１３号）。これは、プラズマの使用に
基づき（ｉ）と同様な欠点がある。
て、酵素の代りにプラズマを用いて製造したもの（特開
昭６２−１５８１１３号）。これは、プラズマの使用に
基づき（ｉ）と同様な欠点がある。
【０００６】（iii）緩和な反応条件下で修飾用シラン
カップリング剤を反応させて実質的に外面のみに修飾基
を結合させ、ついで強い反応条件下で別の修飾用シラン
カップリング剤を反応させて内面に修飾基を結合させた
もの（日本分析化学会第３８年会講演要旨集４頁（１９
８９年）、講演番号１Ａ０４）。これは、細孔の内外面
における反応性の差が少ないため条件設定が難かしく、
製品にばらつきを生じ易い。
カップリング剤を反応させて実質的に外面のみに修飾基
を結合させ、ついで強い反応条件下で別の修飾用シラン
カップリング剤を反応させて内面に修飾基を結合させた
もの（日本分析化学会第３８年会講演要旨集４頁（１９
８９年）、講演番号１Ａ０４）。これは、細孔の内外面
における反応性の差が少ないため条件設定が難かしく、
製品にばらつきを生じ易い。
【０００７】（iv）内外面にまず３−グリシドキシプロ
ピル基を導入し、ついでフェニル基を導入した後、グリ
シドキシ基を加水分解したもので、内外面の性質の差を
物理的性質の差に依存したもの（クロマトグラフィア
（Ｃhromatographia）２９巻２２３−２２７頁）。これ
は、内外面に区別なくフェニル基を導入し得る試剤が限
定され、フェニル基とジオール基の比率の調節も困難で
製品にばらつきを生じやすく、分離能も満足できるもの
ではない。
ピル基を導入し、ついでフェニル基を導入した後、グリ
シドキシ基を加水分解したもので、内外面の性質の差を
物理的性質の差に依存したもの（クロマトグラフィア
（Ｃhromatographia）２９巻２２３−２２７頁）。これ
は、内外面に区別なくフェニル基を導入し得る試剤が限
定され、フェニル基とジオール基の比率の調節も困難で
製品にばらつきを生じやすく、分離能も満足できるもの
ではない。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】この発明は、上記のよ
うな欠点がなく、分離能、再現性、耐久性がすぐれ、製
造が容易なカラム充填剤を提供しようとするものであ
る。
うな欠点がなく、分離能、再現性、耐久性がすぐれ、製
造が容易なカラム充填剤を提供しようとするものであ
る。
【０００９】
【課題を解決するための手段】すなわち、この発明は、 （１）多孔性担体の細孔内面および外面に、（ｉ）アル
キルシリル基（置換基としての芳香族基またはキラル分
割能を有する基を含んでいてもよい）またはアリールシ
リル基、および（ii）２，３−ジヒドロキシプロポキシ
低級アルキルシリル基が混合して導入されていることを
特徴とする、カラム充填剤、 （２）多孔性担体に、 （イ）グリシドキシ基を有する低級アルキルシランカッ
プリング剤を反応させ、 （ロ）ついで、アルキル基（置換基としての芳香族基ま
たはキラル分割能を有する基を含んでいてもよい）また
はアリール基を有するシランカップリング剤を反応さ
せ、 （ハ）グリシドキシ基を加水分解してジオール基を生成
させ、 （ニ）グリシドキシ基を有する低級アルキルシランカッ
プリング剤を反応させ、同時またはその後にグリシドキ
シ基を加水分解してジオール基を生成させることを特徴
とする、上記（１）記載のカラム充填剤の製造方法、お
よび （ホ）アルキル基（置換基としての芳香族基またはキラ
ル分割能を有する基を含んでいてもよい）またはアリー
ル基を有するシランカップリング剤を反応させ、 （ニ）ついで、グリシドキシ基を有する低級アルキルシ
ランカップリング剤を反応させ、同時またはその後にグ
リシドキシ基を加水分解してジオール基を生成させるこ
とを特徴とする、上記（１）記載のカラム充填剤の製造
方法を提供するものである。
キルシリル基（置換基としての芳香族基またはキラル分
割能を有する基を含んでいてもよい）またはアリールシ
リル基、および（ii）２，３−ジヒドロキシプロポキシ
低級アルキルシリル基が混合して導入されていることを
特徴とする、カラム充填剤、 （２）多孔性担体に、 （イ）グリシドキシ基を有する低級アルキルシランカッ
プリング剤を反応させ、 （ロ）ついで、アルキル基（置換基としての芳香族基ま
たはキラル分割能を有する基を含んでいてもよい）また
はアリール基を有するシランカップリング剤を反応さ
せ、 （ハ）グリシドキシ基を加水分解してジオール基を生成
させ、 （ニ）グリシドキシ基を有する低級アルキルシランカッ
プリング剤を反応させ、同時またはその後にグリシドキ
シ基を加水分解してジオール基を生成させることを特徴
とする、上記（１）記載のカラム充填剤の製造方法、お
よび （ホ）アルキル基（置換基としての芳香族基またはキラ
ル分割能を有する基を含んでいてもよい）またはアリー
ル基を有するシランカップリング剤を反応させ、 （ニ）ついで、グリシドキシ基を有する低級アルキルシ
ランカップリング剤を反応させ、同時またはその後にグ
リシドキシ基を加水分解してジオール基を生成させるこ
とを特徴とする、上記（１）記載のカラム充填剤の製造
方法を提供するものである。
【００１０】上記多孔性担体としては、ヒドロキシ基を
有する無機質多孔性材料からなる顆粒、例えばシリカ、
多孔性ガラス、ヒドロキシアパタイト、けいそう土等で
作られた多孔体が含まれる。多孔性担体は、通常粒径５
−２０μmで、比表面積が２００−５００m2／g程度であ
る。シリカとしては、細孔径の大きなものが好ましい。
有する無機質多孔性材料からなる顆粒、例えばシリカ、
多孔性ガラス、ヒドロキシアパタイト、けいそう土等で
作られた多孔体が含まれる。多孔性担体は、通常粒径５
−２０μmで、比表面積が２００−５００m2／g程度であ
る。シリカとしては、細孔径の大きなものが好ましい。
【００１１】上記のアルキルシリル基におけるアルキル
としては、炭素原子数４〜２０のものが好ましく、７−
１８のものがさらに好ましく、８−１５のものが最も好
ましい。
としては、炭素原子数４〜２０のものが好ましく、７−
１８のものがさらに好ましく、８−１５のものが最も好
ましい。
【００１２】アルキルは、直鎖でもよく、また１個以
上、例えば１−２個の分岐を有していてもよい。また、
置換基として、１個以上、例えば１−２個の芳香族基
（好ましくはフェニル、トリル、キシリル、クメニル等
の炭素原子数６−１２、好ましくは６−８の単環性芳香
族基）を有することができる。さらに、置換基として、
１個以上、例えば１−２個のキラル分割能を有する基
（例えば（Ｒ）−Ｎ−３，５−ジニトロベンゾイルフェ
ニルグリシン、３，５−ジニトロベンゾイルナフチルグ
リシンまたはバリン、t−ロイシンもしくはプロリンと
ナフチルエチルアミンとの尿素誘導体等から誘導される
基）を有することができる。
上、例えば１−２個の分岐を有していてもよい。また、
置換基として、１個以上、例えば１−２個の芳香族基
（好ましくはフェニル、トリル、キシリル、クメニル等
の炭素原子数６−１２、好ましくは６−８の単環性芳香
族基）を有することができる。さらに、置換基として、
１個以上、例えば１−２個のキラル分割能を有する基
（例えば（Ｒ）−Ｎ−３，５−ジニトロベンゾイルフェ
ニルグリシン、３，５−ジニトロベンゾイルナフチルグ
リシンまたはバリン、t−ロイシンもしくはプロリンと
ナフチルエチルアミンとの尿素誘導体等から誘導される
基）を有することができる。
【００１３】代表的なアルキルの例は、ブチル、ペンチ
ル、ヘキシル、ヘプチル、イソヘプチル、２−エチルヘ
キシル、オクチル、イソオクチル、ノニル、２，４，５
−トリメチルヘキシル、デシル、ウンデシル、ドデシ
ル、トリデシル、テトラデシル、３−メチル−４−エチ
ルウンデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデ
シル、オクタデシル、ノナデシル、イコサニル、および
これらの芳香族置換体、例えばベンジル、フエネチル、
スチリル、２−フェニルプロピル等、並びにキラル分割
能を有する基で置換されたこれらの基である。
ル、ヘキシル、ヘプチル、イソヘプチル、２−エチルヘ
キシル、オクチル、イソオクチル、ノニル、２，４，５
−トリメチルヘキシル、デシル、ウンデシル、ドデシ
ル、トリデシル、テトラデシル、３−メチル−４−エチ
ルウンデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデ
シル、オクタデシル、ノナデシル、イコサニル、および
これらの芳香族置換体、例えばベンジル、フエネチル、
スチリル、２−フェニルプロピル等、並びにキラル分割
能を有する基で置換されたこれらの基である。
【００１４】上記アリールシリル基におけるアリールと
しては、アルキル上の置換基として上に述べたもの、す
なわち炭素原子数６−１２個の単環性芳香族基（例えば
フェニル、トリル、キシリル、クメニル等の１−２個の
低級アルキル置換分を有していてもよいフェニル）が好
ましい。
しては、アルキル上の置換基として上に述べたもの、す
なわち炭素原子数６−１２個の単環性芳香族基（例えば
フェニル、トリル、キシリル、クメニル等の１−２個の
低級アルキル置換分を有していてもよいフェニル）が好
ましい。
【００１５】２，３−ジヒドロキシプロポキシ低級アル
キル基における低級アルキルとしては、炭素原子数２−
６のものが好ましく、３−５のものがさらに好ましく、
また分岐を有することができる。２，３−ジヒドロキシ
プロポキシ基は、低級アルキルの任意の位置に結合する
ことができる。
キル基における低級アルキルとしては、炭素原子数２−
６のものが好ましく、３−５のものがさらに好ましく、
また分岐を有することができる。２，３−ジヒドロキシ
プロポキシ基は、低級アルキルの任意の位置に結合する
ことができる。
【００１６】
【製造法】この発明のカラム充填剤は、例えば上記
（２）および（３）に示した方法により製造することが
できる。これらの方法を詳細に説明すると次の通りであ
る。
（２）および（３）に示した方法により製造することが
できる。これらの方法を詳細に説明すると次の通りであ
る。
【００１７】（２）の方法： まず、工程（イ）において、多孔性担体にグリシドキシ
基を有する低級アルキルシランカップリング剤を反応さ
せる。グリシドキシ基を有する低級アルキルシランカッ
プリング剤としては、けい素原子に３個以下、好ましく
は１個のグリシドキシ基を有する低級アルキル基が結合
し、残りの結合手に脱離基（例えば、ハロゲン、低級ア
ルコキシ、１−（トリ低級アルキルシリル）イミノ低級
アルコキシ、好ましくは低級アルコキシ）が少なくとも
１個結合し、所望により１−２個の低級アルキル基が結
合した化合物が用いられる。この反応は、実質的無水の
非極性溶媒（例えばトルエン、キシレン等）中で還流下
に行なうのが好ましい。
基を有する低級アルキルシランカップリング剤を反応さ
せる。グリシドキシ基を有する低級アルキルシランカッ
プリング剤としては、けい素原子に３個以下、好ましく
は１個のグリシドキシ基を有する低級アルキル基が結合
し、残りの結合手に脱離基（例えば、ハロゲン、低級ア
ルコキシ、１−（トリ低級アルキルシリル）イミノ低級
アルコキシ、好ましくは低級アルコキシ）が少なくとも
１個結合し、所望により１−２個の低級アルキル基が結
合した化合物が用いられる。この反応は、実質的無水の
非極性溶媒（例えばトルエン、キシレン等）中で還流下
に行なうのが好ましい。
【００１８】次に、工程（ロ）において、上で得た生成
物にアルキル基またはアリール基を有するシランカップ
リング剤を反応させる。アルキル基またはアリール基を
有するシランカップリング剤としては、けい素原子に３
個以下、好ましくは１個のアルキル基またはアリール基
が結合し、残りの結合手に脱離基（好ましくは塩素、臭
素等のハロゲン）が結合し、所望により１−２個の低級
アルキル基が結合した化合物が用いられる。この反応は
縮合剤（例えばピリジ、トリエチルアミンのような塩
基）の存在下に行なうのが好ましい。溶媒としては、実
質的無水の非極性溶媒が用いられる。反応は、還流下に
行なうのが好ましい。なお、上記２つの反応における多
孔性担体とカップリング剤の量はとくに限定されない
が、通常、表面シラノール量（例えば８．５μmol／
m2）に対し、カップリング剤０．５〜４．０当量程度と
するのが適当である。また縮合剤を用いる際の使用量と
しては、カップリング剤に対し２．５当量程度で充分で
ある。
物にアルキル基またはアリール基を有するシランカップ
リング剤を反応させる。アルキル基またはアリール基を
有するシランカップリング剤としては、けい素原子に３
個以下、好ましくは１個のアルキル基またはアリール基
が結合し、残りの結合手に脱離基（好ましくは塩素、臭
素等のハロゲン）が結合し、所望により１−２個の低級
アルキル基が結合した化合物が用いられる。この反応は
縮合剤（例えばピリジ、トリエチルアミンのような塩
基）の存在下に行なうのが好ましい。溶媒としては、実
質的無水の非極性溶媒が用いられる。反応は、還流下に
行なうのが好ましい。なお、上記２つの反応における多
孔性担体とカップリング剤の量はとくに限定されない
が、通常、表面シラノール量（例えば８．５μmol／
m2）に対し、カップリング剤０．５〜４．０当量程度と
するのが適当である。また縮合剤を用いる際の使用量と
しては、カップリング剤に対し２．５当量程度で充分で
ある。
【００１９】次に、工程（ハ）において、上で得た生成
物中のグリシドキシ基を加水分解する。この反応は、グ
リシドキシ基の加水分解に慣用される方法、例えばアセ
トニトリルを含む酸（例えば過塩素酸）水溶液中で還流
する方法により行なうことができる。
物中のグリシドキシ基を加水分解する。この反応は、グ
リシドキシ基の加水分解に慣用される方法、例えばアセ
トニトリルを含む酸（例えば過塩素酸）水溶液中で還流
する方法により行なうことができる。
【００２０】最後に、工程（ニ）において、上で得た生
成物にグリシドキシ基を有する低級アルキルシランカッ
プリング剤を反応させると共に、グリシドキシ基を加水
分解する。この２つの反応は、上に述べたのと同様の方
法で２段に分けて実施することもできなくはないが、１
段で同時に実施するのが便利である。１段の場合、反応
を酸性の水溶液（例えば過塩素酸水溶液）中で実施する
と、両反応を同時に行なうことができる。
成物にグリシドキシ基を有する低級アルキルシランカッ
プリング剤を反応させると共に、グリシドキシ基を加水
分解する。この２つの反応は、上に述べたのと同様の方
法で２段に分けて実施することもできなくはないが、１
段で同時に実施するのが便利である。１段の場合、反応
を酸性の水溶液（例えば過塩素酸水溶液）中で実施する
と、両反応を同時に行なうことができる。
【００２１】（３）の方法： まず、工程（ホ）において、多孔性担体にアルキルまた
はアリール基を有するシランカップリング剤を反応させ
る。この反応は、前記工程（ロ）の反応と同様に行なう
ことができる。次に、工程（ヘ）において、上で得た生
成物にグリシドキシ基を有する低級アルキルシランカッ
プリング剤を反応させると共に、グリシドキシ基を加水
分解する。この反応は、前記工程（ニ）の反応と同様に
行なうことができる。
はアリール基を有するシランカップリング剤を反応させ
る。この反応は、前記工程（ロ）の反応と同様に行なう
ことができる。次に、工程（ヘ）において、上で得た生
成物にグリシドキシ基を有する低級アルキルシランカッ
プリング剤を反応させると共に、グリシドキシ基を加水
分解する。この反応は、前記工程（ニ）の反応と同様に
行なうことができる。
【００２２】上記の方法において、工程（イ）、
（ニ）、（ヘ）のグリシドキシ基を有する低級アルキル
シランカップリング剤並びに工程（ロ）、（ホ）のアル
キル基またはアリール基を有するシランカップリング剤
（特に工程（ニ）、（ヘ）のカップリング剤）のモル数
を調節することにより、カラム充填剤に結合するアルキ
ルまたはアリールシリル基と２，３−ジヒドロキシプロ
ポキシ低級アルキルシリル基の比率を任意に調節するこ
とができる。また、工程（ニ）、（ヘ）のカップリング
剤のモル数を増すことにより、細孔内面に対する外面の
ジオール基の比率を増すことができる。
（ニ）、（ヘ）のグリシドキシ基を有する低級アルキル
シランカップリング剤並びに工程（ロ）、（ホ）のアル
キル基またはアリール基を有するシランカップリング剤
（特に工程（ニ）、（ヘ）のカップリング剤）のモル数
を調節することにより、カラム充填剤に結合するアルキ
ルまたはアリールシリル基と２，３−ジヒドロキシプロ
ポキシ低級アルキルシリル基の比率を任意に調節するこ
とができる。また、工程（ニ）、（ヘ）のカップリング
剤のモル数を増すことにより、細孔内面に対する外面の
ジオール基の比率を増すことができる。
【００２３】
【作用および効果】この発明のカラム充填剤は、多孔性
担体に導入するアルキルまたはアリール基とジオール基
を容易に適当な比率に調節することができるので、蛋白
等の巨大分子が吸着されずに素通りし、薬物等の比較的
小さい分子が疎水性の差に基づいて分離吸着されるもの
とすることができる。また、製造に酵素やプラズマを用
いないで製造が容易で再現性がよく、品質が一定したも
のを得ることができ、不安定な基が結合していないので
耐久性がすぐれている。したがって、この発明のカラム
充填剤は、血清のような蛋白を含む生体試料中の薬物や
代謝物質の分析に便利で価値が高いものである。なお、
上記の製造法のうち、（３）の方法は、工程数が少ない
ため、カラム特性についてバッチ間の変動が少なく再現
性がすぐれている。
担体に導入するアルキルまたはアリール基とジオール基
を容易に適当な比率に調節することができるので、蛋白
等の巨大分子が吸着されずに素通りし、薬物等の比較的
小さい分子が疎水性の差に基づいて分離吸着されるもの
とすることができる。また、製造に酵素やプラズマを用
いないで製造が容易で再現性がよく、品質が一定したも
のを得ることができ、不安定な基が結合していないので
耐久性がすぐれている。したがって、この発明のカラム
充填剤は、血清のような蛋白を含む生体試料中の薬物や
代謝物質の分析に便利で価値が高いものである。なお、
上記の製造法のうち、（３）の方法は、工程数が少ない
ため、カラム特性についてバッチ間の変動が少なく再現
性がすぐれている。
【００２４】
【実施例】以下、この発明の実施例に基づいてさらに詳
細に説明する。
細に説明する。
【００２５】実施例１ オクチルシリル基および２，３−ジヒドロキシプロポキ
シプロピルシリル基を有するシリカの製造 （１）３−グリシドキシプロピルシリル基を有するシリ
カの製造 デベロシル（Ｄevelosil）６０−５ シリカ２gにトル
エン１２０ｍｌを加え、共沸により水を除いた後、３−
グリシドキシプロピルトリメトキシシラン３．８ｍｌを
加え、９０〜９５℃で６時間反応させた。反応済みシリ
カをろ取し、６０ｍｌのトルエンおよび６０ｍｌのメタ
ノールで洗浄し、３−グリシドキシプロピルシリル基を
有するシリカを得た。 （２）オクチルシリル基および３−グリシドキシプロピ
ルシリル基を有するシリカの製造 ３−グリシドキシプロピルシリル基を有するシリカ２g
にトルエン８０ｍｌを加え、さらに、オクチルトリクロ
ルシラン２．４ｍｌおよびピリジン６ｍｌを加えた後、
９時間還流した。反応済みシリカ誘導体をろ取し、６０
ｍｌのトルエンおよび６０ｍｌのメタノールで洗浄し、
オクチルシリル基および３−グリシドキシプロピルシリ
ル基を有するシリカを得た。 （３）オクチルシリル基および２，３−ジヒドロキシプ
ロポキシプロピルシリル基を有するシリカの製造 上記（２）で製造したシリカ誘導体２gを３０％のアセ
トニトリルを含むpＨ３．０の過塩素酸水溶液１００ｍ
ｌ中に加え、７時間還流した。アセトニトリル５０ｍｌ
で洗浄後、さらに、１０％のアセトニトリルを含むpＨ
３．０の過塩素酸水溶液１００ｍｌ中に加え、８時間還
流した。得られたシリカ誘導体を水６０ｍｌおよびメタ
ノール６０ｍｌで洗浄し、オクチルシリル基および２，
３−ジヒドロキシプロポキシプロピルシリル基を有する
シリカを得た。 （４）再度の２，３−ジヒドロキシプロポキシプロピル
シリル基の導入 上記（３）で得られたシリル誘導体２gを４．６４ｍｌ
の３−グリシドキシプロピルトリメトキシシランを含む
pＨ３．５の過塩素酸水溶液に加え、９０℃で４時間反
応した。得られたシリカ誘導体を水６０ｍｌおよびメタ
ノール６０ｍｌで洗浄し、目的とする充填剤を得た。
シプロピルシリル基を有するシリカの製造 （１）３−グリシドキシプロピルシリル基を有するシリ
カの製造 デベロシル（Ｄevelosil）６０−５ シリカ２gにトル
エン１２０ｍｌを加え、共沸により水を除いた後、３−
グリシドキシプロピルトリメトキシシラン３．８ｍｌを
加え、９０〜９５℃で６時間反応させた。反応済みシリ
カをろ取し、６０ｍｌのトルエンおよび６０ｍｌのメタ
ノールで洗浄し、３−グリシドキシプロピルシリル基を
有するシリカを得た。 （２）オクチルシリル基および３−グリシドキシプロピ
ルシリル基を有するシリカの製造 ３−グリシドキシプロピルシリル基を有するシリカ２g
にトルエン８０ｍｌを加え、さらに、オクチルトリクロ
ルシラン２．４ｍｌおよびピリジン６ｍｌを加えた後、
９時間還流した。反応済みシリカ誘導体をろ取し、６０
ｍｌのトルエンおよび６０ｍｌのメタノールで洗浄し、
オクチルシリル基および３−グリシドキシプロピルシリ
ル基を有するシリカを得た。 （３）オクチルシリル基および２，３−ジヒドロキシプ
ロポキシプロピルシリル基を有するシリカの製造 上記（２）で製造したシリカ誘導体２gを３０％のアセ
トニトリルを含むpＨ３．０の過塩素酸水溶液１００ｍ
ｌ中に加え、７時間還流した。アセトニトリル５０ｍｌ
で洗浄後、さらに、１０％のアセトニトリルを含むpＨ
３．０の過塩素酸水溶液１００ｍｌ中に加え、８時間還
流した。得られたシリカ誘導体を水６０ｍｌおよびメタ
ノール６０ｍｌで洗浄し、オクチルシリル基および２，
３−ジヒドロキシプロポキシプロピルシリル基を有する
シリカを得た。 （４）再度の２，３−ジヒドロキシプロポキシプロピル
シリル基の導入 上記（３）で得られたシリル誘導体２gを４．６４ｍｌ
の３−グリシドキシプロピルトリメトキシシランを含む
pＨ３．５の過塩素酸水溶液に加え、９０℃で４時間反
応した。得られたシリカ誘導体を水６０ｍｌおよびメタ
ノール６０ｍｌで洗浄し、目的とする充填剤を得た。
【００２６】実施例２ ブチルシリル基および２，３−ジヒドロキシプロポキシ
プロピルシリル基を有するシリカの製造 （１）３−グリシドキシプロピル基を有するシリカの製
造 実施例１の（１）と同様にして３−グリシドキシプロピ
ル基を有するシリカを得た。 （２）ブチル基および３−グリシドキシプロピル基を有
するシリカの製造 上記（１）で製造したシリカ誘導体２gのトルエン８０
ｍｌを加え、ブチルトリクロルシラン１．７３ｍｌおよ
びピリジン６ｍｌを加えた後、９時間還流した。反応済
みシリカ誘導体をろ取し、６０ｍｌのトルエンおよび６
０ｍｌのメタノールで洗浄し、ブチルシリル基および３
−グリシドキシプロピルシリル基を有するシリカを得
た。 （３）ブチルシリル基および２，３−ジヒドロキシプロ
ポキシプロピルシリル基を有するシリカの製造 上記（２）で製造したシリカ誘導体２gを５％のアセト
ニトリルを含むpＨ３．０の過塩素酸水溶液１００ｍｌ
中に加え、７時間還流した。アセトニトリル５０ｍｌで
洗浄後、さらに、５％のアセトニトリルを含むpＨ３．
０の過塩素酸水溶液１００ｍｌ中に加え、８時間還流し
た。得られたシリカ誘導体を水６０ｍｌおよびメタノー
ル６０ｍｌで洗浄し、ブチルシリル基および２，３−ジ
ヒドロキシプロピルプロポキシシリル基を有するシリカ
誘導体を得た。 （４）再度の２，３−ジヒドロキシプロポキシプロピル
シリル基の導入 上記（３）で得られたシリカ誘導体２gを１．１６ｍｌ
の３−グリシドキシプロピルトリメトキシシランを含む
pＨ３．５の過塩素酸水溶液に加え、９０℃で４時間反
応した。得られたシリカ誘導体を水６０ｍｌおよびメタ
ノール６０ｍｌで洗浄し、目的とする充填剤を得た。
プロピルシリル基を有するシリカの製造 （１）３−グリシドキシプロピル基を有するシリカの製
造 実施例１の（１）と同様にして３−グリシドキシプロピ
ル基を有するシリカを得た。 （２）ブチル基および３−グリシドキシプロピル基を有
するシリカの製造 上記（１）で製造したシリカ誘導体２gのトルエン８０
ｍｌを加え、ブチルトリクロルシラン１．７３ｍｌおよ
びピリジン６ｍｌを加えた後、９時間還流した。反応済
みシリカ誘導体をろ取し、６０ｍｌのトルエンおよび６
０ｍｌのメタノールで洗浄し、ブチルシリル基および３
−グリシドキシプロピルシリル基を有するシリカを得
た。 （３）ブチルシリル基および２，３−ジヒドロキシプロ
ポキシプロピルシリル基を有するシリカの製造 上記（２）で製造したシリカ誘導体２gを５％のアセト
ニトリルを含むpＨ３．０の過塩素酸水溶液１００ｍｌ
中に加え、７時間還流した。アセトニトリル５０ｍｌで
洗浄後、さらに、５％のアセトニトリルを含むpＨ３．
０の過塩素酸水溶液１００ｍｌ中に加え、８時間還流し
た。得られたシリカ誘導体を水６０ｍｌおよびメタノー
ル６０ｍｌで洗浄し、ブチルシリル基および２，３−ジ
ヒドロキシプロピルプロポキシシリル基を有するシリカ
誘導体を得た。 （４）再度の２，３−ジヒドロキシプロポキシプロピル
シリル基の導入 上記（３）で得られたシリカ誘導体２gを１．１６ｍｌ
の３−グリシドキシプロピルトリメトキシシランを含む
pＨ３．５の過塩素酸水溶液に加え、９０℃で４時間反
応した。得られたシリカ誘導体を水６０ｍｌおよびメタ
ノール６０ｍｌで洗浄し、目的とする充填剤を得た。
【００２７】実施例３ 血清試料の直接注入による薬物の分析 実施例１で製造した充填剤を、内径４．６mm、長さ５cm
のＨＰＬＣ用ステンレス管に充填した。このカラムを用
いて、ヒト管理血清（Ａ）およびヒト管理血清にフェノ
バルビタール（２０μg／ｍｌ）を添加したもの（Ｂ）
の分離を調べた。移動相としては、１００mＭ ＮaＨ2Ｐ
Ｏ4−１００mＭ Ｎa2ＨＰＯ4−ＣＨ3CN(4.25-4.25-1.5)
を0.6ml/分で送液し、検出は２５４nmで行なった。ま
た、注入量は１０μｌであった。得られたクロマトグラ
ムを図１および図２に示す。図１では、ヒト血清蛋白の
ピークが、注入後直ち溶出した。図２から、ヒト血清蛋
白の後に、フェバルビタールのピークが溶出し、血清成
分と良好に分離していることがわかる。
のＨＰＬＣ用ステンレス管に充填した。このカラムを用
いて、ヒト管理血清（Ａ）およびヒト管理血清にフェノ
バルビタール（２０μg／ｍｌ）を添加したもの（Ｂ）
の分離を調べた。移動相としては、１００mＭ ＮaＨ2Ｐ
Ｏ4−１００mＭ Ｎa2ＨＰＯ4−ＣＨ3CN(4.25-4.25-1.5)
を0.6ml/分で送液し、検出は２５４nmで行なった。ま
た、注入量は１０μｌであった。得られたクロマトグラ
ムを図１および図２に示す。図１では、ヒト血清蛋白の
ピークが、注入後直ち溶出した。図２から、ヒト血清蛋
白の後に、フェバルビタールのピークが溶出し、血清成
分と良好に分離していることがわかる。
【００２８】実施例４ フェニル基およびジオール基を有する混成機能相シリカ
の製造 （１）フェニル基を有するシリカの製造 デベロシル９０−５シリカ３．８ｇにトルエン２００ｍ
ｌを加え、共沸より水を除いた後、フェニルトリメトキ
シシラン１．４２ｍｌ（５マイクロモル／ｍ2）および
ピリジン１．５１ｍｌを加え、還流下７時間反応させ
た。反応済みシリカをろ取し、６０ｍｌのトルエンおよ
び６０ｍｌのメタノールで洗浄し、フェニル基を有する
シリカを得た。 （２）フェニル基と２，３−ジヒドロキシプロポキシプ
ロピル基を有するシリカの製造 上記（１）で得られたシリカ誘導体１．４ｇを２．１ｍ
ｌの３−グリシドキシプロピルトリメトキシシランを含
むｐＨ３．５の水溶液に加え、還流下５時間反応させ
た。得られたシリカ誘導体を水６０ｍｌおよびメタノー
ル６０ｍｌで洗浄し、目的とする充填剤を得た。
の製造 （１）フェニル基を有するシリカの製造 デベロシル９０−５シリカ３．８ｇにトルエン２００ｍ
ｌを加え、共沸より水を除いた後、フェニルトリメトキ
シシラン１．４２ｍｌ（５マイクロモル／ｍ2）および
ピリジン１．５１ｍｌを加え、還流下７時間反応させ
た。反応済みシリカをろ取し、６０ｍｌのトルエンおよ
び６０ｍｌのメタノールで洗浄し、フェニル基を有する
シリカを得た。 （２）フェニル基と２，３−ジヒドロキシプロポキシプ
ロピル基を有するシリカの製造 上記（１）で得られたシリカ誘導体１．４ｇを２．１ｍ
ｌの３−グリシドキシプロピルトリメトキシシランを含
むｐＨ３．５の水溶液に加え、還流下５時間反応させ
た。得られたシリカ誘導体を水６０ｍｌおよびメタノー
ル６０ｍｌで洗浄し、目的とする充填剤を得た。
【００２９】実施例５ 血清試料の直接注入による薬物の分析 実施例４で製造した充填剤を、内径４．６ｍｍ、長さ５
ｃｍのＨＰＬＣ用ステンレス管に充填した。このカラム
を用いて、ヒト管理血清（Ｃ）およびヒト管理血清にフ
ェニトイン（２５μｇ／ｍｌ）およびカルバマゼピン
（５μｇ／ｍｌ）を標準添加したもの（Ｄ）の分離を調
べた。移動相は、１００ｍＭ ＮａＨ2ＰＯ4−１００ｍ
Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4−ＣＨ3ＣＮ（４．７５−４．７５−
０．５）を０．６ｍｌ／分で送液し、検出は２５４ｎｍ
で行なった。また、注入量は２０μｌであった。得られ
たクロマトグラムを図３および図４に示した。図３で
は、ヒト血清蛋白のピークが、注入後直ちに溶出した。
図４では、ヒト血清蛋白のピークの後に、フェニトイン
およびカルバマゼピンのピークが溶出し、血清成分と良
好に分離していることがわかる。
ｃｍのＨＰＬＣ用ステンレス管に充填した。このカラム
を用いて、ヒト管理血清（Ｃ）およびヒト管理血清にフ
ェニトイン（２５μｇ／ｍｌ）およびカルバマゼピン
（５μｇ／ｍｌ）を標準添加したもの（Ｄ）の分離を調
べた。移動相は、１００ｍＭ ＮａＨ2ＰＯ4−１００ｍ
Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4−ＣＨ3ＣＮ（４．７５−４．７５−
０．５）を０．６ｍｌ／分で送液し、検出は２５４ｎｍ
で行なった。また、注入量は２０μｌであった。得られ
たクロマトグラムを図３および図４に示した。図３で
は、ヒト血清蛋白のピークが、注入後直ちに溶出した。
図４では、ヒト血清蛋白のピークの後に、フェニトイン
およびカルバマゼピンのピークが溶出し、血清成分と良
好に分離していることがわかる。
【図１】この発明のカラム充填剤を用いて、ヒト血清を
分析した結果を示す図である。
分析した結果を示す図である。
【図２】この発明のカラム充填剤を用いて、フェノバル
ビタールを含むヒト血清を分析した結果を示す図であ
る。
ビタールを含むヒト血清を分析した結果を示す図であ
る。
【図３】この発明のカラム充填剤を用いて、ヒト血清を
分析した結果を示す図である。
分析した結果を示す図である。
【図４】この発明のカラム充填剤を用いて、フェニトイ
ンおよびカルバマゼピンを含むヒト血清を分析した結果
を示す図である。
ンおよびカルバマゼピンを含むヒト血清を分析した結果
を示す図である。
１ 血清蛋白 ２ フェノバルビタール ３ 血清蛋白 ４ フェニトイン ５ カルバマゼピン
フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) G01N 30/48 B01D 15/08 B01J 20/22 ＣＡ（ＳＴＮ)
Claims (3)
- 【請求項１】 多孔性担体の細孔内面および外面に、
（ｉ）アルキルシリル基（置換基としての芳香族基また
はキラル分割能を有する基を含んでいてもよい）または
アリールシリル基、および（ii）２，３−ジヒドロキシ
プロポキシ低級アルキルシリル基が混合して導入されて
いることを特徴とする、カラム充填剤。 - 【請求項２】 多孔性担体に、 （イ）グリシドキシ基を有する低級アルキルシランカッ
プリング剤を反応させ、 （ロ）ついで、アルキル基（置換基としての芳香族基ま
たはキラル分割能を有する基を含んでいてもよい）また
はアリール基を有するシランカップリング剤を反応さ
せ、 （ハ）グリシドキシ基を加水分解してジオール基を生成
させ、 （ニ）グリシドキシ基を有する低級アルキルシランカッ
プリング剤を反応させ、同時またはその後にグリシドキ
シ基を加水分解してジオール基を生成させることを特徴
とする、請求項１記載のカラム充填剤の製造方法。 - 【請求項３】 多孔性担体に、 （ホ）アルキル基（置換基としての芳香族基またはキラ
ル分割能を有する基を含んでいてもよい）またはアリー
ル基を有するシランカップリング剤を反応させ、 （ヘ）ついで、グリシドキシ基を有する低級アルキルシ
ランカップリング剤を反応させ、同時またはその後にグ
リシドキシ基を加水分解してジオール基を生成させるこ
とを特徴とする、請求項１記載のカラム充填剤の製造方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2405804A JP2902122B2 (ja) | 1990-06-05 | 1990-12-25 | カラム充填剤及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2-146617 | 1990-06-05 | ||
| JP14661790 | 1990-06-05 | ||
| JP2405804A JP2902122B2 (ja) | 1990-06-05 | 1990-12-25 | カラム充填剤及びその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0440366A JPH0440366A (ja) | 1992-02-10 |
| JP2902122B2 true JP2902122B2 (ja) | 1999-06-07 |
Family
ID=26477417
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2405804A Expired - Lifetime JP2902122B2 (ja) | 1990-06-05 | 1990-12-25 | カラム充填剤及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2902122B2 (ja) |
-
1990
- 1990-12-25 JP JP2405804A patent/JP2902122B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0440366A (ja) | 1992-02-10 |
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