JP4160401B2 - Ｃ−ｊｕｎｎ末端キナーゼ（ｊｎｋ）および他のタンパク質キナーゼのインヒビター - Google Patents

Description

（関連出願の引用）
本願は、２００１年３月２９日に出願された米国仮特許出願６０／２７９，９６１（この内容は、本明細書中に参考として援用される）に対して優先権を主張する。
（発明の技術分野）
本発明は、プロテインキナーゼのインヒビター、特に、マイトジェン活性化プロテイン（ＭＡＰ）キナーゼファミリーのメンバーである、ｃ−Ｊｕｎ Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）およびキナーゼのＳｒｃファミリーのインヒビターに関する。ＪＮＫをコードする多数の異なる遺伝子およびアイソフォームがある。ＪＮＫファミリーのメンバーは、環境ストレスおよび炎症誘発性サイトカインに対する応答でのシグナル伝達を調節し、そして多数の異なる障害の媒介において役割を有することに関与するとされている。Ｓｒｃファミリーのメンバーは、多数のヒト疾患に関与する。本発明はまた、ＧＳＫ３キナーゼおよびＣＤＫ２キナーゼのインヒビターに関する。このＧＳＫ３キナーゼは、糖尿病および他の障害に関与し、ＣＤＫ２キナーゼは、細胞分裂周期の調節において役割を果たす。本発明はまた、本発明のインヒビターを含む薬学的組成物、ならびに種々の障害の処置および予防においてこれらの組成物を利用する方法を提供する。

（発明の背景）
哺乳動物細胞は、細胞外シグナル調節化キナーゼ（ＥＲＫ）、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼおよびｃ−Ｊｕｎ Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）を含む、マイトジェン活性化プロテイン（ＭＡＰ）キナーゼファミリーのメンバーによって媒介される、活性化シグナル伝達カスケードによる細胞外刺激に応答する。ＭＡＰキナーゼ（ＭＡＰＫ）は、増殖因子、サイトカイン、ＵＶ照射、およびストレス誘導因子を含む、種々のシグナルによって活性化される。ＭＡＰＫは、セリン／スレオニンキナーゼであり、そしてこれらの活性化は、活性化ループにおけるＴｈｒ−Ｘ−Ｔｙｒセグメントでのスレオニンおよびチロシンの二重リン酸化によって生じる。ＭＡＰＫは、転写因子を含む、種々の基質をリン酸化し、この転写因子は、次に特定のセットの遺伝子の発現を調節し、このようにして、刺激に対する特異的な応答を媒介する。

ＪＮＫとしてもまた公知のｃ−Ｊｕｎ ＮＨ_２末端プロテインキナーゼにおいて、３つの異なる遺伝子、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＪＮＫ３が同定されており、そして少なくとも１０個の異なるＪＮＫのスプライシングアイソフォームが、哺乳動物細胞に存在する［Ｇｕｐｔａら、ＥＭＢＯ Ｊ．，１５：２７６０−７０（１９９６）］。ＪＮＫファミリーのメンバーは、炎症誘発性サイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）およびインターロイキン−１β（ＩＬ−１β））ならびにアニソマイシン、ＵＶ照射、低酸素、および浸透圧ショックを含む環境ストレスによって活性化される［Ｍｉｎｄｅｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，１３３３：Ｆ８５−Ｆ１０４（１９９７）］。

ＪＮＫの下流への基質としては、転写因子であるｃ−Ｊｕｎ、ＡＴＦ−２、Ｅｌｋ１、ｐ５３および細胞死ドメインタンパク質（ＤＥＮＮ）が挙げられる［Ｚｈａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９５：２５８６−９１（１９９８）］。各々のＪＮＫアイソフォームは、異なる親和性でこれらの基質に結合し、このことは、インビボでの異なるＪＮＫの基質特異性によるシグナル伝達経路の調節を示唆する（Ｇｕｐｔａら、前出）。

他のＭＡＰＫに加えてＪＮＫは、癌、トロンビン誘導血小板凝集、免疫不全障害、自己免疫疾患、細胞死、アレルギー、骨粗鬆症、および心臓疾患に対する細胞応答の媒介において役割を有することに関与するとされている。ＪＮＫ経路の活性化に関連する治療の疾患としては、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性関節リウマチ、喘息、変形性関節症、虚血、癌および神経変性疾患が挙げられる。

様々な報告が、肝臓疾患または肝性虚血の発症に関連するＪＮＫ活性化の重要性を詳述している［Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２１：３２６−９（１９９９）；ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．４２０：２０１−４（１９９７）；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０２：１９４２−５０（１９９８）；Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ２８：１０２２−３０（１９９８）］。

心臓血管疾患（例えば、心筋梗塞または鬱血性心不全）におけるＪＮＫについての役割はまた、ＪＮＫが種々の形態の心臓ストレスに対する肥厚性応答を媒介することが示されると報告されてきた［Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．８３：１６７−７８（１９９８）；Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９７：１７３１−７（１９９８）；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：２８０５０−６（１９９７）；Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．７９：１６２−７３（１９９６）；Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．７８：９４７−５３（１９９６）；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９７：５０８−１４（１９９６）］。

ＪＮＫカスケードはまた、ＩＬ−２プロモーターの活性化を含む、Ｔ細胞活性化において役割を果たすことが、実証されてきた。従って、ＪＮＫのインヒビターは、病理学的免疫応答を変更することにおいて潜在的な治療的価値を有する［Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：３１７６−８７（１９９９）；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：３８６７−７７（１９９８）；Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６：９４１−５３（１９９７）；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：９８９−９４（１９９６）］。

種々の癌におけるＪＮＫ活性化についての役割もまた確立されており、癌におけるＪＮＫインヒビターの潜在的使用を示唆する。例えば、構成的に活性化されたＪＮＫは、ＨＴＬＶ−１媒介性腫瘍形成に関連する［Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １３：１３５−４２（１９９６）］。カポジ肉腫（ＫＳ）細胞でのｂＦＧＦおよびＯＳＭの増殖効果は、ＪＮＫシグナル伝達経路のこれらの活性化によって媒介される［Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９９：１７９８−８０４（１９９７）］。ＫＳ増殖に関与するとされる他のサイトカインの他の増殖効果（例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＩＬ−６およびＴＮＦα）もまた、ＪＮＫによって媒介される。加えて、ｐ２１０ ＢＣＲ−ＡＢＬ形質転換細胞におけるｃ−ｊｕｎ遺伝子の調節は、ＪＮＫの活性に対応し、このことは、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）のための処置におけるＪＮＫインヒビターについての役割を示唆する［Ｂｌｏｏｄ ９２：２４５０−６０（１９９８）］。

ＪＮＫ１およびＪＮＫ２は、種々の組織中で広範に発現される。対照的に、ＪＮＫ３は、脳ならびにより少ない程度で心臓および精巣において選択的に発現される［Ｇｕｐｔａら、前出；Ｍｏｈｉｔら、Ｎｅｕｒｏｎ １４：６７−７８（１９９５）；Ｍａｒｔｉｎら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．Ｍｏｌ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．３５：４７−５７（１９９６）］。ＪＮＫ３は、カイニン酸によって誘導されるニューロンのアポトーシスに関連付けられており、グルタミン酸神経毒性の病因におけるＪＮＫの役割を示す。成人のヒト脳において、ＪＮＫ３発現は、ＣＡ１、ＣＡ４における錐体ニューロンの小集団、ならびに海馬の鉤状回領域、ならびに新皮質の第３層および第５層に局在化される［Ｍｏｈｉｔら、前出］。急性低酸素症を有する患者のＣＡ１ニューロンは、正常患者の脳組織由来の海馬ニューロンの最小の散在性細胞質染色と比較して、強い核のＪＮＫ３免疫反応性を示した［Ｚｈａｎｇら、前出］。従って、ＪＮＫ３は、海馬におけるＣＡ１ニューロンの低酸素損傷および虚血性損傷に関与するようである。

加えて、ＪＮＫ３は、アルツハイマー病において損傷を受け易いニューロンとともに免疫化学的に同時局在する［Ｍｏｈｉｔら、前出］。ＪＮＫ３遺伝子の破壊は、発作の活性、ＡＰ−１転写活性および海馬のニューロンのアポトーシスにおける効果を含む、興奮毒性のグルタミン酸レセプターアゴニストのカイニン酸に対するマウスの耐性を生じ、このことは、ＪＮＫ３シグナル伝達経路が、グルタミン酸神経毒性の病因における重大な成分であることを示す［Ｙａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３８９：８６５−８７０（１９９７）］。

これらの発見に基づいて、ＪＮＫシグナル伝達（特に、ＪＮＫ３のシグナル伝達）は、アポトーシス誘導神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ＡＬＳ（筋萎縮性側索硬化症）、癲癇および発作、ハンチントン病、外傷性脳損傷）ならびに虚血性脳卒中および出血性脳卒中の範囲に関与するとされている。

ＪＮＫ活性化に関連する種々の状態の処置において有用なＪＮＫ特異的インヒビターを開発するための高度なまだ対処されていない医療のニーズ、特に、これらの状態の大部分のための、現在利用可能な比較的不十分な処置選択肢を考えることが残っている。

Ｓｒｃファミリーのキナーゼは、癌、免疫系機能不全、および骨再形成疾患に関与する。一般的総説については、ＴｈｏｍａｓおよびＢｒｕｇｇｅ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．（１９９７）１３，５１３；ＬａｗｒｅｎｃｅおよびＮｉｕ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．（１９９８）７７，８１；ＴａｔｏｓｙａｎおよびＭｉｚｅｎｉｎａ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃｏｗ）（２０００）６５，４９；Ｂｏｓｃｈｅｌｌｉら、Ｄｒｕｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｔｕｒｅ ２０００，２５（７），７１７，（２０００）を参照のこと。

Ｓｒｃファミリーのメンバーとしては、哺乳動物において、以下の８個のキナーゼが挙げられる：Ｓｒｃ、Ｆｙｎ、Ｙｅｓ、Ｆｇｒ、Ｌｙｎ、Ｈｃｋ、Ｌｃｋ、ＢｌｋおよびＹｒｃ。これらは、非レセプタータンパク質キナーゼであり、分子量５２〜６２ｋＤの範囲におよぶ。これら全てが、共通の構造組織によって特徴づけられており、以下の６個の別個の機能ドメインからなる：Ｓｒｃホモロジードメイン４（ＳＨ４）、固有のドメイン、ＳＨ３ドメイン、ＳＨ２ドメイン、触媒ドメイン（ＳＨ１）、およびＣ末端調節領域。Ｔａｔｏｓｙａｎら．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃｏｗ）６５，４９−５８（２０００）。

発表された研究に基づき、Ｓｒｃキナーゼは、種々のヒト疾患に対する潜在的な治療標的として考慮される。Ｓｒｃを欠損するマウスは、骨芽細胞による骨吸収を抑制されるため、大理石骨病、または骨蓄積を発症する。このことは、異常に高度の骨吸収の結果生じる骨粗鬆症が、Ｓｒｃを阻害することにより処置され得ることを示唆する。Ｓｏｒｉａｎｏら、Ｃｅｌｌ，６９，５５１（１９９２）およびＳｏｒｉａｎｏら、Ｃｅｌｌ，６４，６９３（１９９１）。

関節炎の骨破壊の抑制は、リウマチ様の滑膜細胞および骨芽細胞におけるＣＳＫの過剰発現により達成されてきた。Ｔａｋａｙａｎａｇｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０４，１３７（１９９９）。ＣＳＫ（すなわち、Ｃ−末端Ｓｒｃキナーゼ）は、リン酸化し、そしてそれによってＳｒｃ触媒活性を阻害する。このことは、Ｓｒｃの阻害が、慢性関節リウマチに罹患している患者に特徴的な関節破壊を予防し得ることを示す。Ｂｏｓｃｈｅｌｌｉら、Ｄｒｕｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｔｕｒｅ ２０００，２５（７），７１７，（２０００）。

Ｓｒｃはまた、Ｂ型肝炎ウイルスの複製において役割を担う。そのウイルス性にコードされた転写因子ＨＢｘは、ウイルスの繁殖に必要とされる段階でＳｒｃを活性化する。Ｋｌｅｉｎら、ＥＭＢＯ Ｊ．，１８，５０１９，（１９９９）ａｎｄ Ｋｌｅｉｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１７，６４２７（１９９７）。

多くの研究が、Ｓｒｃ発現を癌（例えば、結腸癌、乳癌、肝癌および膵臓癌、特定のＢ細胞白血病およびリンパ腫）と関連付けている。Ｔａｌａｍｏｎｔｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９１，５３（１９９３）；Ｌｕｔｚら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．２４３，５０３（１９９８）；Ｒｏｓｅｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６１，１３７５４（１９８６）；Ｂｏｌｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，２２５１（１９８７）；Ｍａｓａｋｉら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２７，１２５７（１９９８）；Ｂｉｓｃａｒｄｉら、Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，７６，６１（１９９９）；Ｌｙｎｃｈら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ，７，１４１６（１９９３）；さらに、卵巣腫瘍細胞および結腸腫瘍細胞において発現されるアンチセンスＳｒｃは、腫瘍増殖を阻害することを示している。Ｗｉｅｎｅｒら、１．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５，２１６４（１９９９）；Ｓｔａｌｅｙら、Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆ．，８，２６９（１９９７）。

他のＳｒｃファミリーキナーゼもまた、潜在的な治療標的である。Ｌｃｋは、Ｔ細胞シグナル伝達において役割を担う。このＬｃｋ遺伝子を欠くマウスは、胸腺細胞の発達させる弱い能力を有する。Ｔ細胞シグナル伝達の強力な活性化因子としてのＬｃｋの機能は、Ｌｃｋインヒビターが、慢性関節リウマチのような自己免疫疾患を処置するために有用であり得ることを示唆する。Ｍｏｌｉｎａら、Ｎａｔｕｒｅ，３５７，１６１（１９９２）。Ｈｃｋ、ＦｇｒおよびＬｙｎは、骨髄性白血球におけるインテグリンのシグナル伝達の重要な伝達物質として同定されている。Ｌｏｗｅｌｌら、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．，６５，３１３（１９９９）。従って、これらのキナーゼ伝達物質の阻害は、炎症を処置するために有用であり得る。Ｂｏｓｃｈｅｌｌｉら、Ｄｒｕｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｔｕｒｅ ２０００，２５（７），７１７，（２０００）。

グリコゲンシンターゼキナーゼ−３（ＧＳＫ−３）は、αアイソフォームおよびβアイソフォームを含み、各々が異なる遺伝子によってコードされる、セリン／スレオニンプロテインキナーゼである［Ｃｏｇｈｌａｎら，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｙ，７，７９３−８０３（２０００）；ＫｉｍおよびＫｉｍｍｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｄｅｖ．，１０，５０８−５１４（２０００）］。ＧＳＫ−３は、種々の疾患（糖尿病、アルツハイマー病、ＣＮＳ障害（例えば、双極性障害および神経変性疾患）、ならびに心筋細胞（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｅｔｅ）肥大が挙げられる）に関与している［ＷＯ ９９／６５８９７；ＷＯ ００／３８６７５；およびＨａｑら，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．（２０００）１５１，１１７］。これらの疾患は、ＧＳＫ−３が役割を果たす特定の細胞シグナル伝達経路の異常な作用によって引き起こされ得るか、またはこのような作用を生じ得る。ＧＳＫ−３は、多数の調節タンパク質をリン酸化し、そしてそのタンパク質の活性を調節することが見出されている。これらのタンパク質としては、グリコーゲン合成のために必要な律速酵素であるグリコゲンシンターゼ、微小管結合タンパク質Ｔａｕ、遺伝子転写因子β−カテニン、翻訳開始因子ｅ１Ｆ２Ｂ、ならびにＡＴＰクエン酸リアーゼ、アキシン（ａｘｉｎ）、熱ショック因子−１、ｃ−Ｊｕｎ、ｃ−Ｍｙｃ、ｃ−Ｍｙｂ、ＣＲＥＢ、およびＣＥＰＢαが挙げられる。これらの多様なタンパク質標的は、細胞の代謝、増殖、分化および発生の多くの局面に、ＧＳＫ−３を関連させる。

ＩＩ型糖尿病の処置に関連するＧＳＫ−３媒介経路において、インスリン誘導シグナル伝達は、細胞のグルコース摂取およびグリコーゲン合成をもたらす。この経路において、ＧＳＫ−３は、インスリン誘導シグナルのネガティブレギュレーターである。通常、インスリンの存在は、ＧＳＫ−３が媒介するリン酸化の阻害およびグリコーゲン合成の不活化を引き起こす。ＧＳＫ−３の阻害は、増加したグリコーゲン合成およびグルコース摂取をもたらす［Ｋｌｅｉｎら，ＰＮＡＳ，９３，８４５５−９（１９９６）；Ｃｒｏｓｓら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，３０３、２１−２６（１９９４）；Ｃｏｈｅｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，２１，５５５−５６７（１９９３）；Ｍａｓｓｉｌｌｏｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２９９，１２３−１２８（１９９４）］。しかし、インスリン応答に障害がある糖尿病患者において、グリコーゲン合成およびグルコース摂取は、インスリンの比較的高い血液レベルの存在にも係わらず、増加しない。これは、急性および長期の効果をともなって、グルコースの異常に高い血液レベルをもたらし、心血管疾患、腎不全および失明を究極的に生じ得る。このような患者において、インスリンにより誘導されるＧＳＫ−３の正常な阻害が、生じない。ＩＩ型糖尿病を患った患者において、ＧＳＫ−３が過剰発現されることがまた、報告されている［ＷＯ ００／３８６７５］。従って、ＧＳＫ−３の治療的インヒビターは、インスリンに対する応答の障害を患った糖尿病患者を処置するために潜在的に有用であると考えられる。

ＧＳＫ−３活性はまた、アルツハイマー病に関連している。この疾患は、周知のβ−アミロイドペプチドおよび細胞内神経原線維変化の形成によって特徴付けられる。この神経原線維変化は、高リン酸化Ｔａｕタンパク質を含み、ここで、Ｔａｕは、異常部位でリン酸化される。ＧＳＫ−３は、細胞モデルおよび動物モデルにおいて、これらの異常な部位をリン酸化することを示している。さらに、ＧＳＫ−３の阻害は、細胞中におけるＴａｕの高リン酸化を防止することが示される［Ｌｏｖｅｓｔｏｎｅら，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ４，１０７７〜８６（１９９４）；Ｂｒｏｗｎｌｅｅｓら，Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ ８，３２５１〜５５（１９９７）］。従って、ＧＳＫ−３の活性が、神経原線維変化の発生およびアルツハイマー病の進行を促進し得ると考えられる。

ＧＳＫ−３の別の基質は、ＧＳＫ−３によるリン酸化後に分解されるβ−カテニンである。β−カテニンの減少したレベルは、分裂病性患者において報告されており、そしてニューロンの細胞死の増加に関する他の疾患にも関連している［Ｚｈｏｎｇら，Ｎａｔｕｒｅ，３９５，６９８〜７０２（１９９８）；Ｔａｋａｓｈｉｍａら，ＰＮＡＳ，９０，７７８９〜９３（１９９３）；Ｐｅｉら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ，５６，７０〜７８（１９９７）］。

サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）は、βシートリッチなアミノ末端片（ｌｏｂｅ）およびより大きなカルボキシ末端片からなるセリン／スレオニンタンパク質キナーゼであり、その大部分がαらせんである。このＣＤＫは、１１個のサブドメイン（タンパク質キナーゼ全てに共有される）を示し、そして分子量３３〜４４ｋＤの範囲におよぶ。このキナーゼファミリーは、ＣＤＫ１、ＣＫＤ２、ＣＤＫ４、およびＣＤＫ６を含み、完全に活性であるためには、ＣＤＫ２のＴｈｒｌ６０に対応する残基のリン酸化を必要とする［Ｍｅｉｊｅｒ，Ｌ．，Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｕｐｄａｔｅｓ，３，８３−８８（２０００）］。

各ＣＤＫ複合体は、調節性サイクリンサブユニット（例えば、サイクリンＡ、サイクリンＢ１、サイクリンＢ２、サイクリンＤ１、サイクリンＤ２、サイクリンＤ３、およびサイクリンＥ）ならびに触媒キナーゼサブユニット（例えば、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５、およびＣＤＫ６）から形成される。各々の異なるキナーゼ／サイクリンのペアは、Ｇ１期、Ｓ期、Ｇ２期、およびＭ期として公知の、異なりかつ特定の段階の細胞周期を調節するために機能する［Ｎｉｇｇ，Ｅ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ，２，２１−３２（２００１）；Ｆｌａｔｔ，Ｐ．，Ｐｉｅｔｅｎｐｏｌ，Ｊ．，Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｒｅｖｉｅｗｓ，３２，２８３−３０５（２０００）］。

このＣＤＫは、細胞増殖障害、特に癌に関与している。細胞増殖は、細胞分裂周期の直接的または間接的な調節解除の結果であり、そしてこのＣＤＫは、この周期の種々の段階の調節において重要な役割を担う。例えば、サイクリンＤ１の過剰発現は、多数のヒト癌（乳癌、結腸癌、肝細胞癌、および神経膠腫を含む）に共通に関連する［Ｆｌａｔｔ，Ｐ．，Ｐｉｅｔｅｎｐｏｌ，Ｊ．，Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｒｅｖｉｅｗｓ，３２，２８３−３０５（２０００）］。ＣＤＫ２／サイクリンＥ複合体は、細胞周期の初期Ｇ１期からＳ期への進行において重要な役割を担い、そしてサイクリンＥの過剰発現は、種々の固形種湯に関与している。従って、サイクリンＤ１、サイクリンＥ、またはそれらの関連ＣＤＫのインヒビターは、癌治療に対する有用な標的である［Ｋａｕｂｉｓｃｈ，Ａ．，Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｇ．，Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ，６，１９２−２１２（２０００）］。

ＣＤＫ（特にＣＤＫ２）もまた、アポトーシスおよびＴ細胞発生における役割を果たす。ＣＤＫ２は、胸腺細胞アポトーシスの重要な調節因子として同定されてきた［Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｏ．，ら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７０９−７１３（２０００）］。ＣＤＫ２キナーゼ活性の刺激は、特定の刺激に応答した、胸腺細胞におけるアポトーシスの進行に関連する。ＣＤＫ２キナーゼ活性の阻害は、このアポトーシスをブロックし、胸腺細胞の保護を生じる。

細胞周期およびアポトーシスの調節に加えて、ＣＤＫは、転写のプロセスに直接関連する。多数のウイルスが、それらの複製プロセスのためにＣＤＫを必要とする。ＣＤＫインヒビターが、ウイルス複製を抑制する例としては、ヒトサイトメガロウイルス、疱疹ウイルス、および水痘−帯状疱疹ウイルスが挙げられる［Ｍｅｉｊｅｒ，Ｌ．、Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｕｐｄａｔｅｓ、３、８３−８８（２０００）］。

ＣＤＫの阻害はまた、アルツハイマー病のような神経変性障害の処置のためにも有用である。Ｐａｉｒｅｄ ＨｅｌｉｃａｌＦｉｌａｍｅｎｔｓ（ＰＨＦ）（アルツハイマー病に関連する）の発生は、ＣＤＫ２５／ｐ２５によるＴａｕタンパク質の過剰リン酸化によって引き起こされる［Ｍｅｉｊｅｒ，Ｌ．、Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｕｐｄａｔｅｓ、３、８３−８８（２０００）］。

プロテインキナーゼの生物学的重要性の結果として、治療的に有効なプロテインキナーゼインヒビターに現在関心がもたれている。特定のアリール置換２−アミノピリミジンは、プロテインキナーゼインヒビターとして公知である。［米国特許第５，９５８，９３５号、同第５，８６３，９２４号、同第５，６１２，３４０号、およびＰＣＴ公開ＷＯ０１／２９００９］を参照のこと。

従って、ＪＮＫ３、Ｓｒｃ、Ｌｃｋ、ＧＳＫ３、およびＣＤＫ２の活性化に関連する種々の疾患および状態の処置に有用な、ＪＮＫおよびＳｒｃファミリーキナーゼの強力なインヒビター（ＪＮＫ３インヒビター、Ｓｒｃインヒビター、およびＬｃｋインヒビターを含む）ならびにＧＳＫ３の強力なインヒビターおよびＣＤＫ２インヒビターを開発することが、なお、非常に必要とされている。

（発明の要旨）
現在、本発明の化合物およびそれらの薬学的組成物が、ｃ−Ｊｕｎ Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）、Ｓｒｃ、Ｌｃｋ、ＧＳＫ３、およびＣＤＫ２のインヒビターとして効果的であることが知られている。これらの化合物は、以下の一般式ＩおよびＩＩ：

またはそれらの薬学的に受容可能な誘導体を有し、ここで、Ｗは、窒素またはＣＨであり、そしてＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、およびＲ^４は、以下に記載されるとおりである。

これらの化合物およびそれらの薬学的組成物は、心疾患、糖尿病、アルツハイマー病、免疫不全性疾患、炎症性疾患、アレルギー性疾患、自己免疫疾患、骨粗鬆症のような破壊性骨障害、増殖性障害、感染症、およびウイルス性疾患のような種々の障害を処置または予防するために有用である。これらの組成物はまた、細胞死および過形成を予防するための方法において有用であり、従って、発作、心臓発作、および器官低酸素における再灌流／虚血を処置または予防するために用いられ得る。これらの組成物はまた、トロンビン誘導性血小板凝集を予防するための方法においても有用である。これらの組成物は、特に、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性関節リウマチ、喘息、変形性関節症、虚血症、癌、肝臓疾患（肝性虚血症を含む）、心疾患（例えば、心筋梗塞およびうっ血性心不全）、病原性免疫状態（Ｔ細胞活性化を含む）、ならびに神経変性障害のような障害に有用である。

（発明の詳細な説明）
本発明は、以下の式Ｉおよび式ＩＩの化合物：

またはそれらの薬学的組成物に関し、ここで：
各々のＷは、独立して、窒素またはＣＨより選択され；
Ｒ^１、Ｒ^２、およびＲ^３の各々は、独立して、ハロゲン、ＱＲ、Ｑ_（ｎ）ＣＮ、Ｑ_（ｎ）ＮＯ_２、またはＱ_（ｎ）Ａｒ^２より選択され；ここで：
Ｒ^１およびＲ^２またはＲ^２およびＲ^３は、必要に応じて一緒になって、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する４〜８員の、飽和であるか、部分的に不飽和であるか、または完全に不飽和の環を形成し；
ｎは、０または１であり；
Ｑは、Ｃ_１〜４アルキリデン鎖であり、ここでＱの１つのメチレン単位は、必要に応じてＯ、Ｓ、ＮＲ、ＮＲＣＯ、ＮＲＣＯＮＲ、ＮＲＣＯ_２、ＣＯ、ＣＯ_２、ＣＯＮＲ、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ、ＳＯ_２、ＳＯ_２ＮＲ、ＮＲＳＯ_２、ＮＲＳＯ_２ＮＲ、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）、またはＣ（Ｏ）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）により置換されており；
各々のＲは、独立して、水素または必要に応じて置換されたＣ_１〜Ｃ_４脂肪族より選択され、ここで：
同じ窒素原子に結合された２つのＲは、必要に応じて、窒素原子と一緒になって、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される１〜２個の追加のヘテロ原子を有する、３〜７員の、飽和であるか、部分的に不飽和であるか、または完全に不飽和の環を形成し；
Ｒ^４は、Ａｒ^１、Ｔ−Ａｒ^２、またはＴ_（ｎ）−Ａｒ^３であり；
Ｔは、Ｃ_１〜２アルキリデン鎖であり、ここでＴの１つのメチレン単位は、必要に応じてＯ、ＮＲ、ＮＲＣＯ、ＮＲＣＯＮＲ、ＮＲＣＯ_２、ＣＯ、ＣＯ_２、ＣＯＮＲ、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ、ＳＯ_２、ＳＯ_２ＮＲ、ＮＲＳＯ_２、ＮＲＳＯ_２ＮＲ、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）、またはＣ（Ｏ）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）により置換されており；
Ａｒ^１は、５〜６員の単環式であるか、または８〜１０員環の二環式の、飽和であるか、部分的に不飽和であるか、完全に不飽和である環系であり；ここで：
Ａｒ^１は、必要に応じて、５つまでの置換基で置換されており、ここで第一の置換基は、Ｒ^ＸまたはＲ^５より選択され、ここで任意の追加の置換基が、独立して、Ｒ^５より選択され；
各々のＲ^Ｘは、独立して、窒素、酸素、または硫黄より選択される０〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のアリール環より選択され、ここで：
Ｒ^Ｘは、必要に応じて１〜３つのＲ^５で置換されており；
各々のＲ^５は、独立して、Ｒ、ハロゲン、ＮＯ_２、ＣＮ、ＯＲ、ＳＲ、Ｎ（Ｒ）_２、ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ、ＮＲＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、ＮＲＣＯ_２Ｒ、Ｃ（Ｏ）Ｒ，ＣＯ_２Ｒ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、ＳＯＲ、ＳＯ_２Ｒ、ＳＯ_２Ｎ（Ｒ）_２、ＮＲＳＯ_２Ｒ、ＮＲＳＯ_２Ｎ（Ｒ）_２、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、またはＣ（Ｏ）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）Ｒより選択され；
Ａｒ^２は、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を有する、５〜６員の、飽和であるか、部分的に不飽和であるか、または完全に不飽和の単環式環、あるいは、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜５個のヘテロ原子を有する、８〜１０員の、飽和であるか、部分的に不飽和であるか、または完全に不飽和の二環式環系であり；ここで：
Ａｒ^２は、必要に応じて、５つまでの置換基で置換されており、ここで第一の置換基は、Ｒ^ＸまたはＲ^５より選択され、ここで任意の追加の置換基が、独立して、Ｒ^５より選択され；
Ａｒ^３は、０〜２個の窒素を有する６員のアリール環であり、
ここで：
Ａｒ^３は、１つのＺ−Ｒ^６基で置換されており、そして必要に応じて１〜３つのＲ^５で置換されており；
Ｚは、Ｃ_１〜Ｃ_６のアルキリデン鎖であり、ここで２つまでの隣接しないＺのメチレン単位は、必要に応じて、ＣＯ、ＣＯ_２、ＣＯＣＯ、ＣＯＮＲ、ＯＣＯＮＲ、ＮＲＮＲ、ＮＲＮＲＣＯ、ＮＲＣＯ、ＮＲＣＯ_２、ＮＲＣＯＮＲ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＮＲＳＯ_２、ＳＯ_２ＮＲ、ＮＲＳＯ_２ＮＲ、Ｏ、Ｓ、またはＮＲによって置換されており；そして
Ｒ^６は、Ａｒ^２、Ｒ、ハロゲン、ＮＯ_２、ＣＮ、ＯＲ、ＳＲ、Ｎ（Ｒ）_２、ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ、ＮＲＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、ＮＲＣＯ_２Ｒ、Ｃ（Ｏ）Ｒ，ＣＯ_２Ｒ、ＯＣ（Ｏ）Ｒ、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、ＳＯＲ、ＳＯ_２Ｒ、ＳＯ_２Ｎ（Ｒ）_２、ＮＲＳＯ_２Ｒ、ＮＲＳＯ_２Ｎ（Ｒ）_２、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、またはＣ（Ｏ）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）Ｒより選択され；
ただし：
（ｉ）Ｒ^４が２つのＯＲで置換されているフェニルである場合、Ｒは、水素ではなく、これらの２つのＯＲは、同時にメタおよびパラ以外で、フェニル環上の位置を占め；
そして
（ｉｉ）この化合物は、式ＩＩＩの化合物：

以外であり、
ここで：
Ａは、ハロゲン、ＣＮ、ＯＣ（Ｏ）ＮＨ_２、ＣＯ_２Ｒ^１０、ＣＯＲ^１０、ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^１０）_２、Ｎ（Ｒ^１０）_２、ＯＲ^１０、またはフルオロアルキルより選択される１つ以上の基で置換されたフェニル環であり、ここで
各々のＲ^１０は、独立して、水素または必要に応じてＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１〜Ｃ_７アルキル）、もしくはＮ（Ｃ_１〜Ｃ_７アルキル）_２で置換されたＣ_１〜Ｃ_７アルキル基より選択され；そして
Ｂは、ハロゲン、ＣＮ、ＯＣ（Ｏ）ＮＨ_２、ＣＯ_２Ｒ^１０、ＣＯＲ^１０、ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^１０）_２、Ｎ（Ｒ^１０）_２、ＯＲ^１０、またはフルオロ（Ｃ_１〜Ｃ_７アルキル）より選択される。

本明細書中で使用される場合、他に示されない限り、以下の定義を適用する。

句「必要に応じて置換される」は、句「置換または非置換」と交換可能に使用される。他に示さない限り、必要に応じて置換された基は、その基のそれぞれの置換可能な位置で置換基を有し得、そしてそれぞれの置換は、他と独立している。

本明細書中で使用される場合、用語「脂肪族」または「脂肪族基」とは、完全に飽和であるかまたは１つ以上の不飽和単位を含む直鎖または分枝鎖のＣ_１〜Ｃ_１２炭化水素鎖、あるいは完全に飽和であるかまたは１つ以上の不飽和単位を含む単環式Ｃ_３〜Ｃ_８炭化水素または二環式Ｃ_８〜Ｃ_１２炭化水素を意味するが、これらは、芳香族（本明細書中では、「炭素環」または「シクロアルキル」ともいわれる）ではなく、残りの分子への単一の結合点を有し、ここで、この二環式環系における任意の個々の環は、３〜７個のメンバーを有する。例えば、適切な脂肪族基としては、直鎖または分枝鎖あるいはアルキル基、アルケニル基、アルキニル基およびこれらのハイブリッド（例えば、（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキルまたは（シクロアルキル）アルケニル）が挙げられるが、これらに限定されない。

単独またはより大きな部分のうちの一部として用いられる場合、用語「アルキル」、「アルコキシ」、「ヒドロキシアルキル」、「アルコキシアルキル」、および「アルコキシカルボニル」は、１〜１２個の炭素原子を含む直鎖および分枝鎖の両方を含む。単独またはより大きな部分のうちの一部として用いられる場合、用語「アルケニル」および「アルキニル」は、２〜１２個の炭素原子を含む直鎖および分枝鎖の両方を含む。

用語「ハロアルキル」、「ハロアルケニル」、および「ハロアルコキシ」とは、場合に応じて、１個以上のハロゲン原子により置換されたアルキル、アルケニルまたはアルコキシを意味する。用語「ハロゲン」とは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを意味する。

用語「ヘテロ原子」とは、窒素、酸素、または硫黄を意味し、そして窒素および硫黄の任意の酸化形態、ならびに四級化形態の任意の塩基性窒素を含む。また、用語「窒素」は、複素環式環の置換可能な窒素を含む。例としては、酸素、硫黄または窒素より選択される０個〜３個のヘテロ原子を有する飽和または部分的に不飽和な環において、窒素は、Ｎ（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロリルにおける場合）、ＮＨ（ピロリジニルにおける場合）またはＮＲ^＋（Ｎ置換ピロリジニルにおける場合）であり得る。

単独または「アラルキル」、「アラルコキシ」、または「アリールオキシアルキル」のようなより大きな部分のうちの一部として用いられる場合、用語「アリール」とは、全部で５個〜１４個の環のメンバーを有する単環式環系、二環式環系および三環式環系をいい、ここでこの系における少なくとも１つの環は、芳香族であり、ここでこの系における各々の環は、３〜７個の環のメンバーを含む。用語「アリール」は、用語「アリール環」と交換可能に用いられ得る。用語「アリール」はまた、本明細書で以下に規定されるようなヘテロアリール環系もいう。

本明細書中で使用される場合、用語「複素環」、「ヘテロシクリル」、または「複素環式」とは、５個〜１４個の環のメンバー（そのうち１つ以上の環のメンバーは、ヘテロ原子である）を有する非芳香族環系、単環式環系、二環式環系または三環式環系を意味し、ここでこの系における各々の環は、３〜７個の環のメンバーを含む。

単独または「ヘテロアラルキル」または「ヘテロアリールアルコキシ」のようなより大きな部分のうちの一部として用いられる場合、用語「ヘテロアリール」とは、全部で５〜１４個の環のメンバーを有する単環式環系、二環式環系および三環式環系をいい、ここでこの系における少なくとも１つの環は、芳香族であり、この系における少なくとも１つの環は、１個以上のヘテロ原子を含み、ここでこの系における各々の環は、３個〜７個の環のメンバーを含む。用語「ヘテロアリール」は、用語「ヘテロアリール環」または用語「ヘテロ芳香族」と交換可能に用いられ得る。

脂肪族または非脂肪族の複素環式環は、１つ以上の置換基を含み得る。脂肪族または非脂肪族の複素環式環の飽和炭素上の適切な置換基は、以下：ハロゲン、オキソ、−Ｒ^Ｏ、−ＯＲ^Ｏ、−ＳＲ^Ｏ、１，２−メチレン−ジオキシ、１，２−エチレンジオキシ、必要に応じてＲ^Ｏで置換されたフェニル（Ｐｈ）、必要に応じてＲ^Ｏで置換された−Ｏ（Ｐｈ）、必要に応じてＲ^Ｏで置換された−ＣＨ_２（Ｐｈ）、必要に応じてＲ^Ｏで置換された−ＣＨ_２ＣＨ_２（Ｐｈ）、−ＮＯ_２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ^Ｏ）_２、−ＮＲ^ＯＣ（Ｏ）Ｒ^Ｏ、−ＮＲ^ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｏ）_２、−ＮＲ^ＯＣＯ_２Ｒ^Ｏ、−ＮＲ^ＯＮＲ^ＯＣ（Ｏ）Ｒ^Ｏ、−ＮＲ^ＯＮＲ^ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｏ）_２、−ＮＲ^ＯＮＲ^ＯＣＯ_２Ｒ^Ｏ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ^Ｏ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）Ｒ^Ｏ、−ＣＯ_２Ｒ^Ｏ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ^Ｏ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｏ）_２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｏ）_２、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^Ｏ、−ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^Ｏ）_２、−Ｓ（Ｏ）Ｒ^Ｏ、−ＮＲ^ＯＳＯ_２Ｎ（Ｒ^Ｏ）_２、−ＮＲ^ＯＳＯ_２Ｒ^Ｏ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｏ）_２、−（＝ＮＲ）−Ｎ（Ｒ^Ｏ）_２、＝Ｓ、＝ＮＮＨＲ^Ｏ、＝ＮＮ（Ｒ^Ｏ）_２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^Ｏ、＝ＮＮＨＣＯ_２（アルキル）、＝ＮＮＨＳＯ_２ （アルキル）、＝ＮＲ^Ｏ、または−（ＣＨ_２）_ｙＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^Ｏ、より選択され、ここで各々のＲ^Ｏは、水素、必要に応じて置換されたＣ_１〜６脂肪族、非置換５〜６員のヘテロアリールもしくは複素環式環、フェニル、−Ｏ（Ｐｈ）、または−ＣＨ_２（Ｐｈ）から独立して選択される。Ｒ^Ｏの脂肪族基上の任意の置換基は、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１〜４脂肪族）、Ｎ（Ｃ_１〜４脂肪族）_２、ハロゲン、Ｃ_１〜４脂肪族、ＯＨ、Ｏ（Ｃ_１〜４脂肪族）、ＮＯ_２、ＣＮ、ＣＯ_２Ｈ、ＣＯ_２（Ｃ_１〜４脂肪族）、Ｏ（ハロＣ_１〜４脂肪族）、またはハロＣ_１〜４脂肪族より選択される。

用語「アルキリデン鎖」とは、完全に飽和であり得るかまたは１以上の不飽和単位を有し得る、直鎖状炭素鎖または分枝炭素鎖をいう。

置換基または変数の組合わせは、このような組合わせが、安定または化学的に実現可能な化合物を生じる場合に限り許容される。安定な化合物または化学的に実現可能な化合物は、４０℃以下の温度で湿気または他の化学的に反応性の条件の非存在下、少なくとも１週間維持された場合、実質的に変更されない化合物である。

本発明の特定の化合物が、その化合物の互変異性体形態で存在し得、このような互変異性体形態の化合物全てが、本発明の範囲内であることは、当業者に明らかである。

他に記載のない限り、本明細書中に示される構造はまた、その構造の全ての立体化学的形態（すなわち、各不斉中心に対するＲ配置およびＳ配置）を含むことを意味する。従って、本発明の化合物の単一の立体化学的異性体、ならびに鏡像異性体混合物およびジアステレオマー混合物は、本発明の範囲内である。他に記載のない限り、本明細書中に示される構造はまた、１つ以上の同位体濃縮原子の存在下においてのみ異なる化合物を含むことを意味する。例えば、重水素もしくはトリチウムによる水素の置換、または^１３Ｃ−濃縮炭素もしくは^１４Ｃ−濃縮炭素による炭素の置換を除いて本発明の構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。

式Ｉおよび式ＩＩの好ましいＲ^１基、Ｒ^２基およびＲ^３基は、ハロゲン、ＱＲまたはＱＡｒ^２より選択され、ここでＱは、Ｃ_１〜３アルキリデン鎖であり、ここでＱの１つのメチレン単位は、必要に応じて、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨＣＯ−、または−ＮＲ−により置換されており、そしてＡｒ^２は、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜２個のヘテロ原子を有する、必要に応じて置換された５〜６員の、飽和であるか、部分的に不飽和であるか、または完全に不飽和の環である。最も好ましいＲ^１基、Ｒ^２基およびＲ^３基は、ＯＨ、ＯＣＨ_３、ＯＣＨ_２ＣＨ_３、ＮＨＣＯＭｅ、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１〜４脂肪族）、Ｎ（Ｃ_１〜４脂肪族）_２、Ｏ（ＣＨ_２）_２モルホリン−４−イル、Ｏ（ＣＨ_２）_２ＮＨ_２、Ｏ（ＣＨ_２）_２ＮＨ（Ｃ_１〜４脂肪族）、Ｏ（ＣＨ_２）_２Ｎ（Ｃ_１〜４脂肪族）_２、臭素、塩素、またはフッ素より選択される。式Ｉおよび式ＩＩの他の好ましい化合物は、Ｒ^１およびＲ^２、またはＲ^２およびＲ^３のいずれかが一緒になって、

を形成する化合物である。最も好ましいＡｒ^２基は、モルホリン−４−イル、ピロリジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、チオモルホリン−４−イル、ピラゾール−１−イル、またはイミダゾール−１−イルである。

式Ｉおよび式ＩＩの好ましいＲ^４基は、６員の、飽和であるか、部分的に不飽和であるか、もしくは０〜３個の窒素を有するアリール環であるか、０〜２個の窒素を有する９〜１０員の二環式アリール環であるか、または窒素、酸素、もしくは硫黄より独立して選択される２〜３個のヘテロ原子を有する、５員のヘテロアリール環より選択され、ここで各々の環は、必要に応じて置換されている。式Ｉおよび式ＩＩのより好ましいＲ^４基は、フェニル、シクロヘキシル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、トリアジニル、チアゾリル、チアジアゾリル、ピラゾリル、イソキサゾリル、インダゾリル、またはベンズイミダゾリルより選択される置換された環である。

Ｒ^４上の好ましい置換基は、独立して、Ｒ、ハロゲン、ＮＯ_２、ＯＲ、Ｎ（Ｒ）_２、Ｒ^Ｘ、またはＺ−Ｒ^６より選択され、ここでＲは、水素または必要に応じて置換されたＣ_１〜４脂肪族である。式Ｉおよび式ＩＩの好ましいＺ基は、Ｃ_１〜４アルキリデン鎖より選択され、ここでＺの１つのメチレン単位は、必要に応じて−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ_２−、または−ＮＨ−により置換されている。好ましいＲ^６基は、必要に応じて置換されたフェニル、ピリジル、およびピリミジニルより選択される。Ｒ^４上の好ましいＲ^Ｘ置換基は、フェニル、ピリジル、およびピリミジニルより選択され、ここでＲ^Ｘは、必要に応じて１〜２つのＲ^５で置換されている。Ｒ^４上のより好ましい置換基は、塩素、フッ素、臭素、メチル、エチル、ｔ−ブチル、イソプロピル、シクロプロピル、ニトロ、ＯＭｅ、ＯＥｔ、ＣＦ_３、ＮＨ_２、ベンジル、ベンジルオキシ、ＯＨ、メチレンジオキシ、ＳＯ_２ＮＨ_２、フェノキシ、Ｏ−ピリジニル、ＳＯ_２フェニル、ニトロフェノキシ、アミノフェノキシ、Ｓ−ジメチルピリミジン、ＮＨフェニル、ＮＨメトキシフェニル、ピリジニル、アミノフェニル、フェノール、クロロフルオロフェニル、ジメチルアミノフェニル、ＣＦ_３−フェニル、ジメチルフェニル、クロロフェニル、フルオロフェニル、メトキシフェノキシ、クロロフェノキシ、エトキシフェノキシ、およびフルオロフェノキシより選択される。式Ｉおよび式ＩＩの最も好ましいＲ^４基は、表１、２、および３に示されるＲ^４基である。

好ましい実施形態は、式Ｉ−ａまたは式ＩＩ−ａの化合物に関する：
好ましい実施形態は、式Ｉ−ａまたはＩＩ−ａの化合物：

あるいは、薬学的に受容可能なその誘導体に関し、ここで、Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^４、ＱおよびＡｒ^２は、上記で規定される通りである。

好ましいＲ^１、Ｒ^３、Ｒ^４、Ａｒ^２およびＱは、式Ｉおよび式ＩＩの化合物について上に記載された通りである。

式Ｉ−ａおよび式ＩＩ−ａの最も好ましい化合物は、式Ｉ−ａ’および式ＩＩ−ａ’：

または、薬学的に受容可能なその誘導体であり、ここでＲ^１、Ｒ^３およびＲ^４は、上記に規定された通りである。

式Ｉ−ａ’および式ＩＩ−ａ’の好ましいＲ^１基、Ｒ^３基およびＲ^４基は、式Ｉおよび式ＩＩの化合物について上に記載された通りである。

別の好ましい実施形態は、式Ｉ−ｂまたは式ＩＩ−ｂの化合物：

あるいは、薬学的に受容可能なその誘導体に関し、ここでＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、ＺおよびＲ^６は、上記に規定された通りである。

好ましいＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、ＺおよびＲ^６は、式Ｉおよび式ＩＩの化合物について上に記載される通りである。

Ｗが窒素である、式Ｉの例示的な構造が、以下の表１に示される。

ＷがＣＨである、式Ｉの例示的な構造が、以下の表２に示される。

Ｗが窒素である、式ＩＩの例示的な構造が、以下の表３に示される。

本発明の化合物は、通常、一般的なスキームＩ〜ＩＶによって図示されるような、類似化合物について当業者に公知の方法によって調製され得、そして合成の例を以下に示す。

上記のスキームＩは、中間化合物３を調製するために使用される一般的な合成経路を示す。−７８℃で、ＴＨＦ中にアルデヒド（ｉ）を含む溶液に、ＴＨＦ中にメチルマグネシウムクロリドの溶液を加えた。この反応を、冷ＨＣｌ（１Ｎ）を用いてクエンチし、次いで、水性ワークアップ、続くクロマトグラフィーによって、アルコール（ｉｉ）を与える。

二酸化マンガンを、ＣＨ_２Ｃｌ_２中のｉｉの溶液に加え、そして得られた混合物を、還流するために加熱する。３時間後、懸濁液を、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過し、そしてケトン（３）を得るために減圧中で濾液を濃縮した。

上記のスキームＩＩは、式Ｉの化合物を調製するために使用される一般的な合成経路を示す。アニリン１は、密封された管中に、シアナミド、ＨＣｌ（１，４−ジオキサン中に４Ｎ）および１，４−ジオキサンと一緒にされ、そして得られた混合物を、６０℃に加熱した。１２〜１８時間後、水性ワークアップにより、所望のグアニジン誘導体（２）を与える。

中間体４は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（ＤＭＦ−ＤＭＡ）中に３を溶解し、そして得られた溶液を８０℃に加熱することによって調製される。この反応物を、減圧下で濃縮し、そして粗生成物を再結晶して、エナミノン４を得た。

エナミノン４を、グアニジン２およびアセトニトリルと一緒にして、そして得らる混合物を８０℃に加熱した。水性ワークアップ後、クロマトグラフィーにより粗生成物を精製して、５０〜９５％の収率（この収率は、使用されるグアニジン誘導体に依存する）でＩを得る。

種々のＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^４（上記の表１中の列挙される化合物を含む）は、スキームＩＩについて上に記載される反応条件の影響を受けやすい。

上のスキームＩＩＩは、式Ｉの化合物を調製するための代替的な方法を示す。ボロン酸アリール（６）は、ＴＨＦ中でブロマイドｉｉｉをマグネシウムターニングおよび触媒量のヨウ素で１２〜１８時間還流で処理することにより調製される。この反応を０℃に冷却し、次いで、トリメチルホウ酸を加え、そして、得られた混合物を、室温で１２〜１８時間攪拌した。この反応を、ＨＣｌ（６Ｎ、水性）を使用して、６０℃にて加水分解し、次いで、水性ワークアップにより、所望のボロン酸６を得た。

ボロン酸６を、トルエン：メタノール（４：１）の溶液中で、ジクロロピリミジン（５）、Ｎａ_２ＣＯ_３およびＰｄ（ＰＰｈ_３）_４と一緒にした。得られた混合物を、２４時間にて加熱還流し、次いで、シリカゲルを通して濾過した。この粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、クロロピリミジン７を得た。

クロロピリミジン７を、アニリン１、ＮａＨ（鉱油中に６０％分散）およびＰｄ（ＰＰｈ_３）_４を含むＴＨＦと一緒にし、そして得られた混合物を３時間にて加熱還流した。この反応物を、冷却し、次いで水中に注いだ。水性ワークアップ、続くフラッシュクロマトグラフィーにより、Ｉを得る。種々のＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^４（上記の表１に列挙された化合物を含む）は、スキームＩＩＩについて上記された反応条件の影響を受けやすい。

ＷがＣＨである式Ｉの化合物はまた、上記のスキームＩＩＩに記載される方法と本質的に類似する、以下のスキームＩＶに示される方法および当業者に公知の方法によって合成され得る。

これらの化合物を提供するために使用される条件の詳細は、実施例において示される。当業者は、明細書の教示に従い、容易に合成されるかまたは市販されている試薬を使用して、本発明の他の化合物を合成し得る。

本発明においてＪＮＫ３、ＧＳＫ−３、ＣＤＫ２、ＬｃｋまたはＳｒｃのインヒビターとして使用される化合物の活性は、インビトロ、インビボまたは細胞株においてアッセイされ得る。インビトロアッセイは、活性化されたＪＮＫ３、ＧＳＫ−３、ＣＤＫ２、ＬｃｋまたはＳｒｃのリン酸化活性またはＡＴＰａｓｅ活性のいずれかを阻害を決定するアッセイを含む。代替的なインビトロアッセイは、ＪＮＫ３、ＧＳＫ−３、ＣＤＫ２、ＬｃｋまたはＳｒｃに結合するインヒビターの能力を定量化する。インヒビターの結合は、結合の前に、インヒビターを放射性標識すること、インヒビター／ＪＮＫ３複合体、インヒビター／ＧＳＫ−３複合体、インヒビター／ＣＤＫ２複合体、インヒビター／Ｌｃｋ複合体またはインヒビター／Ｓｒｃ複合体を単離することおよび放射性標識結合量を決定することにより測定され得る。あるいは、インヒビターの結合は、競争実験（ここで、新たなインヒビターが、既知の放射リガンドと結合するＪＮＫ３、ＧＳＫ−３、ＣＤＫ２、ＬｃｋまたはＳｒｃとインキュベートされる）の実施により決定され得る。

別の実施形態に従い、本発明は、本発明の化合物または薬学的に受容可能なその塩、および薬学的に受容可能なキャリア、アジュバント、またはビヒクルを含む組成物を提供する。本発明の組成物中の化合物の量は、検出可能な程度にタンパク質キナーゼ（特に、生物学的サンプルまたは患者中のＪＮＫ３、ＧＳＫ−３、ＣＤＫ２、ＬｃｋまたはＳｒｃ）を阻害するために有効である量である。好ましくは、本発明の組成物は、このような組成物を必要とする患者に投与するために処方される。最も好ましくは、本発明の組成物は、患者に経口投与するために処方される。

本明細書中で使用される場合、用語「患者」とは、動物、好ましくは哺乳動物、そして最も好ましくはヒトを意味する。

用語「薬学的に受容可能なキャリア、アジュバント、またはビヒクル」とは、処方された化合物の薬理学的な活性を破壊しない、非毒性のキャリア、アジュバントまたはビヒクルのことをいう。本発明の組成物において使用され得る薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントまたはビヒクルは、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンのような血清タンパク質、リン酸のような緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、植物性飽和脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、塩または電解質、硫酸プロタミンのような電解質、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ろう、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロック重合体、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられるが、これらに限定されない。

用語「検出可能に阻害する」とは、本明細書中で使用される場合、上記の組成物およびＪＮＫ３キナーゼ、ＧＳＫ−３キナーゼ、ＣＤＫ２キナーゼ、ＬｃｋキナーゼまたはＳｒｃキナーゼを含むサンプルと、上記の組成物を含まないＪＮＫ３キナーゼ、ＧＳＫ−３キナーゼ、ＣＤＫ２キナーゼ、ＬｃｋキナーゼまたはＳｒｃキナーゼを含む等価なサンプルとの間のＪＮＫ３活性、ＧＳＫ−３活性、ＣＤＫ２活性、Ｌｃｋ活性またはＳｒｃ活性における測定可能な変化を意味する。

「薬学的に受容可能な塩」とは、任意の非毒性の塩、エステル、エステルの塩または他の本発明の化合物の誘導体を意味する。レシピエントへの投与において、直接的または間接的のいずれかによって、本発明の化合物または阻害活性をもつ代謝産物もしくはその残渣を提供し得る。

本発明の化合物の薬学的に受容可能な塩は、薬学的に受容可能な無機酸および有機酸ならびに無機塩基および有機塩基に由来する塩が挙げられる。適切な酸性塩の例として、アセテート、アジピン酸塩、アルギネート、アスパラギン酸塩、ベンゾエート、ベンゼンスルホナート、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳塩（ｃａｍｐｈｏｒａｔｅ）、カンファスルホネート、シクロペンタプロピオネート、ジグルコネート、ドデシルスルフェート、エタンスルフォネート、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタノエート、グリセロリン酸、グリコール酸塩、ヘミサルフェート、ヘプタノエート、ヘキサノエート、ヒドロクロリド、ヒドロブロミド、ヒドロヨージド、２−ヒドロキシエタンスルフォネート、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチネート、硝酸塩、シュウ酸塩、パルモエート（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチネート（ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）、過硫酸塩、３−フェニルプロピオネート、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアネート、トシレート（ｔｏｓｙｌａｔｅ）およびウンデカノエートが挙げられる。シュウ酸のような他の酸は、それ自体が薬学的に受容可能でなくても、本発明の化合物およびその薬学的に受容可能な酸付加塩を得るための、中間体として有用な塩の調製において使用され得る。

適切な塩基から得られる塩の例として、アルカリ金属（例えば、ナトリウムおよびカリウム）、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）、アンモニウムおよびＮ^＋（Ｃ_１−４アルカリ）_４塩が挙げられる。本発明はまた、本明細書中に記載される化合物の、任意の塩基性窒素含有基の４級化を想定する。水溶性または油溶性あるいは分散可能な生成物は、このような４級化によって得られ得る。

本発明の組成物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレーによって、局所的に、直腸に、鼻に、頬側に、膣にまたは移植されたレザバを介して投与され得る。用語「非経口的に」とは、本明細書中で使用される場合、皮下の、静脈内の、筋肉内の、関節腔内の、滑液包内の、胸骨内の、鞘内の、肝臓内の、病変内のおよび頭蓋内の注射、または、注入技術を含む。好ましくは、この組成物は、経口的に、腹腔内にまたは静脈を介して投与される。本発明の組成物の滅菌注射可能な形態は、水性懸濁液または油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して、当該分野で公知の技術に従って処方され得る。滅菌注射可能な処方物はまた、無毒性の非経口的に受容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌注射可能な溶液または懸濁液（例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として）であり得る。受容可能なビヒクルおよび溶媒の中で使用される得るものは、水、リンガー溶液および等張食塩水である。さらに、滅菌、不揮発性油は、溶媒または懸濁媒体として都合よく使用され得る。

この目的のために、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の刺激性でない不揮発性油が、使用され得る。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体のような脂肪酸は、天然の薬学的に受容可能な油（例えば、オリーブ油またはひまし油、特に、それらがポリオキシエチレート化された形態で）のような、注入可能な処方物において有用である。これらの油剤または懸濁液はまた、長鎖アルコール希釈剤または分散剤（例えば、カルボキシメチルセルロース）または薬学的に受容可能な投薬形態の処方物において共通に使用される類似の分散剤（エマルジョンおよび懸濁液を含む）を含み得る。他の共通に使用される界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ）、Ｓｐａｎおよび薬学的に受容可能な固体、液体または他の投薬形態の製造において共通に使用される他の乳化剤またはバイオアベイラビリティエンハンサーはまた、処方の目的で使用され得る。

本発明の薬学的に受容可能な組成物は、任意の経口的に受容可能な投薬形態で、経口的に投与され得、例として、カプセル、錠剤、水性懸濁液または溶液が挙げられるが、これらに限定されない。経口使用のための錠剤の場合、共通に使用されるキャリアは、ラクトースおよびコーンスターチが挙げられる。ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤がまた、一般的に加えられる。カプセル形態での経口投与のために、有用な希釈剤として、ラクトースおよび乾燥コーンスターチを含む。水性の懸濁液が、経口使用に必要とされる場合、活性成分は、乳化剤および懸濁剤と一緒にされる。所望の場合、特定の甘味料、調味料または着色剤がまた、加えられ得る。

あるいは、本発明の薬学的に受容可能な組成物が、直腸内適用のために座薬の形態で投与され得る。これらは、薬剤と非刺激性の適切な賦形剤とを混合することによって調製され得、ここで賦形剤は、室温では固体だが、直腸温度では液体であり、従って直腸内で溶解して薬剤を放出する。このような材料には、カカオ脂、密蝋およびポリエチレングリコールが挙げられる。

処置の標的が、局所的な適用によって容易に接触可能な領域または器官を含む場合（例えば、目、皮膚または腸の下部の疾患が挙げられる）、本発明の薬学的に受容可能な組成物はまた、局所的に投与され得る。適切な局所的処方物は、これらの領域および器官の各々に対して、容易に調製される。

腸管下部に対する局所的適用は、直腸坐剤処方物（上記を参照のこと）または適切な浣腸剤処方物でもたらされ得る。局所的な経皮パッチもまた使用され得る。

局所的適用について、この薬学的に受容可能な組成物は、１つ以上のキャリア中に懸濁または溶解された活性成分を含有する適切な軟膏で処方され得る。本発明の化合物の局所的投与のためのキャリアとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：鉱油、流動パラフィン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化蝋および水。あるいは、薬学的に受容可能な組成物は、１つ以上の薬学的に受容可能なキャリアに懸濁または溶解された活性成分を含有する適切なローションまたはクリームで処方され得る。適切なキャリアとしては、限定しないが、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられる。

眼科用途のために、この薬学的に受容可能な組成物は、等張のｐＨ調節した滅菌生理食塩水中の微細化懸濁液として、または好ましくは、塩化ベンジアルコニウムのような防腐剤を含むかまたは含まないかのいずれかの、等張のｐＨ調節した滅菌生理食塩水中の溶液として、処方され得る。あるいは、眼科用途のために、この薬学的に受容可能な組成物は、ワセリンのような軟膏で処方され得る。

本発明の薬学的に受容可能な組成物はまた、鼻エアロゾルまたは吸入によって投与され得る。このような組成物は、薬学的処方物の分野で周知の技術に従って調製され、そしてベンジルアルコールもしくは他の適切な防腐剤、バイオアベイラビリティーを増強するための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／または他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を使用して、生理食塩水中の溶液として調製され得る。

最も好ましくは、本発明の薬学的に受容可能な組成物は、経口投与のために処方される。

キャリア物質と一緒にされて、単一投薬形態の組成物を生成し得る本発明の化合物の量は、処置される宿主、投与の特定の様式に依存して変動する。好ましくは、この組成物は、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の間のインヒビターの投薬量が、これらの組成物を受ける患者に投与され得るように処方されるべきである。

任意の特定の患者に対する特定の投薬量および処置レジメンは、種々の因子に依存することもまた理解されるべきであり、この種々の因子としては、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、全身の健康、性別、食事、投与時間、排泄の速度、薬物の組合わせ、ならびに処置医の判断および処置されている特定の疾患の重症度が挙げられる。組成物中の本発明の化合物の量はまた、その組成物における特定の化合物に依存する。

処置または予防されるべき特定の状態または疾患に依存して、そのような状態を処置または予防するために通常投与される、さらなる治療剤はまた、本発明の組成物中に存在し得る。

例えば、化学療法剤または他の抗増殖剤は、増殖疾患および癌を処置するために本発明の化合物と組合わせられ得る。公知の化学療法剤の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：Ｇｌｅｅｖｅｃ^ＴＭ、アドリアマイシン、デキサメタゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、タキソール、インターフェロン、および白金誘導体。

本発明の化合物がまた組合わされ得る、薬剤の他の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド、ＴＮＦブロッカー、ＩＬ−１ ＲＡ、アザチオプリン、シクロホスファミド、およびスルファサラジン）；免疫調節剤および免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシン、ミコフェノレートモフェチル、インターフェロン、コルチコステロイド、シクロホスファミド、アザチオプリン、およびスルファサラジン）；神経栄養因子（例えば、アセチルコリンエステラーゼインヒビター、ＭＡＯインヒビター、インターフェロン、抗痙攣薬、イオンチャネルブロッカー、リルゾール（ｒｉｌｕｚｏｌｅ）、および抗パーキンソン症候群剤）；心臓血管疾患を処置するための薬剤（例えば、β−ブロッカー、ＡＣＥインヒビター、利尿剤、硝酸塩、カルシウムチャネルブロッカー、およびスタチン）；肝臓疾患を処置するための薬剤（例えば、コルチコステロイド、コレスチラミン、インターフェロン、および抗ウイルス剤）；血管障害を処置するための薬剤（例えば、コルチコステロイド、抗白血病剤、および増殖因子）；糖尿病を処置するための薬剤（例えば、インスリンまたはインスリンアナログ、αグルコシダーゼインヒビター、ビグアニド、およびインスリン感作物質）；ならびに免疫不全障害を処置するための薬剤（例えば、γグロブリン）。

本発明の化合物中に存在するさらなる治療的薬剤の量は、唯一の活性剤としてその治療的薬剤を含む組成物中で通常投与される量以下の量である。好ましくは、本発明の開示された組成物中のさらなる治療的薬剤の量は、唯一の治療的活性剤としてその薬剤を含む組成物中に通常存在する量の約５０％〜１００％の範囲である。

別の実施形態に従って、方法は、生物学的サンプルにおけるＪＮＫ３、ＧＳＫ−３、ＣＤＫ２、ＬｃｋまたはＳｒｃキナーゼの活性を阻害する方法に関し、この方法は、生物学的サンプルと、本発明の化合物または上記化合物を含む組成物とを、接触させる工程を包含する。

用語「生物学的サンプル」は、本明細書中で使用される場合、細胞培養物またはそれらの抽出物；哺乳動物から得られる生検材料またはそれらの抽出物；および血液、唾液、尿、糞便、精液、涙、または他の体液、あるいはそれらの抽出物を含むが、これらに限定されない。

生物学的サンプルにおけるＪＮＫ３、ＧＳＫ−３、ＣＤＫ２、Ｌｃｋ、またはＳｒｃのキナーゼ活性の阻害は、当業者に公知である種々の目的に対して有用である。このような目的の例としては、限定ではなく、輸血、臓器移植、生物学的標本貯蔵、および生物学的アッセイが挙げられる。

別の実施形態に従って、本発明は、患者におけるのＪＮＫ３、ＧＳＫ−３、ＣＤＫ２、ＬｃｋまたはＳｒｃ媒介疾患または状態を処置またはその重症度を減少する方法を提供し、この方法は、上記患者に、本発明に従う化合物を投与する工程を包含する。

別の実施形態に従って、本発明は、癌を処置する方法に関し、この方法は、本発明に従う化合物または上記化合物を含む薬学的に受容可能な組成物を用いてＣＤＫ２を阻害することによって増殖期への癌細胞の転移をブロックする工程を包含する。

用語「ＪＮＫ媒介疾患］は、本明細書中で使用される場合、ＪＮＫが役割を果たすことが公知である、任意の疾患または他の有害状態を意味する。このような状態としては、限定しないが、以下が挙げられる：炎症性疾患、自己免疫疾患、破壊性骨障害、増殖性障害、癌、感染症、神経変性疾患、アレルギー、発作における再灌流／虚血、心臓発作、脈管形成障害、臓器低酸素症、血管過形成、心肥大、トロンビン誘発血小板凝集およびプロスタグランジンエンドペルオキシダーゼシンターゼ−２に関連する状態。

本発明の化合物によって処置または予防され得る炎症性疾患としては、限定しないが以下が挙げられる：急性膵炎、慢性膵炎、喘息、アレルギーおよび成人呼吸窮迫症候群。

本発明の化合物によって処置または予防され得る自己免疫疾患としては、限定しないが以下が挙げられる：糸球体腎炎、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、慢性甲状腺炎、グレーヴズ病、自己免疫性胃炎、糖尿病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性好中球減少症、血小板減少症、アトピー性皮膚炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、多発性硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、乾癬または対宿主性移植片病。

本発明の化合物によって処置または予防され得る破壊性骨障害としてとしては、限定しないが以下が挙げられる：骨粗しょう症、変形性関節症および多発性骨髄腫に関連する骨障害。

本発明の化合物によって処置または予防され得る増殖性疾患としては、限定しないが以下が挙げられる：急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、転移性黒色腫、カポージ肉腫、多発性骨髄腫およびＨＴＬＶ−１媒介腫瘍形成。

本発明の化合物によって処置または予防され得る脈管形成障害としては、以下が挙げられる：固形腫瘍、眼性血管形成、乳児血管腫。本発明の化合物によって処置または予防され得る感染症としては、限定しないが以下が挙げられる：敗血症、敗血症性ショックおよび細菌性赤痢。

本発明の化合物によって処置または予防され得るウイルス性疾患としては、限定しないが以下が挙げられる：急性肝炎感染（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、およびＣ型肝炎を含む）、ＨＩＶ感染およびＣＭＶ網膜炎。

本発明の化合物によって処置または予防され得る神経変性疾患としては、限定しないが以下が挙げられる：アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、てんかん、発作、ハンチントン病、外傷性脳損傷、虚血性発作および出血性発作、外傷性損傷、急性低酸素症、虚血またはグルタミン酸神経毒性を原因とする大脳虚血または神経変性疾患（アポトーシス誘導性神経変性疾患を含む）。

「ＪＮＫ媒介疾患」としてはまた、以下が挙げられる：発作における再灌流／虚血、心臓発作、心筋虚血、臓器低酸素症、血管過形成、心臓肥大、肝虚血、肝臓疾患、うっ血性心不全、病的な免疫応答（例えばＴ細胞活性化およびトロンビン誘発血小板凝集を原因とする免疫応答）。

さらに、本発明の化合物は、誘発性の炎症誘発性（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）タンパク質の発現を阻害し得る。それゆえに、本発明の化合物によって処置され得る他の「ＪＮＫ媒介状態」としては、以下が挙げられる：水腫、痛覚脱失症、熱および痛み（例えば、神経筋の痛み、頭痛、癌の痛み、歯の痛み、および関節炎の痛み）。

本発明の化合物はまた、Ｓｒｃファミリーキナーゼ（特にＳｒｃおよびＬｃｋ）のインヒビターとして有用である。これらのキナーゼの一般的評論について、ＴｈｏｍａｓおよびＢｒｕｇｇｅ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．（１９９７）１３，５１３；ＬａｗｒｅｎｃｅおよびＮｉｕ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．（１９９８）７７，８１；ＴａｔｏｓｙａｎおよびＭｉｚｅｎｉｎａ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃｏｗ）（２０００）６５，４９を参照のこと。用語「Ｓｒｃ媒介疾患またはＬｃｋ媒介疾患」は、本明細書中で使用される場合、ＳｒｃまたはＬｃｋが役割を果たすことが公知である任意の疾患または他の有害状態を意味する。従って、これらの化合物は、１つ以上のＳｒｃファミリーキナーゼ活性によって影響されることが公知である疾患または状態を処置するために有用である。このような疾患または状態としては、以下が挙げられる：高カルシウム血症、再狭窄、骨粗しょう症、変形性関節症、骨転移の対症療法、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、狼瘡、対宿主性移植片病、Ｔ細胞媒介過敏症疾患、橋本甲状腺炎、ギヤン−バレー症候群、慢性閉塞性肺障害、接触皮膚炎、癌、パジェット病、ぜん息、虚血障害または再灌流障害、アレルギー性疾患、アトピー性皮膚炎およびアレルギー性鼻炎。Ｓｒｃ活性によって影響される疾患としては、特に以下が挙げられる：高カルシウム血症、骨粗しょう症、変形性関節症、癌、骨転移の対症療法およびパジェット病。Ｌｃｋ活性によって影響される疾患としては、特に以下が挙げられる：自己免疫疾患、アレルギー、慢性関節リウマチおよび白血病。

用語「ＧＳＫ３媒介疾患］は、本明細書中で使用される場合、ＧＳＫ３が役割を果たすことが公知である、任意の疾患または他の有害状態を意味する。従って、これらの化合物は、ＧＳＫ３キナーゼ活性によって影響されることが公知である疾患または状態を処置するために有用である。このような疾患または状態としては、以下が挙げられる：糖尿病、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、ＡＩＤＳ関連性痴呆、筋萎縮性側索硬化症（ＡＭＬ）、多発性硬化症（ＭＳ）、精神分裂病、心臓真菌（ｃａｒｄｉｏｍｙｃｅｔｅ）肥大および禿頭症。

用語「ＣＤＫ２媒介疾患］は、本明細書中で使用される場合、ＣＤＫ２が役割を果たすことが公知である、任意の疾患または他の有害状態を意味する。従って、これらの化合物は、ＣＤＫ２キナーゼ活性によって影響されることが公知である疾患または状態を処置するために有用である。このような疾患または状態としては、以下が挙げられる：ウイルス感染、神経変性疾患、胸腺細胞のアポトーシスに関連する障害または細胞周期（特にＧ_１期からＳ期への進行）の調節解除によって生じる増殖障害。

好ましい実施形態は、以下から選択されるＪＮＫ媒介疾患を処置または予防するために使用される方法に関する：炎症性疾患、自己免疫疾患、破壊性骨障害、神経変性疾患、アレルギー、発作における再灌流／虚血、心臓発作、脈管形成障害、臓器低酸素症、血管過形成、心肥大、またはトロンビン誘発血小板凝集。

別の好ましい実施形態は、以下から選択されるＳｒｃ媒介疾患またはＬｃｋ媒介疾患を処置または予防するために使用される方法に関する：高カルシウム血症、骨粗しょう症、変形性関節症、または骨転移の対症療法。

別の好ましい実施形態は、以下から選択されるＧＳＫ３媒介疾患を処置または予防するために使用される方法に関する：糖尿病、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、多発性硬化症（ＭＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＭＬ）。

別の好ましい実施形態に従って、この方法は、以下から選択されるＣＤＫ２媒介疾患を処置または予防するために使用される：ウイルス感染、神経変性障害、または胸腺細胞のアポトーシスに関連する障害。

本発明の化合物に加えて、本発明の化合物の薬学的に受容可能な誘導体はまた、上で同定された障害を処置または予防するための組成物中で使用され得る。

代替の実施形態において、さらなる治療的薬剤を含まない組成物を使用する本発明の方法は、さらなる治療的薬剤を上記患者に別々に投与するさらなる工程を包含する。これらのさらなる治療的薬剤は、別々に投与される場合、それらは、本発明の組成物の投与の前か、連続的にか、または後に患者に投与され得る。

本発明の化合物またはその薬学的組成物はまた、移植可能な医療デバイス（例えば、人工器官、人工弁、移植血管、ステントおよびカテーテル）をコーティングするための組成物中に組込まれ得る。例えば、血管ステントは、再狭窄（損傷後の血管壁の再狭小化）を克服するために使用されてきた。しかし、ステントまたは他の移植可能なデバイスを使用する患者は、血餅形成または血小板活性化の危険を負う。これらの所望されない効果は、キナーゼインヒビターを含有する薬学的に受容可能な組成物でこのデバイスを予めコーティングすることによって、予防または軽減され得る。適切なコーティングおよびコーティングされた移植可能なデバイスの一般的な調製は、米国特許第６，０９９，５６２号；同第５，８８６，０２６号；および同第５，３０４，１２１号に記載される。このコーティングは、典型的に、生体適合性ポリマー材料（例えば、ヒドロゲルポリマー、ポリメチルジシロキサン、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール、ポリ乳酸、エチレンビニルアセテート、およびそれらの混合物）である。このコーティングは、必要に応じて、フルオロシリコーン、ポリサッカリド、ポリエチレングリコール、リン脂質またはこれらの組合わせの適切なトップコートによって、さらに保護されて、この組成物における制御された放出特性を与え得る。本発明の化合物でコーティングされた移植可能なデバイスは、本発明の別の実施形態である。

本明細書中に記載される本発明を、より完全に理解され得るようにするために、以下の実施例が示される。これらの実施例は、例示目的のみのためであり、いかなる様式においても本発明を限定するように解釈されるべきでないことが、理解されるべきである。

（実施例１）

（１−（７−メトキシ−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル）−エタノール（２））：ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の７−メトキシ−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−カルバルデヒド（Ｉ）（１．８ｇ，１０ｍｍｏｌ）の溶液を、−７８℃に冷却した。メチルマグネシウムクロリドＴＨＦ溶液（３Ｍ、５．０ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ中のｉの溶液に滴下した。この反応を、ＨＣｌ（水溶液、１Ｎ）の添加によってクエンチし、そして酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。この粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル；ヘキサン中の４０％−６０％ 酢酸エチル）で精製し、２（０．８９ｇ，４５％）を生成した。

（実施例２）

（１−（７−メトキシ−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル）−エタノン（３））：二酸化マンガン（５ｇ、モル過剰）を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の２（０．８９ｇ，４．５ｍｍｏｌ）溶液に添加した。得られた混合物を、３時間加熱還流し、次いでＣｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過した。濾過物を、減圧下で濃縮し、黄褐色固体として３を生成した。

（実施例３）

（３−ジメチルアミノ（Ｄｉｍｔｈｙｌａｍｉｎｏ）−１−（７−メトキシ−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル）プロペノン（４））：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（３．５ｇ、モル過剰）中の３（０．８９ｇ，４．５ｍｍｏｌ）の溶液を、８０℃で一晩加熱した。次いで、この反応混合物を、減圧下で濃縮し、そして粗生成物を、酢酸エチル／ヘキサンから再結晶化し、４（１．０ｇ，８９％）を生成した。

（実施例４）

（Ｎ−フェニル−グアニジン）：１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）中のアニリン（１１ｍｍｏｌ）、シアナミド（４２０ｍｇ，１０ｍｍｏｌ）、およびＨＣｌ（ジオキサン中４Ｎ、３ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）を、密封管中で６０℃で一晩加熱した。この反応系を減圧下で濃縮し、そしてその残渣を、ＮａＯＨ（２Ｎ）とジクロロメタンとの間で分配した。その有機層を、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、そして減圧下で濃縮し、Ｎ−フェニル−グアニジンを生成した。

（実施例５）

（［４−（７−メトキシ−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−フェニル−アミン（Ｉ−２６））：密封管で、Ｎ−フェニル−グアニジン（４０ｍｇ、過剰）を、アセトニトリル中で４（５０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）と混合し、そしてこの混合物を、８０℃で一晩加熱した。次いで、この反応混合物を、水と酢酸エチルとの間で分配した。その有機層を、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。この粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン中４０％の酢酸エチル）で精製し、Ｉ−２６を生成した。

（実施例６）

（２−クロロ−４−（２，３，４−トリメトキシフェニル）ピリミジン（５））：２５０ｍＬの丸底フラスコ中で、１．４９グラム（１０ｍｍｏｌ）の２，４−ジクロロピリミジンを、２，３，４−トリメトキシフェニルボロン酸（２．１２ｇ，１０ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（２．１２ｇ，２当量）、および１．１５ｇの（０．１当量）のテトラキス−トリフェニルホスフィンパラジウムと合わせた。トルエン（５０ｍＬ）および水（５ｍＬ）を添加した。この反応系を、窒素下で一晩還流させた。この反応系を、トルエンおよび水で希釈し、そしてその有機層を分離し、ブラインで洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、濾過し、そして濃縮し、粗製ピリミジン５を生成した。この化合物を、３０％アセトン／ヘキサンの溶離液を使用して、シリカゲル上で精製し、白色固体として２．０８ｇ（７４％）の生成物５を生成した。
（実施例７）

（（３，５−ジメチルフェニル）−［４−（２，３，４−トリメトキシフェニル）ピリミド−２−イル］−アミン（ＩＩ−１４））：バイアル中に、２８ｍｇ（１００μｍｏｌ）のクロロピリミジン５、３，５−ジメチルアニリン（２４ｍｇ，２００μｍｏｌ）、６０％ＮａＨ（６ｍｇ、過剰）、およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（６ｍｇ、触媒量）を入れた。テトラヒドロフラン（２ｍＬ）を添加し、このバイアルを密封し、そして２時間還流加熱した。この反応系を、ジエチルエーテルで希釈し、そして１Ｎの塩酸で洗浄した。その有機層を分離し、１ＮのＮａＯＨ溶液、水、およびブラインで洗浄した。この有機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ_４）し、濾過し、そして減圧下でエバポレートし、粗生成物を生成した。この化合物を、２０％アセトン／ヘキサンの溶離液を使用して、シリカゲル上で精製し、白色固体として純粋な生成物ＩＩ−１４を生成した。

（実施例８）

（１−［３，４−ジメトキシ−２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）フェニル−エタノン（６））：５００ｍＬの丸底フラスコ中で、２，３−ジヒドロキシ−４−メトキシアセトフェノン（３．３９グラム、１７．２ｍｍｏｌ）を、４−（２−クロロエチル）モルホリン塩酸（３．５３グラム、１９．０ｍｍｏｌ）、４グラムのＫ_２ＣＯ_３、および５０ｍＬの無水ＤＭＦと合わせた。この反応系を、６０℃で一晩加熱し、ジエチルエーテルで希釈し、そして１Ｎの水酸化ナトリウム溶液で洗浄した。有機層を洗浄して分離し、ブラインで洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、濾過し、そして減圧下で濃縮した。粗生成物を、５％ ＭｅＯＨ−ＣＨ_２Ｃｌ_２の溶離液を使用したフラッシュクロマトグラフィーによって、シリカゲル上で精製し、純粋なアセトフェノン６を生成した。

（実施例９）

（１−［３，４−ジメトキシ−２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）フェニル−３−ジメチルアミノ−プロペノン（７））：バイアル中で、０．９５ｇの６を、２ｍＬ（過剰）のジメチルホルムアミドジメチルアセタールで処理した。この反応系を、１００℃で一晩加熱した。この反応系をオイルになるまで濃縮し、そして５％ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２の溶離液を用いて、シリカゲル上でフラッシュクロマトグラフし、０．５７ｇ（５１％）のエナミノン７を生成した。

（実施例１０）

（（４−［３，４−ジメトキシ−２−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）フェニル−ピリミジン−２−イル）−（３−フェノキシフェニル）−アミン（ＩＩ−２１））：ねじ蓋付き肉厚ガラス管中で、５０ｍｇのエナミノン７を、３−フェノキシグアニジンおよび２ｍＬのアセトニトリルと合わせた。この反応管を密封し、そして１００℃で２日間加熱した。この溶媒を、減圧下でエバポレートし、そして残留物質を、ジエチルエーテル／ヘキサンから再結晶化し、白色固体として純粋なＩＩ−２１を生成した。

（実施例１１）

（１−（５−メトキシ−２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イル）エタン−１−オン（８））：丸底フラスコ中で、５００ｍｇの１−（５−ヒドロキシ−２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシン−６−イル）エタン−ｌ−オンを、１ｍＬのＤＭＦ中に溶解した。この溶液に、４１４ｍｇのＫ_２ＣＯ_３、およびヨウ化メチル（１ｍＬ、過剰）を添加した。この反応系を、８０℃で一晩加熱した。この反応系を水に注ぎ、そしてジエチルエーテルで抽出した。この有機抽出物を、ブラインで洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、濾過し、そして濃縮し、０．３８ｇ（７０％）のアセトフェノン８を生成した。

（実施例１２）

（３−ジメチルアミノ−１−（５−メトキシ−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）−プロペノン（９））：バイアル中で、０．３８ｇ（１．８ｍｍｏｌ）の８を、１ｍＬのアセトニトリル中に溶解した。ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（３２１ｍｇ，２．７ｍｍｏｌ）。このバイアルを密封し、そして９０℃で一晩加熱した。この反応混合物を、シリカゲルカラム上に直接注ぎ、次いで７０％酢酸エチル／ヘキサンで溶出した。適当な画分のエバポレーションによって、０．３０ｇ（６１％）の純粋なエナミノン９を生成した。

（実施例１３）

（［４−（５−メトキシ−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）ピリミジン−２−イル］−（３−フェノキシフェニル）−アミン（ＩＩ−１７））：エナミノン９を、小バイアル中の２ｍＬのアセトニトリル中に溶解した。過剰量の３−フェノキシフェニルグアニジンを添加し、このバイアルを密封し、そしてその混合物を、一晩加熱還流した。反応混合物を、シリカゲルカラム上に直接注ぎ、次いで、５０％酢酸エチル／ヘキサンで溶出した。適当な画分を合わせ、そして、減圧下でエバポレートし、粗製ピリミジンＩＩ−１７を得た。このピリミジンを、ジエチルエーテル／ヘキサンから再結晶化し、純粋なＩＩ−１７を生成した。

（実施例１４）

（８−メトキシ−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−カルバルデヒド（１０））：バイアル中に、０．５ｇ（３．０ｍｍｏｌ）の３，４−ジヒドロキシ−５−メトキシベンズアルデヒド、４１４ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）のＫ２ＣＯ３、および３ｍＬの無水ＤＭＦを入れた。この混合物に、０．５６ｇ（３．０ｍｍｏｌ）の１，２−ジブロモエタンを滴下した。バイアルを密封し、そして１００℃で一晩加熱した。この反応液に水を添加し、そしてこの混合物を、ジエチルエーテルで抽出した。この有機抽出物を、ブラインで洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、濾過し、そして濃縮し、粗生成物を得た。この物質を、溶離液として５０％ 酢酸エチル／ヘキサンを使用したシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、０．２５ｇ（４３％）の純粋なアルデヒド１０を得た。

（実施例１５）

（１−（８−メトキシ−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）−エタノール（１１））：２５０ｍＬの丸底フラスコ中に、０．６０ｇ（３．１ｍｍｏｌ）の１０を、１５ｍＬの無水テトラヒドロフラン中に溶解した。この溶液を、０℃に冷却し、そしてＴＨＦ中３Ｍのメチルマグネシウムクロリド１．１ｍＬ（３．３ｍｍｏｌ）で処理した。この反応系を、数分間攪拌し、次いで１ＮのＨＣｌ溶液でクエンチした。この混合物を、酢酸エチルで抽出した。その有機抽出物を、ブラインで洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、濾過し、そして減圧下でエバポレートし、アルコール１１を生成した。

（実施例１６）

（１−（８−メトキシ−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）−エタノン（１２））：丸底フラスコ中で、０．６５ｇ（３．１ｍｍｏｌ）のアルコール１１を、ジクロロメタン中に溶解した。この溶液に、過剰の酸化マンガンを添加した。この懸濁物を、一晩加熱還流した。この混合物を冷却し、そしてセライトを通して濾過した。濾液を、減圧下でエバポレートし、黄色油として０．６１ｇ（８５％）の１２を生成した。

（実施例１７）

（３−ジメチルアミノ−１−（８−メトキシ−２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）−プロペノン（１３））：バイアル中で、５４８ｍｇ（２．６ｍｍｏｌ）の１２を、２ｍＬのジメチルホルムアミドジメチルアセタールと合わせた。このバイアルを密閉し、そして１００℃で一晩過熱した。この反応系を、乾燥するまで濃縮し、その粗生成物を、酢酸エチル／ヘキサンから再結晶化し、０．５ｇ（７３％）の純粋なエナミノン１３を生成した。

（実施例１８）

（［４−（８−メトキシ−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）ピリミジン−２−イル］−（３−クロロフェニル）−アミン（１−７７））：バイアル中で、０．４５ｇ（０．１７０ｍｍｏｌ）のエナミノン１３を、４０ｍｇ（過剰）の３−クロロフェニルグアニジンと合わせた。アセトニトリル（１ｍＬ）を添加し、そしてその混合物を１００℃で一晩加熱した。この反応系を水で希釈し、そしてジクロロメタンで抽出した。この有機抽出物を乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、そして濃縮した。濃縮した溶液を、シリカゲルカラム上に直接注ぎ、５０％酢酸エチル／ヘキサンで溶出した。適切な画分を合わせ、そして減圧下でエバポレートし、純粋なピリミジンＩ−７７を生成した。

（実施例１９）

（１−［３，５−ジメトキシ−４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニル）エタノン（１４））：バイアル中で、５００ｍｇ（２．５ｍｍｏｌ）の３’，５’−ジメトキシ−４’−ヒドロキシアセトフェノンを、４−（２−クロロエチル）モルホリン塩酸（６００ｍｇ，３．２ｍｍｏｌ）および粉末化炭酸カリウム（１．５ｇ、過剰）と合わせた。ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）を添加し、バイアルを密封し、そしてこの反応系を、８０℃で一晩加熱した。この反応系を水で希釈し、そしてジエチルエーテルで抽出した。この有機抽出物をブラインで洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、そして減圧下でエバポレートし、白色固体として５４０ｍｇ（６７％）の１４を生成した。

（実施例２０）

（１−［３，５−ジメトキシ−４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニル］−３−ジメチルアミノ−プロペノン（１５））：バイアル中で、５４０ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ）の１４を、２ｍＬ（過剰）のジメチルホルムアミドジメチルアセタールと合わせた。この反応系を密封し、そして１３０℃で一晩加熱した。この反応系を、乾燥状態まで濃縮し、そしてその残渣を、ジエチルエーテル／ヘキサンを用いて粉砕し、純粋なエナミノン１５を生成した。

（実施例２１）

（（３−クロロフェニル）−（４［３，５−ジメトキシ−４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）フェニル］ピリミジン−２−イル）−アミン（Ｉ−３９））：バイアル中で、６０ｍｇの３−クロロフェニルグアニジンを、４０ｍｇの１５と合わせた。アセトニトリル（０．２５ｍＬ）を添加し、このバイアルを密封し、そして反応液を８０℃で３日間加熱した。この反応系を、酢酸エチルで希釈し、そしてブラインで洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、そして減圧下でエバポレートした。その粗生成物を、溶離液として５０％酢酸エチル／塩化メチレンを使用したフラッシュクロマトグラフィーによって、シリカゲル上で精製し、純粋なＩ−３９を生成した。

（実施例２２）

（３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−ブタ−２−エンニトリル（１６））：０℃のＴＨＦ中の６０％ＮａＨ（１．４６ｇ，６１．１ｍｍｏｌ）のスラリーに、１０．０ｇ（５６．４ｍｍｏｌ）のエチル（シアノメチル）リン酸を添加した。ＴＨＦ中の９．８８ｇ（４７．０ｍｍｏｌ）の３，４，５−トリメトキシアセトフェノンの溶液を、添加し、黄色固体を沈殿した。この混合物を、室温で３０分間攪拌し、水でクエンチし、そして酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）し、そして減圧下でエバポレートし、黄色油として９．３２ｇ（８５％）の１６を生成した。

（実施例２３）

（３−（３，４，５）−トリメトキシフェニル）−４−（トリメチルシラニル）−ブタ−２−エンニトリル（１７））：クロロトリメチルシラン（１９．６ｍＬ，４９．１７ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ中の１６（３．８２ｇ，１６．３ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。この溶液に、ＴＨＦ中のヘキサメチルジシラジドリチウム（１．０Ｍ、２４．６ｍＬ、２４．６ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。この溶液を、１時間攪拌し、水でクエンチし、そしてジクロロメタンで抽出した。この有機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ_４）し、そして減圧下でエバポレートし、黄色油を精製した。この油を、１０〜１５％酢酸エチル／ヘキサンの溶離液を使用したカラムクロマトグラフィーで、シリカゲル上で精製し、白色固体として２．６ｇ（５２％）の１７を生成した。

（実施例２４）

（５−ジメチルアミノ−３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ペンタ−２，４−ジエンニトリル（１８））：３０ｍＬ（過剰）のジメチルホルムアミドジメチルアセタールを、３０ｍＬのトルエン中の１７（５．８ｇ，１９．０１ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。このスラリーを、一晩加熱還流した。混合物を、室温まで冷却し、そしてジクロロメタンで抽出した。この有機抽出物を、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）し、そして減圧下でエバポレートし、黄色油を生成した。この油を、２０〜３０％酢酸エチル／ヘキサンの溶離液を使用したカラムクロマトグラフィーを使用して、シリカゲル上で精製し、黄色油として３．６ｇ（８３％）の１８を生成した。

（実施例２５）

（２−ブロモ−４−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリジン（１９））：ガス状のＨＢｒを、１５分間、クロロホルム中の１８（３．６ｇ，１６．１ｍｍｏｌ）の溶液にバブリングした。この反応系を、ジクロロメタンで希釈し、水で洗浄し、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）し、そして減圧下でエバポレートし、オフホワイトの固体として、３．２ｇ（６２％）の１９を生成した。

（実施例２６）

（３−クロロフェニル）−［４−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−ピリジン−２−イル］−アミン（Ｉ−１４６））：２当量のアニリン、２当量のＮａＨおよびＰｄ（ＰＰｈ３）４を、３ｍＬのＤＭＦ中の１９（５０ｍｇ）の溶液に添加した。この混合物を、８０℃で一晩加熱し、冷却し、水に注ぎ、そして酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を、ブラインで洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、そして減圧下でエバポレートし、褐色油を生成した。この油を、分取用ＨＰＬＣで精製し、純粋なＩ−１４６を生成した。期待質量＝３７０．１０８４；測定質量（Ｍ＋１）＝３７１．０。保持時間＝３．２５分。

本発明者らは、上記実施例１〜２６に記載される方法およびスキームＩ−ＩＶに示される方法に実質的に類似する方法によって、式Ｉの他の化合物を調製した。これらの化合物について特徴付けデータを、以下の表４に要約し、このデータは、ＬＣ／ＭＳ（実測値）、ＨＰＬＣ、および^１Ｈ ＮＭＲデータを含む。

本明細書中以下の表４で使用される場合、「Ｙ」は、示されたデータが利用可能でかつ構造と一致することが見出されたことを示す。化合物番号は、表１、表２、および表３に列挙される化合物番号に対応する。

用語「Ｒ_ｔ」は、化合物に関連する、分で示された保持時間をいう。

（表４．選択された化合物についての特徴付けデータ）

以下の実施例は、本発明の化合物がどのようにＪＮＫ３キナーゼ、Ｓｒｃキナーゼ、Ｌｃｋキナーゼ、ＧＳＫ３キナーゼ、およびＣＤＫ２キナーゼのインヒビターとして試験され得るのかを示す。

（実施例２７）
（ＪＮＫ３タンパク質のクローニング、発現および精製）
公開されたＪＮＫ３α１ ｃＤＮＡを参照（ｑｕｅｒｙ）として使用するＥＳＴデータベースのＢＬＡＳＴ検索により、ヒトＪＮＫ３α１の全体のコード配列を含むＥＳＴクローン（＃６３２５８８）を同定した。ｐｆｕポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ）を使用するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して、ＮｃｏＩ部位およびＢａｍＨＩ部位においてｐＥＴ−１５Ｂ発現ベクターにクローニングするために、このｃＤＮＡに制限部位を導入した。このタンパク質をＥ．ｃｏｌｉで発現させた。発現された全長タンパク質（Ｍｅｔ１〜Ｇｌｎ４２２）の低い溶解度に起因して、４０位のＳｅｒ残基（Ｓｅｒ４０）で始まるＮ末端短縮タンパク質を生成した。この短縮は、ＪＮＫ１タンパク質およびＪＮＫ２タンパク質のＳｅｒ２に対応し、そしてメチオニン残基（開始）およびグリシン残基の前にくる。このグリシン残基を、発現ベクターにクローニングするためのＮｃｏＩ部位を導入するために加える。さらに、回折品質の結晶を生じる構築物を同定するために、系統的Ｃ末端短縮をＰＣＲにより実行した。このような構築物の１つは、ＪＮＫ３α１のアミノ酸残基Ｓｅｒ４０〜Ｇｌｕ４０２をコードし、そしてＭｅｔ残基およびＧｌｙ残基の前にある。

この構築物を、デオキシオリゴヌクレオチド：

（下線を付した開始コドンを有する順方向プライマー）（配列番号１）および

（下線を付した終止コドンを有する逆方向プライマー）（配列番号２）をプライマーとして使用するＰＣＲにより調製し、そしてＤＮＡ配列決定により確認した。コントロール実験は、この短縮ＪＮＫ３タンパク質が、インビトロで上流キナーゼＭＫＫ７を用いて活性化された場合に、ミエリンベースのタンパク質に対して等価なキナーゼ活性を有することを示した。

Ｅ．ｃｏｌｉ株ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｎｏｖａｇｅｎ）を、ＪＮＫ３発現構築物を用いて形質転換し、そしてこの細胞が対数期（ＯＤ_６００約０．８）になるまで、振盪フラスコ中、１００μｇ／ｍｌカルベニシリンを補充したＬＢにおいて３０℃で増殖させた。イソプロピルチオ−β−Ｄ−ガラクトシダーゼ（ＩＰＴＧ）を、０．８ｍＭの最終濃度まで添加し、そしてこの細胞を、遠心分離により２時間後収集した。

ＪＮＫ３を含むＥ．ｃｏｌｉ細胞ペーストを、１０容量／ｇ溶解緩衝液（１０％グリセロール（ｖ／ｖ）、１００ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＤＴＴ、０．１ｍＭ ＰＭＳＦ、２μｇ／ｍｇ ペプスタチン、それぞれ１μｇ／ｍｌのＥ−６４およびロイペプチンを含有する５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．２））中に再懸濁した。細胞を、ミクロ流動器（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）を用いて氷上で溶解し、４℃で３０分間、１００，０００×ｇで遠心分離した。この１００，０００×ｇ上清を、Ｂｕｆｆｅｒ Ａ（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）、１０％グリセロール（ｖ／ｖ）、２ｍＭ ＤＴＴ）で１：５に希釈し、そしてＳＰ−セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）カチオン交換クロマトグラフィー（カラム寸法：２．６×２０ｃｍ）によって４℃で精製した。この樹脂を、５カラム容量のＢｕｆｆｅｒ Ａ、続いて５０ｍＭ ＮａＣｌを含有する５カラム容量のＢｕｆｆｅｒ Ａを用いて洗浄した。結合したＪＮＫ３を、７．５カラム容量の５０〜３００ｍＭ ＮａＣｌの線形勾配で溶出させた。ＪＮＫ３は、１５０〜２００ｍＭ ＮａＣｌの間で溶出した。

（実施例２８）
（ＪＮＫ３の活性化）
５ｍｇのＪＮＫ３を、１００ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＤＴＴ、２０ｍＭ ＭｇＣｌ_２および１ｍＭ ＡＴＰを含有する５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）に０．５ｍｇ／ｍｌまで希釈した。ＧＳＴ−ＭＫＫ７（ＤＤ）を１：２．５のＧＳＴ−ＭＫＫ７：ＪＮＫ３のモル比で添加した。２５℃で３０分間のインキュベーションの後、この反応混合物を、Ｃｅｎｔｒｉｐｒｅｐ−３０（Ａｍｉｃｏｎ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）で限外濾過によって５倍に濃縮し、１０ｍｌまで希釈し、そしてさらに１ｍＭ ＡＴＰを添加した。この手順を３回繰り返して、ＡＤＰを除去し、ＡＴＰを補充した。ＡＴＰの最終添加は、５ｍＭであり、そしてこの混合物を、４℃で一晩インキュベートした。

活性化ＪＮＫ３／ＧＳＴ−ＭＫＫ７（ＤＤ）反応混合物を、透析または限外濾過によって、５ｍＭ ＤＴＴおよび５％グリセロール（ｗ／ｖ）を含有する５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）中に交換した。反応混合物を、１．１Ｍリン酸カリウム（ｐＨ７．５）に調整し、そしてＲａｉｎｉｎ Ｈｙｄｒｏｐｏｒｅカラムを用いる疎水性相互作用クロマトグラフィー（２５℃）により精製した。１．１〜０．０５Ｍリン酸カリウム勾配が、１ｍｌ／分の流速で６０分間にわたって展開されるような場合、ＧＳＴ−ＭＫＫ７および活性化されていないＪＮＫ３は、これらの条件下で結合せず、二重にリン酸化したＪＮＫ３は、単一にリン酸化したＪＮＫから分離される。活性化ＪＮＫ３（すなわち、二重にリン酸化したＪＮＫ３）を、−７０℃で０．２５〜１ｍｇ／ｍｌで貯蔵した。

（実施例２９）
（ＪＮＫ阻害アッセイ）
化合物を、分光光度的な共役酵素アッセイによってＪＮＫ３の阻害についてアッセイした。このアッセイにおいて、活性化されたＪＮＫ３（１０ｎＭ）の一定の濃度を、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２．５ｍＭホスホエノールピルベート、２００μＭ ＮＡＤＨ、１５０μｇ／ｍＬピルベートキナーゼ、５０μｇ／ｍＬ乳酸デヒドロゲナーゼ、および２００μＭ ＥＧＦレセプターペプチドを含有する０．１Ｍ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）を含有する緩衝液中３０℃で１０分間、ＤＭＳＯ中に溶解した種々の濃度の潜在的なインヒビターとインキュベートした。このＥＧＦレセプターペプチドは、配列ＫＲＥＬＶＥＰＬＴＰＳＧＥＡＰＮＱＡＬＬＲを有し、そしてＪＮＫ３触媒化キナーゼ反応におけるホスホリルアクセプターである。この反応を、１０μＭ ＡＴＰの添加により開始し、そしてアッセイプレートを、３０℃に維持した分光光度計のアッセイプレート区画に挿入した。３４０ｎｍの吸光度の減少を、時間の関数としてモニターした。インヒビター濃度の関数としての速度データを、Ｋ_ｉを決定するための競合的阻害速度論モデルにあてはめた。

表５は、ＪＮＫ阻害アッセイにおける本発明の選択された化合物の活性の結果を示す。化合物番号は、表１、表２、および表３における化合物番号に対応する。０．１マイクロモーラー（μＭ）未満のＫ_ｉを有する化合物を、「Ａ」と評価し、０．１μＭと１μＭとの間のＫ_ｉを有する化合物を、「Ｂ」と評価し、そして１μＭよりも大きなＫ_ｉを有する化合物を、「Ｃ」と評価する。活性評点「Ｄ」、「Ｅ」、および「Ｆ」は、２μＭインヒビター濃度での阻害パーセントに対応する。「Ｄ」として示した活性を有する化合物は、３３％以下の阻害パーセントを与え；「Ｅ」として示した活性を有する化合物は、２４％と６６％との間の阻害パーセントを与え；そして「Ｆ」として示した活性を有する化合物は、６７％と１００％との間の阻害パーセントを与えた。

（表５．ＪＮＫ阻害アッセイにおける活性）

（実施例３０）
（Ｓｒｃ阻害アッセイ）
化合物を、バキュロウイルス細胞から発現させ、精製した全長組換えヒトＳｒｃキナーゼ（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，カタログ番号１４−１１７に由来）のインヒビターとしてアッセイした。ＡＴＰからＧｌｕ：Ｔｙｒ＝４：１の組成のランダムポリＧｌｕ−Ｔｙｒポリマー基質（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ−０２７５）のチロシンへの^３３Ｐの取り込みを追跡することによって、Ｓｒｃキナーゼ活性を、モニターした。最終濃度のアッセイ成分は、以下の通りであった：０．０５Ｍ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．６）、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２ｍＭ ＤＴＴ、０．２５ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、１０μＭ ＡＴＰ（１〜２μＣｉ ^３３Ｐ−ＡＴＰ／反応）、５ｍｇ／ｍｌポリＧｌｕ−Ｔｙｒ、および１〜２単位の組換えヒトＳｒｃキナーゼ。代表的なアッセイにおいて、ＡＴＰを除く全ての反応成分を、予め混合し、そしてアッセイプレートウェル中に等分にした。ＤＭＳＯ中に溶解したインヒビターを、このウェルに添加して、２．５％の最終ＤＭＳＯ濃度を与えた。^３３Ｐ−ＡＴＰを用いた反応を開始する前に、このアッセイプレートを、３０℃で１０分間インキュベートした。反応の２０分後、この反応を、２０ｍＭ Ｎａ_３ＰＯ_４を含有する１５０μｌの１０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）でクエンチした。次いで、このクエンチしたサンプルを、フィルタープレート減圧マニホールド上に設置した９６ウェルフィルタープレート（Ｗｈａｔｍａｎ，ＵＮＩ−Ｆｉｌｔｅｒ ＧＦ／Ｆ Ｇｌａｓｓ Ｆｉｂｅｒ Ｆｉｌｔｅｒ，カタログ番号７７００−３３１０）に移した。フィルタープレートを、２０ｍＭ Ｎａ_３ＰＯ_４を含有する１０％ ＴＣＡで４回、次いでメタノールで４回洗浄した。次いで、２００μｌのシンチレーション流体を、それぞれのウェルに添加した。プレートを、密封し、そしてフィルターに結合した放射能の量を、ＴｏｐＣｏｕｎｔシンチレーションカウンターによって定量化した。

表６は、ＳＲＣ阻害アッセイにおける本発明の選択された化合物の活性の結果を示す。化合物番号は、表１、表２、および表３における化合物番号に対応する。０．１マイクロモーラー（μＭ）未満のＫ_ｉを有する化合物を、「Ａ」と評価し、０．１μＭと１μＭとの間のＫ_ｉを有する化合物を、「Ｂ」と評価し、そして１μＭよりも大きなＫ_ｉを有する化合物を、「Ｃ」と評価する。活性評点「Ｄ」、「Ｅ」、および「Ｆ」は、２μＭインヒビター濃度での阻害パーセントに対応する。「Ｄ」として示した活性を有する化合物は、３３％以下の阻害パーセントを与え；「Ｅ」として示した活性を有する化合物は、２４％と６６％との間の阻害パーセントを与え；そして「Ｆ」として示した活性を有する化合物は、６７％と１００％との間の阻害パーセントを与えた。

（表６．ＳＲＣ阻害アッセイにおける活性）

（実施例３１）
（Ｌｃｋ阻害アッセイ）
化合物を、ウシ胸腺から精製したＬｃｋキナーゼ（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号１４−１０６に由来）のインヒビターとしてアッセイした。ＡＴＰからＧｌｕ：Ｔｙｒ＝４：１の組成のランダムポリＧｌｕ−Ｔｙｒポリマー基質（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ−０２７５）のチロシンへの^３３Ｐの取り込みを追跡することによって、Ｌｃｋキナーゼ活性を、モニターした。最終濃度のアッセイ成分は、以下の通りであった：０．０５Ｍ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．６）、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２ｍＭ ＤＴＴ、０．２５ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、１０μＭ ＡＴＰ（１〜２μＣｉ ^３３Ｐ−ＡＴＰ／反応）、５ｍｇ／ｍｌポリＧｌｕ−Ｔｙｒ、および１〜２単位のｌｃｋキナーゼ。代表的なアッセイにおいて、ＡＴＰを除く全ての反応成分を、予め混合し、そしてアッセイプレートウェル中に等分にした。ＤＭＳＯ中に溶解したインヒビターを、このウェルに添加して、２．５％の最終ＤＭＳＯ濃度を与えた。^３３Ｐ−ＡＴＰを用いた反応を開始する前に、このアッセイプレートを、３０℃で１０分間インキュベートした。反応の２０分後、この反応を、２０ｍＭ Ｎａ_３ＰＯ_４を含有する１５０μｌの１０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）でクエンチした。次いで、このクエンチしたサンプルを、フィルタープレート減圧マニホールド上に設置した９６ウェルフィルタープレート（Ｗｈａｔｍａｎ，ＵＮＩ−Ｆｉｌｔｅｒ ＧＦ／Ｆ Ｇｌａｓｓ Ｆｉｂｅｒ Ｆｉｌｔｅｒ，カタログ番号７７００−３３１０）に移した。フィルタープレートを、２０ｍＭ Ｎａ_３ＰＯ_４を含有する１０％ ＴＣＡで４回、次いでメタノールで４回洗浄した。次いで、２００μｌのシンチレーション流体を、それぞれのウェルに添加した。プレートを、密封し、そしてフィルターに結合した放射能の量を、ＴｏｐＣｏｕｎｔシンチレーションカウンターによって定量化した。

表７は、Ｌｃｋ阻害アッセイにおける本発明の選択された化合物の活性の結果を示す。化合物番号は、表１、表２、および表３における化合物番号に対応する。０．１マイクロモーラー（μＭ）未満のＫ_ｉを有する化合物を、「Ａ」と評価し、０．１μＭと１μＭとの間のＫ_ｉを有する化合物を、「Ｂ」と評価し、そして１μＭよりも大きなＫ_ｉを有する化合物を、「Ｃ」と評価する。活性評点「Ｄ」、「Ｅ」、および「Ｆ」は、５μＭインヒビター濃度での阻害パーセントに対応する。「Ｄ」として示した活性を有する化合物は、３３％以下の阻害パーセントを与え；「Ｅ」として示した活性を有する化合物は、２４％と６６％との間の阻害パーセントを与え；そして「Ｆ」として示した活性を有する化合物は、６７％と１００％との間の阻害パーセントを与えた。

（表７．Ｌｃｋ阻害アッセイにおける活性）

（実施例３２）
（ＧＳＫ−３阻害アッセイ）
化合物を、標準的な共役酵素アッセイ（Ｆｏｘら、（１９９８）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ ７，２２４９）を用いて、グリコゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ−３）を阻害するそれらの能力について以下の様式でスクリーニングした。アッセイについて、０．１Ｍ ＨＥＰＥＳ ７．５、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２５ｍＭ ＮａＣｌ、２．５ｍＭホスホエノールピルベート、３００μＭ ＮＡＤＨ、１ｍＭ ＤＴＴ、３０μｇ／ｍＬ ピルベートキナーゼ、１０μｇ／ｍＬ乳酸デヒドロゲナーゼ、３００μＭペプチド（ＨＳＳＰＨＱｐ−ＳＥＤＥＥＥ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）、および６０ｎＭ ＧＳＫ−３を含有するストック緩衝溶液を、ＤＭＳＯ中３０μＭの化合物の溶液に添加し、そして得られた混合物を、３０℃で５分間インキュベートした。この反応を、１０μＭ ＡＴＰの添加によって開始した。反応速度を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓプレートリーダー（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を使用して、３０℃で読取時間５分間にわたって３４０ｎｍ（ｎＭ）で吸光度をモニターすることによって得た。ＩＣ_５０を、インヒビター濃度の関数として、速度データから決定した。

表８は、ＧＳＫ−３阻害アッセイにおける本発明の選択された化合物の活性の結果を示す。化合物番号は、表１、表２、および表３における化合物番号に対応する。０．１マイクロモーラー（μＭ）未満のＫ_ｉを有する化合物を、「Ａ」と評価し、０．１μＭと１μＭとの間のＫ_ｉを有する化合物を、「Ｂ」と評価し、そして１μＭよりも大きなＫ_ｉを有する化合物を、「Ｃ」と評価する。

（表８．選択された化合物のＧＳＫ−３阻害活性）

（実施例３３）
（ＣＤＫ２阻害アッセイ）
化合物を、標準的な共役酵素アッセイ（Ｆｏｘら、（１９９８）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ ７，２２４９）を用いて、ＣＤＫ２を阻害するそれらの能力について以下の様式でスクリーニングした。

アッセイについて、０．１Ｍ ＨＥＰＥＳ ７．５、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ ＤＴＴ、２５ｍＭ ＮａＣｌ、２．５ｍＭホスホエノールピルベート、３００ｍＭ ＮＡＤＨ、３０ｍｇ／ｍｌ ピルベートキナーゼ、１０ｍｇ／ｍｌ乳酸デヒドロゲナーゼ、１００ｍＭ ＡＴＰ、および１００μＭペプチド（ＭＡＨＨＨＲＳＰＲＫＲＡＫＫＫ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を含有するストック緩衝溶液を、本発明の化合物のＤＭＳＯ溶液に、３０μＭの最終濃度まで添加した。得られた混合物を、３０℃で１０分間インキュベートした。

この反応を、このアッセイにおいて２５ｎＭの最終濃度を与えるような１０μＬのＣＤＫ−２／サイクリン（Ｃｙｃｌｉｎ）Ａストック溶液の添加によって開始した。反応速度を、ＢｉｏＲａｄ Ｕｌｔｒａｍａｒｋプレートリーダー（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用して、３０℃で読取時間５分間にわたって３４０ｎｍで吸光度をモニターすることによって得た。Ｋ_ｉ値を、インヒビター濃度の関数として、速度データから決定した。

表９は、ＣＤＫ２阻害アッセイにおける本発明の選択された化合物の活性の結果を示す。化合物番号は、表１、表２、および表３における化合物番号に対応する。２マイクロモーラー（μＭ）未満のＫ_ｉを有する化合物を、「Ａ」と評価し、２μＭと５μＭとの間のＫ_ｉを有する化合物を、「Ｂ」と評価し、そして５μＭよりも大きなＫ_ｉを有する化合物を、「Ｃ」と評価する。

（表９．選択された化合物のＣＤＫ２阻害活性）

本発明者らは、本発明の多数の実施形態を記載したが、本発明者らの基本的な実施例が、変更されて、本発明の化合物および方法を使用する他の実施形態を提供し得ることは、明らかである。従って、本発明の範囲は、例として示された特定の実施形態よりも、添付された特許請求の範囲によって規定されることが、理解される。

Claims (13)

1. 式Ｉまたは式ＩＩ：
   

   

   の化合物あるいはその薬学的に受容可能な塩であって、
   ここで：
   各Ｗは、窒素またはＣＨから独立して選択され；
   Ｒ ^１、Ｒ^２、およびＲ^３は、メチル、ＯＨ、ＯＣＨ _３ 、ＯＣＨ _２ ＣＨ _３ 、ＮＨＣＯＭｅ、ＮＨ _２ 、ＮＨ（Ｃ _１〜４ 脂肪族）、Ｎ（Ｃ _１〜４ 脂肪族） _２ 、Ｏ（ＣＨ _２ ） _２ モルホリン−４−イル、Ｏ（ＣＨ _２ ） _２ ＮＨ _２ 、Ｏ（ＣＨ _２ ） _２ ＮＨ（Ｃ _１〜４ 脂肪族）、Ｏ（ＣＨ _２ ） _２ Ｎ（Ｃ _１〜４ 脂肪族） _２ 、ブロモ、クロロ、またはフルオロから独立して選択されるか；あるいは
   Ｒ^１およびＲ^２、またはＲ^２およびＲ^３は、一緒になって、
   

   

   を形成し；
   Ｒ^４は、置換された、フェニル環、シクロヘキシル環、ナフチル環、ピリジル環、ピリミジニル環、トリアジニル環、チアゾリル環、チアジアゾリル環、ピラゾリル環、イソオキサゾリル環、インダゾリル環、またはベンズイミダゾリル環であり；
   ここで、前記環は、クロロ、フルオロ、ブロモ、メチル、エチル、ｔ−ブチル、イソプロピル、シクロプロピル、ＣＮ、ニトロ、ＯＭｅ、ＯＥｔ、ＣＦ _３ 、ＮＨ _２ 、ベンジル、ベンジルオキシ、ＯＨ、メチレンジオキシ、ＳＯ _２ ＮＨ _２ 、フェノキシ、Ｏ−ピリジニル、ＳＯ _２ フェニル、ニトロフェノキシ、アミノフェノキシ、Ｓ−ジメチルピリミジン、ＮＨフェニル、ＮＨ−メトキシフェニル、ピリジニル、アミノフェニル、フェノール、クロロ−フルオロ−フェニル、ジメチルアミノフェニル、ＣＦ _３ −フェニル、ジメチルフェニル、クロロフェニル、フルオロフェニル、メトキシフェノキシ、クロロフェノキシ、エトキシフェノキシ、またはフルオロフェノキシから独立して選択される１〜３個の基で置換されており；
   但し：
   （ｉ）Ｒ^４が、２つのＯＲで置換されたフェニルであり、Ｒが水素でない場合、２つのＯＲは、同時にメタおよびパラではないフェニル環上の位置を占め；そして
   （ｉｉ）該化合物が、式ＩＩＩ
   

   

   の化合物以外であり、ここで：
   Ａは、ハロゲン、Ｎ（Ｒ^１０）_２ またはＯＲ ^１０ から選択される１つ以上の基で置換されたフェニル環であり、ここで
   各Ｒ^１０は、水素、またはＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１〜Ｃ_７アルキル）もしくはＮ（Ｃ_１〜Ｃ_７アルキル）_２で必要に応じて置換されたＣ_１〜Ｃ_７アルキル基から独立して選択され；そして
   Ｂは、ハロゲン、ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^１０）_２、Ｎ（Ｒ^１０）_２、ＯＲ^１０またはフルオロ−（Ｃ_１〜Ｃ_７）アルキル基から選択される、
   化合物。
2. 表Ｉ（ＷがＮである式Ｉの化合物）
   

   

   

   

   

   

   

   

   

   表ＩＩ（式中、Ｗ＝ＣＨである式Ｉの化合物）
   

   

   

   

   

   

   

   

   

   および表ＩＩＩ（式中、Ｗが＝Ｎである式ＩＩの化合物）
   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   に記載された化合物からなる群から選択される、化合物。
3. 請求項１または２のいずれか１項に記載の化合物および薬学的に受容可能なキャリア、アジュバント、またはビヒクルを含む、組成物。
4. 請求項３に記載の組成物であって、抗増殖剤、抗炎症剤、免疫調節剤、神経栄養性因子、心臓血管疾患を処置するための薬剤、肝臓疾患を処置するための薬剤、抗ウイルス剤、血液障害を処置するための薬剤、糖尿病を処置するための薬剤、または免疫不全障害を処置するための薬剤から選択されるさらなる治療剤をさらに含有する、組成物。
5. 生物学的サンプルにおいて、ＪＮＫ３キナーゼ活性、ＧＳＫ−３キナーゼ活性、ＣＤＫ２キナーゼ活性、Ｌｃｋキナーゼ活性、またはＳｒｃキナーゼ活性を阻害することにおいて使用するための、請求項１または２のいずれか１項に記載の化合物。
6. 患者における、ＪＮＫ３媒介疾患または状態、ＧＳＫ−３媒介疾患または状態、ＣＤＫ２媒介疾患または状態、Ｌｃｋ媒介疾患または状態、またはＳｒｃ媒介疾患または状態を処置するかあるいは該疾患または状態の重篤度を減少させることにおいて使用するための、請求項３に記載の組成物。
7. 患者において、炎症性疾患、自己免疫疾患、破壊性骨疾患、神経変性疾患、発作における再灌流／虚血、心不全、脈管形成障害、器官低酸素症、脈管過形成、心臓肥大、トロンビン誘導血小板凝集、または炎症誘発性サイトカインに関連する状態から選択される疾患または状態を処置するかあるいは該疾患または状態の重篤度を減少させることにおいて使用するための、請求項３に記載の組成物。
8. 患者において、高カルシウム血症、骨粗しょう症、変形性関節症、骨転移の対症療法、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、狼瘡、対宿主性移植片病、Ｔ細胞媒介性過敏性疾患、橋本甲状腺炎、ギヤン−バレー症候群、慢性閉塞性肺障害、接触皮膚炎、パジェット病、喘息、虚血または再灌流障害、アレルギー疾患、アトピー性皮膚炎、あるいはアレルギー性鼻炎から選択される疾患または状態を処置するかあるいは該疾患または状態の重篤度を減少させることにおいて使用するための、請求項３に記載の組成物。
9. 患者において、糖尿病、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、ＡＩＤＳ関連痴呆、筋萎縮性側索硬化症（ＡＭＬ）、多発性硬化症（ＭＳ）、精神分裂病、心筋細胞肥大、または禿頭症から選択される疾患または状態を処置するかあるいは該疾患または状態の重篤度を減少させることにおいて使用するための、請求項３に記載の組成物。
10. ＣＤＫ２の阻害により癌細胞のそれらの増殖期への移行をブロックすることにより癌を処置するかまたは癌の重篤度を減少させることにおいて使用するための、請求項１または２のいずれか１項に記載の化合物；または請求項３に記載の組成物。
11. 抗増殖剤、抗炎症剤、免疫調節剤、神経栄養性因子、心臓血管疾患を処置するための薬剤、肝臓疾患を処置するための薬剤、抗ウイルス剤、血液障害を処置するための薬剤、糖尿病を処置するための薬剤、または免疫不全障害を処置するための薬剤から選択されるさらなる治療剤と共に使用するための、請求項３に記載の組成物であって、ここで：
    該さらなる治療剤が、処置される疾患に適切であり；そして
    該さらなる治療剤が、単一投薬形態として該組成物とともに使用されるか、または複数投薬形態の一部として該組成物とは別々に使用される、
    組成物。
12. 移植可能デバイスをコーティングするための組成物であって、該組成物が、請求項１に記載の化合物および該移植可能デバイスをコーティングするのに適切なキャリアを含有する、組成物。
13. 請求項１２に記載の組成物でコーティングされた、移植可能デバイス。