JP6573910B2 - 末梢動脈疾患の治療用バルーンカテーテル - Google Patents

Description

水不溶性薬剤の薬剤コート層、および前記水不溶性薬剤の特定の結晶形態型を示す薬剤コート層、ならびに下肢末梢動脈疾患の治療方法を開示する。

近年、バルーンカテーテルに薬剤をコートした薬剤溶出バルーン（ＤＥＢ：Ｄｒｕｇ Ｅｌｕｔｉｎｇ Ｂａｌｌｏｏｎ）の開発が活発に行われており、再狭窄の治療および予防に効果的であると報告されている。バルーンは、薬剤および賦形剤を含むコート層でコートされており、血管を拡張した際にバルーンを血管壁に押付け、薬剤を標的組織に送達する。

近年、バルーン表面にコートされる薬剤の結晶形態型が、病変患部におけるバルーン表面からの薬剤の放出特性および組織移行性に影響を及ぼすことが見出されており、薬剤の結晶形または非結晶形の制御が重要であることが知られている。

従来のコート層を有する薬剤溶出バルーンは、血管の狭窄部を治療する際に低い毒性及び高い狭窄抑制率の効果を十分に示すとは言えないので、毒性がさらに低く狭窄抑制効果が高い医療機器が要望される。

ＤＥＢは金属ステント（ＢＭＳ：Ｂａｒｅ Ｍｅｔａｌ Ｓｔｅｎｔ）や薬剤溶出ステント（ＤＥＳ：Ｄｒｕｇ−Ｅｌｕｔｉｎｇ Ｓｔｅｎｔ）と違って血管内にいかなる異物も残さないので、ＤＥＢは使用上の優利点を有する。特に、下肢の治療にはステントの使用は推奨されておらず、ＤＥＢが必要とされている。一方で、ＤＥＢの使用の際には、微小粒子によって生じる下流末梢血管での塞栓形成の危険性が懸念される。末梢血管の塞栓形成は壊死による下肢切断の危険性をもたらす可能性があるので、末梢血管の塞栓形成の軽減は臨床的に重要である。下腿（ＢＴＫ：Ｂｅｌｏｗ−Ｔｈｅ−Ｋｎｅｅ）部の血管は末梢に位置しており、その血管径は小さい。したがって、塞栓形成の危険性が注目され、ＤＥＢは塞栓形成の危険性が低いことが求められる。このことは、微小粒子の数のみならず、微小粒子のサイズにも関連があると推定される。サイズが大きいほど、下流末梢血管に隣接する筋肉に微小粒子が分散されやすくなる。これによって塞栓形成の危険性が増すと考えられるので、微小粒子のサイズは小さいことが期待される。

ＤＥＢの十分な治療効果を得るためには、血管組織の病変部に移行する薬剤の濃度および薬剤濃度の経時変化を維持することが重要である。また、平滑筋細胞の増殖を抑制すべき初期においては、血管組織内に比較的高い薬剤濃度が必要であるが、内皮細胞の増殖を抑制すべきでない終期においては、組織から薬剤が迅速に消え去ることが求められる。薬剤濃度の変化において、ＤＥＢによってこれら２つの点が達成されれば、ＤＥＢは効能及び安全性の両方において非常に優れた治療効果をもたらすことができる。

ＤＥＢの特徴のひとつは、バルーンの拡張後、２、３分で迅速に薬剤を放出し、十分な量の薬剤を血管組織に移行させることである。もしも薬剤が被治療病変部全体に均一に移行しなければ、治療中の病変部に均一な抑制効果を付与することは期待できない。特に、下肢の血管における病変部の長さは冠動脈におけるそれよりも長いため、下肢において均一な効能を得るのは困難である。

本発明は、薬剤をコートした医療機器を体内に送達する際、病変患部における血管内狭窄抑制効果が高い水不溶性薬剤の形態型を有する薬剤コート層、およびそれを用いた医療機器を提供することである。

本発明は、病変患部において高い血管内狭窄抑制効果を有する水不溶性薬剤の特定の結晶形態型を有する薬剤コート層によって、取り組まれる。

以下のように、種々の態様を開示する。

（１）水不溶性薬剤の各結晶が独立して持つ長軸を備えた複数の長尺体を含む形態型を有する、基材表面上の薬剤コート層であって、前記長尺体の長軸はほぼ直線状であり、前記長尺体の長軸は前記長尺体の長軸が交わる基材平面に対して所定の範囲内の角度、好ましくは４５度〜１３５度の範囲内の角度をなす、薬剤コート層。

（２）前記長尺体の少なくとも先端部付近が中空である、（１）に記載の薬剤コート層。

（３）前記長軸に垂直な面上の前記長尺体の断面形状が多角形である、（１）または（２）に記載の薬剤コート層。

（４）前記水不溶性薬剤の結晶の平たく細長い髪の毛状の結晶が前記基材表面上に不規則に積層されており、前記結晶のいくつかの前記長軸は曲線状に湾曲した部分を有し、他の形状の結晶が同一結晶面には混在しない薬剤コート層である、前記薬剤コート層。

（５）前記水不溶性薬剤の結晶の表面が非晶質膜で覆われている、（４）に記載の薬剤コート層。

（６）水不溶性薬剤の結晶形態型を含み、前記水不溶性薬剤の結晶粒子が前記基材表面上に規則性をもって配置され、賦形剤からなる賦形剤粒子が前記結晶粒子の間に不規則に配置された前記薬剤コート層であって、前記賦形剤の分子量は前記水不溶性薬剤の分子量未満であり、前記基材の面積あたりに占める前記賦形剤粒子の割合は前記結晶粒子の割合未満であり、前記賦形剤粒子はマトリックスを形成していない、薬剤コート層。

（７）前記水不溶性薬剤はラパマイシン、パクリタキセル、ドセタキセル、またはエベロリムスである、（１）〜（６）のいずれかに記載の薬剤コート層。

（８）その表面上に（１）〜（７）のいずれかに記載の薬剤コート層を有する医療機器であって、体内に送達する際には縮径して送達され、患部においては拡径して前記薬剤コート層から薬剤を放出する、医療機器。

（９）（８）に記載の医療機器を管腔に送達するステップと、前記医療機器に備えられた拡張可能部を径方向に拡張するステップと、前記拡張可能部を有する前記薬剤コート層を前記管腔に作用させるステップとを含む、薬剤送達方法。

病変患部における血管内狭窄抑制効果が高く、および／または毒性が低い薬剤溶出性医療機器のための薬剤コート層を提供することができる。

その表面上に均一のサイズにて規則的に配置された水不溶性薬剤の複数の結晶粒子を含む結晶形態型を有する薬剤コート層を有する拡張可能部材を有する医療機器を用意することと、前記医療機器を末梢血管に挿入することと、前記拡張可能部材を拡張することと、前記複数の結晶粒子のうちの少なくとも一部が血管壁に移行するように前記薬剤コート層を前記血管壁に押付けることと、末梢血管の塞栓形成を生じさせる様なサイズの微小粒子の発生が抑制されるように前記拡張可能部材を収縮させることを含む、末梢血管の塞栓形成の危険性を減少させる方法が提供される。

その表面上に均一なサイズにて規則的に配置された水不溶性薬剤の複数の結晶粒子を含む結晶形態型を有する拡張可能部材を有する医療機器を用意することと、前記医療器具を末梢血管に挿入することと、前記拡張可能部材を拡張することと、前記複数の結晶の少なくとも一部が血管壁に移行するように前記薬剤コート層を前記血管壁に押付けることと、高薬剤濃度期間においては平滑筋細胞の増殖が抑制され、かつ、その後の低薬剤濃度期間においては内皮細胞の増殖が抑制されないように血管中薬剤濃度が保たれる薬物動態プロファイルがもたらされるように、前記拡張可能部材を収縮させることを含む、下肢末梢動脈疾患の治療方法が提供される。

その表面上に均一のサイズにて規則的に配置された水不溶性薬剤の複数の結晶粒子を含む結晶形態型を有する薬剤コート層を有する拡張可能部材を有する医療機器を用意することと、前記医療機器を末梢血管に挿入することと、前記拡張可能部材を拡張することと、前記複数の結晶粒子のうちの少なくとも一部が血管壁に移行するように前記薬剤コート層を前記血管壁に押付けることと、狭窄の被治療病変部の全体（長い病変部全体）において血管内膜肥厚が抑制されて病変部が均一に開存状態になるように前記拡張可能部材を収縮させることを含む、血管内膜肥厚の抑制方法が提供される。
以下、本明細書中、「μｍ（ｍｉｃｒｏ ｍ）」はマイクロメートル（ミクロン）を意味する。

図１Ａ〜図１Ｄは、実施例１で作製した薬剤コート層の表面の走査型電子顕微鏡（以下ＳＥＭという：Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）像を示す図面である。図１Ａは、実施例１で作製した薬剤コート層の基材表面に観察される結晶の２０００倍のＳＥＭ像である。 図１Ｂは実施例１で作製した基材表面の他の部分に観察される結晶の１０００倍のＳＥＭ像である。 図１Ｃは、実施例１で作製した基材表面の他の部分に観察される結晶の４００倍のＳＥＭ像である。 図１Ｄは、実施例１で作製した薬剤コート層の基材表面に垂直な横断面で観察される結晶の４０００倍のＳＥＭ像である。 図２は、実施例２で作製した薬剤コート層の基材表面に観察される結晶の２０００倍のＳＥＭ像を示す図である。 図３Ａは、実施例３で作製した薬剤コート層の基材表面に観察される結晶の２０００倍のＳＥＭ像を示す図である。 図３Ｂは、実施例３で作製した薬剤コート層の基材表面に垂直な横断面で観察される結晶の４０００倍のＳＥＭ像である。 図４は、実施例４で作製した薬剤コート層の基材表面に観察される結晶の２０００倍のＳＥＭ像を示す図である。 図５は、実施例５で作製した薬剤コート層の基材表面に観察される結晶の２０００倍のＳＥＭ像を示す図である。 図６Ａは、実施例６で作製した薬剤コート層の基材表面に観察される結晶の２０００倍のＳＥＭ像を示す図である。 図６Ｂは、実施例６で作製した薬剤コート層の基材表面の他の部分に観察される結晶の４００倍のＳＥＭ像を示す図である。 図７は、比較例１でＩＮＶＡｔｅｃ ＪＡＰＡＮ社製の市販薬剤溶出バルーン（ＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標））の薬剤コート層の基材表面に観察される結晶の２０００倍のＳＥＭ像を示す図である。 図８は、ブタ冠動脈内の血管内狭窄に対する抑制効果を示す血管内狭窄率（％）のグラフである。 図９Ａは、実施例７及び比較例３の粒度１０μｍ〜２５μｍの粒子率を示すグラフである。 図９Ｂは、実施例７および比較例３の粒度１００μｍ〜９００μｍの粒子率を示すグラフである。 図１０は、実施例９および比較例Ｃ６〜Ｃ９における、ブタ大腿動脈組織内移行に対する０．０２日後〜０．０４日後（０．５時間〜１時間後）から７日後までの薬剤濃度の曲線下面積（ＡＵＣ：Ａｒｅａ Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ Ｃｕｒｖｅ）を示すグラフである。 図１１は、実施例９および比較例Ｃ６〜比較例Ｃ９における、ブタ大腿動脈組織内移行に対する２７±１日後までの薬物動態プロファイルを示すグラフである。 図１２は、実施例１０および比較例Ｃ６−ｂ〜比較例Ｃ８−ｂ、比較例Ｃ１０および比較例Ｃ１１における、ブタ冠動脈における血管内狭窄抑制効果に対する２８日後の面積狭窄百分率を示すグラフである。 図１３は、実施例１０および比較例Ｃ６−ｂ〜比較例Ｃ１１における、ブタ冠動脈における血管内狭窄抑制効果に対する２８日後の面積狭窄率（％）の均一性を示すグラフである。 図１４は、実施例１０の走査型電子顕微鏡像であって、均一なパクリタキセル微結晶を示す。 図１５は、比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）の走査型電子顕微鏡像であって、不均一な薬剤コート層を示す。 図１６は、実施例９、比較例６−ａ（Ｃ６−ａ）、比較例７−ａ（Ｃ７−ａ）および比較例１３（Ｃ１３）における、ブタ大腿動脈組織内移行に対する薬物動態プロファイルを示すグラフである。 図１７は、実施例９、比較例６−ａ（Ｃ６−ａ）、比較例７−ａ（Ｃ７−ａ）および比較例１３（Ｃ１３）における、ブタ大腿動脈組織内移行に対する薬剤濃度のＡＵＣを示すグラフである。

薬剤をコートした医療機器を体内に送達するに際して、病変患部における毒性が低く、高い血管内狭窄抑制効果を有する薬剤コート層が、水不溶性薬剤の特定の結晶形態を持たせることで提供できることが結論付けられた。

以下の結晶形態が好適に例示される。

（１）中空長尺体の結晶形態型を含む層

中空長尺体結晶を含む形態型を有する層は、水不溶性薬剤の結晶で形成される長軸を有する複数の長尺体が基材表面上にブラシ状に存在する薬剤コート層である。複数の長尺体は、基材表面上にブラシ状で周方向に配列されている。各々の前記長尺体は、独立して存在し、ある長さを持ち、長尺体の一端（基端）が基材表面に固定されている。前記長尺体は、隣接する長尺体と複合的な構造を形成せず、また、互いに結合していない。前記結晶の長軸は、形状がほぼ直線状である。前記長尺体は、その長軸が交わる基材平面に対して所定の角度をなす。所定の角度とは、４５度〜１３５度の範囲内である。所定の角度として、７０度〜１１０度の範囲内であることが好ましく、８０度〜１００度の範囲であることがより好ましい。前記長尺体の長軸が基材平面に対してほぼ９０度の角度をなすことがより好ましい。前記長尺体は、少なくともその先端付近が中空である。前記長尺体の横断面は、長尺体の長軸に垂直な面において中空である。長軸に垂直な面における長尺体の中空横断面は、多角形である。該多角形としては、四角形、五角形、六角形等が挙げられる。したがって、長尺体は先端（または先端面）および基端（または基端面）を有し、先端（または先端面）および基端（または基端面）の間の側面は複数の平面で構成される長尺多面体として形成される。結晶形態型は、基材表面において、ある平面の全体または少なくとも一部を構成する。例えば、中空長尺体結晶形態型を含む層は、図１〜図５のＳＥＭ像に示される結晶形態型を有する層である。

例えば、中空長尺体結晶を含む形態型を有する層の特徴は、以下のとおりである。

１）独立した長軸を有する複数の長尺体（棒状体）であって、長尺体は中空である。

２）長尺体は棒である。

３）長軸を有する長尺体であり、多くの場合、長軸に垂直な面における長尺体の断面が多角形の多面体である。前記長尺体結晶の５０体積％以上は長尺多面体である。多面体の側面は主として四面体である。場合によっては、前記長尺多面体は、頂点が長軸方向に延びる凹角で形成された複数の面（溝）を有する。ここで言う、凹角とは、長軸に垂直な面における長尺体の断面の多角形の内角の少なくとも一つが１８０度より大きい角度であることを意味する。

４）多くの場合、長軸を有する長尺体は長尺多面体である。長軸に垂直な横断面で見たときに、その断面は多角形であり、四角形、五角形、または六角形として観察される。

５）独立した長軸を有する複数の長尺体は、基材表面に対して所定範囲の角度、好ましくは４５度〜１３５度の範囲で、並び立つ。すなわち、独立した長軸を有する複数の長尺体は、基材表面においてほぼ均一に林立する。長尺体が林立した領域は、基材表面上において周方向および軸方向にほぼ均一に形成されている。各独立長尺体の基材表面に対する各角度は、前記所定範囲内で異なっていてもよく、同一でもよい。

６）独立した長軸を有する各長尺体の一端（基端）は基材表面に固定されている。

７）場合によっては、基材表面に近い部分に、粒子状、短い棒状、または短い曲線状の結晶が積層されている。基材表面に直接的もしくは間接的に長軸を有する長尺体が存在する。したがって、前記積層の上に長軸を有する長尺体が林立する場合もある。

８）長軸を有する長尺体の軸方向の長さは、好ましくは５μｍ〜２０μｍであり、より好ましくは９μｍ〜１１μｍであり、さらに好ましくは約１０μｍである。長軸を有する長尺体の直径は、好ましくは０．０１μｍ〜５μｍであり、より好ましくは０．０５μｍ〜４μｍであり、さらに好ましくは０．１μｍ〜３μｍである。

９）中空長尺体の結晶形態型を含む層の表面には、他の形態型（例えば、アモルファスの板状の形態型）は混在せず、長尺中空物の結晶形態型として５０体積％以上、より好ましくは７０体積％以上が、１）〜７）の結晶形態型として存在している。より好ましくは、中空長尺体のほとんど全てが７）の結晶形態型である。

１０）中空長尺体の結晶形態型において、結晶を構成する水不溶性薬剤を含む薬剤コート層に他の化合物が存在することが可能である。この場合、化合物は、バルーン基材表面上に林立する複数の水不溶性薬剤の結晶（長尺体）の間の空間に分配された状態で存在する。薬剤コート層を構成する物質の割合においては、この場合水不溶性薬剤の結晶の方が、他の化合物よりもはるかに大きな体積を占める。

１１）中空長尺体の結晶形態型においては、結晶を構成する不溶性薬剤は、バルーン基材表面上に存在する。結晶を構成する水不溶性薬剤を有するバルーン基材表面上の薬剤コート層に、賦形剤によるマトリクスは形成されない。したがって、結晶を構成する水不溶性薬剤はマトリクス物質中に付着していない。結晶を構成する水不溶性薬剤は、また、マトリクス物質中に埋め込まれてもいない。

１２）中空長尺体の結晶形態型においては、薬剤コート層は基材表面上に規則性をもって配置された水不溶性薬剤の結晶粒子および前記結晶粒子の間に不規則に配置された賦形剤からなる賦形剤粒子を含んでもよい。この場合、前記賦形剤の分子量は水不溶性薬剤の分子量よりも小さい。したがって、基材の所定の面積あたりの賦形剤粒子が占める割合は、前記結晶粒子が占める割合よりも小さく、前記賦形剤粒子はマトリクスを形成しない。ここで、水不溶性薬剤の結晶粒子は前記長尺体の一つであってよく、また、賦形剤粒子は水不溶性薬剤の結晶粒子よりもはるかに小さい状態で存在し、しかも、水不溶性薬剤の結晶粒子の間に分散しているので、賦形剤粒子がＳＥＭ像で観察されない場合もある。

（２）平坦毛状結晶形態型を含む層

下記に述べる平坦毛状結晶形態型は、薬剤コート層（非晶質形を含む）の少なくとも一部、または５０体積％以上、または８０体積％以上、（結晶形として５０体積％以上、より好ましくは７０体積％以上）、さらに好ましくはほぼ１００体積％を占める。ほぼ１００体積％を占める場合は、複数の結晶形態型が混在することはなく、単一の結晶形態型のみが存在する。

平坦毛状結晶形態型を含む層は、水不溶性薬剤の結晶の平坦長尺毛状結晶が基材表面上に不規則に積層される薬剤コート層であって、前記結晶のいくつかは湾曲形状部を有し、同一の結晶面内に他の形態型の結晶が混在することはない。アモルファス層および結晶層が存在する場合には、「同一結晶面でない」はアモルファス膜が結晶層の上に存在することを意味する。例えば、平坦毛状結晶形態型を含む層は、図６Ａに示す実施例６の結晶形態を有する層である。

例えば、平坦毛状結晶形態型を含む層の特徴は以下のとおりである。

１）長軸を有する毛状結晶が、複数の幅方向で平らに接合した形状をで、中空ではなく、先細り形状である。

２）毛状結晶の接合形状が基材表面上に不規則に積層されている。長軸が基材表面に沿って寝た状態で存在する。

３）前記結晶のいくつかは、湾曲形状部を有する。

４）毛状結晶の長軸方向の長さは、好ましくは１０μｍ〜１００μｍ、より好ましくは約２０μｍであり、上記の中空長尺結晶形態型よりも長いものが多い。

（３）平坦毛状結晶の表面上にアモルファス膜が存在する形態型を含む層

この層は、平坦毛状結晶の表面がアモルファス膜で覆われている薬剤コート層である。平坦毛状結晶の表面にアモルファス膜が存在する形態型を含む層は、平坦毛状結晶の上にアモルファス膜の層が存在しており、結晶層とアモルファス層の２層になっている。例えば、平坦毛状結晶の表面にアモルファス膜が存在する形態型を含む層は、図６Ｂに示す実施例６の結晶形を有する層である。

具体的には、ある面（結晶／アモルファス膜が存在する面）には、ある結晶の形態が少なくとも一部または、５０体積％以上、または８０体積％以上、（結晶形態として５０体積％以上、より好ましくは７０体積％以上）、さらに好ましくは、複数の結晶形態が混在しない、さらに、ある面の外側にアモルファス膜が存在してもよい。

前記中空長尺体の形態型、平坦毛状結晶の形態型、および平坦毛状結晶の表面にアモルファス膜が存在する形態型のそれぞれの結晶層は、基材表面に薬剤をコートした医療機器を薬剤コート層として体内に送達する際に、毒性が低く、血管内狭窄抑制効果が高い。その理由としては、限定するわけではないが、ある結晶形態を有する薬剤を組織内に移行させた後の溶解性および組織内滞留性が影響していると考えられる。例えば、アモルファスの場合は溶解性が高いので、薬剤が組織内に移行しても、すぐに血流の中に流れ込む。したがって、組織内滞留性は低いので、優れた狭窄抑制効果が得られない。一方、前記特定の結晶形を有する水不溶性薬剤は、該薬剤が組織に移行する際に結晶の一つの単位が小さくなるために、組織への浸透性およびその溶解性が優れているので、有効に作用して狭窄を抑制する。また、組織に大きな塊として残る薬剤の量が少ないために、毒性が低くなると考えられる。

特に、中空長尺体の結晶形態型を含む層は、複数の長軸を有するほぼ均一な長尺体であり、かつ基材表面に規則性をもって均一に一列に配列した形態型である。したがって、組織内に移行する結晶は約１０μｍという小さなサイズ（長軸方向の長さ）を有する。このため、前記薬剤は病変患部に均一に作用し、組織浸透性が増大する。さらに、移行する結晶のサイズが小さいため、過剰量の薬剤が病変患部に過剰な時間残存することがないため、毒性が発現することはなく、高い狭窄抑制効果を示すことが可能であると考えられる。

前述の例示された結晶形（１）〜（３）などの前記結晶形態のいずれについても、医療機器の表面に規則的に配置され均一なサイズをもつ水不溶性薬剤の複数の結晶粒子は、基材に対してある角度、好ましくは少なくとも２０度〜９０度の角度で基材から突出する複数の高アスペクト比パクリタキセル結晶を含んでもよい。薬剤結晶は、中空晶癖または針状晶癖を有する複数の高アスペクト比パクリタキセル結晶であってよい。薬剤結晶は、中空針状晶癖を有する複数の高アスペクト比パクリタキセル結晶であってよい。「高アスペクト比」癖は、長寸法長さと短寸法長さを有し、長寸法長さが短寸法長さより実質的に長い、例えば短寸法長さの少なくとも約４倍の長さの、晶癖である。
＜水不溶性薬剤＞

水不溶性薬剤とは、水に不溶性または難溶性の薬剤を意味し、具体的には、水に対する溶解度がｐＨ５〜ｐＨ８で５ｍｇ／ｍＬ未満である。この溶解度は１ｍｇ／ｍＬ未満でもよく、さらに０．１ｍｇ／ｍＬ未満でもよい。水不溶性薬剤は、脂溶性薬剤を含む。

好適な水不溶性薬剤としては、例えば、シクロスポリンを含むシクロスポリン類等の免疫抑制剤、ラパマイシン等の免疫活性剤、パクリタキセル等の抗がん剤、抗ウイルス剤または抗菌剤、抗新生組織剤、鎮痛剤および抗炎症剤、抗生物質、抗てんかん剤、不安緩解剤、抗麻痺剤、拮抗剤、ニューロンブロック剤、抗コリン作動剤およびコリン作動剤、抗ムスカリン剤およびムスカリン剤、抗アドレナリン作用剤、抗不整脈剤、抗高血圧剤、ホルモン剤ならびに栄養剤が挙げられる。

水不溶性薬剤としては、ラパマイシン、パクリタキセル、ドセタキセル、およびエベロリムスからなる群から選択される少なくとも一つが好ましい。本明細書においては、ラパマイシン、パクリタキセル、ドセタキセル、およびエベロリムスとは、同様の薬効を有する限り、それらの類似体および／またはそれらの誘導体を含む。例えば、パクリタキセルはドセタキセルの類似体である。ラパマイシンはエベロリムスの類似体である。これらのうちでは、パクリタキセルがより好ましい。

水不溶性薬剤は、さらに賦形剤を含んでもよい。賦形剤は、医薬として許容されるものであれば限定されないが、例えば、水溶性ポリマー、糖、造影剤、クエン酸エステル、アミノ酸エステル、短鎖モノカルボン酸のグリセロールエステル、医薬として許容される塩類、および界面活性剤等が挙げられる。賦形剤と水不溶性薬剤との比率は限定されないが、具体的には、賦形剤／水不溶性薬剤の比率は０．５〜４．０（ｍｏｌ／ｍｏｌ）の範囲内、より好ましくは１．０〜３．２（ｍｏｌ／ｍｏｌ）の範囲内である。賦形剤はアミノ酸エステル、好ましくはセリンエチルエステルでもよく、水不溶性薬剤はパクリタキセルである。
＜結晶層の製造方法＞

水不溶性薬剤を溶媒に溶解してコーティング溶液を調製する。コーティング溶液を、拡張したバルーン上にコーティング溶液の溶媒がゆっくり揮発するようにコートする。その後、コーティングが乾燥してからバルーンを収縮させることで、結晶層を含む薬剤コート層を作製する。

使用する溶媒としては特に限定されないが、例えば、テトラヒドロフラン、エタノール、グリセリン（グリセロールまたはプロパン−１，２，３−トリオールともいう）、アセトン、メタノール、ジクロロメタン、ヘキサン、酢酸エチル、および水が挙げられる。これらのうちでは、テトラヒドロフラン、エタノール、アセトン、および水のうちのいくつかを混合した混合溶媒が好ましい。

コーティング装置を用いてコーティング溶液を医療機器（例えば、バルーンカテーテル等の医療機器等）の表面にコートする。コーティング装置は、モータ、プラットホーム、およびディスペンシングチューブを含む。モータは、医療機器の基端に固定した回転部材に連結されている。医療機器は回転部材上に載置され、その長手方向軸の回りを回転するように構成される。医療機器は、プラットホーム上で回転し得るようにプラットホーム上に支持されている。コーティング溶液は、ディスペンシングチューブを用いて医療機器の表面にコートされる。ディスペンシングチューブは中空管状構造を有し、先端に開口部を有する。ディスペンシングチューブの先端部の側部は医療機器の表面に接触するように配置され、コーティング溶液は先端開口部から医療機器の表面に吐出される。医療機器は、長手方向軸の回りに、コーティング溶液の吐出とは反対の方向（逆方向）に回転される。ディスペンシングチューブは医療機器の長手方向軸に沿って平行移動して、コーティング溶液を医療機器に塗布する。医療機器の表面に塗布されたコーティング溶液を乾燥してコート層を形成する。医療機器（バルーンカテーテル）の回転は、１０ｒｐｍ〜２００ｒｐｍ、好ましくは３０ｒｐｍ〜１８０ｒｐｍ、より好ましくは５０ｒｐｍ〜１５０ｒｐｍで行われる。平行移動は０．０１ｍｍ／秒〜２ｍｍ／秒、好ましくは０．０３ｍｍ／秒〜１．５ｍｍ／秒、より好ましくは０．０５ｍｍ／秒〜１．０ｍｍ／秒で行われる。医療機器（バルーンカテーテル）のうちコート層が形成される部分は断面が円形または環状であり、その直径は１ｍｍ〜１０ｍｍ、好ましくは２ｍｍ〜７ｍｍである。医療機器表面へのコーティング溶液の吐出は０．０１μＬ／秒〜１．５μＬ／秒、好ましくは０．０１μＬ／秒〜１．０μＬ／秒、より好ましくは０．０３μＬ／秒〜０．８μＬ／秒で行われる。
＜医療器機＞

医療機器は、医療機器の表面に直接またはプライマー層等の前処理層を介して塗布した薬剤コート層を有することができる。薬剤コート層は、薬剤を０．１μｇ／ｍｍ^２〜１０μｇ／ｍｍ^２の密度、好ましくは０．５μｇ／ｍｍ^２〜５μｇ／ｍｍ^２の密度、より好ましくは０．５μｇ／ｍｍ^２〜３．５μｇ／ｍｍ^２の密度、さらに好ましくは１．０μｇ／ｍｍ^２〜３．０μｇ／ｍｍ^２の密度で含むが、これに特に限定されない。

基材の形状および材料は特に限定されない。金属類および樹脂類が材料として使用できる。材料は膜、板、ワイヤ、棒、および不規則形状の材料のいずれでもよく、また微粒子でもよい。

使用する医療機器は限定されない。埋込または挿入が可能な医療機器ならいかなるものでも使用できる。長尺で、縮径した非拡張状態で血管等の体腔内に送達され、血管や組織等の部分で周方向に拡径されて薬剤コート層から薬剤を放出する医療機器が好ましい。したがって、縮径されて送達され、拡径されて患部に当てられる医療機器は、拡張部を有する医療機器である。前記薬剤コート層は、拡張部の表面の少なくとも一部の上に設けられる。すなわち、薬剤は、少なくとも、拡張部の外表面にコートされる。

医療機器の拡張部の材料は、ある程度の柔軟性と、血管または組織に医療機器が到達した際に拡張されてその表面に有する薬剤コート層から薬剤を放出できるようにある程度の硬度を有することが好ましい。具体的には、医療機器は金属または樹脂を用いて構成されるが、薬剤コート層が設けられる拡張部の表面は樹脂で構成されるのが好ましい。拡張部の表面を構成する樹脂は特に限定されないが、好ましい例としてはポリアミド類が挙げられる。すなわち、医療機器の拡張部の表面のうち、少なくとも薬剤がコートされる部分は、ポリアミドである。ポリアミドとしては、アミド結合を有する重合体であれば特に限定されないが、例えば、ポリテトラメチレンアジパミド（ナイロン４６）、ポリカプロラクタム（ナイロン６）、ポリヘキサメチレンアジパミド（ナイロン６６）、ポリヘキサメチレンセバカミド（ナイロン６１０）、ポリヘキサメチレンドデカミド（ナイロン６１２）、ポリウンデカノラクタム（ナイロン１１）、ポリドデカノラクタム（ナイロン１２）等の単独重合体、カプロラクタム／ラウリルラクタム共重合体（ナイロン６／１２）、カプロラクタム／アミノウンデカン酸共重合体（ナイロン６／１１）、カプロラクタム／ω−アミノノナン酸共重合体（ナイロン６／９）、カプロラクタム／ヘキサメチレンジアンモニウムアジペート共重合体（ナイロン６／６６）等の共重合体、アジピン酸とメタキシレンジアミンとの共重合体、またはヘキサメチレンジアミンとｍ，ｐ−フタル酸との共重合体等の芳香族ポリアミドなどが挙げられる。さらに、ナイロン６、ナイロン６６、ナイロン１１、ナイロン１２などをハードセグメントとし、ポリアルキレングリコール、ポリエーテル、または脂肪族ポリエステルなどをソフトセグメントとするブロック共重合体であるポリアミドエラストマーも、医療器具の基材として用いることができる。上記ポリアミド類は、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。

具体的には、拡張部を有する医療機器としては、拡張部（ステント）または拡張部（バルーン）を有する長尺カテーテルが例示される（バルーンカテーテル）。

一実施態様のバルーンにおいては、好ましくは、拡張時に表面上に薬剤コート層が形成され、バルーンがラッピングされ（折りたたまれ）、血管、体腔などに挿入され、組織または患部に送達され、患部で拡径され、そして薬剤が放出される。
＜下肢末梢動脈疾患の治療方法＞

前述のとおり、医療機器を、医療機器の表面上に規則的に配置され均一なサイズをもつ水不溶性薬剤の複数の結晶粒子を含む結晶形態型を有する薬剤コート層を有する拡張可能部材（例えば、バルーン）を有するＤＥＢとして用意する。医療機器を、動脈に設けたアクセス点の切開部を通して、末梢血管内に挿入する。アクセス点は橈骨動脈または大腿動脈に設けることができ、それぞれ上腕アプローチまたは下肢アプローチと呼ばれる。医療機器を、ガイドワイヤやガイディングカテーテルなどの他の医療機器を用いて、動脈からアクセス点を介して下肢の治療すべき末梢動脈疾患の病変部へと挿入する。医療機器を病変部の直近に位置付けたら、拡張可能部材を流体で広げて拡張する。拡張可能部材の表面の薬剤コート層を、血管壁に接触させて押付ける。薬剤は拡張可能部材の表面から直ちに放出され、複数の結晶粒子の少なくとも一部が血管の血管組織に移行する。拡張可能部材を収縮させ、医療機器を血管から抜去する。

本明細書中に記載する医療機器を用いて、下肢の末梢動脈疾患を治療する方法が提供される。末梢動脈疾患の病変部は、下肢の血管（動脈）における老化、感染、糖尿病などによって／とともに発生する動脈硬化症によって形成される。本明細書中に記載するように、病変部に生じる微小粒子のサイズは十分に小さく、末梢血管の塞栓形成を生じる可能性のあるサイズの比較的大きな微小粒子の発生は抑制されることが示された。これは、バルーン表面上の薬剤コート層中に均一に配置され一様なサイズを持つパクリタキセルの結晶粒子によるものと考えられる。本明細書中に記載するＤＥＢが、他社製のＤＥＢと比較して、下流末梢血管に隣接する筋肉中に分散される微小粒子が少ないために、末梢塞栓形成の危険性を減少させ得ることが立証された。このことは、ブタ下肢を使った、下流末梢血管に隣接する筋肉に対する微小粒子の影響を見る実験において示された。

本明細書中に記載するとおり、ＤＥＢを用いて薬物動態プロファイル（ＰＫ：Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃプロファイル）を用意する。このＰＫプロファイルは、ミクロサイズの均一なパクリタキセル結晶粒子によって達成される。バルーン拡張の７日後までの高い組織中薬剤濃度が、平滑筋細胞の増殖に影響する。その後は、組織から迅速に消え去るため、内皮細胞の増殖が抑制されることはない。このＤＥＢは、効能と安全性の両方において優れた成果をもたらす。すなわち、本明細書中で開示するＤＥＢは、血管リモデリングに何らの影響を与える可能性がないので、遅発性血栓症の危険性は減少する。狭窄を強く抑制するが、抗血小板薬２剤併用療法（ＤＡＰＴ：Ｄｕａｌ Ａｎｔｉ−Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｔｈｅｒａｐｙ）は４週間、薬剤無塗布バルーンの場合と同程度に限定されると思われる。ＰＫプロファイルは、バルーン拡張の０．０４日後（６０分後）から７日後までの薬剤の血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ：Ａｒｅａ Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ−ｔｉｍｅ Ｃｕｒｖｅ）が少なくとも２００ｎｇ ｄａｙ／ｍｇ組織、７日後の組織中薬剤濃度が５ｎｇ／ｍｇ組織〜４０ｎｇ／ｍｇ組織、好ましくは９ｎｇ／ｍｇ組織〜４０ｎｇ／ｍｇ組織、２８日後の組織中薬剤濃度が０．５ｎｇ／ｍｇ組織〜３ｎｇ／ｍｇ組織、０．０４日後から１日後までの薬剤減少率が多くとも５０％であった。

本明細書中に記載するとおり、ＤＥＢは被治療病変部全体（長尺病変部全体）で血管内膜肥厚の均一な抑制効果をもたらすことが示された。長尺病変部は、例えば、４ｃｍ〜２０ｃｍの範囲の長手方向長さを有するバルーンカテーテルで治療される。これは、バルーン表面の薬剤コート層内の均一に配置され一様なサイズをもつパクリタキセルの微細結晶によって達成される。また、パクリタキセルの微細結晶は、被治療病変部への送達過程でバルーン表面から離脱することなく、送達される。ＤＥＢは、拡張の時点まで薬剤コート層の均一性（複数の結晶粒子の規則的な配置および一様なサイズ）を維持しながら、被治療病変部において拡張することができる。このようにして、パクリタキセルなどの薬剤を病変部全体へ均一に送達することができる。均一に配置されるパクリタキセル結晶のサイズは特に限定されない。結晶サイズは、例えば、０．５μｍ〜５μｍの範囲および５μｍ〜３０μｍの範囲のいずれの範囲内とすることもできる。

１．末梢血管の塞栓形成の危険性を減少させる方法で使用するための水不溶性薬剤であって、
前記水不溶性薬剤は結晶形態型を有するとともに、拡張可能部材を有する医療機器の表面の薬剤コート層の中に複数の結晶粒子が規則的に配置され均一なサイズをもち、
末梢血管の塞栓形成を生じさせるサイズをもつ微小粒子の発生が抑制される、水不溶性薬剤。
２．前記治療が
前記医療機器を末梢血管に挿入することと、
前記拡張可能部材を拡張することと、
前記複数の結晶粒子の少なくとも一部が血管壁に移行するように前記薬剤コート層を前記血管壁に押付けることと、
前記拡張可能部材を収縮させること
を含む、１に記載の用途のための水不溶性薬剤。
３．前記複数の結晶粒子の各々が、長軸を備えた長尺体を有し、前記長軸はほぼ直線状の形状であって前記長尺体の長軸が交わる前記拡張可能部材の表面に対して所定範囲内の角度をなす、１または２に記載の用途のための水不溶性薬剤。
４．前記拡張可能部材の表面に対する前記所定範囲は、前記長尺体の長軸が交わる前記拡張可能部材の表面に対して４５度〜１３５度の範囲内である、３に記載の用途のための水不溶性薬剤。
５．前記長尺体の少なくとも先端近傍は中空である、２、３または４に記載の用途のための水不溶性薬剤。

６．前記長尺体の長軸に垂直な断面形状は多角形である、２〜５のいずれかに記載の用途のための水不溶性薬剤。
７．前記薬剤コート層は針状晶癖を有する複数の高アスペクト比パクリタキセル結晶を含む、１〜６のいずれかに記載の用途のための水不溶性薬剤。
８．前記水不溶性薬剤の複数の結晶粒子を含む結晶形態型を有する薬剤コート層は、前記結晶粒子の間に不規則に配置された賦形剤からなる賦形剤粒子を含み、好ましくは、前記賦形剤の分子量は前記水不溶性薬剤の分子量未満であり、基材の所定面積あたりに前記賦形剤粒子が占める割合は前記結晶粒子の占める割合未満であり、前記賦形剤粒子はマトリクスを形成していない、１〜７のいずれかに記載の用途のための水不溶性薬剤。
９．前記水不溶性薬剤はパクリタキセル、ラパマイシン、ドセタキセル、およびエベロリムスからなる群から選択される、１〜８のいずれかに記載の用途のための水不溶性薬剤。
１０．小さい微小粒子が前記血管内に生じる、１〜９のいずれかに記載の用途のための水不溶性薬剤。
１１．低レベルの前記結晶粒子が下流末梢血管に隣接する筋肉中に分散される、１〜１０のいずれかに記載の用途のための水不溶性薬剤。
１２．前記治療上の用途は壊死のレベルを下げることをさらに含む、１〜１１のいずれかに記載の用途のための水不溶性薬剤。
１３．前記治療上の用途は切断の危険性を下げることをさらに含む、１〜１２のいずれかに記載の用途のための水不溶性薬剤。
１４．末梢血管の塞栓形成を生じさせるサイズをもつ微小粒子は直径が１００μｍ〜９００μｍである、１〜１３のいずれかに記載の用途のための水不溶性薬剤。
１５．前記小さな微小粒子は１０μｍ〜２５μｍの直径を有する、１０の水不溶性薬剤。

次に、実施例および比較例を説明するが、実施態様は実施例に限定されるものではない。
［Ａ．薬剤溶出バルーンの作成または準備、あるいは薬剤無塗布バルーンの準備］
＜実施例１＞
（１）コーティング溶液１の調製

Ｌ−セリンエチルエステル塩酸塩（ＣＡＳ Ｎｏ．２６３４８−６１−８）（５６ｍｇ）およびパクリタキセル（ＣＡＳ Ｎｏ．３３０６９−６２−４）（１３４．４ｍｇ）を量りとった。これに無水エタノール（１．２ｍＬ）、テトラヒドロフラン（１．６ｍＬ）、および逆浸透（ＲＯ：Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｏｓｍｏｓｉｓ）膜処理水（以下、ＲＯ水とする）（０．４ｍＬ）をそれぞれ加えて溶解して、コーティング溶液１を調製した。
（２）バルーンへの薬剤コーティング

拡張時サイズが直径３．０ｍｍ×長さ２０ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。コーティング溶液１を拡張したバルーンに、コーティング溶液の溶媒がゆっくりと揮発してパクリタキセル量が約３μｇ／ｍｍ^２となるように、コートした。すなわち、最先端に開口部を有するディスペンシングチューブを横断方向に水平に移動させ、バルーンの表面上に配置した。ディスペンシングチューブの側方側の少なくとも一部を、バルーンの表面に沿って接触配置した。ディスペンシングチューブの側方側の少なくとも一部をバルーンの表面に接触させたまま、コーティング溶液をディスペンシングチューブの最先端の開口部から吐出した。この状態で、先端開口部からのコーティング溶液の吐出方向に対して反対方向（逆方向）に、バルーンを長手方向軸の回りに回転させた。長手方向軸に沿うディスペンシングチューブの平行移動とバルーンの回転移動を調整し、回転開始とともに、コーティング溶液をバルーンの表面上に０．０５３μＬ／秒で吐出して、バルーンのコーティングを行った。

その後、コーティングを乾燥させて、薬剤溶出バルーンを作製した。
＜実施例２＞
（１）コーティング溶液２の調製

Ｌ−セリンエチルエステル塩酸塩（７０ｍｇ）およびパクリタキセル（１８０ｍｇ）を量りとった。これに無水エタノール（１．５ｍＬ）、アセトン（２．０ｍＬ）、テトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）、およびＲＯ水（１ｍＬ）をそれぞれ加えて溶解し、コーティング溶液２を調製した。
（２）バルーンへの薬剤コーティング

拡張時のサイズが直径３．０ｍｍ×長さ２０ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。コーティング溶液２を拡張したバルーンに、コーティング溶液の溶媒がゆっくりと揮発してパクリタキセル量が約３μｇ／ｍｍ^２となるように、コートした。

すなわち、コーティング溶液をバルーンの表面上に０．０８８μＬ／秒で吐出した以外は、実施例１のようにしてコーティングを行った。

その後、コーティングを乾燥させて、薬剤溶出バルーンを作製した。
＜実施例３＞
（１）コーティング溶液３の調製

Ｌ−セリンエチルエステル塩酸塩（７０ｍｇ）およびパクリタキセル（１６８ｍｇ）を量りとった。これに無水エタノール（１．５ｍＬ）、テトラヒドロフラン（１．５ｍＬ）、およびＲＯ水（１ｍＬ）をそれぞれ加えて溶解し、コーティング溶液３を調製した。
（２）バルーンへの薬剤コーティング

拡張時のサイズが直径３．０ｍｍ×長さ２０ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。コーティング溶液３を拡張したバルーンに、コーティング溶液の溶媒がゆっくりと揮発してパクリタキセル量が約３μｇ／ｍｍ^２となるように、コートした。

すなわち、コーティング溶液をバルーンの表面上に０．１０１μＬ／秒で吐出した以外は、実施例１のようにしてコーティングを行った。

その後、コーティングを乾燥させて、薬剤溶出バルーンを作製した。
＜実施例４＞
（１）コーティング溶液４の調製

Ｌ−セリンエチルエステル塩酸塩（７０ｍｇ）およびパクリタキセル（１８０ｍｇ）を量りとった。これに無水エタノール（１．７５ｍＬ）、テトラヒドロフラン（１．５ｍＬ）、およびＲＯ水（０．７５ｍＬ）をそれぞれ加えて溶解し、コーティング溶液４を調製した。
（２）バルーンへの薬剤コーティング

拡張時のサイズが直径３．０ｍｍ×長さ２０ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。コーティング溶液４を拡張したバルーンに、コーティング溶液の溶媒がゆっくりと揮発してパクリタキセル量が約３μｇ／ｍｍ^２となるように、コートした。

すなわち、コーティング溶液をバルーンの表面上に０．０９２μＬ／秒で吐出した以外は、実施例１のようにしてコーティングを行った。

その後、コーティングを乾燥させて、薬剤溶出バルーンを作製した。
＜実施例５＞
（１）コーティング溶液５の調製

Ｌ−アスパラギン酸ジメチルエステル塩酸塩（ＣＡＳ Ｎｏ．３２２１３−９５−９）（３７．８ｍｇ）およびパクリタキセル（８１ｍｇ）を量りとった。これに無水エタノール（０．７５ｍＬ）、テトラヒドロフラン（０．９６ｍＬ）、およびＲＯ水（０．２７ｍＬ）をそれぞれ加えて溶解して、コーティング溶液５を調製した。
（２）バルーンへの薬剤コーティング

拡張時のサイズが直径３．０ｍｍ×長さ２０ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。コーティング溶液５を拡張したバルーンに、コーティング溶液の溶媒がゆっくりと揮発してパクリタキセル量が約３μｇ／ｍｍ^２となるように、コートした。

すなわち、コーティング溶液をバルーンの表面上に０．０５５μＬ／秒で吐出した以外は、実施例１のようにしてコーティングを行った。

その後、コーティングを乾燥させて、薬剤溶出バルーンを作製した。
＜実施例６＞
（１）コーティング溶液６の調製

Ｌ−セリンエチルエステル塩酸塩（５６ｍｇ）およびパクリタキセル（１３４．４ｍｇ）を量りとった。これに無水エタノール（０．４ｍＬ）、テトラヒドロフラン（２．４ｍＬ）、およびＲＯ水（０．４ｍＬ）をそれぞれ加えて溶解し、コーティング溶液６を調製した。
（２）バルーンへの薬剤コーティング

拡張時のサイズが直径３．０ｍｍ×長さ２０ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。コーティング溶液６を拡張したバルーンに、コーティング溶液の溶媒がゆっくりと揮発してパクリタキセル量が約３μｇ／ｍｍ^２となるように、コートした。

すなわち、コーティング溶液をバルーンの表面上に０．０５３μＬ／秒で吐出した以外は、実施例１のようにしてコーティングを行った。

その後、コーティングを乾燥させて、薬剤溶出バルーンを作製した。
＜比較例１＞

パクリタキセルおよび尿素の賦形剤を含む市販の薬剤溶出バルーンカテーテルであるＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標）（ＩＮＶＡｔｅｃ ＪＡＰＡＮ社製、Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，５８（１１），２０１１，１１０５−１１０９）を準備した。比較例１のバルーンは表面にパクリタキセルをコートした薬剤溶出バルーンである。
＜比較例２＞

拡張時のサイズが直径３．０ｍｍ×長さ２０ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。比較例２のバルーンは表面に薬剤をコートしていない薬剤無塗布バルーンである。
［Ｂ．バルーンにコートしたパクリタキセル量の測定］

実施例１〜実施例６の薬剤溶出バルーンについて、バルーン上にコートしたパクリタキセルの量を以下の手順にしたがって測定した。
１．方法

調製した薬剤溶出バルーンをメタノール溶液に浸漬した後、振とう機で１０分間振とうし、次いでバルーン上にコートしたパクリタキセルを抽出した。パクリタキセルを抽出したメタノール溶液の２２７ｎｍにおける吸光度を、紫外−可視分光光度計を用いた高速液体クロマトグラフィーで測定し、バルーンあたりのパクリタキセル量（［μｇ／バルーン］）を求めた。また、得られたパクリタキセルの量とバルーン表面積から、バルーン単位面積あたりのパクリタキセル量（［μｇ／ｍｍ^２］）を算出した。
２．結果

表１に得られた結果を示す。また、表１中、「バルーン表面積」はバルーン拡張時の表面積（単位：ｍｍ^２）を、「バルーン上のＰＴＸ量」における「バルーンあたり」はバルーン１個あたりのパクリタキセルの量（単位：μｇ／バルーン）を、そして「バルーン上のＰＴＸ量」における「単位面積あたり」はバルーンの表面積１ｍｍ^２あたりのパクリタキセルの量（単位：μｇ／ｍｍ^２）をそれぞれ示す。

表１に示すように、実施例１〜実施例６の全てにおいて、バルーン上にコートしたパクリタキセルの量は約３μｇ／ｍｍ^２であり、バルーン表面上に目標量のパクリタキセルをコートすることが可能であった。

［Ｃ．薬剤溶出バルーンの薬剤コート層の走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）による観察］
１．方法

実施例１〜実施例５および実施例６の薬剤溶出バルーンを乾燥し、それら乾燥した薬剤溶出バルーンを適当なサイズに切断した後、それらを支持台に載せ、その上に白金を蒸着した。また、同様に、比較例１のＩＮＶＡｔｅｃ ＪＡＰＡＮ社製の市販の薬剤溶出バルーン（ＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標））も適当なサイズに切断した後、支持台に載せ、その上に白金を蒸着した。白金蒸着した試料の薬剤コート層の表面および内部を、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）で観察した。
２．結果

実施例の薬剤コート層の中には、中空長尺体の形態型、平坦毛状の形態型、および平坦毛状結晶の表面にアモルファス膜が存在する形態型を有する結晶層が観察された。

図１〜図６に示すＳＥＭ像が得られた。実施例１〜実施例５のＳＥＭ像である図１〜図５は、中空長尺体の形態型を含む層を示しており、約１０μｍの長さを有する中空長尺体の均一なパクリタキセル結晶がバルーン表面上に均一に形成されることが明らかとなった。これら中空長尺体のパクリタキセル結晶は長軸を有し、長軸を有する長尺体（約１０μｍ）はバルーン表面に対してほぼ垂直な方向となるように形成された。長尺体の直径は約２μｍであった。また、長軸に対して垂直な表面における長尺体の断面は多角形であった。この多角形は、例えば、四角形の多角形であった。さらに、これらパクリタキセルのほぼ均一な中空長尺体は、同一の形態型（構造および形状）でバルーン表面全体に均一かつ濃密に（同一密度で）形成されていた。

一方、実施例６の図６Ａおよび図６ＢのＳＥＭ像は、平坦毛状の形態型および平坦毛状結晶の表面上にアモルファス膜が存在する形態型を含む層を示しており、この平坦毛状結晶は平坦長尺毛状のパクリタキセル結晶であった。これら結晶の多くは２０μｍ以上の比較的大きなサイズを有し、長軸はバルーン表面に沿って横たわった状態で存在している（図６Ａ）。また、図６Ｂに示すように、平坦毛状の形態型を含む層の上部がアモルファス膜で覆われた領域が存在した。この領域では、アモルファス膜の層が平坦結晶構造の上に存在する形態型を含む層、すなわち２つの層が結晶およびアモルファス膜から構成され、アモルファス膜は平坦毛状結晶の表面上に存在している。

比較例１の図７は、ＩＮＶＡｔｅｃ ＪＡＰＡＮ社製の市販の薬剤溶出バルーン（ＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標））の薬剤コート層のＳＥＭ像である。これにおいて、アモルファスおよび結晶が同一平面内に混在していた。それらのほとんどはほぼアモルファスであり、針状結晶が同一平面内に部分的に混在する様子が観察された。
［Ｄ．ブタ冠動脈における血管内狭窄抑制効果、および血管リモデリングに対する影響］

実施例１〜実施例６、比較例１（Ｃ１：市販のバルーン）、および比較例２（Ｃ２：薬剤無塗布バルーン）について、ブタ冠動脈における血管内狭窄抑制効果および血管リモデリングに対する影響を、以下の手順にしたがって評価した。
１．方法

（１）ガイドワイヤを備えたガイディングカテーテルを８Ｆｒシースによって挿入し、Ｘ線透視下で左右の冠動脈開口部に誘導した。

（２）各冠動脈の血管造影を行い（冠動脈：左冠動脈前下行枝（ＬＡＤ：Ｌｅｆｔ Ａｎｔｅｒｉｏｒ Ｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ）、右冠動脈（ＲＣＡ：Ｒｉｇｈｔ Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ａｒｔｅｒｙ）、および左冠動脈回旋枝（ＬＣＸ：Ｌｅｆｔ ＣｉｒｃｕｍｆｌｅＸ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ））、血管造影で得られた冠動脈の直径をＱＣＡ（Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ）ソフトウェアで測定した。

（３）血管の直径に対してステントの直径が１．２倍、薬剤溶出バルーンの直径が１．３倍である部位を選択し、ステント留置以降の作業を行った。

（４）選択した冠動脈における金属ステント（ＢＭＳ）（ステント直径３ｍｍ×長さ１５ｍｍ）が１．２倍となるように３０秒間伸長した後、ステント留置用バルーンカテーテルを除去した。ステント留置部位において、実施例１および実施例６ならびに比較例１および比較例２で準備した薬剤コート層を有する薬剤溶出バルーン（バルーン直径３ｍｍ×長さ２０ｍｍ）を血管の直径に対して１．３倍となるように１分間拡張した後、バルーンカテーテルを除去した。

（５）薬剤溶出バルーンを拡張した後、ガイディングカテーテルおよびシースを除去した。頸動脈の中央側を結紮した後、頸部の切開開口部の筋肉の間隙を縫合糸で縫合し、皮膚を外科用縫合ステープラーによって縫合した。

（６）バルーン拡張の２８日後、剖検を行った。
＜血管内狭窄率の算出方法＞

血管内狭窄率を以下の手順に従って算出した。

ライカ顕微鏡および病理画像システムによって血管像を撮像した。これらの像を用いて、外弾性板領域の内面積、内弾性板領域、管腔の内面積、ステントの内面積を測定した。

「面積狭窄率＝（新生内膜領域／内弾性板領域）×１００」から、面積狭窄率（％）を算出した。

＜フィブリン沈着度の算出方法、Ｆｉｂｒｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｓｃｏｒｅ＞

フィブリン沈着度の評価は、鈴木らの方法（Ｓｕｚｕｋｉ Ｙ．，ｅｔ ａｌ． Ｓｔｅｎｔ−ｂａｓｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ ｒｅｄｕｃｅｓ ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｍｏｄｅｌ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２００１；１１８８−９３）に従って、血管の全周において行った。

Ｆｉｂｒｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｓｃｏｒｅのスコアの内容は以下のとおりである。

スコア１：血管内に局在化したフィブリンが観察されたか、または、ステントの支柱付近の観察可能な血管の全周の２５％未満の領域にフィブリンが中程度に堆積している。

スコア２：観察可能な血管の全周の２５％超の領域にフィブリンが中程度に堆積していたか、または、支柱の間および支柱近傍の観察可能な血管の全周の２５％未満の領域にフィブリンが著しく堆積している。

スコア３：観察可能な血管の全周の２５％超の領域にフィブリンが多量に堆積している。

また、スコアはいずれも、各血管についてステント留置部位の３つの位置、すなわち基端位置、中間位置、および先端位置の平均値として算出された。
＜内皮化スコア算出方法、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅ＞

Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅの内容は以下のとおりである。

スコア１：観察可能な血管管腔の全周の２５％以下が内皮細胞に覆われている。

スコア２：観察可能な血管管腔の全周の２５％〜７５％が内皮細胞に覆われている。

スコア３：観察可能な血管管腔の全周の７５％以上が内皮細胞に覆われている。

また、スコアはいずれも、各血管についてステント留置部位の３つの位置、すなわち基端位置、中間位置、および先端位置の平均値として算出された。
２．ブタ冠動脈における血管内狭窄抑制効果についての結果

血管内狭窄率は、前記の手順に従って算出した。表２に得られた結果を示す。表２中、実施例／比較例の欄の１および６は実施例であり、Ｃ１およびＣ２は比較例である。

また、図８は、ブタ冠動脈における血管内狭窄抑制効果についての実施例１および実施例６ならびに比較例Ｃ１および比較例Ｃ２の血管狭窄率を示すグラフである。図８中、横軸は実施例または比較例を表し、数字１および６は実施例１および実施例６を、アルファベット付き数字、すなわちＣ１およびＣ２は比較例１（Ｃ１）および比較例２（Ｃ２）をそれぞれ意味する。また、縦軸は血管の面積狭窄率（単位：％）を表す。

比較例２（Ｃ２）においては、薬剤無処置対照としての薬剤無塗布バルーンで治療した血管の面積狭窄率は３８．９％であった。実施例６の薬剤溶出バルーンで治療した血管の面積狭窄率は２０．６％であり、薬剤無処置対照と比較してかなりの狭窄抑制効果が確認された。一方、比較例１の市販の薬剤溶出バルーン（ＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標））で治療した血管の面積狭窄率は３０．４％であり、薬剤無塗布バルーンと比較して面積狭窄率が減少する傾向のあることが分かった。しかし、この効果を改善する十分な余地があると推定された。

これに対して、実施例１による薬剤溶出バルーンで治療した血管の面積狭窄率は１６．８％であり、薬剤無処置対照および比較例１（Ｃ１）のＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標）と比較してかなりの狭窄抑制効果が観察された。また、これは実施例６におけるよりも強い効果を示しており、最も優れた狭窄抑制効果が得られた。

以上のことから、実施例１および実施例６によるパクリタキセル結晶形態型を有する薬剤コート層の薬剤溶出バルーンは、市販の薬剤溶出バルーンと比較してかなり強い狭窄抑制効果を示すことが明らかとなった。

３．ブタ冠動脈におけるステント留置後の血管リモデリングについての結果（毒性）

ブタ冠動脈におけるステント留置後の血管リモデリングに対する影響（毒性）として、Ｆｉｂｒｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ ＳｃｏｒｅおよびＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅを観察した。結果を表３に示す。また、Ｆｉｂｒｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｓｃｏｒｅの数字が大きいほど、フィブリン沈着度は大きく、それは好ましくないことである。一方、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅの数字が小さいほど、血管が内皮細胞に覆われることが少なく、それは好ましくないことである。表３中、実施例／比較例の欄の１および６は実施例であり、Ｃ１およびＣ６は比較例である。

比較例２（Ｃ２）において薬剤無処置対照としての薬剤無塗布バルーンで治療した血管のＦｉｂｒｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ ＳｃｏｒｅおよびＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅは、薬剤による影響（毒性）が無いので、血管リモデリングには影響せず、それらスコアはそれぞれ１．００±０．００および３．００±０．００であった。

比較例１（Ｃ１）におけるＦｉｂｅｒｉｎ ＣｏｎｔｅｎｔＳｃｏｒｅおよびＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅはそれぞれ１．２７±０．１５および２．８０±０．１１であり、それらスコアは薬剤無塗布バルーンの場合とほぼ同じであった。薬剤による狭窄抑制効果が小さいため血管再造形に対する影響（毒性）も小さいものと推定される。

一方、実施例６による薬剤溶出バルーンで治療した血管のＦｉｂｒｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ ＳｃｏｒｅおよびＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅは、それぞれ２．６１±０．１６および１．７８±０．１７であり、血管リモデリングに対する影響は比較例１（Ｃ１）および比較例２（Ｃ２）の場合と比較して大きいことが示唆された。これは、狭窄抑制効果が比較例１（Ｃ１）および比較例２（Ｃ２）の場合よりも強いためであると考えられる。

これに対して、実施例１による薬剤溶出バルーンで治療した血管のＦｉｂｒｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ ＳｃｏｒｅおよびＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅは、それぞれ１．５３±０．１７および２．８７±０．０９であり、血管リモデリングに対する影響（毒性）は比較例１（Ｃ１）における市販品の場合と同じであり、高い狭窄抑制効果が得られるにもかかわらず毒性が非常に低いことが明らかとなった。

以上のことから、実施例６によるパクリタキセル結晶形態型を有する薬剤コート層の薬剤溶出バルーンは、かなり強い狭窄抑制効果を有する。また、実施例１によるパクリタキセル結晶形態型を有する薬剤コート層の薬剤溶出バルーンは、かなり強い狭窄抑制効果を有しながら、血管リモデリングに対してほとんど影響（毒性）を示さず、したがって、有効性と副作用（毒性）との面で優れた薬剤溶出バルーンであることが明らかとなった。

［Ｅ．薬剤溶出バルーンから生じる粒度］

実施例７および比較例３（Ｃ３）の薬剤溶出バルーンについて、模擬末梢血管モデルの中を薬剤溶出バルーンを通過させて微粒子を発生させて懸濁液として回収した。
＜実施例７＞
＜薬剤溶出バルーンの準備＞

拡張時のサイズが直径７．０ｍｍ×長さ２００ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。

コーティング溶液２を調製した。コーティング溶液２を拡張したバルーンに、コーティング溶液の溶媒がゆっくりと揮発してパクリタキセル量が約３μｇ／ｍｍ^２となるように、コートした。

すなわち、実施例２のようにしてコーティングを行った。
＜比較例３＞

拡張時のサイズが直径７．０ｍｍ×１２０ｍｍ（拡張部）の市販のバルーンカテーテルＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標）（ＩＮＶＡｔｅｃ／Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ社製、上記比較例１で述べたものと同じ）を準備した。比較例３のバルーンは、表面にパクリタキセルをコートした薬剤溶出バルーンである。
１．方法

以下の手順にしたがって微粒子を発生させた。ガイディングシースに生理食塩水を満たし、約４５度の角度となるように配置した。次いで、ガイドワイヤをガイディングシースの内腔に通した。この試験の間、ガイディングシース内の生理食塩水を３７度に保持した。薬剤溶出バルーンを、バルーンがモデル（ガイディングシース）を出てガイディングシースを入れたシリコーンゴム管でできた模倣血管に入るまで、１分間、ガイドワイヤの上をたどらせた。バルーンを１１気圧まで拡張し、１分間保持し、収縮させ、モデル内を後退させた。ガイディングシース内を生理的食塩水で置換した。模倣血管内を生理食塩水で置換した。置換用溶液は全てガラス製バイアルに貯留した。微粒子の数およびサイズの測定は、液体粒子カウンターＨＩＡＣ８０００Ａ（Ｈａｃｈ社）および顕微鏡ＶＨ−５５００（ＫＥＹＥＮＣＥ社）によって行った。
２．結果

シリコーンゴム模倣血管内でバルーン拡張を行うようにして模擬末梢血管モデルの中を薬剤溶出バルーンを通過させて発生させた微粒子（バルーンカテーテルあたりの平均総数）を測定した。結果を図９Ａおよび図９Ｂに示す。図９Ａおよび図９Ｂ中、７は実施例であり、Ｃ３は比較例３である。

実施例７の薬剤溶出バルーンは、直径１０μｍ〜２５μｍの微粒子（微細な微粒子）を、バルーンカテーテルあたり、比較例Ｃ３の薬剤溶出バルーン（ＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標））のおよそ１０倍の数だけ発生させることが示された。さらに、また、実施例７の薬剤溶出バルーンは、１００μｍ〜９００μｍの大きな微粒子を、比較例Ｃ３のＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標）よりも少なく発生させた。この実施態様において、図９Ａおよび図９Ｂに示すように、実施例７の薬剤溶出バルーンから発生した微粒子総体の９０％超は直径が１０μｍ〜２５μｍであり、残り（１０％以下）の微粒子は直径が１００μｍ〜９００μｍであった。
［Ｆ．下流の血管および骨格筋の組織学的評価］

実施例７および比較例４（Ｃ４）の薬剤溶出バルーンについて、（下肢の末梢動脈における）下流の血管および骨格筋の組織学的評価を、以下の手順にしたがって行った。

＜比較例４（Ｃ４）＞
表４中の比較例４（Ｃ４）は、文献（Ｃａｔｈｅｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ ８３， ２０１４，１３２−１４０）を参照すべきものであって、パクリタキセルならびにポリソルベートおよびソルビトールからなる担体を含む、Ｂａｒｄ社製の市販の薬剤溶出バルーン（Ｌｕｔｏｎｉｘ（登録商標））のデータである。
１．方法

実施例７のようにして模擬末梢血管モデルを用いて微粒子懸濁を発生させた。５匹のブタを下流の血管および骨格筋の組織学的評価に指定した。薬剤溶出バルーン治療手技を終えた後、ブタを回収し、所定の２９±１日生存時点に達するようにした。１匹のブタについて、１×臨床的ドーズ（３μｇ／ｍｍ^２パクリタキセル）ないしは３×ドーズ（９μｇ／ｍｍ^２パクリタキセルに相当）微粒子懸濁液または対照懸濁液を左右の腸骨大腿動脈に動脈内注射で投与した。各注射おいて、ガイディングカテーテルを大腿浅動脈および大腿深動脈の分岐の遠位端に位置付け、パクリタキセル粒子懸濁液または対照懸濁液を約５秒間かけて注射した。注射の後すぐに、カテーテル内に約２０ｍＬの生理食塩水を流して、懸濁液全体の目標部位への到達を確実にした。血管の開存を査定するために血管造影を行った。半腱様筋、半膜様筋、大腿二頭筋、大腿腓腹筋、ヒラメ筋、深指屈筋、および浅指屈筋を１ｃｍ〜２ｃｍ間隔の平行切傷で切開することによって、２９±１日後に、下肢筋肉中の塞栓子の存在を評価した。ミクロトームを用いて３〜４ミクロンで組織学的切片を作成し、ヘマトキシリン−エオジン（Ｈ＆Ｅ：Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ ａｎｄ Ｅｏｓｉｎ）で染色した。組織学的切片を抗フォンヴィルブランド因子抗体（Ａｂｃａｍ）で免疫染色して、内皮細胞を検出した。組織学的切片を検査して、塞栓性微粒子および関連する虚血性壊死／炎症領域を確認および定量した。所見を伴う小動脈の数を、組織学的切片の小動脈の総数の百分率で表した。

下流骨格筋の組織学的分析を行って、下流塞栓による虚血の証拠があるかどうか調べた。
２．結果

塞栓や壊死などの何らかの下流の病理学的所見を伴う小動脈の百分率を評価した。表４に得られた結果を示す。表４中、実施例／比較例の欄の「７」は実施例を示し、「Ｃ４」は比較例を示す。

実施例７においては、３×ドーズで治療した動脈のうち何らかの下流の病理学的所見を伴う小動脈の百分率は、最大２８日で０．０１２％であった。骨格筋における変化は概して非常に低いことが示された。また、実施例７で観察された下流の塞栓および／または壊死の百分率は、比較例４（Ｃ４）によるＬｕｔｏｎｉｘ（登録商標）（Ｃａｔｈｅｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ，８３，２０１４，１３２−１４０）よりも小さかった。実施例７は良好な下流安全性を示した。本明細書中に記述する薬剤溶出バルーンは末梢動脈における壊死のレベルが低くなるという効果をもつことが示された。

［Ｇ．下流筋肉中の薬剤濃度］

実施例８および比較例５（Ｃ５）の薬剤溶出バルーンについて、下流筋肉中に分散されるパクリタキセルの濃度を、以下の手順にしたがって評価した。
＜実施例８＞
＜薬剤溶出バルーンの準備＞

拡張時のサイズが直径６．０ｍｍ×長さ４０ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。

コーティング溶液２を調製した。コーティング溶液２を拡張したバルーンに、コーティング溶液の溶媒がゆっくりと揮発してパクリタキセル量が約３μｇ／ｍｍ^２となるように、コートした。

すなわち、実施例２のようにコーティングを行った。
＜比較例５（Ｃ５）＞

表５中、「Ｃ５」はＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標）のデータによるが、実施例８の投与量に対して正規化したものである。ＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標）のデータは、科学博士Ｒ．Ｊ．ＭｅｌｄｅｒによってＬＩＮＣ２０１３（ＩＮ．ＰＡＣＴ ＤＥＢ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｒｅ−ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ）に発表された。
１．方法

下流筋肉（下肢の末梢動脈における）に分散されるパクリタキセルの量を評価するため、３匹のブタを指定した。治療手技において、血管造影を利用して腸骨大腿動脈および大腿浅動脈内の目標治療部位を確認した。ブタごとに、一つの薬剤溶出バルーンによる治療を行った。薬剤溶出バルーン治療手技を終えた後、ブタを回収し、所定の１日（２４±０．５時間）生存時点に達するようにした。（拡張したセグメント［被治療部位］の直下および下流の）筋肉を、薬剤溶出バルーンでの治療の１日（２４±０．５時間）後に周囲の組織から注意深く剥離した。筋肉中のパクリタキセル濃度の測定は、液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ：Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−ｔａｎｄｅｍ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）分析によって行った。
２．結果

薬剤暴露の結果に相関する、下流筋肉中へ分散されたパクリタキセルの量を評価した。表５に、下流筋肉中のパクリタキセル濃度を示す。表５中、実施例／比較例の欄の「８」は実施例を示し、「Ｃ５」は比較例を示す。

実施例８で観察された下流筋肉中のパクリタキセル濃度は、比較例５（Ｃ５）のＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標）よりも低かった。

以上のことから、本明細書中に記載する薬剤溶出バルーンは、他社製の薬剤溶出バルーンと比較して、下流筋肉中への（大きな）微小粒子の分散が少ないため、末梢塞栓形成の危険性を減少させることができることが明らかとなった。

［Ｈ．ブタ腸骨大腿動脈における薬物動態］

実施例９ならびに比較例６−ａ（Ｃ６−ａ）〜比較例８−ａ（Ｃ８−ａ）および比較例９（Ｃ９）の薬剤溶出バルーンについて、ブタ腸骨大腿動脈における薬物動態を、以下の手順によって評価した。
＜実施例９＞
＜薬剤溶出バルーンの準備＞

拡張時のサイズが直径６．０ｍｍ×長さ４０ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。

コーティング溶液２を調製した。コーティング溶液２を拡張したバルーンに、コーティング溶液の溶媒がゆっくりと揮発してパクリタキセル量が約３μｇ／ｍｍ^２となるように、コートした。

すなわち、実施例２のようにコーティングを行った。
＜比較例６−ａ（Ｃ６−ａ）＞

図１０および図１１中の比較例６−ａ（Ｃ６−ａ）はＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標）のデータによる。ＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標）のデータは科学博士Ｒ．Ｊ．ＭｅｌｄｅｒによってＬＩＮＣ ２０１３にて発表されたものである（ＩＮ．ＰＡＣＴ ＤＥＢ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｒｅ−ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ）。
＜比較例７−ａ（Ｃ７−ａ）＞

図１０および図１１中の比較例７−ａ（Ｃ７−ａ）はＬｕｔｏｎｉｘ（登録商標）のデータによる。Ｌｕｔｏｎｉｘ（登録商標）のデータは医学博士Ｒ．ＶｉｒｍａｎｉによってＬＩＮＣ ２０１４にて発表されたものである（Ｐｒｅ−ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓａｆｅｔｙ ｄａｔａ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｒｅｖｉｅｗ）。
＜比較例８−ａ（Ｃ８−ａ）＞

図１０および図１１中の比較例８−ａ（Ｃ８−ａ）はＣｏｔａｖａｎｃｅ（登録商標）のデータによる。Ｃｏｔａｖａｎｃｅ（登録商標）のデータは文献（Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ，６，８，２０１３，８８３−８９０）を参照したものであり、医学博士Ｒ．Ｖｉｒｍａｎｉによって発表されたものである（Ｐｒｏｓ ａｎｄ Ｃｏｎｓ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｉｎ Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ａｒｔｅｒｉｅｓ： Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｆｒｏｍ Ａ Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｓｔ）。
＜比較例９（Ｃ９）＞

図１０および図１１中の比較例９（Ｃ９）はＦｒｅｅｗａｙ（登録商標）のデータによる。Ｆｒｅｅｗａｙ（登録商標）のデータはＲ．Ｐ．Ｓｔｒａｎｄｍａｎｎによってｅｕｒｏ ＰＣＲ ２０１３にて発表されたものである（Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｒｕｇ−ｃｏａｔｅｄ ｂａｌｌｏｏｎ ｏｎ ｐｏｒｃｉｎｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ａｒｔｅｒｉｅｓ： ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ ｖａｓｃｕｌａｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ， ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ）。
１．方法

２４匹のブタを薬物動態の検討に指定した。治療手技において、血管造影を利用して腸骨大腿動脈および大腿浅動脈内の目標治療部位を確認した。

この検討においては、各ブタの２つの動脈（左右の腸骨大腿動脈）を使用した。血管造影は治療の前、最中および後に行って、治療および血流を評価した。薬剤溶出バルーン治療手技を終えた後、ブタを回収し、所定の１時間ならびに１日、７日および２８日生存時点に達するようにした。頸動脈切開を行い、血管への接近のためシースを配置した。薬剤溶出バルーンを用いた治療の１時間後ならびに１日後、７日後および２８日後に、目標組織を周囲の組織から注意深く剥離した。組織中のパクリタキセル濃度の測定は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析によって行った。
２．結果

ブタ大腿動脈における薬物動態を評価した。図１０は、ブタ大腿動脈組織における移行について実施例９および比較例Ｃ６〜比較例Ｃ９の０．０２日後〜０．０４日後（０．５時間〜１時間）〜７日後の薬剤の曲線下面積（ＡＵＣ：Ａｒｅａ Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ Ｃｕｒｖｅ）を示すグラフである。図１０中、横軸は実施例または比較例を表し、数字「９」は実施例９を意味し、アルファベット付き数字、すなわち「Ｃ６−ａ」〜「Ｃ９」は比較例６−ａ（Ｃ６−ａ）、比較例７−ａ（Ｃ７−ａ）、比較例８−ａ（Ｃ８−ａ）および比較例９（Ｃ９）を意味する。また、縦軸は目標動脈組織中の０．０４日後〜７日後の薬剤のＡＵＣ（ｎｇ ｄａｙ／ｍｇ）を表す。

実施例９で観察されたバルーン拡張の０．０４日後（１時間後）から７日後までの目標動脈組織中の薬剤のＡＵＣは２５４ｎｇ ｄａｙ／ｍｇであったが、それは比較例６−ａ（Ｃ６−ａ）、比較例７−ａ（Ｃ７−ａ）、比較例８−ａ（Ｃ８−ａ）および比較例９（Ｃ９）よりも高い。また、図１１はブタ大腿動脈組織における移行についての実施例９および比較例Ｃ６〜Ｃ９の２７±１日後までの薬物動態プロファイルを示すグラフである。図１１中、９は実施例であり、Ｃ６〜Ｃ９は比較例である。横軸は薬剤溶出バルーンの拡張後の日数を表す。また、縦軸は目標動脈組織中の薬剤濃度を表す。

実施例９で得られた０．０４日後から７日後までの薬剤のＡＵＣは文献を参照すべき他社製の薬剤溶出バルーンと比較して最も高く、また、０．０４日後（１時間後）から１日後までの薬剤の減少率は多くとも５０％であった。７日後以降、組織中薬剤濃度は２８日後までに２ｎｇ／ｍｇ組織まで減少した。

実施例９において観察された薬物動態プロファイルは、バルーン拡張の７日後まで高い組織中薬剤濃度を示したが、それ以後、速やかに消え去り、２８日後まで低い濃度を維持した。７日後までの高い組織中薬剤濃度は平滑筋細胞増殖に影響し、それ以後は、速やかに組織から消え去るため内皮細胞の増殖を抑制することはない。したがって、本明細書中に記載する薬剤溶出バルーンは効能と安全性の両方において優れた成果をもたらす。
［Ｉ．ブタ冠動脈における血管内狭窄抑制効果］

実施例１０ならびに比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）〜比較例８−ｂ（Ｃ８−ｂ）および比較例１０（Ｃ１０）〜比較例１１（Ｃ１１）の薬剤溶出バルーンについて、ブタ冠動脈における血管内狭窄抑制効果を以下の手順にしたがって評価した。
＜実施例１０＞
＜薬剤溶出バルーンの準備＞

拡張時のサイズが直径３．０ｍｍ×長さ２０ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。
コーティング溶液２を調製した。コーティング溶液２を拡張したバルーンに、コーティング溶液の溶媒がゆっくりと揮発してパクリタキセル量が約３μｇ／ｍｍ^２となるように、コートした。

すなわち、実施例２のようにコーティングを行った。
＜比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）＞

図１２の比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）の薬剤溶出バルーンとして、ＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標）（ＩＮＶＡｔｅｃ／Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ社製）を準備した。拡張時のサイズが直径３．０ｍｍ×長さ２０ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテルを準備した。
＜比較例７−ｂ（Ｃ７−ｂ）＞

図１２中の比較例７−ｂ（Ｃ７−ｂ）はＬｕｔｏｎｉｘ（登録商標）のデータによる。Ｌｕｔｏｎｉｘ（登録商標）のデータは医学博士Ｒ．Ｖｉｒｍａｎｉによって発表されたものである（Ｐｒｏ ａｎｄ Ｃｏｎｓ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｉｎ Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ａｒｔｅｒｉｅｓ： Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｆｒｏｍ Ａ Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｓｔ）。
＜比較例８−ｂ（Ｃ８−ｂ）＞

図１２中の比較例８−ｂ（Ｃ８−ｂ）はＳｅＱｕｅｎｔ Ｐｌｅａｓｅ（登録商標）のデータによる。ＳｅＱｕｅｎｔ Ｐｌｅａｓｅ（登録商標）のデータは文献を参照したものである（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，１０５，５，２０１１，８６４−８７２）。
＜比較例１０（Ｃ１０）＞

図１２中の比較例１０（Ｃ１０）はＰａｎｔｅｒａ Ｌｕｘ（登録商標）のデータによる。Ｐａｎｔｅｒａ Ｌｕｘ（登録商標）のデータは文献を参照したものである（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，１０５，５，２０１１，８６４−８７２）。
＜比較例１１（Ｃ１１）＞

図１２中の比較例１１（Ｃ１１）は表面に薬剤をコートしていない薬剤無塗布バルーンである。拡張時のサイズが直径３．０ｍｍ×長さ２０ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。
１．方法

（１）ガイドワイヤを備えたガイディングカテーテルを８Ｆｒシースによって挿入し、Ｘ線透視法のもとで左右の冠動脈開口部に案内した。

（２）各冠動脈の血管造影を行い（冠動脈：左冠動脈前下行枝（ＬＡＤ）、右冠動脈（ＲＣＡ）、および左冠動脈回旋枝（ＬＣＸ））、血管造影で得られた冠動脈の直径をＱＣＡソフトウェアで測定した。

（３）血管の直径に対してステントの直径が１．２倍、薬剤溶出バルーンの直径が１．３倍である部位を選択し、ステント留置後の作業を行った。

（４）直径３ｍｍ、長さ１５ｍｍの金属ステント（ＢＭＳ）を選択した冠動脈内で３０秒間拡張（ステントの直径を元の値の１．２倍にするためである）した後、ステント留置用バルーンカテーテルを除去した。ステント留置部位において、実施例１０および比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）で準備した薬剤コート層を有する薬剤溶出バルーン（バルーン直径３ｍｍ×長さ２０ｍｍ）ならびに比較例１１（Ｃ１１）の薬剤無塗布バルーンを血管の直径に対して１．３倍となるように１分間拡張した後、バルーンカテーテルを除去した。

（５）薬剤溶出バルーンを拡張した後、ガイディングカテーテルおよびシースを除去した。頸動脈の中央側を結紮した後、頸部の切開開口部の筋肉の間隙を縫合糸で縫合し、皮膚を外科用ステープラーによって縫合した。

（６）バルーン拡張の２８日後、剖検を行った。
＜血管内狭窄率の算出方法＞

血管内狭窄率を以下の手順にしたがって算出した。

ライカ顕微鏡および病理学撮像装置によって血管像を撮像した。これらの像を用いて、外弾性板領域の内面積、内弾性板領域、管腔の内面積、ステントの内面積を測定した。
≪面積狭窄率（％）算出方法≫

「面積狭窄率＝（新生内膜領域／内弾性板領域）×１００」から、面積狭窄率（％）を算出した。
２．結果

図１２は、ブタ冠動脈における血管内狭窄抑制効果についての実施例１０ならびに比較例Ｃ６−ｂ〜比較例Ｃ８−ｂ、比較例１０および比較例１１の２８日後の面積狭窄百分率を示すグラフである。図１２中、横軸は、実施例または比較例を表し、数字「１０」は実施例１０を意味し、アルファベット付き数字、すなわち「Ｃ６−ｂ」〜「Ｃ８−ｂ」、「Ｃ１０」および「Ｃ１１」は比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）、比較例７−ｂ（Ｃ７−ｂ）、比較例８−ｂ（Ｃ８−ｂ）、比較例１０（Ｃ１０）および比較例１１（Ｃ１１）を意味する。また、縦軸は２８日後の面積狭窄百分率を表す。

比較例１１（Ｃ１１）において、薬剤無処置対照としての薬剤無塗布バルーンで治療した血管の面積狭窄率は３８．４％であった。実施例１０の薬剤溶出バルーンで治療した血管の面積狭窄率は１６．８％であり、薬剤無処置対照と比較してかなりの狭窄抑制効果が観察された。一方、比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）における市販の薬剤溶出バルーン（ＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標））で治療した血管の面積狭窄率は３０％であった。すなわち、実施例１０による薬剤溶出バルーンで治療した血管の面積狭窄率は、比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）のＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標）および文献を参照した他のいかなる薬剤溶出バルーンよりも強い効果を示しており、最も優れた狭窄抑制効果が得られた。
［Ｊ．ブタ冠動脈における形態評価（局所毒性の評価）］

実施例１０の薬剤溶出バルーンおよび比較例１１（Ｃ１１）の薬剤無塗布バルーンについて、ブタ冠動脈における被治療切片の形態分析を、血管についての局所毒性の評価のように、以下の手順にしたがって行った。
１．方法

（１）ガイドワイヤを備えたガイディングカテーテルを８Ｆｒシースによって挿入し、Ｘ線透視法のもとで左右の冠動脈開口部に案内した。

（２）各冠動脈の血管造影を行い（冠動脈：左冠動脈前下行枝（ＬＡＤ）、右冠動脈（ＲＣＡ）、および左冠動脈回旋枝（ＬＣＸ））、血管造影で得られた冠動脈の直径をＱＣＡソフトウェアで測定した。

（３）血管の直径に対して薬剤溶出バルーンの直径が１．３倍である部位を選択し、手技を行った。

（４）実施例１０で作成した薬剤コート層を有する薬剤溶出バルーン（バルーン直径３ｍｍ×長さ２０ｍｍ）および比較例１１（Ｃ１１）の薬剤無塗布バルーンを血管の直径に対して１．３倍となるように１分間拡張した後、バルーンカテーテルを除去した。

（５）薬剤溶出バルーンを拡張した後、ガイディングカテーテルおよびシースを除去した。頸動脈の中央側を結紮した後、頸部の切開開口部の筋肉の間隙を縫合糸で縫合し、皮膚を外科用ステープラーによって縫合した。

（６）バルーン拡張の２８日後、剖検を行った。
≪Ｉｎｊｕｌｙ Ｓｃｏｒｅ算出方法、Ｉｎｊｕｌｙ Ｓｃｏｒｅ≫

血管の全周におけるＩｎｊｕｌｙ Ｓｃｏｒｅの評価を、Ｓｃｈｗａｒｔｚ ＲＳ．らの方法（Ｓｃｈｗａｒｔｚ ＲＳ．，ｅｔ ａｌ． Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｉｎｊｕｒｙ： ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ａ ｐｏｒｃｉｎｅ ｍｏｄｅｌ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９２，２６７−７４）にしたがって行った。

Ｉｎｊｕｌｙ Ｓｃｏｒｅの内容は以下のとおりである。

スコア０：内弾性板は無傷、内皮は典型的にはがれている、中膜は圧縮されているが裂けてはいない。

スコア１：内弾性板が裂けている、中膜は典型的に圧縮されているが裂けてはいない。

スコア２：内弾性板が裂けている、中膜が目に見えて裂けている、外弾性板は無傷だが圧縮されている。

スコア３：外弾性板が裂けている、中膜の典型的に大きな裂傷が外弾性板を通って延びている、コイルワイヤが外膜中に存在することがある。

また、スコアはいずれも、各血管についてステント留置部位の３つの位置、すなわち基端位置、中間位置、および先端位置の平均値を算出することによって得られた。
≪Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｓｃｏｒｅ算出方法、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅ≫

血管の全周におけるＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅの評価を、Ｋｏｒｎｏｗｓｋｉ Ｒ．らの方法（Ｋｏｒｎｏｗｓｋｉ Ｒ．， ｅｔ ａｌ． Ｉｎ−ｓｔｅｎｔ ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ： ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ａｎｄ ａｒｔｅｒｉａｌ ｉｎｊｕｒｙ ｔｏ ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９８，２２４−２３０）にしたがって行った。

Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅの内容は以下のとおりである。

スコア０：支柱の周りに炎症細胞無し。

スコア１：支柱の周りに軽く非円周状にリンパ組織球性浸潤あり。

スコア２：支柱の周りに局在化した中程度から密な細胞凝集が非円周状に存在。

スコア３：支柱の周囲を囲むような密なリンパ組織球性細胞浸潤。

また、スコアはいずれも、各血管についてステント留置部位の３つの位置、すなわち基端位置（基端部）、中間位置（中間部）、および先端位置（先端部）の平均値を算出することによって得られた。
≪Ｆｉｂｒｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｓｃｏｒｅ算出方法、Ｆｉｂｒｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｓｃｏｒｅ≫

血管の全周におけるＦｉｂｒｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｓｃｏｒｅの評価をＲａｄｋｅ，Ｐ．Ｗ．らの方法（Ｒａｄｋｅ，Ｐ．Ｗ． ｅｔ ａｌ． Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ ｆｏｌｌｏｗｉｇ ｄｒｕｇ−ｅｌｕｔｉｎｇ ｂａｌｌｏｏｎ ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ ｉｎ ａ ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｍｏｄｅｌ： ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ． Ｅｕｒｏ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ，２０１１：７，７３０−７３７）にしたがって行った。

Ｆｉｂｒｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｓｃｏｒｅのスコアの内容は以下のとおりである。

スコア０：血管内に局在化されたフィブリンは観察されなかった。

スコア１：血管内に局在化されたフィブリンが観察されたか、または、ステントの支柱付近で観察可能な血管全周の２５％未満の領域にフィブリンが中程度に堆積していた。

スコア２：観察可能な血管全周の２５％超の領域にフィブリンが中程度に堆積していたか、または、支柱の間および支柱近傍で観察可能な血管全周の２５％未満の領域にフィブリンが多量に堆積していた。

スコア３：観察可能な血管全周の２５％超の領域にフィブリンが著しく堆積していた。

また、スコアはいずれも、各血管についてステント留置部位の３つの位置、すなわち基端位置、中間位置、および先端位置の平均値を算出することによって得られた。
≪Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅ算出方法、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅ≫

Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅの内容は以下のとおりである。

スコア１：観察可能な血管内腔の全周の２５％以下が内皮細胞で覆われている。

スコア２：観察可能な血管内腔の全周の２５％〜７５％が内皮細胞で覆われている。

スコア３：観察可能な血管内腔の全周の７５％以上が内皮細胞で覆われている。

また、スコアはいずれも、各血管についてステント留置部位に対する３つの位置、すなわち基端位置、中間位置、および先端位置の平均値として算出した。
２．結果

ブタ冠動脈における被治療切片の局所的毒性、Ｉｎｊｕｌｙ Ｓｃｏｒｅ、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｓｃｏｒｅ、Ｆｉｂｒｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ ＳｃｏｒｅおよびＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅを観察した。結果を表６に示す。また、Ｉｎｊｕｌｙ Ｓｃｏｒｅの数字が大きいほど、損傷が大きく、それは好ましくない。Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｓｃｏｒｅの数字が大きいほど、炎症が大きく、それは好ましくない。Ｆｉｂｒｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｓｃｏｒｅの数字が大きいほど、フィブリン含有量が大きく、それは好ましくない。一方、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅの数字が小さいほど、血管が内皮細胞で覆われることが少なく、それは好ましくない。表６中、実施例／比較例の欄の１０は実施例であり、Ｃ１１は比較例である。

比較例１１（Ｃ１１）における薬剤無処置対照としての薬剤無塗布バルーンで治療した血管のＩｎｊｕｌｙ Ｓｃｏｒｅ、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｓｃｏｒｅ、Ｆｉｂｒｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ ＳｃｏｒｅおよびＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅは、薬剤による影響（毒性）が無いため血管再造形に対して影響が無く、それらのスコアはそれぞれ０．００±０．００、０．００±０．００、１．００±０．００、３．００±０．００であった。

実施例１０による薬剤溶出バルーンで治療した血管のＩｎｊｕｌｙ Ｓｃｏｒｅ、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｓｃｏｒｅ、Ｆｉｂｒｉｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ ＳｃｏｒｅおよびＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｃｏｒｅは、それぞれ０．２２±０．４３、０．２９±０．４８、０．２３±０．２４および２．８９±０．２８であり、被治療切片の局所的毒性は比較例１１（Ｃ１１）の薬剤無塗布バルーンの場合と同じであることが明らかとなった。すなわち、高い狭窄抑制効果が得られたにもかかわらず、局所的毒性は非常に低かった。これらの結果は、実施例１０によるＤＥＢが血管再造形に対して影響が無く、したがって遅発性血栓症の危険性を減少させることを示した。狭窄を強く抑制するが、抗血小板薬２剤併用療法（ＤＡＰＴ）は４週間、薬剤無塗布バルーンの場合と同程度に限定されると思われる。

［Ｋ．ブタ冠動脈における均一な狭窄抑制効果］

実施例１０、比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）および比較例１１（Ｃ１１）の薬剤溶出バルーンについて、ブタ冠動脈における血管内狭窄抑制効果の均一性を以下の手順にしたがって評価した。
１．方法

ブタ冠動脈における血管内狭窄抑制効果の評価を、実施例１の評価のようにして行った。全てのセグメントを３つの片、すなわち基端部、中間部および先端部に横切し、セグメントごとの面積狭窄率（％）を組織形態計測的分析によって算出した。
２．結果

図１３は、ブタ冠動脈における血管内狭窄抑制効果について、実施例１０、比較例Ｃ６−ｂおよび比較例Ｃ１１の２８日後の面積狭窄率（％）の均一性を示すグラフである。図１３中、横軸は実施例または比較例を表し、数字「１０」は実施例１０を意味し、アルファベット付き数字、すなわち「Ｃ６−ｂ」および「Ｃ１１」は比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）および比較例１１（Ｃ１１）を意味する。また、縦軸は２８日後のセグメントごとの面積狭窄百分率（％）を表す。

実施例１０による薬剤溶出バルーンは、被治療病変部における血管内膜肥厚に対する均一な抑制効果をもたらした。一方、比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）による市販の薬剤溶出バルーン（ＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標））で治療した病変部におけるセグメントごとの効果は、均一ではなかった。
［Ｌ．バルーン表面上の薬剤コート層の均一性］

実施例１０〜実施例１３ならびに比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）および比較例１２（Ｃ１２）の薬剤溶出バルーンについて、バルーン表面上の薬剤コート層の均一性を以下の手順にしたがって算出した。
＜実施例１１＞
＜薬剤溶出バルーンの準備＞

拡張時のサイズが直径６．０ｍｍ×長さ１００ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。

コーティング溶液２を調製した。コーティング溶液２を拡張したバルーンに、コーティング溶液の溶媒がゆっくりと揮発してパクリタキセル量が約３μｇ／ｍｍ^２となるように、コートした。

すなわち、実施例２のようにコーティングを行った。
＜実施例１２＞
＜薬剤溶出バルーンの準備＞

拡張時のサイズが直径６．０ｍｍ×長さ２００ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。

コーティング溶液２を調製した。コーティング溶液２を拡張したバルーンに、コーティング溶液の溶媒がゆっくりと揮発してパクリタキセル量が約３μｇ／ｍｍ^２となるように、コートした。

すなわち、実施例２のようにコーティングを行った。
＜実施例１３＞
＜薬剤溶出バルーンの準備＞

拡張時のサイズが直径７．０ｍｍ×長さ２００ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。

コーティング溶液２を調製した。コーティング溶液２を拡張したバルーンに、コーティング溶液の溶媒がゆっくりと揮発してパクリタキセル量が約３μｇ／ｍｍ^２となるように、コートした。

すなわち、実施例２のようにコーティングを行った。
＜比較例１２（Ｃ１２）＞

ＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標）（ＩＮＶＡｔｅｃ／Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ社製）を準備した。拡張時のサイズが直径７．０ｍｍ×長さ１２０ｍｍ（拡張部）のバルーンを準備した。
１．方法

長さ１００ｍｍ〜２００ｍｍのサイズの、実施例１１〜実施例１３および比較例１２（Ｃ１２）の薬剤溶出バルーンについて、２０ｍｍのセグメントに切断して、バルーン表面上の薬剤コート層の均一性分析を行った。一方、長さ２０ｍｍのサイズの、実施例１０および比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）の薬剤溶出バルーンを６ｍｍまたは７ｍｍのセグメントに切断した。バルーン表面上のセグメントごとのパクリタキセル含有量を、高速液体クロマトグラフィーで測定した。
２．結果

薬剤コート層の均一な評価として、バルーン表面上のセグメントごとのパクリタキセル含有量を分析した。結果を表７に示す。表７中、実施例／比較例の欄の「１０」〜「１３」は実施例であり、「Ｃ６−ｂ」および「Ｃ１２」は比較例である。

実施例１０の長さ２０ｍｍのサイズの薬剤溶出バルーンを６ｍｍまたは７ｍｍのセグメントに切断したところ、セグメントごとのパクリタキセル含有量の相対標準偏差（ＲＳＤ％）が１３．０％であることが示された。一方、比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）の長さ２０ｍｍのサイズの薬剤溶出バルーンを同様に６ｍｍまたは７ｍｍのセグメントに切断したところ、パクリタキセル含有量の相対標準偏差（ＲＳＤ％）が２２．８％であることが示された。すなわち、本明細書中に記載する薬剤溶出バルーンは、比較例Ｃ６−ｂのものよりも均一な薬剤コート層を有する。

また、実施例１１〜実施例１３の長さ１００ｍｍ〜２００ｍｍのサイズの薬剤溶出バルーンを２０ｍｍのセグメントに切断したところ、セグメントごとのパクリタキセル含有量の相対標準偏差（ＲＳＤ％）は１．０％〜３．４％であった。一方、比較例１２（Ｃ１２）の長さ１２０ｍｍのサイズの薬剤溶出バルーンを同様に２０ｍｍのセグメントに切断したところ、パクリタキセル含有量の相対標準偏差（ＲＳＤ％）は２５．３％であった。すなわち、本明細書中に記載する薬剤溶出バルーンは、バルーンの長さにかかわらず均一な薬剤コート層を有することが示された。また、その薬剤コート層はＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標）と比較してかなり均一であることが示された。

［Ｍ．薬剤溶出バルーンの薬剤コート層均一性の走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）による］観察

実施例１０および比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）の薬剤溶出バルーンの薬剤コート層均一性について、薬剤コート層のパクリタキセル結晶を走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）により観察した。
１．方法

薬剤溶出バルーンの薬剤コート層均一性の走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）による観察は、実施例１〜実施例６（図１〜図６）における薬剤溶出バルーンのＳＥＭ像のように行った。
２．結果

薬剤コート層の均一性として、薬剤コート層のパクリタキセル結晶を観察した。図１４および図１５に示すＳＥＭ像が得られた。図１４は実施例１０のＳＥＭ像であり、図１５は比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）のＳＥＭ像である。

実施例１０のＳＥＭ像である図１４は、均一なパクリタキセル微小結晶を示した。また、パクリタキセル微小結晶がバルーン表面上に均一に配置され一様なサイズであることが示された。一方、比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）のＳＥＭ像である図１５は、均一でない薬剤コート層を示した。また、比較例６−ｂ（Ｃ６−ｂ）のＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標）である図１５のＳＥＭ像は、薬剤コート層が結晶およびアモルファスで構成されていることを示した。
［Ｎ．バルーン表面上の薬剤コート層の耐久性の評価］

実施例１３および実施例１４ならびに比較例１２（Ｃ１２）の薬剤溶出バルーンについて、バルーン表面上の薬剤コート層の耐久性を以下の手順にしたがって評価した。
＜実施例１４＞
＜薬剤溶出バルーンの準備＞

拡張時のサイズが直径６．０ｍｍ×長さ４０ｍｍ（拡張部）のバルーンカテーテル（テルモ社製、バルーン（拡張部）の素材はナイロンエラストマー）を準備した。

コーティング溶液２を調製した。コーティング溶液２を拡張したバルーンに、コーティング溶液の溶媒がゆっくりと揮発してパクリタキセル量が約３μｇ／ｍｍ^２となるように、コートした。

すなわち、実施例２のようにコーティングを行った。
１．方法

被治療病変部へ送達される過程での薬剤コート層の耐久性を測定するため、模擬末梢血管モデルを用いて試験を行った。ガイディングシースに生理食塩水を満たし、約４５度の角度となるように配置した。次いで、ガイドワイヤをガイディングシースの中に通した。この試験の間、ガイディングシース内の生理食塩水を３７度に保持した。薬剤溶出バルーンを、バルーンが出るまで、１分間、ガイドワイヤの上をたどらせた。その後、バルーン表面上の残存パクリタキセル含有量を、高速液体クロマトグラフィーで測定した。
２．結果

薬剤コート層の耐久性評価として、模擬末梢血管モデルの中を通過後のバルーン表面上の残存パクリタキセル含有量を測定した。結果を表８に示す。表８中、実施例／比較例の欄の「１３」および「１４」は実施例であり、「Ｃ１２」は比較例である。

湿潤血管モデル内での模擬使用の後、実施例１４の長さ４０ｍｍのサイズの薬剤溶出バルーンのバルーン表面上の残存パクリタキセル含有量は、８４％（拡張前）であった。さらに、実施例１３の長さ２００ｍｍのサイズの薬剤溶出バルーンのバルーン表面上の残存パクリタキセル含有量は、８４％であった。一方、比較例１２（Ｃ１２）の長さ１２０ｍｍのサイズのＩＮ．ＰＡＣＴ（登録商標）の残存パクリタキセル含有量は、６３％であった。本明細書中に記載する薬剤溶出バルーンは、被治療病変部全体へ均一な微小結晶を付与しながらパクリタキセルを送達することができることが示された。また、長さの長い薬剤溶出バルーンは、目標病変部への送達の間、均一な微結晶薬剤を保持することもできる。言い換えれば、薬剤溶出バルーンの先端部、中間部、および基端部は、被治療病変部への送達の後、バルーン上の複数の規則的に配置された結晶の均一構造を、周囲を囲むように保持することができた。特に、拡張可能部材（バルーン）の先端（先端部）はカテーテルなどの医療機器の内腔を含む他の表面に対して摺動することが多く、バルーン上の均一な結晶粒子の構造は脱落しやすい。したがって、本明細書中に記載する拡張可能部材の先端は、血管内膜肥厚抑制効果を示す薬剤コート層を有する。

以上のことから、本明細書中に記載する薬剤溶出バルーンは、被治療病変部への送達の過程でバルーン表面から脱落（離脱または落下）することなしに、均一なパクリタキセル微小結晶を送達することができることが明らかとなった。すなわち、本明細書中に記載する薬剤溶出バルーンは、拡張時まで薬剤コート層の均一性を保ちつつ、被治療病変部において拡張することができる。

［Ｏ．ブタ腸骨大腿動脈における薬物動態２］

実施例９、比較例６−ａ（Ｃ６−ａ）、比較例７−ａ（Ｃ７−ａ）および比較例１３（Ｃ１３）の薬剤溶出バルーンについて、ブタ腸骨大腿動脈における薬物動態を、以下の手順にしたがって評価した。
＜比較例１３（Ｃ１３）＞

図１６および図１７における比較例１３（Ｃ１３）は、パクリタキセル塗布バルーンカテーテルＲａｎｇｅｒ（登録商標）（Ｂｏｓｔｏｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）である。Ｒａｎｇｅｒ（登録商標）の結果はＢｏｓｔｏｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社によってウェブサイトに開示されたものである。
１．方法

薬物動態を、「Ｈ」の方法のようにして行った。

薬剤溶出バルーンでの治療の後、目標組織を周囲の組織から注意深く剥離した。組織中のパクリタキセル濃度測定は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析によって行った。
２．結果

ブタ大腿動脈における薬物動態を評価した。図１６は、ブタ大腿動脈組織における移行について、実施例９、比較例６−ａ（Ｃ６−ａ）、比較例７−ａ（Ｃ７−ａ）および比較例１３（Ｃ−１３）の薬物動態プロファイルを示すグラフである。横軸は薬剤溶出バルーンの拡張後の日数を表す。また、縦軸は目標動脈組織における薬剤濃度を表す。図１７中、横軸は実施例または比較例を表し、数字「９」は実施例９を意味し、アルファベット付き数字、すなわち「Ｃ６−ａ」、「Ｃ７−ａ」、および「Ｃ１３」は比較例６−ａ（Ｃ６−ａ）、比較例７−ａ（Ｃ７−ａ）および比較例１３（Ｃ１３）をそれぞれ意味する。また、縦軸は目標動脈組織における０．０２日後〜７日後の薬剤のＡＵＣ（ｎｇ ｄａｙ／ｍｇ）を表す。

図１６に示すように、実施例９で観察された目標動脈組織における薬剤濃度は、０．０４日後、１日後、７日後、２１日後、および２８日後でそれぞれ６９．８ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅ、５３．４ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅ、１１．７ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅ、４．０ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅ、および２．３ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅであった。一方、比較例６−ａ（Ｃ６−ａ）で観察された目標動脈組織における薬剤濃度は、０．０２日後、１日後、２日後、７日後、および２６日後でそれぞれ３５ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅ、７．７ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅ、５．３ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅ、１１．１ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅ、および１．５ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅであった。比較例７−ａ（Ｃ７−ａ）で観察された目標動脈組織における薬剤濃度は、０．０２日後、１日後、７日後、および２８日後でそれぞれ５８．９ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅ、４．４ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅ、２．２ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅ、および１．６ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅであった。比較例１３（Ｃ１３）で観察された目標動脈組織における薬剤濃度は、０．０２日後、１日後、７日後、および２１日後でそれぞれ４８．８ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅ、１９．８ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅ、５．３ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅ、１．９ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅ、および０．４ｎｇ／ｍｇ ｔｉｓｓｕｅであった。すなわち、実施例９についての０．０４日後（１時間後）から１日後までの薬剤減少率は多くとも５０％であった。一方、比較例６−ａ（Ｃ６−ａ）、比較例７−ａ（Ｃ７−ａ）および比較例１３（Ｃ１３）についての０．０２日後〜０．０４日後（０．５〜１時間後）から１日後までの薬剤減少率は５０％超であった。

図１７はブタ大腿動脈組織における移行について、実施例９、比較例６−ａ（Ｃ６−ａ）、比較例７−ａ（Ｃ７−ａ）および比較例１３（Ｃ１３）の０．０２〜０．０４日後（０．５〜１時間後）から７日後までの薬剤のＡＵＣを示すグラフである。また、縦軸は目標動脈組織における０．０２〜０．０４日後から７日後までの薬剤のＡＵＣ（ｎｇ ｄａｙ／ｍｇ）を表す。

実施例９で観察されたバルーン拡張の０．０４日後（１時間後）から７日後までの目標動脈組織における薬剤のＡＵＣは２５４ｎｇ ｄａｙ／ｍｇであった。一方、比較例６−ａ（Ｃ６−ａ）、比較例７−ａ（Ｃ７−ａ）および比較例１３（Ｃ１３）で観察されたバルーン拡張の０．０２〜０．０４日後（０．５〜１時間後）から７日後までの目標動脈組織における薬剤のＡＵＣは、それぞれ６９ｎｇ ｄａｙ／ｍｇ、５１ｎｇ ｄａｙ／ｍｇ、および１０９ｎｇ ｄａｙ／ｍｇであった。すなわち、実施例９で得られたＡＵＣは２００ｎｇ ｄａｙ／ｍｇよりも高かった。一方、比較例６−ａ（Ｃ６−ａ）、比較例７−ａ（Ｃ７−ａ）および比較例１３（Ｃ１３）で得られたＡＵＣは２００ｎｇ ｄａｙ／ｍｇよりも低かった。実施例９で得られたＡＵＣは最も高い。

本明細書中に記載したように、バルーン拡張の７日後までの高い組織中薬剤濃度は、平滑筋細胞の増殖に影響がある。その後は、組織から素早く消え去るため、内皮細胞の増殖を抑制することはない。

以上の詳細な説明は、一例として開示される薬剤コート層を説明するものである。しかしながら、本発明は説明した正確な実施態様や変更に限定されるものではない。当業者は、添付の請求の範囲で規定する本発明の精神および範囲から逸脱することなく、様々な変更、修正および同等物を用いることができる。請求の範囲内のそのような変更、修正および同等物は全て請求の範囲に包含されることは、はっきりと意図される。

Claims (9)

1. 拡張可能なバルーンとバルーン表面に薬剤としてパクリタキセルを含む薬剤コート層を有する末梢動脈疾患の治療に使用されるバルーンカテーテルであって、前記薬剤はバルーン表面に塗布乾燥された薬剤コート層を形成し、前記コート層中でパクリタキセル結晶はバルーン全周にわたって形成され、結晶粒子の各々が、基端はバルーン表面に固定され軸方向の長さ５μｍ〜２０μｍの長軸を備えた直線状の長尺体を有し、長尺体の長軸が交わる前記バルーン表面に対して４５度〜１３５度の範囲内の角度をなす結晶形態型であり、治療される部位において前記薬剤コート層から薬剤を放出するバルーンカテーテル：ただし、前記バルーンカテーテルは、パクリタキセルを含有するコーティングをバルーンカテーテルに適用し、コーティングされたバルーンをアニーリングしてパクリタキセル結晶形を生成する工程を含む方法で得られるバルーンカテーテルを含まず、また、前記バルーンカテーテルは、膨張したバルーンをパクリタキセル溶液でコーティングし、コーティングされたバルーンを収縮させ、収縮したバルーンを湿潤状態で折りたたむ工程を含む方法で得られるバルーンカテーテルを含まない。
2. 前記結晶形態型は、前記長尺体の少なくとも先端が中空であり、バルーンの表面において平面の全体または少なくとも一部を構成する請求項１に記載のバルーンカテーテル。
3. 前記薬剤コート層は、溶媒、パクリタキセルを有するコーティング溶液をバルーン表面上で溶媒が揮発するように乾燥された薬剤コート層である請求項１または２に記載のバルーンカテーテル。
4. 前記薬剤コート層は、さらにアミノ酸エステルである賦形剤を含む薬剤コート層である請求項３に記載のバルーンカテーテル。
5. 前記バルーンはポリアミドからなる請求項１ないし４のいずれか１項に記載のバルーンカテーテル。
6. 前記長尺体がバルーン表面全体にある請求項１ないし５のいずれか１項に記載のバルーンカテーテル。
7. 末梢血管の塞栓形成を生じさせるサイズをもつ微小粒子は直径が１００μｍ〜９００μｍであり、これに対して前記薬剤で治療される血管中で発生する微粒子の９０％超が、直径が１０μｍ〜２５μｍである、請求項１ないし６のいずれか１項に記載のバルーンカテーテル。
8. 末梢血管の塞栓形成を生じさせるサイズをもつ微小粒子より小さい微小粒子が血管内に生じる請求項１ないし７のいずれか１項に記載のバルーンカテーテル。
9. 末梢血管の塞栓形成を生じさせるサイズをもつ微小粒子より小さい微小粒子が下流末梢血管に隣接する筋肉中に分散される、請求項１ないし８のいずれか１項に記載のバルーンカテーテル。

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