JP7737983B2 - 抗体又は巨大タンパク質の延長された放出の為の剤形物 - Google Patents

Description

Ｉ．背景
抗体及び抗原結合性フラグメント、例えば、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、三特異性抗体、抗原結合性フラグメント（antigen binding fragments）（Ｆａｂ）、抗体薬物コンジュゲート（antibody drug conjugates）（ＡＤＣ）及び他の高分子量生物製剤、例えば、Ｆｃ融合タンパク質、酵素、成長因子及び凝固因子、は、副作用がより少ない、より効果的な薬物療法の為の、より特異的な薬の開発において重要性を増している。この分野における急速な進歩は、他の技法の中でもとりわけ、組換えＤＮＡ技術によるこれらの化合物の大規模生産と一緒に、開発中及び既に市場に出ている、抗体、抗原結合性フラグメント及び他の巨大タンパク質（large protein）由来の薬の数の大幅増を引き起こした。不運にも、抗体、抗原結合性フラグメント及び他の巨大治療用タンパク質の発展は、簡便且つ有効な送達系を使用して、これらの化合物を全身的又は局所的に送達する能力をはるかに追い越している。

生分解性ポリマーは、全身的薬物送達又は部位特異的薬物送達のいずれかの為の、長時間作用型の非経口制御放出系における使用に関して、過去十年間にわたりますます注目を集めてきた。生分解性制御放出製剤は、治療用化合物の薬物動態を有意に改善することができる。これは、全身の血漿中濃度は、望ましくない副作用が低減するのと同時に低減されることができる為、慢性疾患の処置において、且つ治療域の狭い化合物に対して、特に適切である。さらに、多くの新しい生物活性化合物は、短い半減期を有し、治療的に有効な血漿レベルを達成する為に頻回の注射を必要とする。非経口的に投与される生物活性化合物に関する、頻回の投薬レジメンに関連する患者のコンプライアンス及び高コストは、生分解性の非経口徐放性剤形物（biodegradable parenteral sustained release dosage forms）における関心を高めている。

ポリ（Ｄ、Ｌ－乳酸）（ＰＬＡ）及びＰＬＧＡコポリマーとしても既知の、乳酸とグリコール酸とのコポリマーは、非経口徐放性デポ製剤における使用に対して最も広く適用される生分解性ポリマーである。ＰＬＧＡ及びＰＬＡ（まとめて、（ＰＬ（Ｇ）Ａ）コポリマーと呼ばれる）は、低分子、例えばリスペリドン、及び治療用ペプチド、例えばロイプロリド、ゴセレリン又はオクトレオチド、の為の徐放性デポ製剤の開発の為に上手く使用されている。

しかしながら、ＰＬ（Ｇ）Ａポリマーは、その使用を限定しタンパク質治療薬の送達に適さない、幾つかの欠点を有する。第１に、ＰＬ（Ｇ）Ａコポリマーは、比較的疎水性のポリマーであり、カプセル化されたタンパク質に対して最適な環境を与えない。タンパク質は該ポリマーに吸着しうる為、低速で及び不完全な放出、タンパク質アンフォールディング及び／又は凝集をもたらす。第２に、比較的剛直で且つ非膨潤性のＰＬ（Ｇ）Ａマトリックスを通るこのような化合物の拡散は、無視できる為、巨大タンパク質分子の放出を操作する為の能力は、限定される。それ故に、ＰＬ（Ｇ）Ａコポリマーからのタンパク質の該放出は、該マトリックス中に存在する孔を介する拡散、及び該マトリックスの分解に依存する。典型的に、該カプセル化されたタンパク質は、ポリマーマトリックスがその一体性を失うか、又は溶解するような程度まで、該ポリマーマトリックスが分解されてしまう瞬間まで、該ポリマーマトリックス中に捕捉されたままであり、典型的に、ＰＬ（Ｇ）Ａベースのデポ製剤に関して得られる、二相又は三相分解に依存する放出プロファイルをもたらす。最後に、ＰＬ（Ｇ）Ａコポリマーの分解中に、酸性部分が形成され、該剛直で且つ非膨潤性のＰＬ（Ｇ）Ａマトリックス中に蓄積し、１～２と同程度の低ｐＨであることができるイン・シチュー（ｉｎ ｓｉｔｕ） ｐＨを有する、該ポリマーマトリックス中の酸性微小環境の形成をもたらす。このような酸性条件下で、カプセル化されたタンパク質は、不完全なタンパク質放出をもたらす凝集物を形成しうる。さらに、該低ｐＨは、カプセル化されたペプチド又はタンパク質の構造的一体性及び生物活性に有害作用を有し、治療有効性の低減及び免疫原性の増強をもたらしうる。タンパク質及びペプチドの化学的修飾、例えばアシル化及び付加物形成、は、ＰＬ（Ｇ）Ａベースの徐放性製剤に関して報告されている。

国際公開第２０１２／００５５９４号パンフレット及び国際公開第２０１３／０１５６８５号パンフレットに開示されている、生分解性の相分離したセグメント化されたマルチブロックコポリマー（ＳｙｎＢｉｏｓｙｓ（商標）、ＩｎｎｏＣｏｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｂ．Ｖ、Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）は、最大３～６カ月までの延長された期間にわたって、構造的に無傷且つ生物活性のペプチド及びタンパク質を送達する為に開発されている（Stankovic et al.，Eur．J．Pharm．Sci．2013，49(4)，578-587；Teekamp et al.，Int．J．Pharm．2017，534(1-2)，229-236；Teekamp et al.，J．Controlled Release 2018，269(10)，258-265；Scheiner et al.，ACS Omega 2019，4(7)，11481-11492）。ＳｙｎＢｉｏｓｙｓマルチブロックコポリマーは、典型的に、Ｄ，Ｌ－ラクチド、Ｌ－ラクチド、グリコリド、ε－カプロラクトン、ｐ－ジオキサノン及び／又はポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）を含む、通常使用されるモノマーが、低分子量ポリマー（プレ－ポリマー）へと共重合されている（これらは、ジイソシアネート、典型的に１，４－ブタンジイソシアネート、と共に連結されている）、２種の異なるブロックから構成されている。２種の化学的及び物理的に別個のプレポリマーブロック、例えば親水性非晶質のブロックと組成性結晶性ブロック、とを使用することによって、ペプチド及びタンパク質を含む薬物の長期放出の為のメカニズムを与える、相分離したセグメント化されたマルチブロックコポリマーが得られる。該親水性非晶質ブロックは、典型的に、水性条件下で、該マルチブロックコポリマーの膨潤をもたらす、高含量のポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）を含有する。該疎水性結晶性ブロックは、物理的架橋として作用する。ＳｙｎＢｉｏｓｙｓベースの製剤中に上手くカプセル化され、それから構造的に無傷のまま放出された、ペプチド及びタンパク質の例は、とりわけ、ゴセレリン（１２６９ｇ／モル）、エキセナチド（４１８７ｇ／モル）、組換えインスリン（５．８ｋＤａ）、インスリン様成長因子（７．６ｋＤａ）、リゾチーム（１４．７ｋＤａ）、炭酸脱水酵素（２９ｋＤａ）、ウシ血清アルブミン（６６．５ｋＤａ）及び肝細胞成長因子（６９ｋＤａ）を包含する。

しかしながら、抗体及び抗原結合性フラグメント、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、三特異性抗体、抗原結合性フラグメント（Ｆａｂ）、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び他の高分子量生物製剤、例えばＦｃ－融合タンパク質、は、最大２００ｋＤａ又はさらに２００ｋＤａを超える分子量を有し、複雑な三次元構造を有しうる。

不運にも、モノクローナル抗体の送達は負担となる。モノクローナル抗体は、典型的に、低濃度の静脈内（intravenous）（ＩＶ）点滴によって投与され、静脈内（ＩＶ）点滴は、完全用量を送達し、患者を不快にさせ、且つ感染のリスクを増加させるのに何時間もかかることができる。さらに、該患者は、該点滴をうける為に頻繁に通院する必要がある。例えば、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、 Ｉｎｃ．）、すなわち様々な癌の処置において使用される、１４９ｋＤａの分子量を有する、ヒト化された抗ＶＥＧＦモノクローナルＩｇＧ_１抗体、は、２週間ごとに最大９０分間、点滴によって２５ｍｇ／ｍｌの溶液として投与される。

この不便且つ負担の大きい投与手順が、より患者に優しい皮下投与に置き換わることが長年望まれている。高度に濃縮された（且つ粘性の）抗体溶液の使用は、高用量の抗体及び抗原結合性フラグメントの皮下送達を可能にしたが、頻回の投与に関する必要性を解決していない。皮下に投与されることができ、構造的に無傷であり且つ生物活性の抗体及び抗原結合性フラグメントの延長された放出（extended release）をもたらすところの延長された放出の剤形物（extended release dosage forms）が、当技術分野において依然として必要とされている。本発明はこの必要性を満たすものである。

ＩＩ．概要
本開示は、巨大タンパク質及び抗体の非経口延長放出製剤に対する、当技術分野において長年求められていた必要性に関する。

従って、一つの観点において、本発明は、抗体（又はその抗原結合性フラグメント）の延長された放出の為の剤形物であって、
（ａ）抗体（又はその抗原結合性フラグメント）；
（ｂ）生分解性マルチブロックコポリマーマトリックス
を含み、
ここで、該抗体（又は該その抗原結合性フラグメント）が、該マルチブロックコポリマーマトリックス中に存在し、
ここで、該生分解性マルチブロックコポリマーが、少なくとも１つの非晶質の加水分解可能なプレポリマー（Ａ）セグメント及び少なくとも１つの半結晶性の加水分解可能なプレポリマー（Ｂ）セグメントを含む、１つ以上の生分解性の、相分離した、熱可塑性マルチブロックコポリマーを含み、
ここで、
生理的条件下での上記マルチブロックコポリマーが、約３７℃以下のＴ_ｇ及び約５０℃～約１１０℃のＴ_ｍを有し；
該セグメントが、多官能性鎖延長剤によって連結されており；
該セグメントが、ポリマー鎖にわたってランダムに分布されており；並びに、
該プレポリマー（Ｂ）セグメントが、Ｘ－Ｙ－Ｘトリブロックコポリマーを含み、ここで、Ｙが重合開始剤であり、及び、Ｘが、約７個以上のｐ－ジオキサノンモノマー単位で表されるブロック長を有するポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントである、
上記剤形物に向けられている。

さらなる観点において、本発明は、約７０ｋＤａ以上のタンパク質の延長された放出の為の剤形物であって、
（ａ）約７０ｋＤａ以上のタンパク質；
（ｂ）生分解性マルチブロックコポリマーマトリックス
を含み、
ここで、該タンパク質が、該マルチブロックコポリマーマトリックス中に存在し、
ここで、該生分解性マルチブロックコポリマーが、少なくとも１つの非晶質の加水分解可能なプレポリマー（Ａ）セグメント及び少なくとも１つの半結晶性の加水分解可能なプレポリマー（Ｂ）セグメントを含む、１つ以上の生分解性の、相分離した、熱可塑性マルチブロックコポリマーを含み、
ここで、
生理的条件下での上記マルチブロックコポリマーが、約３７℃以下のＴ_ｇ及び約５０℃～約１１０℃のＴ_ｍを有し；
該セグメントが、多官能性鎖延長剤によって連結されており；
該セグメントが、ポリマー鎖にわたってランダムに分布されており；並びに、
該プレポリマー（Ｂ）セグメントが、Ｘ－Ｙ－Ｘトリブロックコポリマーを含み、ここで、Ｙが重合開始剤であり、Ｘが、約７個以上のｐ－ジオキサノンモノマー単位で表されるブロック長を有するポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントである、
上記剤形物に向けられている。

幾つかの実施態様において、該剤形物は、約１週間～約２カ月の放出プロファイルを示す。他の実施態様において、本明細書に記載されている剤形物は、約１週間～約６カ月の延長された放出プロファイルを有することができる。

該マルチブロックコポリマーは、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）（又はＰＥＧを含有するポリマーブロック）、及び１つ以上の他のポリマーブロックを含みうるか、又は代替的には、それらからなる。該ポリマーマトリックスは、マイクロスフェア又はマイクロ粒子の形態中に存在しうるが、別の適用形態、例えば、ナノスフェア又はナノ粒子、棒状（rod）、インプラント、コーティング、フィルム、シート、チューブ、膜、メッシュ、繊維、プラグ、足場（scaffold）又は（イン・シチュー（ｉｎ ｓｉｔｕ）で形成する）ゲル、中にまた含まれうる。

本明細書に記載されている抗体及び巨大タンパク質の延長放出製剤は、癌、神経変性疾患、自己免疫疾患、心血管疾患、移植拒絶、炎症性疾患、ウイルス感染症の処置を含むが、これらに限定されない、種々の処置において有用でありうる。よって、本開示のさらなる観点は、本明細書に記載されている延長放出抗体製剤を投与する方法、及び本明細書に記載されている延長放出抗体製剤を用いる処置の方法に関する。このような方法は、癌、神経変性疾患、自己免疫疾患、神経変性疾患、移植拒絶、炎症性疾患及びウイルス感染症に対する処置を含むが、これらに限定されない、種々の処置を含む。

別の実施態様において、該抗体の治療域内のイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）血漿レベルを達成するか又はそれに近付けるレジメンに従って、記載された延長放出抗体剤形物を投与する方法が包含される。

本明細書において記載され、特許請求されている本発明は、この概要において示されているか、又は記載されているか、又は言及されているものを含むが、これらに限定されない、多くの属性及び実施態様を有する。包括的であることを意図するものではなく、本明細書において記載され、特許請求されている本発明は、この概要において特定された要件又は実施態様に又はそれによって限定されるものではなく、これは、例示の為にのみ含まれ、限定の為に含まれるものではない。追加の実施態様は、以下の図面の説明及び詳細な説明において開示されうる。

ＩＩＩ．図面の簡単な説明
５％ｍＡｂＸ標的ローディングによりｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアの走査型電子顕微鏡画像。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との（１００：０、５０：５０、２５：７５及び０：１００ｗ／ｗ）ブレンドから構成され、Ｗ／Ｏ／Ｏベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 ５％ｍＡｂＸ標的ローディングによりｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアの走査型電子顕微鏡画像。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との（１００：０、５０：５０、２５：７５及び０：１００ｗ／ｗ）ブレンドから構成され、Ｗ／Ｏ／Ｏベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 ５％ｍＡｂＸ標的ローディングによりｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアの走査型電子顕微鏡画像。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との（１００：０、５０：５０、２５：７５及び０：１００ｗ／ｗ）ブレンドから構成され、Ｗ／Ｏ／Ｏベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 ５％ｍＡｂＸ標的ローディングによりｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアの走査型電子顕微鏡画像。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との（１００：０、５０：５０、２５：７５及び０：１００ｗ／ｗ）ブレンドから構成され、Ｗ／Ｏ／Ｏベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 ５％ｍＡｂＸ標的ローディングによりｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアの走査型電子顕微鏡画像。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との（１００：０、５０：５０、２５：７５及び０：１００ｗ／ｗ）ブレンドから構成され、Ｗ／Ｏ／Ｗベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 ５％ｍＡｂＸ標的ローディングによりｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアの走査型電子顕微鏡画像。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との（１００：０、５０：５０、２５：７５及び０：１００ｗ／ｗ）ブレンドから構成され、Ｗ／Ｏ／Ｗベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 ５％ｍＡｂＸ標的ローディングによりｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアの走査型電子顕微鏡画像。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との（１００：０、５０：５０、２５：７５及び０：１００ｗ／ｗ）ブレンドから構成され、Ｗ／Ｏ／Ｗベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 ５％ｍＡｂＸ標的ローディングによりｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアの走査型電子顕微鏡画像。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との（１００：０、５０：５０、２５：７５及び０：１００ｗ／ｗ）ブレンドから構成され、Ｗ／Ｏ／Ｗベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 ５％ｍＡｂＸ標的ローディングによりｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアからのｍＡｂＸの累積放出。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との（１００：０、５０：５０、２５：７５及び０：１００ｗ／ｗ）ブレンドから構成され、Ｗ／Ｏ／Ｏベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 ５％ｍＡｂＸ標的ローディングによりｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアからのｍＡｂＸの累積放出。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との（１００：０、５０：５０、２５：７５及び０：１００ｗ／ｗ）ブレンドから構成され、Ｗ／Ｏ／Ｗベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 １０％ｍＡｂＸ標的ローディングによりｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアからのｍＡｂＸの累積放出。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との（１００：０、９０：１０及び８０：２０ｗ／ｗ）ブレンドから構成され、Ｗ／Ｏ／Ｗベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 約１５％ｍＡｂＸ標的ローディングによりｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアからのｍＡｂＸの累積放出。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との８０：２０（ＡＭＤ１７０４２）及び９０：１０ｗ／ｗ（ＡＭＤ１７０３８）ブレンドから構成され、１５重量％のポリマー溶液濃度を使用するＷ／Ｏ／Ｗベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 ９．３％（ＡＭＤ１７０２２）及び１９％（ＡＭＤ１７０２３）のｍＡｂＸローディングによりｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアの走査型電子顕微鏡画像。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との９０：１０ｗ／ｗブレンドから構成され、Ｗ／Ｏ／Ｏベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 ９．３％（ＡＭＤ１７０２２）及び１９％（ＡＭＤ１７０２３）のｍＡｂＸローディングによりｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアの走査型電子顕微鏡画像。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との９０：１０ｗ／ｗブレンドから構成され、Ｗ／Ｏ／Ｏベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 ９．３％（ＡＭＤ１７０２２）及び１９％（ＡＭＤ１７０２３）のｍＡｂＸローディングによりｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアからのｍＡｂＸの累積放出。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との９０：１０ｗ／ｗブレンドから構成され、Ｗ／Ｏ／Ｏベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 様々な時点で採取されたイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出ｍＡｂＸ試料の発光スペクトルを示す、イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で放出されたｍＡｂＸの蛍光分光法（ＦＬＳ：Fluorescence spectroscopy）解析（Ａ）。 ネイティブｍＡｂＸと比較した、様々な時点で採取されたイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出ｍＡｂＸ試料の発光最大値（Ｂ）。 正しくフォールディングされたｍＡｂＸの割合を計算する為に使用された式（Ｃ）。 様々な時点で採取されたイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出ｍＡｂＸ試料の波長の関数としてモル楕円率を示す、イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で放出されたｍＡｂＸの円二色性（ＣＤ）解析（Ａ）。 ネイティブｍＡｂＸ及び完全にフォールディングされていないｍＡｂＸと比較した、様々な時点で採取されたイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出ｍＡｂＸ試料の２１８ｎｍのシグナルピークにおけるモル楕円率（Ｂ）。 正しくフォールディングされたｍＡｂＸの割合を計算する為に使用された式（Ｃ）。 ＳＥＣ－ＵＰＬＣ及びＥＬＩＳＡによって測定された場合に、様々な時点で採取されたイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出試料の総ｍＡｂＸ及び無傷のｍＡｂＸの濃度、並びに蛍光分光法及び円二色性によって測定された場合に、フォールディングされたｍＡｂＸの割合を示す、ｍＡｂＸマイクロスフェアのイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出動態。 雌のＮＭＲＩマウスにおけるｍＡｂＸ ＭＳＰ（１、４、８ｍｇのｍＡｂＸ）の皮下投与後の、ｍＡｂＸのイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）薬物動態（ＰＫ研究Ｉ）。血液試料は、示された時点で採取され、ｍＡｂＸの血清濃度は、ＥＬＩＳＡによって測定された。 雌のＡ４３１異種移植片保有ＮＭＲＩヌードマウスにおけるｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェア（１、２、４、８ｍｇのｍＡｂＸ）の皮下投与後の、ｍＡｂＸのイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）薬物動態（ＰＫ研究ＩＩ）。血液試料は、示された時点で採取され、ｍＡｂＸの血清濃度は、ＥＬＩＳＡによって測定された。 雌のＡ４３１異種移植片を保有するＮＭＲＩヌードマウスにおけるｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェア（１、２、４、８ｍｇのｍＡｂＸ）の皮下投与後の、時間の関数としての皮下腫瘍成長（（ａ）、及び（ｂ）ズーム）。腫瘍体積は、週に２回、カリパス測定によって決定された。 雌のＡ４３１異種移植片を保有するＮＭＲＩヌードマウスにおけるｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェア（１、２、４、８ｍｇのｍＡｂＸ）の皮下投与後の、時間の関数としての皮下腫瘍成長（（ａ）、及び（ｂ）ズーム）。腫瘍体積は、週に２回、カリパス測定によって決定された。 １９％のｍＡｂ０２標的ローディングによりｍＡｂ０２をロードされたマイクロスフェアからのｍＡｂ０２の累積放出。該マイクロスフェアは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０とのブレンド（１００：０、９０：１０、８０：２０、７０：３０、５０：５０、２５：７５及び１００：０ｗ／ｗ）から構成され、Ｗ／Ｏ／Ｏベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 蛍光分光法によって測定された場合に、ｍＡｂ２をロードされたマイクロスフェアからのｍＡｂ２のイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出中に、正しくフォールディングされたｍＡｂ２の割合。Ａ～Ｆは、異なるポリマー組成物から構成された、ｍＡｂ２をロードされたマイクロスフェアを表す。 時間の関数として、残存質量（％）として表される、代表的な［ポリ（ε－カプロラクトン）－ＰＥＧ－ポリ（ε－カプロラクトン）］－ｂ－［ポリ（Ｌ－ラクチド）］（５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０）及び［ポリ（ε－カプロラクトン）－ＰＥＧ－ポリ（ε－カプロラクトン）］－ｂ－［ポリ（ｐ－ジオキサノン）］（５０ＣＰ１０Ｃ２０－Ｄ２５、５０ＣＰ１５Ｃ２０－Ｄ２５及び２０ＣＰ３０Ｃ４０－Ｄ２３）から構成される、ポリマーのみのマイクロスフェアのイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での浸食。 ２０％のｍＡｂ０２標的ローディングによりｍＡｂ０２をロードされたマイクロスフェアからのｍＡｂ０２の累積放出。該マイクロスフェアは、１００：０、９０：１０、８０：２０、７０：３０、５０：５０、２５：７５及び０：１００ｗ／ｗのブレンド比を有する５０ＣＰ３０Ｃ４０－Ｄ２５と５０ＣＰ１０Ｃ２０－Ｄ２５とのブレンドから構成され、Ｗ／Ｏ／Ｏベースのマイクロカプセル化プロセスによって調製された。 様々な時点で採取されたイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出試料の、総ｍＡｂ０２及び無傷のｍＡｂ０２の濃度（ＳＥＣ－ＵＰＬＣによって測定された場合）並びに正しくフォールディングされたｍＡｂ０２の割合（蛍光分光法によって測定された場合）を示す、５０ＣＰ３０Ｃ４０－Ｄ２５と５０ＣＰ１０Ｃ２０－Ｄ２５とのブレンドから構成される、ｍＡｂ０２マイクロスフェアからのｍＡｂ０２のイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出。Ａ～Ｇは、異なるポリマー組成物から構成された、ｍＡｂ０２をロードされたマイクロスフェアを表す。 様々な時点で採取されたイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出試料の、総ｍＡｂ０２及び無傷のｍＡｂ０２の濃度（ＳＥＣ－ＵＰＬＣによって測定された場合）並びに正しくフォールディングされたｍＡｂ０２の割合（蛍光分光法によって測定された場合）を示す、５０ＣＰ３０Ｃ４０－Ｄ２５と５０ＣＰ１０Ｃ２０－Ｄ２５とのブレンドから構成される、ｍＡｂ０２マイクロスフェアからのｍＡｂ０２のイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出。Ａ～Ｇは、異なるポリマー組成物から構成された、ｍＡｂ０２をロードされたマイクロスフェアを表す。 様々な時点で採取されたイン・ビトロ（イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ））放出試料の、総ｍＡｂ０２及び無傷のｍＡｂ０２の濃度（ＳＥＣ－ＵＰＬＣによって測定された場合）並びに正しくフォールディングされたｍＡｂ０２の割合（蛍光分光法によって測定された場合）を示す、５０ＣＰ３０Ｃ４０－Ｄ２５と５０ＣＰ１０Ｃ２０－Ｄ２５とのブレンドから構成される、ｍＡｂ０２マイクロスフェアからのｍＡｂ０２のイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出。Ａ～Ｇは、異なるポリマー組成物から構成された、ｍＡｂ０２をロードされたマイクロスフェアを表す。

ＩＶ．詳細な説明
本発明は、巨大治療用タンパク質又は抗体の、延長された放出の剤形物に向けられている。巨大治療用タンパク質又は抗体の現在の剤形物が、静脈内点滴又は筋肉内若しくは皮下への注射用溶液である為、当技術分野において、このような剤形物に対して長年求められていた必要性が存在する。さらに、現在利用可能な抗体及び治療用タンパク質は、典型的に、水性溶液として投与される。該治療用タンパク質又は抗体の半減期に依存して、血清レベルは投与後に比較的急速に下降し、その為、患者は、処置期間中に治療用タンパク質又は抗体の所望の血漿レベルを維持する為に、頻回の点滴を受けるか、又は頻回の注射を受ける必要がある。頻回の点滴又は注射は、不便であることができ、それ故に、患者のコンプライアンスを不十分にし、患者及び提供者にあまり効果的でない処置を選択させることになる。

該延長された放出の剤形物は、マルチブロックコポリマーマトリックス中にカプセル化された、抗体（例えば、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、二重特異性抗体、又は三特異性抗体）、その抗原結合性フラグメント（Ｆａｂ）、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）又は高分子量タンパク質、例えば、Ｆｃ－融合タンパク質、酵素、成長因子又は凝固因子、を含む。該マルチブロックコポリマーは、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）（又はＰＥＧを含有するポリマーブロック）、及び１以上の他のポリマーを含みうるか、又は代替的には、それらからなる。

本開示による実施態様は、以下により十分に記載されることになる。しかしながら、本開示の観点は、異なる形態で具体化されうるが、本明細書に示されている実施態様に限定されるものと解釈されるべきでない。むしろ、これらの実施態様は、この開示が、徹底的となるよう、且つ本発明の範囲を当業者に十分に伝えるように、提供される。本明細書の記載において使用される用語は、特定の実施態様を説明する為のものに過ぎず、限定的であることを意図していない。

語「相分離した」は、本明細書において使用される場合、２つ以上の異なるプレポリマーから構築され、その内の少なくとも２つが、体温以下で（生理条件下で、例えばヒトの体内で）、互いに（部分的に）不適合である、系、特にコポリマー、を云うことが意味される。よって、該プレポリマーは、組み合わされた場合、すなわち該プレポリマーの物理的混合物として組み合わされた場合にも、該プレポリマーが、「化学的混合物」、すなわちコポリマー、として単一の化学種中で組み合わされた場合にも、均一な混合物を形成しない。

語「プレポリマー」は、本明細書において使用される場合、多官能性鎖延長剤によってランダムに連結され、一緒に該マルチブロックコポリマーを構成する、ポリマーセグメントを云うことが意味される。各プレポリマーは、好適なモノマーの重合によって得られうるが、よって、これらのモノマーは、各プレポリマーの化学的単位である。該プレポリマーの、及び結果として、該マルチブロックコポリマーの、所望の特性は、必要とされるＴ_ｍ又はＴ_ｇが得られるように、好適な組成及び分子量（特に、数平均分子量Ｍ_ｎ）のプレポリマーを選択することによって制御されることができる。

語「マルチブロック」は、本明細書において使用される場合、ポリマー鎖における少なくとも２つの別個のプレポリマーセグメントの存在を云うことが意味される。追加のプレポリマーセグメントは、任意的に存在しうる。

語「ブロック」及び「セグメント」は、本明細書において使用される場合、マルチブロックコポリマーにおける別個の領域を云うことが意味される。これらの語は、本明細書において互換的に使用される。

語「熱可塑性」は、本明細書において使用される場合、該マルチブロックコポリマーの非架橋性の性質を云うことが意味される。加熱すると、熱可塑性ポリマーは流体となり、一方、（再）冷却すると固形化する。熱可塑性ポリマーは、適切な溶剤中で可溶性である。

語「加水分解可能な」は、本明細書において使用される場合、水と反応した際に、化学結合が切断される能力を云うことが意味される。加水分解可能な基は、エステル、カーボネート、ホスファゼン、アミド、及びウレタン基を含む。生理条件下において、エステル、カーボネート及びホスファゼン基のみが、合理的な時間スケールで水と反応する。

語「多官能性鎖延長剤」は、本明細書において使用される場合、反応性プレポリマーを化学的に連結させ、それによってマルチブロックコポリマーを形成する、鎖延長剤上の少なくとも２つの反応性基の存在を云うことが意味される。

語「ランダムマルチブロックコポリマー」は、本明細書において使用される場合、該別個のセグメントが、該ポリマー鎖にわたってランダムに分布しているマルチブロックコポリマーを云うことが意味される。

語「水溶性ポリマー」は、本明細書において使用される場合、生理条件下で、水性媒体中、好ましくは水中で、良好な溶解度を有するポリマーを云うことが意味される。このポリマーは、より疎水性の高い部分と共重合されると、得られたコポリマーが水中で膨潤性となる。該水溶性ポリマーは、ジオール、ジアミン、又は二酸に由来することができる。該ジオール又は二酸は、環状モノマーの開環重合を開始する為に好適に使用される。

語「膨潤性」は、本明細書において使用される場合、ポリマーによる水の取り込みを云うことが意味される。膨潤比は、水で膨潤したコポリマーの質量を乾燥コポリマーの質量で割ることにより計算されることができる。

語「半結晶性」は、本明細書において使用される場合、二つの異なる相、すなわち非晶質相及び結晶相、を含む、該マルチブロックコポリマーのモルホロジーを云うことが意味される。好ましくは、該マルチブロックコポリマーは、非晶質相と結晶相とから構成されている。

Ａ１．抗体
語「抗体」は、本明細書において使用される場合、典型的に、２つの同一のポリペプチド鎖の対から構成され、各鎖の対が、１つの「重」鎖と１つの「軽」鎖からなる、免疫グロブリン分子を云う。ヒト軽鎖は、カッパ及びラムダに分類される。該重鎖は、様々な分類、すなわちミュー、デルタ、ガンマ、アルファ又はイプシロン、を含む。これらの分類は、該抗体のアイソタイプ、例えばそれぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥ、を定義する。これらの分類は、該抗体の機能に関して重要であり、免疫応答を調節する助けとなる。該重鎖と該軽鎖の両方は、可変領域及び定常領域からなる。該重鎖の該定常領域は、該軽鎖の該定常領域より明らかに大きく、該重鎖及び該軽鎖の命名について説明する。各重鎖可変領域(heavy chain variable region)（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（light chain variable region）（ＶＬ）は、相補性決定領域（complementary determining regions）（ＣＤＲ）が散在したフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。該可変領域は、全部で４つのＦＲと３つのＣＤＲとで構成される。これらは、以下のように、アミノ末端からカルボキシル末端へと配列される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４。該軽鎖及び該重鎖の該可変領域は、該抗体の結合部位を一緒に形成し、エピトープに対する特異性を規定する。

語「抗体」は、本明細書において使用される場合、マウス抗体、ヒト化された抗体、脱免疫化されたヒト抗体及びキメラ抗体、並びに多量体形態の抗体、例えば、単量体抗体の二量体、三量体、又はより高次の多量体、である抗体を包含する。抗体はまた、単特異性抗体、二重特異性抗体又は多重特異性抗体、及び必要とされる特異性の抗原認識部位を含む該免疫グロブリン分子の任意の他の改変された立体配置をまた包含する。抗体という語は、非抗体部分に連結又は結合されている抗体を包含する。さらに、語「抗体」は、該抗体を生成する、いずれの特定の方法によっても限定されない。例えば、それは、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、組換え抗体及びポリクローナル抗体を含む。

本明細書において使用される場合、抗原結合性フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）_２、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、及び二価の一本鎖抗体を含む。幾つかの事例において、語「抗体」は、本明細書において使用される場合、その抗原結合性フラグメントをまた含むことが意味される。従って、語「抗体」が本明細書で使用される時はいつでも、それは、「抗体の抗原結合性フラグメント」によって置き換えられうる。特に、抗原結合性フラグメントは、少なくとも２つの対合されたドメイン（at least two paired domains）を含むようなフラグメントを包含する。

本明細書に開示されている抗体は、分子、例えば、以下に限定されないが、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ヒト血清アルブミン、グリコシル化基、脂肪酸及びデキストラン、のイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）半減期を増加させる為の部分をさらに含みうる。このようなさらなる部分は、当技術分野で周知の方法を使用して、該抗体とコンジュゲートされうるか、又はそうでなければ、それと組み合わされうる。幾つかの実施態様において、本明細書に開示されている抗体は、活性化合物、例えば毒素、にカップリングされることができる。さらに、開示されている抗体又は抗原結合性フラグメントは、標識、例えば蛍光タンパク質、化学標識、有機色素、着色された粒子又は酵素、にカップリングされうる。本明細書に開示されている抗体は、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成する為に、薬物にカップリングされることができる。

好ましくは、本明細書に開示されている抗体はヒト化された抗体である。語「ヒト化された抗体」は、非ヒト動物の抗体由来のＣＤＲの幾つか又は全てを含有する抗体を云うが、該抗体のフレームワーク領域及び定常領域は、ヒト抗体配列に由来するアミノ酸残基を含有する。ヒト化された抗体は、典型的に、マウス抗体由来のＣＤＲをヒトフレームワーク配列中にグラフトさせ、その後、供給源の抗体由来の、対応するマウスの残基をある特定のヒトフレームワークの残基で復帰置換（ｂａｃｋ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）することによって、生成される。語「脱免疫化された抗体」はまた、典型的に、１以上の可変領域において、免疫原性を低下させる為に、ヒトのＴ細胞及び／又はＢ細胞のエピトープを構成する強い傾向を有する、１以上のエピトープが除去された、非ヒト起源の抗体を云う。該エピトープのアミノ酸配列は、完全に又は部分的に除去されることができる。しかしながら、典型的に、該アミノ酸配列は、１以上の他のアミノ酸を、該エピトープを構成するアミノ酸のうちの１以上で置換し、それによって、該アミノ酸配列を、ヒトのＴ細胞及び／又はＢ細胞のエピトープを構成しない配列へと変化させることによって、変更される。該アミノ酸は、場合によって、対応するヒトの可変重鎖又は可変軽鎖における対応する１以上の位置に存在するアミノ酸によって置換される。

幾つかの実施態様において、本明細書に開示されている抗体は、ヒト抗体である。語「ヒト抗体」は、ヒトの免疫グロブリン配列のアミノ酸配列のみからなる抗体を云う。ヒト抗体は、当技術分野において既知の種々の方法で調製されうる。

幾つかの実施態様において、該抗体は、単離された抗体である。語「単離された」は、本明細書において使用される場合、自然では通常伴っている構成成分を、実質的又は本質的に含まない物質を云う。

本明細書に開示されている抗体は、当業者に既知の任意の方法によって生成されることができる。幾つかの実施態様において、抗体は、動物を免疫化し、ポリクローナル抗体を採取するか、又は標準的なハイブリドーマ技術を使用することによって、調製されうる（Kohler et al.，Nature 1975，256(5517)，495-497）。抗体はまた、組換え技術を使用して、例えば宿主細胞を、例えばそれぞれの重鎖及び軽鎖を発現する核酸でトランスフェクトすることによって、調製されうる。好適な細胞系は、当業者にとって既知であり、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ＮＳ０細胞又はＰＥＲ－Ｃ６細胞を含む。トランスフェクトされた細胞は培養され、抗体は培養培地から回収される。該抗体は該培地から精製されうるが、好ましくは、上記抗体は親和性精製される。代替的には、上記抗体は、合成によって生成されることができる。二重特異性抗体を調製する為の方法がまた、当技術分野において既知である（例えば、国際公開第２０１３／１５７９５４号パンフレットを参照）。

該抗体は好ましくは、約７０ｋＤａ以上、例えば、約７５ｋＤａ以上、約８０ｋＤａ以上、約８５ｋＤａ以上、約９０ｋＤａ以上、又は約１００ｋＤａ以上、の分子量を有する。典型的に、該抗体又はその抗原結合性フラグメントは、約２００ｋＤａ以下、例えば、約１９０ｋＤａ以下、約１８０ｋＤａ以下、約１７０ｋＤａ以下、約１６０ｋＤａ以下、又は約１５０ｋＤａ以下、の分子量を有することができる。

Ａ２．巨大タンパク質
本明細書において使用される場合、巨大タンパク質は、約７０ｋＤａ以上、例えば、約７５ｋＤａ以上、約８０ｋＤａ以上、約８５ｋＤａ以上、約９０ｋＤａ以上、又は約１００ｋＤａ以上、の分子量を有するタンパク質を云う。典型的に、該巨大タンパク質は、約２００ｋＤａ以下、例えば、約１９０ｋＤａ以下、約１８０ｋＤａ以下、約１７０ｋＤａ以下、約１６０ｋＤａ以下、又は約１５０ｋＤａ以下、の分子量を有することができる。好ましくは、該巨大タンパク質は、治療的に活性である。

本発明の剤形物において用いられうる巨大タンパク質の幾つかの例は、Ｆｃ－融合タンパク質、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、全長免疫グロブリン、凝固因子、成長因子、ホルモン、サイトカイン、酵素等、を包含する。

Ｂ．コポリマーマイクロスフェア
本明細書において使用される場合、語「マイクロスフェア」は、薬物送達の為に、１以上の治療剤をロードされうる、直径約９９９μｍ以下の、球状又はスフェロイド粒子を云う。この開示の文脈において、マイクロスフェアは、典型的に、１μｍ以上の直径を有する。マイクロスフェアは、典型的に、約１００μｍ以下の直径を有することができる。それにもかかわらず、幾つかの場合において、該マイクロスフェアは、約１００μｍ以上、例えば、約２００μｍ以上、約３００μｍ以上、又はさらに最大約５００μｍ、の直径を有することができる（例えば、足場を構築する為の組織工学用途の為のマイクロ粒子）。

本開示の観点は、コポリマーによって形成されるマイクロスフェアに関する。幾つかの実施態様において、これらのコポリマーは、以下の特徴のうちの１以上を有するコポリマー又はその一部に基づいて選択されうる：（ｉ）該ポリマーは、該抗体若しくはタンパク質が組み込まれることができる、マトリックスを形成する、（ｉｉ）該ポリマーは、それが保存される及び／若しくは該マイクロスフェアが投与される環境から該抗体若しくはタンパク質を保護する（例えば、温度安定性）、（ｉｉｉ）該ポリマーは、親水性である、（ｉｖ）該ポリマーは、該抗体若しくはタンパク質の拡散を可能にする、（ｖ）該ポリマーは、該抗体若しくはタンパク質の流体力学半径を収容することになる、（ｖｉ）該ポリマーは生分解性である、並びに／又は（ｖｉｉ）該ポリマーは、該抗体若しくはタンパク質の純度に影響を及ぼすことなく分解する。

該マイクロスフェアは、約２４時間以内に、該マイクロスフェアの総重量に対して、その中に含有される該抗体又はタンパク質の約３％未満～約４０％を放出しうる。

本明細書に記載されているポリマーを利用する、安定な延長放出製剤が作製されることができるのは驚くべきことであり、これは、巨大治療用タンパク質、特に抗体、が、（ｉ）抗体若しくは巨大治療用タンパク質に関する延長放出製剤の生成中に使用される、厳しい条件（例えば、剪断力、油水界面、ｐＨ変化、等）の結果として、（ｉｉ）高められた温度、例えば延長放出インプラントの加熱溶融押出中に使用される高められた温度若しくは体温で、又は（ｉｉｉ）ｐＨ変化、例えば該ポリマーの加水分解の結果として形成される、酸性分解産物によって引き起こされるｐＨ変化に応答して、分解することが既知である為である。よって、本発明に先立って、本明細書に記載されているポリマーを含む、生分解性の延長放出製剤の使用により、抗体又は巨大タンパク質の、長期に及ぶ延長イン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）放出を実現することは不可能であると考えられていた。本発明は、本明細書に記載されている生分解性ポリマーが、抗体又は巨大治療用タンパク質の、安定な延長放出製剤を形成する為に使用されることができ、ここで、該抗体又はタンパク質の構造的一体性及び生物活性が、該延長放出製剤の製造及び保存中に維持され、且つここで、該抗体又はタンパク質が、体内への投与後に、該延長放出製剤から、イン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）で、構造上無傷で、適切にフォールディングされ、且つ生物学的に活性なまま放出される、という驚くべき発見について詳述する。

抗体又は巨大治療用タンパク質を含むマイクロスフェアは、溶媒蒸留及び噴霧乾燥技法を含むがこれらに限定されない、当業者にとって既知の技法によって調製されうる。幾つかの実施態様において、該マイクロスフェアは、約０．１～約１．０、例えば、これらに限定されないが、約０．５～約１．０、約０．５５～約１．０、約０．６～約１．０、約０．６５～約１．０、約０．７～約１．０、約０．７５～約１．０、約０．８～約１．０、約０．８５～約１．０、約０．９～約１．０、又は約０．９５～約１．０の、水とポリマーとの比で形成される。幾つかの実施態様において、該マイクロスフェアの該水とポリマーとの比は、約０．５、約０．５５、約０．６、約０．６５、約０．７、約０．７５、約０．８、約０．８５、約０．９、約０．９５、又は約１．０である。これらの水とポリマーとの比は、該マイクロスフェアを形成する為に使用される、該抗体若しくはタンパク質及び／又は該ポリマーの濃度に基づいて、特定の放出プロファイルを実現する為に調整されうる（Bos et al.，Pharmaceutical Technology，October 2001，110-120）。

幾つかの実施態様において、該マイクロスフェアは、少なくとも約１μｍ、少なくとも約２μｍ、少なくとも約５μｍ、少なくとも約１０μｍ、少なくとも約２０μｍ、少なくとも約３０μｍ、少なくとも約４０μｍ、少なくとも約５０μｍ、最大約５０μｍ、最大約６０μｍ、最大約７０μｍ、最大約８０μｍ、最大約９０μｍ、最大約１００μｍ、最大約１５０μｍ、最大約２００μｍ、最大約３００μｍ、又は最大約５００μｍの直径を有する。幾つかの実施態様において、該マイクロスフェアは、約１５μｍ～約２００μｍ、約２０μｍ～約１５０μｍ、約２５μｍ～約１００μｍ、約３０μｍ～約８０μｍ、又は約４０μｍ～約１００μｍの直径を有する。

幾つかの実施態様において、ロードされたマイクロスフェアの調製の為に使用される、抗体又はタンパク質の水性溶液の濃度は、約１００ｍｇ／ｍｌ以上、約１２５ｍｇ／ｍｌ以上、約１５０ｍｇ／ｍｌ以上、約１７５ｍｇ／ｍｌ以上、約２００ｍｇ／ｍｌ以上、約２２５ｍｇ／ｍｌ以上、又は約２５０ｍｇ／ｍｌ以上である。ロードされたマイクロスフェアの該調製の為に使用される、抗体又はタンパク質の該水性溶液の濃度は、約５００ｍｇ／ｍｌ以下、約４５０ｍｇ／ｍｌ以下、約４００ｍｇ／ｍｌ以下、約３５０ｍｇ／ｍｌ以下、又は約３００ｍｇ／ｍｌ以下でありうる。

該マイクロスフェアは、該抗体又はタンパク質が、該ポリマーマトリックスの全体にわたって分散されている、均一又はモノリシックのマイクロスフェアでありうる。該マイクロスフェアが、該抗体又はタンパク質が、単核又は多核状態で、ポリマーによって囲まれている、リザーバー型のものであることがまた可能である。

該マイクロスフェアは、コアセルベーション、溶媒抽出／蒸留、噴霧乾燥及び噴霧凍結乾燥技法を含むがこれらに限定されない、当業者にとって既知の技法によって調製されることができる。例えば、該マイクロスフェアは、該マルチブロックコポリマーを有機溶媒、例えばジクロロメタン、中に溶解させることと、該マルチブロックコポリマー溶液を乳化剤、例えばポリビニルアルコール、を含有する水性相中で乳化させることとを含む、溶媒抽出／蒸留によって調製されることができる（とりわけ、Okada，Adv．Drug Del．Rev．1997，28(1)，43-70に記載されている）。

このようにして形成されたマイクロスフェアの特徴、例えば、粒子サイズ、多孔性及びローディング、は、パラメーター、例えば水性ポリビニルアルコール相の粘度又は濃度、該マルチブロックコポリマー溶液の濃度、一次エマルションとポリビニルアルコール相との比及び撹拌速度、に応じて変わる。

該マイクロスフェアが噴霧乾燥プロセスによって形成される場合、該有機溶媒、例えばジクロロメタン、中で、該溶液の総重量により約０．５％～約５％、一つの実施態様において、約２％の、低濃度のマルチブロックコポリマーが用いられる。噴霧乾燥は一般的に、多孔性の、不規則な形状の粒子の形成をもたらす。

該マイクロスフェアが形成されているところに、抗体又は巨大治療用タンパク質は、該マイクロスフェア又はマイクロ粒子中にカプセル化される。一般的に、該溶媒抽出／蒸留技法が用いられる場合、該抗体又はタンパク質は、有機溶媒、例えばジクロロメタン又は酢酸エチル、中の該マルチブロックコポリマーの溶液中に、最初に溶解される。次いでその後に、該有機溶液は、水性ポリビニルアルコール溶液中で、乳化され、水中油（Ｏ／Ｗ）エマルションをもたらす。次いで、該有機溶媒は、水性相中に抽出され、蒸留されて、該マイクロスフェアを固体化させる。

一般的に、該溶媒蒸留技法が用いられる場合、該抗体又はタンパク質の水性溶液は、有機溶媒、例えばジクロロメタン中の該マルチブロックコポリマーの溶液中で、最初に乳化される。次いでその後に、この一次エマルションは、水性ポリビニルアルコール溶液中で乳化され、水中油中水（Ｗ／Ｏ／Ｗ）エマルションをもたらす。次いで、該有機溶媒、例えばジクロロメタン又は酢酸エチル、は、該Ｏ／Ｗプロセスの経路と同様にして抽出され、該マイクロスフェアを固体化させる。代替的には、水溶性剤は、有機溶媒中の該マルチブロックコポリマーの溶液中に直接分散されうる。次いでその後に、得られた分散液は、界面活性剤、例えばポリビニルアルコールを含む水性溶液中で乳化され、水中油中固体（Ｓ／Ｏ／Ｗ）エマルションをもたらす。次いで、該有機溶媒は、該Ｏ／Ｗプロセスの経路と同様にして抽出され、該マイクロスフェアを固体化させる。

油中油中水（Ｗ／Ｏ／Ｏ）又は油中油中固体（Ｓ／Ｏ／Ｏ）の乳化経路は、十分なカプセル化効率を有するマイクロスフェアを得る為の興味深い代替案を提供する。該Ｗ／Ｏ／Ｏプロセスにおいて、該抗体又はタンパク質は、Ｗ／Ｏ／Ｗプロセスと同様に、水性溶液中に溶解され、有機溶媒、例えばジクロロメタン又は酢酸エチル、中で、該ポリマーの溶液により乳化される。次に、ポリマー沈殿剤、例えばシリコンオイル（silicon oil）、が、次いで、撹拌下でゆっくりと添加され、初期段階のマイクロ粒子を形成し、次いでこれが、ヘプタン又はヘキサン中に注がれ、シリコーンオイル（silicone oil）及び有機溶媒を抽出し、該マイクロ粒子を固体化させる。該マイクロ粒子は、真空濾過によって採取され、追加の溶媒で濯がれ、真空下で乾燥されうる。該Ｓ／Ｏ／Ｏ乳化経路において、該抗体又はタンパク質は、Ｓ／Ｏ／Ｗプロセスと同様に、有機溶媒、例えばジクロロメタン又は酢酸エチル、中の該ポリマーの溶液中に、固体粉末として分散される。次に、ポリマー沈殿剤、例えばシリコンオイル（silicon oil）、は、次いで、撹拌下でゆっくりと添加され、初期段階のマイクロ粒子を形成し、次いでこれが、ヘプタン又はヘキサン中に注がれ、シリコーンオイル（silicone oil）及びジクロロメタンを抽出し、該マイクロ粒子を固体化させる。

安定剤が、該抗体又はその抗原結合性フラグメントの水性溶液に添加され、マイクロスフェア中への処理中の活性の損失を防ぎうる。このような安定剤の例は、ポリビニルアルコール、Ｔｗｅｅｎ（商標）／ポリソルベート、ヒト血清アルブミン、ゼラチン及び炭水化物、例えば、トレハロース、イヌリン及びスクロース、である。

該噴霧乾燥技法が用いられる場合、該抗体又はその抗原結合性フラグメントの水性溶液は、上記に記載されたように、有機溶媒、例えばジクロロメタン、中の該コポリマーの溶液中で乳化される。次いで、該油中水エマルションは、噴霧乾燥機を使用して噴霧乾燥される。

Ｃ．マルチブロックコポリマー
該コポリマーは、ブロックコポリマーであり、任意的に、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）及び１以上の他のポリマーを含むか、代替的には、それらからなりうる。

本発明の延長された放出の為の該剤形物において利用されることができる、例示的なポリマーは、Ｉｎｎｏｃｏｒｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって製造されたＳｙｎＢｉｏｓｙｓ（商標）ポリマーを含む。ＩｎｎｏＣｏｒｅのＳｙｎＢｉｏｓｙｓ（商標）技術は、薬物送達系として機能するように特異的に設計されている、生体吸収性ポリマーのプラットフォームをもたらす。これらのポリマーは、Ｄ，Ｌ－ラクチド、Ｌ－ラクチド、グリコリド、ε－カプロラクトン、ｐ－ジオキサノン及び／又はポリ（エチレングリコール）から構成され、これらのモノマーは、生体用インプラント、医薬送達製品及びヒトにおける使用が認可された組み合わせ製品を含む、幾つかの製品において使用される。ＳｙｎＢｉｏｓｙｓ（商標）ポリマーは、国際公開第２０１３／０１５６８５号パンフレットに記載されており、その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。本発明の延長された放出の為の剤形物において利用されることができる、さらなる例示的ポリマーは、参照により本明細書にも完全に組み込まれる、早期に公開されていない（ｎｏｎ－ｐｒｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄ）欧州特許出願公開第１９２００８７９．５号明細書に記載されている、マルチブロックコポリマーを含む。

生理的条件下での（すなわち、体内での）形態及び特性は、周囲条件（乾燥、室温）下での形態及び特性とは異なりうる。遷移温度、Ｔ_ｇ及びＴ_ｍは、本明細書において使用される場合、イン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）で適用される場合に；すなわち、水蒸気で飽和されている雰囲気と平衡、且つ体温である場合に、物質の対応する値を云う。これは、該物質を、水で飽和された雰囲気と平衡にさせた後、ＤＳＣ測定を実施することによって、イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）でシミュレーションされうる。

ポリマーマトリックスの特徴、例えば、制御放出の速度、分解、膨潤及び強度、は、２つのコポリマーセグメントの適切な組み合わせによって正確に制御されることができる。

本明細書に記載されているマルチブロックコポリマーは一般的に、直鎖状である。しかしながら、分岐状形態の該コポリマーを調製することがまた可能である。これらの非直鎖状コポリマーは、３つ以上の官能基を有する多官能性鎖延長剤、例えば三官能鎖延長剤、例えばトリイソシアネート、を使用することによって得られうる。分岐状コポリマーは、改善されたクリープ特性を示しうる。

本発明において使用されるマルチブロックコポリマーは、（軟質）プレポリマー（Ａ）ブロック及び（硬質）プレポリマー（Ｂ）ブロックを有する。該プレポリマー（Ｂ）ブロックは、ポリ（ラクチド）又はポリ（ｐ－ジオキサノン）をベースとされうる。ここで、これらについては、以下で別々に議論される。

該マルチブロックコポリマーの形態は、環境条件に依存している：ＤＳＣ（示差走査熱量測定）測定は、不活性（乾燥）条件下で実施され得、結果は、乾燥物質の熱特性を決定する為に使用されうる。しかしながら、生理的条件下での（すなわち、体内での）形態及び特性は、周囲条件（乾燥、室温）下での形態及び特性とは異なりうる。遷移温度、Ｔ_ｇ及びＴ_ｍは、本明細書において使用される場合、イン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）で適用される場合に；すなわち、水蒸気で飽和されている雰囲気と平衡、且つ体温である場合に、物質の対応する値を云うことが、理解されるべきである。これは、該物質を、水で飽和された雰囲気と平衡にさせた後、該ＤＳＣ測定を実施することによって、イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）でシミュレーションされうる。

該マルチブロックコポリマーの物理化学特性（例えば、分解、膨潤及び熱特性）は、軟質プレポリマー（Ａ）セグメントと硬質プレポリマー（Ｂ）セグメントのモノマーの種類及びそれらの鎖長及び鎖の比率を変更することによって、並びに鎖延長剤の種類及び量を選択することによって、容易に調整されることができる。

該生分解性マルチブロックコポリマーは、少なくとも１つの非晶質の加水分解性プレポリマー（Ａ）セグメント及び少なくとも１つの半結晶性の加水分解性プレポリマー（Ｂ）セグメントを含む、生分解性の、相分離した、熱可塑性の、マルチブロックコポリマーを含み、ここで、
生理的条件下での上記マルチブロックコポリマーは、約３７℃以下のＴ_ｇ及び約５０℃～約１１０℃のＴ_ｍを有し；
該セグメントは、多官能性鎖延長剤によって連結されており；
該セグメントは、ポリマー鎖にわたってランダムに分布しており；且つ
該プレポリマー（Ｂ）セグメントは、Ｘ－Ｙ－Ｘトリブロックコポリマーを含み、ここで、Ｙが重合開始剤であり、Ｘが、約７個以上のｐ－ジオキサノンモノマー単位で表されるブロック長を有するポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントである。

本発明者等は、結晶性ポリ（ｐ－ジオキサノン）ビルディングブロックを有する、これらのマルチブロックコポリマーが、結晶性ポリ（ラクチド）ビルディングブロックを有する、上記マルチブロックコポリマーと比較した場合、驚くべきことに、イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）でより迅速な分解プロファイルを示す剤形物をもたらすことを見出した。結晶性ポリ（ラクチド）ビルディングブロックを有するマルチブロックコポリマーは、約３～４年の分解時間を有する。徐放性薬物送達製剤の大多数の為に、このような分解時間は、これが、繰り返し注射された際にポリマーの蓄積をもたらし得、潜在的に長期耐性の問題を引き起こす可能性がある為、望ましくなく長い。他方において、結晶性ポリ（ｐ－ジオキサノン）ビルディングブロックを有する該マルチブロックコポリマーは、放出の持続期間に応じて、およそ０．５～１．５年の、イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での低減された分解時間を示す。同時に、該マルチブロックコポリマーの分解産物は、該抗体又はタンパク質の分解をもたらさないか、又はほとんどもたらさない。従って、これらの生物活性化合物及びこれらの機能性は、無傷のままである（又は主に無傷のままである）。

該マルチブロックコポリマーは、生理的条件下で、約３７℃以下のＴ_ｇを有する。これは、生理的条件下で、約３７℃以下のＴ_ｇを有するプレポリマー（Ａ）を使用することによって実現されうる。プレポリマー（Ａ）は、生理的条件下で、約３０℃以下のＴ_ｇ、例えば、約２５℃以下、約１５℃以下、又は約５℃以下、のＴ_ｇ、を有することができる。

該プレポリマー（Ａ）セグメントは、プレポリマー（Ａ）に由来する。プレポリマー（Ａ）は、典型的に、生理（身体）条件で、完全に非晶質である。

プレポリマー（Ａ）は、例えば、開環重合によって調製されうる。よって、プレポリマー（Ａ）は、ジオール又は二酸化合物によって開始される、開環重合によって調製される、加水分解性コポリマーでありうる。該ジオール化合物は、脂肪族ジオール又は低分子量ポリエーテル、例えばポリ（エチレングリコール）、であることができる。該ポリエーテルは、それを開始剤として使用することによって、該プレポリマー（Ａ）の一部であり、さらに、これは、プレポリマー（Ａ）と混合され、よって、追加の親水性セグメントを形成することができる。プレポリマー（Ａ）は、ジオール、ジカルボン酸、及びヒドロキシカルボン酸から選択される、エステルを形成するモノマーの反応産物を含むことができる。プレポリマー（Ａ）は、環状モノマー及び／又は非環状モノマーの反応産物を含むことができる。例示的な環状モノマーは、グリコリド、Ｌ－ラクチド、Ｄ－ラクチド、Ｄ，Ｌ－ラクチド、ε－カプロラクトン、δ－バレロラクトン、トリメチレンカーボネート、テトラメチレンカーボネート、１，５－ジオキセパン－２－オン、１，４－ジオキサン－２－オン（ｐ－ジオキサノン）及び／又は環状無水物、例えばオキセパン－２，７－ジオン、を含む。一つの実施態様において、ε－カプロラクトンが使用される。

プレポリマー（Ａ）がポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド）を含む場合、該ラクチドのＬ／Ｄ比は、１から離れうる（５０／５０以外でありうる）。例えば、８５／１５～１５／８５のＬ／Ｄ比は、完全に非晶質のホモポリマーを与える。さらに、一方の異性体（Ｌ又はＤ）が他方に対して過剰であれば、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド）のＴ_ｇを増加させることが既知である。

さらに、プレポリマー（Ａ）は、エステル及び／又は無水物の加水分解性部分を形成する、モノマー、例えばヒドロキシ酸（例えば、乳酸、グリコール酸、ヒドロキシ酪酸）、二酸（例えば、グルタル酸、アジピン酸、コハク酸又はセバシン酸）及びジオール、例えばエチレングリコール、ジエチレングリコール、１，４－ブタンジオール又は１，６－ヘキサンジオール、の縮合（非環状）型をベースとする（それらの混合物である）ことができる。

該プレポリマー（Ａ）セグメントの少なくとも一部、例えばプレポリマー（Ａ）の総重量の約３０％以上、約４０％～約９５％、約５０％～約９０％、又は約６０％～約８５％、が、水溶性ポリマーに由来することができる。

この水溶性ポリマーは、例えば、ポリエーテル、例えば、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリ（テトラメチレンオキシド）（ＰＴＭＯ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）、ポリ（ビニルカプロラクタム）、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）（ポリ－（ＨＥＭＡ））、ポリ（ホスファゼン）、ポリ（オルトエステル）、ポリ（オルトエステルアミド）、又はこれらのポリマーのうちのいずれかのコポリマー、からなる群から選択される１以上を含みうる。好ましくは、該水溶性ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（テトラメチレンオキシド）、ポリ（プロピレングリコール）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、及びポリ（ビニルカプロラクタム）の群から選択される１以上を含む。より好ましくは、該水溶性ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）を含む、又はポリ（エチレングリコール）である。

好適なプレポリマー（Ａ）セグメントの幾つかの非限定的な例は、ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ＰＥＧ－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド）－ｃｏ－ＰＥＧ－ｃｏ－ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド）、ポリ（グリコリド）－ｃｏ－ＰＥＧ－ｃｏ－ポリ（グリコリド）、及びポリ（ｐ－ジオキサノン）－ｃｏ－ＰＥＧ－ｃｏ－ポリ（ｐ－ジオキサノン）を包含する。

さらに、該プレポリマー（Ａ）セグメントは、該水溶性ポリマーの両側に、上述のモノマーの、いずれかのコポリマーを含む。このようなプレポリマー（Ａ）セグメントの、幾つかの非限定的な例は、［ポリ（ε－カプロラクトン－ｃｏ－Ｄ，Ｌ－ラクチド）］－ｃｏ－ＰＥＧ－ｃｏ－［ポリ（ε－カプロラクトン－ｃｏ－Ｄ，Ｌ－ラクチド）］、［ポリ（ε－カプロラクトン－ｃｏ－グリコリド）］－ｃｏ－ＰＥＧ－ｃｏ－［ポリ（ε－カプロラクトン－ｃｏ－グリコリド）］、［ポリ（ε－カプロラクトン－ｃｏ－ｐ－ジオキサノン）］－ｃｏ－ＰＥＧ－ｃｏ－［ポリ（ε－カプロラクトン－ｃｏ－ｐ－ジオキサノン）］、［ポリ Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）］－ｃｏ－ＰＥＧ－ｃｏ－［ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）］、［ポリ Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－ｐ－ジオキサノン）］－ｃｏ－ＰＥＧ－ｃｏ－［ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－ｐ－ジオキサノン）］、及び［ポリ（グリコリド－ｃｏ－ｐ－ジオキサノン）］－ｃｏ－ＰＥＧ－ｃｏ－［ポリ（グリコリド－ｃｏ－ｐ－ジオキサノン）］を包含する。

プレポリマー（Ａ）は、ｐ－ジオキサノンをさらに含むことができる。該プレポリマー（Ａ）セグメントにおけるｐ－ジオキサノンモノマーのこのような導入は、該マルチブロックコポリマーにおけるさらなる結晶性を導入することができる。プレポリマー（Ａ）におけるこのようなｐ－ジオキサノンモノマーの含量は、プレポリマー（Ａ）の総重量の約８０％以下、例えば、約６０％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、約１０％以下、又は約５％以下、であることができる。プレポリマー（Ａ）におけるｐ－ジオキサノンモノマーの含量は、プレポリマー（Ａ）の総重量の約０．１％以上、例えば、約１％以上、又は約２％以上、であることができる。

該プレポリマー（Ａ）セグメントは、約５００ｇ／モル以上、例えば、約１０００ｇ／モル以上、約１５００ｇ／モル以上、又は約２０００ｇ／モル以上、の数平均分子量Ｍ_ｎを有することができる。典型的に、該プレポリマー（Ａ）セグメントは、約１００００ｇ／モル以下、例えば、約９０００ｇ／モル以下、又は約８０００ｇ／モル以下、の数平均分子量Ｍ_ｎを有する。

該コポリマー中の該プレポリマー（Ａ）セグメントの含量は、該マルチブロックコポリマーの総重量に対して、約５％～約９５％、例えば、約１０％～約９０％、約３０％～約７５％、又は約５０％～約７０％、であることができる。

該マルチブロックコポリマーは、生理的条件下で、約５０℃～約１１０℃、例えば、約６０℃～約１１０℃、約６０℃～約１００℃、約７０℃～約１００℃、又は約７０℃～約９０℃の範囲内、のＴ_ｍを有する。これは、該プレポリマー（Ｂ）セグメントによるものである。プレポリマー（Ｂ）は、約６０℃～約１００℃の範囲内の、好ましくは約７５℃～約９５℃の範囲内の、Ｔ_ｍを有しうる。プレポリマー（Ｂ）は、約０℃以下、例えば、約－５℃以下、約－１０℃以下、約－１５℃以下、又は約－２０℃以下のＴ_ｇを有しうる。

該プレポリマー（Ｂ）セグメントは、上記プレポリマー（Ｂ）セグメントの総重量の約７０％以上のポリ（ｐ－ジオキサノン）を含む。該プレポリマー（Ｂ）セグメントは、該プレポリマー（Ｂ）セグメントの総重量に対して、約８０％以上、例えば、約８５％以上、約９０％以上、又は約９５％以上、のポリ（ｐ－ジオキサノン）を含むことができる。該プレポリマー（Ｂ）セグメントは、ポリ（ｐ－ジオキサノン）からなるプレポリマーをベースとする。該相分離した、マルチブロックコポリマーの非晶質の相は、主に、軟質プレポリマー（Ａ）セグメントからなる。

ポリ（ｐ－ジオキサノン）とは別に、該プレポリマー（Ｂ）セグメントは、さらなるモノマー単位、例えばε－カプロラクトン及び／又はδ－バレロラクトン、を含むことができる。

該プレポリマー（Ｂ）セグメントは、Ｘ－Ｙ－Ｘトリブロックコポリマーを含み、ここで、Ｙは重合開始剤であり、Ｘはポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントである。ｐ－ジオキサノンモノマー単位に関して表される該ポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントＸのブロック長は、約７以上である。好適には、該ポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントＸの該ブロック長は、約７～約３５、例えば、約８～約３０、約９～約２５、約１０～約２０、又は約１２～約１５、であることができる。

該プレポリマー（Ｂ）セグメントの該ブロック長が短すぎる場合、次いで、融解エンタルピーは比較的低く、ジクロロメタンの抽出中の、該ポリマーマトリックスの結晶化は、遅く且つ不完全となる。次に、これは、該マイクロスフェアの遅い且つ不十分な硬化をもたらし、それに起因して、これらは粘性となり、生成中に、該マイクロスフェアの凝集及び塗抹を引き起こし、非常に広い粒子サイズ分布及び／又は乏しい粉末流動性を有する、マイクロスフェア乾燥粉末をもたらす。さらに、プレポリマー（Ｂ）セグメントの小さいブロック長を原因とする、遅い且つ不完全な結晶化は、抽出プロセス中に、該マイクロスフェアからの、タンパク質及び／又は抗体若しくはその抗原結合性フラグメントの大幅な損失をもたらし、得られるマイクロスフェアにおける、タンパク質及び／又は抗体若しくはその抗原結合性フラグメントの、乏しいカプセル化及び低含量をもたらす。さらに、プレポリマー（Ｂ）セグメントの小さいブロック長を原因とする、遅い且つ不完全な結晶化は、保存中に、さらなる結晶化が起こることができる為、不安定な生成物を生じさせ、それによって、該生成物の臨界特性（例えば、放出速度）を変化させる。

よって、該結晶性プレポリマー（Ｂ）セグメントの最小長は、良好な生成物安定性と良好な加工性とを兼ね備えるマルチブロックコポリマーを得る際に重要な役割を果たす。適当なマイクロスフェアは、該プレポリマー（Ｂ）セグメントがＸ－Ｙ－Ｘトリブロックコポリマーを含み、ここで、短いポリ（ｐ－ジオキサノン）ブロックは、十分に結晶化しない及び／又は非常にゆっくり結晶化する為、Ｘが、該短いポリ（ｐ－ジオキサノン）ブロックから構成される、マルチブロックコポリマーを使用して作製されることができない。このような不完全に結晶化されたポリマーは、さらなる結晶化が起こりうる為、保存の際に不安定である。次に、これは、該ポリマーの臨界特性を変化させる。さらに、短いプレポリマー（Ｂ）セグメントは、粘性のポリマーを生じさせ、これらは、処理中の困難、例えば抽出／蒸発プロセス工程中の、マイクロスフェアの互いの凝集及び融合、である。

該Ｘ－Ｙ－Ｘトリブロックコポリマーにおける該重合開始剤Ｙは好適には、ジオール、例えば約２～約８個の炭素原子を有する脂肪族ジオール、であることができる。重合開始剤Ｙとして使用される好適な脂肪族ジオールの例は、エチレングリコール、１，２－プロパンジオール、１，３－プロパンジオール、１，４－ブタンジオール、１，３－ブタンジオール、２，３－ブタンジオール、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、ポリ（エチレングリコール）、１，５－ペンタンジオール、１，６－ヘキサンジオール、ネオペンチルグリコール、水素化されたビスフェノールＡ、及びグリセロールを包含する。好ましい重合開始剤は、エチレングリコール、１，２－プロパンジオール、１，３－プロパンジオール、１，４－ブタンジオール、１，３－ブタンジオール、２，３－ブタンジオール、１，５－ペンタンジオール、及び１，６－ヘキサンジオールを包含する。より好ましい重合開始剤は、エチレングリコール、１，４－ブタンジオール及び１，６－ヘキサンジオールを包含する。

該プレポリマー（Ｂ）セグメントは、約１３００ｇ／モル以上、例えば、約１５００ｇ／モル以上、約２０００ｇ／モル以上、約２２００ｇ／モル以上、又は約２５００ｇ／モル以上、の数平均分子量Ｍ_ｎを有しうる。該プレポリマー（Ｂ）セグメントの該数平均分子量Ｍ_ｎは、約７２００ｇ／モル以下、例えば、約５０００ｇ／モル以下、約４５００ｇ／モル以下、約４０００ｇ／モル以下、又は約３２００ｇ／モル以下でありうる。

該プレポリマー（Ｂ）セグメントは、約１８００ｇ／モル以上、例えば、約２１００ｇ／モル以上、約２６００ｇ／モル以上、又は約３０００ｇ／モル以上、の重量平均分子量Ｍ_ｗを有しうる。該プレポリマー（Ｂ）セグメントの該重量平均分子量Ｍ_ｗは、約１００８０ｇ／モル以下、例えば、約７０００ｇ／モル以下、約６３００ｇ／モル以下、約５６００ｇ／モル以下、又は約４２００ｇ／モル以下、でありうる。

該プレポリマー（Ｂ）セグメントは、約１．０以上、例えば、約１．１以上、約１．２以上、約１．３以上、又は約１．４以上、の分子量分布Ｍ_ｗ／Ｍ_ｎを有しうる。該プレポリマー（Ｂ）セグメントの該分子量分布は、典型的に、約３．０以下、例えば、約２．０以下、約１．８以下、約１．６以下、約１．５以下、又は約１．４以下、である。

プレポリマー（Ｂ）は、約１．１ｇ／ｃｍ^３以上、例えば、約１．１５ｇ／ｃｍ^３以上、又は約１．２ｇ／ｃｍ^３以上、の密度（ＡＳＴＭ Ｄ１５０５に従って測定される）を有することができる。プレポリマー（Ｂ）の該密度は、約１．５ｇ／ｃｍ^３以下、例えば、約１．４５ｇ／ｃｍ^３以下、又は約１．４ｇ／ｃｍ^３以下、であることができる。

該コポリマー中の該プレポリマー（Ｂ）セグメントの含量は、該マルチブロックコポリマーの総重量の約５％～約９５％、例えば、約１０％～約９０％、約２５％～約７０％、又は約３０％～約５０％、でありうる。このような含量は一般的に、適用の温度（すなわち、医学用途では約３７℃）で、良好な物理特性（例えば、膨潤）及び分解特性を有する、所望の物質をもたらす。

多官能性鎖延長剤は、二官能性脂肪族鎖延長剤（difunctional aliphatic chain extender）、好ましくはジイソシアネート、例えば１，４－ブタンジイソシアネート又は１．６－ヘキサンジイソシアネート、であることができる。鎖延長剤の種類及び量を選択することは、該ポリマー特性をカスタマイズする方法である。例えば、該鎖延長剤は、軟化剤として作用しうるか、又はこれは、相分離の度合に影響を及ぼしうる。

実施態様において、該生分解性マルチブロックコポリマーは、［ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ポリ（エチレングリコール）－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）］－ｂ－［ポリ（ｐ－ジオキサノン）］マルチブロックコポリマーである。

結晶性ポリ（ｐ－ジオキサノン）ビルディングブロックを有する該マルチブロックコポリマーはまた、［（Ｒ^１Ｒ^２ _ｎＲ^３）_ｑ］_ｒ［（Ｒ^４ _ｐＲ^５Ｒ^６ _ｐ）］_ｓによって表され得、ここで、Ｒ^１及びＲ^３は独立して、

及びそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択され、
Ｒ^２は、

であり、
Ｒ^４及びＲ^６はそれぞれ、

であり、
繰り返しＲ^２部分の数である、ｎは、約４～約１２０、好ましくは約１３～約７０、より好ましくは約２０～約４６、であり；
繰り返しＲ^４及びＲ^６部分の数である、ｐは、約７以上、好ましくは約７～約３５、より好ましくは約１０～約２０、さらにより好ましくは約１１～約１４、であり；
（Ｒ^１Ｒ^２ _ｎＲ^３）ブロックの数平均分子量である、ｑは、約４００ｇ／モル～約１００００ｇ／モル、好ましくは約１０００ｇ／モル～約６０００ｇ／モル、より好ましくは約１４００ｇ／モル～約４０００ｇ／モル、さらにより好ましくは約１６００ｇ／モル～約３０００ｇ／モル、最も好ましくは約１８００ｇ／モル～約２２００ｇ／モル、であり；
プレポリマー（Ａ）セグメント対プレポリマー（Ｂ）セグメントの比である、ｒ／ｓは、約０．１～約２．５である。

ある特定の観点において、
ｎは、約２０～約１１５、好ましくは約３５～約１００、より好ましくは約４５～約８５、であり；
ｐは、約７以上、好ましくは約７～約３５、より好ましくは約１０～約２０、さらにより好ましくは約１０～約１４、であり；
ｑは、約１０００ｇ／モル～約７０００ｇ／モル、好ましくは約３０００ｇ／モル～約５０００ｇ／モル、より好ましくは約３８００ｇ／モル～約４２００ｇ／モル；及び
ｒ／ｓは、約０．１０～約１．０、例えば、約０．１５～約０．５０、又は約０．２０～約０．３０である。

ＰＥＧポリマーが、結晶性ポリ（ｐ－ジオキサノン）ビルディングブロックを有する該マルチブロックコポリマー中に存在する場合、該ＰＥＧの長さは、約１０００ｇ／モル～約５０００ｇ／モルまで変化しうる。非限定的な例は、少なくとも約１０００ｇ／モル、少なくとも約１２００ｇ／モル、少なくとも約１４００ｇ／モル、少なくとも約１６００ｇ／モル、少なくとも約１８００ｇ／モル、少なくとも約２０００ｇ／モル、少なくとも約２２００ｇ／モル、少なくとも約２４００ｇ／モル、少なくとも約２６００ｇ／モル、少なくとも約２８００ｇ／モル、少なくとも約３０００ｇ／モル、少なくとも約３２００ｇ／モル、少なくとも約３４００ｇ／モル、少なくとも約３６００ｇ／モル、少なくとも約３８００ｇ／モル、最大約４０００ｇ／モル、最大約４２００ｇ／モル、最大約４４００ｇ／モル、最大約４６００ｇ／モル、最大約４８００ｇ／モル、又は最大約５０００ｇ／モル、のＰＥＧ長を含む。

Ｄ．製剤
本開示の観点は、複数のマイクロスフェアを含む製剤に関する。このような製剤は、本明細書に開示されているパラメーターのいずれか１つに従うマイクロスフェアの均一又は不均一の混合物から構成されうる。さらに、このような製剤は、医薬的に許容される賦形剤及び／又は処置される特定の効能に関連する、他の構成成分を任意的にさらに含みうる。

Ｅ．投与方法及び放出プロファイル
本明細書に開示されているマイクロスフェアの特徴は、抗体又はタンパク質の延長された放出を可能にする放出プロファイルである。幾つかの観点において、該マイクロスフェア又はマイクロスフェア製剤における該抗体又はタンパク質の１／７未満又は約１／７、例えば、１／１４未満若しくは約１／１４、１／２１未満若しくは約１／２１、１／２８未満若しくは約１／２８、１／２９未満若しくは約１／２９、１／３０未満若しくは約１／３０、１／３１未満若しくは約１／３１、１／３３未満若しくは約１／３３、１／３４未満若しくは約１／３４、１／３５未満若しくは約１／３５、１／４２未満若しくは約１／４２、１／４９未満若しくは約１／４９、１／５６未満若しくは約１／５６、１／５７未満若しくは約１／５７、１／５８未満若しくは約１／５８、１／５９未満若しくは約１／５９、１／６０未満若しくは約１／６０、１／６１未満若しくは約１／６１、又は１／６２未満若しくは約１／６２、は、投与後の最初の２４時間で放出される。幾つかの観点において、該マイクロスフェア又はマイクロスフェア製剤における該抗体又はタンパク質の約２％～約４０％、例えば、約３％、約３．５％、約４％、約４．５％、約５％、約５．５％、約６％、約６．５％、約７％、約７．５％、約８％、約８．５％、約９％、約９．５％、約１０％、約１０．５％、約１１％、約１１．５％、約１２％、約１２．５％、約１３％、約１３．５％、約１４％、約１４．５％、約１５％、約１５．５％、約１６％、約１６．５％、約１７％、約１７．５％、約１８％、約１８．５％、約１９％、約１９．５％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、若しくは約４０％、又はこれらの値のうちの２つを含む任意の範囲、例えば、約１８．５％～約２６％、は、該最初の２４時間で放出される。

いずれの理論にも拘束されることを望むものではないが、上記放出プロファイルが、特定された期間、例えば、以下に限定されないが、約１週間以上、約２週間以上、約３週間以上、約４週間以上、約５週間以上、約６週間以上、約７週間以上、約８週間以上、約１２週間以上、約１６週間以上、約２０週間以上、約２４週間以上、約２８週間以上、約１カ月以上、約２カ月以上、約３カ月以上、約４カ月以上、約５カ月以上、約６カ月以上の、抗体又はタンパク質の延長された放出を可能にすることが予想される。

これらのマイクロスフェアを含む該マイクロスフェア及び製剤が、以下に限定されないが、局所、非経口、経口、舌下、吸入による、鼻腔、注射による、皮内、経皮、筋肉内、皮下、硝子体内、関節内、動脈内、腫瘍内、ボーラス投与、点滴、及び／又は任意の他の好適な方法を含む、当技術分野において既知の任意の投与方式に従って、投与されうることが予想される。

局所投与の為に、該マイクロスフェアは、ゲル、クリーム又は軟膏内に含有されうるが、所望の場合、障壁によって被覆されうる。例えば、該マイクロスフェアは、ゲル、例えばヒアルロン酸ゲル又は高分子多糖類ゲル、中に含有されうる。

注射によって投与される場合、該マイクロスフェアは、薬学的担体、例えば、水、生理食塩水溶液（例えば、０．９％）、又は約０．１％～約０．５％ｗ／ｖの量で、界面活性剤を含有する溶液、中に含有されうる。用いられうる界面活性剤の例は、Ｔｗｅｅｎ８０界面活性剤である。該薬学的担体は、増粘剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、をさらに含有しうる。

ある特定の観点において、本開示は、最小限の又はバースト放出を用いる、徐放性プロファイルを実現する又はそれに近付ける、投与方法に関する。

本開示の観点は、治療上適切な血漿レベルの維持を可能にする投与のレジメンに関する。このようなレジメンは、約１週間ごと、約２週間ごと、約３週間ごと、約４週間ごと、約５週間ごと、約６週間ごと、約７週間ごと、約８週間ごと、約１２週間ごと、約１６週間ごと、約２０週間ごと、約２４週間ごと、約２８週間ごと、又は約１カ月ごと、約２カ月ごと、約３カ月ごと、約４カ月ごと、約５カ月ごと、約６カ月ごとに、抗体又はタンパク質の延長された放出の為の剤形物の投与を含む。

Ｆ．処置の方法
本明細書に開示される剤形物は、種々の疾患を処置する為に使用され、適当な周期性及び効能に基づく用量に従って、投与されうる。効能は、ヒト又は家畜のものでありうる。例示的な効能は、様々な癌、急性骨髄性白血病、非ホジキンリンパ腫、関節リウマチ、多発性硬化症、心血管疾患、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、アトピー性皮膚炎、移植拒絶、アルツハイマー病、炎症性疾患、ウイルス感染症、Ｃ型肝炎様感染症、エボラ又はＨＩＶ、剛直性脊髄炎、黄斑変性症、アレルギー性喘息、偏頭痛、血友病Ａ、高コレステロール血症、並びに腫瘍学、血液学、心臓学／血管疾患、皮膚学、内分泌学、消化器病学、遺伝病、免疫学、感染性疾患、筋骨格、腎臓学、眼科学、肺／呼吸器疾患、及びリウマチ学の為に指示される、抗体又は治療用タンパク質に関連する、幾つかのより多くの状態及び／又は任意の他の疾患若しくは状態を含む。これらの例は、ヒトが抗体又は治療用タンパク質を受容しうる疾患の列挙を与えることのみに意図される。このリストは、排他的リストではない。さらに、疾患のメカニズムが明らかにされ、新たな薬物が開発されている抗原が特定される為、さらなる標的抗原に対する、既存の及び新たな抗体及び治療用タンパク質に関する新たな効能が、開発されること及び見出されることが期待される。従って、ここで列挙されていない、これらの抗体又は治療用タンパク質は、ここで記載されているのと同じ方法で製剤化されることができる。

さらに、抗体又はタンパク質の投与に関して、当技術分野において開示されている方法とは異なり、本明細書に開示されている抗体又はタンパク質を含有するマイクロスフェア及び製剤は、３又は６カ月にわたる、従来の抗体の４５回の投与に対し、より回数の少ない投与、例えば、約１０回未満、約９回未満、約８回未満、約７回未満、約６回未満、約５回未満、約４回未満、若しくは約３回未満の投与、又は約１若しくは約２回の投与、しか必要としない。幾つかの実施態様において、記載された製剤は、１カ月より長い治療効果を提供する１回の注射の形態である。

Ｇ．一般的定義
本発明の説明及び添付の特許請求の範囲において使用されるように、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈がそうでないことを明確に示していなければ、複数形も同様に含むことが意図される。

語「約」は、本明細書において使用される場合、測定可能な値、例えば量又は濃度、等、を云う場合、指定された量の２０％、１０％、５％、１％、０．５％、又はさらには０．１％の変動を包含することが意味される。

本明細書に開示されている、いずれかの構成成分、範囲、剤形物、等の選択について説明する為に使用される場合、語、すなわち「許容される」、「有効な」、又は「十分な」は、上記構成成分、範囲、剤形物、等が、開示された目的に対して、好適であることを意図する。

また、本明細書において使用される場合、「及び／又は（ａｎｄ／ｏｒ）」は、関連する列挙された項目のうちの１以上のありとあらゆる可能な組み合わせ、及び択一的（「又は（ｏｒ）」）に解釈される場合には、組み合わせの欠如を言い、且つそれを包含する。

本明細書において使用される場合、語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、製剤及び方法が、列挙された要素を含むが、他を排除しないことを意味することが意図される。本明細書において使用される場合、移行句「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」（及び文法上の変形）は、列挙された物質又は工程「及び列挙された実施態様の基本的及び新規の１以上の特徴に物質的に影響を及ぼさないもの」を包含するものと解釈されるべきである。よって、語「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、本明細書において使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と同等であると解釈されるべきでない。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、微量元素以外の他の成分及び本明細書に開示されている製剤を投与する為の、実質的な方法の工程を除外することを意味することになる。これらの移行語のそれぞれによって定義される観点は、本開示の範囲内にある。

「製剤」は、活性剤と、不活性（例えば、検出可能な薬剤又は標識）又は活性な、別の化合物又は組成物、例えばアジュバント、との組み合わせを意味することが意図される。

「医薬製剤」は、活性剤の、イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）、イン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）又はｅｘ ｖｉｖｏにおける診断又は治療用途に好適な該製剤を作製する、不活性又は活性な、担体との組み合わせを含むことが意図される。

「医薬的に許容される担体」は、本発明の製剤において使用されうる、任意の希釈剤、賦形剤、又は担体を云う。医薬的に許容される担体は、イオン交換剤、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、塩類又は電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリ（エチレングリコール）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックポリマー、及び羊毛脂を含む。好適な薬学的担体は、この分野の参照基準テキストである、Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Companyに記載されている。これらは好ましくは、意図された投与形態、すなわち経口錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ剤、等に関して、及び従来の薬学の実践と一致して、選択される。

語「延長された放出」（extended release）は、特定された期間にわたり、成分を放出する能力を云う為に、本明細書において使用される。語「バースト放出」は、延長された期間にわたる継続放出が、維持されることができないような、環境への成分の急速放出期を云う。

本明細書において使用される場合、語「対象」又は「患者」は、任意の動物を意味する為に互換的に使用される。幾つかの実施態様において、該対象は哺乳動物でありうる；さらなる実施態様において、該対象は、ヒト、マウス、又はラットでありうる。

本明細書において使用される場合、対象における疾患の「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」又は「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、（１）症状若しくは疾患が、該疾患の素因を有するか、若しくは該疾患の症状を未だ示していない対象において生じることを防ぐこと；（２）疾患を阻害すること若しくはその発症を停止させること；又は（３）該疾患又は該疾患の症状を軽快すること若しくはそれを退縮させること、を云う。当技術分野において理解されているように、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、臨床結果を含む、有益な又は所望の結果を得る為のアプローチである。本発明の技術の目的として、有益な又は所望の結果は、以下に限定されないが、検出可能か検出不能かにかかわらず、１以上の症状の緩和又は軽快、状態（疾患を含む）の程度の減弱、状態（疾患を含む）の安定化した（すなわち、悪化していない）状況、状態（疾患を含む）の遅延又は減速、状態（疾患を含む）、状況及び寛解（部分的であるか全体的であるかにかかわらず）の進行、軽快又は軽減のうちの１以上を含むことができる。

別段に定義されていなければ、本明細書で使用される全ての語（技術用語及び科学用語を含む）は、この発明が属する、技術分野の当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。語、例えば通常使用される辞書において定義されるもの、は、本出願及び関連技術分野の文脈において、それらの意味と一致する意味を有するものと解釈されるべきであり、本明細書において明示的にそのように定義されていなければ、理想化された又は過度に形式的な意味で解釈されるべきでないことが、さらに理解されよう。例えば、記述子は、特定の器官の特徴を示す生物材料（例えば、組織、オルガノイド、試料）を云う為に使用されうる、例えば、肝臓由来の組織又は肝臓様オルガノイドを説明する為の「肝臓の（ｈｅｐａｔｉｃ）」の使用。以下に明示的に定義されていなければ、このような語は、それらの通常の意味に従って解釈されるべきである。

本明細書の説明において使用される用語は、特定の実施態様について説明することのみを目的とするものであって、本発明の限定であることを意図するものではない。本明細書において言及されている全ての刊行物、特許出願、特許及び他の参照文献は、参照によりその全体が組み込まれる。

本発明の技術の実践は、別段に示されていなければ、当技術分野の技術の範囲内にある、従来の技法を用いるものである。

文脈が別段に示していなければ、本明細書に記載されている本発明の様々な要件は、任意の組み合わせで使用されることができることが、具体的に意図されている。さらに、本開示は、幾つかの実施態様において、本明細書において示されている任意の構成要件又は構成要件の組み合わせが、除外又は省略されることができることも企図する。例示の為に、本明細書が、複合体が構成成分Ａ、Ｂ及びＣを含むことを記載している場合、Ａ、Ｂ若しくはＣのいずれか、又はその組み合わせは、単一で又は任意の組み合わせで省略及び放棄されることができることが、具体的に意図される。

全ての数字による表示、例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度、及び分子量、は、範囲を含み、適宜、１．０若しくは０．１の増分で、又は代替的には、＋／－１５％の変動で、又は代替的には、１０％、又は代替的には、５％、又は代替的には、２％、（＋）若しくは（－）で変化される、近似値である。常に明示的に記載されている訳ではないが、全ての数字による表示は、語「約」によって先行されていることが理解されるべきである。常に明示的に記載されている訳ではないが、本明細書に記載されている試薬は、単に例示的なものであり、このようなものの均等物が当技術分野において既知であることも理解されるべきである。

Ｖ．実施例
以下の実施例は、非限定的であり、本開示を実行する際の、様々な事例において使用されることができる、手順の例示である。さらに、本明細書に開示されている全ての参照文献は、参照によりその全体が本明細書内に組み込まれる。

実施例１ － ＳｙｎＢｉｏｓｙｓマルチブロックコポリマーの合成
この実施例は、ｍＡｂをロードされたマイクロスフェアの調製において使用される、［ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ポリ（エチレングリコール）－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）］－ｂ－［ポリ（Ｌ－ラクチド）］及び［ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ポリ（エチレングリコール）－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）］－ｂ－［ポリ（ｐ－ジオキサノン）］マルチブロックコポリマーの合成及び特徴付けについて記載する。

およそ４０００ｇ／モルの分子量（Ｍ_ｎ）を有する、ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ＰＥＧ３０００－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）プレポリマー（ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ又はＣＰ３０Ｃ４０と略される）及びおよそ２０００ｇ／モルのＭ_ｎを有する、ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ＰＥＧ１０００－ｃｏ－（ε－カプロラクトン）プレポリマー（ＰＣＬ－ＰＥＧ１０００－ＰＣＬ又はＣＰ１０Ｃ２０と略される）は、開始剤として、３０００ｇ／モル（ＰＥＧ３０００）又は１０００ｇ／モル（ＰＥＧ１０００）の分子量を有する、ポリ（エチレングリコール）及び触媒として、オクタン酸第一スズ、を使用する、ε－カプロラクトンの開環重合によって、調製された。およそ４０００ｇ／モルのＭ_ｎを有する、ポリ（Ｌ－ラクチド）プレポリマー（ＰＬＬＡ又はＬＬ４０と略される）は、開始剤として、１，４－ブタンジオール及び触媒として、オクタン酸第一スズ、を使用する、Ｌ－ラクチドの開環重合によって合成された。該プレポリマーの分子量は、^１Ｈ－ＮＭＲによって解析された。およそ２５００ｇ／モルのＭ_ｎを有する、ポリ（ｐ－ジオキサノン）プレポリマー（ＰＤＯ又はＤ２５と略される）は、開始剤として、１，４－ブタンジオール及び触媒として、オクタン酸第一スズ、を使用する、ｐ－ジオキサノンの開環重合によって合成された。

ブロック比５０／５０ｗ／ｗを有する、［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］、［ＰＣＬ－ＰＥＧ１０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］、［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＬＬＡ］、及び［ＰＣＬ－ＰＥＧ１０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＬＬＡ］マルチブロックコポリマーは、鎖延長剤として１，４－ブタンジイソシアネートを使用して、ｐ－ジオキサン中で、ＰＤＯ又はＰＬＬＡプレポリマーにより、ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ又はＰＣＬ－ＰＥＧ１０００－ＰＣＬプレポリマーを鎖延長させ、その後、沈殿させてｐ－ジオキサンを除去することによって調製された。

５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０、５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０、５０ＣＰ３０Ｃ４０－Ｄ２５及び５０ＣＰ１０Ｃ２０－Ｄ２５、と略される該ポリマーは、それらの化学組成、固有粘度、残留ｐ－ジオキサン含量、及び熱特性について解析された。

該プレポリマーの該化学組成（モノマー比）及び分子量（Ｍ_ｎ）、並びに該マルチブロックコポリマーのブロック比は、^１Ｈ－ＮＭＲによって決定された。この決定の為に、５００ＭＨｚで作動する、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｓａｍｐｌｅ Ｃｈａｎｇｅｒ（ＢＡＣＳ ６０）（Ｖａｒｉａｎ）を備えた、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＤＲＸ ５００ＭＨｚ ＮＭＲ分光計（ＢＡＶ－５００）が、使用された。ｄ_１遅延時間は２０秒に設定され、スキャン回数は１６回であった。スペクトルは０～１４ｐｐｍで記録された。約１．３ｇの重水素化クロロホルムを、約２５ｍｇのポリマーに添加することによって、^１Ｈ－ＮＭＲ試料が調製された。

水浴を含む、Ｓｉ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ Ｖｉｓｃｏｓｉｍｅｔｅｒを供給した、Ｕｂｂｅｌｏｈｄｅ Ｖｉｓｃｏｓｉｍｅｔｅｒ（ＤＩＮ）、タイプ０Ｃ、Ｓｉ Ａｎａｌｙｔｉｃｓを使用して、固有粘度が測定された。測定は、２５℃にて、クロロホルム中で、実施された。クロロホルム中でのポリマー濃度は、相対粘度が１．２～２．０の範囲内であるようなものであった。

残留ｐ－Ｄｉｏｘａｎｅ含量は、ＧＣ－ＦＩＤヘッドスペース法を使用して、決定された。Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃｏｌｕｍｎ、ＤＢ－６２４／３０ｍ／０．５３ｍｍを供給した、ＧＣ－ＦＩＤ Ｃｏｍｂｉ Ｓａｍｐｌｅｒにおいて、測定が実施された。試料は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）中で調製された。残留溶媒含量は、ｐ－ジオキサノン較正標準物質を使用して、決定された。

Ｑ２０００ ＭＤＳＣ（ＴＡ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｇｈｅｎｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）を使用して、該マルチブロックコポリマーの熱挙動を決定する為に、モジュレートされた示差走査熱量測定（ＭＤＳＣ）が使用された。約５～１０ｍｇの乾燥物質が、正確に秤量され、２℃／分の加熱速度及び８０秒ごとに＋／－０．４２℃のモジュレーション振幅で、窒素雰囲気下で、－８５℃～１２０℃まで加熱された。ガラス転移温度（Ｔ_ｇ、中点）、融解温度（吸熱ピークの最大、Ｔ_ｍ）及び融解吸熱の表面積から計算された、融解エンタルピー（ΔＨ_ｍ）は、逆転熱流から決定された。温度及びエンタルピーは、インジウム標準物質を用いて較正された。

表１は、種々のマルチブロックコポリマーの特徴を列挙する。

実施例２ － ＳｙｎＢｉｏｓｙｓ ｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェアの生成
１４５．８ｋＤａの分子量を有する、モノクローナル抗体（ｍＡｂＸ）は、ＳｙｎＢｉｏｓｙｓマイクロスフェア中で製剤化された。５重量％の標的ローディングを有するｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェア（ｍＡｂＸ ＭＳＰ）は、油中油中水（Ｗ／Ｏ／Ｏ）及び水中油中水（Ｗ／Ｏ／Ｗ）ベースのマイクロカプセル化プロセスによって、５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０（ＲＣＰ－１４４０）と５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０（ＲＣＰ１６６７）とのブレンドから調製された。

ｍＡｂＸ溶液は、１００ｍｇ／ｍｌの標的濃度まで濃縮された。濃縮されたタンパク質溶液の目視検査は、不溶性粒子が存在しないことを示した。ｍＡｂＸの完全性は、濃縮中維持された。ＳＥＣ－ＵＰＬＣ解析は、凝集物の非存在を確認し、分解の兆候もなかった。濃縮された溶液のｍＡｂＸ濃度は、ＳＥＣ－ＵＰＬＣで決定された場合に、１０５．７ｍｇ／ｍｌであった。

５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０と５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０とは、異なる重量比（１００：０、５０：５０、２５：７５及び０：１００）で、最終ポリマー濃度が１０重量％まで、ジクロロメタン中に溶解させ、０．２μｍのＰＴＦＥフィルターを通して濾過された。次いで、５．０ｇのポリマー溶液（Ｏ_１）は、Ｕｌｔｒａ Ｔｕｒｒａｘ（２２０００ｒｐｍで４０秒間）を使用して、２０ｗ／ｖのＯ_１／Ｗ_１比で、０．２５ｍｌの濃縮されたｍＡｂＸ溶液（Ｗ_１）と乳化させ、一次エマルション（分散相、ＤＰ）を得た。

Ｗ／Ｏ／Ｏマイクロカプセル化経路を介する、ｍＡｂＸ ＭＳＰの調製の為に、次に、コアセルベーション剤としての役割を果たす、４．５ｇのシリコーン油は、シリンジポンプによるボルテックス下で、ＤＰに添加され、ジクロロメタン抽出を開始し、初期段階のＭＳＰを形成した。一定の撹拌下で、次いで、初期段階のＭＳＰは、３３０ｇのヘプタンを含有する容器に移され、初期段階のＭＳＰからジクロロメタンとシリコーンとを抽出した。抽出手順の完了後に、５μｍのフィルターを使用する濾過によって、マイクロスフェアが採取され、ヘプタンで洗浄され（２×２５０ｍｌ）、最後に、減圧下で４０℃にて一晩、乾燥させた。

Ｗ／Ｏ／Ｗマイクロカプセル化経路を介する、ｍＡｂＸ ＭＳＰの調製の為に、次に、５．０ｍｌのＤＰを、３０μｍの孔を有する、膜を使用する、膜乳化によって、５重量％のＮａＣｌを含有する、０．４％の水性ＰＶＡ溶液（Ｗ_２又はＣＰ）２５０ｍｌで乳化させ、それによって、水中油中水（Ｗ／Ｏ／Ｗ）二重エマルションを形成した。該Ｗ／Ｏ／Ｗエマルションは、室温で１．５時間撹拌され、ジクロロメタンの抽出及び蒸留を可能にした。溶媒蒸留の完了後に、該ｍＡｂＸ ＭＳＰは、濾過によって採取され、０．０５重量％の水性Ｔｗｅｅｎ－８０溶液及び注射用の水で洗浄され、最終的に凍結乾燥された。

得られたマイクロスフェアは、Ｈｏｒｉｂａ ＬＡ－９６０ Ｌａｓｅｒ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｅ Ａｎａｌｙｓｅｒ（表２）を使用して、それらの粒子サイズ分布について解析された。

該ｍＡｂＸ ＭＳＰの平均粒子サイズは、４８～５７μｍで変化した。Ｗ／Ｏ／Ｏ経路を介して調製された、ｍＡｂＸ ＭＳＰは、変動計数（ＣＶ）が３０～４０％の比較的広い粒子サイズ分布を有したが（図１）、一方、Ｗ／Ｏ／Ｗプロセス経路を介して調製された、ｍＡｂＸ ＭＳＰは、非常に狭い粒子サイズ分布を有した（ＣＶ １１～１２％）。

ＪＥＯＬ ＪＣＭ－５０００ Ｎｅｏｓｃｏｐｅ ＳＥＭを使用する、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）は、レーザー回折を用いて得られた結果を確認した。Ｗ／Ｏ／Ｏにより調製された、ｍＡｂＸ ＭＳＰは、典型的に、不規則なレーズン様形状を有する、平滑表面及び広い粒子サイズ分布を有した（図１）。Ｗ／Ｏ／Ｗマイクロカプセル化プロセスは、表面に存在する、繊維様構造を有する、荒い表面を示す、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０から全体的に構成される、ｍＡｂＸ－ＭＳＰ（図２Ａ）を除いて、平滑表面を有する、均一なサイズの球状マイクロスフェアをもたらした（図２Ｂ～Ｄ）。

全てのｍＡｂＸ ＭＳＰは、それらのｍＡｂＸ含量について解析された。ｍＡｂＸ ＭＳＰ（約１０ｍｇ）は、１．０ｍｌのＤＭＳＯ（８０℃、３０分）中に完全に溶解され、その後、５．０ｍｌの０．１Ｎ水性ＮａＯＨ ０．５％ ＳＤＳ溶液が添加されて、ポリマーを完全に加水分解させた（室温、一晩の撹拌）。次いで、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイを使用して、透明溶液の総タンパク質含量が決定された。表３に表された結果は、コアセルベーションベースのＷ／Ｏ／Ｏプロセスは、Ｗ／Ｏ／Ｗ二重乳化プロセスと同様に、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０から全体的に構成される、ｍＡｂＸ－ＭＳＰを除いて、典型的には９０％を超える高いカプセル化効率（ＥＥ）で、ｍＡｂＸのマイクロカプセル化を可能にし、４．６～４．９重量％のｍＡｂＸローディングを有する、ｍＡｂＸ ＭＳＰをもたらすことを示す。

３７℃の人工気候室高温装置中で、オービタルシェーカー上に入れられた、１．８ｍｌのイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出緩衝液（０．０２５％のＴｗｅｅｎ２０及び０．０２％のＮａＮ_３を含む、１００ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ７．４）を含有する、２ｍｌポリプロピレンバイアル中で、２０ｍｇのｍＡｂＸ ＭＳＰをインキュベートすることによって、ｍＡｂＸ イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出動態が決定された。所定の時点で、該バイアルの遠心分離後に、１．６ｍｌの緩衝液のアリコートが除去され、新しい緩衝液で置き換えられた。該緩衝液中のｍＡｂＸ濃度は、ＴＳＫｇｅｌ Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ＨＰＬＣカラム、３００×４．６ｍｍ；４μｍ、２５℃での均一濃度での解析（５０ｍＭのリン酸塩、０．４Ｍの過塩素酸塩の緩衝液 ｐＨ６．３：アセトニトリル（９０：１０、ｖ／ｖ）、及び２１４ｎｍでのＵＶ検出）を使用して、Ｗａｔｅｒｓ ２６９０ ＨＰＬＣシステムを有する、ＳＥＣ－ＵＰＬＣによって、決定された。

ｍＡｂＸの放出動態は、マイクロカプセル化プロセスの種類（Ｗ／Ｏ／Ｏ又はＷ／Ｏ／Ｗ）によってほとんど影響を及ぼされなかったが、ポリマーマトリックスの組成によって、主に影響を及ぼされた。１００％の５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０から調製された、ｍＡｂＸ ＭＳＰは、１カ月間にわたって、徐々に且つ完全にｍＡｂＸを放出した。５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０を（部分的に）５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０によって置き換えること（及び、それによって、該ポリマーマトリックスの膨潤度合いを低下させること）によって、ｍＡｂＸの放出速度は、効果的に低下された。放出曲線の外挿に基づいて、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との５０／５０ブレンドから調製された、ｍＡｂＸ ＭＳＰは、およそ３カ月の推定総放出期間で、徐々に、ｍＡｂＸを放出するが、一方、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との２５／７５ブレンドから調製されたｍＡｂＸ ＭＳＰは、４（Ｗ／Ｏ／Ｗ）～５（Ｗ／Ｏ／Ｏ）カ月の推定総放出期間で、徐々に、ｍＡｂＸを放出する。

実施例３ － Ｗ／Ｏ／Ｗマイクロカプセル化を介する、高いｍＡｂＸローディングを用いる、ＳｙｎＢｉｏｓｙｓ ｍＡｂＸ ＭＳＰの生成
１０～２０重量％の標的ローディングを有するｍＡｂＸ ＭＳＰは、実施例２に記載されたＷ／Ｏ／Ｗベースの膜乳化プロセスによって１ｇのスケールで製造された。得られたｍＡｂＸマイクロスフェアは、それらの粒子サイズ分布が、Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒ Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ ＩＩＩを使用して測定されたことを除き、実施例２で記載された方法を使用して特徴付けられた。体積平均粒子サイズ（Ｄ５０）及び変動計数（ＣＶ）は、４～１２０μｍ又は８～２４０μｍの範囲で決定された。

１０重量％のｍＡｂＸ標的ローディングを有するｍＡｂＸ ＭＳＰは、ｍＡｂＸの１カ月の徐放性を有するｍＡｂＸ ＭＳＰを生成する為の試みにおいて、１００％の５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０から最初に調製された。しかしながら、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０の、より高いｍＡｂＸローディングと相対的に高い膨潤度合いとの組み合わせは、５８％のみの乏しいカプセル化効率をもたらした（ＡＭＤ１６１７２）。５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０を１０～２０重量％の５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０とブレンドすることによって、該カプセル化効率は、有意に改善されることができ（７０～８０％）、７．０重量％（ＡＭＤ１７０１３）及び８．２重量％（ＡＭＤ１７００５）のｍＡｂＸ含量を有するｍＡｂＸ ＭＳＰを得た（表４）。

図５は、９０：１０のポリマー比から調製された、ｍＡｂＸ ＭＳＰの累積放出動態が、シグモイド放出動態及び２～３週間での完全放出を示す、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０から完全に構成された、ｍＡｂＸ ＭＳＰと類似していたことを示す。５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０の重量分率を２０重量％まで増加させることによって、ｍＡｂＸの該放出は、低速化されることができた。

１９重量％の標的ローディングを有するｍＡｂＸ ＭＳＰの調製を可能にする為に、ｍＡｂＸ溶液は、約２３０ｍｇ／ｍｌまでさらに濃縮され、その後、表５に列挙された設定を使用して、上記のようにＷ／Ｏ／Ｗプロセスを使用して、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０とのブレンドから、ｍＡｂＸ ＭＳＰが調製された。不運なことに、このように調製されたｍＡｂＸ ｍＡｂＸ製剤の大多数は、ポリマー比にかかわらず、非常に乏しいカプセル化効率、ポリマー濃度、及び一次乳化条件、を有した。より濃縮されたポリマー溶液（１５重量％）を使用して、調製された、１４～１５％のｍＡｂＸ標的ローディングを有するｍＡｂＸ ＭＳＰについて、有意に、より高いカプセル化効率（７０～７５％）が得られ、約１０．６重量％のｍＡｂＸを有する、ｍＡｂＸ ＭＳＰを得た（ＡＭＤ１７０４２及びＡＭＤ１７０３８）（表５）。

^a ５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との重量比；
^b ２×４０秒の乳化、Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘ、２１６００ｒｐｍによって調製されたＤＰ
^c ｍＡｂＸ溶液は５０又は１５０ｍＭのＬ－アルギニン、０．０２５％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ８０を含有した。

ＡＭＤ１７０４２及びＡＭＤ１７０３８は、それらのイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出動態について解析された（図６）。５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と ５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との９０：１０ｗ／ｗブレンドから調製された、ｍＡｂＸ ＭＳＰ（ＡＭＤ１７０３８）からのｍＡｂＸ放出は、同じポリマーマトリックスから調製されたが、ｍＡｂＸ含量がより低い、ｍＡｂＸ ＭＳＰ（例えば、ＡＭＤ１７０１３）に関して以前に生成された、放出動態と一致した。驚くべきことに、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との８０：２０ｗ／ｗブレンドから調製された、ｍＡｂＸ ＭＳＰからのｍＡｂＸ放出は、有意により低く、およそ２カ月の推定放出期間（データの外挿に基づく）に関する最初の４週間、ｍＡｂＸの線形に近い放出を示した。ＡＭＤ１７０４２とＡＭＤ１７０３８との両方は、非常に無傷のｍＡｂＸを放出した（ＳＥＣ－ＵＰＬＣによって決定された場合、９６％を超える完全性）。

実施例４ － Ｗ／Ｏ／Ｏマイクロカプセル化による高いｍＡｂＸローディングを有する、ＳｙｎＢｉｏｓｙｓ ｍＡｂＸマイクロスフェアの生成
約２０重量％のｍＡｂＸローディングを有する、ｍＡｂＸ ＭＳＰの調製を可能にする為に、Ｗ／Ｏ／Ｗマイクロカプセル化プロセスは、実施例２において使用された、マイクロカプセル化プロセスをベースとする、油中油中水（Ｗ／Ｏ／Ｏ）によって置き換えられた。該Ｗ／Ｏ／Ｏベースのマイクロカプセル化プロセスにおいて、ジクロロメタンの抽出は、ジクロロメタンの抽出中の水溶性ＡＰＩの損失及びマイクロスフェアの硬化を防ぐ、無水抽出プロセスを使用して、実施され、それによって、約１００％の高いカプセル化効率が可能になる。

１０及び１９重量％の標的ローディングを有するｍＡｂＸ ＭＳＰは、表６に列挙された設定を使用して、実施例２に記載されたＷ／Ｏ／Ｏマイクロカプセル化プロセスによって、５０ＣＰ１０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との９０／１０ブレンドから調製された。

該ｍＡｂＸ ＭＳＰの平均粒子サイズ（レーザー回折によって測定された場合）はそれぞれ、Ｄ５０が７８及び１０９μｍで比較的高かった。両方の製剤は、ＣＶ値が６６～８１％の非常に広い粒子サイズ分布を有した。ＳＥＭは、レーザー回折により得られた、結果を確認した（図７）。期待された通り、該カプセル化効率は非常に高く（９０％を超える）、９．３及び１９．３重量％のｍＡｂＸローディングを有する、ｍＡｂＸ ＭＳＰを得た。

ＡＭＤ１７０２２及びＡＭＤ１７０２３は、それらのイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出動態について解析された（図８）。９．３重量％のｍＡｂＸローディングを有する、ｍＡｂＸ ＭＳＰ（ＡＭＤ１７０２２）からのｍＡｂＸ放出は、典型的なシグモイド放出動態を示したが、Ｗ／Ｏ／Ｗマイクロカプセル化プロセスによって調製された、類似するｍＡｂＸローディングを有する、ｍＡｂＸ ＭＳＰ（例えば、ＡＭＤ１７０３８）と比較した場合、わずかにゆっくりと全体的な放出を有した。１９重量％のｍＡｂＸローディングを有する、ｍＡｂＸ ＭＳＰ（ＡＭＤ１７０２３）は、バースト放出の少ない、有意により高速な放出を示し、その後ほぼ１４日間線形放出を示した。ＡＭＤ１７０２２とＡＭＤ１７０２３との両方は、非常に無傷のｍＡｂＸを放出した（ＳＥＣ－ＵＰＬＣによって決定された場合、９６％を超える完全性）。

実施例５ － イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）及びイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）での特徴付けの為の、高いｍＡｂＸローディングを有する、ＳｙｎＢｉｏｓｙｓ ｍＡｂＸマイクロスフェアの生成
リード製剤の、より広範囲のイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）及びイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）での特徴付けを可能にする為に、１９重量％の標的ローディングを有するｍＡｂＸ ＭＳＰは、ＡＭＤ１７０２３に関して使用された設定を使用する、Ｗ／Ｏ／Ｏマイクロカプセル化プロセスによって、１０ｇのスケールで、５０ＣＰ１０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との９０／１０ｗ／ｗブレンドから調製された（実施例４における表６を参照）。簡単に言えば、９．０ｇの５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０（ＲＣＰ－１６６７）及び１．０ｇの５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０（ＲＣＰ－１４４０）は、１０重量％の濃度まで、ジクロロメタン中に溶解され、０．２μｍのＰＴＦＥフィルターを通して濾過滅菌された。ポリマー溶液（Ｏ_１）は、インラインＵｌｔｒａ Ｔｕｒｒａｘ（１２０００ｒｐｍ）を使用して、９．５のＯ_１／Ｗ_１比で、２２０．０ｍｇ／ｍｌのｍＡｂＸ水性溶液（２２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ５．０）（Ｗ_１）で乳化され、一次エマルション（ＤＰ）を得た。ＤＰは、０．７５ｗ／ｗのジクロロメタンに対するシリコーン油の比で、インラインＵｌｔｒａ Ｔｕｒｒａｘ（１２０００ｒｐｍ）を使用して、シリコーン油で直接均一化された。初期段階のマイクロスフェアは、６．７ｌのヘプタンを含有する容器に、連続的に移され、該初期段階のマイクロスフェアから、ジクロロメタン及びシリコーン油を抽出した（最終的なジクロロメタンに対するヘプタンの比が１３．４（ｗ／ｗ））。溶媒抽出の完了後に、濾過によって該マイクロスフェアが採取され、ヘプタンで洗浄され、最終的に、Ｎｕｔｓｃｈｅフィルターの設定を使用して、減圧下で、４０℃にて一晩乾燥された。乾燥されたｍＡｂＸ ＭＳＰは、２００μｍの篩を通して篩にかけられ、オーバーサイズされた粒子を除去し、さらに使用するまで－１８℃で保存された。

ｍＡｂＸ ＭＳＰ（ＡＭＤ１８０１２）は、実施例２に記載された方法を使用して、特徴付けられた。ｍＡｂＸ－ＭＳＰは球形であり、いずれの目に見える孔も有さない平滑表面を有した。該マイクロスフェアは、８３μｍの平均粒子サイズ（Ｄ５０）を有する広い粒子サイズ分布（ＣＶ６５％）及び１４．９重量％のｍＡｂＸローディングを有し、８０％のカプセル化効率を表した。試料（５０～５００ｍｇ）を溶解させる為のＤＭＳＯ、内部標準としてのオクタン及び水素炎イオン化を使用して、ＧＣ－ヘッドスペース（Ｃｏｍｂｉ－Ｐａｌヘッドスペースサンプラーを備えた、Ａｇｉｌｅｎｔ ６８５０ガスクロマトグラフ）によって決定された、ジクロロメタン及びヘプタンの残留含量はそれぞれ、１８ｐｐｍ未満及び３５７ｐｐｍ未満であった。

該ｍＡｂＸ－ＭＳＰのイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出動態は、何らのバーストもない、最大１０日間の、線形放出動態及び２週間のイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出後の、８６％の回収率（放出された、カプセル化されたｍＡｂＸの割合）を有するＡＭＤ１７０２３（図８）と同一に近かった。

実施例６ － ｍＡｂＸ製剤のイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での特徴付け
この実施例において、実施例５において調製されたｍＡｂＸ ＭＳＰのイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出試験中に採取された試料は、（１）サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による、ｍＡｂＸの凝集及びフラグメント化、（２）蛍光分光法（ＦＬＳ）による三次構造の完全性、（３）円二色性分光法（ＣＤ）による二次構造の完全性、（４）吸光分光分析定量によるタンパク質濃度並びに（５）機能的ｍＡｂＸの定量の為の、ＥＬＩＳＡによる、その標的に結合する能力、についてさらに特徴付けられた。

解析方法
イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出試料におけるｍＡｂＸの凝集及びフラグメント化は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって解析された。さらに、ｍＡｂＸモノマーの割合が定量された。試料は、移動相（０．０５Ｍのリン酸ナトリウム、０．４Ｍの過塩素酸ナトリウム、ｐＨ６．３）及びＧｅｌ Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ Ｓｔａｎｄａｒｄ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）の使用の下、ＴＳＫｇｅｌ Ｓｕｐｅｒ ＳＷ３０００サイズ排除カラム（ＴＯＳＯＨ）を用いて、調査された。該カラムを通るタンパク質凝集物、モノマー及びフラグメントの、異なる移動時間は、分離された、溶出された画分の、２１４ｎｍのＵＶによる、ペプチド結合の検出及び分子量に関する証明を可能にする。曲線下面積は、溶出された画分のパーセンテージの計算の為に使用された。

ｍＡｂＸの三次構造の完全性は、２８０ｎｍの波長での、トリプトファンの励起によって、蛍光分光法（fluorescence spectroscopy）（ＦＬＳ）によって解析された。得られた発光は、２９０ｎｍ～４５０ｎｍで記録された。トリプトファンの発光波長は、分子の環境変化の場合にシフトされ、タンパク質の立体配置状態についての情報をもたらす。試料中で正しくフォールディングされたタンパク質の比率は、無傷且つ変性したタンパク質の、該試料及び対照試料の最大発光の間の関係を計算することによって、決定された。

ｍＡｂＸの二次構造の完全性は、円二色性（circular dichroism spectroscopy）（ＣＤ）によって解析された。無傷の抗体の光学的に活性なペプチド結合は、ある程度まで左に偏光された光と右に偏光された光を吸収し、特定の楕円率の、偏光された光をもたらす。該ｍＡｂＸの二次構造は、２１８ｎｍの波長で解析され、抗体において優勢な二次構造要素である、β－シートのシグナルを表した。試料中の正しくフォールディングされた抗体の比率は、好適な緩衝系における、無傷且つ変性したｍＡｂＸの、該試料と対照試料のＣＤシグナル間の関係によって決定された。

試料のタンパク質濃度は、分光光度法によって決定された。タンパク質における、芳香族アミノ酸及びジスルフィド結合の吸収は、２８０ｎｍの波長で検出され、該タンパク質濃度を決定する為に使用された。特定のタンパク質に関する吸収係数の逆数を入力した後、ｍｇ／ｍｌの出力形式の濃度が、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｂｉｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒプラスにより、自動で計算された。

ＥＬＩＳＡ解析では、９６ウェルプレートが、可溶性ｍＡｂＸ受容体でコーティングされ、イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）及びイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）の試料からｍＡｂＸを捕捉する為に使用された。このように、その標的に結合する能力を有する唯一の機能的ｍＡｂＸが固定された。次に、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にカップリングされた、抗ヒト検出抗体が、捕捉されたｍＡｂＸ分子に結合された。得られた抗原－抗体－抗体－ＨＲＰ複合体は、発色基質である、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）のＨＲＰに駆動される変換によって定量された。変換された生成物の色の濃さは、該試料からの結合された、機能的ｍＡｂＸの量に比例した。

結果
図９Ａにおいて、蛍光分光法（ＦＬＳ）データは、ｍＡｂＸ ＭＳＰのイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出試験から採取された、一連の７つのｍＡｂＸ試料に関して示されている。最大１４日間の期間中、放出されたｍＡｂＸのフォールディング特徴には、主な変化が実証されることができなかったが、一方、２ｎｍでの最大発光の１７日目のマイナーなレッドシフトのみが、天然の対照ｍＡｂＸ試料と比較して検出された（図９Ｂ）。最大発光における波長の比（図９Ｃ）は、フォールディングされた画分対フォールディングされていない画分を評価する為に使用され、ＦＬＳデータを円二色性データと比較する為に使用された（図１１も参照されたい）。

図１０Ａにおいて、円二色性データは、イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出実験後に、一連の７つのｍＡｂＸ試料について示されている（図１０Ａ）。最大１４日の期間中、ｍＡｂＸの二次構造に主要な変化は生じなかった（図１０Ｂ）。１４日目以降に採取された試料のタンパク質濃度は、ＣＤ方法の検出限界を下回っていたので、これらの後の時点でのＣＤ解析は、実施されることができなかった。完全にフォールディングされていないｍＡｂＸのシグナルによって割られた、２１８ｎｍでのシグナルピークの比は、ＣＤデータをＦＬＳデータと比較する為に使用された（図１１も参照されたい）。

最後に、ＦＬＳ及びＣＤ（フォールディングされた画分）から得られたデータは、ＳＥＣ－ＵＰＬＣによって得られた総タンパク質濃度、及びＳＥＣによって測定されたｍＡｂＸの無傷のモノマー種に対してプロットされた（図１１）。１４日の期間にわたり、無傷の、正しくフォールディングされた、活性ｍＡｂＸの制御放出が、示されていることができた。１４日目の後に、少量のｍＡｂＸのみが、ポリマーベースのマイクロスフェア製剤によって放出された。

まとめると、ＳＥＣ－ＵＰＬＣ、蛍光分光法、円二色性、及びＥＬＩＳＡから得られたデータは、［ＰＣＬ－ＰＥＧ－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＬＬＡ］－ベースのマルチブロックコポリマー及びモノクローナル抗体ｍＡｂＸ、すなわち１４５．８ｋＤＡの巨大タンパク質を用いるマイクロカプセル化プロセスの適合性を証明する。

実施例７ － ｍＡｂＸ ＭＳＰのイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）での薬物動態及び抗腫瘍効果
実施例５に従って調製されたｍＡｂＸ ＭＳＰは、それらのイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）での薬物動態に関して、健康なＮＭＲＩマウスにおいて評価された。

雌のＮＭＲＩマウスは、４～６週齢で使用された。マウスは、６匹の動物の５つの群に無作為に分けられ、静脈内（Norisk is to be feared but the delay for obtaining the publicationofthe grant will be postponed (meaning the examination procedure is stillongoing until such publication of the decision ofgrant, for example opened tothird partyobservations).）若しくは皮下（ｓ．ｃ．）注射による１ｍｇのｍＡｂＸ対照溶液の単回注射、又は水性再構築媒体（注射用水、０．６重量％のカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ））中、ｍＡｂＸ ＭＳＰの懸濁物の単回皮下注射のいずれかを受けられた（マウス当たり１、４又は８ｍｇのｍＡｂＸ）。血液試料は、示された時点で採取され、ｍＡｂＸの血清濃度は、検証されたＥＬＩＳＡを使用して測定された。

図１２は、投与後のｍＡｂＸの血漿レベルを示す。ｉ．ｖ．対照群内で、血漿ピークレベルは、３時間後に得られたが、一方、ｓ．ｃ．対照群内では、血漿ピークレベルは１日後に得られた。ｍＡｂＸ ＭＳＰ製剤の注射は、３～４日目に血漿ピークレベルのシフトをもたらし、最も高い用量群内で最大２３日の期間にわたり、ｍＡｂＸの用量依存放出を有した。データは、ｍＡｂＸが、延長された期間にわたり、イン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）で該マイクロスフェア製剤から放出されることを明らかに示す。イン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）放出後に、ｍＡｂＸは、結合ＥＬＩＳＡによって血漿中で検出されることができ、放出されたｍＡｂＸが、依然としてその受容体に結合することができることを示し、タンパク質構造が機能的に無傷であることを示す。

第２の薬物動態研究において、ｍＡｂＸ血漿レベルは、Ａ４３１異種移植片保有ＮＭＲＩヌードマウス（図１３）においてモニターされ、ｍＡｂＸ ＭＳＰは、それらの抗腫瘍効果について評価された。皮下腫瘍は、１×１０^７個のＡ４３１細胞の、ＮＭＲＩヌードマウスの脇腹への接種によって誘導された。腫瘍体積が５０～２５０ｍｍ^３に達した際に、マウスは、各処置群（ｎ＝７）に、無作為に割り当てられた。該マウスは、ｍＡｂＸ溶液（マウス１匹当たり１ｍｇ）又はｍＡｂＸをロードされたマイクロスフェア（マウス１匹当たり０～８ｍｇのｍＡｂＸ）のいずれかの単回注射を受けた。血液試料は、示された時点で採取され、ｍＡｂＸの血清濃度は、検証されたＥＬＩＳＡを使用して測定された。腫瘍体積は、週に２回のカリパス測定によって決定された。

１ｍｇのｍＡｂＸのｉ．ｖ．の対照注射は、３時間後に血漿ピークをもたらしたが、一方、１ｍｇのｍＡｂＸ溶液のｓ．ｃ．の対照注射後には、１日後に血漿ピークが観察されることができた。ｍＡｂＸ ＭＳＰ製剤はそれぞれ、１、２、４又は８ｍｇの最終ｍＡｂＸ用量で皮下注射された。血漿ピークは２～４日にシフトしたが、一方、徐放性効果は、最も高い用量で最大２７日、観察された。この第２の薬物動態研究も、ｍＡｂＸが、イン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）でマイクロスフェア製剤から上手く放出されることを確認した。ｍＡｂＸは、機能的ＥＬＩＳＡによって血漿中で検出されることができ、これは、タンパク質構造が、依然として機能的に無傷であることを証明する。

図１４において、Ａ４３１腫瘍保有ＮＭＲＩヌードマウスにおける腫瘍成長が、モニターされた。皮下腫瘍は、１×１０^７個のＡ４３１細胞の、ＮＭＲＩヌードマウスの脇腹への接種によって誘導された。腫瘍体積が５０～２５０ｍｍ^３に達した際に、マウスは、各処置群（ｎ＝７）に無作為に割り当てられた。腫瘍体積は、週に２回のカリパス測定によって決定された。ポリマーのみの群（いずれのｍＡｂＸも有さない）の注射後に、腫瘍は、４２日の研究期間にわたり、成長し続けていた。有意な抗腫瘍効果（ｐ≦０．００２）は、ｍＡｂＸのｉ．ｖ．注射及び７日後の８ｍｇのｍＡｂＸ ＭＳＰ製剤に関して、並びにｍＡｂＸのｓ．ｃ．溶液及び１０日後の１、２又は４ｍｇのｍＡｂＸ ＭＳＰ製剤に関して示されることができた。このデータセットにより、本発明者等は、ｍＡｂＸが、イン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）で該マイクロスフェア製剤から上手く放出されること、及び放出後に、該タンパク質が、依然として構造的に無傷であり、生物活性であることを証明することができた。

実施例８ － ｍＡｂ０２の徐放性マイクロスフェアの生成
別の研究において、分子量が１４４．９ｋＤａ（ｍＡｂ０２）の第２のモノクローナル抗体は、実施例４においてｍＡｂＸ－ＭＳＰ製剤の生成に使用されたのと同じポリマー組成物を使用するＷ／Ｏ／Ｏプロセスによって、１９重量％の標的ローディングで、ＳｙｎＢｉｏｓｙｓマイクロスフェア中に製剤化された。

簡単に言えば、合計１ｇのポリマー（５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０との様々なブレンド比を表す）は、９ｇのジクロロメタンに溶解され、２２１．４ｍｇ／ｍｌのｍＡｂ０２溶液と、９．５のＷ_１／Ｏ比で乳化された（Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘ、２１６００ｒｐｍ、４０秒）。次に、一次エマルションが、５．３ｇのシリコンオイル（silicon oil）（３５０ ＣＳＴ）を用いてホモジナイズされ（Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘ、２１６００ｒｐｍ、３０秒）、その後、初期段階のマイクロスフェアが、２５０ｍｌのｎ－ヘプタンを含有する容器中に移され、ジクロロメタン及びシリコーンオイル（silicone oil）を１時間抽出した。ｍＡｂ０２ ＭＳＰは、５μｍフィルターで採取され、２５０ｍｌのｎ－ヘプタンで２回洗浄され、最終的に、減圧下で４０℃にて一晩乾燥された。

マイクロスフェアは、表７に列挙されるものを含む、種々のポリマーブレンド比に関して、本方法に従って生成された。

得られたｍＡｂ０２ ＭＳＰは、ｍＡｂＸに関して使用され、以前の実施例において記載されたのと同じ方法を使用して、粒子サイズ分布、ｍＡｂ０２含量及びｍＡｂ０２のイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出動態について特徴付けられた。平均粒子サイズは、５７～８９μｍで変化した。結果は、上記コアセルベーションプロセスが、高いカプセル化効率（９１％以上）を維持するマイクロスフェアにおいて、高いｍＡｂ０２含量（１７．７～１８．４重量％）のカプセル化を可能にする。様々なマイクロスフェア製剤のｍＡｂ０２のイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出動態は、図１５に提示されている。全ての製剤は、最初の２時間中、５％以下の低いバースト放出を示す。総ｍＡｂ０２放出期間は、５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０と比較した５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０の重量分率を低下させることによって、およそ１週間～およそ４週間まで増加される。

９０重量％の５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と１０重量％の５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０から構成されるｍＡｂ０２ ＭＳＰ（ＳＲ１９－００２．Ｂ）については、放出されたｍＡｂ０２の完全性は、無傷のｍＡｂ０２のピーク面積とｍＡｂ０２に関連する可溶性凝集物との比を計算することによって、ＳＥＣ－ＵＰＬＣによって決定された。クロマトグラムにおいてさらなるピークは観察されなかった。表８は、ＳＥＣ－ＵＰＬＣによって決定された場合に、放出された総ｍＡｂ０２及び放出されたｍＡｂ０２の純度を示す。

典型的に、放出されたｍＡｂ０２の純度は、８６～８９％であった。１４日で得られたより低い純度（８０％）は、その時点におけるｍＡｂ０２の低濃度に原因がある。全体的に、マイクロカプセル化されたｍＡｂ０２のおよそ９０％近くが、ｍＡｂ０２ ＭＳＰから無傷の形態で放出される（ＳＥＣ－ＵＰＬＣによって決定された場合）。

図１６において、蛍光分光法（ＦＬＳ）のデータは、異なるポリマーブレンドを利用するｍＡｂ０２マイクロスフェア製剤からのイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出後に示される（図１６Ａ～Ｆ）。これらの異なるポリマーブレンド比内で、該ポリマーブレンドの親水性は、Ａ～Ｆへと低下している。該ＦＬＳデータは、ｍＡｂ０２の固有の蛍光トリプトファンスペクトルが、異なるポリマー組成物によって影響を受けられていないことを示す。

実施例９ － ５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０のイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での浸食動態
不運なことに、水中油（Ｏ／Ｗ）ベースの溶媒抽出／蒸留乳化プロセスを使用する、実施例２に記載されたように調製された、ポリ（Ｌ－ラクチド）ベースの５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０マルチブロックコポリマーから構成されるポリマーのみのマイクロスフェアは、非常にゆっくりと分解することが見出された（ｐＨ７．４、３７℃）。最長１２カ月で実験的に決定された該マイクロスフェアの残存質量の外挿に基づいて、５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０マイクロスフェアに関するイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での浸食時間は、約４年であると見積もられる（図１７）。ポリ（Ｌ－ラクチド）ベースのマルチブロックコポリマーの低速な浸食は、他のポリ（Ｌ－ラクチド）、例えば３０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０、について確認され、結晶性ポリ（Ｌ－ラクチド）ブロックの加水分解を遅らせる原因であった。

様々な［ＰＣＬ－ＰＥＧ－ＰＣＬ］プレポリマーとの異なる重量比で、およそ２５００ｇ／モルのＭ_ｎを有する、ＰＤＯプレポリマーブロックを鎖延長することによって調製された、ポリ（ｐ－ジオキサノン）（ＰＤＯ）ベースのマルチブロックコポリマーは、該ポリ（Ｌ－ラクチド）ベースのマルチブロックコポリマーと比較して、有意により迅速に分解することが見出された（図１７）。

５０ＣＰ１０Ｃ２０－Ｄ２５から構成されるポリマーのみのマイクロスフェアは、５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０のおよそ２倍迅速に分解することが見出された。より高い分子量のＰＥＧ、例えばＰＥＧ１５００又はＰＥＧ３０００、を使用することによって、５０ＣＰ１５Ｃ２０－Ｄ２５、すなわちブロック比５０／５０を有する［ＰＣＬ－ＰＥＧ１５００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］マルチブロックコポリマー及び２０ＣＰ３０Ｃ４０－Ｄ２３、すなわちブロック比２０／８０を有する［ＰＣＬ－ＰＥＧ３０００－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］マルチブロックコポリマーに関して示されているように、浸食速度はより一層に増加した（図１７）。

実施例１０ － ［ＰＣＬ－ＰＥＧ－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］マルチブロックコポリマーから調製されたｍＡｂ０２の徐放性マイクロスフェア
この実施例は、改良されたポリマー分解動態を有する［ＰＣＬ－ＰＥＧ－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］マルチブロックコポリマーから構成されるｍＡｂ０２ ＭＳＰの生成について記載する。

２０％のｍＡｂ０２標的ローディングを有するｍＡｂ０２ ＭＳＰは、実施例８に記載されているのと同じ手順に従って、１ｇのスケールで、５０ＣＰ３０Ｃ４０－Ｄ２５と５０ＣＰ１０Ｃ２０－Ｄ２５とのブレンド（実施例１に記載されたように合成された）及び２２１．４ｍｇ／ｍｌの濃度のｍＡｂ０２溶液から生成された。該ｍＡｂ０２ ＭＳＰは、実施例８に記載されているのと同じ方法を使用して、粒子サイズ分布、ｍＡｂ０２含量、ｍＡｂ０２のイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出動態及び放出されたｍＡｂ０２の完全性について、特徴付けられた。

得られたｍＡｂ０２ ＭＳＰは、ｍＡｂＸ及び５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０とのブレンドから生成されたｍＡｂ０２マイクロスフェアよりも有意に大きい粒子サイズ（約１２０～３３０μｍ）を有した（表９）。ＳＥＭによる顕微鏡検査は、レーザー回折によって測定した場合の、比較的大きな粒子サイズを説明する、広範囲の凝集を示した。

ＢＣＡベースの含量解析方法を使用して決定された総タンパク質含量は、ｍＡｂ０２含量が１３．２～１７．３重量％で変動し、カプセル化効率が６６％～８７％で変動することを表し、これは、５０ＣＰ３０Ｃ４０－ＬＬ４０と５０ＣＰ１０Ｃ２０－ＬＬ４０とのブレンドから調製された、ｍＡｂ０２ ＭＳＰに関して得られた９０％を超える典型的なカプセル化効率と比較して、有意により低かった。

様々なマイクロスフェア製剤のｍＡｂ０２ イン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出動態は、図１８に示されている。

全ての製剤は、１０～１５％の中程度のバースト放出を示し、その後、ほとんど完璧な線形放出動態を有する徐放性により続けられた。１００％の５０ＣＰ３０Ｃ４０－Ｄ２５から調製されたｍＡｂ０２ ＭＳＰは、６週間かけて、ｍＡｂ０２を放出する。５０ＣＰ３０Ｃ４０－Ｄ２５を５０ＣＰ１０Ｃ２０－Ｄ２５で（部分的に）置き換えることによって（ブレンド比９０：１０～０：１００）、ｍＡｂ０２の放出速度は、効果的に低下され、２カ月（ブレンド比８０：２０及び７０：３０）から３～４カ月（１００％の５０ＣＰ１０Ｃ２０－Ｄ２５）まで変化する放出期間を有するｍＡｂ０２ ＭＳＰ製剤を得ることができた。放出されたｍＡｂ０２の完全性は、無傷のｍＡｂ０２とｍＡｂ０２に関連する可溶性凝集物のピーク面積の比を計算することによって、ＳＥＣ－ＵＰＬＣによって決定された。クロマトグラムにおいてさらなるピークは観察されなかった。表１０は、５０ＣＰ３０Ｃ４０－Ｄ２５と５０ＣＰ１０Ｃ２０－Ｄ２５との９０：１０ブレンドから構成されるｍＡｂ０２ ＭＳＰに関するＳＥＣ－ＵＰＬＣによって決定された、放出された総ｍＡｂ０２と放出されたｍＡｂ０２の純度とを示す。６週間後に、放出された総ｍＡｂ０２のおよそ８５％が、依然としてその無傷の形態で放出されており、ｍＡｂ０２の使用されたポリマー及び製造手順との適合性が確認される。

実施例６に記載された方法に従う、ＦＬＳによるイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で放出されたｍＡｂ０２の特徴付けは、ｍＡｂ０２の固有の蛍光トリプトファンスペクトルが、様々な５０ＣＰ３０Ｃ４０－Ｄ２５／５０ＣＰ１０Ｃ２０－Ｄ２５ポリマーブレンドから構成されるマイクロスフェア製剤からの放出後に、影響を受けられなかったことを示した。

図１９は、様々な５０ＣＰ３０Ｃ４０－Ｄ２５／５０ＣＰ１０Ｃ２０－Ｄ２５ポリマーブレンドから構成される、ｍＡｂ０２をロードされたマイクロスフェア製剤のイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出試験中に、様々な時点で採取されたイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）放出試料における、全体的且つ無傷のｍＡｂ０２（ＳＥＣ－ＵＰＬＣによって測定された）の濃度及び正しくフォールディングされたｍＡｂ０２の割合（図９Ｃに示される方法に従う蛍光分光法（ＦＬＳ）によって決定された）を示す（図１９Ａ～Ｇ）。これらの異なるポリマーブレンド比内で、該ポリマーブレンドの親水性は、Ａ～Ｇへと低下している。

ＳＥＣ－ＵＰＬＣによって決定された無傷のｍＡｂ０２の割合は、典型的に、８０～９０％であった。ＦＬＳによって決定された、正しくフォールディングされたｍＡｂ０２の割合は、放出期間とは無関係に、６５～１００％で変動し、該ポリマーブレンドの組成によって影響を受けられなかった。

まとめると、ＳＥＣ－ＵＰＬＣ及び蛍光分光法から得られたデータは、最大３カ月の期間、無傷且つ正しくフォールディングされたｍＡｂ０２の放出が、実行可能であることを示し、より迅速に分解する［ＰＣＬ－ＰＥＧ－ＰＣＬ］－ｂ－［ＰＤＯ］ベースのマルチブロックコポリマー及びマイクロカプセル化プロセスの、モノクローナル抗体ｍＡｂ０２、すなわち１４４．９ｋＤａの巨大タンパク質との適合性を証明する。
なお、本開示は、以下のとおりに構成されてもよい。
［項１］
抗体又はその抗原結合性フラグメントの延長された放出の為の剤形物であって、
（ａ）抗体又はその抗原結合性フラグメント；
（ｂ）生分解性マルチブロックコポリマーマトリックス
を含み、
ここで、該抗体又はその抗原結合性フラグメントが、該マルチブロックコポリマーマトリックス中に存在し、
ここで、該生分解性マルチブロックコポリマーが、少なくとも１つの非晶質の加水分解可能なプレポリマー（Ａ）セグメント及び少なくとも１つの半結晶性の加水分解可能なプレポリマー（Ｂ）セグメントを含む、１つ以上の生分解性の、相分離した、熱可塑性マルチブロックコポリマーを含み、
生理的条件下での上記マルチブロックコポリマーが、約３７℃以下のＴ _ｇ 及び約５０℃～約１１０℃のＴ _ｍ を有し；
前記セグメントが、多官能性鎖延長剤によって連結されており；
前記セグメントが、ポリマー鎖にわたってランダムに分布されており；並びに、
前記プレポリマー（Ｂ）セグメントが、Ｘ－Ｙ－Ｘトリブロックコポリマーを含み、ここで、Ｙが重合開始剤であり、及び、Ｘが、約７個以上のｐ－ジオキサノンモノマー単位で表されるブロック長を有するポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントである、
前記剤形物。
［項２］
前記マルチブロックコポリマーマトリックスが、約２４時間以内に、該マルチブロックコポリマーマトリックス中に存在する、タンパク質若しくは抗体又はそれらの抗原結合性フラグメントの総重量に対して、タンパク質若しくは抗体又はそれらの抗原結合性フラグメントの約３％未満～約４０％を放出する、項１に記載の剤形物。
［項３］
前記抗体又はその抗原結合性フラグメントが、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、抗体薬物コンジュゲート、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ'）、Ｆ（ａｂ'）を包含する抗原結合フラグメント、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、及び二価の一本鎖抗体からなる群から選択される１以上を含む、項１又は２に記載の剤形物。
［項４］
前記抗原結合性フラグメントが、少なくとも２つの対合されたドメインを含む、項１～３のいずれか１項に記載の剤形物。
［項５］
前記抗体又はその抗原結合性フラグメントが、約７０ｋＤａ以上、例えば、約７５ｋＤａ以上、約８０ｋＤａ以上、の分子量を有する、項１～４のいずれか１項に記載の剤形物。
［項６］
約７０ｋＤａ以上のタンパク質の延長された放出の為の剤形物であって、
（ａ）約７０ｋＤａ以上のタンパク質；
（ｂ）生分解性マルチブロックコポリマーマトリックス
を含み、
ここで、前記タンパク質が、前記マルチブロックコポリマーマトリックス中に存在し、
ここで、前記生分解性マルチブロックコポリマーが、少なくとも１つの非晶質の加水分解可能なプレポリマー（Ａ）セグメント及び少なくとも１つの半結晶性の加水分解可能なプレポリマー（Ｂ）セグメントを含む、１つ以上の生分解性の、相分離した、熱可塑性マルチブロックコポリマーを含み、
ここで、
生理的条件下での上記マルチブロックコポリマーが、約３７℃以下のＴ _ｇ 及び約５０℃～約１１０℃のＴ _ｍ を有し；
前記セグメントが、多官能性鎖延長剤によって連結されており；
前記セグメントが、ポリマー鎖にわたってランダムに分布されており；並びに、
前記プレポリマー（Ｂ）セグメントが、Ｘ－Ｙ－Ｘトリブロックコポリマーを含み、ここで、Ｙが重合開始剤であり、及び、Ｘが、約７個以上のｐ－ジオキサノンモノマー単位で表されるブロック長を有するポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントである、
前記剤形物。
［項７］
前記タンパク質が、Ｆｃ－融合タンパク質、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、全長免疫グロブリン、凝固因子、成長因子、ホルモン、サイトカイン、及び酵素からなる群から選択される１以上を含む、項６に記載の剤形物。
［項８］
前記プレポリマー（Ｂ）セグメントが、該プレポリマー（Ｂ）セグメントの総重量の約７０％以上、例えば、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、又は約９５％以上、のポリ（ｐ－ジオキサノン）を含む、項１～７のいずれか１項に記載の剤形物。
［項９］
ｐ－ジオキサノンモノマー単位に関して表される前記ポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントＸのブロック長が、約７～約３５、例えば、約８～約３０、約９～約２５、約１０～約２０、又は約１２～約１５、である、項１～８のいずれか１項に記載の剤形物。
［項１０］
前記重合開始剤Ｙが、約２～約８個の炭素原子を有する脂肪族ジオール、例えば、エチレングリコール、１，２－プロパンジオール、１，３－プロパンジオール、１，４－ブタンジオール、１，３－ブタンジオール、２，３－ブタンジオール、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、ポリ（エチレングリコール）、１，５－ペンタンジオール、１，６－ヘキサンジオール、ネオペンチルグリコール、水素化されたビスフェノールＡ、及びグリセロールからなる群から選択される重合開始剤、である、項１～９のいずれか１項に記載の剤形物。
［項１１］
前記プレポリマー（Ｂ）セグメントが、約１３００ｇ／モル以上～約７２００ｇ／モル、例えば、約１５００ｇ／モル以上～約５０００ｇ／モル、約２０００ｇ／モル以上～約４５００ｇ／モル、約２２００ｇ／モル以上～約４０００ｇ／モル、又は約２５００ｇ／モル以上～約３２００ｇ／モル、の数平均分子量Ｍ _ｎ を有する、項１～１０のいずれか１項に記載の剤形物。
［項１２］
前記プレポリマー（Ｂ）セグメントが、約１８００ｇ／モル～約１００８０ｇ／モル、例えば、約２１００ｇ／モル～約７０００ｇ／モル、約２６００ｇ／モル～約６３００ｇ／モル、又は約３０００ｇ／モル～約５６００ｇ／モル、の重量平均分子量Ｍ _ｗ を有する、項１～１１のいずれか１項に記載の剤形物。
［項１３］
前記コポリマー中の前記プレポリマー（Ｂ）セグメントの含量が、該マルチブロックコポリマーの総重量の約５％～約９５％、例えば、約１０％～約９０％、約２５％～約７０％、又は約３０％～約５０％、である、項１～１２のいずれか１項に記載の剤形物。
［項１４］
前記プレポリマー（Ａ）セグメントが、グリコリド、ラクチド（Ｄ及び／又はＬ）、ε－カプロラクトン、δ－バレロラクトン、トリメチレンカーボネート、テトラメチレンカーボネート、１，５－ジオキセパン－２－オン、１，４－ジオキサン－２－オン（ｐ－ジオキサノン）及び／又は環状無水物、例えばオキセパン－２，７－ジオン、の反応産物を含む、項１～１３のいずれか１項に記載の剤形物。
［項１５］
前記プレポリマー（Ａ）が、グリコリド、ラクチド（Ｄ及び／又はＬ）、及び／又はε－カプロラクトンの反応産物を含む、項１～１４のいずれか１項に記載の剤形物。
［項１６］
プレポリマー（Ａ）の総重量の約３０％以上、例えば、約４０％～約９５％、約５０％～約９０％、又は約６０％～約８５％、が、水溶性ポリマーに由来する、項１～１５のいずれか１項に記載の剤形物。
［項１７］
前記水溶性ポリマーが、ポリエーテル、例えば、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリ（テトラメチレンオキシド）（ＰＴＭＯ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）、ポリ（ビニルカプロラクタム）、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）（ポリ－（ＨＥＭＡ））、ポリ（ホスファゼン）、ポリ（オルトエステル）、ポリ（オルトエステルアミド）、又はこれらのポリマーのうちのいずれかのコポリマー、からなる群から選択される１以上を含む、項１～１６のいずれか１項に記載の剤形物。
［項１８］
前記水溶性ポリマーが、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（テトラメチレンオキシド）、ポリ（プロピレングリコール）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、及びポリ（ビニルカプロラクタム）の群から選択される１以上を含む、項１～１７のいずれか１項に記載の剤形物。
［項１９］
前記水溶性ポリマーが、ポリ（エチレングリコール）を含む、又はポリ（エチレングリコール）である、項１～１８のいずれか１項に記載の剤形物。
［項２０］
前記プレポリマー（Ａ）セグメントが、ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ＰＥＧ－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）を含む、項１～１９のいずれか１項に記載の剤形物。
［項２１］
前記プレポリマー（Ａ）セグメントが、約５００ｇ／モル～約１００００ｇ／モル、例えば、約７００ｇ／モル～約９０００ｇ／モル、約１０００ｇ／モル～約８０００ｇ／モル、約２０００ｇ／モル～約８０００ｇ／モル、約３０００ｇ／モル～約８０００ｇ／モル、又は約４０００ｇ／モル～約８０００ｇ／モル、の数平均分子量Ｍ _ｎ を有する、項１～２０のいずれか１項に記載の剤形物。
［項２２］
前記マルチブロックコポリマー中のプレポリマー（Ａ）の含量が、該マルチブロックコポリマーの総重量に対して、約５％～約９５％、例えば、約１０％～約９０％、約３０％～約７５％、又は約５０％～約７０％、である、項１～２１のいずれか１項に記載の剤形物。
［項２３］
前記多官能性鎖延長剤が、二官能性脂肪族鎖延長剤である、項１～２２のいずれか１項に記載の剤形物。
［項２４］
前記多官能性鎖延長剤が、ジイソシアネート、例えば１，４－ブタンジイソシアネート又は１．６－ヘキサンジイソシアネート、である、項１～２３のいずれか１項に記載の剤形物。
［項２５］
前記投与形態物が、マイクロスフェア、マイクロ粒子、ナノスフェア、ナノ粒子、棒状、インプラント、フィルム、シート、チューブ、膜、メッシュ、繊維、プラグ、コーティング、又はゲルの形態である、項１～２４のいずれか１項に記載の剤形物。
［項２６］
前記投与形態物がマイクロスフェアの形態である、項１～２５のいずれか１項に記載の剤形物。
［項２７］
前記マイクロスフェアが、約１μｍ～約２００μｍ、例えば、約１０μｍ～約１５０μｍ、又は約２０μｍ～約１００μｍ、の平均直径を有するマイクロスフェアの形態である、項１～２６のいずれか１項に記載の剤形物。
［項２８］
項１～２７のいずれか１項に記載の剤形物を投与する方法であって、ここで、前記マルチブロックコポリマーマトリックスが、約２４時間以内に、該マルチブロックコポリマーマトリックス中に存在する、タンパク質若しくは抗体又はそれらの抗原結合性フラグメントの総重量に対して、タンパク質若しくは抗体又はそれらの抗原結合性フラグメントの約２０％未満、好ましくは約１０％未満、より好ましくは５％未満、を放出する、前記方法。
［項２９］
前記投与が、皮内、経皮、筋肉内、皮下、硝子体内、関節内、又は腫瘍内の注射を介する、項２８に記載の方法。
［項３０］
タンパク質若しくは抗体又はそれらの抗原結合性フラグメントを必要とする対象を処置する方法であって、項１～２７のいずれか１項に記載の剤形物を投与することを含む、前記方法。
［項３１］
タンパク質若しくは抗体又はそれらの抗原結合性フラグメントを必要とする対象を処置する際に使用する為の項１～２７のいずれか１項に記載の剤形物であって、前記剤形物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
［項３２］
タンパク質若しくは抗体又はそれらの抗原結合性フラグメントの持続放出の為に、生分解性ポリマーマイクロスフェア、好ましくは項１～２７のいずれか一項に記載の定義された生分解性ポリマーマイクロスフェア、を使用する方法。

Claims (36)

1. 抗体又はその抗原結合性フラグメントの延長された放出の為の剤形物であって、
   （ａ）抗体又はその抗原結合性フラグメント；
   （ｂ）生分解性マルチブロックコポリマーマトリックス
   を含み、
   ここで、該抗体又はその抗原結合性フラグメントが、該マルチブロックコポリマーマトリックス中に存在し、
   ここで、該生分解性マルチブロックコポリマーが、少なくとも１つの非晶質の加水分解可能なプレポリマー（Ａ）セグメント及び少なくとも１つの半結晶性の加水分解可能なプレポリマー（Ｂ）セグメントを含む、１つ以上の生分解性の、相分離した、熱可塑性マルチブロックコポリマーを含み、
   生理的条件下での上記マルチブロックコポリマーが、３７℃以下のＴ_ｇ及び５０℃～１１０℃のＴ_ｍを有し；
   前記セグメントが、多官能性鎖延長剤によって連結されており；
   前記セグメントが、ポリマー鎖にわたってランダムに分布されており；並びに、
   前記プレポリマー（Ｂ）セグメントが、Ｘ－Ｙ－Ｘトリブロックコポリマーを含み、ここで、Ｙが重合開始剤であり、及び、Ｘが、７個以上のｐ－ジオキサノンモノマー単位で表されるブロック長を有するポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントであり、
   前記剤形物が、マイクロスフェア、マイクロ粒子、又はナノ粒子の形態にある、
   前記剤形物。
2. 前記マルチブロックコポリマーマトリックスが、２４時間以内に、該抗体又は抗原結合性フラグメントの１／７未満を放出する、請求項１に記載の剤形物。
3. 前記マルチブロックコポリマーマトリックスが、２４時間以内に、該マルチブロックコポリマーマトリックス中に存在する、抗体又はその抗原結合性フラグメントの総重量に対して、抗体又はその抗原結合性フラグメントの３％未満を放出する、請求項１又は２に記載の剤形物。
4. 前記抗体又はその抗原結合性フラグメントが、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、抗体薬物コンジュゲート、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ'）、Ｆ（ａｂ'）_２を包含する抗原結合性フラグメント、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、及び二価の一本鎖抗体からなる群から選択される１以上を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の剤形物。
5. 前記抗原結合性フラグメントが、少なくとも２つの対合されたドメインを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の剤形物。
6. 前記抗体又はその抗原結合性フラグメントが、７０ｋＤａ以上の分子量を有する、請求項１～５のいずれか１項に記載の剤形物。
7. ７０ｋＤａ以上のタンパク質の延長された放出の為の剤形物であって、
   （ａ）７０ｋＤａ以上のタンパク質；
   （ｂ）生分解性マルチブロックコポリマーマトリックス
   を含み、
   ここで、前記タンパク質が、前記マルチブロックコポリマーマトリックス中に存在し、
   ここで、前記生分解性マルチブロックコポリマーが、少なくとも１つの非晶質の加水分解可能なプレポリマー（Ａ）セグメント及び少なくとも１つの半結晶性の加水分解可能なプレポリマー（Ｂ）セグメントを含む、１つ以上の生分解性の、相分離した、熱可塑性マルチブロックコポリマーを含み、
   ここで、
   生理的条件下での上記マルチブロックコポリマーが、３７℃以下のＴ_ｇ及び５０℃～１１０℃のＴ_ｍを有し；
   前記セグメントが、多官能性鎖延長剤によって連結されており；
   前記セグメントが、ポリマー鎖にわたってランダムに分布されており；並びに、
   前記プレポリマー（Ｂ）セグメントが、Ｘ－Ｙ－Ｘトリブロックコポリマーを含み、ここで、Ｙが重合開始剤であり、及び、Ｘが、７個以上のｐ－ジオキサノンモノマー単位で表されるブロック長を有するポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントであり、
   前記剤形物が、マイクロスフェア、マイクロ粒子、又はナノ粒子の形態にある、
   前記剤形物。
8. 前記タンパク質が、Ｆｃ－融合タンパク質、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、全長免疫グロブリン、凝固因子、成長因子、ホルモン、サイトカイン、及び酵素からなる群から選択される１以上を含む、請求項７に記載の剤形物。
9. 前記プレポリマー（Ｂ）セグメントが、該プレポリマー（Ｂ）セグメントの総重量の７０％以上のポリ（ｐ－ジオキサノン）を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の剤形物。
10. ｐ－ジオキサノンモノマー単位に関して表される前記ポリ（ｐ－ジオキサノン）セグメントＸのブロック長が、７～３５である、請求項１～９のいずれか１項に記載の剤形物。
11. 前記重合開始剤Ｙが、２～８個の炭素原子を有する脂肪族ジオールである、請求項１～１０のいずれか１項に記載の剤形物。
12. 前記重合開始剤Ｙが、エチレングリコール、１，２－プロパンジオール、１，３－プロパンジオール、１，４－ブタンジオール、１，３－ブタンジオール、２，３－ブタンジオール、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、ポリ（エチレングリコール）、１，５－ペンタンジオール、１，６－ヘキサンジオール、ネオペンチルグリコール、水素化されたビスフェノールＡ、及びグリセロールからなる群から選択される重合開始剤である、請求項１～１１のいずれか１項に記載の剤形物。
13. 前記プレポリマー（Ｂ）セグメントが、１３００ｇ／モル以上～７２００ｇ／モルの数平均分子量Ｍ_ｎを有する、請求項１～１２のいずれか１項に記載の剤形物。
14. 前記プレポリマー（Ｂ）セグメントが、１８００ｇ／モル～１００８０ｇ／モルの重量平均分子量Ｍ_ｗを有する、請求項１～１３のいずれか１項に記載の剤形物。
15. 前記コポリマー中の前記プレポリマー（Ｂ）セグメントの含量が、該マルチブロックコポリマーの総重量の５％～９５％である、請求項１～１４のいずれか１項に記載の剤形物。
16. 前記プレポリマー（Ａ）セグメントが、グリコリド、ラクチド（Ｄ及び／又はＬ）、ε－カプロラクトン、δ－バレロラクトン、トリメチレンカーボネート、テトラメチレンカーボネート、１，５－ジオキセパン－２－オン、１，４－ジオキサン－２－オン（ｐ－ジオキサノン）及び／又は環状無水物の反応産物を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の剤形物。
17. 前記環状無水物がオキセパン－２，７－ジオンである、請求項１６に記載の剤形物。
18. 前記プレポリマー（Ａ）が、グリコリド、ラクチド（Ｄ及び／又はＬ）、及び／又はε－カプロラクトンの反応産物を含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の剤形物。
19. プレポリマー（Ａ）の総重量の３０％以上が、水溶性ポリマーに由来する、請求項１～１８のいずれか１項に記載の剤形物。
20. 前記水溶性ポリマーが、ポリエーテルからなる群から選択される１以上を含む、請求項１９に記載の剤形物。
21. 前記水溶性ポリマーが、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリ（テトラメチレンオキシド）（ＰＴＭＯ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）、ポリ（ビニルカプロラクタム）、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）（ポリ－（ＨＥＭＡ））、ポリ（ホスファゼン）、ポリ（オルトエステル）、ポリ（オルトエステルアミド）、及びこれらのポリマーのうちのいずれかのコポリマーからなる群から選択される１以上を含む、請求項１９に記載の剤形物。
22. 前記水溶性ポリマーが、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（テトラメチレンオキシド）、ポリ（プロピレングリコール）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、及びポリ（ビニルカプロラクタム）の群から選択される１以上を含む、請求項１９に記載の剤形物。
23. 前記水溶性ポリマーが、ポリ（エチレングリコール）を含む、又はポリ（エチレングリコール）である、請求項１９に記載の剤形物。
24. 前記プレポリマー（Ａ）セグメントが、ポリ（ε－カプロラクトン）－ｃｏ－ＰＥＧ－ｃｏ－ポリ（ε－カプロラクトン）を含む、請求項１～２３のいずれか１項に記載の剤形物。
25. 前記プレポリマー（Ａ）セグメントが、５００ｇ／モル～１００００ｇ／モルの数平均分子量Ｍ_ｎを有する、請求項１～２４のいずれか１項に記載の剤形物。
26. 前記マルチブロックコポリマー中のプレポリマー（Ａ）の含量が、該マルチブロックコポリマーの総重量に対して、５％～９５％である、請求項１～２５のいずれか１項に記載の剤形物。
27. 前記多官能性鎖延長剤が、二官能性脂肪族鎖延長剤である、請求項１～２６のいずれか１項に記載の剤形物。
28. 前記多官能性鎖延長剤が、ジイソシアネートである、請求項１～２７のいずれか１項に記載の剤形物。
29. 前記多官能性鎖延長剤が、１，４－ブタンジイソシアネート又は１，６－ヘキサンジイソシアネートである、請求項１～２８のいずれか１項に記載の剤形物。
30. 前記剤形物がマイクロスフェアの形態である、請求項１～２９のいずれか１項に記載の剤形物。
31. 前記剤形物が、１μｍ～２００μｍの平均直径を有するマイクロスフェアの形態である、請求項１～３０のいずれか１項に記載の剤形物。
32. 請求項１～３１のいずれか１項に記載の剤形物であって、ここで、前記剤形物は、対象に投与されるものであり、前記マルチブロックコポリマーマトリックスが、２４時間以内に、該マルチブロックコポリマーマトリックス中に存在する、タンパク質若しくは抗体又はそれらの抗原結合性フラグメントの総重量に対して、タンパク質若しくは抗体又はそれらの抗原結合性フラグメントの２０％未満を放出する、前記剤形物。
33. 前記投与が、皮内、経皮、筋肉内、皮下、硝子体内、関節内、又は腫瘍内の注射を介する、請求項３２に記載の剤形物。
34. タンパク質若しくは抗体又はそれらの抗原結合性フラグメントを必要とする対象を処置することにおいて使用されるものである、請求項１～３１のいずれか１項に記載の剤形物。
35. タンパク質若しくは抗体又はそれらの抗原結合性フラグメントを必要とする対象を処置する際に使用する為の請求項１～３１のいずれか１項に記載の剤形物であって、前記剤形物を前記対象に投与することを含む、前記剤形物。
36. タンパク質若しくは抗体又はそれらの抗原結合性フラグメントの持続放出の為の、請求項１～３１のいずれか一項に記載の剤形物。