JP7744829B2 - 組み合わせ免疫調節及びその使用 - Google Patents

組み合わせ免疫調節及びその使用

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Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年３月２５日に出願した米国仮出願第６２／８２３，１８４号の利益を主張するものであり、これは参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
連邦政府支援の研究に関する声明文
本発明は、合衆国国立衛生研究所から与えられた助成金Ｒ３５ＧＭ１１９６７９による合衆国政府の援助を受けてなされたものである。政府は、本発明において特定の権利を有する。
本開示は、免疫系を調節するための、ならびにがん及び他の免疫障害を治療するための組成物及び方法に関する。
免疫療法は、様々な癌など、広範な疾患を治療するための革新的な戦略になっている。重要な免疫調節分子及び免疫のシグナルが治療剤として同定され、調製されるため、そのような治療剤の臨床的有効性は、周知である癌モデルを使用して試験することができる。免疫療法の戦略には、ワクチン、活性化細胞、抗体、サイトカイン、及びケモカインを投与することが含まれる。
腫瘍の成長及び転移は、宿主の免疫監視を回避し、宿主の防御に打ち勝つ能力に大きく依存する。ほとんどの腫瘍は、宿主の免疫系によって様々な程度で認識できる抗原を発現するが、多くの場合、免疫応答は不十分である。エフェクターＴ細胞の強力な活性化を誘発できないことは、腫瘍抗原の免疫原性が弱いか、または腫瘍細胞による共刺激分子の発現が不適切であるかもしくは欠如していることが原因であり得る。ほとんどのＴ細胞では、増殖及びＩＬ－２産生には、Ｔ細胞受容体の関与中に共刺激シグナルが必要である。必要でない場合、Ｔ細胞は機能的に無反応の状態に入り得る。
現在まで、免疫系を調節するための免疫療法剤として、多くの治療剤及び抗体が開発されてきた。必要なのは、がん及び他の免疫障害を治療するための免疫系を刺激するための新規組成物及び方法である。
本明細書に開示されるのは、がん及び他の免疫障害を治療するための免疫系を調節する組成物及び方法である。本発明者らは、驚くべきことに、共刺激分子をコードするｍＲＮＡが、共刺激分子に特異的に結合する抗体と共に投与された場合、この組み合わせが腫瘍療法及び全生存の改善をもたらすことを発見した。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、共刺激分子に特異的に結合する抗体、リガンド、またはそれらの抗原結合断片、及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子を含む組成物である。
いくつかの実施形態では、共刺激分子をコードするｍＲＮＡは、ナノ粒子によって内包化される。
いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＳＬＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ２２６、ガレクチン９、ＴＩＭ１、ＬＦＡ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＣＡＭ１、またはＬＦＡ３から選択される。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＯＸ４０を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）を含む。
いくつかの実施形態では、共刺激分子をコードするｍＲＮＡは、異種５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子をコードするｍＲＮＡは、異種３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）を含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、共刺激分子及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子に特異的に結合する、薬学的に許容される担体及び有効量の抗体、リガンド、またはその抗原結合断片を含む医薬組成物である。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、共刺激分子に特異的に結合する抗体、リガンド、またはそれらの抗原結合断片、及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子を含む、有効量の組成物を対象に投与することを含む、Ｔ細胞を刺激する方法である。
いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物である。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、それを必要とする対象に、共刺激分子及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子を特異的に結合する、有効量の抗体、リガンド、またはその抗原結合断片を投与することを含む、がんを治療する方法である。
いくつかの実施形態では、がんは、結腸直腸癌または黒色腫を含む。いくつかの実施形態では、本明細書の組成物は、局所腫瘍及び転移性腫瘍の両方を治療するために使用される。
いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物である。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
いくつかの実施形態では、本方法は、追加の治療剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、追加の免疫療法剤を含む。いくつかの実施形態では、免疫療法剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそれらの組み合わせから選択される。
添付の図面は、本明細書に援用されると共に、本明細書の一部を構成し、以下に説明するいくつかの態様を示す。
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）対照またはナノ粒子（ＮＰ）－ＯＸ４０ ｍＲＮＡで処理されたＥＧ．７－ＯＶＡ細胞を示す図である。ＯＸ４０陽性細胞は、フローサイトメトリーセルソーティング分析によって定量化した。 異なる治療後のＢ１６黒色腫移植マウスにおける腫瘍体積の変化（図２Ａ）及びマウス生存曲線（図２Ｂ）を示す図である。ＮＰ＋ＯＸ４０抗体及びＮＰ／ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋ＯＸ４０抗体：Ｐ＝０．００１０、ログランク検定。ＰＢＳｖｓＮＰ／ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋ＯＸ４０抗体：Ｐ＝０．０００２、ログランク検定。ＮＰはブランクＮＰを表し、ＮＰ／ＯＸ４０は、ＯＸ４０ ｍＲＮＡを含むＮＰを表す。 異なる治療後のＣＴ２６結腸癌マウス腫瘍モデルにおける腫瘍体積の変化を示す図である。マウスを、ＰＢＳ、ナノ粒子（ＮＰ）＋抗ＯＸ４０抗体、ナノ粒子（ＮＰ）／ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０抗体、及びナノ粒子（ＮＰ）／ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０抗体と共に処理した。ナノ粒子（ＮＰ）／ＯＸ４０ ｍＲＮＡは、抗ＯＸ４０抗体の６時間後に注入するか（注射間隔：６時間）、または、ナノ粒子（ＮＰ）／ＯＸ４０ ｍＲＮＡを抗ＯＸ４０抗体と同時に注射した（注射間隔：０時間）。ＮＰはブランクＮＰを表し、ＮＰ／ＯＸ４０は、ＯＸ４０ ｍＲＮＡを含むＮＰを表す。 図４Ａ～４Ｄは、Ｔ細胞媒介性癌免疫療法の刺激を示す図である。図４Ａは、共刺激受容体ｍＲＮＡを送達するナノ粒子を介して増強された抗体免疫療法と、その後共刺激受容体へのアゴニスト抗体（例えば、ＰＬ１－ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０抗体）の注射を示す。図４Ｂは、生体模倣化合物への代表的な合成経路：リン脂質及び糖脂質誘導体を示す。ｉ．Ｅｔ３Ｎ、トルエン、ＲＴ．ｉｉ．Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ、ＲＴ．ｉｉｉ．ＴＦＡ、ＣＨ２Ｃｌ２、ＲＴ．ｉｖ．アルデヒド、Ｅｔ３Ｎ、ＴＨＦ、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３。図４Ｃ～４Ｄは、リン脂質誘導体ＰＬ１～ＰＬ１８（図４Ｃ）、及び糖脂質誘導体ＧＬ１～ＧＬ１６（図４Ｄ）の構造を示す。 図５Ａ～図５Ｇは、ｍＲＮＡ送達のための生体模倣リン脂質由来及び糖脂質由来のナノ粒子を示す図である。図５Ａは、ホタルルシフェラーゼ（Ｆｌｕｃ）ｍＲＮＡをＥ．Ｇ７細胞に送達するリン脂質由来及び糖脂質由来のナノ粒子の発光強度を示している。図５Ｂは、ＰＬ１－ＯＸ４０ナノ粒子の低温電子顕微鏡画像を示している。スケールバー＝５０ｎｍ。図５Ｃは、ＰＬ１ナノ粒子により、ＧＦＰ ｍＲＮＡがＥ．Ｇ７細胞に送達されたことを示している。図５Ｄは、Ｅ．Ｇ７細胞におけるＰＬ１－ＣＤ１３７誘導性ＣＤ１３７発現を示している。図５Ｅは、ＥＧ．７細胞におけるＰＬ１－ＯＸ４０誘導性ＯＸ４０発現を示している。図５Ｆは、遊離ＧＦＰ ｍＲＮＡまたはＰＬ１－ＧＦＰの単回注射後のＢ１６Ｆ１０腫瘍におけるＧＦＰ発現のスキームを示す。図５Ｇは、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍におけるＧＦＰｍＲＮＡ（ｎ＝４）またはＰＬ１－ＧＦＰｍＲＮＡ（ｎ＝５）の単回腫瘍内注射後の、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＧＦＰ発現を示している。図５Ａ～図５Ｅのデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプルからのものである。すべてのデータは、平均±ＳＥＭとして表す。図５Ｃ、図５Ｄ、図５Ｅ及び図５Ｇの統計的有意性は、両側スチューデントｔ検定によって分析した。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１；ｎ．ｓ．，有意性なし。 図６Ａ～図６Ｄは、ＰＬ１－ＣＤ１３７ ｍＲＮＡ＋抗ＣＤ１３７抗体での治療後のＢ１６Ｆ１０及びＡ２０腫瘍の退行を示す図である。図６Ａ及び図６Ｂは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞をｓ．ｃ．移植したことを示している。ＰＢＳ、ＰＬ１＋抗ＣＤ１３７ ＡｂまたはＰＬ１－ＣＤ１３７＋抗ＣＤ１３７ Ａｂ治療後のマウス（ｎ＝１０／群）の腫瘍体積（図６Ａ）及び生存（図６Ｂ）。ＰＬ１－ＣＤ１３７（１０μｇ ｍＲＮＡ／マウス）及び抗ＣＤ１３７ Ａｂ（１６μｇ／マウス）。６回のｉ．ｔ．投与を隔日に行った。図６Ｃ及び図６Ｄは、ＢＡＬＢ／ｃマウスにＡ２０リンパ腫細胞をｓ．ｃ．移植したことを示している。ＰＢＳ（ｎ＝１０）、ＰＬ１＋抗ＣＤ１３７ Ａｂ（ｎ＝１２）またはＰＬ１－ＣＤ１３７＋抗ＣＤ１３７ Ａｂ（ｎ＝１２）治療したマウスの腫瘍体積（図６Ｃ）及び生存（図６Ｄ）。ＰＬ１－ＣＤ１３７（１０μｇ ｍＲＮＡ／マウス）及び抗ＣＤ１３７ Ａｂ（１６μｇ／マウス）。６回のｉ．ｔ．投与を隔日に行った。図６Ａ及び図６Ｃのデータは、平均±ＳＥＭとして表されている。ａ及びｃでの統計的有意性は、二元配置分散分析によって分析した。図６Ｂ及び図６Ｄの統計的有意性は、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定によって分析した。＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；ｎ．ｓ．，有意性なし。 図７Ａ～図７Ｄは、ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂでの治療後のＢ１６Ｆ１０及びＣＴ２６腫瘍の退行を示す図である。図７Ａ～図７Ｂは、Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を担持しているＣ５７ＢＬ／６マウスを示している。ＰＢＳ、ＰＬ１＋抗ＯＸ４０ ＡｂまたはＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂ治療による治療を受けたマウス（ｎ＝１０／群）の腫瘍体積（図７Ａ）及び生存（図７Ｂ）。ＰＬ１－ＯＸ４０（１０μｇ ｍＲＮＡ／マウス）及び抗ＯＸ４０ Ａｂ（８μｇ／マウス）。６回のｉ．ｔ．投与を隔日に行った。図７Ｃ～図７Ｄは、ＢＡＢＬ／ｃマウスにＣＴ２６結腸癌細胞を皮下移植したことを示している。ＰＢＳ、ＰＬ１＋抗ＯＸ４０ ＡｂまたはＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂによる治療を受けたマウス（ｎ＝１０～１１／群）の腫瘍体積（図７Ｃ）及び生存（図７Ｄ）。ＰＬ１－ＯＸ４０（１０μｇ ｍＲＮＡ／マウス）及び抗ＯＸ４０ Ａｂ（８μｇ／マウス）。６回のｉ．ｔ．投与を隔日に行った。図７Ａ及び図７Ｃのデータは、平均±ＳＥＭとして表されている。図７Ａ及び図７Ｃの統計的有意性は、二元配置分散分析によって分析した。図７Ｂ及び図７Ｄの統計的有意性は、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定によって分析した。＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。 図８Ａ～図８Ｈは、ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０抗体での治療後のＡ２０腫瘍の退行を示す図である。図８Ａは、Ａ２０マウス腫瘍モデル及び治療レジメンの概略図を示している。図８Ｂは、ＰＢＳ、ＰＬ１－ＯＸ４０（１０μｇ ｍＲＮＡ／マウス）、ＰＬ１＋抗ＯＸ４０ Ａｂ（８μｇ／マウス）、またはＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂの６回のｉ．ｔ．投与後の個々のマウス（ｎ＝８～１０）の腫瘍体積を示す。図８Ｃ及び図８Ｄは、腫瘍体積（図８Ｃ）及び全生存（図８Ｄ）を示す。図８Ｅは、ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂでの治療後の完全奏功（ｎ＝６）を有するマウスの再チャレンジを示す。図８Ｆは、ＰＢＳ（ｎ＝５）、ＯＸ４０ ｍＲＮＡ（ｎ＝５）、またはＰＬ１－ＯＸ４０（ｎ＝６）を単回ｉ．ｔ．注射した後のＣＤ８＋Ｔ細胞上のＯＸ４０の発現を評価するための治療計画を示す。図８Ｇ及び図８Ｈは、ＰＢＳ（ｎ＝５）、ＰＬ１＋抗ＯＸ４０ Ａｂ（ｎ＝４）、またはＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂ（ｎ＝６）をそれぞれ６回ｉ．ｔ．注射した後の免疫細胞分析（ＣＤ８＋、ＣＤ４＋Ｔ細胞、マクロファージ、ＤＣ）を示す。図８Ｃ、図８Ｆ及び図８Ｈのデータは、平均±ＳＥＭとして表されている。図８Ｃの統計的有意性は、二元配置分散分析によって分析した。図８Ｄの統計的有意性は、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定によって分析した。図８Ｆ及び図８Ｈの統計的有意性は、両側スチューデントｔ検定によって分析した。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１；ｎ．ｓ．，有意性なし。 図９Ａ～図９Ｊは、手術またはチェックポイント阻害剤と組み合わせたときに、ＰＬ１－ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０抗体の抗腫瘍効果を示す図である。図９Ａは、手術と組み合わせたＰＬ１－ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０ Ａｂの治療の概略図を示す（腫瘍体積＜５００ｍｍ３）。図９Ｂは、ＰＢＳ、抗ＯＸ４０（４０μｇ）またはＰＬ１－ＯＸ４０（ψ）＋抗ＯＸ４０ Ａｂ（ｎ＝１０）を６回ｉ．ｔ．注射した後の個々のマウス（ｎ＝１０／群）の腫瘍体積を示す。図９Ｃ及び図９Ｄは、マウスの腫瘍体積（図９Ｃ）及び生存（図９Ｄ）を示す。図９Ｅは、ＰＬ１－ＯＸ４０（ψ）＋抗ＯＸ４０（４０μｇ）を受けた後、残存腫瘍を除去するための手術（ｎ＝２）を受けたマウス対対照（ｎ＝５）マウスの再チャレンジ腫瘍体積を示す。図９Ｆは、抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂと組み合わせたＰＬ１－ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０ Ａｂの処理の概略図を示す。図９Ｇは、ＰＢＳ（ｎ＝１０）、抗マウスＰＤ－１＋抗マウスＣＴＬＡ－４ Ａｂ（ｎ＝１０）、またはＰＬ１－ＯＸ４０（ψ）＋抗ＯＸ４０（４０μｇ）、抗ＰＤ－１Ａｂ及び抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ（ｎ＝１０）の６回投与を隔日受けた個々のマウスの腫瘍体積を示す。抗マウスＰＤ－１＋抗マウスＣＴＬＡ－４Ａｂを３日ごとに６回ｉ．ｐ．注射した。図９Ｈ及び図９Ｉは、マウスの腫瘍体積（図９Ｈ）及び生存（図９Ｉ）を示す。図９Ｊは、ＰＬ１－ＯＸ４０（ψ）＋抗ＯＸ４０（４０μｇ）＋抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４抗体（ｎ＝６）対対照（ｎ＝７）による治療に完全奏効したマウスの再チャレンジ腫瘍体積を示す。図９Ｃ、図９Ｅ、図９Ｈ及び図９Ｊのデータは、平均±ＳＥＭとして表されている。図９Ｃ及び図９Ｈは、二元配置分散分析によって分析した。図９Ｄ及び図９Ｉの統計的有意性は、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定によって分析した。＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１；ｎ．ｓ．，有意性なし。 図１０Ａ～図１０Ｆは、肺転移マウスモデルにおいて抗腫瘍効果を示す図である。図１０Ａは、ＰＢＳ、抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ、またはＰＬ１－ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０ Ａｂ＋抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂの治療によるＢ１６Ｆ１０細胞の肺転移の概略図を示す。マウスは、ＰＢＳのｉ．ｐ．注射（ｎ＝７）、抗マウスＰＤ－１＋抗マウスＣＴＬＡ－４Ａｂのｉ．ｐ．注射（ｎ＝８）、またはＰＬ１－ＯＸ４０（ψ）のｉ．ｖ．注射＋抗ＯＸ４０（１００μｇ）のｉ．ｐ．内注射＋抗ＰＤ－１Ａｂ＋抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ（ｎ＝９）のｉ．ｐ注射を、矢印に示すとおり、３日ごとに受けた。図１０Ｂは、マウスの肺における代表的な黒色腫の転移を示している。図１０Ｃは、肺の重量を示している。図１０Ｄ～図１０Ｆは、それぞれ異なる治療（ｎ＝４、５、５）の肺におけるＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｆｏｘｐ３＋ＣＤ４＋（Ｔｒｅｇ）細胞の免疫細胞分析を示している。図１０Ｃ～図１０Ｆのデータは、平均±ＳＥＭとして表される。図１０Ｃ～図１０Ｆの統計的有意性は、両側スチューデントのｔ検定によって分析した。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１；ｎ．ｓ．、有意性なし。 生体模倣脂質及びリン脂質及び糖脂質誘導体の構造を示す図である。代表例としてのＰＬ１及びＧＬ１は、生体模倣ヘッド（リン酸ヘッドまたは糖ヘッド）、イオン化可能なアミノコア、及び複数の疎水性テールで構成されている。 図１２Ａ～図１２Ｃは、リン脂質由来及び糖脂質由来のナノ粒子の特性を示す図である。図１２Ａは、粒子サイズ（ｎｍ）及びＰＤＩを示している。図１２Ｂは、ゼータ電位（ｍＶ）を示している。図１２Ｃは、Ｆｌｕｃ ｍＲＮＡの捕捉効率を示している。すべてのデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプルからのものであり、平均±ＳＥＭとして表す。 ＰＬ１ナノ粒子のエンドサイトーシス経路を示す図である。Ｅ．Ｇ７－ＯＶＡ細胞は、５－（Ｎ－メチル－Ｎ－イソプロピル）アミロライド（ＥＩＰＡ）、クロルプロマジン塩酸塩（ＣＰＺ）、またはメチル－β－シクロデキストリン（ＭβＣＤ）で処理した。０．５時間後、細胞をＰＬ１－Ａｌｅｘａ－Ｆｌｕｏｒ６４７標識ＲＮＡナノ粒子で処理した。３時間後、細胞は、フローサイトメトリーによって分析した。すべてのデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプルからのものであり、平均±ＳＥＭとして表す。統計的有意性は、両側スチューデントのｔ検定によって分析した。＊Ｐ＜０．０５。 図１４Ａ～図１４Ｃは、ＧＦＰ ｍＲＮＡまたはＰＬ１－ＧＦＰ ｍＲＮＡの単回注射後のＢ１６Ｆ１０腫瘍におけるＧＦＰ発現を示す図である。腫瘍微小環境におけるＧＦＰｍＲＮＡ（ｎ＝４）及びＰＬ１－ＧＦＰｍＲＮＡ（ｎ＝５）の単回腫瘍内注射後のマクロファージ（図１４Ａ）及び樹状細胞（図１４Ｂ）。図１４Ｃのデータは、平均±ＳＥＭとして表す。統計的有意性は両側スチューデントのｔ検定によって分析した。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。 図１５Ａ及び図１５Ｂは、腫瘍成長曲線を示す図である。図１５Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下移植したことを示している。ＰＢＳ（ｎ＝１０）、ＰＬ１＋抗ＣＤ１３７Ａｂ（ｎ＝１０）またはＰＬ１－ＣＤ１３７＋抗ＣＤ１３７Ａｂ（ｎ＝１０）治療で治療された個々のマウスの腫瘍体積。ＰＬ１－ＣＤ１３７（１０μｇ ｍＲＮＡ／マウス）及び抗ＣＤ１３７ Ａｂ（１６μｇ／マウス）。隔日で６回投与するための腫瘍内注射。図１５Ｂは、ＢＡＬＢ／ｃマウスにＡ２０リンパ腫細胞を皮下移植したことを示している。ＰＢＳ（ｎ＝１０）、ＰＬ１＋抗ＣＤ１３７Ａｂ（ｎ＝１２）及びＰＬ１－ＣＤ１３７＋抗ＣＤ１３７Ａｂ（ｎ＝１２）、ＰＬ１－ＣＤ１３７（１０μｇｍＲＮＡ／マウス）、及び抗ＣＤ１３７（１６μｇ／マウス）で治療された個々のマウスの腫瘍体積。隔日で６回投与するための腫瘍内注射。 図１６Ａ及び図１６Ｂは、腫瘍成長曲線を示す図である。図１６Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下移植したことを示している。ＰＢＳ（ｎ＝１０）、ＰＬ１＋抗ＯＸ４０ Ａｂ（ｎ＝１０）またはＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂ（ｎ＝１０）で治療された個々の動物の腫瘍体積。ＰＬ１－ＯＸ４０（１０μｇ ｍＲＮＡ／マウス）及び抗ＯＸ４０ Ａｂ（８μｇ）。隔日で６回投与するための腫瘍内注射。図１６Ｂは、ＢＡＢＬ／ｃマウスにＣＴ２６細胞を皮下移植したことを示している。ＰＢＳ（ｎ＝１０）、ＰＬ１＋抗ＯＸ４０ Ａｂ（ｎ＝１１）及びＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂ（ｎ＝１１）で治療された個々の動物の腫瘍体積。ＰＬ１－ＯＸ４０（１０μｇ ｍＲＮＡ／マウス）及び抗ＯＸ４０ Ａｂ（８μｇ／マウス）。隔日で６回投与するための腫瘍内注射。 図１７Ａ～図１７Ｂは、免疫細胞集団及びサイトカインレベルの分析を示す図である。図１７Ａは、腫瘍微小環境におけるＰＢＳ（ｎ＝５）、ＯＸ４０ ｍＲＮＡ（ｎ＝５）またはＰＬ１－ＯＸ４０ ｍＲＮＡ（ｎ＝６）の単回腫瘍内注射後のＣＤ４＋Ｔ細胞、マイクロファージ及び樹状細胞の表面でのＯＸ４０発現を示す。図１７Ｂは、ＰＢＳ（ｎ＝５）、ＯＸ４０ ｍＲＮＡ（ｎ＝４）またはＰＬ１－ＯＸ４０ ｍＲＮＡ（ｎ＝６）の単回腫瘍内注射後のマウス血漿サイトカインレベルを示す。すべてのデータは、平均±ＳＥＭとして表す。統計的有意性として、両側スチューデントｔ検定によって分析した。＊Ｐ＜０．０１；＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１；ｎ．ｓ．，有意性なし。 ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂ治療の免疫療法に対するＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞枯渇の効果を示す図である。ＩｇＧ＋ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０（ｎ＝９）、抗マウスＣＤ８α＋ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０（ｎ＝９）、または抗マウスＣＤ４＋ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０（ｎ＝９）の腫瘍体積。すべてのデータは平均±ＳＥＭとして表す。統計的有意性は二元配置分散分析によって分析した。＊＊＊Ｐ＜０．００１。 腫瘍内治療の６回投与後の血漿サイトカインを示す図である。ＰＢＳ（ｎ＝５）、ＰＬ１＋抗ＯＸ４０（ｎ＝６）及びＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０（ｎ＝６）。データは、平均±ＳＥＭとして表す。統計的有意性として、両側スチューデントｔ検定によって分析した。ｎ．ｓ．，有意性なし。 図２０Ａ～図２０Ｂは、肺転移マウスモデルにおいて抗腫瘍効果を示す図である。２×１０５のＢ１６Ｆ１０細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに静脈内注射した。マウスは、ＰＢＳのｉ．ｐ．注射（ｎ＝７）、抗マウスＰＤ－１＋抗マウスＣＴＬＡ－４Ａｂ（Ｎ＝８）のｉ．ｐ．注射、またはＰＬ１－ＯＸ４０（ψ）のｉ．ｖ．注射＋抗ＯＸ４０（１００μｇ）のｉ．ｐ．注射＋抗ＰＤ－１Ａｂ＋抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ（ｎ＝９）のｉ．ｐ．注射を３日ごとに受けた。図２０Ａは、マウスの体重を示している。データは平均±ＳＤとして表す。図２０Ｂは、Ｂ１６Ｆ１０細胞のｉ．ｖ．注射後１９日目のマウス肺における黒色腫転移の画像を示す。 図２１Ａ～図２１Ｄは、ＰＬ１－ＯＸ４０のｉ．ｔ．注射及び抗ＯＸ４０抗体のｉ．ｐ．注射による治療後のＢ１６Ｆ１０腫瘍の退行を示す図である。図２１Ａは、Ｂ１６Ｆ１０マウス腫瘍モデル及び治療レジメンの概略図を示している。図２１Ｂは、ＰＢＳ、ＰＬ１－ＯＸ４０（ψ）（１０μｇｍＲＮＡ／マウス）の６回ｉ．ｔ．投与、及び抗ＯＸ４０ Ａｂ（１５０μｇ／マウス）の２回のｉ．ｐ．投与後の個々のマウス（ｎ＝１０／群）の腫瘍体積を示している。図２１Ｃ～２１Ｄは、腫瘍体積（図２１Ｃ）及び全生存（図２１Ｄ）を示す図である。図２１Ｃのデータは、平均±ＳＥＭとして表す。Ｃの統計的有意性は、二元配置分散分析によって分析した。図２１Ｄの統計的有意性は、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定によって分析した。＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１；ｎ．ｓ．，有意性なし。 フローサイトメトリー分析のためのゲーティング戦略を示す図である。細胞は、最初にＦＳＣ／ＳＳＣでゲートし、単一細胞を定義した。次に、ＣＤ４５陽性細胞、ＣＤ３陽性細胞、ＣＤ４／ＣＤ８陽性細胞、及びＯＸ４０／ＧＦＰ陽性細胞をゲートする。また、ＣＤ４５陽性細胞、ＣＤ１１ｂ陽性細胞、ＣＤ１１ｃ／Ｆ４／８０陽性細胞、及びＯＸ４０／ＧＦＰ陽性細胞をゲートする。
本明細書に開示されるのは、がん及び他の免疫障害を治療するための免疫系を調節する組成物及び方法である。
本発明の実施形態を詳細に参照するが、それらの例は、図面及び実施例に例証されている。しかし、本発明は、多くの異なる形態で具体化されてもよく、本明細書に記載される実施形態に限定されると解釈されるべきではない。
別途に定義されない限り、本明細書で使用するすべての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者に普通に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で使用される「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語及びその変形は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語及びその変形と同義に用いられ、限定されていない、非限定的な用語である。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語は、様々な実施形態を説明するために本明細書で使用されてきたが、「本質的にからなる」及び「からなる」という用語は、より具体的な実施形態を提供するために「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の代わりに使用している場合があり、また開示されている。本開示及び添付の特許請求の範囲に使用される、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈によりそうでないことが明確に示されない限り、複数形の指示対象を含む。
以下の定義は、本明細書で使用されている用語を完全に理解するために提供される。
用語
本明細書で使用される場合、「得る（ｍａｙ）」、「任意により（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」、「任意によりあり得る（ｍａｙ ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」という用語は同義的に使用され、この状態が発生する場合、及びこの状態が発生しない場合を含むことを意味する。したがって、例えば、製剤が「賦形剤を含み得る」という記述は、製剤が賦形剤を含む場合、ならびに製剤が賦形剤を含まない場合を含むことを意味する。
「プロモーター」または「調節エレメント」という用語は、転写開始から上流または下流に位置し、転写を開始するためのＲＮＡポリメラーゼ及び他のタンパク質の認識及び結合に関与する領域または配列決定因子を指す。プロモーターは、細菌起源である必要はなく、例えば、ウイルスまたは他の生物に由来するプロモーターは、本明細書に記載の組成物、システム、または方法で使用することができる。「調節エレメント」という用語は、プロモーター、エンハンサー、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、及び他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル及びポリＵ配列などの転写終結シグナル）を含むことを意図している。そのような調節エレメントは、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）に記載されている。調節エレメントとしては、多くのタイプの宿主細胞内でヌクレオチド配列の構成的発現を指示するもの、及びある特定の宿主細胞内でのみヌクレオチド配列の発現を指示するもの（例えば、組織特異的調節配列）が挙げられる。組織特異的プロモーターは、主に、筋肉、ニューロン、骨、皮膚、血液、特定の器官（例えば、肝臓、膵臓）、または特定の細胞型（例えば、リンパ球）などの所望の目的の組織において発現を指示し得る。調節エレメントはまた、細胞周期依存性または発生段階依存性の方法など、時間依存的方法で発現を指示することができ、これは組織または細胞型に特異的であっても、特異的でなくてもよい。いくつかの実施形態では、ベクターは、１つ以上のｐｏｌ ＩＩＩプロモーター（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上のｐｏｌ Ｉプロモーター）、１つ以上のｐｏｌ ＩＩプロモーター（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上のｐｏｌ ＩＩプロモーター）、１つ以上のｐｏｌ Ｉプロモーター（例えば、１、２、３、４、５、またはそれ以上のｐｏｌ Ｉプロモーター）、またはそれらの組み合わせを含む。ｐｏｌ ＩＩＩプロモーターの例としては、これらに限定されないが、Ｕ６及びＨ１プロモーターが挙げられる。ｐｏｌ ＩＩプロモーターの例としては、これらに限定されないが、レトロウイルス性ルース肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲプロモーター（任意によりＲＳＶエンハンサーを含む）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（任意によりＣＭＶエンハンサーを含む）［例えば、Ｂｏｓｈａｒｔ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ，４１：５２１－５３０（１９８５）を参照］、ＳＶ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸レダクターゼプロモーター、β－アクチンプロモーター、ホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、及びＥＦ１αプロモーターが挙げられる。「調節エレメント」という用語には、ＷＰＲＥなどのエンハンサーエレメント、ＣＭＶエンハンサー；ＨＴＬＶ－ＩのＬＴＲ内のＲ－Ｕ５’セグメント（Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．８（１），ｐ．４６６－４７２，１９８８）；ＳＶ４０エンハンサー；及びウサギβ－グロビンのエクソン２と３の間のイントロン配列（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，Ｖｏｌ．７８（３），ｐ．１５２７－３１，１９８１）も含む。発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、所望の発現レベルなどのような要因に依存し得ることが当業者によって理解されるであろう。
「組換え」という用語は、ヒト操作核酸（例えば、ポリヌクレオチド）もしくはヒト操作核酸（例えば、ポリヌクレオチド）の複製もしくは相補体を指し、またはタンパク質（すなわち、「組換えタンパク質」）に関しては、組換え核酸によってコードされるタンパク質（例えば、ポリヌクレオチド）を指す。実施形態において、第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）に操作可能に連結されたプロモーターを含む組換え発現カセットは、ヒト操作の結果として第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチドなど）に対して異種であるプロモーターを含み得る（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ－Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８９）またはＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅｓ１－３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９４－１９９８）に記載されている方法による）。別の例では、組換え発現カセットは、核酸（例えば、ポリヌクレオチド）が自然界に見出される可能性が非常に低いように組み合わされた核酸（例えば、ポリヌクレオチド）を含み得る。例えば、ヒトが操作する制限部位またはプラスミドベクター配列は、プロモーターを第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）に隣接させるかまたは分離させ得る。当業者であれば、核酸（例えば、ポリヌクレオチド）が多くの方法で操作され得、上記の例に限定されないことを認識するであろう。
「発現カセット」または「ベクター」という用語は、宿主細胞に導入されたときに、それぞれ、ＲＮＡまたはポリペプチドの転写及び／または翻訳をもたらす核酸コンストラクトを指す。実施形態において、第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）に操作可能に連結されたプロモーターを含む発現カセットは、ヒト操作の結果として第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチドなど）に対して異種であるプロモーターを含み得る（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ－Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８９）またはＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅｓ１－３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９４－１９９８）に記載されている方法による）。いくつかの実施形態では、第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）に操作可能に連結されたターミネーター（または終結配列）を含む発現カセットは、ヒト操作の結果として、第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）に対して異種であるターミネーターを含み得る。いくつかの実施形態では、発現カセットは、ヒト操作の結果として、第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）に操作可能に連結されたプロモーター及び第２の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）に操作可能に連結されたターミネーターを含む。いくつかの実施形態では、発現カセットは、内因性プロモーターを含む。いくつかの実施形態では、発現カセットは、内因性ターミネーターを含む。いくつかの実施形態では、発現カセットは、合成（または非天然）プロモーターを含む。いくつかの実施形態では、発現カセットは、合成（または非天然）ターミネーターを含む。
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈における「同一性」またはパーセント「同一性」という用語は、下記のデフォルトパラメータを使用したＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ２．０シーケンス比較アルゴリズムを使用して、または手動のアライメント及び目視検査によって測定された（例えば、ＮＣＢＩ Ｗｅｂサイトなどを参照）、同一であるか、または同一である特定のパーセンテージ（すなわち、比較ウィンドウまたは指定された領域で最大の対応を得るために比較し、アラインされた場合、指定された領域で、約６０％の同一性、好ましくは６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の同一性）のアミノ酸残基またはヌクレオチドを有する２つ以上の配列またはサブ配列を指す。そのような配列は、「実質的に同一」であると言われる。この定義は、試験配列の相補を指すか、または相補に適用され得る。この定義には、欠失及び／または付加を有する配列、ならびに置換を有する配列も含む。以下に記載のとおり、好ましいアルゴリズムは、ギャップなどを説明できる。好ましくは、同一性は、少なくとも約１０アミノ酸もしくは２０ヌクレオチド長である領域、またはより好ましくは、１０～５０アミノ酸もしくは２０～５０ヌクレオチド長である領域に存在する。本明細書で使用される場合、アミノ酸配列同一性パーセント（％）は、参照配列内のアミノ酸と同一である候補配列内のアミノ酸のパーセンテージとして定義され、配列をアラインさせ、必要に応じてギャップを導入した後、最大の配列同一性パーセントを得る。配列同一性パーセントを決定するための整列は、当該技術分野の技術範囲内の様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなど、公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成され得る。比較されている配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含め、アライメントを測定するための適切なパラメータは、既知の方法によって決定できる。
配列比較のために、典型的には、１つの配列が参照配列として機能し、これと試験配列を比較する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列及び参照配列をコンピュータに入力し、必要に応じてサブシーケンス座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。好ましくは、デフォルトのプログラムパラメータを使用することができるか、または代替的パラメータを指定することができる。その後、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを算出する。
配列同一性パーセント及び配列類似性を決定するために好適であるアルゴリズムの好ましい一例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムである（それぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２、及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０に記載されている）。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、全米バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を介して一般に利用可能である。このアルゴリズムは、まず、データベース配列における同じ長さのワードと整列するときに何らかの正値の閾値スコアＴと一致するかまたはそれを満たす、問い合わせ配列における長さの短いワードＷを特定することによって、高スコアの配列対（ＨＳＰ）を特定することを伴う。Ｔは、近傍のワードスコア閾値と称する（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０）。これらの最初の近傍のワードヒットは、それらを含むより長いＨＳＰを見出すために検索を開始するためのシード値として機能する。ワードヒットは、累積整列スコアが増加することができる限り、各配列に沿って両方向に延びる。累積スコアは、ヌクレオチド配列については、パラメータＭ（マッチする残基の対に対するリワードスコア；常に０超）及びＮ（ミスマッチの残基に対するペナルティスコア；常に０未満）を使用して算出する。アミノ酸配列については、スコア化マトリックスを使用して累積スコアを算出する。各方向へのワードヒットの拡張は、次の場合に停止される：累積整列スコアがその最大の実績値から量Ｘ分減少する場合、累積スコアが、１つ以上の負のスコアの残基整列の蓄積に起因してゼロ以下になる場合、またはいずれかの配列の終端に達する場合に停止する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、及びＸは、整列の感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、１１のワード長（Ｗ）、期待値（Ｅ）または１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両方の鎖の比較をデフォルトで使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、３のワード長、及び１０の期待値（Ｅ）、ならびに５０のＢＬＯＳＵＭ６２スコア化マトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ａｎｄ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９），Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，８９：１０９１５）整列（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両方の鎖の比較をデフォルトで使用する。
ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似性の統計的分析を行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７を参照のこと）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムが提供する類似性の１つの測定は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列の間の一致が偶然に起こり得る確率の指標を提供する。例えば、核酸は、試験核酸と参照核酸とを比較した際の最小合計確率が約０．２未満、より好ましくは約０．０１未満である場合に、参照配列に類似していると見なされる。
「コドン最適化」という句は、様々な宿主へのトランスフォーメーション用の核酸分子の遺伝子またはコード領域に関する場合、ＤＮＡによってコードされるポリペプチドを改変せずに、選択された生物の典型的なコドン使用頻度を反映するように、そのポリ核酸分子の遺伝子またはコード領域におけるコドンを改変することを指す。このような最適化としては、少なくとも１つ、２つ以上または有意な数のコドンを、選択された生物の遺伝子での使用頻度がより高い１つ以上のコドンに置き換えることが挙げられる。
核酸は、それが別の核酸配列と機能的な関係性に置かれるとき、「操作可能に連結」されている。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現する場合、ポリペプチドのＤＮＡに操作可能に連結しているか、プロモーターまたはエンハンサーは、それがコード配列の転写に影響を及ぼす場合、その配列に操作可能に連結しているか、あるいはリボソーム結合部位は、それが翻訳を促進するように配置されている場合、コード配列に操作可能に連結されている。概して、「操作可能に連結される」とは、連結されるＤＮＡ配列が互いに近接し、分泌リーダーの場合、連続的であり、リーディング相内にあることを意味する。しかし、操作可能に連結された核酸（例えば、エンハンサー及びコード配列）は、連続している必要はない。連結は、好都合な制限部位でのライゲーションによって達成される。かかる部位が存在していない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが、従来の慣例に従って使用される。実施形態では、プロモーターは、そのコード配列からのタンパク質の発現に影響を与える（例えば、プロモーターの非存在に対して調節する）ことができる場合（すなわち、コード配列がプロモーターの転写制御下にある場合）、コード配列と操作可能に連結される。
「核酸塩基」という用語は、ワトソン／クリックの塩基対形成機能を保有するヌクレオチドの部分を指す。最も一般的な天然の核酸塩基であるアデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、ウラシル（Ｕ）、シトシン（Ｃ）、及びチミン（Ｔ）は、ある核酸鎖を別の核酸鎖に配列特異的に結合する水素結合機能を保有する。
全体を通して使用されるとおり、「対象」（または「宿主」）とは、個体を意味する。したがって、「対象」には、例えば、ネコ、イヌなどの飼育動物、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど）、実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモットなど）、哺乳動物、非ヒト哺乳動物、霊長類、非ヒト霊長類、げっ歯類、トリ、爬虫類、両生類、魚、及び任意の他の動物を挙げることができる。対象は、霊長目またはヒトなどの哺乳動物であり得る。治療剤の投与は、対象の治療に有効な投与量及び期間で実施することができる。
量、パーセンテージなど測定可能な値を指すときに本明細書で使用される「約」という用語は、測定可能な値から±２０％、±１０％、±５％、または±１％の変動を包含することを意味する。
核酸配列は、それが外来種に由来する場合、または同じ種に由来する場合、その元の形態からのヒトの作用によって改変される場合、第２の核酸配列に対して「異種」である。例えば、コード配列に操作可能に連結された異種プロモーター（または異種５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ））は、プロモーターが由来したものとは異なる種からコード配列を指し、同じ種からである場合、天然に存在する対立遺伝子バリアントとは異なるコード配列（例えば、異なる遺伝子からの５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲは、共刺激分子をコードする核酸に操作可能に連結されている）を指す。
本明細書で使用される場合、対象の「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、疾患もしくは障害、または疾患もしくは障害の症状を治癒する（ｃｕｒｉｎｇ）、解消する（ｈｅａｌｉｎｇ）、緩和させる（ａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇ）、取り除く（ｒｅｌｉｅｖｉｎｇ）、変化させる、治療する、軽減する、改善する、安定化させるまたは影響を与える目的で対象へ薬物を投与することを含む。「治療する」及び「治療」という用語はまた、症状の重症度及び／または頻度の減少、症状及び／または根本的な原因の排除、及び損傷の改善または修復を指すこともある。
本明細書で使用される場合、対象における疾患、障害、または望ましくない生理学的事象の「予防」という用語は、疾患、障害、もしくは望ましくない生理学的事象の予防、または疾患、障害、もしくは望ましくない生理学的事象の症状の予防を指す。
剤の「有効量」とは、所望の効果を提供するのに十分な量の剤を指す。「有効」である剤の量は、対象の年齢及び全身状態、特定の剤（複数可）などの多くの要因に応じて、対象ごとに異なるであろう。したがって、定量化された「有効量」を常に指定できるとは限らない。しかし、任意の対象の場合における適切な「有効量」は、日常的な実験を使用して当業者によって決定され得る。また、本明細書で使用される場合、特に別段の記載がない限り、剤の「有効量」は、治療有効量及び予防有効量の両方を網羅する量を指すこともできる。治療効果を得るために必要な剤の「有効量」は、対象の年齢、性別、及び体重などの要因によって異なり得る。投薬量レジメンを調整して、最適な治療反応を提供することもできる。例えば、いくつかの分割用量が毎日投与され得るか、または用量は、治療状況の緊急性によって示されるように比例して減少され得る。
「薬学的に許容される」成分は、生物学的に望ましくないことはないか、または他の理由で望ましくないことはない成分を指すことができ、すなわち、この成分は、本発明の医薬製剤に組み込まれ、重大な望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、またはそれが含まれている製剤の他の成分のいずれかと有害な方法で相互作用することなく、本明細書に記載の対象に投与される。ヒトへの投与に関して使用される場合、この用語は一般に、成分が毒物学的試験及び製造試験の必要な基準を満たしていること、またはＵ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎによって作成された不活性成分ガイドに含まれていることを意味する。
「薬学的に許容される担体」（「担体」と呼ばれることもある）は、一般に安全かつ毒性のない医薬組成物または治療用組成物を調製する際に有用な担体または賦形剤を意味し、獣医及び／またはヒトの薬学的使用または治療的使用に許容される担体を含む。「担体」または「薬学的に許容される担体」という用語は、これらに限定されないが、リン酸緩衝生理食塩水、水、エマルジョン（油／水もしくは水／油エマルジョンなど）及び／または様々なタイプの湿潤剤を含むことができる。本明細書で使用される場合、「担体」という用語は、これらに限定されないが、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、脂質、安定剤、または医薬製剤中で使用するため、また本明細書にさらに記載の当技術分野において周知である他の材料を包含する。
「治療剤」は、有益な生物学的効果を有する任意の組成物を指す。有益な生物学的効果は、例えば、障害または他の望ましくない生理学的状態の治療などの治療効果と、例えば、障害または他の望ましくない生理学的状態の予防などの予防効果の両方を含む。これらの用語はまた、これらに限定されないが、塩、エステル、アミド、プロエージェント、活性代謝物、異性体、断片、類似体など、本明細書で具体的に言及される有益な剤の薬学的に許容される薬理学的に活性な誘導体を包含する。「治療剤」という用語が使用される場合、または特定の剤が具体的に特定される場合、その用語は、剤自体、ならびに薬学的に許容される薬理学的に活性な塩、エステル、アミド、プロエージェント、コンジュゲート、活性代謝物、異性体、断片、類似体などを含む。
本明細書で使用される場合、「制御放出」または「制御放出薬物送達」または「徐放」という用語は、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて所望の薬物動態プロファイルを達成するために、制御された方法で所与の剤形から薬物を放出するかまたは投与することを指す。「制御された」薬物送達の態様は、薬物放出の所望の動力学を確立するために、製剤及び／または剤形を操作する能力である。
本明細書で使用される「同時投与（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」、「併用投与」、「同時投与（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」または「同時に投与する」という句は、化合物が同じ時点でまたは互いに直後に投与されることを意味する。
「ポリペプチド」という用語は、Ｄ－アミノ酸もしくはＬ－アミノ酸の一本鎖、またはペプチド結合によって連結されたＤ－アミノ酸及びＬ－アミノ酸の混合物から構成される化合物を指す。
「抗体」という用語は、本明細書では広い意味で使用され、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の両方を含む。無傷の免疫グロブリン分子に加えて、「抗体」という用語にも含まれるのは、それらの免疫グロブリン分子の断片またはポリマー、ならびに免疫グロブリン分子またはその断片のヒト型またはヒト化型である。抗体は、本明細書に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを使用して、または類似の方法によって、それらの所望の活性について試験することができ、その後、それらのｉｎ ｖｉｖｏ治療及び／または予防活性を既知の臨床試験方法に従って試験する。ヒト免疫グロブリンには５つの主な種類：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ－１、ＩｇＧ－２、ＩｇＧ－３、及びＩｇＧ－４；ＩｇＡ－１、及びＩｇＡ－２にさらに分割され得る。当業者は、マウスの同等の種類を認識するであろう。異なる種類の免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）と呼ばれる。
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、抗体の実質的に均一な集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団内の個々の抗体は、抗体分子の小さいサブセット内に存在し得る、天然に存在する可能性のある突然変異を除いて同一である。本明細書におけるモノクローナル抗体には、重鎖及び／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一であるかまたは相同であり、その一方で、鎖（複数可）の残部は、それらが所望の拮抗活性を呈する限り、別の種に由来するか、または別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体、ならびにそのような抗体の断片における、対応する配列と同一であるかまたは相同である、「キメラ」抗体が具体的に含まれる。
開示されたモノクローナル抗体は、モノクローナル抗体を産生する任意の手順を使用して作製することができる。例えば、開示されたモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって記載されたものなどのハイブリドーマ法を使用して調製することができる。ハイブリドーマ法において、マウスまたは他の適切な宿主動物は、典型的に、免疫剤で免疫付与され、免疫剤に特異的に結合する抗体を生成するか、または生成することができるリンパ球を引き出す。代替として、リンパ球は生体外で免疫付与され得る。
モノクローナル抗体はまた、組換えＤＮＡ法によって作製され得る。本開示のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることにより）容易に単離及び配列決定することができる。抗体または活性抗体断片のライブラリーはまた、例えば、米国特許第５，８０４，４４０号（Ｂｕｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）、及び米国特許第６，０９６，４４１号（Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．）に記載されているとおり、ファージディスプレイ技術を使用して生成し、スクリーニングすることができる。
Ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法も、一価抗体を調製するために適している。その断片、特にＦａｂ断片を生成するための抗体の消化は、当該技術分野において周知のルーチン技法を用いて達成することができる。例えば、消化は、パパインを用いて行われることができる。パパイン消化の例は、１９９４年１２月２２日に公開されたＷＯ９４／２９３４８及び米国特許第４，３４２，５６６号に記載されている。抗体のパパイン消化は、典型的に、それぞれが単一の抗原結合部位を有するＦａｂ断片、及び残基Ｆｃ断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片を生成する。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有し、かつ依然として抗原を架橋することができる断片が生成される。
本明細書で使用される場合、「抗体またはその抗原結合断片」または「抗体またはその断片」という用語は、二重または複数の抗原またはエピトープ特異性を有するキメラ抗体及びハイブリッド抗体、ならびにＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓＦｖ、ｓｃＦｖの断片など、例えばハイブリッド断片を包含する。したがって、抗体の断片であって、その特異的抗原に結合する能力を保持する抗体の断片が提供される。例えば、結合活性を維持する抗体の断片は、抗体またはその抗体結合断片という用語の意味内に含まれる。このような抗体及び断片は、当該技術分野において周知の技法により製造することができ、実施例に記載の方法、及び抗体を生成し、特異性及び活性について抗体をスクリーニングするための一般的な方法に従って、特異性及び活性についてスクリーニングすることができる（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８８）を参照のこと）。
「抗体またはその抗原結合断片」の意味には、抗体断片及び抗原結合タンパク質（単鎖抗体）のコンジュゲートも含まれる。「抗体またはその抗原結合断片」の意味には、例えばナノボディなどの免疫グロブリン単一可変ドメインも含まれる。
断片は、抗体または断片の活性が、非修飾抗体または抗体断片と比較して、有意に変化しているかまたは障害されていない限り、他の配列に付着されるか否かに関わらず、特定の領域または特定のアミノ酸残基の挿入、欠失、置換、または他の選択される修飾も含むことができる。これらの修飾は、ジスルフィド結合が可能なアミノ酸の除去／付加、その生体寿命の延長、その分泌特性の変更など、いくつかの追加の特性を提供することができる。いずれの場合も、抗体または抗体断片は、その同族抗原への特異的結合など、生物活性を有するものとする。抗体または抗体断片の機能的領域または活性領域は、タンパク質の特定領域の突然変異誘発、続いて発現及び発現したポリペプチドの検査により特定され得る。このような方法は、当業者には容易に明らかであり、抗体または抗体断片をコードする核酸の部位特異的突然変異誘発を含むことができる（Ｚｏｌｌｅｒ，Ｍ．Ｊ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：３４８－３５４，１９９２）。
本明細書で使用される場合、「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」または「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」という用語はまた、ヒト抗体及び／またはヒト化抗体を指すことができる。多くの非ヒト抗体（例えば、マウス、ラット、またはウサギに由来するもの）は、ヒトにおいて自然に抗原性であり、したがって、ヒトに投与された場合、望ましくない免疫応答を引き起こし得る。したがって、これらの方法におけるヒト抗体またはヒト化抗体の使用は、ヒトに投与された抗体が望ましくない免疫応答を引き起こす機会を減少させるのに役立つ。
本明細書で使用される「核酸」という用語は、ヌクレオチド、例えば、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドから構成されるポリマーを意味する。
本明細書で使用される「リボ核酸」及び「ＲＮＡ」という用語は、リボヌクレオチドから構成されるポリマーを意味する。
本明細書で使用される「デオキシリボ核酸」及び「ＤＮＡ」という用語は、デオキシリボヌクレオチドから構成されるポリマーを意味する。
「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチドモノマーから構成される一本鎖または二本鎖ポリマーを指す。
組成物及び方法
いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、共刺激分子に特異的に結合する抗体、リガンド、またはそれらの抗原結合断片、及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子を含む組成物である。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、共刺激分子に特異的に結合する抗体、またはそれらの抗原結合断片、及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子を含む組成物である。
いくつかの実施形態では、共刺激分子をコードするｍＲＮＡは、ナノ粒子によって内包化される。
いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、リン脂質または糖脂質を含む。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、リン脂質を含む。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、糖脂質を含む。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＰＬ１～ＰＬ１８からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＰＬ１である。いくつかの実施形態では、糖脂質は、ＧＬ１～ＧＬ１６からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、糖脂質は、ＧＬ４である。
いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＳＬＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ２２６、ガレクチン９、ＴＩＭ１、ＬＦＡ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＣＡＭ１、またはＬＦＡ３から選択される。
いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＯＸ４０を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ３０を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ２を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７－Ｈ２を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７－１を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７－２を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ７０を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ４０を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、４－１ＢＢＬを含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＯＸ４０Ｌを含む。
共刺激分子の配列としては、例えば（ヒト配列の場合）、ＩＣＯＳ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０１２０９２．３）、ＣＤ２８（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００６１３９．４）、ＣＤ２７（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２４２．４）、ＨＶＥＭ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３８２０．３）、ＬＩＧＨＴ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３８０７．４）、ＣＤ４０Ｌ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００００７４．２）、４－１ＢＢ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１５６１．５）、ＯＸ４０（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３３２７．４）、ＤＲ３（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿１４８９６５．１）、ＧＩＴＲ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００４１９５．３）、ＣＤ３０（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｍ８３５５４．１）、ＳＬＡＭ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３０３７．４）、ＣＤ２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１３２８６０９．１）、ＣＤ２２６（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００６５６６．３）、ガレクチン－９（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＢ０４０１３０．２）、ＴＩＭ１（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｕ０２０８２．１）、Ｂ７－Ｈ２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０１５２５９．５）、Ｂ７－１（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００５１９１．４）、Ｂ７－２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿１７５８６２．５）、ＣＤ７０（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２５２．５）、ＣＤ４０（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２５０．５）、４－１ＢＢＬ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３８１１．４）、ＯＸ４０Ｌ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３３２６．５）、ＴＬ１Ａ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００５１１８．４）、ＧＩＴＲＬ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＹ３５８８６８．１）、ＣＤ３０Ｌ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２４４．３）、ＳＬＡＭ（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｕ３３０１７．１）、ＣＤ４８（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１７７８．４）、ＣＤ５８（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１７７９．３）、ＣＤ１５５（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００６５０５．５）、ＣＤ１１２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１０４２７２４．２）、ＴＩＭ３（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦ４５０２４２．１）、ＴＩＭ４（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿１３８３７９．３）、ＩＣＡＭ１（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿０００２０１．３）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、共刺激分子に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、ＢＭＳ９８６１７８である。いくつかの実施形態では、共刺激分子に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、ＧＳＫ３１７４９９８である。いくつかの実施形態では、共刺激分子に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、ＰＦ－０４５１８６００である。いくつかの実施形態では、共刺激分子に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、ＭＯＸＲ０９１６である。いくつかの実施形態では、共刺激分子に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、ＰＦ－０４５１８６００である。いくつかの実施形態では、共刺激分子に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、ＭＥＤＩ６３８３である。いくつかの実施形態では、共刺激分子に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、ＭＥＤＩ０５６２である。いくつかの実施形態では、共刺激分子に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、ＩＮＣＡＧＮ０１９４９である。いくつかの実施形態では、共刺激分子に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、ＩｎＶｉｖｏＰｌｕｓ抗マウスＯＸ４０（クローンＯＸ－８６）（会社：ＢｉｏＸｃｅｌｌ、カタログ：ＢＰ００３１）である。
共刺激分子に特異的に結合する追加の抗体またはその抗原結合断片としては、例えば、：マウスでは、ＩｎＶｉｖｏＰｌｕｓ抗－マウス４－１ＢＢ （ＣＤ１３７）（クローンＬＯＢ１２．３）（会社：ＢｉｏＸｃｅｌｌ、カタログ：ＢＰ０１６９）、ＩｎＶｉｖｏＰｌｕｓ抗－マウスＣＤ４０（クローンＦＧＫ４．５／ＦＧＫ４５）（会社：ＢｉｏＸｃｅｌｌ、カタログ：ＢＰ００１６－２）；ヒトでは、抗ヒトＯＸ４０、ＢＭＳ９８６１７８、ＧＳＫ３１７４９９８、ＰＦ－０４５１８６００、ＭＯＸＲ０９１６、ＰＦ－０４５１８６００，ＭＥＤＩ６３８３、ＭＥＤＩ０５６２、ＩＮＣＡＧＮ０１９４９；抗ヒト４－１ＢＢ，ウトミルマブ、ウレルマブ；抗ヒトＣＤ４０、ＣＰ－８７０８９３、ＡＰＸ００５Ｍ，ＡＤＣ－１０１３、ＪＮＪ－６４４５７１０７、ＳＥＡ－ＣＤ４０、ＲＯ７００９７８９を挙げることができる。
いくつかの実施形態では、共刺激分子をコードするｍＲＮＡは、異種５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子をコードするｍＲＮＡは、異種３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される核酸（例えば、共刺激分子をコードするｍＲＮＡ）は、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドは、化学的に修飾された核酸塩基、化学的に修飾されたリボース、化学的に修飾されたホスホジエステル連結、またはそれらの組み合わせを含む。
一実施形態では、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドは、化学的に修飾された核酸塩基である。
一実施形態では、化学的に修飾された核酸塩基は、５－ホルミルシチジン（５ｆＣ）、５－メチルシチジン（５ｍｅＣ）、５－メトキシシチジン（５ｍｏＣ）、５－ヒドロキシシチジン（５ｈｏＣ）、５－ヒドロキシメチルシチジン（５ｈｍＣ）、５－ホルミルウリジン（５ｆＵ）、５－メチルウリジン（５－ｍｅＵ）、５－メトキシウリジン（５ｍｏＵ）、５－カルボキシメチルエステルウリジン（５ｃａｍＵ）、シュードウリジン（Ψ）、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍｅ１Ψ）、Ｎ６－メチルアデノシン（ｍｅ６Ａ）、またはチエノグアノシン（ｔｈＧ）から選択される。
いくつかの実施形態では、化学的に修飾された核酸塩基は、５－メトキシウリジン（５ｍｏＵ）である。いくつかの実施形態では、化学的に修飾された核酸塩基は、シュードウリジン（Ψ）である。いくつかの実施形態では、化学的に修飾された核酸塩基は、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１Ψ）である。
これらの修飾核酸塩基の構造を以下に示す：
一実施形態では、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドは、化学的に修飾されたリボースである。
一実施形態では、化学的に修飾されたリボースは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）、２’－フルオロ（２’－Ｆ）、２’－デオキシ－２’－フルオロ－ベータ－Ｄ－アラビノ－核酸（２’Ｆ－ＡＮＡ）、４’－Ｓ、４’－ＳＦＡＮＡ、２’－アジド、ＵＮＡ、２’－Ｏ－メトキシ－エチル（２’－Ｏ－ＭＥ）、２’－Ｏ－アリル、２’－Ｏ－エチルアミン、２’－Ｏ－シアノエチル、ロックされた核酸（ＬＡＮ）、メチレン－ｃＬＡＮ、Ｎ－ＭｅＯ－アミノＢＮＡ、またはＮ－ＭｅＯ－アミノオキシＢＮＡから選択される。一実施形態では、化学的に修飾されたリボースは、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）である。一実施形態では、化学的に修飾されたリボースは、２’－フルオロ（２’－Ｆ）である。
これらの修飾リボースの構造を以下に示す：
一実施形態では、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドは、化学的に修飾されたホスホジエステル連結である。
一実施形態では、化学的に修飾されたホスホジエステル連結は、ホスホロチオエート（ＰＳ）、ボラノホスフェート、ホスホジチオエート（ＰＳ２）、３’，５’－アミド、Ｎ３’－ホスホルアミデート（ＮＰ）、ホスホジエステル（ＰＯ）、または２’，５’－ホスホジエステル（２’，５’－ＰＯ）から選択される。一実施形態では、化学的に修飾されたホスホジエステル連結は、ホスホロチオエートである。
これらの修飾ホスホジエステル連結の構造を以下に示す：
いくつかの実施形態では、組成物は、免疫療法剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、免疫療法剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそれらの組み合わせから選択される。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、共刺激分子及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子に特異的に結合する、薬学的に許容される担体及び有効量の抗体、リガンド、またはその抗原結合断片を含む医薬組成物である。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、共刺激分子及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子に特異的に結合する、薬学的に許容される担体及び有効量の抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物である。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、それを必要とする対象に、共刺激分子及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子を特異的に結合する、有効量の抗体、リガンド、またはその抗原結合断片を投与することを含む、がんを治療する方法である。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、それを必要とする対象に、共刺激分子及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子を特異的に結合する、有効量の抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、がんを治療する方法である。
いくつかの実施形態では、共刺激分子をコードするｍＲＮＡは、ナノ粒子によって内包化される。
使用されるナノ粒子は、核酸の送達に有用な任意のナノ粒子であり得る。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は脂質様ナノ粒子を含む。例えば、ＷＯ／２０１６／１８７５３１Ａ１、ＷＯ／２０１７／１７６９７４、ＷＯ／２０１９／０２７９９９、またはＬｉ，Ｂ ｅｔ ａｌ．Ａｎ Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ａｒｒａｙ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐｉｄ－ｌｉｋｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｍＲＮＡ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｎａｎｏ Ｌｅｔｔ．２０１５，１５，８０９９－８１０７を参照のこと；これらは参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ナノ粒子（または送達剤）は、脂質二重層またはリポソームを含むことができる。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、ポリマー、例えば、生分解性ポリマーを含むことができる。ポリマーとしては、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリエチレンオキシド（ＰＥＧ）などのポリアルキレンオキシド、ポリ無水物、ポリ（エステル無水物）、ポリラクチド（ＰＬＡ）などのポリヒドロキシ酸、ポリグリコリド（ＰＧＡ）、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）、ポリ－３－ヒドロキシブチレート（ＰＨＢ）及びそれらのコポリマー、ポリ－４－ヒドロキシブチレート（Ｐ４ＨＢ）及びそれらのコポリマー、ポリカプロラクトン及びそれらのコポリマー、ならびにそれらの組み合わせなどの生安定性及び生分解性ポリマーの両方を挙げることができる。
いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＳＬＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ２２６、ガレクチン９、ＴＩＭ１、ＬＦＡ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＣＡＭ１、またはＬＦＡ３から選択される。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＯＸ４０を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）を含む。
いくつかの実施形態では、共刺激分子をコードするｍＲＮＡは、単離される。いくつかの実施形態では、共刺激分子をコードするｍＲＮＡは、組み換え型である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、単離される。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、組み換え型である。いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。
いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、結腸直腸癌、肺癌、結腸癌、またはリンパ腫を含む。いくつかの実施形態では、がんは、結腸直腸癌または黒色腫を含む。いくつかの実施形態では、がんは、結腸直腸癌である。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫である。いくつかの実施形態では、本明細書の組成物は、局所腫瘍及び転移性腫瘍の両方を治療するために使用される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法は、がんの転移または再発を治療するかまたは予防するために有用である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法は、切除された固形腫瘍の再発の予防に有用である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法は、切除された固形腫瘍の転移の予防に有用である。
一態様では、本明細書に記載の方法は、癌、例えば、とりわけ、黒色腫、肺癌（肺腺癌、基底細胞癌、扁平上皮癌、大細胞癌、気管支肺胞癌、気管支原性癌、非小細胞癌、小細胞癌、中皮腫など）；乳癌（乳管癌、小葉癌、炎症性乳癌、明細胞癌、粘液性癌、漿膜腔乳癌など）；結腸直腸癌（結腸癌、直腸癌、結腸直腸腺癌）；肛門癌；膵癌（膵臓腺癌、膵島細胞癌、神経内分泌腫瘍など）；前立腺癌；前立腺腺癌；卵巣癌（卵巣上皮癌または漿液性腫瘍を含む表面上皮間質腫瘍、類内膜腫瘍及び粘液性嚢胞腺癌、性索間質性腫瘍）；肝臓及び胆管癌（肝細胞癌、胆管癌、血管腫など）；食道癌（食道腺癌及び扁平上皮癌など）；口腔及び中咽頭扁平上皮癌；唾液腺アデノイド嚢胞性癌；膀胱癌；膀胱癌腫；子宮癌（子宮内膜腺癌を含む、眼、子宮体部漿液性癌、子宮体部明細胞癌、子宮肉腫、平滑筋肉腫、ミューラー管混合腫瘍）；神経膠腫、膠芽腫、髄芽腫、及び脳の他の腫瘍；腎臓癌（腎細胞癌、明細胞癌、ウィルムス腫瘍など）；頭頸部癌（扁平上皮癌など）；胃の癌（胃癌、胃腺癌、消化管間質腫瘍）；精巣腫瘍；胚細胞腫瘍；神経内分泌腫瘍；子宮頸癌；胃腸管のカルチノイド、胸、及び他の臓器；印環細胞癌；肉腫などの間葉系腫瘍、線維肉腫、血管腫、血管腫症、血管周囲細胞腫、偽血管腫性間質性過形成、筋線維芽細胞腫、線維腫症、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、脂肪腫、血管脂肪腫、顆粒細胞腫、神経線維腫、神経鞘腫、血管肉腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、平滑筋腫、平滑筋肉腫、皮膚、黒色腫など、頸部、網膜芽細胞腫、頭頸部癌、膵臓、脳、甲状腺、精巣、腎臓、膀胱、軟部組織、副腎、尿道、陰茎癌、粘液肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、悪性線維性組織球腫、リンパ管肉腫、中皮腫、扁平上皮癌；類表皮癌、悪性皮膚付属器腫瘍、腺癌、ヘパトーマ、肝細胞癌、腎細胞癌、副腎腫、胆管癌、移行上皮癌、絨毛癌、セミノーマ、胎児性細胞癌、退形成性神経膠腫；多形性膠芽腫、神経芽細胞腫、髄芽腫、悪性髄膜腫、悪性神経鞘腫、神経線維肉腫、副甲状腺癌、甲状腺髄様癌、気管支カルチノイド、褐色細胞腫、膵島細胞癌、悪性カルチノイド、悪性傍神経節腫、黒色腫、メルケル細胞新生物、葉状嚢胞肉腫、唾液癌、胸腺癌、膣癌を治療するために使用される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法は、がんを治療するかまたは予防するのに有用である。場合によっては、がんは、循環癌細胞（循環腫瘍細胞）である。場合によっては、がんは、転移性癌細胞である。
いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物である。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片及びナノ粒子は、筋肉内注射によって投与されるかまたは全身投与される。
いくつかの実施形態では、本方法は、追加の治療剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、追加の免疫療法剤を含む。いくつかの実施形態では、免疫療法剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそれらの組み合わせから選択される。
一実施形態では、免疫療法剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、またはアベルマブから選択される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）（Ｒｏｃｈｅ）である。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）である。一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アベルマブ（ＭＳ００１０７１８Ｃ）である。
一実施形態では、免疫療法剤は、プログラム死タンパク質１（ＰＤ－１）阻害剤またはプログラム死タンパク質リガンド１もしくは２阻害剤である。ＰＤ－１阻害剤は、当技術分野において公知であり、例えば、ニボルマブ（ＢＭＳ）、ペムブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）、ピジリズマブ（ＣｕｒｅＴｅｃｈ／Ｔｅｖａ）、ＡＭＰ－２４４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ／ＧＳＫ）、ＢＭＳ－９３６５５９（ＢＭＳ）、及びＭＥＤＩ４７３６（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）が挙げられる。
一実施形態では、免疫療法剤は、抗ＰＤ１抗体である。一実施形態では、抗ＰＤ１抗体は、ニボルマブである。一実施形態では、抗ＰＤ１抗体は、ペムブロリズマブである。
一実施形態では、免疫療法剤は、抗ＣＴＬＡ４抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体は、イピリムマブである。
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、抗新生物剤である。例えば、抗新生物剤としては、アビラソンアセテート、アビトレキサート（メトレセレート）、アブラキサン（パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤）、アブラキサン、ＡＢＶＤ、ＡＢＶＥ、ＡＢＶＥ－ＰＣ、ＡＣ、ＡＣ－Ｔ、アドセトリス（ブレンツキシマブベドチン）、ＡＤＥ、トラスツズマブエムタンシン（Ａｄｏ－Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ Ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）、アドリアマイシン（ドキソルビシン塩酸塩）、Ａｄｒｕｃｉｌ（フルオロウラシル）、アファチニブニマレイン酸塩、アフィニトール（エベロリムス）、アキンゼオ（ネツピタント・パロノセトロン塩酸塩）、アルダラ（イミキモド）、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリムタ（ペメトレキセド二ナトリウム）、アロキシ（パロノセトロン塩酸塩）、アンボクロリン（クロラムブシル）、アンボクロリン（クロラムブシル）、アミノレブリン酸、アナストロゾール、アプレピタント、アレディア（パミドロン酸二ナトリウム）、アリミデックス（アナストロゾール）、アロマシン（エキセメスタン）、アラノン（ネララビン）、三酸化砒素、アーゼラ（オファツムマブ）、アスパラギナーゼエルウィニアクリサンチミー、アバスチン（ベバシズマブ）、アキシチニブ、アザシチジン、ＢＥＡＣＯＰＰ、ベセナム（カルムスチン）、ベレオダク（ベリノスタット）、ベリノスタット、ベンダムスチン塩酸塩、ＢＥＰ、ベバシズマブ、ベキサロテン、Ｂｅｘｘａｒ（トシツモマブ及びヨウ素Ｉ １３１ トシツモマブ）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ（カルムスチン）、ブレオマイシン、ブリナツモマブ、ビーリンサイト（ブリナツモマブ）、ボルテゾミブ、ボシュリフ（ボスチニブ）、ボスチニブ、ブレンツキシマブベドチン、ブスルファン、ブスルフェクス（ブスルファン）、カバジタキセル、カボザンチニブｓ－リンゴ酸塩、ＣＡＦ、キャンパス（アレムツズマブ）、カンプトサール（イリノテカン塩酸塩）、カペシタビン、ＣＡＰＯＸ、カルボプラチン、カルボプラチン－タキソール、カルフィルゾミブ、カルムブリス（カルムスチン）、カルムスチン、カルムスチンインプラント、カソデックス（ビカルタミド）、ＣｅｅＮＵ（ロムスチン）、セリチニブ、セルビジン（ダウノルビシン塩酸塩）、サーバリックス（組換えＨＰＶ二価ワクチン）、セツキシマブ、クロラムブシル、クロラムブシル－プレドニゾン、ＣＨＯＰ、シスプラチン、Ｃｌａｆｅｎ（シクロホスファミド）、クロファラビン、クロファレックス（クロファラビン）、クロラール（クロファラビン）、ＣＭＦ、Ｃｏｍｅｔｒｉｑ（カボザンチニブｓ－リンゴ酸塩）、ＣＯＰＰ、ＣＯＰＰ－ＡＢＶ、コスメゲン（ダクチノマイシン）、クリゾリブ、ＣＶＰ、シクロホスファミド、Ｃｙｆｏｓ（イホスファミド）、サイラムザ（ラムシルマブ）、シタラビン、シタラビン、リポソーム、シトサールＵ（シタラビン）、シクロキサン（シクロホスファミド）、ダブラフェニブ、ダカルバジン、Ｄａｃｏｇｅｎ（デシタビン）、ダクチノマイシン、ダサチニブ、ダウノルビシン塩酸塩、デシタビン、デガレリクス、デニロイキンディフティトックス、デノスマブ、ＤｅｐｏＣｙｔ（リポソームシタラビン）、ＤｅｐｏＦｏａｍ（リポソームシタラビン）、デクスラゾキサン塩酸塩、ジヌツキシマブ、ドセタキセル、ドキシル（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ドキソルビシン塩酸塩、ドキソルビシン塩酸塩リポソーム、Ｄｏｘ－ＳＬ（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（ダカルバジン）、Ｅｆｕｄｅｘ（フルオロウラシル）、エリテック（ラスブリカーゼ）、エレンス（エピルビシン塩酸塩）、エロキサチン（オキサリプラチン）、エルトロンボパグオラミン、Ｅｍｅｎｄ（アプレピタント）、エンザルタミド、エピルビシン塩酸塩、ＥＰＯＣＨ、アービタックス（セツキシマブ）、エリブリンメシル酸塩、Ｅｒｉｖｅｄｇｅ（ビスモデギブ）、エルロチニブ塩酸塩、エルウィナーゼ（アスパラギナーゼエルウィニアクリサンチミー）、エトポホス（エトポシドリン酸）、エトポシド、エトポシドリン酸塩、ｅｖａｃｅｔ（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、エベロリムス、エビスタ（ラロキシフェン塩酸塩）、エキセメスタン、フェアストン（トレミフェン）、ファリーダック（パノビノスタット）、フェソロデックス（フルベストラント）、ＦＥＣ、フェマーラ（レトロゾール）、フィルグラスチム、フルダラ（フルダラビンリン酸塩）、フルダラビンリン酸塩フルオロプレックス（フルオロウラシル）、フルオロウラシル、Ｆｏｌｅｘ （メトトレキサート）、Ｆｏｌｅｘ ＰＦＳ（メトトレキサート）、ＦＯＬＦＩＲＩ、ＦＯＬＦＩＲＩ－ベバシズマブ、ＦＯＬＦＩＲＩ－セツキシマブ、ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ、ＦＯＬＦＯＸ、Ｆｏｌｏｔｙｎ（プララトレキサート）、ＦＵ－ＬＶ、フルベストラントガルダシル（組換えＨＰＶ Ｑｕａｄｒａｉｖｅｒｔワクチン）、ガルダシル９（組換えＨＰＶ非価ワクチン）、ゲフィチニブ、ゲムシタビン塩酸塩、ゲムシタビン－シスプラチン、ゲムシタビン－オキサリプラチン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ジェムザール（ゲムシタビン塩酸塩）、ジオトリフ（ジマレイン酸アファチニブ）、グリベック（イマチニブメシレート）、ギリアデル（カルムスチンインプラント）、ギリアデルウェハー（カルムスチンインプラント）、グルカルピダーゼ、ゴセレリン酢酸塩、ハラベン（エリブリンメシル酸塩）、ハーセプチン（トラスツズマブ）、ＨＰＶ二価ワクチン、組換え、ＨＰＶ非価ワクチン、組換え、ＨＰＶ四価ワクチン、組換え、ハイカムチン（トポテカン塩酸塩）、ハイパーＣＶＡＤ、イブランス（パルボシクリブ）、イブリツモマブ・チウキセタン、イブルチニブ、ＩＣＥ、アイクルシグ（ポナチニブ塩酸塩）、イダマイシン（イダルビシン塩酸塩）、イダルビシン塩酸塩、イデラリシブ、ＩＦＥＸ（イホスファミド）、イホスファミド、イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｕｍ）、メシル酸イマチニブ、イムブルビカ（イブルチニブ）、イミキモド、インターフェロンアルファ－２ｂ、組換え、イントロンＡ（組換えインターフェロンアルファ－２ｂ）、ヨウ素Ｉ １３１チオシトウマブ及びトシツモマブ、イピリムマブ、イレッサ（ゲフィチニブ）、イリノテカン塩酸塩、ＩＳＴＯＤＡＸ（ロミデプシン）、イキサベピロン、Ｉｘｅｍｐｒａ（イキサベピロン）、ジャカビ（ルキソリチニブリン酸塩）、ジェブタナ（カバジタキセル）、カドサイラ（トラスツズマブエムタンシン）、Ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ（ラロキシフェン塩酸塩）、Ｋｅｐｉｖａｎｃｅ（パリフェルミン）、キイトルーダ（ペムブロリズマブ）、カイプロリス（カルフィルゾミブ）、ランレオチド酢酸塩、ラパチニブトシル酸塩水和物、レナリドミド、レンバチニブメシル酸塩、レンビマ（レンバチニブメシル酸塩）、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、リューケラン（クロラムブシル）、リュープロリド酢酸塩、レヴラン（アミノレブリン酸）、リンフォリジン（Ｌｉｎｆｏｌｉｚｉｎ）（クロラムブシル）、リポドックス（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、リポソームシタラビン、ロムスチンリュープロン（Ｌｕｐｒｏｎ）（リュープロリド酢酸塩）、リュープロンデポ（Ｌｕｐｒｏｎ Ｄｅｐｏｔ）（リュープロリド酢酸塩）、リュープロンデポ－ペド（Ｌｕｐｒｏｎ Ｄｅｐｏｔ－Ｐｅｄ）（リュープロリド酢酸塩）、リュープロンデポ－３ヶ月（Ｌｕｐｒｏｎ Ｄｅｐｏｔ－３ Ｍｏｎｔｈ）（リュープロリド酢酸塩）、リュープロンデポ－４ヶ月（Ｌｕｐｒｏｎ Ｄｅｐｏｔ－４ Ｍｏｎｔｈ）（リュープロリド酢酸塩）、リンパルザ（オラパリブ）、マルキボ（Ｍａｒｑｉｂｏ）（ビンクリスチン硫酸塩リポソーム）、マツラン（Ｍａｔｕｌａｎｅ）（プロカルバジン塩酸塩）、メクロレタミン塩酸塩、メゲース（メゲストロール酢酸エステル）、メゲストロール酢酸エステル、メキニスト（トラメチニブ）、メルカプトプリン、メスナ、メスネックス（メスナ）、メタゾラストン（テモゾロミド）、メトトレキサート、メトトレキサートＬＰＦ（メトトレキサート）、メキサート（メトトレキサート）、メキサート－ＡＱ（メトトレキサート）、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン塩酸塩、ミトズイレックス（マイトマイシンＣ）、ＭＯＰＰ、モズビル（プレリキサホル）、ムスタルゲン（メクロレタミン塩酸塩）、ミュータマイシン（マイトマイシンＣ）、ミレラン（ブスルファン）、マイロサー（Ｍｙｌｏｓａｒ）（アザシチジン）、マイロターグ（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ナノ粒子パクリタキセル（パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ナベルビン（ビノレルビン酒石酸塩）、ネララビン、ネオサール（シクロホスファミド）、ネツピタント及びパロノセトロン塩酸塩、ニューポジェン（フィルグラスチム）、ネクサバール（ソラフェニブトシル酸塩）、ニロチニブ、ニボルマブ、ノルバデックス（タモキシフェンクエン酸塩）、Ｎプレート（ロミプロスチム）、オビヌツズマブ、オドムゾ（ソニデジブ）、ＯＥＰＡ、オファツムマブ、ＯＦＦ、オラパリブ、オマセタキシンメペスクシナート、オンカスパー（Ｏｎｃａｓｐａｒ）（ペガスパルガーゼ）、オンダンセトロン塩酸塩、オンタック（デニロイキンディフティトックス）、ＯＰＰＡオキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤、ＰＡＤ、パルボシクリブ、パリフェルミン、パロノセトロン塩酸塩、パロノセトロン塩酸塩及びネツピタント、パミドロン酸二ナトリウム、パニツムマブ、パノビノスタット、パラプラット（カルボプラチン）、パラプラチン（カルボプラチン）、パゾパニブ塩酸塩、ペガスパルガーゼ、ＰＥＧインターフェロンアルファ－２ｂ、ＰＥＧ－イントロン（ＰＥＧインターフェロンアルファ－２ｂ）、ペムブロリズマブ、ペメトレキセド二ナトリウム、パージェタ（ペルツズマブ）、ペルツズマブ、プラチノール（シスプラチン）、プラチノール－ＡＱ（シスプラチン）、プレリキサホルポマリドミド、ポマリスト（ポマリドミド）、ポナチニブ塩酸塩、プララトレキサート、プレドニゾン、プロカルバジン塩酸塩、プロロイキン（アルデスロイキン）、プロリア（デノスマブ）、プロマクタ（エルトロンボパグオラミン）、プロベンジ（シプロイセル－Ｔ）、プリントール（メルカプトプリン）、プリキサン（Ｐｕｒｉｘａｎ）（メルカプトプリン）、二塩化ラジウム２２３、ラロキシフェン塩酸塩、ラムシルマブ、ラスブリカーゼ、Ｒ－ＣＨＯＰ、Ｒ－ＣＶＰ、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）二価ワクチン、組み換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）非価ワクチン、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）四価ワクチン、組換えインターフェロンアルファ－２ｂ、レゴラフェニブ、Ｒ－ＥＰＯＣＨ、レブリミド（レナミドミド）、リウマトレックス（メトトレキサート）、リツキサン（リツキシマブ）、リツキシマブ、ロミデプシン、ロミプロスチム、ルビドマイシン（ダウノルビシン塩酸塩）、ルキソリチニブリン酸塩、スクレロソル胸膜内エアロゾル（Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ Ｉｎｔｒａｐｌｅｕｒａｌ Ａｅｒｏｓｏｌ）（タルク）、シルツキシマブ、シプリューセル－Ｔ、ソマチュリンデポ（ランレオチド酢酸塩）、ソニデジブ、ソラフェニブトシル酸塩、スプリセル（ダサチニブ）、ＳＴＡＮＦＯＲＤ Ｖ、滅菌タルクパウダー（タルク）、ステリタルク（タルク）、スチバーガ（レゴラフェニブ）、スニチニブリンゴ酸塩、スーテント（スニチニブリンゴ酸塩）、サイラトロン（Ｓｙｌａｔｒｏｎ）（ペグインターフェロンアルファ－２ｂ）、シルバント（シルツキシマブ）、シノビール（Ｓｙｎｏｖｉｒ）（サリドマイド）、シンリボ（オマセタキシンメペスクシナート）、ＴＡＣ、タフィンラー（ダブラフェニブ）、タルク、タモキシフェンクエン酸塩、タラビンＰＦＳ（シタラビン）、タルセバ（エルロチニブ塩酸塩）、タルグレチン（ベキサロテン）、タシグナ（ニロチニブ）、タキソール（パクリタキセル）、タキソテール（ドセタキセル）、テモダール（テモゾロミド）、テモゾロミド、テムシロリムス、サリドマイド、サロミド（サリドマイド）、チオテパ、トポサ
ール（エトポシド）、トポテカン塩酸塩、トレミフェン、トリセル（テムシロリムス）、トシツモマブ及びヨードＩ １３１トシツモマブ、トテクト（デクスラゾキサン塩酸塩）、ＴＰＦ、トラメレニブ、トラスツズマブ、トレアンダ（ベンダムスチン塩酸塩）、トリセノックス（三酸化砒素）、タイカーブ（ラパチニブジトシル酸塩）、ユニツキシン（ジヌツキシマブ）、バンデタニブ、ＶＡＭＰ、ベクティビックス（パニツムマブ）、ＶｅＩＰ、ベルバン（ビンブラスチン硫酸塩）、ベルケイド（ボルテゾミブ）、ベルサール（ビンブラスチン硫酸塩）、ベムラフェニブ、ベプシド（エトポシド）、ビアドゥール（Ｖｉａｄｕｒ）（リュープロリド酢酸塩）、ビダーザ（アザシチジン）、ビンブラスチン硫酸塩、ビンカサールＰＦＳ（ビンクリスチン硫酸塩）、ビンクリスチン硫酸塩、ビンクリスチン硫酸塩リポソーム、ビノレルビン酒石酸ＶＩＰビスモデギブ、ボラキサーゼ（Ｖｏｒａｘａｚｅ）（グルカルピダーゼ）、ボリノスタット、ヴォトリエント（パゾパニブ塩酸塩）、ウェルコボリン（ロイコボリンカルシウム）、ザーコリ（クリゾチニブ）、ゼローダ（カペシタビン）、ＸＥＬＩＲＩ、ＸＥＬＯＸ、Ｘｇｅｖａ（デノスマブ）、ゾーフィゴ（二塩化ラジウム２２３）、イクスタンジ（Ｘｔａｎｄｉ）（エンザルタミド）、ヤーボイ（イピリムマブ）、ザルトラップ（Ｚｉｖ－アフリベルセプト）、ゼルボラフ（ベムラフェニブ）、ゼヴァリン（イブリツモマブチウキセタン）、ザインカード（Ｚｉｎｅｃａｒｄ）（デクスラゾキサン塩酸塩）、Ｚｉｖ－アフリベルセプト、ゾフラン（オンダンセトロン塩酸塩）、ゾラデックス（ゴセレリン酢酸塩）、ゾレドロン酸、ゾリンザ（ボリノスタット）、ゾメタ（ゾレドロン酸）、ザイデリグ（イデラリシブ）、ジカディア（セリチニブ）、ならびにザイティガ（アビラテロン酢酸エステル）からなる群から選択することができる。
いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＩＣＯＳである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ２８である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ２７である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＨＶＥＭである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＬＩＧＨＴである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ４０Ｌである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、４－１ＢＢである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＤＲ３である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＧＩＴＲである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ３０である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＳＬＡＭである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ２である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ２２６である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ガレクチン９である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＴＩＭ１である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＬＦＡ１である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７－Ｈ２である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７－１である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、Ｂ７－２である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ７０である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＬＩＧＨＴである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＨＶＥＭである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、４－１ＢＢＬである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＯＸ４０Ｌである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＴＬ１Ａである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＧＩＴＲＬである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ３０Ｌである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＳＬＡＭである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ４８である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ５８である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ１５５である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ１１２である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ８０である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ８６である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＩＣＯＳＬである。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＴＩＭ３である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＴＩＭ４である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＩＣＡＭ１である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＬＦＡ３である。
いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＯＸ４０である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０共刺激分子は、配列番号１のｍＲＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０共刺激分子は、配列番号２のｍＲＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０共刺激分子は、配列番号５のｍＲＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＯＸ４０である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０共刺激分子は、配列番号６のｍＲＮＡ配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０共刺激分子は、配列番号１と、少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である核酸配列またはそのバリアントまたは断片を含む。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０共刺激分子は、配列番号２と、少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である核酸配列またはそのバリアントまたは断片を含む。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０共刺激分子は、配列番号５と、少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である核酸配列またはそのバリアントまたは断片を含む。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０共刺激分子は、配列番号６と、少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である核酸配列またはそのバリアントまたは断片を含む。
いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＳＬＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ２２６、ガレクチン９、ＴＩＭ１、ＬＦＡ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＣＡＭ１、ＬＦＡ３から選択される共刺激分子の配列、またはそのバリアントまたはその断片と少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である核酸配列によってコードされる。
いくつかの実施形態では、共刺激分子をコードするｍＲＮＡは、修飾５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子をコードするｍＲＮＡは、修飾３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）を含む。例えば、修飾配列は、挿入、欠失、またはヌクレオチド置換を含み得る。
いくつかの実施形態では、共刺激分子をコードするｍＲＮＡは、配列番号３のｍＲＮＡ配列を含む異種５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子をコードするｍＲＮＡは、ｍＲＮＡ配列番号４を含む異種３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子をコードするｍＲＮＡは、配列番号３と、少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である核酸配列またはそのバリアントまたは断片を含む異種５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）を含む。いくつかの実施形態では、共刺激分子をコードするｍＲＮＡは、配列番号４と少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である核酸配列またはそのバリアントまたは断片を含む異種３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）を含む。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、共刺激分子に特異的に結合する抗体、リガンド、またはそれらの抗原結合断片、及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子を含む、有効量の組成物を対象に投与することを含む、Ｔ細胞を刺激する方法である。
いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、共刺激分子に特異的に結合する抗体、またはそれらの抗原結合断片、及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子を含む、有効量の組成物を対象に投与することを含む、Ｔ細胞を刺激する方法である。
いくつかの実施形態では、共刺激分子に特異的に結合する抗原結合断片は、ＯＸ４０リガンドまたはＯＸ４０に結合するその機能的断片を含む。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０リガンドは、配列番号１３または１４と少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である核酸配列によってコードされる。
いくつかの実施形態では、共刺激分子に特異的に結合する抗原結合断片は、ＩＣＯＳリガンドまたはＩＣＯＳに結合するその機能的断片を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳリガンドは、配列番号１５または１６と少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である核酸配列によってコードされる。
いくつかの実施形態では、共刺激分子に特異的に結合する抗原結合断片は、ＣＤ１３７リガンドまたはＣＤ１３７に結合するその機能的断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７リガンドは、配列番号１９または２０と少なくとも６０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）同一である核酸配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物である。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞とも呼ばれ、特異的に認識された細胞（腫瘍細胞など）を死滅させるように機能し得る。
いくつかの実施形態では、共刺激分子に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片、及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子は、同時に（同時にまたはその直後に）投与される。いくつかの実施形態では、共刺激分子に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片、及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子は、順次投与される。
本明細書に開示されるのは、炎症性疾患（自己免疫疾患など）またはリンパ系増殖性疾患などの疾患または状態を治療する方法であって、本方法は、共刺激分子、及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子に特異的に結合する、有効量の抗体、リガンド、またはそれらの抗原結合断片をそれを必要とする対象に投与することを含む。
さらに本明細書に開示されるのは、炎症性疾患（自己免疫疾患など）またはリンパ系増殖性疾患などの疾患または状態を治療する方法であって、本方法は、共刺激分子、及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子に特異的に結合する、有効量の抗体、またはそれらの抗原結合断片をそれを必要とする対象に投与することを含む。
一実施形態では、本明細書で提供されるのは、対象における自己免疫疾患などの炎症性障害を治療する方法である。この方法は、治療有効量の化合物、化合物の組み合わせ、または本明細書で提供される組成物、またはその薬学的に許容される形態、または本明細書で提供される医薬組成物を対象に投与することを含む。自己免疫疾患の例としては、これらに限定されないが、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、再生不良性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性皮膚疾患、セリアック病、クローン病、真性糖尿病（１型）、グッドパスチャー症候群、グレイブス病、ギランバレ症候群（ＧＢＳ）、橋本病、紅斑性ループス、多発性硬化症、重力筋無力症、ミオクローヌス症候群（ＯＭＳ）、視神経炎、オード甲状腺炎、気腫、多関節炎、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、関節リウマ、ライター症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎（「巨細胞性動脈炎」としても公知である）、温式自己免疫性溶血性貧血、ウェゲナー肉芽腫症、円形脱毛症（例えば、炎症性脱毛症）、シャーガス病、慢性疲労症候群、自律神経障害、子宮内膜症、化膿性汗腺炎、間質性膀胱炎、ューロミオトニア、サルコイドーシス、強皮症、潰瘍性大腸炎、白斑、及び外陰部痛が挙げられる。他の障害としては、骨吸収障害及び血栓症が挙げられる。
炎症は多くの形態をとり、これらに限定されないが、急性、接着性、萎縮性、カタル性、慢性、肝硬変、びまん性、播種性、滲出性、線維性（ｆｉｂｒｉｎｏｕｓ）、線維性（ｆｉｂｒｏｓｉｎｇ）、限局性、肉芽腫性、過形成性、肥大性、間質性、転移性、壊死性、閉塞性、実質性、可塑性、増殖性（ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ）、増殖性（ｐｒｏｌｉｆｅｒｏｕｓ）、偽膜性、化膿性、硬化性、血清性（ｓｅｒｏｐｌａｓｔｉｃ）、漿液性、単純、特異的、亜急性、化膿性、毒性、外傷性、及び／または潰瘍性の炎症が挙げられる。
例示的な炎症状態としては、これらに限定されないが、にきび、貧血（例えば、形成不全性貧血、溶血性自己免疫性貧血）、喘息、動脈炎（例えば、多発性動脈炎、側頭動脈炎、結節性動脈周囲炎、高安動脈炎）、関節炎（例えば、結晶性関節炎、変形性関節症、乾癬性関節炎、痛風フレア、痛風関節炎、反応性関節炎、リウマチ性関節炎及びライター関節炎）、強直性脊椎炎、アミローシス（ａｍｙｌｏｓｉｓ）、筋萎縮性側索硬化症、自己免疫疾患、アレルギーまたはアレルギー反応、アテローム性動脈硬化症結節性炎、気管支炎、滑液包炎、慢性前立腺炎、結膜炎、シャーガス病、慢性閉塞性肺疾患、皮膚筋炎（ｃｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）、憩室炎、糖尿病（例えば、Ｉ型糖尿病、２型糖尿病）、皮膚状態（例えば、乾癬、湿疹、火傷、皮膚炎、掻痒症（かゆみ））、子宮内膜症、ギランバレ症候群、感染症、虚血性心臓病、川崎病、糸球体腎炎、歯肉炎、過敏症、頭痛（例えば、片頭痛、緊張性頭痛）、腸閉塞（例えば、特発性血小板減少性紫斑病、間質性膀胱炎（痛みを伴う膀胱症候群）、胃腸障害（例えば、消化性潰瘍、局所腸炎、憩室炎、胃腸出血、好酸球性胃腸障害（例えば、好酸球性食道炎、好酸球性胃炎、好酸球性胃腸炎、好酸球性大腸炎から選択）、胃炎、下痢、胃食道逆流症（ＧＯＲＤ、またはその同義語ＧＥＲＤ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、膠原線維性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、便流変更性大腸炎、ベーチェット症候群、非定型的大腸炎）及び炎症性腸症候群（ＩＢＳ））、ループス、多発性硬化症、モルフェア、重症筋無力症、心筋虚血、腎症症候群、尋常性天疱瘡、悪性貧血、消化性潰瘍、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、脳障害関連神経炎症（例えば、パーキンソン病、ハンチントン病、及びアルツハイマー病）、前立腺炎、頭蓋放射線障害関連慢性炎症、骨盤炎症性疾患、リウマチ性多発筋痛、再灌流障害、局所腸炎、リウマチ熱、全身性紅斑性狼瘡、強皮症、強皮症（ｓｃｉｅｒｏｄｏｍａ）、サルコイドーシス、脊椎関節炎シェーグレン症候群、甲状腺炎、移植拒絶、腱炎、外傷または損傷（例えば、凍傷、化学的刺激物、毒素、瘢痕、火傷、身体的損傷）、血管炎、白斑及びウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。特定の実施形態では、炎症性障害は、関節炎（例えば、関節リウマチ）、炎症性腸疾患、炎症性腸症候群、喘息、乾癬、子宮内膜症、間質性膀胱炎及び前立腺炎から選択される。特定の実施形態では、炎症状態は、急性炎症状態（例えば、感染に起因する炎症）である。特定の実施形態では、炎症状態は、慢性炎症状態（例えば、喘息、関節炎、及び炎症性腸疾患に起因する状態）である。これらの化合物は、外傷及び非炎症性筋肉痛に関連する炎症の治療にも有用であり得る。
自己免疫障害などの免疫障害としては、これらに限定されないが、関節炎（関節リウマチ、脊椎関節症、痛風関節炎、骨関節炎などの変性関節疾患、全身性紅斑性狼瘡、シェーグレン症候群、強直性脊椎炎、未分化型脊椎関節炎）、ベーチェット病、溶血性自己免疫性貧血、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アミローシス、急性の痛みを伴う肩、乾癬、及び若年性関節炎）、喘息、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症、気管支炎、腱炎、滑液包炎、皮膚状態（例えば、乾癬、湿疹、火傷、皮膚炎掻痒症（かゆみ））、夜尿症、好酸球性疾患、胃腸障害（例えば、消化性潰瘍、局所腸炎、憩室炎、胃腸出血、好酸球性胃腸障害（例えば、好酸球性食道炎、好酸球性胃炎、好酸球性胃腸炎、好酸球性胃腸症）、胃炎、下痢、胃食道逆流症（ＧＯＲＤ、またはその同義語ＧＥＲＤ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、膠原線維性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、便流変更性大腸炎、ベーチェット症候群、炎症性腸疾患）及び過敏性腸症候群（ＩＢＳ））、再発性多発軟骨炎（例えば、萎縮性多発性軟骨炎及び全身性多発性軟骨炎）、及び胃運動促進剤によって改善される障害（例えば、イレウス、術後イレウス及び敗血症中のイレウス；胃食道逆流症（ＧＯＲＤ、またはその同義語ＧＥＲＤ）；好酸球性食道炎、糖尿病性胃不全麻痺などの胃不全麻痺；食物不耐性及び食物アレルギー、ならびに非潰瘍性消化不良（ＮＵＤ）及び非心臓性胸痛（ＮＣＣＰ、肋軟骨炎など）などの他の機能性腸障害）が挙げられる。
以下の実施例は、開示された主題による組成物、方法、及び結果を説明するために以下に記載している。これらの実施例は、本明細書に開示される主題のすべての態様を含むことを意図するものではなく、むしろ代表的な方法及び結果を説明することを意図している。これらの実施例は、当業者に明らかである本発明の同等物及び変形を除外することを意図するものではない。
本開示は、例えば、以下に関する。
［項１］
共刺激分子に特異的に結合する抗体、リガンド、またはそれらの抗原結合断片と、
前記共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子と、を含む、組成物。
［項２］
前記共刺激分子をコードする前記ｍＲＮＡが、前記ナノ粒子によって内包化される、項１に記載の組成物。
［項３］
前記ナノ粒子が、リン脂質または糖脂質を含む、項１または２に記載の組成物。
［項４］
前記リン脂質が、ＰＬ１～ＰＬ１８からなる群から選択される、項３に記載の組成物。
［項５］
前記リン脂質がＰＬ１である、項４に記載の組成物。
［項６］
前記糖脂質がＧＬ１～ＧＬ１６からなる群から選択される、項３に記載の組成物。
［項７］
前記糖脂質がＧＬ４である、項６に記載の組成物。
［項８］
前記共刺激分子が、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＳＬＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ２２６、ガレクチン９、ＴＩＭ１、ＬＦＡ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＣＡＭ１、またはＬＦＡ３から選択される、項１～７のいずれか１項に記載の組成物。
［項９］
前記共刺激分子が、ＯＸ４０または４－１ＢＢを含む、項８に記載の組成物。
［項１０］
前記共刺激分子をコードする前記ｍＲＮＡが、異種５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）を含む、項１～９のいずれか１項に記載の組成物。
［項１１］
前記共刺激分子をコードする前記ｍＲＮＡが異種３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）を含む、項１～９のいずれか１項に記載の組成物。
［項１２］
前記ｍＲＮＡが、化学的に修飾された核酸塩基を含む、項１～１１のいずれか１項に記載の組成物。
［項１３］
前記化学的に修飾された核酸塩基が、シュードウリジンである、項１２に記載の組成物。
［項１４］
免疫療法剤をさらに含む、項１～１３のいずれか１項に記載の組成物。
［項１５］
前記免疫療法剤が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそれらの組み合わせから選択される、項１４に記載の組成物。
［項１６］
薬学的に許容される担体と、有効量の項１～１５のいずれか１項に記載の組成物とを含む医薬組成物。
［項１７］
有効量の項１～１５のいずれか１項に記載の組成物または項１６に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、Ｔ細胞を刺激する方法。
［項１８］
前記対象が、哺乳動物である、項１７に記載の方法。
［項１９］
前記哺乳動物が、ヒトである、項１８に記載の方法。
［項２０］
がんを治療する方法であって、それを必要とする対象に、共刺激分子及び前記共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子を特異的に結合する、有効量の抗体、リガンド、またはその抗原結合断片を投与することを含む、前記方法。
［項２１］
前記共刺激分子をコードする前記ｍＲＮＡが、前記ナノ粒子によって内包化される、項２０に記載の方法。
［項２２］
前記ナノ粒子が、リン脂質または糖脂質を含む、項２０または２１に記載の方法。
［項２３］
前記リン脂質が、ＰＬ１～ＰＬ１８からなる群から選択される、項２２に記載の方法。
［項２４］
前記リン脂質がＰＬ１である、項２３に記載の方法。
［項２５］
前記糖脂質がＧＬ１～ＧＬ１６からなる群から選択される、項２２に記載の組成物。
［項２６］
前記糖脂質がＧＬ４である、項２５に記載の組成物。
［項２７］
前記共刺激分子が、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＳＬＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ２２６、ガレクチン９、ＴＩＭ１、ＬＦＡ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＣＡＭ１、またはＬＦＡ３から選択される、項２０～２６のいずれか１項に記載の方法。
［項２８］
前記共刺激分子がＯＸ４０または４－１ＢＢを含む、項２７に記載の方法。
［項２９］
前記共刺激分子をコードする前記ｍＲＮＡが、異種５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）を含む、項２０～２８のいずれか１項に記載の方法。
［項３０］
前記共刺激分子をコードする前記ｍＲＮＡが、異種３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）を含む、項２０～２９のいずれか１項に記載の方法。
［項３１］
化学的に修飾された核酸塩基が、シュードウリジンである、項２０～３０のいずれか１項に記載の方法。
［項３２］
前記がんが、黒色腫、結腸直腸癌、肺癌、結腸癌、またはリンパ腫を含む、項２０～３１のいずれか１項に記載の方法。
［項３３］
前記対象が、哺乳動物である、項２０～３２のいずれか１項に記載の方法。
［項３４］
前記哺乳動物が、ヒトである、項３３に記載の方法。
［項３５］
前記抗体またはその抗原結合断片及び前記ナノ粒子が、筋肉内注射によって投与されるかまたは全身投与される、項２０～３４のいずれか１項に記載の方法。
［項３６］
追加の治療剤を投与することをさらに含む、項２０～３５のいずれか１項に記載の方法。
［項３７］
前記追加の治療剤が、追加の免疫療法剤を含む、項３６に記載の方法。
［項３８］
前記追加の免疫療法剤が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそれらの組み合わせから選択される、項３７に記載の方法。
［項３９］
前記共刺激分子と、前記共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含む前記ナノ粒子とを特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片が同時に投与される、項２０～３８のいずれか１項に記載の方法。
実施例１．ナノ粒子（ＮＰ）－ＯＸ４０ ｍＲＮＡは、ＯＸ４０の発現レベルの増加を誘導した
ＯＸ４０の発現は、ＥＧ．７－ＯＶＡ細胞を特徴とした。ナノ粒子（ＮＰ）－ＯＸ４０ ｍＲＮＡは、対照群と比較してはるかに高いＯＸ４０発現を誘導した（図１）。５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲ修飾は、サイトカインをコードするｍＲＮＡ、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０などの免疫チェックポイント調節因子に広く適用可能である。ナノ粒子は、脂質、ＤＯＰＥ、コレステロール、ＤＭＧ－ＰＥＧ、及びｍＲＮＡを配合した（Ｌｉ，Ｂ ｅｔ ａｌ．Ａｎ Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ａｒｒａｙ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐｉｄ－ｌｉｋｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｍＲＮＡ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｎａｎｏ Ｌｅｔｔ．２０１５，１５，８０９９－８１０７を参照のこと）。
実施例２．ＮＰ／ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０抗体の併用療法は、Ｂ１６黒色腫腫瘍モデルにおける腫瘍療法を改善した。
Ｂ１６黒色腫マウス腫瘍モデルを確立した（Ｔｒｉｐｌｅｔｔ，ＴＡ，ｅｔ ａｌ．Ｒｅｖｅｒｓａｌ ｏｆ ＩＤＯ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｋｙｎｕｒｅｎｉｎｅ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｎｚｙｍｅ，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１８ Ｓｅｐ；３６（８）：７５８－７６４））。マウスをＰＢＳ、ＮＰ＋抗ＯＸ４０抗体（ＩｎＶｉｖｏＰｌｕｓ抗マウスＯＸ４０（クローンＯＸ－８６）（会社：ＢｉｏＸｃｅｌｌ、カタログ：ＢＰ００３１））、またはＮＰ／ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０抗体で治療した。これらのｍＲＮＡとそれらの関連する抗体との組み合わせにより、このマウス腫瘍モデルにおいて腫瘍療法が有意に改善され（図２Ａ）、全生存期間を延長した（図２Ｂ）。
実施例３．ＮＰ／ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０抗体の併用療法では、ＣＴ２６腫瘍モデルにおける腫瘍療法が改善した。
ＣＴ２６マウス腫瘍モデルを確立した（Ｍａｌｖｉｃｉｎｉ，Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｔｕｍｏｒ Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ｂｙ ４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ Ｂｏｏｓｔｓ ｔｈｅ Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ｍｕｒｉｎｅ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ．ｖｏｌ．２３ ｎｏ．９，１４４４－１４５５ Ｓｅｐ．２０１５）．マウスを、ＰＢＳ、ナノ粒子（ＮＰ）＋抗ＯＸ４０抗体、ナノ粒子（ＮＰ）／ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０抗体、及びナノ粒子（ＮＰ）／ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０抗体と共に、ナノ粒子（ＮＰ）／ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０抗体（注射間隔：６時間）；及びナノ粒子（ＮＰ）／ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０抗体と共に（注入間隔：０時間）治療した。使用したＯＸ４０抗体は、ＩｎＶｉｖｏＰｌｕｓ抗マウスＯＸ４０（クローンＯＸ－８６）（会社：ＢｉｏＸｃｅｌｌ、カタログ：ＢＰ００３１））であった。これらのｍＲＮＡとそれらに関連する抗体の組み合わせにより、マウス腫瘍モデルの全生存が大幅に延長され、腫瘍療法が改善された。
実施例４．共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子。
癌免疫療法は、癌ワクチン、細胞ベースの療法、免疫チェックポイントブロッカー、モノクローナル抗体、ｍＲＮＡベースの免疫療法、及び他のナノ粒子媒介免疫療法など、抗腫瘍免疫応答を刺激するための様々なアプローチを用いている。特に、免疫チェックポイント阻害剤の使用は、ＰＤ－１及びＣＴＬＡ－４などのＴ細胞共阻害経路を標的とすることにより、癌患者の全生存の改善となった。これらの抗体は、診療所で日常的に使用されるが、意味のある腫瘍応答を経験する患者の割合はわずか約２５％である。したがって、癌治療のための新しい免疫療法戦略を緊急に開発する必要性がある。
近年、研究者らは、癌免疫療法のためにＴ細胞上に一連の共刺激分子を発見した。共刺激分子のリガンドとＴ細胞表面の共刺激受容体との相互作用により、クローンＴ細胞の拡大及び分化が活性化され、いくつかのヒトの癌における抗腫瘍効率の上昇となる。ＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても公知である）及びＯＸ４０（ＣＤ１３４としても公知である）は、Ｔ細胞共刺激受容体であり、ＣＤ８及びＣＤ４Ｔ細胞に活性化シグナルを提供する。ＣＤ１３７は、Ｔ細胞の増殖及びサイトカインの分泌に重要な役割を果たしている。近年、２つの抗ＣＤ１３７抗体（ウレルマブ及びウトミルマブ）が臨床試験において調査されている。ＯＸ４０は、抗腫瘍免疫応答を生じさせるためにＣＤ８＋Ｔ細胞を刺激することに関与している。抗ＯＸ４０抗体は、様々な癌種におけるＴ細胞の分化、細胞溶解機能、及び抗腫瘍免疫を増強する。いくつかのアゴニスト抗ＯＸ４０抗体が、現在臨床試験中である。共刺激シグナルは、Ｔ細胞の刺激に重要であるが、腫瘍微小環境では発現が不十分であり、このことが、免疫療法効果を妨げる。したがって、共刺激受容体ｍＲＮＡの腫瘍浸潤Ｔ細胞への送達は、その受容体に対するアゴニスト抗体の使用と組み合わせて、Ｔ細胞を直接活性化し、癌免疫療法を改善することができる（図４Ａ）。
共刺激受容体ｍＲＮＡをＴ細胞に送達するために、細胞膜の天然成分であるためにリン脂質及び糖脂質を使用した。リン脂質及び糖脂質の化学構造に基づいて、リン脂質及び糖脂質模倣材料のライブラリーを設計し、合成した（図４Ｂ～図４Ｄ）。これらの化合物は、ｍＲＮＡ送達のためにリン脂質由来及び糖脂質由来のナノ粒子に配合した。１つのリン脂質由来ナノ粒子であるＰＬ１は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの両方でｍＲＮＡをＴ細胞に効率的に送達した。次に、ＰＬ１ナノ粒子を使用して、複数の腫瘍モデルで抗ＣＤ１３７抗体または抗ＯＸ４０抗体と組み合わせて、共刺激受容体ＣＤ１３７またはＯＸ４０ ｍＲＮＡを腫瘍浸潤Ｔ細胞に送達した。さらに、この治療アプローチにより、抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４抗体の免疫療法効果が大幅に改善した。この実施例では、Ｔ細胞を活性化し、抗腫瘍免疫を高めるために、共刺激受容体ｍＲＮＡを送達するための新しいかつ緊急に必要な生体材料を提供する。
実施例５．ｍＲＮＡ送達のためのリン脂質及び糖脂質誘導体（ＰＬ及びＧＬ）の設計及び合成。
生体模倣化合物、リン脂質及び糖脂質は、生体模倣ヘッド（リン酸ヘッドまたは糖ヘッド）、イオン化可能なアミノコア、及び複数の疎水性テールから構成される（図１１）。これらのリン脂質誘導体及び糖脂質誘導体（ＰＬ及びＧＬ）は、以前に報告された手順に従って合成した。例えば、ＷＯ／２０１９／０２７９９９を参照のこと。図４Ｂは、ＰＬ１及びＧＬ１への代表的な合成経路を示している。この合成経路に従って、ＰＬ１－１８及びＧＬ１－１６材料を合成し（図４Ｃ）、これらは１Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）及び質量分析（ＭＳ）（図４Ｃ）によって特徴を明らかにした。次に、ＰＬナノ粒子及びＧＬナノ粒子は、ホタルルシフェラーゼｍＲＮＡ（ＦＬｕｃ ｍＲＮＡ）により配合され、サイズ、表面電荷、及びｍＲＮＡ内包化効率に従って特徴を明らかにした（図１２Ａ～図１２Ｃ）。次に、ＰＬ１－１８ナノ粒子及びＧＬ１－１６ナノ粒子のｍＲＮＡ送達効率をＥ．Ｇ７細胞（Ｔリンパ球細胞株）中で研究し、ＰＬ１ナノ粒子がＦＬｕｃ ｍＲＮＡの最高の送達効率を示すことを発見した（図５Ａ）。さらに、ＰＬ１は、ＧＦＰ ｍＲＮＡをＥ．Ｇ７細胞の約９４％に送達した。これは、Ｔ細胞送達ビヒクルとしてのその機能を実証している（図５Ｃ）。ＰＬ１ナノ粒子のエンドサイトーシス経路は、マクロピノサイトーシス用の５－（Ｎ－メチル－Ｎ－イソプロピル）アミロリド（ＥＩＰＡ）、クラスリン介在性エンドサイトーシス用の塩酸クロルプロマジン（ＣＰＺ）、及びカベオラ媒介エンドサイトーシス用のメチル－ベータ－シスロデキストリン（ＭβＣＤ）などのエンドサイトーシス阻害剤を使用してさらに調査した。ＥＩＰＡ、ＣＰＺ、及びＭβＣＤによる治療は、ＰＬ１ナノ粒子のそれぞれ５０％、５６％、及び３９％の細胞取り込みを有意に阻害し（図１３）、これは、ＰＬ１ナノ粒子が複数のエンドサイトーシス経路を介して内在化されたことを示している。Ｔ細胞共刺激受容体ＣＤ１３７ｍＲＮＡ及びＯＸ４０ ｍＲＮＡも、Ｅ．Ｇ７細胞に送達された。図５Ｂは、ＰＬ１－ＯＸ４０ナノ粒子の低温電子顕微鏡画像を示している。フローサイトメトリーの結果は、ＰＬ１－ＣＤ１３７（２７．８％）及びＰＬ１－ＯＸ４０（４７．４％）の両方が、それぞれＣＤ１３７及びＯＸ４０の細胞表面発現を有意に増加させたことを示した（図５Ｄ及び図５Ｅ）。マウス黒色腫モデル（Ｃ５７ＢＬ／６マウスでｓｃ成長するＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞）の腫瘍浸潤リンパ球におけるＰＬ１－ＧＦＰの腫瘍内（ｉ．ｔ．）送達について次の調査を行った（図５Ｆ）。ＰＬ１－ＧＦＰ治療により、ＧＦＰの発現増加が腫瘍浸潤ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図５Ｇ）、ならびにマクロファージ及び樹状細胞（ＤＣ）（図１４Ａ～図１４Ｃ）において観察された。これらの結果に基づいて、ＰＬ１ナノ粒子は、ｉｎ ｖｉｖｏでＣＤ１３７及びＯＸ４０ ｍＲＮＡを送達するために選択した。
実施例６．ＰＬ１－ＣＤ１３７ｍＲＮＡ＋抗ＣＤ１３７抗体の治療による腫瘍成長の退行。
ＰＬ１－ＣＤ１３７は、Ｂ１６Ｆ１０細胞黒色腫マウスモデルにおいて、抗ＣＤ１３７抗体と組み合わせて隔日で６回腫瘍内注射した。ＰＬ１－ＣＤ１３７＋抗ＣＤ１３７の投与は、腫瘍成長速度を劇的に低下させた（対照の５分の１、接種１８日）（図６Ａ及び図１５Ａ）。治療はまた、ＰＢＳ及びＰＬ１（空のナノ粒子）＋抗ＣＤ１３７Ａｂと比較して、全生存期間を有意に増長させた（図６Ｂ）。同様の実験をＡ２０リンパ腫腫瘍モデルで行った。ＰＬ１－ＣＤ１３７＋抗ＣＤ１３７ Ａｂによる治療は、ＰＢＳ及びＰＬ－１＋抗ＣＤ１３７ Ａｂと比較して、腫瘍成長速度（接種１８日）の２分の１の低下をもたらした（図６Ｃ及び図１５Ｂ）。しかし、ＰＬ１－ＣＤ１３７＋抗ＣＤ１３７ＡｂをＰＬ－１＋抗ＣＤ１３７Ａｂ治療と比較して、全生存期間の有意な延長は観察されなかった（図６Ｄ）。したがって、共刺激受容体ＣＤ１３７ ｍＲＮＡのＰＬ１ナノ粒子送達は、両方の腫瘍モデルにおいて抗ＣＤ１３７ Ａｂによる免疫療法の結果をある程度改善し、Ａ２０リンパ腫モデルと比較してＢ１６Ｆ１０黒色腫モデルにおいてより良好な結果が得られた。
実施例７．ＰＬ１－ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０抗体の治療による腫瘍成長の退行。
Ｂ１６Ｆ１０黒色腫腫瘍モデルにおける共刺激受容体ＯＸ４０送達の治療効果も調査した。ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂ治療（ｉ．ｔ．）は、ＰＢＳ及びＰＬ１＋抗ＯＸ４０ Ａｂによる治療と比較して、腫瘍成長を有意に減少させ、生存を延長した（図７Ａ、図７Ｂ、及び図１６Ａ）。次に、ＢＡＢＬ／ｃマウスにおいて、ＣＴ２６マウス腫瘍モデルを確立した。ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂによる治療後に有意な治療効果が観察された（図７Ｃ、図７Ｄ、及び図１６Ｂ）。
次に、ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂ治療の治療効果を、Ａ２０Ｂ細胞リンパ腫モデルで評価した。マウスは、ＰＢＳ、ＰＬ１－ＯＸ４０、ＰＬ１＋抗ＯＸ４０ ＡｂまたはＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂの注射を受けた。腫瘍成長を６０日間モニターした（図８Ａ及び図８Ｂ）。ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂによる治療は、対照と比較して、腫瘍成長を有意に減少させて（図８Ｃ）、生存期間を増長させた（図８Ｄ）。重要なことに、ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂで治療した１０匹中６匹（６０％）のマウスは完全奏効を呈し（図８Ｄ）、Ａ２０腫瘍細胞による再チャレンジに耐性があった（図８Ｅ）。これらの結果は、共刺激ＯＸ４０ ｍＲＮＡを送達するＰＬ１ナノ粒子が、３つの異なるマウスモデルにおいて、抗ＯＸ４０ Ａｂ療法の免疫療法効果を高める可能性があることを示した。
腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）は、抗腫瘍免疫において重要な役割を果たす。腫瘍内Ｔ細胞へのｍＲＮＡ送達は、Ａ２０Ｂ細胞リンパ腫モデルで調査を行った。ＰＬ１－ＯＸ４０治療後の腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞上のＯＸ４０の発現が有意に増加したが（図８Ｆ）、浸潤ＣＤ４＋Ｔ細胞またはマクロファージでのＯＸ４０発現の変化は最小限であった（図１７Ａ）。浸潤性樹状細胞（ＤＣ）でのＯＸ４０の発現も有意に増加した（図１７Ａ）。サイトカイン及びケモカインのレベルも調査した。ＩＦＮ－γの血漿レベルは、対照群と比較してＰＬ１－ＯＸ４０治療後に有意に増加し、ケモカインリガンド１２（ＣＣＬ１２）、好中球化学誘引物質（ＣＸＣＬ１）、及びマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）のレベルも、ＰＬ１－ＯＸ４０治療により２～１０倍増加した（図１７Ｂ）。
Ａ２０Ｂ細胞リンパ腫腫瘍における浸潤性Ｔ細胞集団も調査した。図６Ａに記載されているのと同じ投薬戦略を使用して、免疫細胞集団は、最後の治療の２４時間後に分析した（図８Ｇ）。ＣＤ８＋Ｔ細胞の有意な増加が観察されたが、ＰＬ１＋抗ＯＸ４０ Ａｂと比較して、ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂ治療によるＣＤ４＋Ｔ細胞、マクロファージ、または樹状細胞のレベルに変化はなかった（図８Ｈ）。興味深いことに、抗ＣＤ８ Ａｂまたは抗ＣＤ４ ＡｂのいずれかによりＴ細胞が枯渇する場合は、対照Ａｂの投与と比較して、併用治療の有効性が著しく損われた（図１８）。マウス血漿中のＩＦＮ－γ、ＣＣＬ１２、Ｍ－ＣＳＦ及びＣＸＣＬ１のサイトカインレベルは、６回の治療投与後の異なる群において類似していた（図１９）。
実施例８．ＰＬ１－ＯＸ４０ ｍＲＮＡ＋抗ＯＸ４０抗体の抗腫瘍効果の増強。
ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂ治療は、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍成長を有意に減少させ、生存を延長したが（図７Ａ及び図７Ｂ）、腫瘍負荷を完全に根絶することは、免疫ベース治療の重要な目標である。ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂ療法の抗腫瘍効果を改善するために、ＯＸ４０ ｍＲＮＡをその野生型（ＯＸ４０（ＷＴ）からシュードウリジン（ψ）－修飾（ＯＸ４０（ψ））に修飾し、抗ＯＸ４０抗体の投与量を８μｇから４０μｇに増加させた。ＰＬ１－ＯＸ４０（ψ）＋抗ＯＸ４０ Ａｂ（４０μｇ）によるＢ１６Ｆ１０担癌マウスの治療では、ＰＢＳ及びＰＬ１＋抗ＯＸ４０治療と比較して、腫瘍成長を有意に減少させ、生存を延長した（図９Ａ～図９Ｄ）。３５日目に、５匹のマウスが５００ｍｍ３未満のサイズの腫瘍を呈し、これらのマウスから腫瘍を除去するために手術を行った。２匹のマウスは５０日以上腫瘍がない状態が継続し、これは、再チャレンジさせたＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞を有する対照マウスよりも腫瘍成長が遅延したことを示した（図９Ｅ）。
別の治療レジメンでは、抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４免疫チェックポイント阻害剤Ａｂによる治療を、ＰＬ１－ＯＸ４０（ψ）抗ＯＸ４０ Ａｂ（４０μｇ）による治療に追加した（図９Ｆ）。ＰＬ１－ＯＸ４０（ψ）＋抗ＯＸ４０及び抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ治療の併用は、ＰＢＳまたは抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂによる治療と比較して、腫瘍成長を劇的に阻害し、生存期間を延長した。（図９Ｇ～図９Ｉ）。４５日目に、６匹のマウスは腫瘍を有さず、１匹のマウスは小さい腫瘍（約５０ｍｍ３）を有していた。生存マウスは、再チャレンジさせたＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞（図９Ｊ）に耐性があり、その中で、１匹のマウスの原発腫瘍が再成長し、５８日で早期除去基準を満たした。残りの５匹のマウスは両側で腫瘍がない状態が継続した。これらの結果は、ＰＬ１－ＯＸ４０＋抗ＯＸ４０ Ａｂの治療レジメンにより、抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ療法に対する応答が改善したことを示している。
次に、この治療レジメンの治療効果を、Ｂ１６Ｆ１０肺転移マウスモデルを使用して、抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４抗体とＰＬ１－ＯＸ４０（ψ）＋抗ＯＸ４０抗体（１００μｇ）の全身投与により評価した（図１０Ａ）。結果は、この治療レジメンにより、抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４抗体及びＰＢＳ治療と比較して、マウス肺における腫瘍転移を劇的に減少させたことを示した（図１０Ｂ～図１０Ｃ、図２０Ａ～図２０Ｂ）。抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ治療と比較して、ＰＬ１－ＯＸ４０（ψ）＋抗－ＯＸ４０ Ａｂと抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂとの群では、マウス肺のＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞の有意な増加が観察された。（図１０Ｄ～図１０Ｅ）。また、Ｆｏｘｐ３＋ＣＤ４＋細胞（Ｔｒｅｇ細胞）の数は、ＰＬ１－ＯＸ４０（ψ）＋抗ＯＸ４０ Ａｂと抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂの群の肺において減少した（図１０Ｆ）。これらの結果は、全身投与治療レジメンにより、肺転移マウスモデルにおいて強力な抗腫瘍活性を示すことを示している。
アゴニスト抗体は、内因性リガンドなどの同様の機能を有する部分で置換することができる。例えば、ＯＸ４０共刺激受容体は、ＯＸ４０リガンドと相互作用できる。ＯＸ４０リガンドのコード配列は、配列番号１３に示す。
実施例９．考察
がんのＴ細胞ベース免疫療法は急速に発展している分野である。近年、ナノテクノロジーは、ｅｘ ｖｉｖｏでの操作Ｔ細胞及びＴ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ変調などのＴ細胞療法を改善するために開発されている。これらの重要な進歩にもかかわらず、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて初代Ｔ細胞の抗腫瘍免疫を刺激するという、重要な課題が残っている。
この研究では、ｍＲＮＡをＴ細胞に送達するためのナノ粒子を探索するために、リン脂質誘導体及び糖脂質誘導体（ＰＬ及びＧＬ）のライブラリーを設計し、合成した。これらの材料は、ｍＲＮＡ送達用の生体模倣ナノ粒子を配合するために使用した。ＰＬ１ナノ粒子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで共刺激受容体ｍＲＮＡをＴ細胞株に送達するのみでなく、腫瘍内のＴ細胞に共刺激受容体ｍＲＮＡを送達することもでき、Ｔ細胞機能の調節に有用な送達ツールがもたらされた。
近年、抗腫瘍Ｔ細胞免疫を増強する能力を有する共刺激受容体に特異的なアグノスティック（ａｇｎｏｓｔｉｃ）抗体（ｍＡｂ）が癌治療のために開発されている。例えば、抗ＯＸ４０抗体は、Ｔ細胞を活性化することができ、腫瘍細胞を除去できるようになる。しかし、ＯＸ４０の低発現により、多くの腫瘍モデル（Ｂ１６Ｆ１０など）において抗ＯＸ４０抗体免疫療法の効果が妨げられた。この研究では、ＰＬ１ナノ粒子を使用して、ＯＸ４０ ｍＲＮＡを腫瘍浸潤Ｔ細胞に送達した。これにより、ＯＸ４０の発現が増加し、その結果、抗ＯＸ４０抗体の抗腫瘍効果が向上した。ＰＬ１－ＯＸ４０と抗ＯＸ４０抗体との併用治療は、複数の腫瘍モデルにおいて抗体単独と比較して有意な抗腫瘍活性を呈した。ＰＬ１－ＯＸ４０及び抗ＯＸ４０抗体の抗腫瘍活性をさらに高めるために、抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４抗体を治療レジメンに追加した。この治療アプローチにより、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデルにおいて約５０％の完全奏効を得た。特に、これらのマウスは、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞による再チャレンジに耐性を示した。この結果は、この治療レジメンがｉｎ ｖｉｖｏにおいて抗腫瘍免疫を効果的に誘導することを示している。
さらに、この治療戦略は、複数の投与経路に適合する。例えば、ＰＬ１－ＯＸ４０と抗ＯＸ４０抗体との併用治療は、腫瘍への局所投与のみでなく、抗ＯＸ４０抗体の全身投与によっても有意な抗腫瘍活性を呈した（図２１Ａ～図２１Ｄ）。さらに重要なことに、抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ－４ ＡｂとＰＬ１－ＯＸ４０（ψ）＋抗ＯＸ４０ Ａｂの全身投与により、肺転移モデルにおいて、腫瘍転移が劇的に減少した。これらの結果は、多様な治療状況下でのこの治療レジメンの幅広い適用可能性を示している。
実施例１０．リン脂質誘導体及び糖脂質誘導体（ＰＬ及びＧＬ）の化学合成
リン脂質及び糖脂質化合物及びそれらの類似体は、以前に報告された方法に従って合成した。例えば、ＷＯ／２０１９／０２７９９９を参照のこと。ＰＬ１～ＰＬ１８及びＧＬ１～ＧＬ１６の一般的な方法では、化合物ｉまたは類似体（０．５ｍｍｏｌ）を含むＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）溶液に、過剰量のトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、薄層クロマトグラフィーでモニターした。反応が完了すると、溶媒を蒸発させて、油状中間体を得た。中間体を１０ｍＬの無水テトラヒドロフランに溶解し、その後トリエチルアミン（０．２ｍＬ）を添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した。アルデヒド（３ｍｍｏｌ）及びＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３ｍｍｏｌ）を添加後、反応混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物を、ＲｅｄｉＳｅｐ Ｇｏｌｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎシリカカラム（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ）を備えたＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆシステムを使用したカラムクロマトグラフィーで、１００％ＣＨ２Ｃｌ２から７０％ＣＨ２Ｃｌ２（超、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ＝７５／２２／３（容量）の）勾配溶離（ＣＨ２Ｃｌ２及び超）により、精製し、対応する生成物を得た。
ＰＬ１， 収率３４％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．８６－４．８０ （３Ｈ， ｍ）， ４．１６－４．０８ （６Ｈ， ｍ）， ２．５３－２．５０ （２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ２．４２－２．３７ （８Ｈ， ｍ）， ２．３１－２．２８ （６Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， １．８３－１．８０ （２Ｈ， ｍ）， １．６３－１．５１ （２１Ｈ， ｍ）， １．３７－１．２８ （５４Ｈ， ｍ）， ０．９０－０．８７ （１８Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）． ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ６１Ｈ１２２Ｎ２Ｏ１０Ｐに対する計算値， １０７３．８８， 実測値， １０７３．８８
ＰＬ２， 収率６４％．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．１３－４．０８ （２Ｈ， ｍ）， ３．７９ （３Ｈ， ｓ）， ３．７６ （３Ｈ， ｓ）， ２．５３－２．５０ （２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ２．４２－２．３７ （９Ｈ， ｍ）， １．８５－１．７８ （２Ｈ， ｍ）， １．６２－１．５７ （２Ｈ， ｍ）， １．４５－１．４３ （６Ｈ， ｍ）， １．２７ （５４Ｈ， ｓ）， ０．９１－０．８７ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）． ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ４４Ｈ９４Ｎ２Ｏ４Ｐに対する計算値， ７４５．７０， 実測値， ７４５．６９
ＰＬ３， 収率５０％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．８６－４．８０ （３Ｈ， ｍ）， ４．０８－４．０３ （２Ｈ， ｍ）， ２．５４－２．５１ （２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ２．４６－２．３８ （９Ｈ， ｍ）， １．８３－１．８０ （２Ｈ， ｍ）， １．６２－１．６０ （２Ｈ， ｍ）， １．４５ （８Ｈ， ｍ）， １．３５－１．３４ （１２Ｈ， ｍ）， １．２８ （４９Ｈ， ｓ）， ０．９１－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）． ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ４８Ｈ１０２Ｎ２Ｏ４Ｐに対する計算値， ８０１．７６， 実測値， ８０１．７６
ＰＬ４， 収率 ４８％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．１６－４．０７ （６Ｈ， ｍ）， ２．５４－２．５０ （２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ２．４３－２．３７ （９Ｈ， ｍ）， １．８４－１．８０ （２Ｈ， ｍ）， １．５９－１．５６ （２Ｈ， ｍ）， １．４５ （６Ｈ， ｍ）， １．３８－１．２８ （４９Ｈ， ｍ）， ０．９１－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）． ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ４０Ｈ８６Ｎ２Ｏ４Ｐに対する計算値， ６８９．６３， 実測値， ６８９．６３
ＰＬ５， 収率 ４０％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．１４－４．０７ （６Ｈ， ｍ）， ２．５４－２．５０ （２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ２．４３－２．３７ （８Ｈ， ｍ）， １．８４－１．８０ （２Ｈ， ｍ）， １．５９－１．５６ （２Ｈ， ｍ）， １．４５ （６Ｈ， ｍ）， １．３７－１．２８ （５５Ｈ， ｍ）， ０．９１－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）． ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ４３Ｈ９２Ｎ２Ｏ４Ｐに対する計算値， ７３１．６８， 実測値， ７３１．６８
ＰＬ６， 収率４８％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．１６－４．０７ （６Ｈ， ｍ）， ３．７２－３．６９ （２Ｈ， ｍ）， ２．５４－２．５０ （２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ２．４４－２．３８ （８Ｈ， ｍ）， １．８６－１．７９ （２Ｈ， ｍ）， １．７２－１．６９ （２Ｈ， ｍ）， １．４４ （６Ｈ， ｍ）， １．３７－１．３４ （６Ｈ， ｍ）， １．２７ （５４Ｈ， ｓ）， ０．９１－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）． ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ４６Ｈ９８Ｎ２Ｏ４Ｐに対する計算値， ７７３．７３， 実測値， ７７３．７３
ＰＬ７， 収率 ４１％．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．１６－４．０７ （６Ｈ， ｍ）， ３．７２－３．６９ （２Ｈ， ｍ）， ２．５４－２．５０ （２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ２．４４－２．３８ （８Ｈ， ｍ）， １．８６－１．７９ （２Ｈ， ｍ）， １．７２－１．６９ （２Ｈ， ｍ）， １．４４ （６Ｈ， ｍ）， １．３７－１．３４ （６Ｈ， ｍ）， １．２７ （５４Ｈ， ｓ）， ０．９１－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ４９Ｈ１０４Ｎ２Ｏ４Ｐに対する計算値， ８１５．７７， 実測値， ８１５．７７
ＰＬ８， 収率２６％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．１４－４．０８ （６Ｈ， ｍ）， ３．２４－３．２２ （２Ｈ， ｍ）， ２．８０－２．７７ （１Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ２．５４－２．５０ （２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ２．４６－２．３２ （１４Ｈ， ｍ）， ２．２２ （３Ｈ， ｓ）， １．８３－１．８０ （２Ｈ， ｍ）， １．６５－１．６０ （６Ｈ， ｍ）， １．４４ （５Ｈ， ｍ）， １．３７－１．２８ （５０Ｈ， ｍ）， ０．９１－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）． ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ４４Ｈ９５Ｎ３Ｏ４Ｐに対する計算値， ７６０．７１，実測値， ７６０．７１
ＰＬ９， 収率２４％．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．１６－４．０７ （６Ｈ， ｍ）， ２．８０－２．７６ （２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ２．７４－２．７０ （４Ｈ， ｍ）， ２．６１－２．５８ （２Ｈ， ｍ）， ２．５３－２．４４ （８Ｈ， ｍ）， ２．３１ （３Ｈ， ｓ）， １．８７－１．８１ （４Ｈ， ｍ）， １．６９－１．６６ （２Ｈ， ｍ）， １．５６ （４Ｈ， ｍ）， １．４４ （２Ｈ， ｍ）， １．３７－１．２７ （５４Ｈ， ｍ）， ０．９１－０．８７ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）． ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ４７Ｈ１０１Ｎ３Ｏ４Ｐに対する計算値， ８０２．７５， 実測値， ８０２．７５
ＰＬ１０， 収率 ４１％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．１２－４．０６ （６Ｈ， ｍ）， ２．５１－２．５０ （２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ４）， ２．４３－２．３２ （１４Ｈ， ｍ）， ２．２２ （３Ｈ， ｓ）， １．８３－１．７９ （２Ｈ， ｍ）， １．６２－１．６０ （２Ｈ， ｍ）， １．４３ （６Ｈ， ｍ）， １．３７－１．２７ （６２Ｈ， ｍ）， ０．９１－０．８７ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）． ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ５０Ｈ１０７Ｎ３Ｏ４Ｐに対する計算値， ８４４．８０， 実測値， ８４４．８０
ＰＬ１１， 収率３３％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．１５－４．０６ （６Ｈ， ｍ）， ２．５３－２．５０ （２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ４）， ２．４４－２．４０ （９Ｈ， ｍ）， ２．３７－２．３２ （５Ｈ， ｍ）， ２．２２ （３Ｈ， ｓ）， １．８３－１．７９ （２Ｈ， ｍ）， １．７１－１．６８ （１Ｈ， ｍ）， １．６４－１．６０ （４Ｈ， ｍ）， １．４３ （６Ｈ， ｍ）， １．３７－１．２７ （６６Ｈ， ｍ）， ０．９１－０．８７ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）． ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ５３Ｈ１１３Ｎ３Ｏ４Ｐに対する計算値， ８８６．８５， 実測値， ８８６．８５
ＰＬ１２， 収率 ３２％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．１５－４．０６ （６Ｈ， ｍ）， ２．５２－２．３１ （２２Ｈ， ｍ）， １．８４－１．７７ （２Ｈ， ｍ）， １．６５－１．６０ （４Ｈ， ｍ）， １．４２－１．４１ （６Ｈ， ｍ）， １．３７－１．２７ （４９Ｈ， ｍ）， ０．９１－０．８７ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）． ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ４７Ｈ１００Ｎ４Ｏ４Ｐに対する計算値， ８１５．７５， 実測値， ８１５．７５
ＰＬ１３， 収率 ３０％．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．１６－４．０６ （６Ｈ， ｍ）， ２．５２－２．３２ （２２Ｈ， ｍ）， １．８２－１．７９ （２Ｈ， ｍ）， １．６６－１．６０ （４Ｈ， ｍ）， １．４２－１．４１ （６Ｈ， ｍ）， １．３７－１．２７ （５５Ｈ， ｍ）， ０．９１－０．８７ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ５０Ｈ１０６Ｎ４Ｏ４Ｐに対する計算値， ８５７．８０， 実測値， ８５７．７９．
ＰＬ１４， 収率 ３６％．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．１６－４．０７ （６Ｈ， ｍ）， ２．５３－２．３２ （２２Ｈ， ｍ）， １．８３－１．８０ （２Ｈ， ｍ）， １．６６－１．６１ （４Ｈ， ｍ）， １．４２ （６Ｈ， ｍ）， １．３７－１．２８ （６１Ｈ， ｍ）， ０．９１－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）． ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ５３Ｈ１１２Ｎ４Ｏ４Ｐに対する計算値， ８９９．８４， 実測値， ８９９．８４．
ＰＬ１５， 収率２１％．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．１３－４．０８ （６Ｈ， ｍ）， ２．５３－２．３３ （２４Ｈ， ｍ）， １．８５－１．８０ （４Ｈ， ｍ）， １．６６－１．６３ （５Ｈ， ｍ）， １．４２ （９Ｈ， ｍ）， １．３８－１．２８ （７２Ｈ， ｍ）， ０．９１－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ５６Ｈ１１８Ｎ４Ｏ４Ｐに対する計算値， ９４１．８９， 実測値， ９４１．８９．
ＰＬ１６， 収率 ２３％．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．６９－５．６３ （３Ｈ， ｍ）， ５．５７－５．５１ （３Ｈ， ｍ）， ４．６５－４．６３ （６Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８）， ４．１６－４．０８ （６Ｈ， ｍ）， ２．５５－２．４０ （１０Ｈ， ｍ）， ２．３４－２．３０ （６Ｈ， ｍ）， ２．１４－２．０９ （６Ｈ， ｍ）， １．８５－１．８０ （２Ｈ， ｍ）， １．６５－１．６２ （９Ｈ， ｍ）， １．４２ （９Ｈ， ｍ）， １．３８－１．３１ （６２Ｈ， ｍ）， ０．９２－０．８９ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ６４Ｈ１２２Ｎ２Ｏ１０Ｐに対する計算値， １１０９．８７， 実測値， １１０９．８９．
ＰＬ１７， 収率 ２３％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．４１－５．２８ （１２Ｈ， ｍ）， ４．１５－４．０６ （６Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８）， ３．１５－３．０３ （２Ｈ， ｍ）， ２．９７－２．８９ （７Ｈ， ｍ）， ２．７８－２．７５ （７Ｈ， ｍ）， ２．０７－２．００ （２２Ｈ， ｍ）， １．６２－１．５５ （５Ｈ， ｍ）， １．３５－１．２９ （５１Ｈ， ｍ）， ０．９０－０．８６ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ６４Ｈ１２２Ｎ２Ｏ４Ｐ に対する計算値， １０１３．９１， 実測値， １０１３．９１．
ＰＬ１８， 収率 ２４％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．２２－４．１０ （７Ｈ， ｍ）， ２．４３－２．３９ （１１Ｈ， ｍ）， ２．３４－２．３０ （２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ２．０４－２．０１ （２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， １．６７－１．６３ （４Ｈ， ｍ）， １．３８－１．２８ （７１Ｈ， ｍ）， ０．９１－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ５２Ｈ１０７Ｎ２Ｏ６Ｐに対する計算値， ８８７．７９， 実測値， ８８７．７９．
ＧＬ１， 収率 ２６％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ４．１７－４．１１ （２Ｈ， ｍ）， ２．７０－２．５７ （１１Ｈ， ｍ）， ２．３３－２．２９ （２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， １．７８ （２Ｈ， ｓ）， １．６９－１．６２ （３Ｈ， ｍ）， １．５４－１．４８ （８Ｈ， ｍ）， １．２８ （５９Ｈ， ｓ）， ０．９２－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ５０Ｈ９５Ｎ２Ｏ１０に対する計算値， ８８３．７０；実測値， ８８３．７０．
ＧＬ２， 収率 ３５％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．４０ （１Ｈ， ｍ）， ５．２４－５．１９ （１Ｈ， ｍ）， ５．０４－５．００ （１Ｈ， ｍ）， ４．４８－４．４６ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８）， ４．１７ （２Ｈ， ｍ）， ３．９１ （２Ｈ， ｍ）， ３．５４－３．５１ （１Ｈ， ｍ）， ２．４０－２．３８ （１２Ｈ， ｍ）， ２．１６ （３Ｈ， ｓ）， ２．０６ （６Ｈ， ｓ）， １．９９ （４Ｈ， ｓ）， １．７４ （２Ｈ， ｍ）， １．７３－１．７０ （２Ｈ， ｍ）， １．５７ （６Ｈ， ｍ）， １．２７ （５２Ｈ， ｓ）， ０．８９ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ５３Ｈ１０１Ｎ２Ｏ１０に対する計算値， ９２５．７５， 実測値， ９２５．７４．
ＧＬ３， 収率 ６４％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．４１－５．４０ （１Ｈ， ｍ）， ５．３２－５．２０ （１Ｈ， ｍ）， ５．０４－５．０１ （１Ｈ， ｍ）， ４．４８－４．４６ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８）， ４．２２－４．１３ （２Ｈ， ｍ）， ３．９４－３．９０ （２Ｈ， ｍ）， ３．５４－３．５２ （１Ｈ， ｍ）， ２．４６－２．３７ （１２Ｈ， ｍ）， ２．１６ （３Ｈ， ｓ）， ２．０６ （６Ｈ， ｓ）， ２．００ （４Ｈ， ｓ）， １．７３－１．７２ （２Ｈ， ｍ）， １．５８－１．５６ （２Ｈ， ｍ）， １．４２ （６Ｈ， ｍ）， １．２８ （５５ Ｈ， ｓ）， ０．８９ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ５６Ｈ１０７Ｎ２Ｏ１０に対する計算値， ９６７．７９， 実測値， ９６７．７９．
ＧＬ４， 収率 ３５％．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．３９ （１Ｈ， ｍ）， ５．１９－５．１５ （１Ｈ， ｍ）， ５．０３－５．０１ （１Ｈ， ｍ）， ４．４７－４．４５ （１Ｈ， ｍ）， ４．１５－４．１４ （２Ｈ， ｍ）， ３．９３－３．９２ （２Ｈ， ｍ）， ３．５３－３．５１ （１Ｈ， ｍ）， ２．８４－２．７４ （６Ｈ， ｍ）， ２．６４－２．５９ （４Ｈ， ｍ）， ２．５５－２．５１ （２Ｈ， ｍ）， ２．１０ （３Ｈ， ｓ）， ２．０５ （６Ｈ， ｓ）， １．９８ （６Ｈ， ｓ）， １．８３－１．７８ （４Ｈ， ｍ）， １．５８ （４Ｈ， ｍ）， １．４６ （２Ｈ， ｍ）， １．２６ （６３ Ｈ， ｓ）， ０．８９－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ４）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ５９Ｈ１１３Ｎ２Ｏ１０に対する計算値， １００９．８４， 実測値， １００９．８４．
ＧＬ５， 収率 ３５％．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．４１－５．４０ （１Ｈ， ｍ）， ５．２２－５．１９ （１Ｈ， ｍ）， ５．０４ （１Ｈ， ｍ）， ４．４８－４．４６ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８）， ４．１７ （２Ｈ， ｍ）， ３．９１ （２Ｈ， ｍ）， ３．５４－３．５２ （１Ｈ， ｍ）， ２．８４－２．５１ （１５Ｈ， ｍ）， ２．１０ （３Ｈ， ｓ）， ２．１６ （３Ｈ， ｓ）， ２．０７ （５Ｈ， ｓ）， ２．００ （４Ｈ， ｓ）， １．７３－１．７２ （２Ｈ， ｍ）， １．６２－１．６０ （４Ｈ， ｓ）， １．４３－１．４２ （６Ｈ， ｍ）， １．２６ （５３Ｈ， ｓ）， ０．８９－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ６０Ｈ１１６Ｎ３Ｏ１０に対する計算値， １０３８．８７， 実測値， １０３８．８６．
ＧＬ６， 収率 ３５％．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．４１－５．４０ （１Ｈ， ｍ）， ５．２４－５．２１ （１Ｈ， ｍ）， ５．０４＝５．０１ （１Ｈ， ｍ）， ４．４８－４．４６ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８）， ４．２２－４．１２ （２Ｈ， ｍ）， ３．９５－３．８９ （２Ｈ， ｍ）， ３．５６－３．５０ （１Ｈ， ｍ）， ２．８４－２．３３ （２２Ｈ， ｍ）， ２．１６ （３Ｈ， ｓ）， ２．０７－２．０６ （１Ｈ， ｓ）， ２．００ （３Ｈ， ｓ）， １．７３－１．６３ （６Ｈ， ｍ）， １．４２ （６Ｈ， ｍ）， １．２７ （５３Ｈ， ｓ）， ０．９１－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ６３Ｈ１２１Ｎ４Ｏ１０に対する計算値， １０９３．９１， 実測値， １０９３．９１．
ＧＬ７， 収率 ３０％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．２４－５．１９ （１Ｈ， ｍ）， ５．１３－５．０８ （１Ｈ， ｍ）， ５．０２－４．９８ （１Ｈ， ｍ）， ４．５２－４．５０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８）， ４．３２－４．２７ （１Ｈ， ｍ）， ４．１６－４．１３ （１Ｈ， ｍ）， ３．９４－３．８９ （１Ｈ， ｍ）， ３．７２－３．６９ （１Ｈ， ｍ）， ３．５６－３．５０ （１Ｈ， ｍ）， ３．３７－３．３４ （１Ｈ， ｍ）， ２．４６－２．３５ （１５Ｈ， ｍ）， ２．２３ （３Ｈ， ｓ）， ２．１０－２．０２ （１１Ｈ， ｍ）， １．７２－１．６０ （８Ｈ， ｍ）， １．４５－１．２８ （６４Ｈ， ｓ）， ０．９１－０．８８ （１２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ６０Ｈ１１６Ｎ３Ｏ１０に対する計算値， １０３８，８７， 実測値， １０３８．８７．
ＧＬ８， 収率 ６５％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．２４－５．１９ （１Ｈ， ｍ）， ５．１２－５．０８ （１Ｈ， ｍ）， ５．０１－４．９７ （１Ｈ， ｍ）， ４．５１－４．４９ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８）， ４．３１－４．２７ （１Ｈ， ｍ）， ４．１６－４．１３ （１Ｈ， ｍ）， ３．９２－３．８８ （１Ｈ， ｍ）， ３．７０－３．６９ （３Ｈ， ｍ）， ３．５５－３．５０ （１Ｈ， ｍ）， ２．４７－２．３４ （２５Ｈ， ｍ）， ２．１０ （３Ｈ， ｓ）， ２．０５－２．０２ （９Ｈ， ｍ）， １．７０ （１０Ｈ， ｍ）， １．５０ （１０Ｈ， ｍ）， １．２７ （５５Ｈ， ｓ）， ０．９１－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ６３Ｈ１２１Ｎ４Ｏ１０ に対する計算値， １０９３，９１， 実測値， １０９３．９１．
ＧＬ９， 収率 ４９％．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．６９－５．６３ （１Ｈ， ｍ）， ５．５７－５．５１ （３Ｈ， ｍ）， ５．２４－５．１９ （１Ｈ， ｍ）， ５．１２－５．０８ （１Ｈ， ｍ）， ５．０２－４．９７ （１Ｈ， ｍ）， ４．６４－４．６３ （６Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ４）， ４．５２－４．５０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８）， ４．３１－４．２７ （１Ｈ， ｍ）， ４．１７－４．１１ （１Ｈ， ｍ）， ３．９４－３．８８ （１Ｈ， ｍ）， ３．７３－３．６９ （１Ｈ， ｍ）， ３．５４－３．５１ （１Ｈ， ｍ）， ２．４７－２．３０ （１８Ｈ， ｍ）， ２．１４－２．０２ （１７Ｈ， ｍ）， １．６５－１．６２ （１１Ｈ， ｍ）， １．４０－１．３１ （５５Ｈ， ｍ）， ０．９２－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ７４Ｈ１３１Ｎ２Ｏ１６に対する計算値， １３０３．９５， 実測値， １３０３．９４．
ＧＬ１０， 収率 ３３％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．６４－５．６３ （２Ｈ， ｍ）， ５．５７－５．５１ （２Ｈ， ｍ）， ５．２４－５．１９ （１Ｈ， ｍ）， ５．１３－５．０８ （１Ｈ， ｍ）， ５．０２－４．９７ （１Ｈ， ｍ）， ４．６４－４．６３ （４Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ４）， ４．５２－４．５０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８）， ４．３１－４．２７ （１Ｈ， ｍ）， ４．１７－４．１３ （１Ｈ， ｍ）， ３．９５－３．８９ （１Ｈ， ｍ）， ３．７２－３．７０ （２Ｈ， ｍ）， ３．５８－３．５２ （２Ｈ， ｍ）， ２．５５－２．３８ （９Ｈ， ｍ）， ２．３４－２．３０ （５Ｈ， ｍ）， ２．２２ （２Ｈ， ｍ）， ２．１６－２．０２ （１６Ｈ， ｍ）， １．７９－１．６０ （９Ｈ， ｍ）， １．４６－１．２７ （３２Ｈ， ｍ）， ０．９２－０．８８ （６Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ５７Ｈ１０１Ｎ２Ｏ１４に対する計算値， １０３７．７３， 実測値， １０３７．７３．
ＧＬ１１， 収率 ２０％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．２５－５．２０ （１Ｈ， ｍ）， ５．１４－５．０８ （１Ｈ， ｍ）， ５．０２－４．９７ （１Ｈ， ｍ）， ４．５５－４．５３ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８）， ４．３２－４．２８ （１Ｈ， ｍ）， ４．１７－４．１３ （１Ｈ， ｍ）， ４．０８－４．０５ （６Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ３．９３－３．８８ （１Ｈ， ｍ）， ３．７５－３．７１ （１Ｈ， ｓ）， ３．５７－３．５３ （１Ｈ， ｍ）， ２．８０－２．７６ （６Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ２．４７－２．４３ （１０Ｈ， ｍ）， ２．１１ （３Ｈ， ｓ）， ２．０７ （３Ｈ， ｓ）， ２．０４ （３Ｈ， ｓ）， ２．０２ （３Ｈ， ｓ）， １．６７－１．６０ （１２Ｈ， ｍ）， １．３２－１．２８ （５４Ｈ， ｍ）， ０．９２－０．８８ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ６５Ｈ１１９Ｎ２Ｏ１６に対する計算値， １１８３．８６， 実測値， １１８３．８５．
ＧＬ１２， 収率 ６３％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．２４－５．１９ （１Ｈ， ｍ）， ５．１２－５．０８ （１Ｈ， ｍ）， ５．０２－４．９７ （１Ｈ， ｍ）， ４．５２－４．５０ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８）， ４．３１－４．２６ （１Ｈ， ｍ）， ４．１６－４．１２ （１Ｈ， ｍ）， ３．９４－３．８９ （１Ｈ， ｍ）， ３．７１－３．６８ （２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ３．５８－３．５２ （１Ｈ， ｍ）， ２．４４－２．３３ （１２Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ２．２１ （３Ｈ， ｓ）， ２．１０ （３Ｈ， ｓ）， ２．０６ （３Ｈ， ｓ）， ２．０４ （３Ｈ， ｓ）， ２．０２ （３Ｈ， ｓ）， １．７５－１．６３ （６Ｈ， ｍ）， １．４４ （４Ｈ， ｍ）， １．２７ （３７Ｈ， ｍ）， ０．９１－０．８７ （６Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ４５Ｈ８５Ｎ２Ｏ１０に対する計算値， ８１３．６２， 実測値， ８１３．６２．
ＧＬ１３， 収率 ４４％． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．４２ （１Ｈ， ｍ）， ５．２４－５．１９ （１Ｈ， ｍ）， ５．１３－５．０９ （１Ｈ， ｍ）， ４．５２－４．５０ （１Ｈ， ｍ）， ４．２１－４．１７ （１Ｈ， ｍ）， ４．０７－３．８７ （３Ｈ， ｍ）， ３．５３－３．４７ （１Ｈ， ｍ）， ２．５２－２．３９ （１０Ｈ， ｍ）， １．７７－１．６６ （４Ｈ， ｍ）， １．５０－１．４２ （５Ｈ， ｍ）， １．２７－１．１３ （８９Ｈ， ｍ）， ０．９１－０．８７ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）． ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ６８Ｈ１３１Ｎ２Ｏ１０ に対する計算値， １１３５．９８， 実測値， １１３５．９８．
ＧＬ１４， 収率 ３７％．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．４３－５．２４ （４Ｈ， ｍ）， ５．０９－５．０４ （１Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ４．８９－４．８２ （２Ｈ， ｍ）， ４．５３－４．４７ （２Ｈ， ｍ）， ４．２９－４．２２ （３Ｈ， ｍ）， ４．０７－３．９６ （４Ｈ， ｍ）， ３．９０－３．８７ （１Ｈ， ｍ）， ３．７２－３．６７ （４Ｈ， ｍ）， ３．５３－３．５０ （１Ｈ， ｍ）， ２．４８－２．３７ （１０Ｈ， ｍ）， ２．１６－２．０１ （２７Ｈ， ｍ）， １．７３－１．６９ （３Ｈ， ｍ）， １．４５－１．４１ （６Ｈ， ｍ）， １．２７ （４５Ｈ， ｓ）， ０．９１－０．８７ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）． ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ６８Ｈ１２３Ｎ２Ｏ１８に対する計算値， １２５５．８８， 実測値， １２５５．８８．
ＧＬ１５， 収率 ４８％．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．３６－５．３５ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ４）， ５．２２－５．１８ （１Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ５．１４－５．１０ （１Ｈ， ｍ）， ４．９８－４．９５ （１Ｈ， ｍ）， ４．９１－４．８７ （１Ｈ， ｍ）， ４．５０－４．４５ （３Ｈ， ｍ）， ４．１５－４．０７ （３Ｈ， ｍ）， ３．８８－３．７８ （４Ｈ， ｍ）， ３．６２－３．５８ （１Ｈ， ｍ）， ３．５２－３．４７ （１Ｈ， ｍ）， ２．３９－２．３７ （１Ｈ， ｍ）， ２．１６ （３Ｈ， ｓ）， ２．１３ （３Ｈ， ｓ）， ２．０７－２．０４ （１２Ｈ， ｍ）， １．９７ （３Ｈ， ｓ）， １．７１－１．６８ （３Ｈ， ｍ）， １．５５－１．５３ （２Ｈ， ｍ）， １．４１ （６Ｈ， ｍ）， １．２７ （５１Ｈ， ｍ）， ０．９１－０．８７ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）． ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ６８Ｈ１２３Ｎ２Ｏ１８ に対する計算値， １２５５．８８， 実測値， １２５５．８８．
ＧＬ１６， 収率 ５５％．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ＝ ５．３４－５．３０ （１Ｈ， ｍ）， ５．２４－５．２３ （１Ｈ， ｍ）， ４．９９ （１Ｈ， ｍ）， ４．３５－４．２８ （２Ｈ， ｍ）， ４．１４－４．１０ （１Ｈ， ｍ）， ３．７５－３．７１ （１Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ３．４５－３．４１ （１Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）， ２．４１（１２Ｈ， ｍ）， ２．１２－２．０５ （９Ｈ， ｍ）， １．７０（３Ｈ， ｍ）， １．５８ （３Ｈ， ｍ）， １．４２ （６Ｈ， ｍ）， １．２７ （５２Ｈ， ｓ）， ０．９１－０．８７ （９Ｈ， ｔ， Ｊ ＝ ８）．ＭＳ （ｍ／ｚ）： ［Ｍ＋Ｈ］＋ Ｃ５３Ｈ１０３Ｎ２Ｏ８ に対する計算値， ８９５．７７， 実測値， ８９５．７７．

配列
ＲＮＡ配列
ヒトＯＸ４０ｍＲＮＡ（５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲを含む）（配列番号１）
ＧＧＧＡＡＡＡＧＵＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＧＡＧＡＡＡＡＵＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡＵＧＵＧＣＧＵＧＧＧＡＧＣＡＣＧＧＡＧＡＣＵＧＧＧＡＡＧＧＧＧＡＣＣＵＵＧＣＧＣＣＧＣＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＣＵＧＧＧＣＣＵＧＧＧＣＣＵＧＵＣＣＡＣＣＧＵＧＡＣＡＧＧＣＣＵＧＣＡＣＵＧＣＧＵＧＧＧＣＧＡＣＡＣＣＵＡＣＣＣＵＵＣＵＡＡＣＧＡＵＡＧＧＵＧＣＵＧＵＣＡＣＧＡＧＵＧＵＣＧＣＣＣＡＧＧＣＡＡＵＧＧＣＡＵＧＧＵＧＵＣＣＡＧＧＵＧＣＵＣＣＣＧＣＵＣＵＣＡＧＡＡＣＡＣＣＧＵＧＵＧＣＣＧＧＣＣＵＵＧＵＧＧＣＣＣＡＧＧＣＵＵＣＵＡＵＡＡＵＧＡＣＧＵＧＧＵＧＡＧＣＵＣＣＡＡＧＣＣＣＵＧＣＡＡＧＣＣＵＵＧＵＡＣＡＵＧＧＵＧＣＡＡＣＣＵＧＣＧＧＡＧＣＧＧＣＵＣＣＧＡＧＡＧＡＡＡＧＣＡＧＣＵＧＵＧＣＡＣＣＧＣＣＡＣＡＣＡＧＧＡＵＡＣＣＧＵＧＵＧＣＣＧＧＵＧＵＡＧＡＧＣＣＧＧＣＡＣＡＣＡＧＣＣＡＣＵＧＧＡＣＵＣＵＵＡＣＡＡＧＣＣＡＧＧＡＧＵＧＧＡＵＵＧＵＧＣＡＣＣＵＵＧＣＣＣＡＣＣＵＧＧＣＣＡＣＵＵＵＡＧＣＣＣＡＧＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＧＣＣＵＧＵＡＡＧＣＣＣＵＧＧＡＣＣＡＡＵＵＧＣＡＣＡＣＵＧＧＣＡＧＧＣＡＡＧＣＡＣＡＣＣＣＵＧＣＡＧＣＣＡＧＣＡＵＣＵＡＡＵＵＣＵＡＧＣＧＡＵＧＣＣＡＵＣＵＧＣＧＡＧＧＡＣＡＧＡＧＡＵＣＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＡＧＣＣＵＣＡＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＧＧＡＣＣＵＣＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＡＵＣＡＣＣＧＵＧＣＡＧＣＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＡＵＧＧＣＣＵＣＧＧＡＣＣＵＣＵＣＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＡＣＡＡＧＡＣＣＣＧＵＧＧＡＧＧＵＧＣＣＵＧＧＡＧＧＡＡＧＧＧＣＡＧＵＧＧＣＡＧＣＵＡＵＣＵＵＧＧＧＧＣＵＣＧＧＧＵＵＧＧＵＡＣＵＧＧＧＡＣＵＧＣＵＵＧＧＣＣＣＡＣＵＵＧＣＵＡＵＣＵＵＧＣＵＧＧＣＵＣＵＧＵＡＵＣＵＧＣＵＧＡＧＧＣＧＣＧＡＣＣＡＧＣＧＣＣＵＧＣＣＣＣＣＵＧＡＵＧＣＡＣＡＣＡＡＧＣＣＡＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＣＵＵＣＣＧＧＡＣＣＣＣＡＡＵＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＡＧＡＣＧＣＡＣＡＣＵＣＣＡＣＡＣＵＧＧＣＣＡＡＧＡＵＣＵＧＡＵＵＧＵＧＵＡＵＧＣＧＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＵＣＧＵＡ
マウスＯＸ４０ ｍＲＮＡ（５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲを含む）（配列番号２）
ＧＧＧＡＡＡＡＧＵＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＧＡＧＡＡＡＡＵＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡＵＧＵＡＵＧＵＧＵＧＧＧＵＵＣＡＧＣＡＧＣＣＣＡＣＡＧＣＣＣＵＵＣＵＧＣＵＧＣＵＧＧＧＡＣＵＣＡＣＡＣＵＵＧＧＡＧＵＵＡＣＡＧＣＡＡＧＧＣＧＧＣＵＣＡＡＣＵＧＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＡＣＣＵＡＣＣＣＣＡＧＵＧＧＵＣＡＣＡＡＧＵＧＣＵＧＵＣＧＵＧＡＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＵＧＧＵＡＵＧＧＵＧＡＧＣＣＧＣＵＧＵＧＡＵＣＡＵＡＣＣＡＧＧＧＡＵＡＣＵＣＵＡＵＧＵＣＡＵＣＣＧＵＧＵＧＡＧＡＣＵＧＧＣＵＵＣＵＡＣＡＡＵＧＡＡＧＣＵＧＵＣＡＡＵＵＡＵＧＡＵＡＣＣＵＧＣＡＡＧＣＡＧＵＧＵＡＣＡＣＡＧＵＧＣＡＡＣＣＡＵＣＧＡＡＧＵＧＧＡＡＧＵＧＡＡＣＵＣＡＡＧＣＡＧＡＡＵＵＧＣＡＣＡＣＣＵＡＣＵＣＡＧＧＡＵＡＣＵＧＵＣＵＧＣＡＧＡＵＧＵＡＧＡＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＡＡＣＣＵＣＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＧＧＣＵＡＣＡＡＧＣＵＵＧＧＡＧＵＵＧＡＣＵＧＵＧＵＵＣＣＣＵＧＣＣＣＵＣＣＵＧＧＣＣＡＣＵＵＵＵＣＵＣＣＡＧＧＣＡＡＣＡＡＣＣＡＧＧＣＣＵＧＣＡＡＧＣＣＣＵＧＧＡＣＣＡＡＵＵＧＵＡＣＣＵＵＡＵＣＵＧＧＡＡＡＧＣＡＧＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣＣＡＧＣＣＡＧＵＧＡＣＡＧＣＵＵＧＧＡＣＧＣＡＧＵＣＵＧＵＧＡＧＧＡＣＡＧＡＡＧＣＣＵＣＣＵＧＧＣＣＡＣＡＣＵＧＣＵＣＵＧＧＧＡＧＡＣＣＣＡＧＣＧＣＣＣＵＡＣＡＵＵＣＡＧＧＣＣＡＡＣＣＡＣＵＧＵＣＣＡＡＵＣＣＡＣＣＡＣＡＧＵＣＵＧＧＣＣＣＡＧＧＡＣＵＵＣＵＧＡＧＵＵＧＣＣＣＵＣＵＣＣＡＣＣＣＡＣＣＵＵＧＧＵＧＡＣＵＣＣＵＧＡＧＧＧＣＣＣＵＧＣＡＵＵＵＧＣＵＧＵＵＣＵＣＣＵＡＧＧＣＣＵＧＧＧＣＣＵＧＧＧＣＣＵＧＣＵＧＧＣＵＣＣＣＵＵＧＡＣＵＧＵＣＣＵＧＣＵＧＧＣＣＵＵＧＵＡＣＣＵＧＣＵＣＣＧＧＡＡＧＧＣＵＵＧＧＡＧＡＵＵＧＣＣＵＡＡＣＡＣＵＣＣＣＡＡＡＣＣＵＵＧＵＵＧＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＵＵＣＡＧＧＡＣＣＣＣＧＡＵＣＣＡＧＧＡＧＧＡＡＣＡＣＡＣＡＧＡＣＧＣＡＣＡＣＵＵＵＡＣＵＣＵＧＧＣＣＡＡＧＡＵＣＵＧＡＵＵＧＵＧＵＡＵＧＣＧＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＵＣＧＵＡ
異種５’ＵＴＲ ／ ３’ＵＴＲ
５’ＵＴＲ：ＧＧＧＡＡＡＡＧＵＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＧＡＧＡＡＡＡＵＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ（配列番号３）
３’ＵＴＲ：ＵＵＧＵＧＵＡＵＧＣＧＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＵＣＧＵＡ（配列番号４）
ヒトＯＸ４０コード配列（配列番号５）
ＡＵＧＵＧＣＧＵＧＧＧＡＧＣＡＣＧＧＡＧＡＣＵＧＧＧＡＡＧＧＧＧＡＣＣＵＵＧＣＧＣＣＧＣＣＣＵＧＣＵＧＣＵＧＣＵＧＧＧＣＣＵＧＧＧＣＣＵＧＵＣＣＡＣＣＧＵＧＡＣＡＧＧＣＣＵＧＣＡＣＵＧＣＧＵＧＧＧＣＧＡＣＡＣＣＵＡＣＣＣＵＵＣＵＡＡＣＧＡＵＡＧＧＵＧＣＵＧＵＣＡＣＧＡＧＵＧＵＣＧＣＣＣＡＧＧＣＡＡＵＧＧＣＡＵＧＧＵＧＵＣＣＡＧＧＵＧＣＵＣＣＣＧＣＵＣＵＣＡＧＡＡＣＡＣＣＧＵＧＵＧＣＣＧＧＣＣＵＵＧＵＧＧＣＣＣＡＧＧＣＵＵＣＵＡＵＡＡＵＧＡＣＧＵＧＧＵＧＡＧＣＵＣＣＡＡＧＣＣＣＵＧＣＡＡＧＣＣＵＵＧＵＡＣＡＵＧＧＵＧＣＡＡＣＣＵＧＣＧＧＡＧＣＧＧＣＵＣＣＧＡＧＡＧＡＡＡＧＣＡＧＣＵＧＵＧＣＡＣＣＧＣＣＡＣＡＣＡＧＧＡＵＡＣＣＧＵＧＵＧＣＣＧＧＵＧＵＡＧＡＧＣＣＧＧＣＡＣＡＣＡＧＣＣＡＣＵＧＧＡＣＵＣＵＵＡＣＡＡＧＣＣＡＧＧＡＧＵＧＧＡＵＵＧＵＧＣＡＣＣＵＵＧＣＣＣＡＣＣＵＧＧＣＣＡＣＵＵＵＡＧＣＣＣＡＧＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＧＣＣＵＧＵＡＡＧＣＣＣＵＧＧＡＣＣＡＡＵＵＧＣＡＣＡＣＵＧＧＣＡＧＧＣＡＡＧＣＡＣＡＣＣＣＵＧＣＡＧＣＣＡＧＣＡＵＣＵＡＡＵＵＣＵＡＧＣＧＡＵＧＣＣＡＵＣＵＧＣＧＡＧＧＡＣＡＧＡＧＡＵＣＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＡＧＣＣＵＣＡＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＧＧＡＣＣＵＣＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＡＵＣＡＣＣＧＵＧＣＡＧＣＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＡＵＧＧＣＣＵＣＧＧＡＣＣＵＣＵＣＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＡＣＡＡＧＡＣＣＣＧＵＧＧＡＧＧＵＧＣＣＵＧＧＡＧＧＡＡＧＧＧＣＡＧＵＧＧＣＡＧＣＵＡＵＣＵＵＧＧＧＧＣＵＣＧＧＧＵＵＧＧＵＡＣＵＧＧＧＡＣＵＧＣＵＵＧＧＣＣＣＡＣＵＵＧＣＵＡＵＣＵＵＧＣＵＧＧＣＵＣＵＧＵＡＵＣＵＧＣＵＧＡＧＧＣＧＣＧＡＣＣＡＧＣＧＣＣＵＧＣＣＣＣＣＵＧＡＵＧＣＡＣＡＣＡＡＧＣＣＡＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＣＵＵＣＣＧＧＡＣＣＣＣＡＡＵＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＡＧＡＣＧＣＡＣＡＣＵＣＣＡＣＡＣＵＧＧＣＣＡＡＧＡＵＣＵＧＡ
マウスＯＸ４０コード配列（配列番号６）
ＡＵＧＵＡＵＧＵＧＵＧＧＧＵＵＣＡＧＣＡＧＣＣＣＡＣＡＧＣＣＣＵＵＣＵＧＣＵＧＣＵＧＧＧＡＣＵＣＡＣＡＣＵＵＧＧＡＧＵＵＡＣＡＧＣＡＡＧＧＣＧＧＣＵＣＡＡＣＵＧＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＡＣＣＵＡＣＣＣＣＡＧＵＧＧＵＣＡＣＡＡＧＵＧＣＵＧＵＣＧＵＧＡＧＵＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＵＧＧＵＡＵＧＧＵＧＡＧＣＣＧＣＵＧＵＧＡＵＣＡＵＡＣＣＡＧＧＧＡＵＡＣＵＣＵＡＵＧＵＣＡＵＣＣＧＵＧＵＧＡＧＡＣＵＧＧＣＵＵＣＵＡＣＡＡＵＧＡＡＧＣＵＧＵＣＡＡＵＵＡＵＧＡＵＡＣＣＵＧＣＡＡＧＣＡＧＵＧＵＡＣＡＣＡＧＵＧＣＡＡＣＣＡＵＣＧＡＡＧＵＧＧＡＡＧＵＧＡＡＣＵＣＡＡＧＣＡＧＡＡＵＵＧＣＡＣＡＣＣＵＡＣＵＣＡＧＧＡＵＡＣＵＧＵＣＵＧＣＡＧＡＵＧＵＡＧＡＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＡＡＣＣＵＣＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＧＧＣＵＡＣＡＡＧＣＵＵＧＧＡＧＵＵＧＡＣＵＧＵＧＵＵＣＣＣＵＧＣＣＣＵＣＣＵＧＧＣＣＡＣＵＵＵＵＣＵＣＣＡＧＧＣＡＡＣＡＡＣＣＡＧＧＣＣＵＧＣＡＡＧＣＣＣＵＧＧＡＣＣＡＡＵＵＧＵＡＣＣＵＵＡＵＣＵＧＧＡＡＡＧＣＡＧＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣＣＡＧＣＣＡＧＵＧＡＣＡＧＣＵＵＧＧＡＣＧＣＡＧＵＣＵＧＵＧＡＧＧＡＣＡＧＡＡＧＣＣＵＣＣＵＧＧＣＣＡＣＡＣＵＧＣＵＣＵＧＧＧＡＧＡＣＣＣＡＧＣＧＣＣＣＵＡＣＡＵＵＣＡＧＧＣＣＡＡＣＣＡＣＵＧＵＣＣＡＡＵＣＣＡＣＣＡＣＡＧＵＣＵＧＧＣＣＣＡＧＧＡＣＵＵＣＵＧＡＧＵＵＧＣＣＣＵＣＵＣＣＡＣＣＣＡＣＣＵＵＧＧＵＧＡＣＵＣＣＵＧＡＧＧＧＣＣＣＵＧＣＡＵＵＵＧＣＵＧＵＵＣＵＣＣＵＡＧＧＣＣＵＧＧＧＣＣＵＧＧＧＣＣＵＧＣＵＧＧＣＵＣＣＣＵＵＧＡＣＵＧＵＣＣＵＧＣＵＧＧＣＣＵＵＧＵＡＣＣＵＧＣＵＣＣＧＧＡＡＧＧＣＵＵＧＧＡＧＡＵＵＧＣＣＵＡＡＣＡＣＵＣＣＣＡＡＡＣＣＵＵＧＵＵＧＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＵＵＣＡＧＧＡＣＣＣＣＧＡＵＣＣＡＧＧＡＧＧＡＡＣＡＣＡＣＡＧＡＣＧＣＡＣＡＣＵＵＵＡＣＵＣＵＧＧＣＣＡＡＧＡＵＣＵＧＡ
ＤＮＡ配列
ヒトＯＸ４０ ｍＲＮＡ（５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲを含む）（配列番号７）
ＧＧＧＡＡＡＡＧＴＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＧＡＧＡＡＡＡＴＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＡＧＣＡＣＧＧＡＧＡＣＴＧＧＧＡＡＧＧＧＧＡＣＣＴＴＧＣＧＣＣＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＴＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＧＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＧＴＧＧＧＣＧＡＣＡＣＣＴＡＣＣＣＴＴＣＴＡＡＣＧＡＴＡＧＧＴＧＣＴＧＴＣＡＣＧＡＧＴＧＴＣＧＣＣＣＡＧＧＣＡＡＴＧＧＣＡＴＧＧＴＧＴＣＣＡＧＧＴＧＣＴＣＣＣＧＣＴＣＴＣＡＧＡＡＣＡＣＣＧＴＧＴＧＣＣＧＧＣＣＴＴＧＴＧＧＣＣＣＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＧＣＴＣＣＡＡＧＣＣＣＴＧＣＡＡＧＣＣＴＴＧＴＡＣＡＴＧＧＴＧＣＡＡＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＡＧＡＧＡＡＡＧＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＣＣＧＣＣＡＣＡＣＡＧＧＡＴＡＣＣＧＴＧＴＧＣＣＧＧＴＧＴＡＧＡＧＣＣＧＧＣＡＣＡＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＡＣＴＣＴＴＡＣＡＡＧＣＣＡＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＴＧＣＡＣＣＴＴＧＣＣＣＡＣＣＴＧＧＣＣＡＣＴＴＴＡＧＣＣＣＡＧＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＧＣＣＴＧＴＡＡＧＣＣＣＴＧＧＡＣＣＡＡＴＴＧＣＡＣＡＣＴＧＧＣＡＧＧＣＡＡＧＣＡＣＡＣＣＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＣＡＴＣＴＡＡＴＴＣＴＡＧＣＧＡＴＧＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＧＡＣＡＧＡＧＡＴＣＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＧＧＡＣＣＴＣＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＡＴＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＣＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＴＣＴＣＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＡＣＡＡＧＡＣＣＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＣＴＧＧＡＧＧＡＡＧＧＧＣＡＧＴＧＧＣＡＧＣＴＡＴＣＴＴＧＧＧＧＣＴＣＧＧＧＴＴＧＧＴＡＣＴＧＧＧＡＣＴＧＣＴＴＧＧＣＣＣＡＣＴＴＧＣＴＡＴＣＴＴＧＣＴＧＧＣＴＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＴＧＡＧＧＣＧＣＧＡＣＣＡＧＣＧＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＧＡＴＧＣＡＣＡＣＡＡＧＣＣＡＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＣＴＴＣＣＧＧＡＣＣＣＣＡＡＴＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＡＧＡＣＧＣＡＣＡＣＴＣＣＡＣＡＣＴＧＧＣＣＡＡＧＡＴＣＴＧＡＴＴＧＴＧＴＡＴＧＣＧＴＴＡＡＴＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＴＣＧＴＡ
マウスＯＸ４０ ｍＲＮＡ（５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲを含む）（配列番号８）
ＧＧＧＡＡＡＡＧＴＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＧＡＧＡＡＡＡＴＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＡＴＧＴＧＴＧＧＧＴＴＣＡＧＣＡＧＣＣＣＡＣＡＧＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＡＣＴＣＡＣＡＣＴＴＧＧＡＧＴＴＡＣＡＧＣＡＡＧＧＣＧＧＣＴＣＡＡＣＴＧＴＧＴＴＡＡＡＣＡＴＡＣＣＴＡＣＣＣＣＡＧＴＧＧＴＣＡＣＡＡＧＴＧＣＴＧＴＣＧＴＧＡＧＴＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＴＧＧＴＡＴＧＧＴＧＡＧＣＣＧＣＴＧＴＧＡＴＣＡＴＡＣＣＡＧＧＧＡＴＡＣＴＣＴＡＴＧＴＣＡＴＣＣＧＴＧＴＧＡＧＡＣＴＧＧＣＴＴＣＴＡＣＡＡＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＡＡＴＴＡＴＧＡＴＡＣＣＴＧＣＡＡＧＣＡＧＴＧＴＡＣＡＣＡＧＴＧＣＡＡＣＣＡＴＣＧＡＡＧＴＧＧＡＡＧＴＧＡＡＣＴＣＡＡＧＣＡＧＡＡＴＴＧＣＡＣＡＣＣＴＡＣＴＣＡＧＧＡＴＡＣＴＧＴＣＴＧＣＡＧＡＴＧＴＡＧＡＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＡＡＣＣＴＣＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＡＧＣＴＴＧＧＡＧＴＴＧＡＣＴＧＴＧＴＴＣＣＣＴＧＣＣＣＴＣＣＴＧＧＣＣＡＣＴＴＴＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＣＡＡＣＣＡＧＧＣＣＴＧＣＡＡＧＣＣＣＴＧＧＡＣＣＡＡＴＴＧＴＡＣＣＴＴＡＴＣＴＧＧＡＡＡＧＣＡＧＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣＣＡＧＣＣＡＧＴＧＡＣＡＧＣＴＴＧＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＧＴＧＡＧＧＡＣＡＧＡＡＧＣＣＴＣＣＴＧＧＣＣＡＣＡＣＴＧＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＣＣＣＡＧＣＧＣＣＣＴＡＣＡＴＴＣＡＧＧＣＣＡＡＣＣＡＣＴＧＴＣＣＡＡＴＣＣＡＣＣＡＣＡＧＴＣＴＧＧＣＣＣＡＧＧＡＣＴＴＣＴＧＡＧＴＴＧＣＣＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＡＣＣＴＴＧＧＴＧＡＣＴＣＣＴＧＡＧＧＧＣＣＣＴＧＣＡＴＴＴＧＣＴＧＴＴＣＴＣＣＴＡＧＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＧＣＴＣＣＣＴＴＧＡＣＴＧＴＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＧＴＡＣＣＴＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧＧＣＴＴＧＧＡＧＡＴＴＧＣＣＴＡＡＣＡＣＴＣＣＣＡＡＡＣＣＴＴＧＴＴＧＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＴＴＣＡＧＧＡＣＣＣＣＧＡＴＣＣＡＧＧＡＧＧＡＡＣＡＣＡＣＡＧＡＣＧＣＡＣＡＣＴＴＴＡＣＴＣＴＧＧＣＣＡＡＧＡＴＣＴＧＡＴＴＧＴＧＴＡＴＧＣＧＴＴＡＡＴＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＴＣＧＴＡ
異種５’ＵＴＲ ／ ３’ＵＴＲ
５’ＵＴＲ： ＧＧＧＡＡＡＡＧＴＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＧＡＧＡＡＡＡＴＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ （配列番号９）
３’ＵＴＲ：ＴＴＧＴＧＴＡＴＧＣＧＴＴＡＡＴＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＴＣＧＴＡ（配列番号１０）
ヒトＯＸ４０コード配列（配列番号１１）
ＡＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＡＧＣＡＣＧＧＡＧＡＣＴＧＧＧＡＡＧＧＧＧＡＣＣＴＴＧＣＧＣＣＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＴＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＧＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＧＴＧＧＧＣＧＡＣＡＣＣＴＡＣＣＣＴＴＣＴＡＡＣＧＡＴＡＧＧＴＧＣＴＧＴＣＡＣＧＡＧＴＧＴＣＧＣＣＣＡＧＧＣＡＡＴＧＧＣＡＴＧＧＴＧＴＣＣＡＧＧＴＧＣＴＣＣＣＧＣＴＣＴＣＡＧＡＡＣＡＣＣＧＴＧＴＧＣＣＧＧＣＣＴＴＧＴＧＧＣＣＣＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＧＣＴＣＣＡＡＧＣＣＣＴＧＣＡＡＧＣＣＴＴＧＴＡＣＡＴＧＧＴＧＣＡＡＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＡＧＡＧＡＡＡＧＣＡＧＣＴＧＴＧＣＡＣＣＧＣＣＡＣＡＣＡＧＧＡＴＡＣＣＧＴＧＴＧＣＣＧＧＴＧＴＡＧＡＧＣＣＧＧＣＡＣＡＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＡＣＴＣＴＴＡＣＡＡＧＣＣＡＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＴＧＣＡＣＣＴＴＧＣＣＣＡＣＣＴＧＧＣＣＡＣＴＴＴＡＧＣＣＣＡＧＧＣＧＡＣＡＡＣＣＡＧＧＣＣＴＧＴＡＡＧＣＣＣＴＧＧＡＣＣＡＡＴＴＧＣＡＣＡＣＴＧＧＣＡＧＧＣＡＡＧＣＡＣＡＣＣＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＣＡＴＣＴＡＡＴＴＣＴＡＧＣＧＡＴＧＣＣＡＴＣＴＧＣＧＡＧＧＡＣＡＧＡＧＡＴＣＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＡＧＣＣＴＣＡＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＧＧＡＣＣＴＣＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＡＴＣＡＣＣＧＴＧＣＡＧＣＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＡＴＧＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＴＣＴＣＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＡＣＡＡＧＡＣＣＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＣＴＧＧＡＧＧＡＡＧＧＧＣＡＧＴＧＧＣＡＧＣＴＡＴＣＴＴＧＧＧＧＣＴＣＧＧＧＴＴＧＧＴＡＣＴＧＧＧＡＣＴＧＣＴＴＧＧＣＣＣＡＣＴＴＧＣＴＡＴＣＴＴＧＣＴＧＧＣＴＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＴＧＡＧＧＣＧＣＧＡＣＣＡＧＣＧＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＧＡＴＧＣＡＣＡＣＡＡＧＣＣＡＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＣＴＴＣＣＧＧＡＣＣＣＣＡＡＴＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＡＧＡＣＧＣＡＣＡＣＴＣＣＡＣＡＣＴＧＧＣＣＡＡＧＡＴＣＴＧＡ
マウスＯＸ４０コード配列（配列番号１２）
ＡＴＧＴＡＴＧＴＧＴＧＧＧＴＴＣＡＧＣＡＧＣＣＣＡＣＡＧＣＣＣＴＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＡＣＴＣＡＣＡＣＴＴＧＧＡＧＴＴＡＣＡＧＣＡＡＧＧＣＧＧＣＴＣＡＡＣＴＧＴＧＴＴＡＡＡＣＡＴＡＣＣＴＡＣＣＣＣＡＧＴＧＧＴＣＡＣＡＡＧＴＧＣＴＧＴＣＧＴＧＡＧＴＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＴＧＧＴＡＴＧＧＴＧＡＧＣＣＧＣＴＧＴＧＡＴＣＡＴＡＣＣＡＧＧＧＡＴＡＣＴＣＴＡＴＧＴＣＡＴＣＣＧＴＧＴＧＡＧＡＣＴＧＧＣＴＴＣＴＡＣＡＡＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＡＡＴＴＡＴＧＡＴＡＣＣＴＧＣＡＡＧＣＡＧＴＧＴＡＣＡＣＡＧＴＧＣＡＡＣＣＡＴＣＧＡＡＧＴＧＧＡＡＧＴＧＡＡＣＴＣＡＡＧＣＡＧＡＡＴＴＧＣＡＣＡＣＣＴＡＣＴＣＡＧＧＡＴＡＣＴＧＴＣＴＧＣＡＧＡＴＧＴＡＧＡＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＡＡＣＣＴＣＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＡＧＣＴＴＧＧＡＧＴＴＧＡＣＴＧＴＧＴＴＣＣＣＴＧＣＣＣＴＣＣＴＧＧＣＣＡＣＴＴＴＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＣＡＡＣＣＡＧＧＣＣＴＧＣＡＡＧＣＣＣＴＧＧＡＣＣＡＡＴＴＧＴＡＣＣＴＴＡＴＣＴＧＧＡＡＡＧＣＡＧＡＣＣＣＧＣＣＡＣＣＣＡＧＣＣＡＧＴＧＡＣＡＧＣＴＴＧＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＧＴＧＡＧＧＡＣＡＧＡＡＧＣＣＴＣＣＴＧＧＣＣＡＣＡＣＴＧＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＣＣＣＡＧＣＧＣＣＣＴＡＣＡＴＴＣＡＧＧＣＣＡＡＣＣＡＣＴＧＴＣＣＡＡＴＣＣＡＣＣＡＣＡＧＴＣＴＧＧＣＣＣＡＧＧＡＣＴＴＣＴＧＡＧＴＴＧＣＣＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＡＣＣＴＴＧＧＴＧＡＣＴＣＣＴＧＡＧＧＧＣＣＣＴＧＣＡＴＴＴＧＣＴＧＴＴＣＴＣＣＴＡＧＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＧＣＴＣＣＣＴＴＧＡＣＴＧＴＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＧＴＡＣＣＴＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧＧＣＴＴＧＧＡＧＡＴＴＧＣＣＴＡＡＣＡＣＴＣＣＣＡＡＡＣＣＴＴＧＴＴＧＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＴＴＣＡＧＧＡＣＣＣＣＧＡＴＣＣＡＧＧＡＧＧＡＡＣＡＣＡＣＡＧＡＣＧＣＡＣＡＣＴＴＴＡＣＴＣＴＧＧＣＣＡＡＧＡＴＣＴＧＡ
マウスＯＸ４０リガンドのコード配列（配列番号１３）。
ＡＴＧＧＡＡＧＧＧＧＡＡＧＧＧＧＴＴＣＡＡＣＣＣＣＴＧＧＡＴＧＡＧＡＡＴＣＴＧＧＡＡＡＡＣＧＧＡＴＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＴＴＣＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＡＧＡＣＧＣＴＡＡＧＧＣＴＧＧＴＧＧＴＣＴＣＴＧＧＧＡＴＣＡＡＧＧＧＡＧＣＡＧＧＧＡＴＧＣＴＴＣＴＧＴＧＣＴＴＣＡＴＣＴＡＴＧＴＣＴＧＣＣＴＧＣＡＡＣＴＣＴＣＴＴＣＣＴＣＴＣＣＧＧＣＡＡＡＧＧＡＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＣＡＡＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＡＣＣＡＧＡＴＧＴＧＡＧＧＡＴＧＧＧＣＡＡＣＴＡＴＴＣＡＴＣＡＧＣＴＣＡＴＡＣＡＡＧＡＡＴＧＡＧＴＡＴＣＡＡＡＣＴＡＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＧＡＡＣＡＡＴＴＣＧＧＴＴＧＴＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＧＡＴＧＧＧＣＴＴＴＡＴＡＴＣＡＴＣＴＡＣＣＴＧＡＡＧＧＧＣＴＣＣＴＴＴＴＴＣＣＡＧＧＡＧＧＴＣＡＡＧＡＴＴＧＡＣＣＴＴＣＡＴＴＴＣＣＧＧＧＡＧＧＡＴＣＡＴＡＡＴＣＣＣＡＴＣＴＣＴＡＴＴＣＣＡＡＴＧＣＴＧＡＡＣＧＡＴＧＧＴＣＧＡＡＧＧＡＴＴＧＴＣＴＴＣＡＣＴＧＴＧＧＴＧＧＣＣＴＣＴＴＴＧＧＣＴＴＴＣＡＡＡＧＡＴＡＡＡＧＴＴＴＡＣＣＴＧＡＣＴＧＴＡＡＡＴＧＣＴＣＣＴＧＡＴＡＣＴＣＴＣＴＧＣＧＡＡＣＡＣＣＴＣＣＡＧＡＴＡＡＡＴＧＡＴＧＧＧＧＡＧＣＴＧＡＴＴＧＴＴＧＴＣＣＡＧＣＴＡＡＣＧＣＣＴＧＧＡＴＡＣＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＡＡＧＧＡＴＣＴＴＡＣＣＡＣＡＧＣＡＣＴＧＴＧＡＡＣＣＡＡＧＴＡＣＣＡＣＴＧＴＧＡ
ヒトＯＸ４０リガンドのコード配列（配列番号１４）
ＡＴＧＧＡＡＡＧＧＧＴＣＣＡＡＣＣＣＣＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＴＧＴＧＧＧＡＡＡＴＧＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＡＧＡＴＴＣＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＡＧＣＴＡＴＴＧＣＴＧＧＴＧＧＣＣＴＣＴＧＴＡＡＴＴＣＡＧＧＧＡＣＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＴＣＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＣＴＧＣＡＣＴＴＣＴＣＴＧＣＴＣＴＴＣＡＧＧＴＡＴＣＡＣＡＴＣＧＧＴＡＴＣＣＴＣＧＡＡＴＴＣＡＡＡＧＴＡＴＣＡＡＡＧＴＡＣＡＡＴＴＴＡＣＣＧＡＡＴＡＴＡＡＧＡＡＧＧＡＧＡＡＡＧＧＴＴＴＣＡＴＣＣＴＣＡＣＴＴＣＣＣＡＡＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＡＡＡＴＣＡＴＧＡＡＧＧＴＧＣＡＧＡＡＣＡＡＣＴＣＡＧＴＣＡＴＣＡＴＣＡＡＣＴＧＴＧＡＴＧＧＧＴＴＴＴＡＴＣＴＣＡＴＣＴＣＣＣＴＧＡＡＧＧＧＣＴＡＣＴＴＣＴＣＣＣＡＧＧＡＡＧＴＣＡＡＣＡＴＴＡＧＣＣＴＴＣＡＴＴＡＣＣＡＧＡＡＧＧＡＴＧＡＧＧＡＧＣＣＣＣＴＣＴＴＣＣＡＡＣＴＧＡＡＧＡＡＧＧＴＣＡＧＧＴＣＴＧＴＣＡＡＣＴＣＣＴＴＧＡＴＧＧＴＧＧＣＣＴＣＴＣＴＧＡＣＴＴＡＣＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＴＴＧＡＡＴＧＴＧＡＣＣＡＣＴＧＡＣＡＡＴＡＣＣＴＣＣＣＴＧＧＡＴＧＡＣＴＴＣＣＡＴＧＴＧＡＡＴＧＧＣＧＧＡＧＡＡＣＴＧＡＴＴＣＴＴＡＴＣＣＡＴＣＡＡＡＡＴＣＣＴＧＧＴＧＡＡＴＴＣＴＧＴＧＴＣＣＴＴＴＧＡ
マウスＩＣＯＳのコード配列 （配列番号１５）
ＡＴＧＡＡ ＧＣＣＧＴＡＣＴＴＣＴＧＣＣＧＴＧＴＣＴ ＴＴＧＴＣＴＴＣＴＧ ＣＴＴＣＣＴＡＡＴＣ ＡＧＡＣＴＴＴＴＡＡ ＣＡＧＧＡＧＡＡＡＴ ＣＡＡＴＧＧＣＴＣＧＧＣＣＧＡＴＣＡＴＡ ＧＧＡＴＧＴＴＴＴＣ ＡＴＴＴＣＡＣＡＡＴ ＧＧＡＧＧＴＧＴＡＣ ＡＧＡＴＴＴＣＴＴＧ ＴＡＡＡＴＡＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＣ ＡＧＣＡＧＴＴＡＡＡ ＡＡＴＧＣＧＡＴＴＧ ＴＴＣＡＧＡＧＡＧＡ ＧＡＧＡＡＧＴＣＣＴ ＣＴＧＣＧＡＡＣＴＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＡ ＡＧＧＧＡＡＧＣＧＧ ＡＡＡＴＧＣＧＧＴＧ ＴＣＣＡＴＣＡＡＧＡ ＡＴＣＣＡＡＴＧＣＴ ＣＴＧＴＣＴＡＴＡＴＣＡＴＣＴＧＴＣＡＡ ＡＣＡＡＣＡＧＣＧＴ ＣＴＣＴＴＴＴＴＴＣ ＣＴＡＡＡＣＡＡＣＣ ＣＡＧＡＣＡＧＣＴＣ ＣＣＡＧＧＧＡＡＧＣＴＡＴＴＡＣＴＴＣＴ ＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣ ＣＡＴＴＴＴＴＧＡＣ ＣＣＡＣＣＴＣＣＴＴ ＴＴＣＡＡＧＡＡＡＧ ＧＡＡＣＣＴＴＡＧＴＧＧＡＧＧＡＴＡＴＴ ＴＧＣＡＴＡＴＴＴＡ ＴＧＡＡＴＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＣＴＧＣＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＴＣＴＧＧＣＴＡＣＣＣＧＴＡＧＧＧＴＧＴＧＣＡＧＣＴＴＴＣＧＴ ＴＧＴＧＧＴＡＣＴＣ ＣＴＴＴＴＴＧＧＡＴ ＧＣＡＴＡＣＴＴＡＴ ＣＡＴＣＴＧＧＴＴＴＴＣＡＡＡＡＡＡＧＡ ＡＡＴＡＣＧＧＡＴＣＣＡＧＴＧＴＧＣＡＴＧＡＣＣＣＴＡＡＴＡＧＴＧＡＡＴＡＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＧＣＧＧＣＡＧＴＣＡＡＣＡ ＣＡＡＡＣＡＡＡＡＡ ＧＴＣＴＡＧＡＣＴＴ ＧＣＡＧＧＴＧＴＧＡ ＣＣＴＣＡＴＡＡ
ヒトＩＣＯＳのコード配列（配列番号１６）
ＡＴＧ ＡＡＧＴＣＡＧＧＣＣ ＴＣＴＧＧＴＡＴＴＴ ＣＴＴＴＣＴＣＴＴＣ ＴＧＣＴＴＧＣＧＣＡ ＴＴＡＡＡＧＴＴＴＴＡＡＣＡＧＧＡＧＡＡ ＡＴＣＡＡＴＧＧＴＴ ＣＴＧＣＣＡＡＴＴＡ ＴＧＡＧＡＴＧＴＴＴ ＡＴＡＴＴＴＣＡＣＡ ＡＣＧＧＡＧＧＴＧＴ ＡＣＡＡＡＴＴＴＴＡ ＴＧＣＡＡＡＴＡＴＣ ＣＴＧＡＣＡＴＴＧＴ ＣＣＡＧＣＡＡＴＴＴ ＡＡＡＡＴＧＣＡＧＴ ＴＧＣＴＧＡＡＡＧＧＧＧＧＧＣＡＡＡＴＡ ＣＴＣＴＧＣＧＡＴＣ ＴＣＡＣＴＡＡＧＡＣ ＡＡＡＡＧＧＡＡＧＴ ＧＧＡＡＡＣＡＣＡＧ ＴＧＴＣＣＡＴＴＡＡ ＧＡＧＴＣＴＧＡＡＡ ＴＴＣＴＧＣＣＡＴＴ ＣＴＣＡＧＴＴＡＴＣ ＣＡＡＣＡＡＣＡＧＴ ＧＴＣＴＣＴＴＴＴＴ ＴＴＣＴＡＴＡＣＡＡ ＣＴＴＧＧＡＣＣＡＴ ＴＣＴＣＡＴＧＣＣＡ ＡＣＴＡＴＴＡＣＴＴ ＣＴＧＣＡＡＣＣＴＡ ＴＣＡＡＴＴＴＴＴＧ ＡＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＴＴＴＡＡＡＧＴＡ ＡＣＴＣＴＴＡＣＡＧ ＧＡＧＧＡＴＡＴＴＴ ＧＣＡＴＡＴＴＴＡＴ ＧＡＡＴＣＡＣＡＡＣ ＴＴＴＧＴＴＧＣＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＴＣ ＴＧＧＴＴＡＣＣＣＡ ＴＡＧＧＡＴＧＴＧＣ ＡＧＣＣＴＴＴＧＴＴ ＧＴＡＧＴＣＴＧＣＡ ＴＴＴＴＧＧＧＡＴＧＣＡＴＡＣＴＴＡＴＴ ＴＧＴＴＧＧＣＴＴＡ ＣＡＡＡＡＡＡＧＡＡ ＧＴＡＴＴＣＡＴＣＣ ＡＧＴＧＴＧＣＡＣＧ ＡＣＣＣＴＡＡＣＧＧＴＧＡＡＴＡＣＡＴＧ ＴＴＣＡＴＧＡＧＡＧ ＣＡＧＴＧＡＡＣＡＣ ＡＧＣＣＡＡＡＡＡＡ ＴＣＴＡＧＡＣＴＣＡ ＣＡＧＡＴＧＴＧＡＣ ＣＣＴＡＴＡＡ
マウスＣＤ１３７（４－１ＢＢ）のコード配列（配列番号１７）
ＡＴＧＧＧＡＡＡＣ ＡＡＣＴＧＴＴＡＣＡ ＡＣＧＴＧＧＴＧＧＴ ＣＡＴＴＧＴＧＣＴＧ ＣＴＧＣＴＡＧＴＧＧＧＣＴＧＴＧＡＧＡＡ ＧＧＴＧＧＧＡＧＣＣ ＧＴＧＣＡＧＡＡＣＴ ＣＣＴＧＴＧＡＴＡＡ ＣＴＧＴＣＡＧＣＣＴ ＧＧＴＡＣＴＴＴＣＴＧＣＡＧＡＡＡＡＴＡ ＣＡＡＴＣＣＡＧＴＣ ＴＧＣＡＡＧＡＧＣＴ ＧＣＣＣＴＣＣＡＡＧ ＴＡＣＣＴＴＣＴＣＣ ＡＧＣＡＴＡＧＧＴＧＧＡＣＡＧＣＣＧＡＡ ＣＴＧＴＡＡＣＡＴＣ ＴＧＣＡＧＡＧＴＧＴ ＧＴＧＣＡＧＧＣＴＡ ＴＴＴＣＡＧＧＴＴＣ ＡＡＧＡＡＧＴＴＴＴＧＣＴＣＣＴＣＴＡＣ ＣＣＡＣＡＡＣＧＣＧ ＧＡＧＴＧＴＧＡＧＴ ＧＣＡＴＴＧＡＡＧＧ ＡＴＴＣＣＡＴＴＧＣ ＴＴＧＧＧＧＣＣＡＣＡＧＴＧＣＡＣＣＡＧ ＡＴＧＴＧＡＡＡＡＧ ＧＡＣＴＧＣＡＧＧＣ ＣＴＧＧＣＣＡＧＧＡ ＧＣＴＡＡＣＧＡＡＧ ＣＡＧＧＧＴＴＧＣＡＡＡＡＣＣＴＧＴＡＧ ＣＴＴＧＧＧＡＡＣＡ ＴＴＴＡＡＴＧＡＣＣ ＡＧＡＡＣＧＧＴＡＣ ＴＧＧＣＧＴＣＴＧＴ ＣＧＡＣＣＣＴＧＧＡＣＧＡＡＣＴＧＣＴＣ ＴＣＴＡＧＡＣＧＧＡ ＡＧＧＴＣＴＧＴＧＣ ＴＴＡＡＧＡＣＣＧＧ ＧＡＣＣＡＣＧＧＡＧ ＡＡＧＧＡＣＧＴＧＧＴＧＴＧＴＧＧＡＣＣ ＣＣＣＴＧＴＧＧＴＧ ＡＧＣＴＴＣＴＣＴＣ ＣＣＡＧＴＡＣＣＡＣ ＣＡＴＴＴＣＴＧＴＧ ＡＣＴＣＣＡＧＡＧＧＧＡＧＧＡＣＣＡＧＧ ＡＧＧＧＣＡＣＴＣＣ ＴＴＧＣＡＧＧＴＣＣ ＴＴＡＣＣＴＴＧＴＴ ＣＣＴＧＧＣＧＣＴＧ ＡＣＡＴＣＧＧＣＴＴＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣ ＣＣＴＧＡＴＣＴＴＣ ＡＴＴＡＣＴＣＴＣＣ ＴＧＴＴＣＴＣＴＧＴ ＧＣＴＣＡＡＡＴＧＧ ＡＴＣＡＧＧＡＡＡＡ
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ヒトＣＤ１３７（４－１ＢＢ）のコード配列（配列番号１８）
ＡＴＧＧＧＡＡＡＣ ＡＧＣＴＧＴＴＡＣＡ ＡＣＡＴＡＧＴＡＧＣ ＣＡＣＴＣＴＧＴＴＧＣＴＧＧＴＣＣＴＣＡ ＡＣＴＴＴＧＡＧＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＣＡＴＴＧＣＡＧＧＡＴＣＣＴＴＧＴＡＧＴＡＡＣＴＧＣＣＣＡＧＣＴＧＧＴＡＣＡＴＴＣＴＧＴＧＡＴＡＡＴＡＡＣＡＧＧＡＡＴＣＡＧＡＴＴＴＧＣＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＡＡＴＡＧＴＴＴＣＴＣＣＡＧＣＧＣＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＡＧＧＡＣＣＴＧＴＧＡＣＡＴＡＴＧＣＡＧＧＣＡＧＴＧＴＡＡＡＧＧＴＧＴＴＴＴＣＡＧＧＡＣＣＡＧＧＡＡＧＧＡＧＴＧＴＴＣＣＴＣＣＡＣＣＡＧＣＡＡＴＧＣＡＧＡＧＴＧＴＧＡＣＴＧＣＡＣＴＣＣＡＧＧＧＴＴＴＣＡＣＴＧＣＣＴＧＧＧＧＧＣＡＧＧＡＴＧＣＡＧＣＡＴＧＴＧＴＧＡＡＣＡＧＧＡＴＴＧＴＡＡＡＣＡＡＧＧＴＣＡＡＧＡＡＣＴＧＡＣＡＡＡＡＡＡＡＧＧＴＴＧＴＡＡＡＧＡＣＴＧＴＴＧＣＴＴＴＧＧＧＡＣＡＴＴＴＡＡＣＧＡＴＣＡＧＡＡＡＣＧＴＧＧＣＡＴＣＴＧＴＣＧＡＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＡＣＴＧＴＴＣＴＴＴＧＧＡＴＧＧＡＡＡＧＴＣＴＧＴＧＣＴＴＧＴＧＡＡＴＧＧＧＡＣＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧＧＡＣＧＴＧＧＴＣＴＧＴＧＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＣＣＧＡＣＣＴＣＴＣＴＣＣＧＧＧＡＧＣＡＴＣＣＴＣＴＧＴＧＡＣＣＣＣＧＣＣＴＧＣＣＣＣＴＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＣＧＣＡＧＡＴＣＡＴＣＴＣＣＴＴＣＴＴＴＣＴＴＧＣＧＣＴＧＡＣＧＴＣＧＡＣＴＧＣＧＴＴＧＣＴＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＴＴＣＣＴＣＡＣＧＣＴＣＣＧＴＴＴＣＴＣＴＧＴＴＧＴＴＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣ ＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣ ＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧ ＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡ ＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧＴＧＡ
マウスＣＤ１３７リガンド（４－１ＢＢＬ）のコード配列（配列番号１９）
ＡＴＧＧＡＣＣＡＧＣＡＣＡＣＡＣＴＴＧＡＴＧＴＧＧＡＧＧＡＴＡＣＣＧＣＧＧＡＴＧＣＣＡＧＡＣＡＴＣＣＡＧＣＡＧＧＴＡＣＴＴＣＧＴＧＣＣＣＣＴＣＧＧＡＴＧＣＧＧＣＧＣＴＣＣＴＣＡＧＡＧＡＴＡＣＣＧＧＧＣＴＣＣＴＣＧＣＧＧＡＣＧＣＴＧＣＧＣＴＣＣＴＣＴＣＡＧＡＴＡＣＴＧＴＧＣＧＣＣＣＣＡＣＡＡＡＴＧＣＣＧＣＧＣＴＣＣＣＣＡＣＧＧＡＴＧＣＴＧＣＣＴＡＣＣＣＴＧＣＧＧＴＴＡＡＴＧＴＴＣＧＧＧＡＴＣＧＣＧＡＧＧＣＣＧＣＧＴＧＧＣＣＧＣＣＴＧＣＡＣＴＧＡＡＣＴＴＣＴＧＴＴＣＣＣＧＣＣＡＣＣＣＡＡＡＧＣＴＣＴＡＴＧＧＣＣＴＡＧＴＣＧＣＴＴＴＧＧＴＴＴＴＧＣＴＧＣＴＴＣＴＧＡＴＣＧＣＣＧＣＣＴＧＴＧＴＴＣＣＴＡＴＣＴＴＣＡＣＣＣＧＣＡＣＣＧＡＧＣＣＴＣＧＧＣＣＡＧＣＧＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＣＣＡＣＣＴＣＧＣＣＣＡＡＣＣＴＧＧＧＴＡＣＣＣＧＡＧＡＧＡＡＴＡＡＴＧＣＡＧＡＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＣＣＴＧＴＴＴＣＣＣＡＣＡＴＴＧＧＣＴＧＣＣＣＣＡＡＣＡＣＴＡＣＡＣＡＡＣＡＧＧＧＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＴＣＧＣＣＡＡＧＣＴＡＣＴＧＧＣＴＡＡＡＡＡＣＣＡＡＧＣＡＴＣＧＴＴＧＴＧＣＡＡＴＡＣＡＡＣＴＣＴＧＡＡＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＴＧＧＡＧＣＴＧＧＧＡＧＣＴＣＡＴＡＣＣＴＡＴＣＴＣＡＡＧＧＴＣＴＧＡＧＧＴＡＣＧＡＡＧＡＡＧＡＣＡＡＡＡＡＧＧＡＧＴＴＧＧＴＧＧＴＡＧＡＣＡＧＴＣＣＣＧＧＧＣＴＣＴＡＣＴＡＣＧＴＡＴＴＴＴＴＧＧＡＡＣＴＧＡＡＧＣＴＣＡＧＴＣＣＡＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＡＣＡＣＡＧＧＣＣＡＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＧＧＣＴＧＧＧＴＣＴＣＴＣＴＴＧＴＴＴＴＧＣＡＡＧＣＡＡＡＧＣＣＴＣＡＧＧＴＡＧＡＴＧＡＣＴＴＴＧＡＣＡＡＣＴＴＧＧＣＣＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＡＣＴＧＴＴＣＣＣＴＴＧＣＴＣＣＡＴＧＧＡＧＡＡＣＡＡＧＴＴＡＧＴＧＧＡＣＣＧＴＴＣＣＴＧＧＡＧＴＣＡＡＣＴＧＴＴＧＣＴＣＣＴＧＡＡＧＧＣＴＧＧＣＣＡＣＣＧＣＣＴＣＡＧＴＧＴＧＧＧＴＣＴＧＡＧＧＧＣＴＴＡＴＣＴＧＣＡＴＧＧＡＧＣＣＣＡＧＧＡＴＧＣＡＴＡＣＡＧＡＧＡＣＴＧＧＧＡＧＣＴＧＴＣＴＴＡＴＣＣＣＡＡＣＡＣＣＡＣＣＡＧＣＴＴＴＧＧＡＣＴＣＴＴＴＣＴＴＧＴＧＡＡＡＣＣＣＧＡＣＡＡＣＣＣＡＴＧＧＧＡＡＴＧＡ
ヒトＣＤ１３７リガンド（４－１ＢＢＬ）のコード配列（配列番号２０）
ＡＴＧＧＡＡＴＡＣＧＣＣＴＣＴＧＡＣＧＣＴＴＣＡＣＴＧＧＡＣＣＣＣＧＡＡＧＣＣＣＣＧＴＧＧＣＣＴＣＣＣＧＣＧＣＣＣＣＧＣＧＣＴＣＧＣＧＣＣＴＧＣＣＧＣＧＴＡＣＴＧＣＣＴＴＧＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＧＣＧＧＧＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＣＧＣＴＧＣＣＧＣＣＴＧＣＧＣＣＧＴＣＴＴＣＣＴＣＧＣＣＴＧＣＣＣＣＴＧＧＧＣＣＧＴＧＴＣＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＧＣＣＴＣＧＣＣＣＧＧＣＴＣＣＧＣＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＡＧＡＣＴＣＣＧＣＧＡＧＧＧＴＣＣＣＧＡＧＣＴＴＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＡＴＣＣＣＧＣＣＧＧＣＣＴＣＴＴＧＧＡＣＣＴＧＣＧＧＣＡＧＧＧＣＡＴＧＴＴＴＧＣＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＣＣＣＡＡＡＡＴＧＴＴＣＴＧＣＴＧＡＴＣＧＡＴＧＧＧＣＣＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＡＣＡＧＴＧＡＣＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＣＡＧＧＣＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＧＧＧＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＡＣＡＡＡＧＡＧＧＡＣＡＣＧＡＡＧＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＣＣＡＡＧＧＣＴＧＧＡＧＴＣＴＡＣＴＡＴＧＴＣＴＴＣＴＴＴＣＡＡＣＴＡＧＡＧＣＴＧＣＧＧＣＧＣＧＴＧＧＴＧＧＣＣＧＧＣＧＡＧＧＧＣＴＣＡＧＧＣＴＣＣＧＴＴＴＣＡＣＴＴＧＣＧＣＴＧＣＡＣＣＴＧＣＡＧＣＣＡＣＴＧＣＧＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＧＣＣＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＣＴＴＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＣＴＧＣＣＡＣＣＣＧＣＣＴＣＣＴＣＣＧＡＧＧＣＴＣＧＧＡＡＣＴＣＧＧＣＣＴＴＣＧＧＴＴＴＣＣＡＧＧＧＣＣＧＣＴＴＧＣＴＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＧＣＣＧＧＣＣＡＧＣＧＣＣＴＧＧＧＣＧＴＣＣＡＴＣＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＧＣＣＡＴＧＣＣＴＧＧＣＡＧＣＴＴＡＣＣＣＡＧＧＧＣＧＣＣＡＣＡＧＴＣＴＴＧＧＧＡＣＴＣＴＴＣＣＧＧＧＴＧＡＣＣＣＣＣＧＡＡＡＴＣＣＣＡＧＣＣＧＧＡＣＴＣＣＣＴＴＣＡＣＣＧＡＧＧＴＣＧＧＡＡＴＡＡ
マウスＧＩＴＲのコード配列（配列番号２１）
ＡＴＧＧＧＧＧＣＡＴＧＧＧＣＣＡＴＧＣＴＧＴＡＴＧＧＡＧＴＣＴＣＧＡＴＧＣＴＣＴＧＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＣＴＡＧＧＴＣＡＧＣＣＧＡＧＴＧＴＡＧＴＴＧＡＧＧＡＧＣＣＴＧＧＣＴＧＴＧＧＣＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＡＡＣＧＧＡＡＧＴＧＧＣＡＡＣＡＡＣＡＣＴＣＧＣＴＧＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＴＡＴＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＡＧＧＡＣＴＧＴＣＣＡＡＡＡＧＡＡＡＧＧＴＧＣＡＴＡＴＧＴＧＴＣＡＣＡＣＣＴＧＡＧＴＡＣＣＡＣＴＧＴＧＧＡＧＡＣＣＣＴＣＡＧＴＧＣＡＡＧＡＴＣＴＧＣＡＡＧＣＡＣＴＡＣＣＣＣＴＧＣＣＡＡＣＣＡＧＧＣＣＡＧＡＧＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＣＡＡＧＧＧＧＡＴＡＴＴＧＴＧＴＴＴＧＧＣＴＴＣＣＧＧＴＧＴＧＴＴＧＣＣＴＧＴＧＣＣＡＴＧＧＧＣＡＣＣＴＴＣＴＣＣＧＣＡＧＧＴＣＧＴＧＡＣＧＧＴＣＡＣＴＧＣＡＧＡＣＴＴＴＧＧＡＣＣＡＡＣＴＧＴＴＣＴＣＡＧＴＴＴＧＧＡＴＴＴＣＴＣＡＣＣＡＴＧＴＴＣＣＣＴＧＧＧＡＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＡＴＧＣＴＧＴＧＴＧＣＡＴＣＣＣＧＧＡＧＣＣＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＴＡＣＧＧＣＣＡＴＴＴＧＡＣＴＧＴＣＡＴＣＴＴＣＣＴＧＧＴＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＴＧＣＡＴＴＴＴＣＴＴＣＣＴＡＡＣＣＡＣＡＧＴＣＣＡＧＣＴＣＧＧＣＣＴＧＣＡＣＡＴＡＴＧＧＣＡＧＣＴＧＡＧＧＡＧＧＣＡＡＣＡＣＡＴＧＴＧＴＣＣＴＣＧＡＧＡＧＡＣＣＣＡＧＣＣＡＴＴＣＧＣＧＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＧＴＣＡＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＣＴＴＧＣＡＧＣＴＴＣＣＡＧＴＴＣＣＣＴＧＡＧＧＡＧＧＡＡＣＧＣＧＧＧＧＡＧＣＡＧＡＣＡＧＡＡＧＡＡＡＡＧＴＧＴＣＡＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＧＧＴＧＧＣＣＡＴ ＧＡ
ヒトＧＩＴＲのコード配列（配列番号２２）
ＡＴＧＧＣＡＣＡＧ ＣＡＣＧＧＧＧＣＧＡ ＴＧＧＧＣＧＣＧＴＴ ＴＣＧＧＧＣＣＣＴＧ ＴＧＣＧＧＣＣＴＧＧ ＣＧＣＴＧＣＴＧＴＧ ＣＧＣＧＣＴＣＡＧＣ ＣＴＧＧＧＴＣＡＧＣ ＧＣＣＣＣＡＣＣＧＧ ＧＧＧＴＣＣＣＧＧＧ ＴＧＣＧＧＣＣＣＴＧ ＧＧＣＧＣＣＴＣＣＴ ＧＣＴＴＧＧＧＡＣＧ ＧＧＡＡＣＧＧＡＣＧ ＣＧＣＧＣＴＧＣＴＧ ＣＣＧＧＧＴＴＣＡＣ ＡＣＧＡＣＧＣＧＣＴ ＧＣＴＧＣＣＧＣＧＡ ＴＴＡＣＣＣＧＧＧＣ ＧＡＧＧＡＧＴＧＣＴ ＧＴＴＣＣＧＡＧＴＧ ＧＧＡＣＴＧＣＡＴＧＴＧＴＧＴＣＣＡＧＣ ＣＴＧＡＡＴＴＣＣＡ ＣＴＧＣＧＧＡＧＡＣ ＣＣＴＴＧＣＴＧＣＡ ＣＧＡＣＣＴＧＣＣＧ ＧＣＡＣＣＡＣＣＣＴＴＧＴＣＣＣＣＣＡＧ ＧＣＣＡＧＧＧＧＧＴ ＡＣＡＧＴＣＣＣＡＧ ＧＧＧＡＡＡＴＴＣＡ ＧＴＴＴＴＧＧＣＴＴ ＣＣＡＧＴＧＴＡＴＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＴ ＣＧＧＧＧＡＣＣＴＴ ＣＴＣＣＧＧＧＧＧＣ ＣＡＣＧＡＡＧＧＣＣ ＡＣＴＧＣＡＡＡＣＣ ＴＴＧＧＡＣＡＧＡＣ ＴＧＣＡＣＣＣＡＧＴ ＴＣＧＧＧＴＴＴＣＴ ＣＡＣＴＧＴＧＴＴＣ ＣＣＴＧＧＧＡＡＣＡ ＡＧＡＣＣＣＡＣＡＡ ＣＧＣＴＧＴＧＴＧＣＧＴＣＣＣＡＧＧＧＴ ＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣ ＡＧＡＧＣＣＧＣＴＴ ＧＧＧＴＧＧＣＴＧＡ ＣＣＧＴＣＧＴＣＣＴ ＣＣＴＧＧＣＣＧＴＧＧＣＣＧＣＣＴＧＣＧ ＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴ ＧＡＣＣＴＣＧＧＣＣ ＣＡＧＣＴＴＧＧＡＣ ＴＧＣＡＣＡＴＣＴＧ ＧＣＡＧＣＴＧＡＧＧ ＡＧＴＣＡＧＴＧＣＡ ＴＧＴＧＧＣＣＣＣＧ ＡＧＡＧＡＣＣＣＡＧ ＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧ ＡＧＧＴＧＣＣＧＣＣ ＧＴＣＧＡＣＣＧＡＡ ＧＡＣＧＣＣＡＧＡＡ ＧＣＴＧＣＣＡＧＴＴ ＣＣＣＣＧＡＧＧＡＡ ＧＡＧＣＧＧＧＧＣＧ ＡＧＣＧＡＴＣＧＧＣ ＡＧＡＧＧＡＧＡＡＧＧＧＧＣＧＧＣＴＧＧ ＧＡＧＡＣＣＴＧＴＧ ＧＧＴＧＴＧＡ
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、開示されている本発明が属する当業者が一般に理解する意味と同一の意味を有する。本明細書において引用される刊行物及び引用される資料は、参照により具体的に組み込まれる。
当業者は、多くの変更及び修正が本発明の好ましい実施形態に対して行われ、そのようは変更及び修正が本発明の趣旨から逸脱することなく行われ得ることを理解するだろう。したがって、付属の請求項は、本発明の真の趣旨及び範囲に入る全てのそのような等しい変形例を網羅することが意図される。

Claims (35)

  1. 共刺激分子に特異的に結合する抗体、リガンド、またはそれらの抗原結合断片と、
    前記共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子と、
    を含む、組成物であって、
    前記抗体、リガンド、またはそれらの抗原結合断片が、ＢＭＳ９８６１７８、ＧＳＫ３１７４９９８、ＰＦ－０４５１８６００、ＭＯＸＲ０９１６、ＭＥＤＩ６３８３、ＭＥＤＩ０５６２、ＩＮＣＡＧＮ０１９４９、ＩｎＶｉｖｏＰｌｕｓ抗マウスＯＸ４０（クローンＯＸ－８６）（会社：ＢｉｏＸｃｅｌｌ、カタログ：ＢＰ００３１）、ＩｎＶｉｖｏＰｌｕｓ抗－マウス４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）（クローンＬＯＢ１２．３）（会社：ＢｉｏＸｃｅｌｌ、カタログ：ＢＰ０１６９）、ウトミルマブ、ウレルマブ、または配列番号１３、１４、１９、または２０によってコードされるリガンドを含み、
    前記共刺激分子が、ＯＸ４０または４－１ＢＢを含む、組成物。
  2. 前記共刺激分子をコードする前記ｍＲＮＡが、前記ナノ粒子によって内包化される、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記ナノ粒子が、リン脂質または糖脂質を含む、請求項１または２に記載の組成物。
  4. 前記リン脂質が、



    からなる群から選択される、請求項３に記載の組成物。
  5. 前記リン脂質が
    である、請求項４に記載の組成物。
  6. 前記糖脂質が



    からなる群から選択される、請求項３に記載の組成物。
  7. 前記糖脂質が
    である、請求項６に記載の組成物。
  8. 前記共刺激分子をコードする前記ｍＲＮＡが、異種５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の組成物。
  9. 前記共刺激分子をコードする前記ｍＲＮＡが異種３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の組成物。
  10. 前記ｍＲＮＡが、化学的に修飾された核酸塩基を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。
  11. 前記化学的に修飾された核酸塩基が、シュードウリジンである、請求項１０に記載の組成物。
  12. 免疫療法剤をさらに含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の組成物。
  13. 前記免疫療法剤が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項１２に記載の組成物。
  14. 薬学的に許容される担体と、有効量の請求項１～１３のいずれか１項に記載の組成物とを含む医薬組成物。
  15. 有効量の請求項１～１３のいずれか１項に記載の組成物または請求項１４に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、Ｔ細胞を刺激する方法において使用するための、請求項１～１４のいずれか１項に記載の組成物。
  16. 前記対象が、哺乳動物である、請求項１５に記載の組成物。
  17. 前記哺乳動物が、ヒトである、請求項１６に記載の組成物。
  18. 有効量の、共刺激分子に特異的に結合する、抗体、リガンド、またはそれらの抗原結合断片と、前記共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含むナノ粒子と、を含む、組成物であって、前記組成物が、必要とする対象に前記組成物を投与することを含む、がんを治療する方法において使用するためのものであり、前記共刺激分子が、ＯＸ４０または４－１ＢＢを含み、前記抗体、リガンド、またはそれらの抗原結合断片が、ＢＭＳ９８６１７８、ＧＳＫ３１７４９９８、ＰＦ－０４５１８６００、ＭＯＸＲ０９１６、ＭＥＤＩ６３８３、ＭＥＤＩ０５６２、ＩＮＣＡＧＮ０１９４９、ＩｎＶｉｖｏＰｌｕｓ抗マウスＯＸ４０（クローンＯＸ－８６）（会社：ＢｉｏＸｃｅｌｌ、カタログ：ＢＰ００３１）、ＩｎＶｉｖｏＰｌｕｓ抗－マウス４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）（クローンＬＯＢ１２．３）（会社：ＢｉｏＸｃｅｌｌ、カタログ：ＢＰ０１６９）、ウトミルマブ、ウレルマブ、または配列番号１３、１４、１９、または２０によってコードされるリガンドを含む、組成物。
  19. 前記共刺激分子をコードする前記ｍＲＮＡが、前記ナノ粒子によって内包化される、請求項１８に記載の組成物。
  20. 前記ナノ粒子が、リン脂質または糖脂質を含む、請求項１８または１９に記載の組成物。
  21. 前記リン脂質が、




    からなる群から選択される、請求項２０に記載の組成物。
  22. 前記リン脂質が
    である、請求項２１に記載の組成物。
  23. 前記糖脂質が



    からなる群から選択される、請求項２０に記載の組成物。
  24. 前記糖脂質が
    である、請求項２３に記載の組成物。
  25. 前記共刺激分子をコードする前記ｍＲＮＡが、異種５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）を含む、請求項１８～２４のいずれか１項に記載の組成物。
  26. 前記共刺激分子をコードする前記ｍＲＮＡが、異種３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）を含む、請求項１８～２５のいずれか１項に記載の組成物。
  27. 前記ｍＲＮＡが、化学的に修飾された核酸塩基を含み、化学的に修飾された核酸塩基が、シュードウリジンである、請求項１８～２６のいずれか１項に記載の組成物。
  28. 前記がんが、黒色腫、結腸直腸癌、肺癌、結腸癌、またはリンパ腫を含む、請求項１８～２７のいずれか１項に記載の組成物。
  29. 前記対象が、哺乳動物である、請求項１８～２８のいずれか１項に記載の組成物。
  30. 前記哺乳動物が、ヒトである、請求項２９に記載の組成物。
  31. 前記抗体またはその抗原結合断片及び前記ナノ粒子が、筋肉内注射によって投与されるかまたは全身投与される、請求項１８～３０のいずれか１項に記載の組成物。
  32. 前記方法が、追加の治療剤を投与することをさらに含む、請求項１８～３１のいずれか１項に記載の組成物。
  33. 前記追加の治療剤が、追加の免疫療法剤を含む、請求項３２に記載の組成物。
  34. 前記追加の免疫療法剤が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項３３に記載の組成物。
  35. 共刺激分子に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片と、前記共刺激分子をコードするｍＲＮＡを含む前記ナノ粒子とが、同時に投与される、請求項１８～３４のいずれか１項に記載の組成物。
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