JPH0315388A - ｍｓＤＮＡの製造方法 - Google Patents
ｍｓＤＮＡの製造方法Info
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- JPH0315388A JPH0315388A JP2042304A JP4230490A JPH0315388A JP H0315388 A JPH0315388 A JP H0315388A JP 2042304 A JP2042304 A JP 2042304A JP 4230490 A JP4230490 A JP 4230490A JP H0315388 A JPH0315388 A JP H0315388A
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- synthesis
- rna
- myxococcus xanthus
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/30—Nucleotides
- C12P19/34—Polynucleotides, e.g. nucleic acids, oligoribonucleotides
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はｍｓＤＮＡの製造方法に関する。
本発明者らは、ダラム陰性土壌細菌であるミクソコツカ
ス●キサンサス（ Ｍｙｘｏｃｏｅｃｕｓ ｘａｎｔｈ
ｕｓ）にマルチコピー１本鎖ＤＩ▲（ ａ＋ｓＤＮＡ
）と呼ばれる特殊な構造をとっているサテライトＤＮＡ
が存在することを初めて見いだした（Ｔ．イー Ｔ．７
ルイチ、Ｓ．イノウエ、村，イノウエ（ Ｔ．Ｙｅｅ，
丁．ＦｕｒｕｉｃｈＬ， Ｓ．Ｉｎｏｕｙｅ， Ｍ．Ｉ
ｎｏｕｙｅ ） ：セＡ／（Ｃｅｌｌ）第３８巻２０３
頁（１９８４））。このｗ＋ＩＤＮＡ（ ｍｓＤ１１Ａ
−１ｈ １ ６ ２と称す）は、７７塩基のＲＮＡ（
ｍｓｄＲＮＡ ）の２０番目のグ７ノシン残基の２′の
、位置に、１６２塩基の１本鎖ＤＮＡの５１末端が２′
，５゛−ホスホジエステル結合で枝分かれした形につな
がった構造をとっており（Ａ．ダーンディル（ Ａ．Ｄ
ｈｕｎｄａｌｅ ）ら：セル第５１巻１１０５頁（１９
８７））、これは細胞当り７００コピ一存在している。
ス●キサンサス（ Ｍｙｘｏｃｏｅｃｕｓ ｘａｎｔｈ
ｕｓ）にマルチコピー１本鎖ＤＩ▲（ ａ＋ｓＤＮＡ
）と呼ばれる特殊な構造をとっているサテライトＤＮＡ
が存在することを初めて見いだした（Ｔ．イー Ｔ．７
ルイチ、Ｓ．イノウエ、村，イノウエ（ Ｔ．Ｙｅｅ，
丁．ＦｕｒｕｉｃｈＬ， Ｓ．Ｉｎｏｕｙｅ， Ｍ．Ｉ
ｎｏｕｙｅ ） ：セＡ／（Ｃｅｌｌ）第３８巻２０３
頁（１９８４））。このｗ＋ＩＤＮＡ（ ｍｓＤ１１Ａ
−１ｈ １ ６ ２と称す）は、７７塩基のＲＮＡ（
ｍｓｄＲＮＡ ）の２０番目のグ７ノシン残基の２′の
、位置に、１６２塩基の１本鎖ＤＮＡの５１末端が２′
，５゛−ホスホジエステル結合で枝分かれした形につな
がった構造をとっており（Ａ．ダーンディル（ Ａ．Ｄ
ｈｕｎｄａｌｅ ）ら：セル第５１巻１１０５頁（１９
８７））、これは細胞当り７００コピ一存在している。
ａ＋ｓＤＮＡは種々のミクソ細菌（ｍｙｘｏｂａｃｔｅ
ｒｉａ ）に広く分布しており、近縁種であるステイグ
マテラ●オーランティアカ（Ｓｔｉｇａａｔｅｌｌｍ
ａｕｒａｎｔｉａｃａ ）にも、ミクソコツカス●キサ
ンサス由来のｍｓＤＮＡ−Ｍｘ １ ６ ２と高い相同
性を有すルｍｓＤＮＡ （ ａｉｓＤＮＡ − Ｓａ
１ ６ ３と称す）が存在する（ Ｔ．７ Ａ／イチら
：セル第４８巻４７頁（１９８７）、Ｔ．フルイチら：
セル第４８巻５５頁（ １ ９ ８ ７ ） ） 。ｍ
ｓＤＮＡは異なった場所から分離されたミクソコッカス
●キサンサスの数株にも存在し（Ａ．ダーンディルら：
ジャーナル●オプ●バクテリオロジ−（ Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ）第１６４巻９１
４頁（１９８５刀、さらにミクソコッカス●キサンサス
にはより小さい種類のｍｓＤＮＡであるｍｓＤＮＡ−Ｍ
ｘ ６ ５ （以前はＭｒＤＮＡと呼ばれた）が存在す
る（Ａ．ダーンデイノレら：ザ●ジャーナル●オプ●バ
イオロジカル●ケミストリ−（ Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ
）第２６３巻９０５５頁（１９８８））。
ｒｉａ ）に広く分布しており、近縁種であるステイグ
マテラ●オーランティアカ（Ｓｔｉｇａａｔｅｌｌｍ
ａｕｒａｎｔｉａｃａ ）にも、ミクソコツカス●キサ
ンサス由来のｍｓＤＮＡ−Ｍｘ １ ６ ２と高い相同
性を有すルｍｓＤＮＡ （ ａｉｓＤＮＡ − Ｓａ
１ ６ ３と称す）が存在する（ Ｔ．７ Ａ／イチら
：セル第４８巻４７頁（１９８７）、Ｔ．フルイチら：
セル第４８巻５５頁（ １ ９ ８ ７ ） ） 。ｍ
ｓＤＮＡは異なった場所から分離されたミクソコッカス
●キサンサスの数株にも存在し（Ａ．ダーンディルら：
ジャーナル●オプ●バクテリオロジ−（ Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ）第１６４巻９１
４頁（１９８５刀、さらにミクソコッカス●キサンサス
にはより小さい種類のｍｓＤＮＡであるｍｓＤＮＡ−Ｍ
ｘ ６ ５ （以前はＭｒＤＮＡと呼ばれた）が存在す
る（Ａ．ダーンデイノレら：ザ●ジャーナル●オプ●バ
イオロジカル●ケミストリ−（ Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ
）第２６３巻９０５５頁（１９８８））。
ｍｓＤＮＡ−Ｍｘ １ ６ ２とｍｓＤＮＡ−Ｓａ １
６ ３とは高い相同性があるが、これらはｍｓＤＮＡ
− Ｍｘ ６ ５とは一次配列の上での相同性はない
。しかＬｍｓＤＮＡ−Ｍｘ６５は、さきの二つのものと
共通の２次構造を有している。すなわちｍｓＤＮＡ −
Ｈｚ ６ ５もＲＮＡ鎖中のグアノシンにＤＮＡの５
９末端がつながった分岐構造をとっており、ｍｓＤＮＡ
とｍｓｄＲＮ＾の３′末端配列との間でハイブリッドが
形成されており、またＲＮＡ ， ＤＮＡともステムー
ループ構造をとっている。本発明者らは， ｍｓｄＲＮ
Ａ が更に長い前駆体ＲＮＡ ＜ ｐｒｅ − ｍｓｄ
ＲＮＡ ）から形成され、このｐｒｅ − ｍｓｄＲ
ＮＡは非常に安定な７． ９ Ａ − １−プ構造をと
り得ることを示した（Ａ．ダーンデイνら：セル第５１
巻ｌ１０５頁（１９８７））。
６ ３とは高い相同性があるが、これらはｍｓＤＮＡ
− Ｍｘ ６ ５とは一次配列の上での相同性はない
。しかＬｍｓＤＮＡ−Ｍｘ６５は、さきの二つのものと
共通の２次構造を有している。すなわちｍｓＤＮＡ −
Ｈｚ ６ ５もＲＮＡ鎖中のグアノシンにＤＮＡの５
９末端がつながった分岐構造をとっており、ｍｓＤＮＡ
とｍｓｄＲＮ＾の３′末端配列との間でハイブリッドが
形成されており、またＲＮＡ ， ＤＮＡともステムー
ループ構造をとっている。本発明者らは， ｍｓｄＲＮ
Ａ が更に長い前駆体ＲＮＡ ＜ ｐｒｅ − ｍｓｄ
ＲＮＡ ）から形成され、このｐｒｅ − ｍｓｄＲ
ＮＡは非常に安定な７． ９ Ａ − １−プ構造をと
り得ることを示した（Ａ．ダーンデイνら：セル第５１
巻ｌ１０５頁（１９８７））。
本発明者らは、上記の研究結果に基づきｍｓＤＮＡの生
成に対して次のような機構を提唱した。
成に対して次のような機構を提唱した。
ｐｒｅ − ｍｓｄＲＮＡのステムーループ構造がＲＮ
Ａに結合した分岐ｍｓＤＮＡ形成の鋳型となると同時に
、ｍｓＤＮＡ合成を開始させるプライマーとなるという
ものである。そしてこのような反応機構を考えることに
より、本発明者らは逆転写酵素及びＲＮａｓｅＨ？存在
を考えるようになった。本発明の目的は、このようなｍ
ｓＤＮＡを合成し得るミクソ細菌より調製した無細胞系
を提供することにある。
Ａに結合した分岐ｍｓＤＮＡ形成の鋳型となると同時に
、ｍｓＤＮＡ合成を開始させるプライマーとなるという
ものである。そしてこのような反応機構を考えることに
より、本発明者らは逆転写酵素及びＲＮａｓｅＨ？存在
を考えるようになった。本発明の目的は、このようなｍ
ｓＤＮＡを合成し得るミクソ細菌より調製した無細胞系
を提供することにある。
本発明を概説すれば、本発明は膜透過性を亢進させた原
核細胞をＲＮＡ結合分岐ｍ＠ＤＮＡ合成に必要な基質を
含む緩衝液と反応処理させることを特徴とするｍｓＤＮ
Ａの製造方法に関するものである。
核細胞をＲＮＡ結合分岐ｍ＠ＤＮＡ合成に必要な基質を
含む緩衝液と反応処理させることを特徴とするｍｓＤＮ
Ａの製造方法に関するものである。
本発明者らは種々の細胞抽出液を用いた無細胞系でのｍ
ｓＤＮＡ合成を試みたが成功しなかつｔもそこで細胞を
薬剤で処理することにより、細胞に種々の化合物を取り
込ませることを試みた。
ｓＤＮＡ合成を試みたが成功しなかつｔもそこで細胞を
薬剤で処理することにより、細胞に種々の化合物を取り
込ませることを試みた。
トｐエン処理された細胞は生きてはいないが、ＤＮＡの
損傷修復能、合成能を有Ｌ（Ｒ．Ｅ．モーゼス（ Ｒ．
Ｅ．Ｍｏｓｅｓ ）ら：プロシーデイングズ●オブ●ザ
●ナショナ〃●アカデミー●オプ●サイエンシーズ＊
ＵＳＡ （ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｎ
ａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ
ｓ，υ．Ｓ．Ａ． ）第６７巻６７４頁（１９７０））
、ある種のＲＮＡを合成することができ（Ｒ．Ｌ．ビー
ターソン（ Ｒ．Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ）ら：ジャー
ナν●オプ●パクテリオロジー第１０７巻５８５頁（１
９７１））、膜蛋白質を作ることのできることが示され
ている〔Ｓ．へ−ルゴナ（ Ｓ．Ｈａｌｅｇｏｎａ ）
ら：ヨーロビアン●ジャーナル●オプ●パイオケミスト
リ−（ ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ）第６９巻１６３頁（１９７６
））。本発明者らが以前に報告した大腸菌の透過性亢進
細胞を作るのに用いた方法〔Ｓ．ヘールゴナら：ヨーロ
ピアン●ジャーナν●オプ・バイオケミストリー第６９
巻１６３頁（１９７６））や、他の方法（Ｒ．Ｅ．モー
ゼスら：プロシーデイングズ●オプ●ザ●ナショナ〜●
アカデミー●オプ●サイエンシーズ●υＳＡ第６７巻６
７４頁（１９７０））を改変して、本発明者らはミクソ
コツカス●キサンサスの透過性亢進細胞系を開発した。
損傷修復能、合成能を有Ｌ（Ｒ．Ｅ．モーゼス（ Ｒ．
Ｅ．Ｍｏｓｅｓ ）ら：プロシーデイングズ●オブ●ザ
●ナショナ〃●アカデミー●オプ●サイエンシーズ＊
ＵＳＡ （ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｎ
ａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ
ｓ，υ．Ｓ．Ａ． ）第６７巻６７４頁（１９７０））
、ある種のＲＮＡを合成することができ（Ｒ．Ｌ．ビー
ターソン（ Ｒ．Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ）ら：ジャー
ナν●オプ●パクテリオロジー第１０７巻５８５頁（１
９７１））、膜蛋白質を作ることのできることが示され
ている〔Ｓ．へ−ルゴナ（ Ｓ．Ｈａｌｅｇｏｎａ ）
ら：ヨーロビアン●ジャーナル●オプ●パイオケミスト
リ−（ ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ）第６９巻１６３頁（１９７６
））。本発明者らが以前に報告した大腸菌の透過性亢進
細胞を作るのに用いた方法〔Ｓ．ヘールゴナら：ヨーロ
ピアン●ジャーナν●オプ・バイオケミストリー第６９
巻１６３頁（１９７６））や、他の方法（Ｒ．Ｅ．モー
ゼスら：プロシーデイングズ●オプ●ザ●ナショナ〜●
アカデミー●オプ●サイエンシーズ●υＳＡ第６７巻６
７４頁（１９７０））を改変して、本発明者らはミクソ
コツカス●キサンサスの透過性亢進細胞系を開発した。
本発明に用いられるミクソ細菌はｍｓＤＮＡの存在して
いるものであれば何でもよく、その例としてミクソコツ
カス・キサンサスＦＢ （ ＡＴＣＣ ２ ５ ２ ３
２ ）あるいはＦＢ株の変異株でありラトガース・ロ
バートウツド・ジョンソン医科大学より供与可能なミク
ソコツカス●キサンサスＤＺＦ − １があげられる。
いるものであれば何でもよく、その例としてミクソコツ
カス・キサンサスＦＢ （ ＡＴＣＣ ２ ５ ２ ３
２ ）あるいはＦＢ株の変異株でありラトガース・ロ
バートウツド・ジョンソン医科大学より供与可能なミク
ソコツカス●キサンサスＤＺＦ − １があげられる。
ミクソコツカス●キサンサスは、トルエン処理において
もフエネチ〃アルコール（ ＰＥＡ ）処理においても
、ラベルされたヌクレオチド３リン酸に対して同・程度
の透過効率を示すことが見出された。ＰＥＡはトルエン
よりもはるかに水溶性が高いため、この種の実験によく
用いられる。
もフエネチ〃アルコール（ ＰＥＡ ）処理においても
、ラベルされたヌクレオチド３リン酸に対して同・程度
の透過効率を示すことが見出された。ＰＥＡはトルエン
よりもはるかに水溶性が高いため、この種の実験によく
用いられる。
ミクソコツカス●キサンサスのＰＥＡ処理菌を顕微鏡で
観察したところ、たいていの細胞で形態変化は観察され
たが溶菌は起こっていなかつヘこのような無細胞系を用
いることにより、各種ヌクレオチドあるいはその誘導体
をＯｌ８ＤＮＡに取り込ませることができた。
観察したところ、たいていの細胞で形態変化は観察され
たが溶菌は起こっていなかつヘこのような無細胞系を用
いることにより、各種ヌクレオチドあるいはその誘導体
をＯｌ８ＤＮＡに取り込ませることができた。
以下本発明を実施例により更に具体的に説明するが、本
発明はこれら実施例に限定されない。
発明はこれら実施例に限定されない。
ミクソコツカス●キサンサスＤＺＦ １をＣＴＴ 培地
（ Ａ．Ｐ．グレツチャー（ Ａ．Ｐ．Ｂｒｅｔｓｃｈ
ｅｒ ）ら：ジャーナル●オプ◆バクテリオロジー第１
３３巻７６３頁（１９７８））で対数増殖中期まで培養
した。菌体は５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で
洗浄し、菌体が培養液の５倍濃度になるように同一緩衝
液に懸濁した。ｌ一の濃縮細胞懸濁液（ ２ Ｘ １０
＠ｃｆｕ ／ｍｌ ）にＰＥＡを終濃度０．５％になる
ように加え、室温で２時間激しく振とうした（ ｃｆｕ
はコロニー形成単位を示す）。２分後には生菌数は１
０” ｃｆｕ ／ ｍｌ以下となった。ＰＥＡ処理菌を
直ちに〔α一″”Ｐ） ｄｃＴＰを含んでいる反／応液
に加え、３０℃で１０分間反応させた。反応液の組成は
以下のとおりである。
（ Ａ．Ｐ．グレツチャー（ Ａ．Ｐ．Ｂｒｅｔｓｃｈ
ｅｒ ）ら：ジャーナル●オプ◆バクテリオロジー第１
３３巻７６３頁（１９７８））で対数増殖中期まで培養
した。菌体は５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で
洗浄し、菌体が培養液の５倍濃度になるように同一緩衝
液に懸濁した。ｌ一の濃縮細胞懸濁液（ ２ Ｘ １０
＠ｃｆｕ ／ｍｌ ）にＰＥＡを終濃度０．５％になる
ように加え、室温で２時間激しく振とうした（ ｃｆｕ
はコロニー形成単位を示す）。２分後には生菌数は１
０” ｃｆｕ ／ ｍｌ以下となった。ＰＥＡ処理菌を
直ちに〔α一″”Ｐ） ｄｃＴＰを含んでいる反／応液
に加え、３０℃で１０分間反応させた。反応液の組成は
以下のとおりである。
７ Ｘ １ ０” ｃｆｕ ／ＲｌのＰＥＡ処理菌、７
０叶のリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）、１３ｍＭのＭｇＣ
ｊ．、１．３１ＩＮのＡＴＰ ，それぞれ３３μＨのｄ
ＣＴＰ， ｄＴＴＰ，ｄＡＴＰ，０．６６μＨのｄｃ
ＴＰ ，それぞれ３３μＨのＧＴＰ ，υＴＰ，ＣＴＰ
％ ０．０２μＨの〔α一”Ｐ） ｄＣＴＰ，ＰＦ，
Ａ処理菌は反応後遠心によりペレットとして集め、１０
ｍＭのＴｒｉｓ ●ＨＣＩ （ ｐＨ ８． ０ ）、
１ｍＨのＥＤＴＡ，３ ５ ０ ｍＷのＮａＣｌｌ１２
％ＳＤＳ．７Ｍ尿素よりなる溶菌溶液に懸濁し、フェノ
ールークロロホｐム（１：１）抽出、クロロホルム抽出
を行い、エタノールでＲＮＡ画分を沈澱させた。
０叶のリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）、１３ｍＭのＭｇＣ
ｊ．、１．３１ＩＮのＡＴＰ ，それぞれ３３μＨのｄ
ＣＴＰ， ｄＴＴＰ，ｄＡＴＰ，０．６６μＨのｄｃ
ＴＰ ，それぞれ３３μＨのＧＴＰ ，υＴＰ，ＣＴＰ
％ ０．０２μＨの〔α一”Ｐ） ｄＣＴＰ，ＰＦ，
Ａ処理菌は反応後遠心によりペレットとして集め、１０
ｍＭのＴｒｉｓ ●ＨＣＩ （ ｐＨ ８． ０ ）、
１ｍＨのＥＤＴＡ，３ ５ ０ ｍＷのＮａＣｌｌ１２
％ＳＤＳ．７Ｍ尿素よりなる溶菌溶液に懸濁し、フェノ
ールークロロホｐム（１：１）抽出、クロロホルム抽出
を行い、エタノールでＲＮＡ画分を沈澱させた。
上記エタノール沈澱で回収した両分を４％ボリアクリｐ
アミドー８Ｍ尿素、または６％ボリアクリ〜アミドー８
Ｍ尿素のゲルを用いて電気泳動することによって， ａ
＋ｓＤＮＡを分析した。その結果， ＤＮＡ分子量マー
カーの約２４０の大きさに相当する位置にバンドが検出
された。この大きさはｍｓＤＮＡ − ｍｓｄＲＮＡ複
合体の大きさ（１６２ｂｐ＋７ ９ ｂｐ＝２ ３ ９
ｂｐ）と一致した。
アミドー８Ｍ尿素、または６％ボリアクリ〜アミドー８
Ｍ尿素のゲルを用いて電気泳動することによって， ａ
＋ｓＤＮＡを分析した。その結果， ＤＮＡ分子量マー
カーの約２４０の大きさに相当する位置にバンドが検出
された。この大きさはｍｓＤＮＡ − ｍｓｄＲＮＡ複
合体の大きさ（１６２ｂｐ＋７ ９ ｂｐ＝２ ３ ９
ｂｐ）と一致した。
本発明により、無細胞系におけるｍｓＤＮＡの製造方法
が確立された。この方法はｍｓＤＮＡが合成されるため
に必要な成分及びｍｓＤＮＡが合成される際に形成され
る中間体の構造などの同定などにおいて有用である。
が確立された。この方法はｍｓＤＮＡが合成されるため
に必要な成分及びｍｓＤＮＡが合成される際に形成され
る中間体の構造などの同定などにおいて有用である。
−４７３
Claims (1)
- １、膜透過性を亢進させた原核細胞をＲＮＡ結合分岐マ
ルチコビー１本鎖ＤＮＡ（ｍｓＤＮＡ）合成に必要な基
質を含む緩衝液と反応処理させることを特徴とするｍｓ
ＤＮＡの製造方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US315427 | 1989-02-24 | ||
| US07/315,427 US5079151A (en) | 1989-02-24 | 1989-02-24 | Production of branched RNA-linked multi-copy single-stranded DNA using permeabilized cells |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0315388A true JPH0315388A (ja) | 1991-01-23 |
| JP2649735B2 JP2649735B2 (ja) | 1997-09-03 |
Family
ID=23224377
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2042304A Expired - Fee Related JP2649735B2 (ja) | 1989-02-24 | 1990-02-22 | ｍｓＤＮＡの製造方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5079151A (ja) |
| JP (1) | JP2649735B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5436141A (en) * | 1989-02-24 | 1995-07-25 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Method for synthesizing stable single-stranded CDNA in eukaryotes by means of a bacterial retron and products |
| US5434257A (en) * | 1992-06-01 | 1995-07-18 | Gilead Sciences, Inc. | Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages |
| US5817781A (en) | 1992-06-01 | 1998-10-06 | Gilead Sciences, Inc. | Modified internucleoside linkages (II) |
| US5389840A (en) * | 1992-11-10 | 1995-02-14 | Elantec, Inc. | Complementary analog multiplier circuits with differential ground referenced outputs and switching capability |
| US20070160581A1 (en) * | 1994-04-29 | 2007-07-12 | Cytogenix, Inc. | Production of ssDNA in vivo |
| JP2002515730A (ja) * | 1995-10-16 | 2002-05-28 | カイロン コーポレイション | 遺伝子発現を変調する因子のスクリーニング方法 |
-
1989
- 1989-02-24 US US07/315,427 patent/US5079151A/en not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-02-22 JP JP2042304A patent/JP2649735B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2649735B2 (ja) | 1997-09-03 |
| US5079151A (en) | 1992-01-07 |
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