JPH03275658A - テトリルータンパク質コンジュゲート - Google Patents
テトリルータンパク質コンジュゲートInfo
- Publication number
- JPH03275658A JPH03275658A JP2074972A JP7497290A JPH03275658A JP H03275658 A JPH03275658 A JP H03275658A JP 2074972 A JP2074972 A JP 2074972A JP 7497290 A JP7497290 A JP 7497290A JP H03275658 A JPH03275658 A JP H03275658A
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- JP
- Japan
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- tetryl
- protein
- derivative
- protein conjugate
- immunogen
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は新規な抗テトリル抗体の作製のためのテトリル
誘導体とこの誘導体の作製方法及びこの誘導体を用いた
テトリル−タンパク賞コンジュゲートに関するものであ
る。本発明により得られるテトリル−タンパク質コンジ
ュゲートは、爆薬の一種であるテトリルを血中又は大気
中から免疫測定法によって高感度に検知するために用い
られる抗テトリル抗体を作成するための免疫原として有
用である。
誘導体とこの誘導体の作製方法及びこの誘導体を用いた
テトリル−タンパク賞コンジュゲートに関するものであ
る。本発明により得られるテトリル−タンパク質コンジ
ュゲートは、爆薬の一種であるテトリルを血中又は大気
中から免疫測定法によって高感度に検知するために用い
られる抗テトリル抗体を作成するための免疫原として有
用である。
従来の技術
キャピラリーガスクロマトグラフィーの検出方法を用い
たテトリルの高感度検知が、フレデリック・ベルキン、
リチャード・Ｗ・ビショップ及びマイケル・Ｖ・シーリ
ーら（ジャーナル・オブ・クロマトグラフィツク・サイ
エンス、２４巻、■２月、１９８５）によって報告され
ているように、近年、抗体を利用した免疫的測定法によ
る極微量物質の検出方法が開発されている。
たテトリルの高感度検知が、フレデリック・ベルキン、
リチャード・Ｗ・ビショップ及びマイケル・Ｖ・シーリ
ーら（ジャーナル・オブ・クロマトグラフィツク・サイ
エンス、２４巻、■２月、１９８５）によって報告され
ているように、近年、抗体を利用した免疫的測定法によ
る極微量物質の検出方法が開発されている。
この検出方法によれば、ある目的物質に特異的に結合す
る抗体を用いて、様々なものの混合物の中から目的物質
を検出できる。例えば、爆薬物の一種であるテトリルも
免疫学的方法で検出が可能となれば、夾雑物による測定
感度の低下を防ぐことができる。
る抗体を用いて、様々なものの混合物の中から目的物質
を検出できる。例えば、爆薬物の一種であるテトリルも
免疫学的方法で検出が可能となれば、夾雑物による測定
感度の低下を防ぐことができる。
発明が解決しようとする課題
従来の技術であるキャピラリーガスクロマトグラフィー
では、測定するサンプルに夾雑物が含有されていると、
測定感度が低下したり目的検知物質以外のものが検出さ
れる可能性があり、目的物を正確に検出することができ
ない。
では、測定するサンプルに夾雑物が含有されていると、
測定感度が低下したり目的検知物質以外のものが検出さ
れる可能性があり、目的物を正確に検出することができ
ない。
又現在までのところ、テトリルと特異的に結合する抗体
はその免疫原が開発されていなかったため、作製されて
いない。
はその免疫原が開発されていなかったため、作製されて
いない。
課題を解決するための手段
本発明は、テトリルのＮ位のニトロ基を還元して得られ
る下記構造のテトリル誘導体と、このテトリル誘導体を
タンパク質と結合させたテトリル−タンパク質コンジュ
ゲートとを提供することによって、かかる従来の課題を
解決するものである。
る下記構造のテトリル誘導体と、このテトリル誘導体を
タンパク質と結合させたテトリル−タンパク質コンジュ
ゲートとを提供することによって、かかる従来の課題を
解決するものである。
Ｎ ○２
作用
特定の物質に特異的に結合するモノクロール抗体、抗血
清などの抗体は、この特定の物質を免疫原として動物に
注射することによって作ることができる。
清などの抗体は、この特定の物質を免疫原として動物に
注射することによって作ることができる。
以下の構造式で示されるテトリル誘導体とタンパク質と
のコンジュゲートを免疫原とし、マウスを免疫感作動物
として免疫することにより得られる抗体は、テトリルに
対して高いアフィニティーを有し特異的に結合するので
、テトリルの極微量検出が可能となる。
のコンジュゲートを免疫原とし、マウスを免疫感作動物
として免疫することにより得られる抗体は、テトリルに
対して高いアフィニティーを有し特異的に結合するので
、テトリルの極微量検出が可能となる。
実施例
本発明の一実施例としてテトリルを使用し、そのＮ位の
ニトロ基を還元することによりテトリル誘導体を作製し
た後、この誘導体をスペーサーを介してタンパク質と結
合させてコンジュゲートとし、これを免疫原とした。
ニトロ基を還元することによりテトリル誘導体を作製し
た後、この誘導体をスペーサーを介してタンパク質と結
合させてコンジュゲートとし、これを免疫原とした。
この還元方法には、ニトロ基を選択的に還元する硫化水
素を利用したものが適当である。
素を利用したものが適当である。
結合させるタンパク質は、免疫応答性の高いものが望ま
しい。この点で好適なタンパク質としてチキン由来のＴ
−グロブリン（ＣＧＣ，）を用いることが好ましい。
しい。この点で好適なタンパク質としてチキン由来のＴ
−グロブリン（ＣＧＣ，）を用いることが好ましい。
免疫原が分子量数百のタンパク質などの場合はそのまま
注射できるが、低分子（ハプテン）の場合は、適当なタ
ンパク質にこれを結合させて疑似的に分子量を高くした
免疫原とし、これを注射する必要がある。
注射できるが、低分子（ハプテン）の場合は、適当なタ
ンパク質にこれを結合させて疑似的に分子量を高くした
免疫原とし、これを注射する必要がある。
以下、本発明の一実施例についてより詳細に説明する。
（イ）テトリル誘導体の作製方法
テトリル１００ｍｇを２００ｍ ｌのエタノールに？容
かし、更に１０ｎ＋１のアンモニア水を加えた後、これ
に硫化水素をテトリルのモル数の３倍以上溶解させた。
かし、更に１０ｎ＋１のアンモニア水を加えた後、これ
に硫化水素をテトリルのモル数の３倍以上溶解させた。
この溶液を撹拌しながら６０°Ｃで２４時間反応させた
。
。
反応後、溶液を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ
）にかけ、テトリル誘導体を精製した。
）にかけ、テトリル誘導体を精製した。
（ロ）チドリルータンパク質コンジュゲートの作製方法
上述の（イ）で得たテトリル誘導体の２５．０ｍｇを０
．５Ｎ塩酸２００μｍに溶解し、リン酸バッファー溶液
（Ｐ Ｂ Ｓ （ｐＨ７，０、Ｈ３Ｐ Ｏ４： ０．
Ｉ Ｍ、、ＮａＣ１：０． Ｉ Ｍ） ） ５ｍｌで希
釈した。
．５Ｎ塩酸２００μｍに溶解し、リン酸バッファー溶液
（Ｐ Ｂ Ｓ （ｐＨ７，０、Ｈ３Ｐ Ｏ４： ０．
Ｉ Ｍ、、ＮａＣ１：０． Ｉ Ｍ） ） ５ｍｌで希
釈した。
この溶液に、５ＰＤＰ （ファルマシア社製）１２．５
ｍｇを１ｍｌのエタノールに溶解した溶液を混合して３
０分撹拌した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ（シリ
カゲル、展開溶媒：アンモニア飽和、メタノール／クロ
ロフォルム＝ ５ ／９５、紫外光の吸収で判別］）上
で、５ＰＤＰのスポットが消失したのを［した（ＴＥＴ
−３ＰＤＰ）。
ｍｇを１ｍｌのエタノールに溶解した溶液を混合して３
０分撹拌した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ（シリ
カゲル、展開溶媒：アンモニア飽和、メタノール／クロ
ロフォルム＝ ５ ／９５、紫外光の吸収で判別］）上
で、５ＰＤＰのスポットが消失したのを［した（ＴＥＴ
−３ＰＤＰ）。
Ｔ−グロブリン（ＣＧＧ）３００ｍｇをリン酸バッファ
ー溶液（ＰＢＳ）の５０ｍ ｌに熔かし、これに５ＰＤ
Ｐ溶液（溶媒エタノール、１１．１ｍｇ／ｍ１）４．５
ｎ＋１を滴下した。常温で１２時間撹拌後、セファデッ
クスＧ２５充填カラム質（ファルマシア社製、直径４ｃ
ｍｘ長さ５０ｃｍ、流速７．２ ｍｌ／ｗｉｎ）でゲル
濾過した。
ー溶液（ＰＢＳ）の５０ｍ ｌに熔かし、これに５ＰＤ
Ｐ溶液（溶媒エタノール、１１．１ｍｇ／ｍ１）４．５
ｎ＋１を滴下した。常温で１２時間撹拌後、セファデッ
クスＧ２５充填カラム質（ファルマシア社製、直径４ｃ
ｍｘ長さ５０ｃｍ、流速７．２ ｍｌ／ｗｉｎ）でゲル
濾過した。
ジチオスレイトール（Ｄ Ｔ Ｔ ） １００ｍＭ、
リン酸バッファー溶液ＣＰＢＳ）２．０ｍｌを上記の流
出液に添加し、還元させた。
リン酸バッファー溶液ＣＰＢＳ）２．０ｍｌを上記の流
出液に添加し、還元させた。
これをゲル濾過した後、溶液１００ｍ ！にＴＥＴ−３
ＰＤＰ溶液を徐々に加え、３０分後にゲル濾過した。
ＰＤＰ溶液を徐々に加え、３０分後にゲル濾過した。
この結果、Ｃ（１，０１分子当り１０．３分子のテトリ
ルが導入されたテトリル−タンパク質コンジュゲート（
ＴＰＴ−ＣＯＧ）を得ることができた。
ルが導入されたテトリル−タンパク質コンジュゲート（
ＴＰＴ−ＣＯＧ）を得ることができた。
発明の効果
本発明によれば、抗テトリル抗体を作製するための免疫
原として有効なテトリル−タンパク質コンジュゲートを
得ることができる。
原として有効なテトリル−タンパク質コンジュゲートを
得ることができる。
Claims (4)
- （１）下記の構造を有するテトリル誘導体。 ▲数式、化学式、表等があります▼
- （２）テトリルのＮ位のニトロ基を還元することを特徴
とするテトリル誘導体の作製方法。 - （３）請求項１記載のテトリル誘導体がタンパク質と結
合していることを特徴とするテトリル−タンパク質コン
ジュゲート。 - （４）タンパク質がチキンγ−グロブリンであることを
特徴とする請求項３記載のテトリル−タンパク質コンジ
ュゲート。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2074972A JP2758965B2 (ja) | 1990-03-25 | 1990-03-25 | テトリルータンパク質コンジュゲート |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2074972A JP2758965B2 (ja) | 1990-03-25 | 1990-03-25 | テトリルータンパク質コンジュゲート |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03275658A true JPH03275658A (ja) | 1991-12-06 |
| JP2758965B2 JP2758965B2 (ja) | 1998-05-28 |
Family
ID=13562720
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2074972A Expired - Fee Related JP2758965B2 (ja) | 1990-03-25 | 1990-03-25 | テトリルータンパク質コンジュゲート |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2758965B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5742424A (en) * | 1992-12-22 | 1998-04-21 | Monsanto Company | Electrochromic materials and displays |
| US5754329A (en) * | 1992-12-22 | 1998-05-19 | Monsanto Company | Electrochromic display laminates |
| US5876633A (en) * | 1995-12-26 | 1999-03-02 | Monsanto Company | Electrochromic metal oxides |
| US5876634A (en) * | 1995-12-26 | 1999-03-02 | Monsanto Company | Electrochromic tin oxide |
| US5891511A (en) * | 1995-12-26 | 1999-04-06 | Monsanto Company | Addition of color to electrochromic displays |
-
1990
- 1990-03-25 JP JP2074972A patent/JP2758965B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| J CHEM SOC B=1968 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5742424A (en) * | 1992-12-22 | 1998-04-21 | Monsanto Company | Electrochromic materials and displays |
| US5754329A (en) * | 1992-12-22 | 1998-05-19 | Monsanto Company | Electrochromic display laminates |
| US5812300A (en) * | 1992-12-22 | 1998-09-22 | Monsanto Company | Electrochromic materials and displays |
| US5876633A (en) * | 1995-12-26 | 1999-03-02 | Monsanto Company | Electrochromic metal oxides |
| US5876634A (en) * | 1995-12-26 | 1999-03-02 | Monsanto Company | Electrochromic tin oxide |
| US5891511A (en) * | 1995-12-26 | 1999-04-06 | Monsanto Company | Addition of color to electrochromic displays |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2758965B2 (ja) | 1998-05-28 |
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
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