JPH04504404A - 治療薬および診断薬の内皮および上皮取り込み、および障害部位への局在化のための生物付着薬物担体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 治療薬および診断薬の内皮および上皮取り込み、および障害部位への局在化のた めの生物付着薬物担体最近まで、血管内薬物の体組繊中での局在化は、多数の体 器官の組織小室への微小血管関門を横切っての化学分配に依存し、てぃた。

このために、実際には注射された量の０．０１％がら０．００１％しか目的の標 的に到達していなかった。約２０年前、薬物をリポソームおよびミクロスフェア （微小球）内にエントラップ（捕獲）した。このことが初期生体分布を改変し、 それらを細網内皮細胞器官、肝臓、牌臓および骨髄中の貧食細胞に再度直面させ ることになった。

１９７８年、本発明者および共同研究者［ライダーら（Ｗｉｄｄｅｒ）。

Ｐｒｏｃ、Ａｍ、Ａｓ５ｎ、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、Ｖ、　１　９．　ｐｉ　７ （１９７８）コは、薬物と磁性体とをミクロスフェアにコントロールする（同時 捕獲）方法を開発した。このミクロスフェアは、静注可能であって非細網内皮細 胞標的器官（例、脳および肺）の組織小室に磁気的に局在化することができる。

磁気的な捕獲は十分な磁力（０，５〜Ｑ　８Ｔ　ｅｓｌａ）と勾配（０、Ｉ　Ｔ 　ｅｓｌａ／　ｍｍ）を有する体外の磁石に近接している正常組織と組織腫瘍内 に、血管内皮を通過して粒子を選択的に引きずり込むことにより行われた。この 方法は効率が高く注射された用量の２５〜５０％が所望の標的組織に沈着（デポ ジット）するが、同時に非常に複雑で、下記の主な不都合を有する方法でもあっ た：１）特殊な医療センターでの使用に限定される；２）標的器官に磁性体を永 久に配置する；３）捕獲する磁場の不均一性により薬物が集中的に過剰投与され る：および４）ごく限られた数の治療薬にしか適用できない。しかしながら、磁 気標的化の研究過程でエントラップ型担体（ミクロスフェア）から毒性薬物を徐 々に（制御して）放出すると局所組織環境における正常細胞は薬物毒性から保護 され、しかも膿瘍細胞および微生物に対して有効な治療がなされることが分かっ た。

動物および臨床研究にモノクローナル抗体が一般的に利用可能となった時には、 抗体−薬物抱合体（コンジユゲート）が毒性物質の生体分布を制限し、標的組織 内の微小血管関門を横切った所にある疾患（腫瘍および感染）の中心に沈着させ ることが期待された。不運にも、大多数のモノクローナル抗体は、現在でもそう であるがマウスから得られているので、ヒト受容体にとっては免疫学的に異種物 質である。治療上適切な置換比率で薬物が結合すると、モノクローナル抗体誘導 体はより異種性となりそれらの結合特異性が損われる。

従って、抗体−薬物抱合体はリポソニムにおけると同様に、肝臓で迅速に清掃さ れる。重要なのは、大多数の固形腫瘍へのそれらの局在化は、血流から膿瘍組織 （間質）を分離している部分的に無傷の微小血管関門の存在により一層損なわれ ているという点である。このために、注射量の約１％から７％（最大）が非細網 内皮細胞標的に到達するにすぎない。選択的なリンパ腫と白血病はこの血管関門 の自然破壊がより大きいために、上記の原則の例外である。しかしながら、大多 数の固形腫瘍および感染症に関しては、デボート剤形（放出制御型）で微小血管 関門を効率よく通過して薬物を運搬（供給）する、一般的な方法がなおも必要と されている。

そのような薬物剤形は、血管内皮と正常組繊細胞を薬物の毒性作用から保護し、 通過に際する内皮および組織による代謝から薬物を保護し、標的組織および組織 病変内において制御された治療速度で薬物を生物利用せしめるために必要である 。　′低分子量の分子（例えばグルコースおよびインシユリン）に関しては活性 な内皮通過が証明されているが、本発明者以外により大きい分子または積荷（カ ーゴ）剤形に担持された分子の通過に関する研究はなされていない。本発明の実 施例では直径約２ｎｍ以上の粒子および分子集合体の経内反移動が、内皮により 合成された、または他の部位で合成されたが内皮表面と緊密に結合するようにな った、受容体（リセブター）または抗原と多重結合する表面被覆（コーティング ）を適用することにより促進されることを示すものである［ラネイ（Ｒａｎｎｅ ｙ）、Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍｉｃｏｌｏｇｙ＋　Ｖ、　３５　＋　Ｎ ｏ、　７　、　ｐｐｌ　Ｏ６３〜１０６９（１９８６）］。

本発明は、表面を有する担体、該担体内に含有された少なくとも２分子の薬物ま たは診断薬、および内皮表面決定に因るに特異的な多価結合物質からなる組成物 に関する。該結合物質の少な（とも一部は担体表面と結合している。担体は約１ ナノメーター（ｒ＋ｍ）から約２５０マイクロメーター（ｕｎ）の間の大きさで あることが好ましい。

結合物質は内皮表面の抗原決定基に生物付着くバイオアトヘア）し、血管壁の内 皮細胞による担体のエンベローブメント（包み込み）を誘導し、ざらに該膜を通 過して近接組織への移送を導く物質である。

本明細書中、生物付着という語句は、生体系で特徴的に起こる、複数分子が関与 する通常非共有結合的な相互反応を意味する。

本発明の方法および組成物にがかる担体は、好ましくは１またはそれ以上の高分 子（巨大分子）、微小集合体、微小粒子、ミクロスフェア、ナノスフェア（ナノ 小球）、リポソームおよびマイクロ（微細）エマルシヨンを含有する。内皮表面 抗原決定基は内皮組織に特徴的なものであり、その内のあるものは組織病変に近 接しているとき量が増えることで明らかにすることができる。これらの内皮表面 抗原決定基は例えば、因子■抗原、インターロイキンＩレセプター、内皮性トロ ンボデュリン、内皮組織因子、内皮上組織部分、フィブリンＤ−Ｄダイマーおよ びＧＰ２ｂ／３ａ糖タンパク質複合体（コンプレ・ノクス）が含まれる。

本発明の多価結合物質はヘパリン、ヘパリン断片（フラグメント）またはニーレ ックス・ニーロバニス（Ｕ　ｌｅｘ　Ｅ　ｕｒｏｐａｅｕｓ）　Ｔレクチンであ ることが好ましい。ある場合には、内皮表面抗原に対する抗体を多価結合物質と して用いることができる。本発明の多価結合物質はまた、内皮上組織部分、例え ばラミニン、■型コラーゲン、フィブロネクチン、または単核細胞走化性フィブ ロネクチン断片に対するものであってもよい。これらの内皮下部分は例えば、病 変形成により血管液に暴露され本発明物質組成物と結合または包み込むことがで きる。本発明物質の組成物は内皮表面レセプター、表面酵素、内皮表面を被覆す る物質または内皮の直ぐ下に存在している物質を介して血管内皮と結合し、正常 な血管内皮または組織または内皮疾患の中心付近に沈着し、暴露され、あるいは 変化される物質である。

本発明の組成物はその試料と内皮との結合、および内皮による結合物質の全体ま たは部分の例えば１０〜１５分間以内の包み込みを誘導することを含む方法に用 いることができる。本発明組成物と内皮との相互反応によって内皮の一時的な分 離または解放が誘導され、そのことにより、本発明組成物が親和性をもって結合 し得る内皮下抗原決定基が暴露されることになる。本発明組成物は内皮との相互 反応によってそれに関連する薬物または診断薬が関連の血管内腔にまだ止まって いるか、あるいは突入する早期における全体的または部分的な隔離を誘導する。

本発明の組成物は、その試料を内皮との相互反応し、関連する血管内皮および／ または内皮下構造の少なくとも１つを横切って近接組織小室に入ることにより試 料の運搬を促進することを特徴とする。

本発明組成物の試料と内皮との相互反応により、関連薬物または診断薬が内皮お よび関連構造を通過して移動する効率が改善されるので、かなり大量のｉ！！離 の薬物または診断薬の投与と匹敵する効果を得るために投与する薬物または診断 薬の総投与１を減少することができる。

本発明の組成物はある実施態様においてはミクロスフェアであることが好ましい 。そのようなミクロスフェアはマトリックスを有し、それは直径０．２〜２５０ ｕｍであることが最も好ましい。マトリックスは炭水化物であって多価結合能力 をも有するヘパリンのような炭水化物であることが好ましい。デキストランも好 ましいマトリ。

クスであって、例えばヘパリンなどの多価結合物質で被覆されていることが好ま しい。後者の場合、本発明組成物の好ましい割合はヘパリン約１０％（Ｗ／Ｖ） である。

本発明組成物に含有される薬物または診断薬はアンホテリシＢ等の抗真菌ポリエ ンンマクロライドであってよい。アンホテリシンＢまたは他の疎水性薬物または 診断薬はシクロデキストリンコンプレックス中にあってもよい。アンホテリシン Ｂ等の薬物または診断薬は、例えばブルーロニツクＦ６８ブロック共重合体、ポ リオキシプロピレン−ポリオキシエチレンのミセル内に包み込まれた形の放出制 御（コントロール−リリース）製剤であってよい。

本発明組成物はミクロスフェア炭水化物マトリックスおよび、内皮表面抗原決定 基、酵素、内皮上または内皮下物質と結合し得る、多価結合物質としての暴露さ れた、または変換されたレクチンを含有することが好ましい。

本発明組成物は、１つの好ましい実施態様として、表面を有する担体、該担体に 含有されている少なくとも２分子の薬物または診断薬、内皮抗原決定基に特異的 な多価結合物質であってその少なくとも一部は該担体の表面と結合している結合 物質、および多価結合物質を外部接触に暴露させないための除去可能な皮膜（コ ーティング）を含有している。除去可能なコーティングは引金となる事象により 除去される。引金事象はｐＨの低下、温度変化、正常な内腔との接触、異常な内 膜との接触５酵素’ｔａＩｊｌ：の変化、または外部からの放射線振動数、超音 波、磁性または電気、等の外部力の適用で誘導される生理的な変化である。

本発明組成物は、除去可能なコーティングを有するかまたは有しない、多価結合 物質が内皮、内皮上または内皮下抗原決定基に親和性を有するレクチンであるも のである。好ましい実施態様として、レクチンはＬ）Ｉｅｘ　Ｅｕｒｏｐａｅｕ ｓ　Ｔ　レクチンであり、除去可能なコーティングはフコース、フコノルアルブ ミンまたはアルブミンーフコンルアミンである。

本発明組成物は内皮または内皮子結合部位に親和性を有する抗体である多価結合 物質を含有していてもよい。また、本発明の多価結合物質は内皮また内皮上酵素 のための基質であってもよい：例えば内皮アンギオテンシン変換酵素に基質親和 性を有するペプチド、ペンゾイルーフェニアラニルーアラニルプロリンがある。

また、別の好ましい実施態様として、薬物または診断薬および多価結合物質は同 一物質であって、分子直径が１〜２００ｎｍの分子微小集合体からなるものであ ってもよく、最も好ましくは、薬物または診断薬および多価結合物質は同一であ って分子直径約１〜２００ｎＩＩ＋のヘパリンの分子微小集合体を含有している 。

本発明の好ましい実施態様における組成物は静脈注射により、あるいは他の非経 口的投与に適した薬学的に許容し得る溶液である。

本発明組成物の使用方法は、上記の表面を有する担体、該担体に含有されている 少なくとも２分子の薬物または診断薬、内反抗原決定基に特異的な多価結合物質 であってその少なくとも一部は該担体の表面と結合している結合物質を動物に投 与することからなる。上記組成物は薬学的に許容し得る担体を含有していること が好ましい。

多価結合物質は特定の標的部位、特に内皮を標的部位として選択される。薬物ま たは診断薬は治療すべき特定の病変または用いる診断法によって選択される。担 体は天然または合成ポリマーである。

第１図は加熱していない、アセトン安定化ヘパリンミクロスフェアを静注され、 ２−５分後に綾された被検マウ”スの、ＰＡＳ染色肺組織切断面を示す図である 。

第２図は、第１図と同様のヘパリンミクロスフェアを静注され、１０分゛後に殺 された被検マウスの、ＰＡＳ染色肺組織切断面を示す図である。

第３図は実施例４記載のフコース−ブロック、Ｕ　ｌｅｒ　Ｅ　ｕｒｏｐａｅｕ ｓアグルチニンＩ−被覆スフェア（小球）を静注され、２−５分後に殺された被 検マウスの、ＰＡＳ染色肺組織切断面を示す図である。

第４図は実施例３記載と同一のフコース−ブロック、ＵｌｅｘＥｕｒｏｐａｅｕ ｓアグルチニン■−被覆スフェア（小球）を静注され、１０分後に殺された被検 マウスの、レティキニリン染色肺組織切断面を示す図である。

第５図は実施例３および４記載と同一のフコース−ブロックスフェア（小球）を 静注され、２０分後に殺された被検マウスの、ＰＡＳ染色肺組織切断面を示す図 である。

第６図はプレインアガロースのミクロスフェア対照（Ｍｃ）であって、静注後１ ０分後の肺微小血管（Ｖ）内における存在を示す図である。

本発明は内皮結合性物質を含有する（またはそれで被覆（コーティング）されて いる）無毒で生物分解される小さいミクロスフェア（大きさ、約０．２〜１１０ ０ｕ以下）および微小集合体（大きさ、１〜２００ｒ＋ｎ＋）に関する。これら の物質は、粒子の被検嘔歯動物への静注により、以下の連続的な段階を誘発する ＝１）内皮への生物付着；２）粒子（微小集合体の）迅速（２−分）な内皮によ る（部分的または全体的な）包み込み（エンベロープメント）；３）無傷の薬物 −担体粒子の組織小室への微小血管を通過しての急速なく加速された）移動（注 射後１０〜２０分後にほぼ完了する）：４）エンベローブメント担体のミクロス フェア製剤からの薬物（または診断薬）の遅延された放出、これは生体内で、標 的組織（病変）における薬物のコントロールされた生物利用率と相関関係にある ことが分かっている。

ここに示す例は、循環中の赤血球、白血球または血小板表面に潜在的に競合する レセプターが存在するか否かにかかわらず、有効で非磁気的な、正常および病変 組繊への薬物の局在化のための製剤担体として作用する本発明組成物の３つの主 要な試みに関する。これるの試みは以下の通りである二１）体中の正常な内皮に 存在する相補的なヘパリンおよびヘパリンスルフェートと結合するヘパリン含有 （およびヘパリンで被覆された）微小粒子（および微小集合体）（肺および脳に 関する結合は以下に示す）；２）内皮内腔表面に存在し、疾患の中心で高密度で あると報告されている［ロエスバーグら（Ｌｏｅｓｂｅｒｇ）、Ｂｉｏｃｈｅｍ 、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ、　Ｖ、　７６３．　ｐｐｌ　６０（１９８３ ）〕因子Ｘ１抗原と結合する糖タンパク質である、Ｕ　ｔｅｘ　Ｅ　ｕｒｏｐａ ｅｕｓアグルチニン　１と表面コンジュゲートした微小粒子；　３）　Ｕｌｅｘ Ｅ　ｕｒｏｐａｅｕｓアグルチニン　■の因子■抗原との結合部位を変換（可逆 的な被覆）し、それが循環中の赤血球表面の潜在的に同様のレセプターと結合す ることを避けるために糖へブタン、Ｌ−フコースを付加することにより該部位を ブロックしたＵ　ｔｅｘ　Ｅ　ｕｒｏｐａｅｕｓアグルチニン■が表面にコンジ ュゲートしている微小粒子。表面被覆微小担体はインターロイキン■および血管 内皮の表面における疾患により誘導されたそのレセプター部位を利用することも できる［リビーら（Ｌｉｂｂｙ）、Ｆｅｄ、Ｐｒｏｃ、＋　Ｖ、４５ｐ、　１０ ７４（１９８６）コ。

これらの例として初期の生物形態計測データは、注入された担体の少なくとも２ ５％が遭遇する第１標的器官微小血管を、即ち肺においては静脈内経路により、 脳においては頚動脈経路を経て通過していることを示唆している。故に、これら の新規な担体は（５つのファクターにより）これまで記載された内で、最も有効 な一般目的のアンホテリシンーシクロデキストリンの微小粒子＜０．１〜０．６ ｕｍ）薬物供給手段といえる。−例として、薬物放出速度が非常に遅い（ｔ４が 約３６時間以上）を分解速度がより早いヘパリンマトリックス（ｔ〜は循環血液 中、血液アミラーゼにより約１５分）の大きい（５−２，５ｕｍ）巨大粒子内に 捕獲した。そのようなハイブリッド微小担体は組織内で血管外薬物を徐々に放出 させると同時に微小血管内に残存する断片を迅速に分解させる。後者の性質は、 さもなくば微小担体の治療有効量を注入する際に起こり得る微小血管血液流の一 時的な破壊を最小限に止める。この製剤は組織病変に入り込み、それらの細胞内 顆粒（生きた微小粒子）からコントロールされた速度でリゾソーム性酵素および リンホカイン類（生物薬物類）を放出する、白血球（生きた巨大粒子）の形態学 および機能を模倣したものであるので、真正な“細胞性薬物担体”を含有するも のである。

本発明の結果、および既知の内皮および関連の結合物質にかかる生物学的機能お よび関係から、以下のごとく多価結合物質およびその様々な変形を含む本発明方 法の拡張は容易に行えると思われる。

これらの拡張は多価結合物質に関して次のように分類することができるであろう 。

第１群　固有の内皮に結合する以下の物質：１、ヘパリン ２、ヘパリンスルフェート ３、ヘパリン断片および抗トロンビン■と結合する合成類似体（ペンタサツカリ ド、ヘキササツカリド、オリゴサツカリド）４、　Ｕｌｅｘ　Ｅｕｒｏｐａｅｕ ｓ　Ｉ　アグルチニン（因子■抗原と結合）５、Ｆ　−ｎｅｔ−１ｅｕ−ｐｈｅ ６、　ｔ−ｂｏａ−１ｅｕ−ｐｈｓ−１ｅｕ−ｐｈｅ７、ベンゾイル−ｐｈｅ− ａｌａ　−ｐｒｏ（Ｂ　Ｐ　Ａ　Ｐ　、アンギオテンシン変換酵素と結合） ８、アンギオテンシン変換酵素の他の阻害物質１０、　バイオジェニックアミン 類、５−ヒドロキシトリプタミンおよびノルエピネフィリンの不活性な同種物質 １１、インシュリンおよび不活性なインシュリン類似体１２、トランスフェリン １３、　プロスタグランジンＥ、Ｆおよび安定な同種物質１４、組繊プラスミノ ーゲン活性化物質（ｔＰＡ）のペプチド基質および阻害物質 ］５．アルブミンおよびグリコシモル化アルブミン１６４カチオニノクフェリン １７、低密度リポタンパク（ＬＤＬ） １８　、　Ｈ１ｒｕｃｌｉｎ−阻害トロンビン（ドロンボデニリンと結合）１９ 、以下のものの表面炭水化物に対する抗体（およびそのレセプター分子） １、中央リンパ−モード内皮（ＭＥＬ−１４およびＭＥＣＡ−３６７Ａｂ’ｓ） ２、末梢リンバーモード内皮（ＭＥＣＡ−７９Ａｂ）３　膵内皮（ＭＥＣＡ−３ ２５） ４、器官特異的な毛細血管レベルの内皮（肺、肝、および脳内反抗体） ２０、負の電荷を有するポリサツカリドまたはオリゴサツカリド例えば ａ、テキストランスルフェート ｂ９デルマタンスルフェート Ｃ，フンドロイチンスルフェート、およびｄ、ヒアルロン酸 第２群　活性化され、病変を来しだ内皮と選択的に結合する物質１、Ｕｌｅｘ　 Ｅｕｒｏｐａｅｕｓ　Ｉ　アグルチニン２、ａ、フコース ｂ、フコシルアルブミン Ｃ，アルブミン−フコシルアミン ｄ、他のネオグリフプロティン類 ｅ、アミン化炭水化物 により可逆的にブロックされているＵ　ｌｅｘ　Ｅ　ｕｒｏｐａｅｕｓＩ　アグ ルチニン ３、活性化内皮と親和性を有する細胞付着物質：ｃ９Ｍａｃ−１ ｄ、Ｐ５Ｑ ４．インターロイキンＩ ５、以下の物質の抗体（およびそのレセプター分子）：ａ、内皮白血球付着分子 、ＥＬＡＭ（Ｈ４／１８およびＨ１８／７Ａｂ’ｓ） ｂ、内皮組織因子、ｔｆ Ｃ１内皮−結合フィビリンＤ−Ｄダイマーｄ、クラス■組織−合性抗原、Ｉａお よびＨＬＡ−Ｄｒｅ、Ｆｃレセプター ｆ、Ｍｏ３ｅ表面抗原 ｇ、因子■抗原 り、グリコプロティンｍｂ ｉ、グリコプロティン■８ ｊ、グリコプロティンＩＩ　ｂ／　ｍ　ａ複合体に、内皮の１１−ルセブタ− １、フィブロネクチン、ＥＤの“余分な領域（エキストラドメイン）”。

第３群　内皮子分子および内皮の活性化および病変によって暴露された構造と結 合する物質： １、　Ｒｉｃｉｎｕｓ　ｃｏｍｍｕｎｉｓアグルチニンＩ（基底膜分子と結合す る）２、以下の物質の抗体くおよびそのレセプター分子）：ａ、フィブロネクチ ン ｂ、フィブロネクチン断片（例えば単球走化性断片）Ｃ，ラミニン ｄ、細胞内付着分子（例えばＩＣＡＭ−１）ｅ、４型コラーゲン ｆ、基底膜分子（抗−〇ＢＭ抗体）。

本発明はまた、内皮結合リガンドそれ自身が外部のフコース誘導体の保護層に被 覆されている微小担体の形成に関するものである。

そのような誘導体には、例えば、ネオグリコプロティン、フコシルアルブミンお よびアルブミンフコシルアミンがある。そのような保護皮膜は、かかる組成の担 体を全身静脈注入した後の組織病巣への半選択的な襟的化を達成するのに利用し 得る。適切な等電点と熱力学的性質を有する表面ポリマーを選択することにより 、通常、腫瘍に供給している微小血管および慢性感染症のある部位に存在するｐ Ｈ低下部位で皮膜の選択的な除去（アンコーティング）が誘導され得る。

グリコプロティンや他の表面ポリマーはそれぞれ、それらの等電点て最低溶解１ ｉｔ−（ｐＫ　Ｉ　）を示しており、温度がｐＨがｐＫ１以下に低下するにつれ て溶解度が増す（表面皮膜の不安定さ）ので選択的なアンコーティングが可能と なる。従って、体内でのアンコーティングポリマーの至適等電点はおよそ血液の ｐＨ（７，３５）である。本発明の技術により、グルコン酸を生成しさらに低い ｐＨ値で表面のポリマーをプロトン化（プロトネート）して引金となり得る形の グルコースオキシターセを微小担体マトリックスに導入することによりそのよう なアンコーティングの速度を速めることができる。

これらの方法を用いる上で考慮すべき重要な点は粒子の迅速な細網内皮クリアラ ンスを最小にするという点である。ごく最近、小さい（約５０ｎｍ）粒子サイズ を維持し、粒子をテトロニアタブロックコポリマー９０８、ブルーロニノクフポ リマーＦ６８その他の、親水性−疎水性ブロック共重合体の組み合わせで被覆す ることにより、上記のことが容易になった。病変の微小血管における第２の選択 的なアンコーティング誘導法は、病変性分解酵素によって分解される表面コーテ ィングを利用することである。これらの酵素にはセリンエステラーゼ（例えば１ １組織プラスミノーゲン活性化因子および凝固カスケードの他の酵素）およびリ ゾソーム性酵素（例えば、酸エステラーゼおよびベータグルクロニダーゼ）が含 まれる。第３の選択的なアンコーティング法は保護表面の外的な物理的エネルギ ーに対する潜在的感受性に関し、例えば表面脂質の局所的な高体温による溶融、 高振動数の超音波による表面コーティングの硬度の破壊などによって起こる。

以下に示す内皮による包囲（エンベローブメント）−移送コーティングはあらゆ る合成および天然の、固形（マトリ、クス）および変形可能（液体および中空体 ）なミクロスフェア、リポソーム、人工膜、微細小庖および親水性および疎水性 マイクロエマルジョン等の経血管微小担体の使用に適用し得る、ここに、マトリ ックスおよび／または被覆材料は炭水化物、オリゴ−または単糖類、タンパク質 またはペプチド、脂質、アルキルまたはアルケニル鎖、あるいは両適合性（パイ コンパチブル）合成ポリマーからなるものである。本発明の薬物または診断薬担 体の態様は様々に変形可能であって、例えば：１）１本鎖ポリマー； ２）分子担体／集合体は内皮結合部分とプロドラッグとの結合のためのパックホ ーンを含有する分子微小集合体：３）複数のマトリ／ラス材料および／または一 連のコーティングを含むコンプレックス超分子担体、新規性の主たる基準は迅速 な包囲（エンベロープメント、それによって内皮を通過する間におけるスフェア の血管性破解および薬物の下流への放出を避ける）および担体の移送に必要な内 皮細胞プロセスの活性化のために、複数（２またはそれ以上）の内反結合部位が 担体材料または微小担体表面によって保証（確保）されているという点である。

本発明は、本明細書に示した材料のいずれかから微小マトリックスを形成するこ とに関する従来技術によっては、該従来技術がその材料について、全身静脈投与 後にインビボで複数の内皮結合を行い、迅速な内皮エンベロープを誘導し、さら に最初に遭遇する微小血管床での巨大分子、微小集合体および微小粒子の血管外 遊出（通過）の加速の産生、あるいは疾患の中心を準選択する可能性（提示した ように）を認識しておらず、文書で証明していない限り制限されるとは考えられ ない。

内皮−エンベローブメント担体は、例えば薬学的に許容し得る適当な安定化剤、 浸透圧剤、着色料、普香料、および血管内および洞内注入を可能にするための生 理的溶液を加え乾燥または液体状の製剤として製剤化し保存することができる。

本発明は特に、第１段階の外部からの体バリア（例えば胃腸管；口、鼻、直腸、 膀胱または膣粘膜；皮膚、冠、または強膜など）の有効な通過のために開発され た未来の装置（下記委照）における血管襟的相への適用を想定している。

本願は、付着性の表面を有する微小カプセル封入化（ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕ ｌａｔｉｏｎ）スフェア（小球）が内皮生物付着により、そして誘導された経内 及移動によって選択的に組織に取り込まれ、組織間質に入ることを文書で証明す るものである。また、本願はそのような担体によってコントロールされている薬 物が薬物担体の沈着と正確に比例して選択的に肺等の標的組織に沈着することを 文書で証明するものである。また、可溶性の薬物−担体複合体く正式に微小カプ セルに封入された薬物と同様に）が、薬物単独では取り込みがなされないような 状況の下で、比較し得る薬物の組織取り込みをもたらすことも確立された。さら に、同一または同様の担体が経上皮経路によって肺、胃腸管および膀胱に取り込 まれることも確立された。最後に、同一または同様の担体が腫瘍および肺感染病 巣に選択的に局所濃縮されることも確立された。

本願によって確立された薬物担体技術におけるユニークな側面はこれらの新規な 担体が薬物および診断薬が、特に薬物が非塞栓性（ノンエンボライジング、３− ４　ｕ＋ｎ以下）並びに塞栓性（５−２５０ｕｍ）の担体によってコントロール されている場合には、高効率の組織取り込みおよび局在化を与えという点である 。他のユニークな性質はこれらの担体が、ａ）水溶性の生物適合性および生物分 解性材料で形成されており、ｂ）疎水性担体（例えばリポソーム）では不可能な やり方で組織間質（および病巣ゲル）を通して広範に浸透（貫通）するという点 である。最後に、担体は基本的な態様として、それらの細胞性取り込み（内皮お よび上皮細胞）の初期部位と、炭水化物−炭水化物結合、並びにタンパク質−炭 水化物結合（およびペプチド−炭水化物およびペプチド−タンパク質結合も可能 ）に基いて多価結合し、担体および該担体にコントロールされた薬物を、誘導さ れた活性な内皮（または上皮）による包み込み（エンベローブメント）および経 内皮（または経上皮）移送せしめるようなやり方で相互作用する。

このことは、担体のトランスサイトシス（経細胞、０．Ｏ２ｎｍ〜１０ｕｓ以下 の試薬−担体複合体に専ら起きる一個の内皮細胞または上皮細胞を通過する工程 ）または担体の内皮（上皮）ｉ！１走性発育過度のいずれかによって専ら、大き い（１０１０１００ｕ粒状化薬物担体の包み込みが好適に導かれることを含む。

新規性に最小限必要なことは、以下のことを誘導するために、細胞（または近接 のマトリックス）との多値結合が起きなければならないという点であるコ ａ）薬物−担体カップルの活性な血管外遊出（または上皮輸送）、ここに、その ような輸送は被覆されていない（コントロールされていない）粒子または薬物− 担体複合体に比較して有意に促進されている；その促進は、微小血管流および／ または洞内液体流、気流、または小腸流（それぞれ、微小血管、膀胱、肺、大腸 、あるいは他の体温）の生体内条件の下、非塞栓性並びに塞栓性の粒子（コンプ レックス）の経細胞輸送が内皮／上皮接触の１２分以内に完了する（通常、５分 以内）程度であり、さらに ｂ）担体は、それが自然に輸送された単純なホルモン、タンパク質、ペプチド、 および２個の低分子量薬物のハイブリッド；ンジュゲートからそれらを区別する ために薬物の複数（少なくとも２個）の分子の供給をフントロールしなければな らない。

この一部一継続出願は最初に提示された実施例の拡張およびある種の薬物−担体 システム（特にヘパリンーアンホテリシンミクロスフェア）が加速された経内反 移動によって正常組織に一次取り込みがなされるばかりか二次的に、組織（肺感 染症、および肺、肝、および皮下移植腫瘍）を含む疾患の中心に局所下濃縮され ることを示すものである。そのような病変への濃縮は以下の点に基づいている： ａ）ヘパリンおよびヘパリン断片と、構成的内皮レセプター（これには、抗トロ ンビン■、トロンボモデニリン、ヘパリンコファクター■その他が含まれる）と の初期結合、ｂ）以下の１またはそれ以上からなる、ヘパリン（またはヘパリン 断片）の、疾患によって暴露されたく誘導された）部位（組織成分）への同時的 または逐次的な結合：内皮上血小板ファクター４（およびその他）、内皮下フィ ブロネクチン分裂産物（例えば３３，０００ダルトンの蛋白分解断片）、■型コ ラーゲン（およびそのサブユニット）、Ｉ型コラーゲン、ラミニンおよびその他 、およびＣ）最後に、形質転換された、悪性細胞による負電荷を帯びた天然のポ リカーボハイドレート（ポリ炭水化物）、とりわけ、ヘパリン、デキストランお よびアンホテリシンＢまたはヘパリンーシスープラチン複合体を含有する修飾さ れたデキストランミクロスフェア類、の活性化細胞による選択的な細胞性の取り 込み。この細胞の生物学的取り込み機構は肝細胞腫細胞に関して証明されており 、このことは他の形質転換された、および悪性細胞においても起きると予想され る。

好ましい実施態様ではヘパリンによる表面被覆が記載されているが、ヘパリン断 片、トリドデシル・メチルアンモニウム・クロリド・ヘパリン（以後、ＴＤＭＡ Ｃヘパリント呼称）、デルマタン・スルフェートおよびその断片、および他のグ リコースアミノグリカン（ＧＡＧ’ｓ）などの他の担体（および表面被覆および 薬物−複合体形成物質）も構成的および誘導されたヘパリンコファクター■と結 合する。デルマタン・スルフェートの８−１２ユニット断片は活性化なしにヘパ リン・コファクター■と結合する。固有のヘパリンとは異なり、デルマタン・ス ルフェートもその８−１２ユニット断片も構成的な内皮表面凝固物質（コアギニ ラント）、抗トロンビン■を阻害しない。

このことは、より短いヘパリンの半合成断片についても正しい。従って、デルマ タン・スルフェートおよび、ヘパリンおよびデルマタン・スルフェート両者の短 い断片は固有のヘパリンの抗凝固活性（ヘパリンが薬物ミクロスフェアおよび複 合体に導入されている場合には、その最小の抗凝固活性でも許容し得る低さであ る）よりも低い抗凝固活性を有すると予想される。

さらに、内皮およびパラ内皮（内皮周囲）レセプターは選択的な器官取り込みお よび第２の疾患領域（中心）への組織局在化に有用と予想される。これらには、 以下のものが含まれる：インターロイキンＩ（および他のサイドキンおよびリン ホカイン）によって誘導される内皮付着決定基、血小板活性化因子（類ＸＰＡＦ ’ｓ）、表面凝固因子１１ａ、Ｖａ、■ａ、　ＩＸａ、　Ｘａ、℃ａ１フォン・ ライリブランド・ファクター（ｖＷＦ）、および内皮組織因子：および種々の疾 患工程で暴露された■型コラーゲン、Ｉ型コラーゲンおよびフィブロネクチン断 片（これは悪性膿瘍細胞の付着を促進し得る）。さらに、相補的な物質が１また はそれ以上の先の病変部位への結合（および選択的な局在化）のための表面コー ティング（コンプレックス）の形成に有用と考えられる。これらには、以下のも のが含まれる：ペプチド−■（腫瘍細胞への抗−付着物質）：モノクローナル抗 体ＡＨＢ−２（およびそのＦａｂ断片）およびフィブロネクチン−結合ポリペプ チド（後２者はフィブロネクチンの３３，０００ダルトンの蛋白分解断片と結合 している）；フィブロネクチンの他の断片と結合する物質；フィブロネクチン自 身：フィブロネクチン誘導体；および他の相補的物質：薬物；結合物質およびそ の誘導体。

薬物担体（とりわけヘパリン−アンホテリシンＢミクロスフェア）の上皮取り込 みについて、本出願でさろに試験し、気管内、胃腸管、および嚢内（膀胱）経路 から取り込まれることが分かった。そのような上皮取り込みを、本出願に記載の 薬物担体に僅かに修飾を施したミクロスフェアについて試験する。これらの処方 は以下の通りである・酸化鉄イオン（Ｆｅａｒ４）を捕獲（エントラップ）した ミクロスフェア：およびヘパリンマトリックスを有するミクロスフェア、および ヘパリン被覆デキストランおよびアルブミンマトリックスであって捕獲された鉄 イオン（Ｆｅ″３）を含有するもの。以下に示す上皮取り込みの新しい例は生物 付着薬物担体の投与を気管内経路（吸入）、胃腸管経路（経口および直腸）、嚢 経路（膀胱およびプロストレイｈ　（ｐｒｏｓｔｒａｔｅ））、胃腸管取り込み を伴う経口ルートで投与すると、全身分布（血管流による）され、さらに二次的 に器官および病変に担体が標的化という根拠を提供するものである。これらの例 は、薬物担体を直接、他の体腔、例えば腹膜、尿管、胸膜、脳およびを椎の室、 硬膜上または下空間、膿瘍および膿瘍、皮下組織、筋肉、骨の延髄腔および関節 空間に注射することからなる、薬物担体の投与方法の理論的根拠を提供するもの である。

内皮取り込みは新規な生理的製剤、即ちヘパリンとシスーブラチン（抗腫傷薬） との巨大分子複合体（コンプレックス）について記載されている。この薬物と担 体との新規な複合体は、複合体形成された薬物を血管にポーラス注入することに より、通常、薬物のみでは起きる肝臓取り込みがないので、肺に選択的に高効率 で取り込まれることが本願明細書に記載されている。ヘパリンーシスーブラチン による内皮損傷の回避（さもなくば高毒性の１０ｍｇ／ｚ６シスーブラチンにお いて）も記載されている。この新しい結果は、既存の薬物をヘパリンおよび関連 のキット（手段として）を用いた再製剤化、これは病院薬剤師によって患者に投 与する直前に行うことができることであるが、についての論拠を確立したもので ある。この新しい試みは下肥のごとく、非塞栓性担体によってコントロールされ た薬物の局所的な組織（病変）への取り込みを可能にするものである。

ａ）静脈内投与による肺（高効率）への供給および全身の病変部位（中程度の効 率）への供給：または ｂ）肝臓、腎臓、脳、骨盤、四肢および他の体部位への選択的な動脈潅流（高効 率の供給）。

本願明細書には、これらの親水性薬物−担体の二次的な組織への＋透がヘパリン −被覆ミクロスフェアについて、正常な標的組織＜間質、リンパおよび上皮）で 起きることが記載されている。本願には、脂質マイクロエマルジョン、リポソー ムおよび他の疎水性担体と異なり、本発明の親水性スフェアが膿瘍間室および突 発性の肺炎病巣ゲルに広範に浸透し、両者とも、これら病巣の外部に広がる縁お よび内部の壊死中心に到達するという一般原則を確立した追加の例が示されてい る。このことは薬物担体およびそれらに捕獲された（コントロールされた）薬物 の病変漫畠、細胞（微生物）アクセスおよび取り込みの改善に関する論拠を与え るものである。隔離された部位に存在する膿瘍細胞および微生物への薬物接近が 改善されると予想される。

さらに、本発明は、アンホテリシンＢのような疎水性薬物をそれ自身はほとんど 浸透しないボロキサマー（好ましくは、ブルーロエックス、Ｆ２Ｏ３またはＦ１ ａ、あるいはブルー口二ノクスＦ１２７またはＬ６１、あるいはテトロニック９ ０８）で予備（ブレ）乳化し、次いで、これらの放出制御されたサブ粒子（サブ パーティクル、ナノ粒子またはエマルシヨン）を大きい、それ自身は広範に浸出 する親水性のマトリックス担体（例、ヘパリン）に微小カプセル封入（マイクロ エンカブサルーション）することで間質組織および病変中心への広範な浸透が達 成されることを示すものである。そのような製剤は新規であり、人工的な白血球 と考えることができる。外部のマクロマ）ＩＪフックは全白血球の役割（即ち、 粒子が内皮／上皮に生物付着し初期バリアを横切って移動し間質に浸透する）： およびサブ粒子（内部す７粒子、エマルジョン、またはコンプレックス）が白血 球内部の顆粒の役割を果たす（即ち、最終的に間質マトリックスまたは細胞標的 に付着し、薬物をコントロール下に放出する）。これらの薬物担体は、多段階（ マルチステージ）の微小粒子（コンプレックス）であり；それらの初期（体）生 物分布および次期（局所組織）分布の両者を支配する機能的に配向した表面コー ティングを有するので、新規である。それらの明細および試験により、通常、そ れ自身ではこれらの複数工程を達成し得ない薬物くおよび診断薬）の生体分布、 局所取り込み、組織浸透、およ・び細胞（または微生物）アクセスおよび取り込 みの改善についての論拠が確立される。

本願の元の出願（Ｓｅｒｉａｌ　Ｎｏ、　０３３．４３２）および本願は、内部 に捕獲された内容物が外部のヘパリンおよびヘパリン−被覆デキストラ　。

ンのマクロマトリックスから放出された後（迅速または緩慢に）、薬物（および 診断薬）を内部に捕獲したデボート、経時放出薬物（例えば、アンホテリシンＢ −プルロニックＦ６８およびアンホテリシンＢ−シクロデキストリン複合体）の サブ粒子（ナノ粒子、エマルジョンコンプレックス）、からの薬物（診断薬）放 出（又は生物利用率）における二次コントロールに関する新規な理論を提供する ものである。

これはまた、例え外部マトリックス担体がその最初の標的部位から再度拡散する としても、内部微小粒子を標的組織（細胞）に閉じ込める柔軟性を有することを 予想させるものである。

急速に増殖し、あるいは分割しつつある細胞への最終的な薬物取り込みは内部（ または外部）薬物粒子を、それ自身は大多数の非常に急速に増殖しつつある固体 腫瘍（感染または膿瘍）の下方領域によく侵入することがないトランスフェリン 、フェリチン、または抗腫瘍抗体（または抗体フラグメント）と−緒に製剤化す ることにより増大し得ると考えられる。本発明の微小担体によって達成されるゲ ル浸透の改善から腫瘍グリコカリクス、肉腫のボニイ（骨の多い）サブ成分、骨 髄炎、歯周炎および他の微生物感染症を引き起こすスタフィロコッカスまたは他 の微生物により付着ポリマーとして合成されるポリグルコースハイドロゲル；肺 および脳の浸潤性アスペルギルス症の間に産生されるタンパク性微小血栓；急性 関節炎を引き起こす増殖性パンヌスの軟骨性および骨化成分；および他の疾患過 程に伴うゲル物質への浸透が予想されている。最後に、これらの技術はヒトおよ び動物の卵子および精子、並びに細菌および酵母に存在する浸透性細胞表面（表 皮）炭水化物のインビトロへの適用に向けても想定されたものである。

本発明は新規な捕獲（エントラノブメント）された物質であって、ａ）全身注射 の後、肺に選択的に取り込まれるＴＤＭＡＣヘパリンで被覆された脂質マイクロ エマルジョン中のアンホテリンンＢ（上記した経路／方法で他の器官／病変部位 にも取り込まれると予測される）、および ｂ＞ｍ準ヘパリン、ＴＤＭＡＣヘパリンまたはヘパリン断片、近縁のグリコース アミノグリカンおよびその誘導体で被覆し、修正し得るアルブミンミクロスフェ ア中の生物変調タンパク質、インターロイキン２を提供するものである。

これはマイクロエマルジョン、リポソーム、およびポリラフティックおよびポリ グリコリックポリマーのミクロスフェアなどの従来の疎水性担体のヘパリンによ る改良および局在化に関する新規な根拠を提供するものである。本発明はまた、 ３種の新規分類の生物薬剤二組換えタンパク質、ペプチドおよびＤＮＡ／ＲＮＡ ベクター（遺伝性疾患の再構成のための）、の選択的な局在化を予想したもので ある。最後に、この新規な薬物担体技術は、インビボでの特定部位での全細胞移 植に有用であると考えられる。そのような標的化のための細胞の調製は、その１ 成分は（例えばヘパリン、フィブロネクチン、ラミニン、モノクローナル抗体の Ｆａｂフラグメント等）移植可能な細胞に非細胞毒性的に結合し、もう１成分（ ａ狂的に同一成分）は標的内皮（上皮）と多価付着する２機能性付着剤を用いて 行うことができると予想される。高効率移植はこれらの細胞を標的器官、組織ま たは細胞に至る血管（または腔内）経路に直接導入することで達成されると考え られる。

本発明は本明細書記載の方法を用いて以下の疾患（および薬物の）の治療（およ び局在化）の改良に有用と予想される。がん（抗がん剤、生物学的応答の改良剤 、とりわけＩＬ−２およびＴＮＦ、放射性増感剤、過フッ化炭化水素、および高 体温増強剤）：腫瘍および細菌性転移の予防（デボートヘバリンそれ自身、新規 な抗転移ペプチド、ペプチド−■など）：広汎性感染症および膿瘍（抗生物質、 抗真菌および抗ウィルス剤）：免疫抑制患者および腫瘍患者における深部肺感染 症および中枢神経系感染症（アミノグリコシドおよびセファロスポリン抗生物質 、アンホテリシンＢおよび他の抗真菌剤、および抗ウィルス剤）；尿路膀胱また は他の部位の慢性感染症／炎症（ヘパリンのデボート製剤、デルマタンスルフェ ート、またはベントサンポリスルフェート、ガングリオシド、ハブテンおよびペ プチド遮断剤、およびその誘導体）；多発性硬化症；糖尿病性血管障害、急性お よび慢性関節炎（ベニンラミン等の銅キレート剤ニステロイド、およびステロイ ド類似体）、心筋、脳、腸および四肢の梗塞（好中球および血小板の付着を阻害 する抗−付着剤、および遊離ラジカル捕捉剤）、散在性の血管向凝固（血小板活 性化因子、血小板付着およびフィブリン重合の阻害物質）：アテローム性動脈硬 化症（デボートヘパリン、およびヘパリン＋プロブコール等の抗脂血症剤）；急 性冠動脈または脳血栓症（組織プラスミノーゲン活性化因子−一静脈内または選 択的動脈潅流による投与）；遺伝的および変質疾患、特に肝臓、膵臓、および脳 （適当な分解酵素、膵臓島細胞、脳下垂体および脳細胞、およびトランスフェク ション用遺伝子ベクター）−子宮内膵炎（ダナゾール、抗炎症剤、および抗血管 増殖剤）；不妊症（インビボおよびインビ）ｏ妊娠のための精子付着剤：同種移 植拒否反応の防止、特に腎臓、肝臓、骨髄および肺（ステロイド、免疫抑制剤、 サイクロスポリンＡその他、抗リンパ球抗体）；急性および慢性喘息（吸入投与 されるデボート抗喘息剤）：肺気騰、予防および治療、ならびに喫煙による内部 流による肺損傷の防止（ペプチドその他の好中球エラスターゼ遮断剤、抗炎症剤 、血小板活性化因子阻害剤、遊離ラジカル捕捉剤、およびその誘導体−一吸入、 経口、静脈内投与、または／ガレ、ト、シガーまたはバイブタバコの添加物とし て投与）。

本願の上記生物付着担体は高毒性の薬物（ある種の抗腫瘍剤、抗真菌剤、抗生物 質および多くの抗ウィルス剤）：高度に不安定な薬物（ペプチド、ホルモン、組 換えタンパク質生物変調剤、およびその類似体）；分子量が大きいとか、体内に 競合レセプターが散在しているために経験的に生物分布が不適当である、または 組織に接近し難い物質（リンホカイン、サイドキン、インターフェロン、および 他の生物学的応答改良剤、および遺伝子ベクター）；抗付着医薬くかん細胞転移 阻止、アテローム性動脈硬化症予防、および白血球および血小板の血管内皮への 付着阻害のためのデボート製剤）；並びに最も最近では生産コストが非常に高く 自由に循環させる方法では投与することが不可能な、大多数の新規な組換え生物 医薬（全部の新規な組換えタンパク質、ペプチドおよび遺伝子ベクター、一般に 骨髄に直接作用するものを除く）の供給に好適であると考えろれる。

さらに、これろの新規な製剤および細胞の生物付着−取り込みを容易にする方法 はインビトロでの精子、卵子、細菌、酵母その他の細胞マイクロインジェクショ ンに適用可能である。想定される物質には薬物、ペプチド、タンパク質、金属、 診断用プローブ、トランスフェクション用遺伝子ベクター、突然変異プローブ、 全精子、アルブミン濃度勾配法で選別された好適な性の精子、その他、ノンフユ ーシケニノク（ｎｏｎｆｕｓｉｇｅｎｉｃ）な条件下（例えば、フユニジゲニ、 りなウィルスまたはポリエチレングリコールなどの化学物質の非存在下）で注射 する（理想的には）ことが必要な物質が含まれる。この方法は、ヒトおよび動物 の両者において、インビトロでの不妊症、および組換え遺伝子トランスフェクシ ョンの分野にも関連すると考えられる。

以下の実施例は上記の発明を例示するものである。

実施例１ アセトン−安定化および熱−安定化ヘパリン微小球および分子微小凝集体の調製 肉牛の肺ヘパリン１００〜２００ｍ９［１５２ユニツト／巧、アノプジッン・コ ーポレーション（ＵｐコｏｈｎＣｏ、）コを蒸留水０．３〜０．４ｃｃに溶解し 、１〜５分間強く渦動混合することによって、この溶液を綿実油［サージェント ・ウェルチ（Ｓａｒｇｅｎｔ　Ｗｅｌｃｈ）、５Ｃ−１１６１２］６ｃｃに乳化 した。この最初のエマルジョンを、１１４〜１２２℃に予熱して撹拌した綿実油 １９ｃｃに滴下した。この懸濁液を高温で１０分間維持し、次いで、撹拌し続け ながら室温に冷却した。

別に、２２℃で、同量の撹拌した綿実油にヘパリン懸濁液に滴下した。油相を抽 出するために（そして、非熱処理の調製物中、ヘパリンの安定な結晶化を行うた めに）、この油懸濁液を、アセトン中０゜１％トウィーン８０　［（Ｔ　５ｅｅ ｎ　８０　）、シグマ・ケミカル・コーボレーシ＊　７（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍ ｉｃａｌ　Ｃｏ、）］の混合物３０ｃｃ（油の容量の５倍）に滴下した。微小球 −アセトン懸１１ｉａを１．２５０Ｘ９で５分間遠心分離し、小球を沈降させた 。微小球をアセトン中０．１％トゥイーン８０でさらに３回（合計容１２５ｃｃ または油の容量の４倍）抽出した。得られた微小球を凍結乾燥するか、またはア セトンＱ、５ｃｃ中、２％（ｗ／ｖ）トウィーン８０と完全に混合して２２°Ｃ で２４時間風乾した。両方法とも、水または等張食塩水中で安定な懸濁液であり 、かつ光顕微鏡で測定して平均粒径７〜５０マイクロメーター（μｍ）を有する ヘパリン微小球が得られた。大きさは、上記油乳化工程におさらに標準超音波発 生器および特定のマイクロチップ［ヒート・システムズ・インコーホレーテッド （Ｈｅａｔ　Ｓｙｓｔｅｍｓ、　Ｉｎｃ、）］を用いて、２０，０ＯＯＨｚで５ 分間、最初の油エマルジテン６ｃｃを音波破砕することによる以外は、前記工程 における記載に従って、平均径０．１〜０．２μｌのヘパリン微小凝集物を調製 した。

実施例２ 捕獲したアンホテリシンＢを含有するヘパリン微小球の調製ａ、アンホテリシン ーシクロデキストリン複合物の捕獲デオキシコレート（ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔ ｅ）を含有していないアンホテリシンＢ２０π９ニイー・アール・スクイブ・ア ンド拳すンズ拳インコーボレーテ、ド（Ｅ、Ｒ，５ｑｕｉｂｂ　ａｎｄ　５ｏｎ ｓ、Ｉｎｃ、）］およびγシクロデキストリン［ポリサイエンシズ・インコーホ レーテッド（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ、　１ｎｃ、　）］３１　＊９を、ジメ チルスルホキシド［シグマ・ケミカル・コーポレーション］０．４ｃｃにモル比 １；１で溶解した。肉牛の肺ヘパリン（実施例１と同じ）４９所を蒸留水０．８ ｃｃに溶解した。２つの溶液を混合し、次いで、強く渦動混合し続けることによ って綿実油６ｃｃに迅速に乳化した。少量を迅速に取り出しく薬物−シクロデキ ストリン複合物の部分的であるがコントロール可能な相分離による）、実施例ユ の非熱処理微小球の調製に関して記載された抽出方法にしたがって、アセトン中 ０．１％トウイーン８０に滴下した。捕獲された出発薬物の割合は７０％であり 、小球中の最終薬物含有量は１４％（ｗ／ｗ）であった。水および等張食塩水中 での再懸濁の結果、２種類の大きさの粒子個体群が得られ、この主要な分画（質 量的８５％）は直径７〜２５−の比較的大きい微小球からなっており、比較的小 さい分画（質量的１５％）は直径０．３〜１．０μ次の比較的小さい微小球から なっていた。これら２つの分画をミクロボア濾過によって迅速に分離した。比較 的大きい小球を顕微鏡で観察すると、前記の比較的小さい粒子の大きさと同じ大 きさの黄色の屈折性顆粒（ｒｅｆｌｅｃｔｉｌｅ　ｇｒａｎｕｌｅｓ）で覆われ ていた。凍結乾燥した小球（混合したサイズ分画）の水懸濁液を遠心分離すると 、完全に沈降した。粒子と一緒に沈降したアンホテリシンＢ（黄色）の分画を水 に再懸濁した後、経時的に比色評価した結果、アンホテリシンＢの制御放出のｔ ４は約３日であった。

ｂ、プルロニックＦ６８ブロノクフポリマーによる予め乳化されたアンホテリシ ンＢの捕獲 デオキシコレートしていない天然アンホテリシンＢ（イー・アール・スクイブ・ アンド・サンズ・インコーホレーテッド）１００ＩＩＦおよびプルロニックＦ６ ８ブロックコポリマー［ポリオキシプロピレン−ポリオ牛ジエチレン、グリーン ・クロス・コーポレーション（Ｃｒｅｅｎ　Ｃｒｏｓｓ　Ｃｏｒｐ、　）］　１ ２　ｍｙを蒸留水ｌｃｃに懸濁し、１分間超音波処理して（実施例１のとおり） 、直径０１〜５ｕｍの範囲の粒子サイズを有する最初のエマルジョンを得た。こ の懸濁液を、暗所で２２°Ｃで一晩撹拌し、次いで、さらに１分間超音波処理し た。得られたエマルジョンは非常に小さく、直径０．１〜０．８μｌの範囲の粒 子サイズを有していた。比較的大きいく非被覆の可能性あり）薬物粒子を沈降さ せるために、このエマルジョンを５０’Ｏｘ９で２分間遠心分離した。上清（微 細なエマルジョン、全体の約３０〜５０％）を取り出し、これを次のヘパリン微 小球における捕獲に用いた。これは、５分間撹拌しながら回収可能な上清（微細 なエマルジョン）０．９ｃｃに肉牛の肺ヘパリン（アップジョン・コーポレーシ ョン、実施例１と同じ）７０即を添加してヘパリンの完全な溶媒和物を得、得ら れた混合物を油に添加しく好ましくは室温で、または１１４〜１２５°Ｃで１０ 分間、付加的な安定化のため）、渦動することによって乳化し、２２℃でアセト ン中０．１％トゥイーン８０中に撹拌することによってエマルジョンを迅速に安 定化し、そして実施例１と同様に処理することによって、行われた。得られた微 小球は、渦動混合の時間に応じて平均直径３・”１５μπを有していた。比色的 に評価すると、捕獲された薬物の割合は７０％以上であり、最終薬物含有量は２ ０〜３０％（ｗ／ｗ）テあツタ。

主要マトリックス成分としてデキストランＴ７０［ファルマンア・ファイン・ケ ミカルズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）］を用い、表 面被覆剤としてヘパリン（１０重量％）を用いた以外は、上記のとおり、対応す る微小球を調製した。これらの小球に関して、以下の実施例３に記載のとおり（ 「表面被覆剤」と記した本明細書の位置で始まる）、表面被覆剤を添加した。

実施例３ デオキシコレートしていないアンホテリシンＢ（イー・アール・スクイブ・アン ド・サンズ・インコーポレーション）２０ｕおよびγシクロデキストリン３０Ｍ ９をジメチルスルホキシド（シグマ・ケミカル・コーポレーション）０．４ｃｃ に溶解した。別に、ジメチルスルホキシド０１７５ｃｃにデキストランＴ７０（ ファルマシア・ファイン・ケミカルズ）４９１を溶解した。２つの水性懸濁液を 混合し、綿実油（サージェント・ウェルチ、ＳＣ１１６１２）７ｃｃに迅速に乳 化した。この油懸濁液をアセトン中０．１％トウィーン８０（Ｔ−Ａｃ）３５ｃ ｃに、迅速にではあるけれども滴々滴加した。１２５０Ｘ９で５分間微小球を沈 降させた。このペレットを０．１％Ｔ−ＡｃｌＯｃｃでさらに１回抽出し、２％ Ｔ−Ａｃ０．５ＣＣに再懸濁し、２２℃で４５〜６０分間乾燥した（アセトン臭 気がもはや検出されなくなるまで）。以下のように璽表面被覆剤」を調製した。

肉牛の肺ヘパリン（アップジョン・コーポレーション、前記と同じ）１０ｙｉｒ を蒸留水０゜５ｃｃに予め溶解し、乾燥小球に加えた。予め結晶化したデキスト ラン小球の表面にヘパリン被覆剤を塗布するため、これに綿実油５ｃｃぐ水の容 量の１２倍）を添加し、穏やかに渦動混合することによって墾濁液を乳化した。

撹拌した０　１％Ｔ−Ａｅ３ＱＣｃに滴下することによって、このエマルジョン をもう１度安定化させ、１２５０Ｘ＠で５分間微小球を沈降させた。各々１０５ ９および６ｃｃのＴ−Ａｃでさらに３回抽出した。このベレットを２％Ｔ−Ａｃ ０．５ｃｃに再懸濁し、２２°Ｃて１６時間風乾した。捕獲された薬物の割合は ６５％であり、最終薬物含有量は１２重量％であった。微小球の大きさは、渦動 混合の時間に応じて０．５μｌ〜３０ａｚの範囲であった。

実施例４ クチンは、ＩＪｌｅｘレクチンがガラクトースおよび３，６−アンヒドロガラク トースモノマーからなるわずかに架橋した多糖類のアガロース小球（直径２５〜 ７５μｍ）に安定なエーテル架橋によって結合した、ゲル懸濁液状態の市販品を 入手した［ベクター・ラボラトリーズ（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅ ｓ）、バーリンガム、ＣＡ］、入手した時、結合許容量（ｂｉｎｄｉｎｇ　ｃａ ｐａｃｉｔｙ）はゲルｌｃｃあたりフコンルグリコプロテイン２．５ｍ９であり 、懸濁液は、１０裏Ｍフ；−ス、全てのＩＪｌｅｘ結合部位を飽和するのに最も 特異性の高いシコガーハブテンを含有していた。

ａ、ハブテン−ブロック化（フコース−結合した）結合部位を有する小球の注射 用溶液の調製 未洗浄ゲル０．２５ｃｃｌ；：０．２Ｍリン酸緩衝化０．１５Ｎ食塩水［グラン ド・アイランド・バイオロジカル・コーポレーテノド（Ｇｒａｎｄ　１ｓｌａｎ ｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｏ、ル０．７５ｃｃを添加して、直接静脈内注射 のための充分に薄いゲル懸濁液を得たく下記参照）。

ｂ、非ブロック化（有効な）結合部位を有する小球の注射用溶液の調製 ０．０２Ｍリン酸緩衝化０．１５Ｎ食塩水各０　、８　ｃｃと一緒に２５００Ｘ ９で遠心分離することによって、ゲル０．２５ｃｃを３回洗浄し、ｔＪ　ｌ　ｅ ｘ結合レクチンに最初に結合したフコース・シュガー・ノ＼ブテンのほとんど全 てを除去した。得られた小球のベレットを、次の静脈内注射のために全容量０． ８ｃｃに懸濁した（下記参照）。

実施例５ 実施例１に従って調製したヘパリン微小球および微小凝集物のインビボ注射 全インビボ試験に関して（この実施例および下記実施例６）、固めた（遠心分離 した）容量が、懸濁液（小球および溶液）中の最終容量が２０％となるような密 度でリン酸緩衝化食塩水（実施例４による）に微小球を懸濁した。充分に懸濁し た物質０．１２５ｃｃを注射することによって各動物に同量の投与を行った。Ｃ ＢＡマウスへの静脈内注射によって肺標的化（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）を行い、ス ブラーギコードウレイ種ラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｖｌｅｙ　ｒａｔｓ）へ の頚動脈注射によって脳標的化を行った。小球の器官標的化、包囲および血管外 移動の分析は、１）注射後２．５．１０．１５および２０分後に代表的な被験動 物を殺し、１０％緩衝化ホルマリン中で脳組織を固定するか、または２０ｃｍ水 柱に等しい圧力で気管内に１０％カーソン緩衝化（ｐＨ７，４）ホルマリンを注 入することによって固定した大きさに肺を膨張させ；２）光学および電子顕微鏡 用に固定化組繊細片を処理し：３）ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆　Ｅ　 ）、過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）、ならびにレチクリン組織化学的染色法によっ てこれら細片を染色し；厚さ４μＲ（以下）の光顕微鏡用細片に（ミクロトーム で）切断し；５）血管、脈管周囲構造、肺の間隙および空間（ａｉｒｓｐａｃｅ ｓ）について、小球の数および顕微鏡位置、ならびに微小面管周皮細胞（星状細 胞）処理（脳の微小血管と接触する）および脳組織適性について、処理した細片 を体型測定的に分析することによって行った。

本明細書に示す組繊細片の全ての図面中の記号は、Ｍ＝微小球、■＝微小血管、 Ａ＝空間、ｅ＝内皮膜、およびｎ＝内皮核である。

ａ、ヘパリン微小球（０，１２５ｃｃ＞の静脈内注射およびＣＢＡマウスの肺に おける局在化 第１図はＰＡＳで染色した肺組織細片であり、実施例１の非熱処理アセトン安定 化ヘパリン微小球の静脈内注射後２〜５分後に殺した被験マウスの代表例である 。中央には、腺毛細血管の微小血管腔内に位置しており、２つの核（ｎ）が直接 隣接しており、小球を覆っている内皮細胞膜（ｅ）によってすでに完全に包囲さ れている直径約２０μｌの代表的なヘパリン微小球（Ｍ）がある。上部の右コー ナーには腺毛細血管（Ｖ）の外に部分的に移動し、小球の８〜９時の位置で（ｅ 、小球の４〜６時で）内皮被覆を失い始めている内皮皮膜微小球（Ｍ）がある。

第２図はＰＡＳで染色した肺組織細片であり、第１図におけると同じヘパリン微 小球の静脈内注射後１０分後に殺した被験マウスの代表例である。中央には第１ 図におけると同じヘパリン微小球（Ｍ）がある。中央には、隣接する空間（Ａ） 内の腺毛細血管（Ｖ）の外にほとんど完全に移動した微小球（Ｍ）がある。内皮 膜（ｅ）および核（ｎ）はまだ微小球表面に存在している。共に脈管外に溢出す る赤血球細胞または血清タンパク（ＰＡＳで極度に染色した）の非存在によって 証明されるとおり微小血管に対する毒性は最小ないし全くない。第２の内皮被覆 された部分的に脈管外にある微小球が右の下方にある。

実施例１のヘパリンおよびヘパリン被覆製剤の全ての比較的小さい（非塞栓形成 ）微小球および微小凝集体が、同様に包囲され、かつほぼ同じ動力学の脈管性移 動されるのが観察される。

第１表に、静脈内注射後１５〜２０分後の直径４〜１５μ友の肺内の微小球の割 合および位置について記す。

第１表 肺において同定された　脈管外位置における小球の型　注射投与量の概算割合（ ％）小球の割合（％）１、ヘパリン　３５　８５ （アセトン） ２、ヘパリン　４０　８０ （加熱処理） ３、　プレインアカロース寡　１０　２０宜残存する静脈内小球の多くは血清ア ミラーゼ消化によって分解され、これら小球の小さいフラグメントだけを同定す ることができた。

これら組織学的および体型測定の結果、ヘパリン微小球の表面は迅速に（２分以 下）、小球の内皮包囲（壁でさえぎる）の結果生じる部分的および／または完全 な内皮被覆を起こし、したがって、（脈管空間の外へ移動する前の期間であって も）脈管の区画からそれらを機能的に移動させることが立証された。これは小球 の脈管的分解を遅くし、無傷の小球の脈管性移動を促進しく１５〜２０分以内に 大部分完全に）、組織（間隙の）区画および気道において局在化された小球の割 合を非常に増加する。

比較的大きいヘパリン微小球（直径２５〜７５μ肩）は、下記実施例６の第２表 に示すウレノクス１小球のものと同一の肺動脈捕捉および脈管性移動を経る。

ｂ、！１動脈へのヘパリン微小球の注射およびスブラーギュードウレイ種うット 脳における局在化 実施例１からのヘパリン微小球（０，２５０ｃｃ、直径５〜１５ｇｍ）を頚動脈 に注射し、ラットを１５分目に殺した。１〜７の小さい（０，２〜３．０）ＰＡ Ｓ−陽性粒子が、大脳および小脳皮質ならびに脳の深核（ｔｈｅ　ｄｅｅｐ　ｎ ｕｃｌｅｉ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｒａｉｎ）の微小血管の中および周囲で観察され た。血管の約５０％が遊出粒子に関して陽性である。

注射後１５分目に、これらの粒子は、脳細動脈および毛細血管と隣接している開 成細胞の突起（ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ）に沿って主に存在した。（開成細胞は脳実 質中の血管から栄養素の輸送において含まれると考えられる。）比較的少数のＰ ＡＳ−陽性粒子は、脳組織適性の細胞外区画内の開成細胞から非常にはなれた距 離で同定された。体型測定的に、注射した微小球の少なくとも１５％か１５分目 に脳組織に局在化された。

実施例６ 実施例１で調製したし；ｌｅｘ　Ｅｕｒｏｐａｅｕｓ　Ｉ　レクチン微小球のイ ンビボ注射 Ｕｌｅｘ　Ｅｕｒｏｐａｅｕｓ　Ｉ　レクチン微小球（０，１２５ｃｃ）を、Ｃ Ｂ　Ａマウス肺における局在化のために静脈内注射した。

第３図はＰＡＳで染色した柿組繊細片であり、実施例４のフフースープロ、り化 したＵ　ｔｅｘ　Ｅ　ｕｒｏｐａｅｕｓアグルチニンＩ−被覆小球の静脈内注射 後２〜５分後に殺した被験マウスの代表例である。比較的大きい微小球（Ｍ＞が 血管空間（Ｖ）中（左中央）にあり、内皮膜（ｅ）および核（ｎ）によってほと んど完全に包囲されている。比較的小さい微小球（＼１）が（右中央に）あり、 内皮包囲され、かつ空間（Ａ）内へはとんと完全に脈管性移動されている。しか し、それが遊出した小さい血管の基底膜に（ｔ　＠　Ｌ、たままである。内皮膜 （ｅ）の残存部は何着した表面でまた被覆したままであるが遊離した表面から損 失されている。ヘパリンとＵｌｅｘ　ｌ微小球との組織学的比較は、遊出しだＵ ｌｅｘ　Ｉ小球の比較的高い割合がアブルーミナル（ａｂｌｔ＋ｍ１ｎａｌ）基 底膜に付着したままであるか、しかしヘパリン小球（上記実施例５）の比較的高 い割合がリンパ管および気道を含む離れた構造中にさらに移動したことを示した 。全ての小球に関して、下流表面上での赤血球付着はなく、赤血球表面血液−グ ループ物質（ｒｅｄ　ｃｅｌｌ　５ｕｒｆａｃｅ　ｂｌ。

ｏｄ−ｇｒｏｕｐ　５ｕｂｓｔａｎｃｅｓ）の結合または凝集への傾向がシュガ ー・ハブテンによって好結果的にブロックされたことを示している。また、急性 凝固障害または内皮毒性の誘発に関する組織学的立証があった。

第４図はレチクリン染色法で染色した肺組織細片であり、実施例３と同一のフコ ース−ブロック化したＵ　Ｉｅｘ　Ｅ　ｕｒｏｐａｅｕｓアグルチニンー被覆小 球の静脈内注射後１０分後に殺し、た被験マウスの代表例である。中央には、空 間（Ａ）内の血管空間（Ｖ）から完全に遊出された微小球（Ｍ）があり、アブル ーミナル基底膜に付着し続けている。

この小球は、内皮膜（ｅ、　ｅ）によって被覆されたままであるが反対側の表面 （【１）上では被覆されていないことを示す。レチクリンを有する小さいフラグ メント（血管壁の接続組織成分）は、微小球と一緒に空間内を通って運ばれるが （ちょうどＡの下方の暗い糸のような物質）、赤血球細胞は血管から空間に放出 されていない。（レチクリンの遊出は、このウレ、クスＩ懸濁液中に存在する最 も小さい１０μ置の小球の遊出と一緒には観察されない。）第４図の微小球は１ ０分目で空間で分解され始める。２０分目での分解量は、温圧した小球マトリッ クス（図示しない）のほとんどに関して１０分目のものよりもわずかに多いだけ である。実施例３および４は、フコース−ブロック化したＵｌｅｘ　Ｉ小球がＵ ｌｅｘＩレクチンに関する結合部位を有している内皮表面との接触によって効率 的に被覆されていないこと、およびこのことが小球の内皮包囲および迅速な脈管 性移動を誘発することを示している。ブロックされていない微小球（Ｕｌｅｘ　 Ｉ結合部位がさらされている）に関して同じ応答がみられる。直径３〜５ｐｉの 比較的小さい（非塞栓形成）Ｕｌｅｘ　１小球に関して、このような非被覆は、 病巣の損傷組織（炎症、感染および腫瘍を含む）を供給する微小血管において好 ましく起こると思われる。

第５図はＰＡＳで染色した肺組織細片であり、実施例３および４と同一のフコー ス−ブロック化小球の静脈内注射後２０分後に殺した被験マウスの代表例である 。これは、２０分目で同定することができる稀な脈管内機小球（Ｍ）を例示して いる。はぼ完全に内皮包囲されており、部分的に脈管性移動しているが、その移 動はまだ完全ではない。この稀な例は、内皮膜（ｅ）によってほとんど完全に被 覆された小球の一部分が脈管内アミラーゼ消化からほとんど保護されており、形 態学的に無傷のままである。逆に、被覆されていない小球の部分（脈管区画“Ｖ ”の中に最も深く陥入する部分）は形態学的に分断され（ｒ）、遊出の工程がま ず完了しない限り、血管内で容易に完全に消化される。このことは、内皮包囲が 実際に遊出粒子を脈管外にならしめ、したがって遊出の工程中に消化から保護す ることを示している。粒子をさえぎる同一の方法によって、微小球の遊出中にこ の新しく形成された内皮嚢中に放出された薬物のほとんどかは遮られ、粒子が組 織側部に出現すると、組織区画中に放出されることが示される。血液流はこの小 球のまわりの５〜７時の位置でこの血管において再確立されている。

第６図は、静脈内注射後１０分後に肺微小血管（Ｖ）内に存在するプレインアガ ロースの対照微小球（Ｍｃ）の代表的な例である。ＵｌｅｘＩ（およびヘパリン ）小球に対照して、この小球は、上流または下流の遊離面（Ｕ、非被覆）上での 内皮被覆の徴候がみられない。脈管性移動を開始するという徴候もみられない。

レチクリン染色（示さない）は、小球が接触している血管壁のすべての面のまわ りに無傷のレチクリンを示す。このような対照小球（Ｕｌｅｘ　Ｔまたはヘパリ ン表面を有していない）は、時間がかかる（２０分またはそれ以上）非効率的な 方法で移動しく下記第２表参照）、微小球フラグメントおよび薬物の下流放出に よって脈管内分解する。

静脈内注射後１０〜２０分後の直径２５〜７５μ贋の肺動脈内微小球の割合およ び位置を第２表に示す。

第２表 肺で同定された注射　脈管外位置における小球の型　投与量の概算割合（％）小 球の割合（％）１、　Ｕｌｅｘ　Ｉ　９０　８０ ７フースーブ■フク化冨 ２、Ｕｌｅｘ　Ｉ　９０　９０ 非ブロツク化冨 ３、　ブレインアｆＪａ−スエ富　１０　２０富実施例５の第１表のヘパリン小 球に対するＵｌｅｘｌの比較的高い肺−捕獲率は、これら粒子の比較的大きい直 径に起因する。しかし、比較的大きい直径のプレインアガロース粒子（第２表） は、組織中に効率的に移送されず、したがって、１０〜２０分目の捕獲率は、脈 管内分解および肺からの放出によって低い。ウレ、ノクス１面を有する比較的小 さい小球は、同じサイズのヘパリン小球と同じ割合で捕獲されると思われる。

Ｘ宜残存脈管内小球の多くは血清アミラーゼ消化によって分解せしめられ、これ ら小球の小さいフラグメントだけを同定することができた。

実施例７ 好ましい具体例および別の具体例の前製剤以下の具体例は、今まで得られたもの を継続しかつ増大させ、以下のものを含んでいる。

１、微小粒子は、０．０２ナノメーター以下のストークス半径および直径のナノ 粒子および分子複合物を含むべく拡大した。

２、マトリックス物質は、以下のとおり意図された：ａ）好ましくは、各々、多 原子価ヘパリンまたはＴＤＭＡＣヘパリンで被覆された■型コラーゲンまたはア ルブミン：ｂ）他に、リシノブリルーアルブミン・コンジュゲート、ポリ乳酸、 ポリグリコール酸、結晶および／またはアモルファス形のポリ乳酸とポリグリコ ール酸との混合物、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、および他のデンプン 誘導体、油中水工マルジヲン、リポソーム、ラミニン（およびそのフラグメント ）、１型コラーゲン（およびそのサブユニット）、フィブロネクチン（およびそ のフラグメント）、アンチトロンビン旧（およびその結合サブユニット）： Ｃ）負に荷電されているマトリックス物質の対イオン複合化および安定化に関し て： （１）好ましくは、プロタミンまたはポリエチレンイミン（ＰＥｌ）： （２）他に、インビボ（特に内皮的な）毒性を最小にするために、正に荷電され た部分が優位的に内部に位置し、負に荷電された部分が優位的に外面に位置する 、ポリーＬ−リジン、または他の正に荷電されたアミノ酸もしくは中間代謝産物 、細菌もしくは組換え産物、またはそれらの誘導体； ｄ）半選択的腸瘍−細胞摂取に関して、負に荷電されたかまたは中性のポリ炭水 化物の包含。

（１）好ましくは、親出願（出願番号第０３３．４３２号）に最初に詳述されて いるような硫酸化ポリグルコース、ヘパリン、または中性ポリグルコース、デ牛 ストラン；（２Ｈｍに、硫酸デルマタン、ベントサンポリスルフェートまたはデ ンプンおよびそれらの誘導体。

３、さらに、表面被覆および薬物複合化物質を以下に詳述する。

ａ）好ましくは、低分子量フラグメントまたは硫酸デルマタン：ｂ）他に、リン ノグリル、デキストラン、デンプン、デンプン誘導体またはアルブミンのリシノ ブリルフンノユゲート体、負に荷電されたグリコリピドまたはガングリオシドお よびそ１１らの誘導体、疎水性置換基が共有コンジュゲート体または対イオン複 合物によってヘパリン（またはグリコサミノグリカン、ＧＡＧ）に付着する（特 に、変性アルブミン、ポリ乳酸およびポリグリコール酸、油中水工マルジ９ンお よびリポソームのような疎水性であるかまたは疎水性亜区を有する被覆マトリッ クスにおいて有用な）ＴＤＭＡＣヘパリン（またはイ也の疎水的に変形したヘパ リンまたはグリコサミノグリカン、ＧＡＧ’ｓ）： Ｃ）インビボでの、細胞および／または硫酸マトリノクスヘバソンまたはヘパリ ン・グリコサミノグリカンを標的化することに関して。

（））好ましくは、■型コラーゲン。

（２）他に、アンチトロンビン■、組換えヘパリン補［Ｉｒ、フィブロネクチン の３３，０００ダルトンのタンパク分解性フラグメント、およびラミニン： ｄ）インビボでの、疾病過程によってさらされる組織マトリックス成分を標的化 することに関して： （１）好ましくは、■型コラーゲン： （２）他に、ラミニン、アンチトロンビン■、組換えヘパリン補因子■、フィブ ロネクチン−結合ポリペプチド、ＡＨＢ−２モノクローナル抗体のＦａｂフラグ メント（フィブロネクチンの３３，０００ダルトンのタンパク分解性フラグメン トに対して指向する）フィブロネクチン、フィブロネクチンの３３，０００ダル トンのタンパク分解性フラグメント； ｅ）腎臓の糸球体および腎臓を標的化することに関して：（１）好ましくは、Ｆ ＤＡ認可された静脈内注射可能なプロタミン： （２）他に、ボＩ／エチレンイミン、ポリーＬ−９シンもしくは他の正に萄電さ れたアミノ酸もしくは中間代謝産物、細菌または酵母誘導の組換え産物、Ｎ　Ｈ ２−含有モノマー、オリゴマーもしくはポリマーまたは前記化合物の誘導体。

ｆ）胃腸の摂取量の増大に関して： （１）好ましくは、ラウリル硫酸ナトリウムまたはスルホコハク酸ジオクチルナ トリウム； （２）他に、アルキルアリールスルフェート、Ｇ−３３００゜タウロコール酸ナ トリウム、または他の生適合性、フンジニゲート化、複合化、物理的混合または 乳化された硫酸化もしくはスルホン酸化洗剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）。

ｇ）脈管内凝血／フィブリノーゲン溶解の部位への増大された結合に関して： （１）好ましくは、フィブリノーゲン；（２）他に、アンチフィブリノーゲン抗 体のＦａｂフラグメント、および活性化表面凝血因子１１ａ、Ｖａ、■ａ、ＩＸ ａ、Ｉａ、内皮表面リン脂質、ｖＷＦ等に結合する試薬。

前記表面被覆剤のいくつかまたは全ては、厚いがまたは薄い（単一分子）フィル ムとして、そして単一液相、液体−エマルジョン中において、または気体懸濁、 真空下での超音波懸濁を含みかっ１またはそれ以上の下記物理的または化学的手 段によって達成される微小粒子化懸濁法によって、それらの下にあるマトリック スに適合することを意図する。

ａ、熱プラズマ被覆； ｂ、冷プラズマ被覆； Ｃ０真空スパッタリング： ｄ、液相移動（直接沈着または道孔化）；ｅ、塩化トレシル、臭化シアノまたは 他の化学試薬による粒子表面活性化に次ぐ、レセプター−結合ペプチドまたはタ ンパクの共有結合： ｆ、ビシナルヒドロキシ基の過ヨウ素酸塩酸化による粒子表面活性化に次ぐ１、 炭水化物、デキストリン、糖タンパク、もしくは糖脂質の共有結合またはアルド ール縮合、またはタンパクおよびペプチドのアミノ縮合、次いでホウ水素化物に よるｇ、前記のいずれかの方法による内部および外部粒子（またはエマルジョン 、粒子−エマルシヨン・ハイブリッド、またはグリコサミノグリカン−洗剤複合 物もしくは共有コンジ二ゲート体）の結合； ６９粒状のマトリックスまたは医薬複合物質（例えば、■型コラーゲン、ラミニ ン、アンチトロンビン■、およびフィブロネクチン−ヘパリンに関する；および ／または他のグリコサミノグリカン、ヘブチド、プロティン等）が表面被覆物質 に関する固有の結合部位を有する場合、表面被覆剤（複合物質）が非共有会合に よってマトリックスと結合し、内皮または上皮付着に関して外部表面において有 効な付加的な（同一または別の）非結合群（好ましくはヘパリンまたは■型コラ ーゲン；他にラミニン、硫酸デルマタン、または他のグリコサミノグリカン）を 放出するような相補性表面物質への前形成粒子（または複合物）の直接付加、ま た、このようなマトリックス−結合物質が固有的に多価ではない場合、多価にす るために再調製し、これらの合成マルチマー（ｍｕｌｔｉｍｅｒｓ）を、基礎と なるマトリックスと内部的におよびこれらの生物学的標的：内皮、上皮および／ または細胞外のマトリックス成分と外部的に結合することができるように、−緒 にハプテンサブユニットを重合または複合する方法。

４、本発明は、内部薬物エマルシヨン、アンホテリシンＢ−プルロニックＦ６８ の製剤化および捕獲のための、親出願（出願番号第０３３．４３２号）に最初に 記載されているような内部薬物ナノ粒子、ナノエマルジヲン、または他の内部的 に捕獲されコントロールされた放出型サブカプセル、複合物または薬剤を調製す るための賦形剤として付加的に洗剤を用いる製剤を意図するものである。このよ うな洗剤としては、以下のものが挙げられる。

ａ）好ましくは、デオキシコール酸ナトリウム；ｂ）他に、安定な薬物エマルジ ョンを製剤化するのに必要な、コレステロール、トゥイーン８０（Ｔｗｅｅｎ　 ８０）、両性イオン型洗剤、または他の生適合性非イオン型ポリ硫酸化されたか もしくは正に荷電された洗剤。

５、本発明は、薬物の放出を安定化しコントロールするマトリックスに関する付 加的方法の使用を意図するものである。以下のことが挙げられる。

ａ）好ましくは、タンパクおよび熱不安定性ペプチドに関して、新鮮なホルムア ルデヒドまたはパラホルムアルデヒドとの化学的架橋： ｂ）他に、ポリ乳酸、ポリグリフール酸、ポリアミノ酸、ポリーＬ−リシン、ポ リエチレンイミン、グリセロール、ポリグリセロールまたはポリアルコール（熱 処理または化学反応を有するか有さずに）、ポリエチレンオキシド、生分解性ポ ロキサマー（ｐｏｌｏｘａｍｅｒｓ）またはポロキサミン（ｐｏｌｏｘａｍｉｎ ｅｓ）　（プルロニッククまたはテトロニック）、ポリーＣＯＯＨ化合物（ポリ カルポール）、またはポリアミンのような増粘剤の添加。

６、微粒状製剤化の付加的方法としては、（特に、生成物スケールアップのため に）以下に挙げられるものが意図される：ａ）好ましくは、単一（および／また は共軸）の音波処理または気流破壊されたミクロオリフィス（単−口または多数 口）を介するマトリックス（および／または表面）成分の押出し；ｂ）他に、ハ イブリッド、均一化−スプレィ乾燥装置を用いるエアロゾル化。

７、本発明は、相乳化に用いられる溶媒を抽出し、同時にマトリックス、表面お よび／または捕獲物質を結晶化する付加的方法を意図するものである： ａ）好ましくは、ヘキサン： ｂ）他に、エタノールまたはメタノール。

８、以下に挙げられる最終（またはサブファイナル）製剤の滅菌（および／また は粒子のサイズ分け）の付加的方法：ａ）好ましくは、熱安定な試薬に関して、 １２０’ｃで１０〜２０分間オートクレーブ処理すること： ｂ）好ましくは、熱不安定な試薬に関して（１）複合物およびナノ粒子のサブミ クロン濾過；なろびに（２）０．２２μｍ以上の大きさの粒子の照射；Ｃ）他に 、超音波処理。

実施例８ コントロールされた放出型ヘバリンーアンホテリシンＢ−プルロニック−Ｆ１０ ８薬物粒子の製剤化 以下の変形を伴って実施例２．ｂの記載に従って、熱安定化へ７　Ｎ＋　ｌＪシ ン−ンホテリシンＢ微小球の２つの製剤を調製した：アンホテリシンＢ（イー・ アール・スクイブ・アンド・サンズ・インコーポレーテ、ト、プリンストン、Ｎ Ｊ）の前乳化に関して、プルロニックＦ６８をプルロニック洗剤、Ｆ１０８Ｉ／ ＜スフ・コーポレーテノド（ＢＡＳＦ　Ｃｏｒｐ、　）、バーンノパニイー、Ｎ 」二に代え、高速音波処理ブローブーホモジナイザー−ブリンクマン・インスト ウルメンノ（Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ　１ｎｓｔｒｕｌＩＩｅ＋＋ｔｓ）、ウェスト ノ＼リー、ＮＹ：を用（Ｘで剪断し続（すながら、１１５°Ｃで１０分間、薬物 マトリックスの熱安定化を行い：そしてアセトン−０，１％（ｗ／　ｖ）　トウ ビーン８０中、２５０　Ｘ９で１５秒間比較的大きい方を遠心分離することによ って、異なる直径を有する小球の２つの分画を集め、次いで、最初に懸濁したま まである比較的小さい方を完全に沈降させた。これは、各々が合計生成物重量の ５０％を含んでいる、アンホテリシンーＢ捕獲小球の２つの大きさの分画を得た 。

ａ）比較的小さい分画は、直径１５０〜７００ナノメーター（ｎｍ）の範囲のナ ノ小球を含有していた。このナノ小球製剤は、ジメチルスルホキシド：メタノー ル（１０：９０）における抽出および抽出されたアンホテリシンＢの逆相（Ｃ１ ８）高速液体グロマトグラフイー（ＨＰＬＣ）分析によって測定した結果、３３ ６％（Ｗ／Ｗ）アンホテリシンＢを含有していた。静脈内注射溶液におけるナノ 小球の水性懸濁液によって、全薬物（＝表面分画）の５．３％か迅速に（１５分 かけて）放出された。残存する薬物９４７％は、コントロールされた状態（ｔ！ ｓ　：　２４時間）で放出された。

ｂ）比較的大きい分画は、直径１〜８マイクロメーター（μＷ）の範囲の微小球 を含有していた。この微小球製剤は４１，７％アンホテリシンＢ（ｖ／ｖ）を含 有しており、２．７％が迅速に放出され、９７゜３％がフントロールされた状態 （ｔ４　：　３２時間）で放出された。

実施例９ 絶倒８と同様にして調製した静脈内投与されたヘパリンーアンホテリシンＢ−Ｆ １０８ナノ小球および微小球製剤の肺動脈および肺動脈性局在化試験 成熟した雄性のＣＢＡ／Ｊマウスに静脈内注射することによって、実施例８と同 様にして調製したアンホテリシンＢ製剤の器官局在化を試験した。薬物１ｉＩ１ １度は、化学的および組織学的に分析した。化学的分析は、注射後１０分〜６時 間目に動物を殺し、組織ホモジナイゼーシヲン、薬物抽出、および薬物のＨＰＬ Ｃ定量化（上記実施例８における微小球に関する記載のとおり）を行うことによ って実施した。アンホテリシンーポロキシマー局在化および組織−サブリージジ ン分布の組織学的分析は、注射後１５分目に動物を殺し、全主要体器官の代表的 な１０ミクロンの厚さの区画で特定の組織化学的染色（オイル・レッド・０を含 む）を行うことによって実施した。

組織学的結果は、全解剖部位の内皮による担体局在化および摂取が注射後１０分 以内でほぼ完了し、１５分で完全に完了したことを示した。ＨＰＬＣ分析によっ て、血液量は、注射後１０分で検出領域にあり、１時間で検出不可能であった。

したがって、１時間目の化学的データー（以下）は平衡化した生分布を表す。実 施例８の非塞栓化ナノ小球と周囲を塞栓した微小球に関する１時間目の結果を、 単一のアンホテリシンＢ−デオキシコレート・ナノエマルジョン（イー・アール ・スクイブ・アンド・サンプ・インコーホレーテッド、プリンストン、ＮＪ）と して製剤化された標準アンホテリシンＢ５フアンギゾーン（Ｆｕｎｇｉｚｏｎｅ ）のものと比較した。アンホテリシンＢの全投与量は体重１＆ｆあたり０．７５ ｍｇに維持された。

（１）注射後１時間目のナノ粒状ヘパリンーアンホテリシンＢ−Ｆ２Ｏ３の生分 布： （ａ）全身体薬物７０％を回収した： （ｂ）器官濃度（μ９アンホテリシン／９組織、湿潤重量）：肺１５、肝臓８． ３、腎臓１，１、膵臓６．２、脳０．２０、心臓１゜４； （ｃ）組織１９（湿潤重量）あたりの局在化した注射投薬量の割合（％）：肺５ ２、肝臓２９、腎臓３８、膵臓２１、脳Ｏ１７、心臓４．８゜ （２）注射後１時間目の微粒状ヘパリンーアンホテリシンＢ−Ｆ　１０８の生分 布： （ａ）全身体薬物５５％を回収した： （ｂ）器官濃度（μ９アンホテリシン／９組織、湿潤型ｊｌｌ）：肺２５゜７、 肝臓５．０、腎臓０．４、膵臓２．２、心臓０３、脳０．２； （ｃ）組織１ｇ（湿潤重量）あたりの局在化した注射投薬量の割合（％）・肺９ ４、肝臓１８、腎臓１．４、膵臓８．２、心臓０．４、脳０．５゜ （３）注射後１時間目のフントロール（アンホテリシンＢ−デオキシコレート・ ナノエマルジョン）の生分布：（ａ）全身体薬物５８％を回収した： （ｂ）器官濃度（μ９アンホテリシン／９組織、湿潤重量）コ肺４．０、肝臓６ ．７、腎臓２．５、膵臓１１、心臓０．３、脳００（ｃ）組織１ｇ（湿潤重量） あたりの局在化した注射投薬の割合（％）：肺１４、肝臓２４、腎臓９．２、膵 臓３８．３、心臓０゜ これらの結果、準塞栓（ｓｕｂｅｗｂｏｌ　ｉｚｉｎｇ）または塞栓性直径を有 する熱安定化したヘパリン−Ｆ１０８小球として製剤化された場合に、静脈内投 与したアンホテリシンＢの優位的で迅速な肺摂取が生じることが立証された。こ れら薬物局在化の結果は、初めに得られた担体局在化の体型測定的結果と確実に 相互に関連する。本明細書に記載されているとおり、準塞栓化ナノ小球に捕獲さ れたアンホテリシンＢの化学的摂取および解剖学的サブリージョン位置づけによ り、摂取機構がさらに確立された。即ち、内皮土付着、および誘発された活性内 皮包囲およびヘパリン−被覆粒子の組織間隙への移送である。また、初めの内皮 生付着に関することは、可溶性ヘパリンをヘパリン−薬物粒子と同時に注射する と、ヘパリン−アンボテリシンＢナノ粒状化物の１時間目肺摂取が５２％減少す ることを示しＣいる。

また、アンホテリシンＢの活性内皮移送がヘパリン表面によって誘発されるとい うことは、静脈内注射の１ｏ分後の非常に早期に薬物の肺分離片形成がほぼ完全 であり、血液レベルがほぼＯになるという結果と合わせて示される。このように 迅速かつ効率的な摂取は、ヘパリン表面被覆が欠落しているデキストランおよび アガロースブラシーボ粒子に関して観察されない。

１時間後、肺に沈着するアンホテリンンＢの量は、組織学的にそして手間どる化 学的分析によって評価すると、延長された時間に器官内に非常に多く残存してい る。化学的分析によると、６箇月齢の成熟したＣＢＡ／Ｊマウスの肺内のアンホ テリシンＢの６時間貯留は、１時間目の値の６０〜７０パーセントであった。組 織化学的染色によると、アンホテリシンＢは肺胞、肺の間隙、気道上皮、および 気管支／気管リンパ節内に広く分布していた。これは、薬物担体の組織バーコレ ーンジンが広範囲であり、このようなバーコレーンヨンが主要な組織樟的および 第２のリンパ管ドレナージ経路の広い適用範囲を提供することができる。病巣の 肺炎（自発性マイフプラズマ感染）を得たマウスの場合、ナノ小球および微小球 の密度は、周囲の正常な組織におけるよりもこれらの感染の病巣における方が非 常に高かった。これは、ヘパリンナノ小球（および微小球）が（アンホテリシン Ｂの）第２損傷蓄積の付加的長所を有Ｉ−でいることを示している。したがって 、外部−肺再分布は生じるが、その範囲は狭（、重要なことに、生じた内部−肺 再分布は、感染の部位において、選択的蓄積を助け、薬物の貯留を延長する（正 常な組織成分に比べて）。

柿レセプターの過飽和後に生じる全身系器官摂取を試験するため、マウスの１グ ループに、ヘパリンーアンホテリシンＢ−Ｆ１０８ナノ小球（副塞栓する）の意 図された過度の投与量を静脈内投与した。これは、肝臓による第２器官クリアラ ンスにおける結果であるが、これらの新しいヘパリン粒子が肝実質細胞およびク ノブファー細胞内に局在化するので、組織学的パターンは、非特異的（非局在化 ）粒子によって一般的に観察されるものとは非常に異なった。これは、ヘパリン 粒子が優位的な食細胞−細胞摂取よりも一般的な内皮−細胞摂取を経験すること を立証した。ヘパリンーアンホテリシンＢ−Ｆ　１０８ナノ小球は、腎＠（アン ホテリシン毒性の主要部位）を避は続けた。これらの結果と前述の選択的な頚動 脈、潅流による脳摂取の結果（実施例５．ｂ）とを合わせると、肺以外の部位（ 器官）での高効率内皮土付着、選択的薬物摂取および貯留を達成できることを立 証した。

実施例１０ アンホテリンンＢを含有するＴ　Ｄ　Ｍ　Ａ、　Ｃヘパリン被覆した脂質ナノエ マルジジンの調製 本ナノエマルジョンは、ＦＤＡ認可の脂質エマルジョン、２０％（重量／容量） イントラリビド（Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ）［カビビトラム社（ＫａｂｉＶｉｔｒ ｕｍ、ｔｎｅ、、　Ａｌａｍｅｄｓ、　ＣＡ）ｍを再配合することによって調製 した。即ち、アンホテリシンＢを１５％（重量／重量）でこのエマルジョンに加 え、エマルジョンの（ダイズ）油成分に２０分間混ぜ込み、次いで得られた混合 物にＴＤＭＡＣヘパリン１ポリサイエンシーズ社（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ、 Ｉｎｃ、、　Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ、　ＦＡ）２を０２％（重ｊ１／重量）で加 え、そして２０秒間これを超音波処理してＴＤＭＡＣヘパリンの卵黄リン脂質表 面への導入を促進することによって調製した。得られた混成の脂質−エマルジョ ン粒子は直径２００〜７００ｎｍの範囲内であり、２時間以上（コントロールさ れた静脈内注入を行うに十分である）にわたって安定であった（逆光顕微鏡分析 により）。

実施例１１ 実施例１０で調製したＴＤＭＡＣヘパリンーアンホテリシンＢ　−ｍ！質す／エ マルジぢンを静脈内投与したときの肺および柿外集中の試特 アンホテリシンＢのＴＤＭＡＣヘパリン−脂質ナノエマルジョン（実施例１０で ｍ？Ｊ）を成体雄性ＣＢＡ／Ｊマウスに静脈内注射した。

注射の１時間後に、アンホテリシンＢｆｉの肺゛腎臓の比は１．４４・１まで有 意に増加した「フンギゾーン（Ｆｕｎｇｉｚｏｎｅ）で観察される結果二Ｌ　１ ７　：　］と比較して２．。また、騨臓、肝臓および腎臓での薬初濃度は、等用 量のフンギゾーンで達成される倍率と比較すると、それぞれ２．２．１．６およ び１．７の倍率で減少した。このことは、腎臓（主要な毒性の器官）による浄化 、並びに網内及器官／細胞による顕著な食細胞性取込みを最少にする、アンホテ リシンＢのＴＤＭＡＣヘパリン−脂質ミクロエマルジ１ンの能力を示した。

注射の１２分後にすべての器官の凍結切片について特別の組織学的染色を行った 。これによって、アンホテリシンＢのＴＤＭＡＣヘパリン−脂質エマルジョンの 、肺胞における均一な分布および中程度の染色強度を確認した。さらに、有意に 少ないフンギゾーンエマルジ１ンが肺に集中するようになることを示した。これ らの結果は、ナノエマルジョンをヘパリン修飾するとアンホテリシンＢの肺集中 が改善されることになることを示すものである。この集中（局在化）は安定化さ れたナノおよびミクロ担体によって与えられるものよりその効率が小さいが、単 純なナノエマルジョン（ヘパリンネ含）によって与えられるものよりはその効率 が有意に大きい。

実施例１２ ＦＤＡ認可の抗腫瘍薬物シスプラチン［ブラチノール（Ｐｌａｔｉｎｏｌ）、シ ス−ジアミノジクロロ白金配位体、ブリストル・ラボラトリーズ（Ｂｒｉｓｔｏ ｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　５ｙｒａｃｕｓｅ＋　ＮＹ）］を、準安定な ヘパリンコンプレックスとして再配合した。即ち、プラテノールを蒸留水で１０ Ｉｆ／　１１２の濃度に再水和し、この薬物をウシ肺ヘパリン［アップ２１７社 （ｔｌｐｊｏｈｎ　Ｃｏ、、　Ｋａｌａｍａｚｏｏ、　Ｉ！＋）］と１：１．１ （シスプラチン：ヘパリン、重量／重量）の重量比で混合し、そして１．５分間 超音波処理してシス−プラテンのアミ７基とヘパリンの硫酸基の間の対イオンコ ンプレックスの生成を促進することによって調製した。これにより、０．２〜１ ．５μｌの粒子寸法を有するヘパリン被覆のシス−プラテン　ミクロエマルジョ ンコンプレックスが得られた（シス−プラテン自体は約２１９／３１１１２以上 の濃度では不溶性である）。得られたミクロエマルジョンコンブレンクスは２２ ℃で１時間以上にわたって安定のままであった（コントｅ＋−ルされた血管内注 入に十分である）。

実施例１３ 実施例１２で調製したヘパリン−シスプラチン　ミクロエマルジジンコンブレノ クス、並びに未処理のシスプラチン（ブラテノール、１ｒ９／、Ｑで完全に溶解 した）を、別々の群の成体雄性ＣＢＡ／Ｊマウスに静脈内注入した。注入の１５ 分後にマウスを犠牲にし、すべての器官の組織学的切片を増強プルシアンブルー 鉄反応によって染色した。これにより、標的組織に存在する細胞外白金の大部分 および細胞内白金のすべてが淡青緑色に染色されることにより準定量的に同定さ れた。この新規に開発した染色は、白金染色の特異性および色を確認するため、 ンスーブラチンについてインビトロで初めて試験した。結果は次のようである。

（ａ）標準の静脈内ブラチノールを投与したマウスは、肝臓（小葉中心領域）で 中〜強の染色を示し、肺ではほとんど染色を示さなかった。

（ｂ）再ＩＥ合したヘパリンーシスプラチンエマルシチンコンプレックスを投与 したマウスは次のように肺で中〜強の染色を示した：部分的な内皮染色：肺間質 、肺胞、気道上皮、および気管支および気管リンパ節のかなりの染色；および相 当に少ない程度で肺胞マクロファージ。肺内皮の毒性は見あたらなかった（もし あれば、内皮の小胞形成、滲出血漿タンパク質の蓄積、滲出赤血球、および／ま たは血管向凝固として現れるであろう）。肝臓染色は肺染色の約１／１０であっ た。

これらの結果は、高濃度プラチノール（通常、内皮にとって毒性である）がヘパ リンのミクロエマルジョンコンプレ／ジスとしてうまく再配合されつること、並 びに、ヘパリン成分が、この薬物の毒性作用から内皮を保護するような方法でフ ンプレックスの内皮結合および細胞を横切っての取込みを誘導しうることを示す ものである。

さらにこれらの結果は、シスーブラチン（ブラテノール）が内皮結合、取込みお よび優先的な組織接近／局在化を経るために形式的にマトリックスまたはエマル ジジン担体中にマイクロカプセル化される必要がないことを示している。むしろ 、ヘパリンを含有している試薬キット（装置）を用いてその場で再配合すると効 率的である。

実施例１４ 気管内投与に続く肺へのヘパリン−鉄粒子の上皮取込みプル／アンプル−鉄染色 を用いて、後に行う組織切片中の捕捉物質の組織化学的同定を可能にするため、 アンホテリシンＢの代わりに金属、酸化鉄（Ｆｅ３０．）および鉄イオン（Ｆ　 ｅ”）をマイクロカプセル化すること以外は実施例８（上記）のようにして、ヘ パリンナノ小球（直径２００〜８００　ｎｍ）を調製した。

ナノ小球（０，１５Ｍ　ＮａＣＣの０．５ｖ９／ｌＱ懸濁液をｏ、ｓｃｃ：＋を ベンドパルビタール麻酔した成体雄性ＣＢＡ／Ｊマウスの気管に注射した。注射 の１５分後にマウスを犠牲にし、肺の組織学的切片を調製し、そして標準のブル ンアンプルー鉄反応を用いて切片を染色して、捕捉された鉄および微小球の量お よび位置を同定した。肺は微小球鉄に対して正に染まった。染色はあるパターン で存在し、強度はアンホテリシン含有ナノ小球の静脈内投与の後に観察される強 度（前記実施例８および９に記載）と同じであった。肝臓および腎臓の染色は無 視しうるほど非常に弱いものであった。これにより、安定化されたヘパリンナノ 担体（ヘパリン表面を有する）が上皮輸送によって肺組織に取込まれること、こ れらの担体が捕捉されている物質（鉄化合物）の肺貯蔵所を蓄積させること、お よび気道から投与したときには注射用量のうちの高い割合が肺に局在化するよう になる（他の気管と比較して）ことが確かめられた。

実施例１５ 腔内投与に続く膀胱、小腸および大腸（および排出門脈循環）Ｉ仝のヘパリンナ ノ担体の上皮取込み 実施例１４のように調製したナノ小球を注射によってベンドパルビタール麻酔し た成体雄性ＣＢＡ／Ｊマウスの膀胱、または分離小腸および大腸セグメントに導 入した。ナ／小球投与の２０分後にマウスを犠牲にし、組織を調製し、実施例１ ４のようにして染色した。

中程度〜著しい染色が小腸および大腸の両方の表面および深部粘膜層に存在した 。部分的な染色が注射した腸セグメントの門脈（排出）毛細管および腸間膜りン パ管において、および膀胱壁の深部毛細管において同定された。これらの結果は 、ヘパリン被覆されたナノ小球の腸および膀胱粘膜を越えての局所的な取込みが 、上皮を越える経路によって達成されることを示した。最終的にこれらは、胃腸 経路を経て取込まれる薬物粒子の一部は肝臓が利用できるようになり、そして／ または門脈循環によって全身分布するようになること、および全身部位を櫟的と する第２の薬物は実施例１〜３および１４の記載のように配合した粒子担体の腸 投与に続いて可能になることを示した。

実施例１６ 肝臓、肺および皮下部位で増殖したモリスフ７７７株叶細胞癌を有スルバファロ ラ、トの呻瘍における静脈内投与したヘハリ７　革５実施例１４のように配合し たヘパリン−鉄粒子を、ヘパリン被覆の熱安定化ナノ粒子と同様に試験した：こ の粒子は直径２００〜９００ｎｍであり、マトリックスとしてアルブミンを用い ることおよび液体の再乳化で適用される表面被覆としてラン肺ヘパリン（アップ ジョン社）を用いること以外は同様に調製した］。これらのマーカー粒子を、肝 臓または皮下後肢（−次部位）および肺（転移部位）の７７７７株モリス（Ｍｏ ｒｒｉｓ）肝細胞癌を有する、ベンドパルビタール麻酔したバフアロ（Ｂｕｆｆ ａｌｏ）ラットに静脈内注射した。腫瘍蓄積およびサブ領域（小領域）分布を、 注射後２０分〜２．５時間の間隔を置いて組織化学的に評価した（実施例１４の ように）。形態的な分析によって、初期（２０分）および長期（２，５時間）の 蓄積が、腫瘍間質において、腫瘍細胞それ自体中に、および一部の宿主マクロフ ァージにおいて観察された。このような蓄積は腫瘍のおおまかな解剖学的部位に 関係なく観察された。膿瘍に存在する染色可能なトレーサー金属の、近接および 遠位正常組織に対する比は４：１〜１０：１の範囲内であった（３つの身体部位 すべてにおける腫瘍部分に対して）。

また重要なことは、染色パターンが担体の広範囲な膿瘍浸透を示したこと、さら に、薬物治療（診断）に最も関係が深い以下の腫瘍サブ領域においてトレーサー 鉄の優先的な蓄積を示したことである：即ち、 ａ）腫瘍と近接正常組繊の間の境界において（即ち、最も活性に増殖しているサ ブ領域）；および ｂ）生存腫瘍と中心的な壊死性（死）腫瘍の間の境界、およびそれらの中心の壊 死領域において。

これらの結果は、ヘパリン−鉄のナノ粒子の静脈内投与によってこれらが以下の ことを達成するのを可能にすることを示している。

（１）全身の脈管系を経由しての分布、（２）代表的な悪性腫瘍における選択的 な局在化、（３）腫瘍間質の至る所への広範な浸透、（４）治療および診断に関 係している腫瘍のザブ領域における選択的な濃縮、および （５）腫瘍細胞による半選択的な取込み（正常な肝細胞に対する悪性腫瘍の誘導 されたアニオン輸送経路によって、硫酸化したポリグルコース化合物、例えばヘ パリンの細胞取込みが増強されることによる）。

実施例１７ マイクロカプセル化された生物調節物質、組換えヒトインターロイキン２を含有 するヘパリン被覆しうるアルブミン微小球の調製生物学的応答調節物質である組 換えヒトインターロイキン２（１２５−ａｌａ−修飾したＩ　Ｌ−２）［アムゲ ン社（Ａｍｇｅｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、　Ｔｈｏｕｓａｎｄ　０ａｋｓ、 　ＣＡ）］を、乳化重合捕捉によってアルブミン微小球およびナノ小球（前記実 施例８に記載と同様の直径を有する）中にマイクロカプセル化した。生物学的活 性を最大に保存するため、アルブミン−インターロイキン共重合マトリックスを 新鮮な０，５〜７．０％ホルムアルデヒドで化学的に架橋することによって安定 化しく加熱の代わりに）、この架橋反応を過剰のグリシンで停止させた。水和す ると、ＩＬ−２が４２分のｔＪ−１で生物学的に活性な形態で小球から放已され た（インビトロで試験したＪＬ−２依存性のＴ−細胞ラインによるトリチウム化 チミジンの導入に及ぼす放出上清の生物学的作用によって評価）。このＩＬ−２ の微小球製剤は、Ｔ　Ｄ　Ｍ　Ａ　Ｃへｉ＜リン（前記実施例１０に記載）およ び標準ヘパリン（ウシ肺へ、＜リン、実施例２．ｂに記載）［アップジョン社（ Ｕｐｊｏｂｎ　Ｃｏ、、Ｋａｌａｍａｚｏｏ、　Ｍｌ）３による、並びにブタ腸 粘膜ヘパリン［シグマ・ケミカルズ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、　Ｓｔ 、Ｌｏｕｉｓ、　ＭＯ）］による、直接被覆（予め形成させた粒子の）にかけ易 い。これらの結果は、球状のタンパク質からなる生物学的応答調節物質ＩＬ−２ が、膿瘍および／または肺および脳中に選択的に局在化されることになる（前記 のように）粒子担体中に捕捉されうろことを示すものである。

閏協謹審鱗牛 ””−”＊＝＾ｍ−＝−Ｈ＠　ＰＣＴ／ｌＪｓ　８！１７０１０９６−内噛（− 〜ゆ＃１ムゆ、１□ｍｗ＊、ＰＣτ／υＳＩ！８１０１０９６国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ある表面を有する担体、該担体に含有されている少なくとも２分子の薬物ま たは診断用物質、および内皮表面決定因子に特異的な多価の結合剤からなり、該 結合剤の少なくとも一部が該担体の表面に結合していることを特徴とする組成物 。 ２．担体が約１ｎｍ〜約２５０μｍの大きさを有する請求項１記載の組成物。 ３．結合剤が内皮表面決定因子に生物吸着し、血管壁の内皮細胞による担体の包 囲および該壁を越えての近接部組織への移動を誘導するものであるとさらに定義 される請求項１記載の組成物。 ４．担体が１またはそれ以上の巨大分子、微集合体、微粒子、微小球、ナノ小球 、リポソームおよび微エマルジョンからなる請求項１記載の組成物。 ５．内皮表面決定因子が、組織損傷に近接しているときにはその量が増強される ことを特徴とするものであるとさらに定義される請求項１記載の組成物。 ６．内皮表面決定因子が、因子ＶＩＩ抗原、インターロイキンＩ受容体、内皮ト ロンボモジユリン、内皮組織因子、内皮下の組織部分、フィブリンＤ−Ｄダイマ ーおよびＧＰ２ｂ／３ａ糖タンパク質コンブレックスからなる請求項５記載の組 成物。 ７．多価の結合剤がヘパリン、へパリンフラグメントまたはアレックス・ユーロ パエウスＩレクチンである請求項１記載の組成物。 ８．内皮下の組織部分が単球に対して走化性のラミニン、タイブＩＶコラーゲン 、フィブロネクチンまたはフィブロネクチンフラグメントである請求項６記載の 組成物。 ９．多価の結合剤が、内皮表面受容体、表面酵素、内皮表面を覆う物質または内 皮のすぐ下に存在する物質を介して血管内皮に結合し、粗織または内皮疾患の病 巣の近接部または正常な血管内皮において蓄積、暴露または改変されることもあ るものである請求項１記載の組成物。 １０．組成物試料の内皮への結合が、１０〜１５分以内に結合試料を完全にまた は部分的に包囲するように内皮を誘導するとさらに定義される請求項記載の組成 物。 １１．組成物試料と内皮の相互作用が、一時的な分離または開裂を経てそれによ り該組成物が結合親和力を有している内皮下の決定因子を暴露するように内皮を 誘導するとさらに定義される請求項１記載の組成物。 １２．組成物試料と内皮の相互作用が、関連の血管内腔にいまだ存在しているか 、またはそ中に突出している初期の段階で、薬物または診断用物質の完全な、ま たは部分的な分離を誘導するとさらに定義される請求項１記載の組成物。 １３．組成物試料と内皮の相互作用が、少なくとも１つの関連の血管内皮および 内皮下の構造を越えて試料が近接組織部へ輸送されるのを促進するとさらに定義 される請求項１記載の組成物。 １４．組成物試料と内皮の相互作用が、関連薬物または診断用物質が内皮および 関連構造を越えて移動する効率を改善して、薬物または診断用物質の合計用量を 減少させて投与することにより有意に高い用量の遊離の薬物または診断用物質に 匹敵する効果を得るという結果を与えるとさらに定義される請求項１記載の組成 物。 １５．組成物試料と内皮の相互作用が、関連の血管内腔にいまだ存在しているか 、またはその中に突出している初期の段階で、薬物または診断用物質担体の完全 な、または部分的な分離を誘導するとさらに定義される請求項１記載の組成物。 １６．微小球であるとさらに定義される請求項１記載の組成物。 １７．微小球が直径０．２〜２５０μｍの範囲内である請求項１６記載の組成物 。 １８．微小球がマトリックスを含有している請求項１６記載の組成物。 １９．マトリックスが炭水化物である請求項１８記載の組成物。 ２０．マトリックスがヘパリンである請求項１８記載の組成物。 ２１．薬物または診断用物質がアンホテリシンＢである請求項２０記載の組成物 。 ２２．アンホテリシンＢがシクロデキストリンコンブレックスである請求項２１ 記載の組成物。 ２３．アンホテリシンＢが放出をコントロールされた形態にある請求項２１記載 の組成物。 ２４．アンホテリシンＢがブルロニックＦ６８ブロックコポリマー、即ちポリオ キシブロピレン−ポリオキシエチレンの内部捕捉ミセル内にある請求項２３記載 の組成物。 ２５．マトリックスがデキストランである請求項１８記載の組成物。 ２６．マトリックスが多価の結合剤ヘパリンで覆われている請求項２５記載の組 成物。 ２７．ヘパリンが約１０％（重量／重量）である請求項２６記載の組成物。 ２８．微小球マトリックスがデキストランであり、該マトリックスが約１０％（ 重量／重量）の多価結合剤へパリンで覆われており、微小球マトリックスが薬物 アンホテリシンＢをシクロデキストリンコンブレックスとして放出コントロール 形態で捕捉している請求項１８記載の組成物。 ２９．微小球マトリックスがデキストランであり、該マトリックスが約１０％（ 重量／重量）の多価結合剤ヘパリンで覆われており、微小球マトリックスが薬物 アンホテリシンＢをブルロニックＦ６８ブロックコポリマーポリオキシブロピレ ン−ポリオキシエチレンの内部捕捉ミセル内に放出コントロール形態で捕捉して いる請求項１８記載の組成物。 ３０．微小球マトリックスが炭水化物であり、多価結合剤が内皮表面決定因子、 酵素、内皮上または内皮下物質と結合しうる暴露または変換レクチンである請求 項１８記載の組成物。 ３１．ある表面を有する担体、該担体に含有される少なくとも２分子の薬物また は診断用物質、および内皮決定因子に特異的な多価の結合剤からなり、該結合剤 の少なくとも一部が該担体の表面、および該多価結合剤が外部接触にさらされな いようにする除去可能な被覆に結合していることを特徴とする組成物。 ３２．除去可能な被覆が誘発によって除去される請求項３１記載の組成物。 ３３．誘発がｐＨの低下、温度変化、正常内皮との接触、異常内皮との接触、酵 素レベルの変化、または高周波、超音波、磁気もしくは電気などの外部からの力 の適用によって誘導される物理的変化である請求項３１記載の組成物。 ３４．多価結合剤が内皮、内皮上または下の決定因子に親和性を有するレクチン である請求項３１記載の組成物。 ３５．レクチンがアレックス・ユーロパエウスＩレクチンであり、除去可能な被 覆がフコースである請求項３４記載の組成物。 ３６．内皮（内皮上または下）の結合部位がアレックス・ユーロパエウスＩレク チンによって付与され、除去可能な被覆がフコシル−アルブミンまたはアルブミ ン−フコシルアミンである請求項３４記載の組成物。 ３７．多価の結合剤が内皮または内皮下の結合部位に親和性を有する抗体である 請求項１または請求項３１に記載の組成物。 ３８．多価の結合剤が内皮または内皮上の酵素の基質である請求項１または請求 項３１記載の組成物。 ３９．多価の結合剤がペブチドである請求項３８記載の組成物。 ４０．多価の結合剤がベンゾイル−フェニルアラニル−アラニルプロリンである 請求項３８記載の組成物。 ４１．ベンゾイル−フェニルアラニル−アラニルプロリンが内皮アンギオテンシ ン変換酵素に対して基質親和性を有している請求項４０記載の組成物。 ４２．多価の結合剤が内皮の酵素、アンギオテンシン変換酵素の結合阻害物質で ある請求項１または請求項３１記載の組成物。 ４３．多価の結合剤が内皮のアブルミナル側の基底膜構造への吸着を生じる請求 項１または請求項３１記載の組成物。 ４４．薬物または診断用物質および多価結合剤が同一であり、内皮、内皮上また は内皮下の決定因子に対して２またはそれ以上の結合部位を有するポリマー分子 からなる請求項１または請求項３１記載の組成物。 ４５．薬物または診断用物質および多価結合剤が同一であり、分子直径が１〜２ ００ｎｍの分子微集合体からなる請求項１または請求項３１記載の組成物。 ４６．薬物または診断用物質および多価結合剤が同一であり、分子直径が約１０ ０〜２００ｎｍのヘパリンの分子微集合体からなる請求項１または請求項３１記 載の組成物。 ４７．血管内またはその他の非経口注射に適した薬学的に許容しうる溶液の形態 である請求項１または請求項３１記載の組成物。 ４８．生物学的損傷の診断または治療方法であって、ある表面を有する担体、該 担体に含有される少なくとも２分子の薬物または診断用物質、および内皮表面決 定因子に特異的な多価の結合剤からなり、該結合剤の少なくとも一部が該担体の 表面に結合している組成物を調製し； 該組成物を薬学的に許容しうる担体中に含有させ；そして該薬学的に許容しうる 担体中の組成物を動物に投与すること；を特徴とする方法。 ４９．多価の結合剤が特定の標的部位、大部分は内皮などに対して選択される請 求項４８記載の方法。 ５０．薬物または診断用物質が治療しようとする特定の損傷または使用しようと する診断法に従って選択される請求項４８記載の方法。 ５１．担体が天然の、または合成のポリマーである請求項４８記載の方法。 ５２．アンホテリシンＢがブルロニックＦ１０８ブロックコポリマー、即ちポリ オキシブロピレン−ポリオキシエチレンの内部捕捉のミセル内にある請求項２３ 記載の組成物。 ５３．ナノ小球であるとさらに定義される請求項１記載の組成物。 ５４．ナノ小球が直径１〜９９９ｎｍの範囲内である請求項５３記載の組成物。 ５５．ナノ小球がマトリックスを含有している請求項５４記載の組成物。 ５６．マトリックスが炭水化物である請求項５５記載の組成物。 ５７．マトリックスがヘパリンである請求項５６記載の組成物。 ５８．薬物または診断用物質がアンホテリシンＢである請求項５７記載の組成物 。 ５９．アンホテリシンＢが放出をコントロールされた形態にある請求項５８記載 の組成物。 ６０．アンホテリシンＢがブルロニックＦ１０８ブロックコポリマー、即ちポリ オキシブロビレン−ポリオキシエチレンの内部捕捉のミセル内にある請求項５９ 記載の組成物。 ６１．アンホテリシンＢがシクロデキストリンコンブレックスとして内部捕捉さ れている請求項５９記載の組成物。 ６２．ある表面を有する担体、該担体に含有される少なくとも２分子の薬物また は診断用物質、および上皮表面決定因子に特異的であるか、または相補的である 多価の結合剤からなり、該結合剤の少なくとも一部が該担体の表面に結合してい ることを特徴とする組成物。 ６３．担体と薬物または診断用物質とで形成されたコンブレックスであるとさら に定義される請求項１または請求項６２記載の組成物。 ６４．コンブレックスが担体と薬物の間の対イオン電荷の相互作用または疎水性 の相互作用によって形成される請求項６３記載の組成物。 ６５．担体物質が単一または多重分子層であり、それによって担体が外部表面の 少なくとも一部を形成し、また、薬物または診断用物質を内部的に安定化するこ ともある請求項６２記載の組成物。 ６６．担体物質がヘパリンであり、薬物がシス−ブラチンであり、担体と薬物が エマルジョンとして製剤化されている請求項６３記載の組成物。 ６７．担体物質が約０．２〜５５％（重量／重量）のへパリンであり、薬物が約 ４５〜９９．８％（重量／重重）のシス−ブラチンであり、シス−ブラチンが約 １〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度で水性媒体に含まれており、そして得られたヘパリン −シス−ブラチン溶液または懸濁液が高圧ホモジナイズまたは超音波処理によっ てエマルジョンとしてさらに安定化されている請求項６３記載の組成物。 ６８．担体物質が植物油と表面リン脂質の脂質エマルジョンであり、その表面に ヘパリンと脂肪族側鎖の対イオンコンブレックスが挿入されており、そしてその 脂質エマルジョン中に薬物アンホテリシンＢが捕捉されている請求項６３記載の 組成物。 ６９．ヘパリンと脂肪族側鎖の対イオンコンブレックス、植物油、リン脂質およ びアンホテリシンＢ成分が、高圧ホモジナイズまたは超音波処理によってさらに 安定化されている請求項６８記載の組成物。 ７０．担体が約０．０２〜３ｎｍのストークス半径を有する分子コンブレックス である請求項１または請求項６２記載の組成物。 ７１．担体が約１ｎｍ〜２５０μｍの直径を有する粒子または分子集合体である 請求項１または請求項６２記載の組成物。 ７２．結合剤が上皮表面決定因子に生物吸着し、上皮細胞による担体の包囲およ び該細胞を越えての近接組織への移動を誘導するものであるとさらに定義される 請求項６２記載の組成物。 ７３．担体が１またはそれ以上の巨大分子、微集合体、巨大集合体、微粒子、微 小球、ナノ小球、リポソーム、ナノエマルジョン、微エマルジョン、中空小胞、 無傷細胞、精子、卵、修飾生細胞、細菌、酵母、およびこれらから導かれる担体 からなる請求項６２記載の組成物。 ７４．上皮表面決定因子が、病理学的な組織損傷に近接しているときにはその量 または利用率が増強されることを特徴とするものであるとさらに定義される請求 項６２記載の組成物。 ７５．上皮表面決定因子が、少なくとも１つの硫酸へパリン、ヘパリンに対して 相補的なグリコサミノグリカン類、細胞性および細胞由来の粘液の成分、細胞性 および細胞由来の炭水化物およびオリゴサッカリド類、塘タンパク質類、糖脂質 類、ガンダリオシド類、および受容体タンパク質類、およびフィブリンＤ−Ｄダ イマーおよび糖タンパク質２ｂ／３ａ糖タンパク質コンブレックス、および上皮 下組織部分からなる請求項７４記載の組成物。 ７６．多価の結合剤がヘパリン、へパリンのフラグメント、または天然、半合成 もしくは合成のヘパリン誘導体である請求項６２記載の組成物。 ７７．多価の結合剤がデルマタン硫酸塩、デルマタン硫酸塩のフラグメント、ま たはその天然、半合成もしくは合成の誘導体である請求項６２記載の組成物。 ７８．上皮下組織部分が少なくとも１つのフィブロネクチン、フィブロネクチン フラグメント、フィブロネクチンのＲＧＤＳペブチド配列、タイブＩＶコラーゲ ン、タイブＩＶコラーゲンのサブ領域、タイブＩＶコラーゲンのヘパリン結合配 列、タイブＩコラーゲン、タイブＩコラーゲンのサブ領域、ラミニン、ラミニン のサブ領域、ラミニンのヘパリン結合サブ領域、ラミニンフラグメント、デルマ タン硫酸塩グリコサミノグリカン類、デルマタン硫酸塩グリコサミノグリカン類 のヘパリン関連サブ領域、コンドロイチン硫酸塩グリコサミノグリカン類および 細胞性および細胞由来の粘液の成分である請求項７５記載の組成物。 ７９．多価の結合剤が、上皮表面受容体、表面酵素、上皮のすぐ下に存在する物 質を介して上皮に結合し、組織または上皮疾患の病巣の近接部または正常な上皮 において蓄積、暴露または改変されることもあるものである請求項６２記載の組 成物。 ８０．組成物試料の上皮への結合が、１０〜１５分以内に結合試料を完全にまた は部分的に包囲するように上皮を誘導する請求項６２記載の組成物。 ８１．組成物試料と上皮の相互作用が、一時的な分離または開裂を経てそれによ り該組成物が結合親和力を有している内皮下の決定因子を暴露するように上皮を 誘導する請求項６２記載の組成物。 ８２．組成物試料と上皮の相互作用が、覆いかぶさっている上皮外空間、内腔、 表面または腔にいまだ存在しているか、またはその中に突出している初期の段階 で、薬物または診断用物質の完全な、または部分的な分離を誘導する請求項６２ 記載の組成物。 ８３．組成物試料と上皮の相互作用が、関連の上皮を越えてその中に、および少 なくとも１つの上皮下の構造および近接の組織部の中に試料が輸送されるのを促 進する請求項６２記載の組成物。 ８４．組成物試料と上皮の相互作用が、関連薬物または診断用物質が上皮および 関連構造を越えて移動する効率を改善して、薬物または診断用物質の合計用量を 減少させて投与することにより有意に高い用量の常法投与の薬物または診断用物 質に匹敵する効果を得るという結果を与える請求項６２記載の組成物。 ８５．微小球またはナノ小球であるとさらに定義される請求項６２記載の組成物 。 ８６．微小球が直径１〜２５０μｍの範囲内である請求項８５記載の組成物。 ８７．ナノ小球が直径１〜９９９ｎｍの範囲内である請求項８５記載の組成物。 ８８．微小球またはナノ小球がマトリックスを含有している請求項８５記載の組 成物。 ８９．マトリックスが炭水化物である請求項８８記載の組成物。 ９０．マトリックスがヘパリンである請求項８８記載の組成物。 ９１．薬物または診断用物質がアンホテリシンＢである請求項９０記載の組成物 。 ９２．アンホテリシンＢが放出をコントロールされた形態にある請求項９１記載 の組成物。 ９３．アンホテリシンＢがブルロニックＦ１０８ブロックコポリマー、即ちポリ オキシブロピレン−ポリオキシエチレンの内部捕捉ミセル内にある請求項９４記 載の組成物。 ９４．アンホテリシンＢがアンホテリシンＢ−デオキシコレートの内部捕捉ミセ ル内にある請求項９２記載の組成物。 ９５．アンホテリシンＢがアンホテリシンＢ−シクロデキストリンの内部捕捉コ ンブレックス内にある請求項９２記載の組成物。 ９６．マトリックスがデキストラン、デンブン、またはその誘導体である請求項 ８８記載の組成物。 ９７．マトリックスがデキストランである請求項８８記載の組成物。 ９８．マトリックスが多価の結合剤ヘパリンで被覆されている請求項９７記載の 組成物。 ９９．ヘパリンが約０．２〜１０％（重量／重量）である請求項９８記載の組成 物。 １００．マトリックスがデキストランであり、該マトリックスが約０．２〜１０ ％（重量／重量）の多価結合剤ヘパリンで被覆されており、そして徴小球マトリ ックスが薬物アンホテリシンＢをシクロデキストリンの内部捕捉コンブレックス として放出ーコシトロールされた形態で捕捉している請求項８８記載め組成物。 １０１．マトリックスがデキストランであり、該マトリックスが約０．２〜１０ ％（重量／重量）の多価結合剤へパリンで被覆されており、そして微小球マトリ ックスが薬物アンホテリシンＢをブルロニックＦ１０８ブロックコポリマーの内 部捕捉ミセルとして放出ーコントロールされた形態で捕捉している請求項８８記 載の組成物。 １０２．マトリックスが炭水化物であり、多価の結合剤が上皮表面決定因子、受 容体、酸素、相補性の生化学的置換体、内皮上または内皮下物質を結合しうる暴 露または変換レクチンである請求項８８記載の組成物。 １０３．組成物と結合する標的細胞が上皮ならびに内皮を含んでいる請求項３１ 〜３９、および４２〜４７のいずれかに記載の組成物。 １０４．担体が約０．０１〜約３ｎｍのストークスの分子半径を有している請求 項６２記載の組成物。 １０５．コンブレックスが約０．０２ｎｍ〜１００μｍの大きさを有するミクロ 集合体またはマクロ集合体からなる請求項６２記載の組成物。 １０６．マトリックスがアルブミンである請求項８５記載の組成物。 １０７．薬物または診断用物質がアンホテリシンＢである請求項１０６記載の組 成物。 １０８．アンホテリシンＢが放出−コントロールされた形態にある請求項１０７ 記載の組成物。 １０９．アンホテリシンＢがブルロニックＦ１０８ブロックコポリマー、即ちポ リオキシブロピレン−ポリオキシエチレンの内部捕捉ミセル内にある請求項１０ ８記載の組成物。 １１０．アンホテリシンＢがアンホテリシンＢ−デオキシコレートの内部捕捉ミ セル内にある請求項１０８記載の組成物。 １１１．アンホテリシンＢがアンホテリシンＢ−シクロデキストリンの内部捕捉 コンブレックス内にある請求項１０８記載の組成物。 １１２．診断用トレーサー物質が酸化鉄Ｆｅ２Ｏ４である請求項８５記載の組成 物。 １１３．マトリックスおよび表面被覆がヘパリンであり、捕捉されている診断用 トレーサーが酸化鉄Ｆｅ３Ｏ４であり、そして捕捉製剤が加熱によって安定化さ れている請求項８５記載の組成物。 １１４．マトリックスがアルブミンであり、捕捉されている診断用トレーサーが 酸化鋏Ｆｅ３Ｏ４であり、表面被覆がへパリンであり、そして捕捉製剤が加熱に よって安定化されている請求項８５記載の組成物。 １１５．マトリックスがアルブミンであり、捕捉されている診断用トレーサーが 酸化鉄Ｆｅ３Ｏ４であり、捕捉製剤が加熱によって安定化されており、そしてヘ パリンと脂肪族側鎖の対イオンコンブレックスが表面物質として加えれている請 求項８５記載の組成物。 １１６．マトリックスがアルブミンであり、捕捉されている治療用薬物が組換え ａｌａ−１２５−インターロイキン２であり、捕捉製剤がホルムアルデヒドによ る化学架橋によって安定化されており、そしてヘパリンが表面物質として存在し ている請求項１または請求項６２記載の組成物。 １１７．マトリックスがアルブミンであり、捕捉されている治療用薬物が組換え ａｌａ−１２５−インターロイキン２であり、捕捉製剤がホルムアルデヒドによ る化学架橋によって安定化されており、そしてヘパリンと脂肪族側鎖の対イオン コンブレックスが表面物質として加えられている請求項１または請求項６２記載 の組成物。 １１８．担体および薬物もしくは診断物質の取込みに適合しているか、または内 皮もしくは上皮の取込み機序に関係しているとさらに定義される請求項４８記載 の方法。 １１９．肺での高い効率の取込みを得る目的で、薬物もしくは診断物質の担体を 静脈内経路で投与する請求項４８記載の方法。 １２０．近接の標的器官、組織または組織損傷での高い効率の取込みを得る目的 で、薬物もしくは診断物質の担体を選択された動脈灌流によって投与する請求項 ４８記載の方法。 １２１．広く分布している全身の部位に存在する組織損傷での半選択的な中程度 の効率の取込みを得る目的で、薬物もしくは診断物質の担体を静脈内注射によっ て投与する請求項４８記載の方法。 １２２．薬物もしくは診断物質の担体が、直接上皮と接触する経路で投与される 請求項１１８記載の方法。 １２３．肺組織における高い効率の局在化を得るために、薬物もしくは診断物質 の担体が液体装置またはエーロゾル適用によって気管内に投与される請求項１２ ２記載の方法。 １２４．薬物もしくは診断物質の担体が膀胱に投与される請求項１２２記載の方 法。 １２５．薬物もしくは診断物質の担体が胃腸管に投与される請求項１２２記載の 方法。 １２６．薬物もしくは診断物質の担体が腸装置によって胃腸管に投与される請求 項１２５記載の方法。 １２７．薬物もしくは診断物質の担体が経口装置によって胃腸管に投与され、該 担体が腸用に被覆されていて胃での分解に対して保護されており、小腸および大 腸への増強された放出を与える請求項１２５記載の方法。 １２８．腸粘膜を越えて排出門脈循環への、そしてこれらの経路によって二次的 な肝臓および全身循環への一部取込みを得るために、薬物もしくは診断物質の損 体が胃腸管に投与される請求項１２５記載の方法。 １２９．腸粘膜を越えて門脈および全身循環への取込みの増大を得るために、硫 酸化またはスルホン化されたデタージェントが、薬物もしくは診断物質の担体に 共有結合によりコンジュゲート化されるか、またはそれとともに乳化され、そし て同時投与される請求項１２８記載の方法。 １３０．薬物もしくは診断物質の担体を体腔、内腔、空隙または表面に投与して 、局所または領域の取込み効率を高め、毒性を最小にし、そして薬物もしくは診 断物質の用量および損失を減少させる請求項１２２記載の方法。 １３１．薬物もしくは診断物質の担体の投与が、内皮または上皮細胞の取込みに より、改善された部位特異的な薬物もしくは診断物質の局在化を導く請求項４８ および請求項１１８〜１３０のいずれかに記載の方法。 １３２．薬物もしくは診断物質の握体の投与が、正常および損傷組織、細胞、お よびゲル物質を通ってその中への、担体または物質による改善された浸透を導き 、それによって、隔離された部位内または排出領域の毛細管およびリンパ管内に 存在する細胞、微生物およびその他の標的物質への改善された接近を与えるか、 またはこれらの部位における薬物もしくは診断物質の改善され、延長された局在 を与える請求項４８および請求項１１８〜１３０のいずれかに記載の方法。 １３３．微小球マトリックスがデキストランまたはデンブンであり、多価の結合 剤がアレックスＩユーロパエウス凝集素である請求項３０記載の組成物。 １３４．多価の結合剤がアンギオテンシン変換酵素の阻害物質、リシノブリルで ある請求項４２記載の組成物。 １３５．多価の結合物質がアンギオテンシン変換酵素の阻害物質、リシノブリル の共有結合アルブミンコンジュゲートである請求項４２記載の組成物。 １３６．多価の結合物質およびマトリックス物質が同一である請求項１３５記載 の組成物。 １３７．薬物もしくは診断物質が天然または合成のポリマーであり、表面薬物、 酵素、阻害物質、ペブチド、ポリペブチド、タンパク質、糖タンパク質、レクチ ン、デキストリン、オリゴサッカリド、ポリサッカリド、炭水化物、グリコサミ ノグリカン、硫酸化もしくはカルボキシル化されたグリコサミノグリカン、正荷 電したかもしくはアミノ含有の炭水化物、糖脂質、またはガンダリオシド、抗体 、キメラ抗体、抗体フラグメント、およびこれらの誘導体および組合せで被覆さ れているか、またはこれらとコンブレックス化されている請求項４８、５０、５ １、および１１８〜１３２のいずれかに記載の方法。 １３８．内皮または上皮の結合、取込みおよび輸送を媒介する多価の生物吸着表 面物質またはコンブレックスが、炭水化物、オリゴサッカリド、デキストリン、 糖、ヘパリン、硫酸ヘパリンおよびデルマタン、デキストラン、デンブン、ラミ ニン、フィブロネクチン、および生および修飾細胞および微生物、小さい巨大分 子薬物、およびこれらの誘導体を含む天然に親水性である担体マトリックスと組 合せて用いられる請求項４８、５０、５１、および１１８〜１３２のいずれかに 記載の方法。 １３９．内皮または上皮の結合、取込みおよび輸送を媒介する多価の生物吸着表 面物質またはコンブレックスが、アルブミン、変性アルブミン、水中−脂質エマ ルジョン、ミクロエマルジョンおよびナノエマルジョン、リポソーム、架橋また は他の方法で安定化したリポソーム、ポリ乳酸、ポリグリコール酸および混合ポ リ乳酸−ポリグリコール酸、タイブＩＶおよびＩコラーゲン、疎水性の小さい巨 大分子薬物、およびこれらの誘導体を含む天然に、部分的に、または完全に疎水 性である担体マトリックスと組合せて用いられる請求項４８、５０、５１、およ び１１８〜１３２のいずれかに記載の方法。 １４０．マトリックスがアルブミンである請求項１８または請求項８８記載の組 成物。 １４１．薬物もしくは診断物質がアンホテリシンＢである請求項１４０記載の組 成物。 １４２．アンホテリシンＢが放出をコントロールされた形態にある請求項１４１ 記載の組成物。 １４３．アンホテリシンＢがシクロデキストリンの内部捕捉コンブレックス内に ある請求項１４２記載の組成物。 １４４．アルブミンマトリックスが多価の結合剤ヘパリンで被覆されている請求 項１４０記載の組成物。 １４５．へパリンが約０．２〜１０％（重量／重量）である請求項１４４記載の 組成物。 １４６．微小球マトリックスがアルブミンであり、該マトリックスが約０．２〜 １０％（重量／重量）の多価結合剤ヘパリンで被覆されており、そして微小球マ トリックスが薬物アンホテリシンＢを内部捕捉されたγシクロデキストリンコン ブレックスとして放出−コントロールされた形態で捕捉している請求項１４０記 載の組成物。 １４７．徴小球マトリックスがアルブミンであり、該マトリックスが約０．１〜 １０％（重量／重量）へパリンで多価結合剤であるヘパリンと脂肪族側鎖の対イ オンコンブレックスで被覆されており、そして微小球マトリックスが薬物アンホ テリシンＢを内部捕捉されたγシクロデキストリンコンブレックスとして放出− コントロールされた形態で捕捉している請求項１４０記載の組成物。 １４８．マトリックスおよび多価結合物質が両者ともヘパリンであり、マトリッ クスが約４０〜９９．８％（重量／重量）の薬物シス−ブラチンを放出−コント ロールされた形態で捕捉している請求項２０または請求項９０記載の組成物。 １４９．マトリックスがデキストランであり、該マトリックスが約０．２〜１０ ％（重量／重量）の多価結合剤ヘパリンで被覆されており、そしてマトリックス が約４０〜８０％（重量／重量）の薬物シス−ブラチンを放出−コントロールさ れた形態で捕捉している請求項１８または請求項８８記載の組成物。 １５０．マトリックスがデンブンまたはその誘導体であり、該マトリックスが約 ０．２〜１０％（重量／重量）の多価結合剤ヘパリンで被覆されており、そして マトリックスが約４０〜８０％（重量／重量）の薬物シス−ブラチンを放出−コ ントロールされた形態で捕捉している請求項１８または請求項８８記載の組成物 。 １５１．マトリックスがアルブミンであり、該マトリックスが約０．２〜１０％ （重量／重量）の多価結合剤ヘパリンで被覆されており、そしてマトリックスが 約４０〜８０％（重量／重量）の薬物シス−ブラチンを放出−コントロールされ た形態で捕捉している請求項１８または請求項８８記載の組成物。 １５２．マトリックスがタイブＩＶコラーゲンまたはその誘導体であり、該マト リックスが約０．２〜１０％（重量／重量）の多価結合剤ヘパリンで被覆されて おり、そしてマトリックスが約４０〜８０％（重量／重量）の薬物シス−ブラチ ンを放出−コントロールされた形態で捕捉している請求項１８または請求項８８ 記載の組成物。 １５３．マトリックスがラミニンであり、該マトリックスが約０．２〜１０％（ 重量／重量）の多価結合剤ヘパリンで被覆されており、そしてマトリックスが約 ４０〜８０％（重量／重量）の薬物シス−ブラチンを放出−コントロールされた 形態で捕捉している請求項１８または請求項８８記載の組成物。 １５４．マトリックスがフィブロネクチンを結合しているペブチドまたはポリペ ブチドであり、該マトリックスが約０．２〜１０％（重量／重量）の多価結合剤 ヘパリンで被覆されており、そしてマトリックスが約４０〜８０％（重量／重量 ）の薬物シス−ブラチンを放出−コントロールされた形態で捕捉している請求項 １８または請求項８８記載の組成物。 １５５．マトリックスがフィブロネクチンであり、該マトリックスが約０．２〜 １０％（重量／重量）の多価結合剤ヘパリンで被覆されており、そしてマトリッ クスが約４０〜８０％（重量／重量）の薬物シス−ブラチンを放出−コントロー ルされた形態で捕捉している請求項１８または請求項８８記載の組成物。 １５６．マトリックスがフィブロネクチンであり、該マトリックスが約０．２〜 １０％（重量／重量）の多価結合剤ヘパリンで被覆されており、そしてマトリッ クスが約４０〜８０％（重量／重量）の薬物アンホテリシンＢを放出−コントロ ールされた形態で捕捉している請求項１８または請求項８８記載の組成物。