JPH05508770A - 膵臓エラスターゼ１特異性抗体、その獲得方法および該抗体を含有するテストキット - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 膵臓エラスターゼ１特異性抗体、その獲得方法および該抗体を含有するテストキ ット 本発明は、感度および選択性の高いエラスターゼ１抗体、その獲得方法、および 該抗体を含有する高感度な診断用テストキ・ットに関する。

膵臓の炎症性疾患の症例は工業国において増加し続けて４Ｘる（ｉｌ、Ｒａ５ｃ ｈ、Ｄｅｕｔｓｅｈｅｓ＾ｒｚｔｅｂｌａｔｔ　８４：　Ｃ−３９７−３９８， １９８７＞、この種の疾患は一般的に間欠性の経過を辿り、最終的には腺の完全 な欠損に至る。急性の発作（ｅｐｉｓｏｄｅｓ　）は酷１１）腹痛および悪１１ ，１により認識されるが、中間相では、通常患者は痛みが引くのを経験する。こ れらの疾患は、特徴の無い消化系の愁訴を伴うだけなので、それを認識すること 番よ困難である。そこで、全ての消化系の不調に対して慢性膵臓疾患の疑塾）が 持たれる。

現在まで、膵炎の検査室的診断においては、血清アミラーゼレベルの測定が通常 用いられてきた。しかし、血清アミラーゼの上昇は、他の腹腔内の炎症、例えｉ ｆ腸穿孔、おたふくかぜ、または腎不全によ・でも起こる。さら５、血清アミラ ーゼレベルの上昇はモルヒネの投与後仁も観察され得る。他の検査室的診断とし て番よ、急性膵炎において上昇する、クレアチニンクリアランスに対するアミラ ーゼの比率の測定による診断が可能である。残念なことに、急性膵炎により上昇 したアミラーを値は急速に正常化するので、患者の３人に１人の割合で、疾患に かかった４８時間後にはすでに正常値が測定される（Ｊ、＾、　ＥｃＭｅｌｄｔ ら、＾ｒｃｈ、　Ｐａｔｈｏｌ、　Ｌａｂ、　Ｗｅｄ。

１０９：３１６−３１９．１９８５）。

リパーゼの測定は別の診断法の可能性を提示する。しかしながら、リノ（−ゼま たはアミラーゼのどちらの測定も、慢性膵炎を検知するには適してν）な１）、 従来、この疾患は、糞便中の膵臓酵素であるキモトリプシンの活性を測定するこ とによって、不十分仁立証されてきただけである。この測定方法の欠点は、膵臓 により排出されるキモトリプシンの一部しか検出できず、しかもその一部のもの も非常に広範な彷徨変異を免れないことである（にｏｌｄｂｅｒｇら、　Ｃｕｔ 　１０：４７７−４８３．１９８９＞、このことが正常値の測定を極端に困難に している。

＾、　Ｓｚｉｅｇｏｌｅｉｔの論文（Ｂｉｏｅｈｅｓ、　Ｊ、　２１旦＋７３５ −７４２．１９８４）に記されているように、膵臓エラスターゼ１（Ｅｌ）、別 名プロテアーゼＥは膵臓だけで形成され、そして消化液と共に十二指腸内に分泌 される。糞便中の前記酵素のレベルはキモトリプシン活性よりも実質的に良好に 膵臓の外分泌機能を表すことから、既述の欠点を避けるために、糞便中のエラス ターゼ１のレベルを測定する試みが既に行われている（＾、　Ｓｚｉｅｇｏｌｅ ｉｔら、　Ｃｌ１ｎ、　Ｂｉｏｅｈｅｍ、２２：８５−８９．１９８９）。

また、血清中のＥｌを測定することによって急性膵炎を検知できることも見いだ されている（＾、　Ｓｚｉｅｇｏｌｅｉｔら、　Ｃｌ１ｎ、　Ｂｉｏｃｈｅｓ＋ 、　２２ニア９−８３．１９８９）＃現在までのところ、他の酵素と異なり、Ｅ ｌは腸を通過する際に分解されないか、単に非実質的に分解されると考えられて いる。従って、糞便中の前記酵素のレベルは膵臓の外分泌機能の程度を示す、さ らにまた、この酵素は急性膵臓疾患相においては血流はも入る。

血清エラスターゼ１を測定するための放射免疫学的テストが既に利用されている （＾、　Ｍｕｒａｔａら、　Ｅｎｚｙｍｅ　３０：２９−３７．１９８３；　エ ラスターゼ−１−ＲＩＡ−キット。

＾ｂｂｏｔｔ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ）。

しかし、そのような放射性物質による測定（放射免疫検定；ＲＩＡ）は、放射性 試薬が限られた安定性しか有しないために、連続的に再合成される必要があると いう欠点を有している。さらに、放射性物質は注意深く貯蔵しなければならず、 また、放射性物質の測定には特別に訓練された人間および特別な試験器材が必要 である。

加えて、このテストを用いて糞便中のＥルベルを測定することは不可能であるか 、もしくは不十分にしか可能ではない。

従って本発明の目的は、血清および糞便中のエラスターゼ１を測定するに充分な 感度を有し、急性および慢性の両方の膵炎の診断のためにヒトエラスターゼ１を 測定することが可能なテスト方法を開発することである。

本発明によれば、この目的はアミノ酸配列Ｔｈｒ−Ｎｅｔ−Ｖａｌ−＾ｌａ−に ｌｙ−にｌｙ−＾５ｐ−１１ｅ−＾ｒｇを有するエピトープに対する抗体により 達成される。驚くべきことに、ヒトエラスターゼ１のこのエピトープに対する抗 体は、標識酵素を選択的に認識し、それにより他の抗原を識別することが判明し た。

従って本発明はまた、慣用法により抗エラスターゼ抗体を調製するための、抗原 として予め定義されたエピトープを用いることを特徴とする方法にも関する１本 発明によれば、このエピトープの一部および断片が免疫応答を引き起こすならば 、それらを抗体の免疫および調製のために用いることも可能である。そのような 断片は、合成によっても、エラスターゼ１の化学的および／または生物学的な分 解によって６得ることができる０本発明の方法においては、必要に応じてスペー サーを用いてペプチドあるいはペプチドの一部を担体に結合することが適切であ ることが判明した。適切な担体は当業者には公知であり、それらは例えば合成膜 材もしくは天然膜材、ポリサッカライド、ペプチドまたはタンパク質である。ア ルブミンならびにヘモシアニンが特に好ましい、用いられるスペーサーも当業者 には公知である０本発明によれば、前記エビトー１またはその断片を用いて、選 択的モノクローナル抗体および選択的ポリクローナル抗体を共に得ることが可能 である０本発明による好ましい抗体はパラフィン包埋した薄い切片を認識するこ とができる。

本発明による抗体を含有する抗血清は、実験動物を高純度のヒトエラスターゼ１ または該酵素の断片で免疫することにより得ることができる。その際、実験動物 、例えばマウス、ラット、ウサギ、ヤギまたはウマは慣用法により免疫されるの で、ポリクローナル抗体を含有する抗血清が得られ、該抗血清から慣用法により 本発明による抗体を得ることもできる６本発明による好ましい抗体はパラフィン 包埋した薄い切片を認識することができる。

好ましい実施態様において、本発明によるエビトー１を用いたＧ、　Ｋ６ｈｌｅ ｒおよびＣ，Ｍｉｌｓｔｅｉｎ　（Ｎａｔｕｒｅ　２５６：４９５−４９７．１ ９）５）の方法により、モノクローナル抗体を適切に得ることができる。

従って、本発明のさらなる目的は、Ｅｌと特異的に結合し得るモノクローナル抗 体である。そのような抗体は以下の手順により得られる。マウスまたはラットを 高純度のＥｌあるいは本発明により用いられるエピトープで免疫し、該免疫動物 の膵臓由来のＢリンパ球を骨髄腫細胞と融合し、形成された雑種細胞をクローニ ングして、Ｅｌと結合し得る抗体を分泌する雑種細胞をクローニングおよび培養 することにより、それらにより形成されるモノクローナル抗体が得られる。

それ自身は免疫グロブリンをまったく産生じない細胞系を用いることが特に好ま しい。

本発明により得られるモノクローナル抗体はＥ１特異性であり、Ｅ１以外の物質 とは反応しない０本発明によるモノクローナル抗体はパラフィン包埋した薄い切 片を認識し得ることが好ましい。

本発明による好ましい抗体は、ヨーロピアン・コレクション・イン・アニマル・ セル６カルチヤーズ（ｔｈｅ　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　ｏｒ 　Ａｎｉｍａｌ　Ｃｅ１ｌ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ　：ＥＣＡＣＣ）、ワクチン・リ サーチ・アンド・プロダクション・ラボラトリ−（Ｖａｃｃｉｎｅ　Ｒｅ５ｅａ ｒｅｈ　ａｎｃｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）　、パブリ ツク°ヘルス・アンド０ラボラトリ・サービス（Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　 ａｎｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　５ｅｒｖｉｃｅ）、センター、フォー・アプラ イド・マイクロバイオロジー・アンド・リサーチ（Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ａｐ ｐｌｉｅｄＮｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　Ｐｏｒｔ ｏｎ　Ｄｏｗｎ、　ＧＢ　５ａｌｉｓｂｕｒｙ、　Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ@ＳＦ３ ０ＪＧ）に １９９０年１２月２１日に申請され、申請番号９０１２１９０６および９０１２ １９０７が与えられている雑種細胞系から入手可能である。これらの細胞系から 得られる抗体は共に、パラフィン包埋した薄い切片を認識することができる。

本発明の別の目的は、本発明によるＥ１特興性抗体をＥｌの定性的および／また は定量的な測定に使用することである。それによって、この抗体を用いて体液も しくは糞便中のエラスターゼ１を特異的に検出することが可能である。従って、 本発明はまた、本発明による抗体を含むテストキット、特に体液および／または 糞便を用いて慢性膵炎、急性膵炎および肺繊維症を診断ならびに経過観察するた めの免疫学的テストキットにも関する。適切な体液は血液、血漿および血清であ る、間接法、競合法およびサンドイツチ法を用いる種々のＥＬＩＳＡが、血液、 血漿、血清または糞便中のＥｌを検出するために実験に取り入れられた。しかし 、サントイ・ｌチ法を用いたＥＬＩＳＡが大量の試料の迅速な診断に最も適して いることが判明した。これは、サンドイツチ法を用いたＥＬＩＳＡが計算できな い他の血清因子から独立しているためである。この目的のためには、前記酵素エ ラスターゼ１の異なるエピトープに対する、少なくとも２種類の異なるモノクロ ーナル抗体が必要である。

血清または糞便中の酵素の値の変化は、例えばそのようなテストにより明示する ことができ、特に膵臓の状態が変化した場合にはそれらの変位の出現により明示 され得る。

免疫検定法の原理に基づく測定方法は広範に発達してきた５これらの測定方法の 利点には、精密度および迅速性（非常な信頼性および試料処理）並びに（ナノグ ラム単位の）微量の物質を検出し得る可能性が包含される。この測定を行うため に、ホモジニアスおよびヘテロジニアスな相の両方を用いた種々の変法が可能で ある。

ヘテロジニアスな相を用いた実施態様においては受容体の一つを担体に結合する 。

サンドイツチ法においては、例えば第一の抗体を受容体、あるいは別名キャッチ ャ−（ｃａｔｃｈｅｒ）として担体に結合し、そしてテスト溶液を添加し、それ によってテスト溶液中の測定すべき抗原が選り出されて抗体と結合する１次に、 前記抗原もしくは前記抗原と受容体との複合体と特異的に反応する第二の標識抗 体を添加する。

そして、標準溶液（単離、精製したヒトエラスターゼ１）を補助として、第二の 抗体を標識することにより抗原の量を測定することができる。

本発明の別の好ましい実施態様においては、第一の抗体を、膜、薄葉紙または流 れ（ｆｌｏｗｉｎｇ）構造の担体マトリックスに受容体として結合するので、こ の抗体はＥＬＩＳＡ免疫プレートの凹凸の通常の床部とならず、かわりにマトリ ックスと結合して存在する。好ましいマトリックスは、イオン交換基を有する特 別な態様の微小孔性平面膜あるいは中空繊維膜である。微小孔性の平面膜、例え ばボウル社（Ｐａｌｌ　Ｃｏｒｐ、、　Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ、　ＵＳＡ）から 市販されている膜等が、この目的のために好適に用いられる１本発明により用い られる中空繊維膜も市場で入手でき、例えばセプラカー社（Ｓｅｐｒａｃｏｒ　 Ｉｎｃ、　Ｍａｓｓ、、　ＵＳＡ）から市販されている。このような担体材料を 用いて、特に迅速かつ簡単な検出法を開発することができる。

上記した一般的原理にっては種々の変法が可能である１例えば、３種の受容体を 用い、３種の受容体の内の１種をヘテロジニアスな相に存在させ、他の２種の受 容体を溶解して測定することが可能である。２種の可溶性受容体の内の１種を標 識し。

もう一方は標識しない０次に、可溶性受容体は非標識受容体に向けられる。

本発明によるＥ１特異性抗体を免疫検定法の原理に基づ＜Ｅｌの選択的定量的測 定のために使用する際には、少なくとも２種の異なる受容体と共にインキュベー トする０両方の受容体、例えば２樗のモノクローナル抗体はＥｌ持異性でなけれ ばならず、如何なる場合においても異なるエピトープ（結合部位）と結合する必 要がある。

２種の受容体の内の１種を固相に結合する。固相との結合は当業者に公知の常法 により行われる。さらに、可溶性の形態で存在する少なくとも１種の他の受容体 が用いられる。

該他の受容体は標識を有している。多種の受容体を用いる際には、その内の１種 類だけが標識を有する。受容体の標識は、当業者に公知の常法により行われる。

本発明によるテストキットにおける標識は慣用法、特に放射性標識、ビオチン結 合（ビオチン／アビジン）、計測可能な反応を起こす酵素、または化学発光化合 物あるいは蛍光化合物により行われる。酵素による標識は特に好ましく、とりわ けパーオキシダーゼまたはフォスファターゼによる標識が好ましい、特別な実施 態様においては、酵素による標識がこの抗体の第二酵素増幅システムへの導入を も可能にする（Ｃ，Ｊ、　５ｔａｎｌｅｙ；　Ｆ、　Ｐａｒｉｓ；＾、　Ｐｌｕ ｍｂ；＾、　ｋｌｅｂｂ；＾、　Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ、＾−ｅｒｉｅ≠■ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ：　Ｍ　１９８５；　Ｃ， Ｈ，５ｅｌｆ、Ｊ、　１ｍｓ＋ｕｎｏ１．　Ｍｅｔｈ、。

１９８５）　。

拳法の特に好ましい実施態様においては、Ｅｌと非特異的に結合し得る受容体、 または好ましくはＥｌと特異的に結合し得る受容体のどちらかを固相に結合させ る。

固相と結合したこの受容体は、次に、測定されるＥｌを含む溶液、および可溶性 の形態で存在しかつ標識された、Ｅｌと特異的に結合し得る抗体と共にインキュ ベートされる。

固相に結合した受容体がＥｌと非特異的に結合し得る場合には、Ｅｌだけでなく 他の抗原も固相と複合体を形成する。Ｅｌと特異的に結合し得る第二の抗体は、 それにも拘らずＥｌとだけ複合体を形成するので、Ｅ１分子だけが特に標識抗体 を有し、他の抗原は標識されない、固相を液相から分離した後に、このようにし て標識物を計測することでＥｌの内容量を測定することができる。

Ｅｌと特異的に結合し得る第一の受容体が固相に固定されている場合には、Ｅｌ だけが特異的に固相に結合する。可溶性のＥ１特異性の第二の受容体または抗体 と共にインキュベートする間に、該抗体もＥｌだけと反応する。従って他の抗原 は固相と殆ど結合しないために、この方法は非常に特異的であり、それにより非 常に精密な測定が可能である。これにより、Ｅｌは選択的に固相と結合し：他の 抗原は溶液中に留まる。さらに、Ｅｌと結合し得る可溶性の標識抗体はＥｌと複 合体を形成する。固相を液相から分離した後で、標識物によりＥｌの内容量を再 度非常に精密に測定することができる。特に好ましい実施態様においては、第三 の抗体を添加してさらに選択性を高める。第三の抗体は標識された第二の抗体に 向かう。

当業者に公知の、３種類の受容体を用いる別の変法も、Ｅｌに特異的に結合し得 る抗体を用いることができる。このことは、当業者には明かなことであり、これ 以上ここに述べる必要はない。

本発明による方法を実施するなめに用いられる抗体の少なくとも１種類はモノク ローナル抗体であることが好ましい。好ましい実施態様においては、モノクロー ナル抗体だけが受容体として用いられる。

Ｅｌに特異的に結合し得る抗体は固相に結合して存在するか、または可溶性の標 識された受容体または可溶性の標識されない受容体として存在することができる 。

この受容体は好ましくはモノクローナル抗体である。用いられる全ての受容体が モノクローナル抗体であることが特に好ましい。

本発明の方法並びにテストキットは自動分析システムに特に適しており、とりわ けバイオセンサーに基づくシステム、及びチップテクノロジー（ｅｈｉｐ　ｔｅ ｃｈｎｏｌｏｌＨｙ）を利用するシステムに適している。

以下の例により本発明をさらに詳細に説明する。

例−」２ ａ）　高純度Ｅ１によるモノクローナル抗体の調製高純度ヒトＥ１［ヒト膵臓か らの製造は、Ｓ、　Ｓｚｉｅｇｏｌｅｉｔ、“ヒト膵臓由来のコレステロール結 合タンパク質の精製および特性付け”、　Ｂｉｏｅｈｅ−、Ｊ、　２０７：５７ ３−５８２゜１９８２、に記載されている］をＰＢＳ中に溶解し、等量のフロイ ンドアジュバントと混和した。全ての場合において、この混合液１００μｇと６ 〜８週齢のＢａ１ｂ／ｃマウスの腹腔内および皮下に注射した。これらの注射を ３〜４週間の間隔で２度反復した。この試験計画では、肺臓摘出の３日前に、Ｐ ＢＳに溶解した１００μｇの高純度Ｅ１を、高純度Ｅ１で免疫したマウスの静脈 内に注射した。

約１億個の免疫マウス膵臓由来細胞を５千万個の脅髄腫細胞［Ｘ　６３−５ｐ８ −６５３．これは免疫グロブリンをまったく生合成しない細胞系であり、サルク 研究所の細胞配布センター（Ｓｉｌｋ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ、　Ｃｅ１ｌ　Ｄｉ ｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　Ｃｅｎｔｅｒ、　Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ　Ｃ＾９２１P２ ゜ ｕＳ＾）から入手可能である］と、ポリエチレングリコール（ＭＧ　３４００） の存在下で融合させた１ｗ＆合細胞を、各々２４の陥凹を含む８つのプレートに 播種した。これらの陥凹はそれぞれ、ピポキサンチン、アミノプテリンおよびチ ミジンを含有する栄養培地中に、同系の免疫マウス由来の肺臓細胞を５千万個含 んでいた。

１０〜１４日後に、ＥＬＩＳＡ、ウェスターン・プロット、凍結切片およびノ（ ラフイン切片により、これらの融合細胞く雑種細胞）の抗体含有上澄み液の高純 度ヒトＥ１に対する特異性をテストした。

Ｅｌだけに対するモノクローナル抗体を得るために、その上澄み液がＥ１以外の 抗原に対する抗体を含有しない雑種細胞を２回クローニングした。

ｂ）　免疫原性ペプチドによるモノクローナル抗体の調製アミノ酸配列Ｔｈｒ− Ｎｅｔ−Ｖａｌ−＾１ｔ−Ｃ１ｙ−Ｇｌｙ−＾５ｐ−１１ｅ−＾ｒｇを有するペ プチドを、メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）による固相合成により調製 し、上記の如く、このペプチドを６〜８週齢のＢａ１ｂ／ｃマウスに注射した。

上記の手順により、糞便および血清の双方から得られたヒトエラスターゼ１に対 して高い特異性を有するモノクローナル抗体を得た。

Ｅ１特異性モノクローナル抗体を用いた血漿中のＥｌの測定医−ノ 血漿中のＥｌをＥＬｒＳＡにより測定した。この目的のために、例１により得ら れたＥ１特異性モノクローナル抗体をｐＨ７，２でＰＢＳに溶解し、そして担体 としてのポリスチレン上に不動化させた。洗浄工程の後に、希釈しなＥ１含有血 漿または血清を添加した。血漿または血清は、ＰＢＳ、５ｍｍｏｌのＥＤＴＡお よび０．２％のツイーン（Ｔｗｅｅｎ　）　２０を含有するＩＩｆｒ液で希釈し た。

ＰＢＳおよび０．２％ツイーン２０による洗浄工程の後、抗体に結合したＥｌを 、やはりＥｌに結合しかつ０２％ツイーン２０を含有するＰＨ７，２のＰＢＳに 溶解したフォスファターゼとカップリングしたポリクローナル抗体と共に室温で １時間インキュベートした。別の洗浄ステップの後、ｐ−ニトロフェニルリン酸 ・２ナトリウム・６水和物を添加して、モノクローナル抗体がＥｌと反応した反 応容器中で光学密度の変化を測定した。

２種類の異なるＥ１特異性抗体を用いた血漿中のＥｌの測定一１ Ｅｌに対するモノクローナル抗体を例２に記載の如く担体に固定した。洗浄工程 の後、Ｅｌを含有する血清または血漿を前記モノクローナル抗体と共に、例２に 記載の条件下でインキュベートした。別の洗浄工程の後、本発明による第二のＥ １特異性モノクローナル抗体によりＥｌの結合を検出した。この第二のＥ１特異 性抗体はパーオキシダーゼと共有結合していた。洗浄工程およびパーオキシダー ゼの基質としてのＡＢＴＳの添加の後に、光学密度の変化を測定した。

伝−Ａ 手順は、酵素の替わりにビオチンを第二のＥ１特異性抗体にカップリングした以 外は、例３に記載の如く行った。基質を添加する前に、ノく−オキシダーゼーア ビジン複合体またはパーオキシダーゼ−ストレプトアビジン複合体を添加した。

これにより選択されたＥｌの測定では、Ｅｌだけの極めて特異的な測定が可能と なった６溶液中に含有される他の抗原は、本発明によるＥ１測定を妨げない。

！−約 本発明は、体液および糞便と反応する膵臓エラスターゼ１高特異性抗体を獲得す るための方法に関する。このような抗体は、アミノ酸配列Ｔｈｒ−Ｎｅｔ−Ｖａ ｌ−＾１ａ−Ｇｌｙ−ｃ＋ｙ−＾ｓｐ−［１ｅ−＾ｒｇを有する抗原または該抗 原の免疫学的に活性な部分ペプチドを用いた免疫により得られる。このような抗 体を含有するテストキットは、体液および／または糞便を用いた、慢性および急 性の膵炎、および膵繊維症の診断ならびに経過観察に適している。

国際調査報告 〉１頁の続き 特表平５−５０８７７０　（５） ６３０１　ヴエッテンベルク　２、ハイネルヴエー６３０６　ラングゲンス、オ イレンヴエーク　３

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. １．アミノ酸配列【配列があります】を有する抗原または該抗原の免疫学的に活 性な部分ペプチドを用いることを特徴とする、慣用法により体液および糞便中の エラスターゼ１と反応する抗エラスターゼ１モノおよび／またはポリクローナル 抗体を獲得するための方法。
2. ２．合成した部分ペプチドを用いることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
3. ３．スペーサーを用いて担体に結合させた部分ペプチドを用いることを特徴とす る、請求項１または２に記載の方法。
4. ４．前記担体としてペプチドを用いることを特徴とする、請求項３に記載の方法 。
5. ５．前記担体としてアルブミンまたはヘモシアニンを用いることを特徴とする、 請求項３または４に記載の方法。
6. ６．申請番号ＥＣＡＣＣ９０１２１９０６を有する、雑種細胞系。
7. ７．申請番号ＥＣＡＣＣ９０１２１９０７を有する、雑種細胞系。
8. ８．請求項１〜５のいずれかに記載の方法により得られる、抗エラスターゼ１抗 体。
9. ９．申請番号ＥＣＡＣＣ９０１２１９０６およびＥＣＡＣＣ９０１２１９０７を 有する雑種細胞系から得られる、抗エラスターゼ１抗体。
10. １０．請求項８または９に記載の抗体を少なくとも１種類含む免疫学的テストキ ット。
11. １１．体液および／または糞便を用いて慢性膵炎、急性膵炎および膵繊維症の診 断ならびに経過観察するための、請求項１０に記載の免疫学的テストキット。