JPH0634755B2 - カルシウムイオン定量用試薬 - Google Patents
カルシウムイオン定量用試薬Info
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- JPH0634755B2 JPH0634755B2 JP61036123A JP3612386A JPH0634755B2 JP H0634755 B2 JPH0634755 B2 JP H0634755B2 JP 61036123 A JP61036123 A JP 61036123A JP 3612386 A JP3612386 A JP 3612386A JP H0634755 B2 JPH0634755 B2 JP H0634755B2
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は，カルシウムイオン定量用試薬に関するもので
ある。
ある。
（従来の技術） 現在，臨床検査の分野で，副甲状腺の疾患，閉塞性黄疸
等の診断の目的で血中のカルシウムイオン濃度が定量さ
れている。その定量は大きく２つに分けられる。１つは
原子吸光法，電極法に代表される機器分析法による定量
であり，さらに１つは，オルトクレゾールフタレインコ
ンプレキソン法（以後OCPC法と略記する。）などの化学
的手法による定量である。
等の診断の目的で血中のカルシウムイオン濃度が定量さ
れている。その定量は大きく２つに分けられる。１つは
原子吸光法，電極法に代表される機器分析法による定量
であり，さらに１つは，オルトクレゾールフタレインコ
ンプレキソン法（以後OCPC法と略記する。）などの化学
的手法による定量である。
一方，特開昭57-58893号公報には，コリンオキシダーゼ
を含有する分析用組成物が提案されている。しかしなが
ら，この組成物はコリン又はベタインアルデヒドを定量
するものであって，カルシウムイオンを定量するもので
はない。
を含有する分析用組成物が提案されている。しかしなが
ら，この組成物はコリン又はベタインアルデヒドを定量
するものであって，カルシウムイオンを定量するもので
はない。
（発明が解決しようとする問題点） 前記の機器分析法による定量では比較的正確な結果が得
られるが，高価な機器を特別に必要とし，操作も繁雑で
ある。
られるが，高価な機器を特別に必要とし，操作も繁雑で
ある。
一方，前記したOCPC法などによる定量では，特別な分析
装置を必要とせず，簡単な比色計で定量可能であるとい
う理由から普及しているが，発色の度合いが，気温やpH
などによって変化する他にカルシウムイオンに対する特
異性に欠けるため，共存する物質の影響が避けられず
に，大きな誤差要因を含んだ結果しか得られないという
問題点があった。
装置を必要とせず，簡単な比色計で定量可能であるとい
う理由から普及しているが，発色の度合いが，気温やpH
などによって変化する他にカルシウムイオンに対する特
異性に欠けるため，共存する物質の影響が避けられず
に，大きな誤差要因を含んだ結果しか得られないという
問題点があった。
（問題点を解決するための手段） そこで本発明者らは，このような点に鑑み，簡単に，か
つ正確にカルシウムイオンを定量することができる試薬
を提供することを目的として鋭意研究した結果，レシチ
ン，ホスホリパーゼＤ及びコリンオキシダーゼからなる
試薬が試料中のカルシウムイオン濃度に比例して発現
し，正確なカルシウムイオンが定量できることを見い出
し，本発明を完成した。
つ正確にカルシウムイオンを定量することができる試薬
を提供することを目的として鋭意研究した結果，レシチ
ン，ホスホリパーゼＤ及びコリンオキシダーゼからなる
試薬が試料中のカルシウムイオン濃度に比例して発現
し，正確なカルシウムイオンが定量できることを見い出
し，本発明を完成した。
すなわち，本発明はレシチン，ホスホリパーゼＤ及びコ
リンオキシダーゼからなるカルシウムイオン定量用試薬
を要旨とするものである。
リンオキシダーゼからなるカルシウムイオン定量用試薬
を要旨とするものである。
本発明の試薬はレシチン，ホスホリパーゼＤ及びコリン
オキシダーゼからなり，その他通常の賦活剤などの添加
物及び緩衝液が含有されている。
オキシダーゼからなり，その他通常の賦活剤などの添加
物及び緩衝液が含有されている。
本発明にいうレシチンとは，別名1,2−ジアシル−sn−
グリセロ−(3)−ホスホコリンと言われる〔1979年発行
の『生化学データブックＩ』第８３１頁（東京化学同
人）参照〕。
グリセロ−(3)−ホスホコリンと言われる〔1979年発行
の『生化学データブックＩ』第８３１頁（東京化学同
人）参照〕。
本発明に用いられるホスホリパーゼＤとしては，例え
ば，キヤベツ，ニンジン，ブタ膵などの動植物由来，ス
トレプトマイセス・クロモフアカス（Streptomyces Cho
romofuscus）などの微生物由来のものがあげられ，ま
た，コリンオキシダーゼとしては，例えば，アースロバ
クター・グラビホーミス（Arthrobacter globiformi
s），アルカリゲネス・スピーシーズ（Alcaligenes S
P.）などの微生物由来のものがあげられる。
ば，キヤベツ，ニンジン，ブタ膵などの動植物由来，ス
トレプトマイセス・クロモフアカス（Streptomyces Cho
romofuscus）などの微生物由来のものがあげられ，ま
た，コリンオキシダーゼとしては，例えば，アースロバ
クター・グラビホーミス（Arthrobacter globiformi
s），アルカリゲネス・スピーシーズ（Alcaligenes S
P.）などの微生物由来のものがあげられる。
本発明の試薬の各成分の濃度としては，例えば，レシチ
ンを0.2〜10.0mg/ml，ホスホリパーゼＤを0.01〜1.0U/m
l，コリンオキシダーゼを0.1〜10.0U/ml使用すればよ
い。特にレシチンを0.4〜2.0mg/ml，ホスホリパーゼＤ
を0.05〜0.5U/ml，コリンオキシダーゼを0.5〜2.0U/ml
使用することが好ましい。
ンを0.2〜10.0mg/ml，ホスホリパーゼＤを0.01〜1.0U/m
l，コリンオキシダーゼを0.1〜10.0U/ml使用すればよ
い。特にレシチンを0.4〜2.0mg/ml，ホスホリパーゼＤ
を0.05〜0.5U/ml，コリンオキシダーゼを0.5〜2.0U/ml
使用することが好ましい。
本発明の試薬の測定原理を次に示す。
反応式におけるホスホリパーゼＤの活性発現にはカル
シウムイオンの存在が必須であり，ホスホリパーゼＤの
活性はカルシウムイオンの濃度に比例する。最終的に反
応式において生成したH2O2を過酸化水素電極で定量す
るか，またはある色原体の存在下ペルオキシダーゼを作
用させ，色調の変化を比色定量すればカルシウムイオン
の定量は完了する。特に後者が特別な装置を必要としな
いという点で日常の検査には適している。その原理を下
に示す。
シウムイオンの存在が必須であり，ホスホリパーゼＤの
活性はカルシウムイオンの濃度に比例する。最終的に反
応式において生成したH2O2を過酸化水素電極で定量す
るか，またはある色原体の存在下ペルオキシダーゼを作
用させ，色調の変化を比色定量すればカルシウムイオン
の定量は完了する。特に後者が特別な装置を必要としな
いという点で日常の検査には適している。その原理を下
に示す。
上記で用いられるペルオキシダーゼとしては，例えば西
洋ワサビ由来のものがあげられ，その濃度としては，例
えば10〜300U/dl，好ましくは100〜250U/dlである。
洋ワサビ由来のものがあげられ，その濃度としては，例
えば10〜300U/dl，好ましくは100〜250U/dlである。
本発明の試薬を用いてカルシウムイオンを定量するに
は，例えば，まず，試薬を約３分間保温（25℃，30℃，
37℃のいずれの温度でもよい。）したのち，サンプルを
加えて約１０分間反応させる。次に反応停止液を添加し
た後，生成したH2O2を上記方法により定量すればよい。
色調の変化を比色定量してH2O2を定量する場合，例え
ば，上記した色原体の存在下ペルオキシダーゼを作用さ
せ，500nmにおける吸光度の上昇を測定すればよい。
は，例えば，まず，試薬を約３分間保温（25℃，30℃，
37℃のいずれの温度でもよい。）したのち，サンプルを
加えて約１０分間反応させる。次に反応停止液を添加し
た後，生成したH2O2を上記方法により定量すればよい。
色調の変化を比色定量してH2O2を定量する場合，例え
ば，上記した色原体の存在下ペルオキシダーゼを作用さ
せ，500nmにおける吸光度の上昇を測定すればよい。
（実施例） 次に本発明を実施例によって具体的に説明する。
実施例１ NaCl120mM，キヤベツ由来のホスホリパーゼＤ（ベーリ
ンガーマンハイム山ノ内株式会社より購入）0.15U/ml，
アルカリゲネス・スピーシーズ由来のコリンオキシダー
ゼ（東洋紡績株式会社より購入）1.35U/ml，西洋ワサビ
由来のペルオキシダーゼ（東洋紡績株式会社より購入）
200U/dl，レシチン0.8mg/ml，４−アミノアンチピリン
７mg/dl，フエノール40mg/dl,50mMトリス緩衝液（pH7.
4）から成る試薬を調製した。
ンガーマンハイム山ノ内株式会社より購入）0.15U/ml，
アルカリゲネス・スピーシーズ由来のコリンオキシダー
ゼ（東洋紡績株式会社より購入）1.35U/ml，西洋ワサビ
由来のペルオキシダーゼ（東洋紡績株式会社より購入）
200U/dl，レシチン0.8mg/ml，４−アミノアンチピリン
７mg/dl，フエノール40mg/dl,50mMトリス緩衝液（pH7.
4）から成る試薬を調製した。
次いであらかじめ３０℃に保温した上記試薬0.45mlとサ
ンプル0.015ml（既知濃度のカルシウム標準液）を混和
し，３０℃で１０分間反応させた。その後，0.2MのEDTA
0.10mlを添加して反応を停止し，500nmにおける吸光度
を測定した。
ンプル0.015ml（既知濃度のカルシウム標準液）を混和
し，３０℃で１０分間反応させた。その後，0.2MのEDTA
0.10mlを添加して反応を停止し，500nmにおける吸光度
を測定した。
その結果を第１図に示す。第１図はカルシウム濃度と吸
光度との相関関係を示すもので，10mg/dlまでの良好な
直線性を有することが判明した。
光度との相関関係を示すもので，10mg/dlまでの良好な
直線性を有することが判明した。
次に上記と同一のカルシウムイオン標準液をカルシウム
イオン電極法を用いて測定し，その相関関係を調べた。
イオン電極法を用いて測定し，その相関関係を調べた。
その結果を第２図に示す。
第２図により，本発明の試薬によって得られた値とカル
シウムイオン電極法によって得られた値とは良好な相関
関係を示していることが明らかである。
シウムイオン電極法によって得られた値とは良好な相関
関係を示していることが明らかである。
（発明の効果） 本発明の試薬は，簡便で，かつ正確にカルシウムイオン
を定量することができ，特に副甲状腺の疾患，閉塞性黄
疸等の診断に適用できる。
を定量することができ，特に副甲状腺の疾患，閉塞性黄
疸等の診断に適用できる。
第１図は，本発明の試薬におけるカルシウムイオン標準
液と500nmにおける１０分間の吸光度変化量との関係を
示す図で，第２図は，カルシウムイオン電極法における
測定値と本発明の試薬における測定値との関係を示す図
である。
液と500nmにおける１０分間の吸光度変化量との関係を
示す図で，第２図は，カルシウムイオン電極法における
測定値と本発明の試薬における測定値との関係を示す図
である。
Claims (1)
- 【請求項１】レシチン，ホスホリパーゼＤ及びコリンオ
キシダーゼからなるカルシウムイオン定量用試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61036123A JPH0634755B2 (ja) | 1986-02-19 | 1986-02-19 | カルシウムイオン定量用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61036123A JPH0634755B2 (ja) | 1986-02-19 | 1986-02-19 | カルシウムイオン定量用試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62195297A JPS62195297A (ja) | 1987-08-28 |
| JPH0634755B2 true JPH0634755B2 (ja) | 1994-05-11 |
Family
ID=12461003
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61036123A Expired - Lifetime JPH0634755B2 (ja) | 1986-02-19 | 1986-02-19 | カルシウムイオン定量用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0634755B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2533236B2 (ja) * | 1990-11-20 | 1996-09-11 | ユニチカ株式会社 | カルシウムイオン測定用試薬 |
| US5460972A (en) * | 1991-04-08 | 1995-10-24 | Research Foundation Of The State University Of New York | Ionized magnesium2+ concentrations in biological samples |
| JPH06335400A (ja) * | 1993-05-31 | 1994-12-06 | Kyowa Medex Co Ltd | イオン化カルシウムの測定法 |
| US6387646B1 (en) | 1998-12-11 | 2002-05-14 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Reagent compositions for measuring electrolyte |
| CN100354630C (zh) * | 2002-10-31 | 2007-12-12 | 世诺临床诊断制品株式会社 | 样品中钙的测定试剂和测定方法 |
| CN100434913C (zh) * | 2006-07-25 | 2008-11-19 | 暨南大学 | 基于五电极法的尿路结石智能诊断仪 |
-
1986
- 1986-02-19 JP JP61036123A patent/JPH0634755B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BIOCHEMICHAL JOURNAL=1967 * |
| JOURNAL OF BIOCHEMISTRY=1978 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62195297A (ja) | 1987-08-28 |
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