JPH06509469A - 生物検定法 - Google Patents
生物検定法Info
- Publication number
- JPH06509469A JPH06509469A JP5502083A JP50208393A JPH06509469A JP H06509469 A JPH06509469 A JP H06509469A JP 5502083 A JP5502083 A JP 5502083A JP 50208393 A JP50208393 A JP 50208393A JP H06509469 A JPH06509469 A JP H06509469A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- embryo
- method characterized
- test substance
- microcannula
- rat
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 title claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 65
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims description 47
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 39
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 36
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims description 17
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 16
- 230000004087 circulation Effects 0.000 claims description 12
- 210000001325 yolk sac Anatomy 0.000 claims description 11
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 9
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims description 7
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims description 7
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims description 7
- 210000003278 egg shell Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 5
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims description 5
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 claims description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 4
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 238000011161 development Methods 0.000 claims 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 claims 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 claims 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 claims 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 4
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 210000000991 chicken egg Anatomy 0.000 description 2
- IJOOHPMOJXWVHK-UHFFFAOYSA-N chlorotrimethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)Cl IJOOHPMOJXWVHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical class NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002870 angiogenesis inducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000004020 conductor Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000383 hazardous chemical Substances 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 230000008558 metabolic pathway by substance Effects 0.000 description 1
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000005871 repellent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 239000005051 trimethylchlorosilane Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
- G01N33/5088—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms of vertebrates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
志物棟定迭
本発明は、潜在的に生物にとって有害な物質の生物検定法に関する。
生物検定法を実施する際に用いられる１つの方法として、ラット胎芽を抽出し、
テスト物質を含有する養分培地内に浮遊させながらこのラット胎芽を培養する方
法がある。
通常の環境下では、胚臓器卵黄嚢の存在により、現在使用されているようなラッ
ト胎芽のような生きている卵子着床後胎芽に物質を直接投与することは難しい。
卵黄嚢は、テスト物質を代謝させ、テスト物質そのものよりも成る種の物質の誘
導体を受け取る可能性のある酵素を含んでいる。
さらに、テスト物質は、卵黄嚢内の代謝生成物と組み合って純粋のテスト物質と
異なる性質をもつ付加化合物を生成する可能性がある。さらなる問題は、テスト
物質・代謝生成物中間生成物の引き続く物質代謝である。これらおよび他の反応
はテスト物質の代謝活性化あるいは代謝非活性化のいずれかの原因となり得る。
一般的に組織培養で成長した独立細胞個体群または組織ホモジエネートの抽出物
を含む試験管生物検定法はこれらの細胞個体群あるいはホモジエネート内の種々
の系についての潜在的に危険な化学物質の影響について価値ある情報を提供する
が、潜在的に突然変異誘発性、発癌性、脈管形成性のある物質についての生物検
定法は、多細胞組織あるいは全動物組織で実施するのが好ましい。
本発明は、現存の試験管法よりも利点があり、普通に使用されているような多細
胞組織または全動物組織を使用する必要がない試験管生物検定法を提供する。
しかしながら、このような組織は、バックアップとしであるいは完全な生物検定
法のためにも望ましいかも知れない。一般的に言って、本発明の方法がその物質
は有害であるということを示している場合には、さらなるテストは必要ない。
本発明は、いかなる中間物質代謝によっても改質されないように試薬を胎芽の循
環に通し、培地内で胎芽を培養し、胎芽の発育を評定する生物検定法を包含す哨
乳類胎芽、たとえば、ラット胎芽を使用するとき、この方法では、胎芽の臓器卵
黄溝をバイパスしながら試薬を胎芽に注入し、試薬が臓器卵黄嚢物質代謝によっ
て改質されないようにしてもよい。
卵黄溝は卵黄循環のカニュレーションによってバイパスしてもよい。カニュレー
ション中、胎芽は顕微鏡ステージ上のくぼみ内に置いてもよい。この（ぼみは寒
天で作ってもよいし、卵黄溝面の下の血管を観察するときには染色してコントラ
ストを与えてもよい。くぼみを加熱してもよい。
卵黄循環のカニュレーションはマイクロカニユーレで行ってもよ（、このマイク
ロカニユーレは１〜２μｍの先端内径を持ち得る。
マイクロカニユーレをシリコン処理剤で被覆してもよい。
マイクロカニユーレは、マイクロ注射ポンプに接続してもよいし、蛍光染料、た
とえば、フルオレセインまたはローダミンからなり得るテスト物質を注入し、テ
スト物質が満足できる状態で注入されたかどうかをチェックするのにも用い得る
。
１マイクロリツトル以下の全体積のテスト物質を胎芽に注入してもよい。
胎芽は、１０〜１１日前のウィスターラット受胎産物であってもよい。
テスト物質は４分間にわたって胎芽に注入してもよい。
テスト物質の注入後、ラット胎芽は、たとえば、ゲンタマイシン、ペニシリン、
ストレプトマイシンのような抗生物質を含んだ熱非活性化ラット血清内で培養し
てもよい。
胎芽がラット受胎産物でない場合には、抗生物質を含む熱非活性化同種血清内で
胎芽を培養してもよい。
さもなければ、ラット受胎産物であるか否かを問わず、胎芽を合成培地または半
合成培地内で培養してもよい。
胎芽としては、臓器卵黄溝で取り囲まれていない、ニワトリ受精卵の胎芽を使用
してもよい。試薬は、胚性循環、おそらくは卵黄循環あるいは塩素アラントイン
酸血管へ直接マイクロカニュレーションなどによって従来通りに投与し得る。
また、卵内容を卵殻からプラスチック容器に入れ、その中で培養してもよし屯。
あるいは、卵殻に窓をあけて胎芽にアクセスしてもよい。
しかしながら、試薬を胎芽に近接した卵白に導入することによってマイクロカニ
ュレーションの必要性を避けることもできる。
直接的なカニュレーション以外の手段で処理して試薬が胎芽内への移入にも耐え
て改質されないようにしたサンプル胎芽をテストする必要があるかも知れないが
、これは一般に多重マイクロカニュレーションを実施するよりも容易な作業とな
ろう。
テスト物質の効果は免疫学的生物検定法、生化学的生物検定法、細胞推計学的生
物検定法を含み得る定量化手段によって決定し得る。
生化学的生物検定法は蛋白質、ＤＮＡ、ＤＮＡ合成、蛋白質合成および酵素合成
を含み、細胞推計学的生物検定法はクラウンランプ測定、原節数測定、卵黄溝直
径測定および卵黄循環評価を含み得る。細胞推計学生物検定法は、付加的に、株
化細胞推計学的評価式生物検定法を含み得る。
本方法は、特に発育中の胎芽にとって有害なファクタを評価したり、脈管形成、
非脈管形成ファクタを評価するのにも使用し得る。臓器卵黄溝も、早期発育段階
でマイクロカニユーレによって胎芽心臓のカニュレーションによってバイパスし
てもよい。テスト物質の脈管形成活性度は発育中の血管系の形態計測によって評
価できる。
テスト物質は放射線ラベル、たとえば、トリチウム化サイミジンを添付してから
胎芽心臓へ注入してもよい。次に、胎芽を均質化し、こうして得た酸不溶性成分
を液体シンチレーション分光測光法にかけ、テスト物質に全質量応答性を試験管
内評価してもよい。
本発明は、また、この方法を実施するためのテスト・キットも包含する。このテ
スト・キットは、マイクロカニユーレ、染色寒天くぼみ、培養基、マイクロ注射
ポンプ、マイクロマニピュレータおよび顕微鏡用の加熱ステージ・切開ヘッドを
含むワークステーション、所望に応じて顕微鏡を含み得る。
本発明による生物検定法の代表的な１つを以下に説明する。
本方法は、９〜１３日前の卵子着床後ウィスターラット胎芽へ胎芽の臓器卵黄溝
をバイパスして臓器卵黄溝による物質の改質を避けながらテスト物質および適当
な対昭物質を注入し、注入済みの胎芽を培地で培養し、引き続く胎芽発育を定量
化することからなる。
卵黄溝のバイパスは卵黄循環のマイクロカニュレーションによって行う。カニユ
ーレは、その内容物の流れが血流方向と一緒になるように挿入する。カニュレー
ションで用いるマイクロカニユーレは、１〜２ＬＬｍ、好ましくは、１．２ＬＬ
ｍの先端内径を有する。代表的には、マイクロカニユーレはホウケイ酸塩で作り
、トリメチルクロロシランで撥水コーティングを行ってテスト物質ならびに胎芽
組織がカニユーレの壁面に付着するのを防いでもよい。
マイクロカニユーレはマイクロ注射ポンプに接続して１秒間から４分間にわたっ
てナノリットルあるいはピコリットルの量を給送する。テスト物質はフルオレセ
インまたはローダミンのような蛍光染料を含み、テスト物質が満足できる状態で
注入されたかどうかを調べるために胎芽をチェックする。
テスト物質は、１マイクロリツトル以下の全体積で胎芽に注入する。これよりも
かなり多い体積は本方法の人為結果に通じ、生物検定法が完了する前の胎芽染色
の原因となり得る。
１０．５日間で、ラット受胎生産物は卵黄溝に無視し得るほどの血管系を持つが
、これは潜在的な脈管形成の評価に利用できる。
カニュレーション後、ゲンタマイシン、ペニシリンおよびストレプトマイシンの
ような抗生物質を含む熱非活性化ラット血清のローラボトル内で胎芽を培養する
。しかしながら、合成培地または半合成培地のような任意の適当な培地で培養で
きると適切であろう。
テスト物質の効果は、免疫学的生物検定法、生化学的生物検定法および細胞推計
学的生物検定法で決定される。生化学的生物検定法は、たとえば、全蛋白質およ
び全ＤＮＡ内容ならびに蛋白質、ＤＮＡ合成について行い得、テスト物質に対す
る胎芽の全質量応答性を評価することができる。しかしながら、特殊な酵素また
は蛋白質を生物検定することができ、有毒化／無毒化反応に伴う生化学器官系の
導入でなされる評価を行うと適切であろう。このようなシステムの１つとしては
Ｐ２Ｓ５ Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅシステムがある。
ＤＮＡ内容は４゛−６−ジアミンノー２−フェニリンドール（ＤＡＰＩ）で生物
検定できる。
細胞推計学的生物検定法は、クラウンランプ測定、原節数測定、卵黄溝直径測定
および卵黄循環の視覚検査を含む。
テスト物質は、トリチウム化サイミジンのような放射線ラベルを添付してから胎
芽心臓に注入できる。次に、胎芽を均質化し、それで得た酸不溶性成分を液体シ
ンチレーション分光測光法にかけ、テスト物質に対する全質量応答性を試験管内
評価する。
本生物検定法を実施するためのテスト・キットは、マイクロカニユーレ、マイク
ロカニュレーション作業のために胎芽を保持するための滅菌染色ブラック寒天ブ
ロック、培地サツシェ、マイクロ注射ポンプ、マイクロマニピュレータおよび切
開ヘッド、加熱ステージを包含する顕微鏡からなるワークステーションとを包含
する。加熱は、注入作業中に胎芽の生活能力を維持するのに望ましく、また、実
験室を本生物検定法に充分な温度に維持するのに好ましい。
生物検定法を実施するのに用いられる１つの方法は、ラット胎芽を抽出し、それ
らをテスト物質を含有する養分培地に浮かべながら培養することである。
哺乳類の胎芽、たと久ば、ラット胎芽を用いる場合、本方法では、胎芽の臓器卵
黄溝をバイパスして試薬が臓器卵黄嚢物質代謝によって改質されないようにしな
がら試薬を胎芽に注入する。
胎芽としては、臓器卵黄溝で取り囲まれていない、ニワトリ受精卵の胎芽を使用
してもよい。試薬は、卵黄循環に直接マイクロカニュレーションなどによって従
来通りに投与し得る。また、卵内容を卵殻からプラスチック容器に入れ、その中
で培養してもよいし、あるいは、卵殻に窓をあけて胎芽にアクセスしてもよい。
しかしながら、試薬な胎芽に接近した卵白内へ導入することによってマイクロカ
ニュレーションの必要性を遵けることもできる。
直接的なカニュレーション以外の手段で処理して試薬が胎芽内への移入にも耐え
て改質されないようにしたサンプル胎芽をテストする必要があるかも知れないが
、これは一般に多重マイクロカニュレーションを実施するよりも容易な作業とな
ろう。
補正書の写し（翻訳文）提出書（特許法１８４条の８）平成６年１月６日切へ
Claims (30)
- １．いかなる中間物質代謝によっても改質されないように試薬を胎芽の循環に通 し、培地内で胎芽を培養し、胎芽の発育を評定することを特徴とする生物検定方 法。
- ２．請求の範囲第１項記載の方法において、胎芽が哺乳類胎芽であることを特徴 とする方法。
- ３．請求の範囲第２項記載の方法において、哺乳類胎芽がラット胎芽であること を特徴とする方法。
- ４．請求の範囲第３項記載の方法において、ラット胎芽がウィンスターラット受 胎生産物であることを特徴とする方法。
- ５．請求の範囲第３項または第４項記載の方法において、胎芽が１０〜１１日前 のものであることを特徴とする方法。
- ６．請求の範囲第１項から第５項までのいずれか１つに記載の方法において、胎 芽が臓器卵黄嚢であり、胎芽の臓器卵黄嚢をバイパスして試薬が臓器卵黄嚢物質 代謝によって改質されないようにしながら胎芽へ試薬を注入することを特徴とす る方法。
- ７．請求の範囲第６項記載の方法におし、て、卵黄嚢を卵黄循環のカニュレーシ ョンによってバイパスすることを特徴とする方法。
- ８．請求の範囲第７項記載の方法において、カニュレーション中、胎芽を顕微鏡 ステージ上のくぼみに置くことを特徴とする方法。
- ９．請求の範囲第８項記載の方法において、くぼみが寒天で作ってあることを特 徴とする方法。
- １０．請求の範囲第９項記載の方法において、くぼみを染色して、卵黄嚢表面下 の血管を観察するときにコントラストを与えることを特徴とする方法。
- １１．請求の範囲第８項から第１０項までのいずれか１つに記載の方法において 、くぼみを加熱することを特徴とする方法。
- １２．請求の範囲第１項から第１１項までのいずれか１つに記載の方法において 、卵黄循環をマイクロカニューレでカニュレーションすることを特徴とする方法 。
- １３．請求の範囲第１２項記載の方法において、マイクロカニューレが１〜２μ ｍの先端内径を有することを特徴とする方法。
- １４．請求の範囲第１２項または第１３項記載の方法において、マイクロカニュ ーレがシリコン処理剤で被覆してあることを特徴とする方法。
- １５．請求の範囲第１２項から第１４項までのいずれか１つに記載の方法におい て、マイクロカニューレを注入ポンプに接続することを特徴とする方法。
- １６．請求の範囲第１２項から第１５項までのいずれか１つに記載の方法におい て、マイクロカニューレを用いて蛍光染料を含有するテスト物質を注入すること を特徴とする方法。
- １７．請求の範囲第１項から第１６項までのいずれか１つに記載の方法において 、１マイクロリットル以下の全体積を注入することを特徴とする方法。
- １８．請求の範囲第１項から第１７項までのいずれか１つに記載の方法において 、テスト物質を４分間にわたって胎芽に注入することを特徴とする方法。
- １９．請求の範囲第１項から第１８項までのいずれか１つに記載の方法において 、胎芽がラット胎芽である場合、抗生物質を含有する熱非活性化ラット血清内で 胎芽を培養することを特徴とする方法。
- ２０．請求の範囲第１項から第１８項までのいずれか１つに記載の方法において 、胎芽を合成培地または半合成培地で培養することを特徴とする方法。
- ２１．請求の範囲第１項記載の方法において、臓器卵黄嚢によって取り囲まれて いない胎芽を利用することを特徴とする方法。
- ２２．請求の範囲第２１項記載の方法において、ニワトリ受精卵の胎芽を利用す ることを特徴とする方法。
- ２３．請求の範囲第２１項または第２２項記載の方法において、試薬を胚外循環 へ直接マイクロカニュレーションによって投与することを特徴とする方法。
- ２４．請求の範囲第２２項記載の方法において、卵内容を卵殻からプラスチック 容器へ移し、そこで培養することを特徴とする方法。
- ２５．請求の範囲第２２項記載の方法において、卵殻に窓をあけて胎芽にアクセ スすることを特徴とする方法。
- ２６．請求の範囲第２１項記載の方法において、試薬を卵白に導入することを特 徴とする方法。
- ２７．請求の範囲第１項から第２６項までのいずれか１つに記載の方法において 、テスト物質に放射線ラベルを添付することを特徴とする方法。
- ２８．請求の範囲第２８項記載の方法において、テスト物質を胎芽心臓へ注入す ることを特徴とする方法。
- ２９．請求の範囲第２８項記載の方法において、胎芽をテスト物質の効果の評価 のために均質化して酸不溶性留分を得、それを液体シンチレーション分光測光法 にかけ、テスト物質に対する全質量応答性を試験管内評価することを特徴とする 方法。
- ３０．生物検定法を実施するためのテスト・キットであり、マイクロカニューレ と、染色した寒天くぼみと、培地と、マイクロ注射ポンプ、マイクロマニピュレ ータ、顕微鏡用加熱ステージおよび切開ヘッドからなるワークステーションとを 包含することを特徴とするテスト・キット。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB9114638.1 | 1991-07-06 | ||
| GB919114638A GB9114638D0 (en) | 1991-07-06 | 1991-07-06 | Bioassay method |
| GB9114955.9 | 1991-07-11 | ||
| GB919114955A GB9114955D0 (en) | 1991-07-11 | 1991-07-11 | Bioassay method |
| PCT/GB1992/001210 WO1993001272A2 (en) | 1991-07-06 | 1992-07-03 | Bioassay method |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06509469A true JPH06509469A (ja) | 1994-10-27 |
Family
ID=26299196
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5502083A Pending JPH06509469A (ja) | 1991-07-06 | 1992-07-03 | 生物検定法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0594660A1 (ja) |
| JP (1) | JPH06509469A (ja) |
| AU (1) | AU2230992A (ja) |
| CA (1) | CA2112897A1 (ja) |
| IE (1) | IE922172A1 (ja) |
| WO (1) | WO1993001272A2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006103988A1 (ja) * | 2005-03-25 | 2006-10-05 | Bio Frontier Screening, Inc | 外部刺激の評価方法 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995006716A1 (en) * | 1993-08-30 | 1995-03-09 | Northwestern University | Rat pluripotent embryonic stem cells and method of obtaining and using same |
| DE19606207A1 (de) * | 1996-02-21 | 1997-08-28 | Univ Duesseldorf H Heine | Verfahren zur Bestimmung der Phototoxizität und/oder Photosensibilität von Stoffen oder Stoffgemischen sowie dessen Verwendung |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3530336A1 (de) * | 1985-08-24 | 1987-02-26 | Wittmann J Dr | Verfahren zur kultivierung des gefluegelembryos |
-
1992
- 1992-07-03 AU AU22309/92A patent/AU2230992A/en not_active Abandoned
- 1992-07-03 EP EP92914060A patent/EP0594660A1/en not_active Withdrawn
- 1992-07-03 JP JP5502083A patent/JPH06509469A/ja active Pending
- 1992-07-03 IE IE922172A patent/IE922172A1/en not_active Application Discontinuation
- 1992-07-03 WO PCT/GB1992/001210 patent/WO1993001272A2/en not_active Ceased
- 1992-07-03 CA CA 2112897 patent/CA2112897A1/en not_active Abandoned
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006103988A1 (ja) * | 2005-03-25 | 2006-10-05 | Bio Frontier Screening, Inc | 外部刺激の評価方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0594660A1 (en) | 1994-05-04 |
| AU2230992A (en) | 1993-02-11 |
| WO1993001272A2 (en) | 1993-01-21 |
| IE922172A1 (en) | 1993-01-13 |
| WO1993001272A3 (en) | 1993-03-18 |
| CA2112897A1 (en) | 1993-01-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mead et al. | Proliferation assays (BrdU and EdU) on skeletal tissue sections | |
| Auerbach et al. | Assays for angiogenesis: a review | |
| Norrby | In vivo models of angiogenesis | |
| Eisenberg et al. | Bone marrow cells transdifferentiate to cardiomyocytes when introduced into the embryonic heart | |
| Mangiavini et al. | Analysis of mouse growth plate development | |
| WO1994003495A1 (en) | Noncolorimetric histoculture method for predicting drug response of tumors | |
| Krishnan | Histochemical studies on reproductive and nutritional cycles of the holothurian, Holothuria scabra | |
| CN102057037B (zh) | 平滑肌干细胞的分离方法 | |
| Roopesh et al. | High‐throughput production of liver parenchymal microtissues and enrichment of organ‐specific functions in gelatin methacrylamide microenvironment | |
| Takács et al. | Isolation and micromass culturing of primary chicken chondroprogenitor cells for cartilage regeneration | |
| JP2014223061A (ja) | 肝細胞培養方法 | |
| JPH06509469A (ja) | 生物検定法 | |
| Woloszyk et al. | Angiogenesis within stem cell–seeded silk scaffolds cultured on the chorioallantoic membrane and visualized by 3D imaging | |
| Wilson et al. | Experimental metastasis assays in the chick embryo | |
| JP3077628B2 (ja) | 細胞毒性試験方法 | |
| Meda | Assaying the molecular permeability of connexin channels | |
| Lencinas et al. | Collagen gel analysis of epithelial–mesenchymal transition in the embryo heart: an in vitro model system for the analysis of tissue interaction, signal transduction, and environmental effects | |
| Al-Thani et al. | Effects of an acute in vivo application of concanavalin A on the migration of avian primordial germ cells | |
| Cui et al. | Electroporation and EGFP labeling of gastrulating quail embryos | |
| Kalthoff et al. | Mitochondria and polarity in the egg of Smittia spec.(Diptera, Chironomidae): UV irradiation, respiration measurements, ATP determination and application of inhibitors | |
| Liu et al. | Studying macrophages in the murine steatotic liver using flow cytometry and confocal microscopy | |
| AU2006329837B2 (en) | Microaggregates including endothelial cells | |
| Kiyomoto et al. | Commitment and response to inductive signals of primary mesenchyme cells of the sea urchin embryo | |
| EP4685484A1 (en) | Method, assay and use of alpha-1-acid glycoprotein for determining the binding capacity of stem cells | |
| RU2763845C1 (ru) | Способ оценки функционального состояния лимфоцитов периферической крови |