JPH07505870A

JPH07505870A - 新規テトラヒドロカンナビノール誘導体，タンパクおよびポリペプチドテトラヒドロカンナビノール誘導共役体および標識

Info

Publication number: JPH07505870A
Application number: JP5517677A
Authority: JP
Inventors: ビューチラー、ケネス・フランシス; モイ、シ・シ
Original assignee: バイオサイト・ダイアグノスティックス・インコーポレイテッド
Priority date: 1992-04-06
Filing date: 1993-03-31
Publication date: 1995-06-29
Also published as: EP0644884A4; CA2132445A1; AU4045393A; EP0644884A1; US5237057A; US5302703A; WO1993020070A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、体液試料中のテトラヒドロカンナビノールの選択的代謝産物を検出するための、免疫学的測定を含む、リガンドレセプターアッセイの分野に関する。

更に詳しくは、本発明は、テトラヒドロカンナビノール代謝産物に対する抗体の調製、および免疫学的検定法において用いる、新規テトラヒドロカンナビノール誘導体およびタンパクおよびポリペプチドテトラヒドロカンナビノール誘導共役体および標識の合成方法に関する。

発明の背景１−△９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）はマリファナ植物（インド麻サテイバ（ｓａｔｉｖａ）　）の中で最も精神活性な成分である。マリフアナの使用は、多幸症、幻覚、鎮静作用および時の歪み（ｔｅｍｐｏｒａｌ　ｄｉｓｔｏｒｔｉｏ口）の原因となり得る。マリファナのはびこった濫用のために、その使用を監視する必要が生じてきた。ＴＨＣは様々な精神活性および不活性な誘導体に代謝され、大部分の代謝産物カクルクロニトトシテ尿から排泄される（Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ、　１７，１６３７（１９７５）、Ｒｅｓ、Ｃｏｗｔｓ、　Ｃｈｅｗ、Ｐａｔｈ、　Ｐｈａｒｍ、　１７．４２１（１９７７）およびＣ１１ｎ、　Ｐｈａｒｍ、　Ｔｈｅｒ、　３４，３５２（P９８３））。

ＴＨＣ代謝産物に対する抗体の調製には、ＴＨＣ誘導体が抗原性のポリペプチドまたはタンパクに共有結合で結び付（ように該ＴＨＣ誘導体を合成する必要がある。更に、ＴＨＣ誘導体は、抗体のスクリーニングおよび免疫学的検定法において利用するために、種々のポリペプチド類、タンパク類、または標識類に共有結合させる。ＴＨＣ誘導体は、測定調査されるＴＨＣ代謝産物の構造に疑似させるべきである。それ故、タンパク類、ポリペプチド類または標識類に共有結合で結び付くタイプのＴＨＣ誘導体の選択および合成は重要である。それに加えて、ＴＨＣ誘導体は、水溶液中で安定かつ可溶性である必要がある。

免疫および免疫学的測定のためのＴＨＣ化合物および共役体は米国特許第４゜８３３．０７３号および欧州特許出願第２７９．３０８号で開示されている。

発明の概要本発明は、ＴＨＣ代謝産物に対する抗体の調製のだめの、抗原（タンパク類またはポリペプチド類）と共有結合するように合成された、新規なＴＨＣ誘導体に関する。結果として得られる新規な抗原を、標準方法により、抗体の製造に用いてもよい。一旦生成したならば、抗体および、タンパク類、ポリペプチド類または標識類と共有結合する新規誘導体を免疫学的測定法に用いてもよい。

定義本発明において、および本明細書中に用いられている以下の語は、他に特に述べる場合を除き、以下の意味で定義される。

「薬」は、生体組織に投与されたときに、自然発生的化学反応、または酵素による触媒反応、または代謝反応の結果、固有の活性を生ずる、化合物またはりガントを意味するものとする。薬は、生体組織によって、薬誘導体に代謝されてもよい。薬およびその代謝産物の一般的な例としては、モルヒネ、バルヒッール剤、テトラヒドロカンナビノール、フエンンクリシン、アンフェタミン類、メタアンフェタミン類、アヘン剤類、ベンゾジアゼピン類、コカイン、エルトロン−３− グルクロニド、プレグナン／オール−グルクロニド、コティナイン、リセルグ酸ジエチルアミド、プロポキノフェン、メタトン、アナポリックステロイド類およびトリサイクリック−抗肥薬類が挙げられる。

「薬誘導体」は、連結基に共役した、リガンド誘導体、薬、薬代側産物、または薬類似物を意味するものとする。

「藁代謝産物」は、生化学的または代謝的経路における、薬由来の上流または下流の化合物、または中間体を意味するものとする。

「標識」は、信号発生成分、または信号を発生できる手段を意味するものとし、例えば色素や酵素が挙げられる。標識への薬誘導体の結び付きは、キレート等における、共有結合、吸着作用、疎水性および／または静電結合、またはそれらの組み合わせおよび相互作用によるものと考えてよい。

「結合領域」は、リガンドに結合するレセプターの部分と会合する分子構造を指すものとする。更に詳しくは、結合領域は、そのアミノ酸配列が、タンパクの特定の部位を表す、天然または合成のポリペプチド、またはそのようなポリペプチドをコード化する核酸を指すとみなしてもよ（、該領域は、単独または他の領域との組み合わせで、所望のリガンド／レセプター結合ペアと同様または類似した結合の特性を示す。結合活性さえ示されていれば、領域の特異的な配列や、特異的な境界は、さして重要ではない。同様に、本明細書中においては、結合活性が示されているときには、結合特性は、必然的にある範囲の親和性、親和力および特異性、およびそれら組み合わせを含む。

「連結基」は、タンパク、ポリペプチドまたは標識と、薬、または薬誘導体との間の「構成」を意味するものとする。当業者が認めるように、必須の化学的構造を完成するためには、それぞれの反応体は、必要な反応性基を有していなければならない。そのような基の代表的な組み合わせは、アミド結合を形成するアミン基とカルボキシル基、エステル結合を形成するカルボキシル基と水酸基、アルキルアミノ結合を形成するアミノ基とハロゲン化アルキル、ジスルフィドを形成するチオールとチオール、またはチオエーテル類を形成するチオール類とマレイミドまたはハロゲン化アルキルがある。もちろん、水酸基、カルボキシル基、アミノ基およびここに示していないその他の官能性基を既知の方法により採り入れてもよい。同様に、当業者が認めるような、様々な連結基を使用してもよい。連結の構造は、薬または薬誘導体がタンパク、ポリペプチドまたは標識に結び付いて形成された安定な共有結合であったほうがよい。所望のりガントとレセプターの結合特性を強化するために、連結基は、親水性あるいは疎水性となるように設計してもよい。共有結合は、リガンドと連結基が存在する溶液の状態では、安定であるべきである。一般に好ましい連結基は、１〜２０の炭素、およびＯ〜１０のへテロ原子（ＮＨｌｏ、Ｓ）で構成され、分枝鎖てあっても直鎖であってもよい。前述のように限定することなくとも、化学的に適合している原子の組み合わせだけが、連結基を構成することは、当業者には自明のことであろう。化学的に適合性のある連結基として条件に合うものは、例えば、炭素−炭素結合との種々の組み合わせにおける、アミド、エステル、チオエーテル、チオエステル、ケト、ヒドロキシル、カルボキシル、エーテル基が挙げられる。連結基を構成するようなその他の化学的に適合性のある化合物を、この定義の章で示し、ここにおける内容の一部とする。

「ヒドロカルビル」は、水素およびその他の元素が結び付いた、炭素鎖からなる有機基を指すものとする。この語は、アルキル、アルケニル、アルキニルおよびアリール基、飽和および不飽和結合の混合物を有する基、炭素環式環を含み、またそのような基の組み合わせを含む。直鎖、分枝ｆＪ１環式構造物またはそれらの組み合わせを示していてもよい。

「アリール」は、共役π電子系を有する、少なくとも一つの環を有する芳香族基を指し、炭素環式アリール、複素環式アリールおよびジアリール基を含み、それらは所望により置換されていてもよい。

「炭素環式アリール基」は、芳香族環上の環状原子が炭素である基を指すものとする。炭素環式アリール基は、単環式の炭素環式アリール基、および所望により置換されたナフチル基を含む。

「単環式の炭素環式アリール」は、所望により置換されたフェニルを指すものとする。好ましくは、フェニル、または１から３の置換基で置換されたフェニルであって、置換基は、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキノ、低級アルカノイロキノ、ハロゲン、ンアノ、トリハロメチル、低級アシルアミノ、低級アミン、または低級アルコキンカルボニルであることが好ましい。

「所望により置換されたナフチル」は、１−または２−ナフチル、または好ましくは低級アルキル、低級アルコキンまたはハロケンで置換された１−または２− ナフチルを指すとみてよい。

「複素環式アリール基」は、芳香族環上の環状原子が、１から３の異種原子を有し、環原子の残りが炭素原子である基を指すものとする。好適な異種原子は、酸素、硫黄、および窒素を含み、フラニル、チェニル、ピリジル、ピロリル、Ｎ− 低級アルキルピロロ、ピリミノル、ビラノニル、イミダゾリル等を含み、それらは所望により置換されていてもよい。

「所望により置換されたフラニル」は、２−または３−フラニル、または好ましくは低級アルキルまたはハロゲンで置換された、２−または３−フラニルを指すものとする。

「所望により置換されたビリノル」は、２−１３−または４−ピリジル、または好ましくは低級アルキルまたはハロゲンで置換された、２−１３−または４−ビリノルを指すものとする。

「所望により置換されたチェニル」は、２−または３−チェニル、または好ましくは低級アルキルまたはハロゲンて置換された、２−または３−チェニルを指すものとする。

「ジアリール」は、ここに定義した炭素環式アリールまたは複素環式アリールで置換されたフェニルを指すものとし、フェニル環の結合位置はオルト、メタ、またはバラで、好ましくはパラである。ジアリールは、　ＣｓＨ４Ａｒとも表せ、Ａｒの置換基は、アリールである。

「アラルキル」は、アリール基で置換されたアルキル基を指すものとする。好適なアラルキル基は、ベンジル、ピコリル等を含み、それらは所望により置換されていてもよい。

「低級」は、ここでは有機基または有機化合物に関連しており、それぞれ７以下、好ましくは４以下、より好ましくは１または２の炭素原子を有するものと定義される。このような基は、直鎖であっても、分枝鎖であってもよい。

（ａ）「アルキルアミノ」、（ｂ）「アリールアミノ」および（Ｃ）「アラルキルアミノ」の語は、それぞれ−ＮＲＲ’　で表される基を指すものとし、（ａ）では、Ｒはアルキル、およびＲｏは水素またはアルキルであり：　（ｂ）では、Ｒはアリール、およびＲｏは水素またはアリールであり：　（Ｃ）では、Ｒはアラルキル、およびＲｏは水素またはアラルキルである。

「アノル」は、ヒドロカルビル−ＣＯ−まｔ二はＨＣ○−を指すものとする。

「アノルアミノ」は、ＲＣＯＮＣＲ）−および（ＲＣ０２Ｎ−をそれぞれ指し、それぞれのＲは、それぞれ独立して、水素またはヒドロカルビルである。

「ヒドロカルビロキノカルホニロキノ」は、ＲＯＣ（０）Ｏ−の基を指し、Ｒは、ヒドロカルビルである。

「低級カルボアルコキシメチル」または「低級ヒドロ力ルビロキンカルボニメチル」は、ヒドロカルビル−ＱＣ（０）ＣＨ２−を指し、ヒドロカルビル基は、１０以下の炭素原子を含む。

「カルボニル」は、−Ｃ（０）−を指す。

「カルボキンアミド（ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ）Ｊまたは「カルボキンアミド（ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｏ）Ｊは、　ＣＯＮ　Ｒ２を指し、それぞれのＲは、それぞれ独立して水素またはヒドロカルビルである。

「低級ヒドロカルビル」は、炭素原子が１０以下のヒドロカルビル基を指す。

「アルキル」は、直鎖、分枝鎖および環式基を含む、飽和脂肪族基を指す。

「アルケニル」は、少なくとも一つの炭素−炭素の二重結合を含む、不飽和ヒドロカルビル基を指し、直鎖、分枝鎖および環式基を含む。

「アルキニル」は、少な（とも二つの炭素−炭素の三重結合を含む、不飽和ヒドロカルビル基を指し、直鎖、分枝鎖および環式基を含む。

「ヒドロ力ルビロキノカルボニルアミノ」は、ウレタン、ヒドロカルビル−０− ＣＯＮＲ−を指し、Ｒは、水素またはヒドロカルヒルであり、それぞれのヒドロカルビルは、独立して選択される。

「／（ヒドロ力ルビロキノカルボニル）アミノ」は、（ヒドロカルビル−〇−Ｃ ○）２Ｎ−を指し、それぞれのヒドロカルビルは、独立して選択される。

「ヒドロカルビルアミノ」は、−ＮＲＲ”　を指し、Ｒは、ヒドロカルビルであり、Ｒｏ　は、ヒドロカルヒルまたは水素から独立して選択される。

「メルカプト」は、ＳＨまたはその互変体である。

「メチレン」は、−ＣＨ２−を指す。

「アルキレン」は、２価の直鎖または分枝鎖飽和脂肪族基を指す。

「オキシ」は、−〇−（酸素）を指す。

「チオ」は、−８−（硫黄）を指す。

「ジスルフィド」は、−５−Ｓ−を指す。

「チオエーテル」は、ｃ−ｓ−ｃを指す。

「アナライト（Ａｎａｌｙｔｅ）Ｊは、検出および／または測定しで調べられる、天然または合成源の物質を意味するものとする。そのような物質は、そのようなアナライトと特有の相互作用をする、特定の結合パートナ−を有する。

「リガンド」は、リガンドレセプターへの結合パートナ−を意味するものとする。検出をした場合に、試料中にアナライトの存在が推定されるであろう物質は、ハプテン類、ホルモン類、抗原類、抗体類、チオキシリボ核酸（ＤＮＡ）　、リボ核酸（ＲＮＡ）　、前記の材料の代謝産物、および診断上の興味があり、特定の結合ハードナー、すなわちリガンドーレセブターアンセイのりガントレセプター等を有する天然物または合成物のその他の物質を含むものであるが、それらに限定されるものではない。

「レセプター」は、リガンドと結合することのできるレセプターで、一般的には抗体、またはその断片を意味するものとするが、アッセイの目的次第では、その池のリカンドてあってもよい。

「リカンドーレセブターアノセイ」は、リガンドと、そのリガンドと特有の相互作用をするりガントレセプターとの複合体の形成によって検出されるであろうアナライトのアッセイを意味するものとする。リカンドーレセブターアンセイは、競合的であっても、非競合的であってもよく、また、均一系であっても、非均− 系であってもよい。

「免疫原」は、免疫反応で顕在化する化学的または生化学的構造体、決定子、抗原またはその一部を意味するものとし、例えばポリリジン、牛血清アルブミン、および鍵穴透明ヘモシアニン（ＫＬＨ）等を含む。

「抗原性」は、抗体を構成することのできる化学的または生化学的構造体、決定子、抗原またはその一部を意味するものとする。

図面の説明図１は、実施例１〜４の化合物の構造式である。

発明の詳細な説明本発明は、抗体の生成および一般には免疫学的測定法に用いる、新規化合物に関する。本化合物は、ＴＨＣ代謝産物の誘導体である。タンパク、ポリペプチドおよび標識類へ共有結合させるために、１−△８−９−カルボキシテトラヒドロキノカンナビノール（ｃＴＨＣ）の９−カルボキシまたは１−ヒドロキシ位でＴＨＣ類似物の誘導体化を行う。タンパク、ポリペプチドまたは標識と、ｃＴＨＣ誘導体との間の連結基化学手の合成は、薬誘導体とレセプターの所望の結合が達成されるように設計される。例えば、誘導体は、レセプターの結合領域に自身を呈示できるようにタンパク、ポリペプチドまたは標識の表面から置換されてもよい。

一般に、本発明の化合物は、次の構造式を有する式中、Ｒは、次の構造式の一つからなる連結基である一Ｎｌ（−Ａ辱。

式中、Ａは、１〜２０の炭素、および０〜１０のへテロ原子（ＮＨ，０ＳＳ）の連結基であり、分枝鎖でも直鎖でもよい。

更に、分子または標識とのアミド、ジスルフィド、千オニーチルまたはエステル結合により誘導体化された、免疫原性タンパクまたはポリペプチド分子、またはタンパクまたはポリペプチド分子または標識の一般的な構造を以下に示す：上記式中、Ｐは、抗原性タンパクまたはポリペプチド、またはタンパク、ポリペプチドまたは標識てあり：Ｘは、少なくとも１で、１００より大きくはな（。

Ｒは、以下の連結基である：上記式中、Ａは、１〜２０の炭素、および０〜１０のへテロ原子（ＮＨ，Ｏ。

Ｓ）の連結基であり、分枝鎖でも直鎖でもよく。

Ｂは、最終的にタンパク、ポリペプチドまたは標識に連結する、以下の基からなる群より選ばれる連結基である：上記式中、２は、１〜２０の炭素、および０〜１０のへテロ原子（ＮＨ，０１Ｓ）の連結基であり、分枝鎖でも直鎖でもよい。

一般には、本発明の化合物は、以下のような構造をも有していてもよい二式中、Ｒ′は、−〇Ｈかグルクロニドエステルであり。

Ｒは、以下の構造式の一つからなる、連結基である・上記式中、Ａは、１〜２０の炭素、およびＯ〜１０のへテロ原子（ＮＨｌｏ、Ｓ）の連結基であり、分枝鎖ても直鎖でもよい。

更に、分子または標識とのアミド、ジスルフィド、チオエーテルまたはエステル結合により誘導体化された、免疫原性タンパクまたはポリペプチド分子、またはタンパクまたはポリペプチド分子または標識の一般的な構造を以下に示す：式中、Ｐは、抗原性タンパクまたはポリペプチド、またはタンパク、ポリペプチドまたは標識であり。

Ｘは、少なくとも１で、１００より大きくはなく。

Ｒ′は、−ＯＨかグルクロニドエステルであり、Ｒは、以下の連結基である。

上記式中、Ａは、１〜２０の炭素、および０〜１０のへテロ原子（ＮＨ，０１Ｓ）の連結基であり、分枝鎖ても直鎖てもよく。

Ｂは、最終的にタンパク、ポリペプチドまたは標識に連結した、以下の基からなる群より選ばれる連結基である：上記式中、Ｚは、１〜２ｏの炭素、および０〜１ｏのへテロ原子（ＮＨ，Ｏ。

Ｓ）の連結基であり、分枝鎖でも直鎖でもよい。

本発明において、好ましい化合物（ベストモード）は、以下のような構造を有する２式中、Ｒは、以下の構造式の一つからなる、連結基である更に、分子または標識とのアミドまたはエステル結合により誘導体化された、最も好ましい免疫原性タンパクまたはポリペプチド分子、またはタンパクまたはポリペプチド分子または標識の一般的な構造を以下に示す。

式中、Ｐは、抗原性タンパクまたはポリペプチド、またはタンパク、ポリペプチドまたは標識であり。

Ｘは、少なくとも１で、１００より大きくはなく。

Ｚは、１〜２０の炭素、およびＯ〜１０のへテロ原子（ＮＨＳＯ，Ｓ）の連結基であり、分枝鎖ても直鎖てもよい。

本発明において好ましい化合物（ベストモード）は次の構造式をも有する。

式中、Ｒ′は、−ＯＨまたはグルクロニドエステルであり、Ｒは、以下の構造式のうち１つからなる連結基である。

更にまた、分子または標識とのアミドまたはエステル結合により誘導体化された、好ましい免疫原性タンパクまたはポリペプチド分子、またはタンパクまたはポリペプチド分子または標識（ベストモード）の一般的な構造を以下に示す。

式中、Ｐは、抗原性タンパクまたはポリペプチド、またはタンパク、ポリペプチドまたは標識であり；Ｘは、少なくとも１で、１００より大きくはなく。

Ｒ′は、−ＯＨまたはグルクロニドエステルであり、Ｚは、１〜２０の炭素、およびＯ〜１０のへテロ原子（ＮＨ，Ｏ，Ｓ）の連結基であり、分枝鎖でも直鎖でもよい。

特に興味深いのは、１−立体異性体が自然界に存在しているのでこの異性体を用いて合成されているｃＴＨＣ誘導体である。ｃＴＨＣに対して非常に特異的でそして高い親和性のある抗体を作る１−異性体として、本発明のｃＴＨＣ誘導体は合成される。ｃＴＨＣ分子は疎水性であるため、プラスチックやガラスの表面およびタンパク類に吸着される。ｃＴＨＣ誘導体の水溶性を改善するために分子にカルボン酸基を導入し、本発明のｃＴＨＣ誘導体が合成される。これは、免疫原およびタンパク共役体が調製される場合、多くのＴＨＣ誘導体（およそ１〜１００）はタンパク、ポリペプチドまたは標識と共有結合するため、特に重要である。例えば、カルボン酸およびスルホン酸といった付加的な水溶性基がｃＴＨＣ誘導体に取り入れられない場合、置換の多さがタンパクまたはポリペプチド共役体または標識が沈澱する原因となり得る。更に、タンパクまたはポリペプチドに共有結合するＴＨＣ誘導体に水溶性基がないと、ＴＨＣ誘導体はもつと容易にタンパク表面に吸着されるか、タンパク表面で相互作用し、その結果、レセプターを結び付けるのに役立つＴＨＣ誘導体はほとんどなくなる。このように、共有結合したＴＨＣ誘導体が互いに相互作用しあうか、タンパクまたはポリペプチド表面に吸着される場合、ＴＨＣ共役体に対するレセプターの結合親和性は減少する。

一般に、免疫学的測定法にとって、可能な限り結合親和性が高いことが好ましく、高感度で高速の免疫測定を可能にする（例えば、米国特許第５．０２８．５３５号および第５．０８９．３９１号を見よ）。ここで記載される新規ＴＨＣ誘導体は改良された水溶性を提供する。

２−（２−アミノ−４−チオールブタン酸チオラクトン）−ブロモアセトアミドのような、ハロゲン化アルキルチオールエステルを用いてｃＴＨＣの９−グルクロニドの１−ＯＨのアルキル化は、ここで記載されるように１−０−アルキル化ｃＴＨＣ誘導体を合成するのに用いられる条件下て達成される。アセチルチオプロピオン酸のような、カルボン酸アルキルチオールエステルを用いてｃＴＨＣの９−グルクロニドエステルの１−ＯＨのエステル化は、芳香族エステルを合成するための通常の条件下で達成される。

１−６ｍ−９−カルボキシテトラヒドロカンナビノールは異性化に対して△９異性体より安定であるため、ＴＨＣ誘導体を合成するには前者が使用される。ここて記載される教訓を△９異性体に応用できることは、当業者が認め得るものである。

ＴＨＣ誘導体は、タンパク類、ポリペプチド類または標識への共有結合が、例えばタンパク溶液中ｐＨ７のような温和な条件下で容易に行われるように、チオール類またはチオールエステル類として合成される。薬誘導体とチオールまたはチオールエステルとの間の連結手には、様々な長さがある。例えば、９−カルボキノＴＨＣは、ホモシスティンチオラクトンと直接反応し得るし、また９−カルボキノＴＨＣは様々な長さの鎖をもつアミノアルキルカルボン酸エステル、例えば、４−アミノ酪酸メチルエステル等とまず反応し、そしてそのエステルは温和な塩基で加水分解し、その結果化じるカルボン酸ＴＨＣ誘導体がホモシスティンチオラクトンと反応し得る。チオールエステルはＯ，ＯＩＭ〜０．１Ｍの水酸化カリウム等の希塩基中で簡単に加水分解し、マレイミド、ハロゲン化アルキルまたはチオール等のチオール反応性基と反応するチオール基を発生させる。チオール反応性基は、一般にタンパク、ポリペプチドまたは標識上にあるが、チオール薬がチオール反応性化合物と反応した後はタンパク、ポリペプチドまたは標識上に組み入れることもできる。

タンパク、ポリペプチドまたは標識を、分子中にマレイミドまたはハロゲン化アルキルを組み入れている試薬と反応させる。これらの試薬およびその使用方法は、イリノイ州ロンクフォード（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ）のピアス（Ｐｉｅｒｃｅ）より入手できる。例えば、マレイミド基をタンパ八ポリペプチド、または標識に組み入れるためには、スフノンイミノルー４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルホキル−）　（ＳＭＣＣ）　、スフノンイミノル−４−（ｐ− マレイミドフェニル）ブチレート（ＳＭＰＢ）　、またはｍ−マレイミド−ベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスク／ノイミトエステル（ＭＢＳ）が使用できる。ハロゲン化アルキルを、タンパク、ポリペプチドまたは標識への導入は、同じくピアスの、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）が、使用できる。基チーオルと反応させる前に、マレイミド、ハロゲン化アルキルまたはチオール等のチオール反応基を、タンパク、ポリペプチドまたは標識中に組み入れてもよいが、薬チオールは、タンパク、ポリペプチドまたは標識と反応する前に、チオール反応性化合物とも反応できる。また、ＴＨＣチオール誘導体の共有結合のために、種々の長さのビス−マレイミド化合物を、タンパク類、ポリペプチド類または標識を含むチオールと反応させてもよい。逆に、ビス−マレイミド化合物を、チオール誘導体と反応させて、続いてタンパク、ポリペプチドまたは標識を含むチオールと反応させてもよい。普通、ビス−マレイミドは、ピアスから入手できる、ビス−マレイミドヘキサン、ミズリー州、セントルイスのシグマ化学社（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｊｃａｌ　Ｃｏ、　）の、Ｎ、Ｎ゛−ビス（３−マレイミドプロピオニル）−２−ヒドロキシ−１，３−プロバノンアミン、ウィスコンシン州、ミルウオーキーのアルドリッチ化学社（＾１ｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍ、　Ｃｏ、　）の、１．１’−（メチレンノー４．１＝フエニレン）−ビスマレイミドである。また、チオールＴＨＣ誘導体は、誘導体を分子中に組み込む手段として、ポリペプチド、タンパクまたは標識を含むチオールと共に、ジスルフィドを形成できる。

抗体の生成のために、薬誘導体、免疫原、およびタンパクおよびポリペプチド共役体を用いること、並びにその免疫学的測定法への使用は、例えば、米国特許第５．０２８．５３５号、および第５．０８９．３９１号に記載されている。

９−Ｎ−（２−ブチロチオラクトン）アミド−１１−ノル（ｎｏｒ）−△８−テトラヒドロカンナビノールの合成１−９−カルボキシー△＠−１１−ツルーテトラヒドロカンナビノール（４０Ｑｍｇ、１．２ｘｌＯ−’ｍｏｌ、リサーチ・トライアングル・インスチチュート（Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｔｒｉａｎｇｌｅ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）　、リサーチ・トライアングル・ノ（−り（Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｔｒｉａｎｇｌｅ　Ｐａｒｋ）　、Ｎ　Ｃ）を無水ピリジン（１２ｍｌ）に溶解した。ｄｌ−ホモシスティンチオラクトン塩酸塩（１９６ｍｇ、１．３ｘｌＯ−’ｍｏｌ）をその溶液に加え、続いて１−　（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（０，４４ｇ、２．３Ｘ１０−３ｍｏｌ）を加えた。フラスコをアルゴンでパージし、反応混合物を２５℃で６時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、エタノールを加え（３Ｘ２５ｍｌ）　、いくらか残ったピリジンを共沸させた。残留物をｐＨ７，０のＱ、５Ｍリン酸カリウム（２５ｍｌ）とりｏｏホルム（２５ｍｌ）との間で分配させた。クロロホルム層を脱イオン水（３Ｘ３０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させた。乾燥剤を濾過により除去した。溶媒を減圧留去し、最終生成物４８０ｍｇを得た。

実施例２９−Ｎ−（システィン）アミド−１１−ツルー△８−テトラヒドロカンナビノールの合成９−Ｎ−（２−ブチロチオラクトン）アミド−１１−ツルー△８−テトラヒドロカンナビノール（０，８９ｍｇ、２ｘｌＯ−’ｍｏｌ）を領　０７ｍ１のジメチルホルムアミド／水（７０／３０、ｖ／ｖ）に溶解した。水酸化カリウム（領０２ｍ１、ＩＮ）を加え、その溶液を室温で１０分間放置した。リン酸カリウム緩衝液（０，１ｍｌ、０．５Ｍ、ｐＨ７）を直ちに加えた。標題の化合物溶液を、チオール反応性基と反応させた。チオール反応性基は、マレイミド類、ハロゲン化アルキル類またはチオール類であり、溶液中で溶離しているか、タン／＜り類、ポリペプチド類または標識類と結合している。

９−カルボキン−１１−ツルー△８−テトラヒドロカンナビノールメチルエステルの合成１Ｍ塩化水素ジエチルエーテル（０，１ｍ１）溶液を含む９−カルボキン−１１ −ツルー△８−テトラヒドロカンナビノール（１０ｍｇ、２．９ｘｌＯ−５ｍ。

１）メチルアルコール（１ｍｇ）溶液を５５℃で２時間加熱した。溶媒を減圧下で蒸発させて、透明なゴム状物として標題の化合物１０．４ｍｇ　（１００％）を得た。

実施例４９−カルボキン−１１−ツルー△８−１−０−カルボキシメチルテトラヒドロカンナヒノールの合成水酸化ナトリウム（０，１ｍｇ、４．２ｘｌＯ−’ｍｏｌ）を含む９−カルボキノ−１１−ツルー△８−テトラヒドロカンナビノールメチルエステル（１，０ｍｇ、２．８Ｘ１０−’ｍｏｌ）無水ツメチルホルムアミド（８０μｍ）溶液にエチルブロモアセテート（０，５ｍｇ、２．７Ｘ１０−’ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で５５時間加熱した。さらに水酸化ナトリウム（０，０６ｍｇ、２５Ｘ１０−’ｍｏｌ）無水ツメチルホルムアミド（６０μｌ）溶液を先程の溶液に追加し、５０°Ｃで合計６時間加熱した。溶媒を減圧留去した。残留物をメチルアルコール（２５０μｍ）に溶解し、続いて水（２００μｍ）に溶解し、そしてＩＮ水酸化カリウム（５０μｌ）を加えた。７５°Ｃで４５分間加熱して反応させた。

塩化水素（ＩＮ）溶液を加えｐＨを７０に調整し、溶媒を減圧留去した。残留物を水に溶解し、塩化水素（ＩＮ）溶液でｐＨ２まで酸性にした。溶液をクロロホルム（１ｍｌＸ１）で抽出し、アルゴン下で乾燥させ、透明な残留物として標題の化合物３．９ｍｇを得た。

実施例１実施例２実胞例３フロントページの続き（５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，６識別記号　庁内整理番号ＧＯＩＮ　３３１５３　Ｄ　７０５５−２Ｊ３３１５６６　７０５５−２Ｊ／／　Ａ　６１　Ｋ　３９／３８５　９２８４−４ＣＩ

Claims

【特許請求の範囲】１．次の構造式の化合物： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒは、次の構造式の１つからなる連結ヒドロカルビル基である▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼▲数式、化学式、表等があります▼および▲数式、化学式、表等があります▼（式中、Ａは、１〜２０の炭素原子、ならびに窒素、酸素および硫黄からなる群より選ばれる０〜１０のヘテロ原子からなり、無置換でも置換でもよいし分枝鎖でも直鎖でもよい連結基である。）〕。２．次の構造式の化合物に誘導体化された、免疫原性タンパクまたはポリペプチド分子、またはタンパクまたはポリペプチド分子または標識：▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｐは、抗原性タンパクまたはポリペプチド、またはタンパク、ポリペプチドまたは標識であり：ｘは、少なくとも１で、１００より大きくはなく：Ｒは、以下の構造式の連結基である： ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ａは、１〜２０の炭素、および０〜１０のヘテロ原子（ＮＨ、Ｏ、Ｓ）からなる、分枝鎖でも直鎖でもよい連結基であり：Ｂは、最終的にタンパク、ポリペプチドまたは標識に連結する、以下の基からなる群より選ばれる連結基である ▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，■および▲数式、化学式、表等があります▼（式中、Ｚは、１〜２０の炭素、および０〜１０のヘテロ原子（ＮＨ、Ｏ、Ｓ）からなる連結基であり、分枝鎖でも直鎖でもよい。））］。３．請求項２記載の化合物類からなる、抗原に対する応答において調製されたレセプター。４．次の構造式の化合物： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ′は、−ＯＨまたはグルクロニドエステルであり、Ｒは、以下の構造式の１つからなる連結基である：▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ａは、１〜２０の炭素、および０〜１０のヘテロ原子（ＮＨ、Ｏ、Ｓ）からなる、分枝鎖でも直鎖でもよい連結基である。）］。５．次の構造式の化合物に誘導体化された、免疫原性タンパクまたはポリペプチド分子、またはタンパクまたはポリペプチド分子または標識：▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｐは、抗原性タンパクまたはポリペプチド、またはタンパク、ポリペプチドまたは標識であり：ｘは、少なくとも１で、１００より大きくはなく：Ｒ′は、−ＯＨまたはグルクロニドエステルであり、Ｒは、以下の構造式からなる群より選ばれる連結基である：▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼および▲数式、化学式、表等があります▼（式中、Ａは、１〜２０の炭素、および０〜１０のヘテロ原子（ＮＨ、Ｏ、Ｓ）からなる、分枝鎖でも直鎖でもよい連結基であり：Ｂは、最終的にタンパク、ポリペプチドまたは標識に連結する、以下の基からなる群より選ばれる連結基である： ▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼および▲数式、化学式、表等があります▼（式中、Ｚは、１〜２０の炭素、および０〜１０のヘテロ原子（ＮＨ、Ｏ、Ｓ）からなる連結基であり、分枝鎖でも直鎖でもよい。））］。６．請求項５記載の化合物類からなる、抗原に応答して調製されたレセプター。７．次の構造式の化合物： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒは、以下の構造式の１つからなる連結基である。］。 ▲数式、化学式、表等があります▼および▲数式、化学式、表等があります▼８．次の構造式の化合物に誘導体化された、免疫原性タンパクまたはポリペプチド分子、またはタンパクまたはポリペプチド分子または標識：▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｐは、抗原性タンパクまたはポリペプチド、またはタンパク、ポリペプチドまたは標識であり：ｘは、少なくとも１で、１００より大きくはなく：Ｚは、１〜２０の炭素、および０〜１０のヘテロ原子（ＮＨ、Ｏ、Ｓ）からなる連結基であり、分枝鎖でも直鎖でもよい。］。９．請求項８記載の化合物類からなる、抗原に応答して調製されたレセプター。１０．次の構造式の化合物： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ′は、−ＯＨまたはグルクロニドエステルであり、Ｒは、以下の構造式の１つからなる連結基である。］。 ▲数式、化学式、表等があります▼および▲数式、化学式、表等があります▼１１．次の構造式の化合物に誘導体化された、免疫原性タンパクまたはポリペプチド分子、またはタンパクまたはポリペプチド分子または標識：▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｐは、抗原性タンパクまたはポリペプチド、またはタンパク、ポリペプチドまたは標識であり：ｘは、少なくとも１で、１００より大きくはなく：Ｒ′は、−ＯＨまたはグルクロニドエステルであり、Ｚは、１〜２０の炭素、および０〜１０のヘテロ原子（ＮＨ、Ｏ、Ｓ）からなる連結基であり、分枝鎖でも直鎖でもよい。］。１２．請求項１１記載の化合物類からなる、抗原に応答して調製されたレセプター。