JPH08233812A - ハプテンのイムノアッセイおよびそれに使用可能なハプテントレーサー抗体複合体ならびにそれらの製造方法 - Google Patents
ハプテンのイムノアッセイおよびそれに使用可能なハプテントレーサー抗体複合体ならびにそれらの製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 指示薬成分に連結されたハプテンを使用する
イムノアッセイにおけるハプテントレーサーの不安定性
およびその非特異的結合による分析結果への悪影響を排
除する。 【解決手段】 一方では直接またはスペーサー基を介し
て指示薬成分に連結するハプテンを含有し、他方では特
異的に指示薬成分と結合可能な抗体を含有するハプテン
トレーサー複合体をイムノアッセイ、とくに競合イムノ
アッセイに使用する。
イムノアッセイにおけるハプテントレーサーの不安定性
およびその非特異的結合による分析結果への悪影響を排
除する。 【解決手段】 一方では直接またはスペーサー基を介し
て指示薬成分に連結するハプテンを含有し、他方では特
異的に指示薬成分と結合可能な抗体を含有するハプテン
トレーサー複合体をイムノアッセイ、とくに競合イムノ
アッセイに使用する。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はイムノアッセイの分
野に関する。ある種の抗原すなわち免疫学的反応を起こ
すことができる化合物がサンプル中に存在するか否かを
検出することが望まれる場合は多い。抗原の検出はしば
しば、いわゆるイムノアッセイの手法によって実施さ
れ、抗原またはハプテンが免疫学的方法によって検出さ
れる。本発明はとくに、いわゆるハプテントレーサー複
合体が用いられるイムノアッセイに関する。ハプテント
レーサーでは、免疫学的に適切なハプテンが指示薬成分
に連結されている。
野に関する。ある種の抗原すなわち免疫学的反応を起こ
すことができる化合物がサンプル中に存在するか否かを
検出することが望まれる場合は多い。抗原の検出はしば
しば、いわゆるイムノアッセイの手法によって実施さ
れ、抗原またはハプテンが免疫学的方法によって検出さ
れる。本発明はとくに、いわゆるハプテントレーサー複
合体が用いられるイムノアッセイに関する。ハプテント
レーサーでは、免疫学的に適切なハプテンが指示薬成分
に連結されている。
【０００２】
【従来技術】化学ルミネセンスで標識されたハプテン接
合体は従来技術により既知である。ＥＰ ０ １３５ ０
７１には、化学ルミネセンス発生能を有する基と「スペ
ーサー」とも呼ばれる連結基を有するハプテンの間の化
学ルミネセンス標識ハプテン接合体が記載されている。
連結基は、ペプチド、糖蛋白質、糖脂質または炭水化物
のような反復する官能基を有する鎖状ポリマーである。
合体は従来技術により既知である。ＥＰ ０ １３５ ０
７１には、化学ルミネセンス発生能を有する基と「スペ
ーサー」とも呼ばれる連結基を有するハプテンの間の化
学ルミネセンス標識ハプテン接合体が記載されている。
連結基は、ペプチド、糖蛋白質、糖脂質または炭水化物
のような反復する官能基を有する鎖状ポリマーである。
【０００３】ＥＰ ０ ４４２ ３７２には、標識と呼ば
れる指示薬成分がポリエチレングリコールおよび蛋白質
またはオリゴもしくはポリペプチドを介してハプテンに
連結されている標識ハプテンが記載されている。指示薬
成分は化学的または物理的方法によって定量可能な基で
ある。
れる指示薬成分がポリエチレングリコールおよび蛋白質
またはオリゴもしくはポリペプチドを介してハプテンに
連結されている標識ハプテンが記載されている。指示薬
成分は化学的または物理的方法によって定量可能な基で
ある。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】指示薬成分に連結され
たハプテンには実際上、ある種の欠点のあることが見出
された。すなわち一般的に、これらのハプテン接合体
は、とくに水溶液とした場合、保存に際して安定ではな
く、冷凍状態での保存は加水分解の危険があるので行わ
れない。さらに、この型のハプテン接合体は、非特異的
結合のために、得られる結果に再現性のない場合の多い
ことが見出されている。ハプテントレーサーの容器壁へ
の非特異的結合は、適当な添加物たとえば蛋白質によっ
て実際に減少させることができる場合もあるが、これら
の添加物が試験の質に悪影響を及ぼすことは珍しくはな
い。
たハプテンには実際上、ある種の欠点のあることが見出
された。すなわち一般的に、これらのハプテン接合体
は、とくに水溶液とした場合、保存に際して安定ではな
く、冷凍状態での保存は加水分解の危険があるので行わ
れない。さらに、この型のハプテン接合体は、非特異的
結合のために、得られる結果に再現性のない場合の多い
ことが見出されている。ハプテントレーサーの容器壁へ
の非特異的結合は、適当な添加物たとえば蛋白質によっ
て実際に減少させることができる場合もあるが、これら
の添加物が試験の質に悪影響を及ぼすことは珍しくはな
い。
【０００５】実際の使用に際しては試験溶液の使用者が
比較的大量のバッチで数種のトレーサー溶液を保存する
点でさらに他の問題も起こりうる。余分の容器を使用す
るために、この場合も制御不能の吸着現象が起こり、そ
の程度は使用する容器の種類（ガラス、ポリエチレン、
ポリスチレン等）およびサイズならびに温度に依存す
る。その結果、試験アッセイにおけるハプテントレーサ
ーの適性はもはや保証されない。
比較的大量のバッチで数種のトレーサー溶液を保存する
点でさらに他の問題も起こりうる。余分の容器を使用す
るために、この場合も制御不能の吸着現象が起こり、そ
の程度は使用する容器の種類（ガラス、ポリエチレン、
ポリスチレン等）およびサイズならびに温度に依存す
る。その結果、試験アッセイにおけるハプテントレーサ
ーの適性はもはや保証されない。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明はしたがって、一
方では直接またはスペーサー基を介して指示薬成分に連
結するハプテンを含有し、また他方では指示薬成分と特
異的に結合できる抗体を含有するハプテントレーサー複
合体に関する。指示薬成分とはシグナル伝達成分であっ
て、標識またはマーカーと呼ぶこともできる。
方では直接またはスペーサー基を介して指示薬成分に連
結するハプテンを含有し、また他方では指示薬成分と特
異的に結合できる抗体を含有するハプテントレーサー複
合体に関する。指示薬成分とはシグナル伝達成分であっ
て、標識またはマーカーと呼ぶこともできる。
【０００７】本発明によるハプテントレーサー複合体
は、一方では直接またはスペーサー基を介して指示薬成
分に連結するハプテンから構成される。ハプテンとは、
そのサイズのため一般に、担体へのカップリング後にの
み抗体の形成を誘導できる抗原を表わす語である。指示
薬成分とは、化学的または物理的方法により検出可能ま
たは定量可能な基である。ハプテンと指示薬成分は、直
接化学結合を介して、またはこの２成分間に配置できる
スペーサーとも呼ばれるスペーサー基を介して結合させ
ることができる。通常用いられるスペーサー基は線状構
造を有し、たとえばポリエチレングリコールである。し
かしながら、反復官能基を有する他の鎖状ポリマー、た
とえばペプチド、糖蛋白質、糖脂質または炭水化物をス
ペーサー基として用いることも問題なく可能である。こ
の種類のスペーサー基の典型例には、デキストラン、ペ
クチン、レクチンのような多糖類、ポリリジンのような
ペプチド、血清アルブミンもしくはグロブリンのような
蛋白質、またはトランスフェリンのような糖蛋白質があ
る。
は、一方では直接またはスペーサー基を介して指示薬成
分に連結するハプテンから構成される。ハプテンとは、
そのサイズのため一般に、担体へのカップリング後にの
み抗体の形成を誘導できる抗原を表わす語である。指示
薬成分とは、化学的または物理的方法により検出可能ま
たは定量可能な基である。ハプテンと指示薬成分は、直
接化学結合を介して、またはこの２成分間に配置できる
スペーサーとも呼ばれるスペーサー基を介して結合させ
ることができる。通常用いられるスペーサー基は線状構
造を有し、たとえばポリエチレングリコールである。し
かしながら、反復官能基を有する他の鎖状ポリマー、た
とえばペプチド、糖蛋白質、糖脂質または炭水化物をス
ペーサー基として用いることも問題なく可能である。こ
の種類のスペーサー基の典型例には、デキストラン、ペ
クチン、レクチンのような多糖類、ポリリジンのような
ペプチド、血清アルブミンもしくはグロブリンのような
蛋白質、またはトランスフェリンのような糖蛋白質があ
る。
【０００８】本発明によるハプテントレーサー複合体は
さらに指示薬成分に特異的に結合できる抗体を含有す
る。指示薬成分に特異的なこの型の抗体は、それ自体は
既知の免疫学的方法によって得られる。指示薬成分に対
するポリクローナル抗体は実験動物たとえばウサギを指
示薬成分（好ましくは標識蛋白質接合体）で免疫処置す
ることにより得られる。別法として、指示薬成分に特異
的なモノクローナル抗体を、Koehler & Milsteinの既知
方法によって調製することができる。
さらに指示薬成分に特異的に結合できる抗体を含有す
る。指示薬成分に特異的なこの型の抗体は、それ自体は
既知の免疫学的方法によって得られる。指示薬成分に対
するポリクローナル抗体は実験動物たとえばウサギを指
示薬成分（好ましくは標識蛋白質接合体）で免疫処置す
ることにより得られる。別法として、指示薬成分に特異
的なモノクローナル抗体を、Koehler & Milsteinの既知
方法によって調製することができる。
【０００９】本発明によるハプテントレーサー複合体は
基本的にすべての適当なイムノアッセイにおいて、とく
に不均一系イムノアッセイにおいて有利に、使用でき
る。これらの試験においては、検出すべき抗原またはハ
プテンに特異的な抗体は共有結合を介してまたは吸着に
よって固相にカップリングされる。ハプテンに特異的な
この抗体は、このハプテンをたとえば血清アルブミンの
ようなポリマーに共有結合によってカップリングさせ、
それを用いて抗体産生のために選定された動物を免疫処
置して得るのが好ましい。この型の抗体は、純粋なハプ
テンおよび指示薬成分に連結されたハプテンの両方に高
度に特異的であることが明らかにされている。適当なハ
プテンとは、免疫処置のためハプテンと担体分子との免
疫原性接合体の形態で注射した場合、宿主動物に免疫反
応を起こすことができる分析的に興味がもたれるすべて
の有機物質である。
基本的にすべての適当なイムノアッセイにおいて、とく
に不均一系イムノアッセイにおいて有利に、使用でき
る。これらの試験においては、検出すべき抗原またはハ
プテンに特異的な抗体は共有結合を介してまたは吸着に
よって固相にカップリングされる。ハプテンに特異的な
この抗体は、このハプテンをたとえば血清アルブミンの
ようなポリマーに共有結合によってカップリングさせ、
それを用いて抗体産生のために選定された動物を免疫処
置して得るのが好ましい。この型の抗体は、純粋なハプ
テンおよび指示薬成分に連結されたハプテンの両方に高
度に特異的であることが明らかにされている。適当なハ
プテンとは、免疫処置のためハプテンと担体分子との免
疫原性接合体の形態で注射した場合、宿主動物に免疫反
応を起こすことができる分析的に興味がもたれるすべて
の有機物質である。
【００１０】通常、ハプテンに特異的な抗体は固体担体
に結合される。この型の担体の例としては、抗体が吸着
によって結合するポリスチレンチューブもしくはビー
ズ、または抗体が二価性試薬を介して共有結合するリジ
ン含有ポリペプチドで前処理されたプラスティック表面
もしくは抗体がたとえばカルボジイミドによって結合さ
れるＮＨ2基あるいはＣＯＯＨ基官能化磁性ラテックス
粒子である。
に結合される。この型の担体の例としては、抗体が吸着
によって結合するポリスチレンチューブもしくはビー
ズ、または抗体が二価性試薬を介して共有結合するリジ
ン含有ポリペプチドで前処理されたプラスティック表面
もしくは抗体がたとえばカルボジイミドによって結合さ
れるＮＨ2基あるいはＣＯＯＨ基官能化磁性ラテックス
粒子である。
【００１１】本発明の好ましい実施態様においては、指
示薬成分は化学ルミネセンス発生能を有する基であり、
とくに好ましくはこの基はアクリジニウムアシルスルホ
ンアミド、アクリジニウムエステル、ルミノール、イソ
ルミノール、ジオキセタン、シュウ酸エステルもしくは
シュウ酸アミドまたはこれらの化合物の一種の誘導体か
らなる群より選択される。
示薬成分は化学ルミネセンス発生能を有する基であり、
とくに好ましくはこの基はアクリジニウムアシルスルホ
ンアミド、アクリジニウムエステル、ルミノール、イソ
ルミノール、ジオキセタン、シュウ酸エステルもしくは
シュウ酸アミドまたはこれらの化合物の一種の誘導体か
らなる群より選択される。
【００１２】化学ルミネセンスとは、化学反応における
光の放出を意味するものと解釈される。本発明の場合に
は、化学ルミネセンス発生能を有する化合物はしたがっ
てハプテンに結合される。これらはアクリジニウムエス
テル、アクリジニウムアシルスルホンアミド、ルミノー
ルもしくはその誘導体、イソルミノールもしくはその誘
導体、ジオキセタン、ルシフェリン、シュウ酸エステル
またはシュウ酸アミドとすることができる。
光の放出を意味するものと解釈される。本発明の場合に
は、化学ルミネセンス発生能を有する化合物はしたがっ
てハプテンに結合される。これらはアクリジニウムエス
テル、アクリジニウムアシルスルホンアミド、ルミノー
ルもしくはその誘導体、イソルミノールもしくはその誘
導体、ジオキセタン、ルシフェリン、シュウ酸エステル
またはシュウ酸アミドとすることができる。
【００１３】他の好ましい実施態様においては、指示薬
成分は、蛍光発生能を有する基である。この場合、用い
られる指示薬成分は蛍光染料である。この型の蛍光染料
の例にはフルオレセインイソチオシアナートがある。他
の好ましい実施態様においては、指示薬成分は生物ルミ
ネセンス発生能を有する基である。生物ルミネセンスは
下等生物、たとえば細菌、菌類、腔腸動物、蠕虫、甲殻
類等で起こるルミネセンスの形態である。生物ルミネセ
ンスにおいては、一般にルシフェリンが酸素の存在下に
ＡＴＰを消費してルシフェラーゼにより酵素的に活性化
オキシルシフェリンに変換され、これが光（青色可視光
線）を放出してオキシルシフェリンを形成する。
成分は、蛍光発生能を有する基である。この場合、用い
られる指示薬成分は蛍光染料である。この型の蛍光染料
の例にはフルオレセインイソチオシアナートがある。他
の好ましい実施態様においては、指示薬成分は生物ルミ
ネセンス発生能を有する基である。生物ルミネセンスは
下等生物、たとえば細菌、菌類、腔腸動物、蠕虫、甲殻
類等で起こるルミネセンスの形態である。生物ルミネセ
ンスにおいては、一般にルシフェリンが酸素の存在下に
ＡＴＰを消費してルシフェラーゼにより酵素的に活性化
オキシルシフェリンに変換され、これが光（青色可視光
線）を放出してオキシルシフェリンを形成する。
【００１４】本発明の他の実施態様においては、指示薬
成分はエレクトロルミネセンス発生能を有す基である。
エレクトロルミネセンスは強い電場によって発生する。
本発明のさらに他の実施態様においては、指示薬成分は
リン光発生能を有する基である。リン光では、電子的に
励起された無機または有機化合物が、吸収されたエネル
ギーを励起後最も速くて１０-3秒で通常、より長波長の
放射線の形態で再放出する。
成分はエレクトロルミネセンス発生能を有す基である。
エレクトロルミネセンスは強い電場によって発生する。
本発明のさらに他の実施態様においては、指示薬成分は
リン光発生能を有する基である。リン光では、電子的に
励起された無機または有機化合物が、吸収されたエネル
ギーを励起後最も速くて１０-3秒で通常、より長波長の
放射線の形態で再放出する。
【００１５】本発明の場合、指示薬成分に対する抗体
は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フ
ラグメント、化学的に修飾された抗体または化学的に修
飾された抗体フラグメントである。本発明によるハプテ
ントレーサー複合体は、簡単な方法で調製することがで
きる。本発明によるハプテントレーサー抗体複合体は、
好ましくは、指示薬成分に対する抗体および標識された
ハプテン誘導体を水溶液中で混合することによって調製
される。水性反応溶液には、ハプテントレーサーの溶解
度を０％を超える濃度〜約５０％濃度に改良するため、
有機溶媒を含有させることもできる。この場合、アセト
ニトリル、ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホ
キシドの使用が好ましい。
は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フ
ラグメント、化学的に修飾された抗体または化学的に修
飾された抗体フラグメントである。本発明によるハプテ
ントレーサー複合体は、簡単な方法で調製することがで
きる。本発明によるハプテントレーサー抗体複合体は、
好ましくは、指示薬成分に対する抗体および標識された
ハプテン誘導体を水溶液中で混合することによって調製
される。水性反応溶液には、ハプテントレーサーの溶解
度を０％を超える濃度〜約５０％濃度に改良するため、
有機溶媒を含有させることもできる。この場合、アセト
ニトリル、ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホ
キシドの使用が好ましい。
【００１６】本発明はまた、抗原またはハプテンの検出
のためのイムノアッセイの実施に適した試験キットにも
関する。本発明によるハプテントレーサー抗体複合体の
少なくとも１種の使用がこの場合必須である。本発明の
意味における試験キットとは、イムノアッセイの実施に
必要な用具を意味する。一般に、試験キットは固相を有
する物品たとえばマイクロタイタープレート、ポリスチ
レンチューブ等、ハプテンに対する少なくとも１種の抗
体、および本発明による少なくとも１種のハプテントレ
ーサー抗体複合体から構成される。
のためのイムノアッセイの実施に適した試験キットにも
関する。本発明によるハプテントレーサー抗体複合体の
少なくとも１種の使用がこの場合必須である。本発明の
意味における試験キットとは、イムノアッセイの実施に
必要な用具を意味する。一般に、試験キットは固相を有
する物品たとえばマイクロタイタープレート、ポリスチ
レンチューブ等、ハプテンに対する少なくとも１種の抗
体、および本発明による少なくとも１種のハプテントレ
ーサー抗体複合体から構成される。
【００１７】好ましい実施態様において、本発明による
試験キットはさらにルミネセンスイムノアッセイを実施
するのに必要な成分を包含する。とくに好ましい実施態
様において、本発明による試験キットはさらに磁化可能
粒子も包含する。一般に、この型のイムノアッセイは試
験管内で実施される。この場合、ハプテンに対する抗体
は磁石によって吸引できる粒子に結合される。好ましく
は、これらは磁鉄鉱粒子を包含しポリスチレンによって
コーティングされた磁化可能なラテックスビーズであ
り、ラテックスビーズの直径は５μｍまで、好ましくは
０.５〜２μｍである。これらの抗体磁性粒子を検討さ
れる液体と接触させ、反応後に磁石を用いて簡便に沈澱
させることができる。
試験キットはさらにルミネセンスイムノアッセイを実施
するのに必要な成分を包含する。とくに好ましい実施態
様において、本発明による試験キットはさらに磁化可能
粒子も包含する。一般に、この型のイムノアッセイは試
験管内で実施される。この場合、ハプテンに対する抗体
は磁石によって吸引できる粒子に結合される。好ましく
は、これらは磁鉄鉱粒子を包含しポリスチレンによって
コーティングされた磁化可能なラテックスビーズであ
り、ラテックスビーズの直径は５μｍまで、好ましくは
０.５〜２μｍである。これらの抗体磁性粒子を検討さ
れる液体と接触させ、反応後に磁石を用いて簡便に沈澱
させることができる。
【００１８】一般に、本発明によるイムノアッセイは競
合不均一系イムノアッセイである。この場合、ハプテン
に対する抗体は検討されるサンプルと接触させる固相に
カップリングさせる。指示薬成分にカップリングされた
一定量のハプテンをさらにサンプルに添加する。検討す
るサンプル中にハプテンが存在しない場合には、すべて
の抗体が指示薬成分を含有するハプテンと反応すること
ができる。すなわち、被検物質が存在しない場合には、
検討されるサンプル中には最大のシグナルが発生する。
合不均一系イムノアッセイである。この場合、ハプテン
に対する抗体は検討されるサンプルと接触させる固相に
カップリングさせる。指示薬成分にカップリングされた
一定量のハプテンをさらにサンプルに添加する。検討す
るサンプル中にハプテンが存在しない場合には、すべて
の抗体が指示薬成分を含有するハプテンと反応すること
ができる。すなわち、被検物質が存在しない場合には、
検討されるサンプル中には最大のシグナルが発生する。
【００１９】サンプルが高濃度のハプテンを含有する場
合には、サンプル中に存在するハプテンは指示薬成分に
連結されているハプテンと競合する。サンプル中に遊離
ハプテンが多いほど、指示薬成分に結合されているハプ
テンが固相に結合できる量は減少し、したがって、シグ
ナルは弱くなる。検討されるサンプル中のハプテンの実
際の濃度は適当な検量線を用いて測定することができ
る。
合には、サンプル中に存在するハプテンは指示薬成分に
連結されているハプテンと競合する。サンプル中に遊離
ハプテンが多いほど、指示薬成分に結合されているハプ
テンが固相に結合できる量は減少し、したがって、シグ
ナルは弱くなる。検討されるサンプル中のハプテンの実
際の濃度は適当な検量線を用いて測定することができ
る。
【００２０】本発明によるハプテントレーサー抗体複合
体はしたがって抗原またはハプテンの検出のためのイム
ノアッセイにおける使用に適している。これは一般的に
は競合イムノアッセイである。イムノアッセイにおいて
は、ルミネセンスを各指示薬成分の関数としてそれ自体
既知の方法によって測定することができる。使用が好ま
しいアクリジニウムアシルスルホンアミドの場合には、
ルミネセンスの測定はたとえば、適当な固相を、アルカ
リ性過酸化水素溶液と接触させるか、または酸性過酸化
水素溶液と接触させて、ついで直ちにpHを上昇させるこ
とによって行われる。この場合に起こる光反応は既知の
装置たとえばBeriLux（登録商標）アナライザー中で測
定できる。ハプテンのこの種のルミネセンスイムノアッ
セイの操作、感度および精度は、相当するラジオイムノ
アッセイの場合に完全に匹敵することが明らかにされて
いて、本発明によるルミネセンスイムノアッセイにおい
ては、放射性成分の使用の回避をが可能である。さら
に、本発明によるルミネセンスは自動化に適していて、
完全自動化システムにおいても使用できる。
体はしたがって抗原またはハプテンの検出のためのイム
ノアッセイにおける使用に適している。これは一般的に
は競合イムノアッセイである。イムノアッセイにおいて
は、ルミネセンスを各指示薬成分の関数としてそれ自体
既知の方法によって測定することができる。使用が好ま
しいアクリジニウムアシルスルホンアミドの場合には、
ルミネセンスの測定はたとえば、適当な固相を、アルカ
リ性過酸化水素溶液と接触させるか、または酸性過酸化
水素溶液と接触させて、ついで直ちにpHを上昇させるこ
とによって行われる。この場合に起こる光反応は既知の
装置たとえばBeriLux（登録商標）アナライザー中で測
定できる。ハプテンのこの種のルミネセンスイムノアッ
セイの操作、感度および精度は、相当するラジオイムノ
アッセイの場合に完全に匹敵することが明らかにされて
いて、本発明によるルミネセンスイムノアッセイにおい
ては、放射性成分の使用の回避をが可能である。さら
に、本発明によるルミネセンスは自動化に適していて、
完全自動化システムにおいても使用できる。
【００２１】本発明によるハプテントレーサー抗体複合
体は、イムノアッセイに使用した場合、多くの利点を有
する。第一に、ハプテントレーサー抗体複合体は調製が
簡単である。指示薬成分に連結されているハプテンを水
溶液中で抗体と混合する。こうすると指示薬成分と抗体
の結合部位の間で特異的な反応が起こる。指示薬成分に
対してモノクローナル抗体を使用すれば、抗体の選択に
よってシグナルに影響を与える可能性も生じる。
体は、イムノアッセイに使用した場合、多くの利点を有
する。第一に、ハプテントレーサー抗体複合体は調製が
簡単である。指示薬成分に連結されているハプテンを水
溶液中で抗体と混合する。こうすると指示薬成分と抗体
の結合部位の間で特異的な反応が起こる。指示薬成分に
対してモノクローナル抗体を使用すれば、抗体の選択に
よってシグナルに影響を与える可能性も生じる。
【００２２】本発明によるハプテントレーサー抗体複合
体には特定の取り込み率がある。ＩｇＧ抗体の場合に
は、抗−指示薬成分抗体１分子につきハプテン−指示薬
成分２分子が結合できる。Ｆａｂフラグメントの場合に
は、取り込み率は抗−指示薬成分抗体フラグメント１分
子につきハプテン−指示薬成分１分子に減少する。しか
しながら、ハプテン−指示薬成分１モル以下の量を用い
ることによって取り込み率を制御下に減少させることも
できる。
体には特定の取り込み率がある。ＩｇＧ抗体の場合に
は、抗−指示薬成分抗体１分子につきハプテン−指示薬
成分２分子が結合できる。Ｆａｂフラグメントの場合に
は、取り込み率は抗−指示薬成分抗体フラグメント１分
子につきハプテン−指示薬成分１分子に減少する。しか
しながら、ハプテン−指示薬成分１モル以下の量を用い
ることによって取り込み率を制御下に減少させることも
できる。
【００２３】指示薬成分に対する抗体の存在により、複
合体の親水性は増大する。ハプテントレーサー抗体複合
体の疎水性は、遊離ハプテントレーサーの場合よりも明
らかに低下し、それは高い蛋白質含量と、また通常さら
に、一般的に疎水性である指示薬部分の抗−指示薬成分
抗体の特異的結合部位への直接結合によるものである。
これは、トレーサーの水溶性に対してポジティブな効果
を有し、非特異的結合の程度の低下にもつながる。した
がって、本発明による複合体使用の結果、測定の正確度
の向上が達成できる。
合体の親水性は増大する。ハプテントレーサー抗体複合
体の疎水性は、遊離ハプテントレーサーの場合よりも明
らかに低下し、それは高い蛋白質含量と、また通常さら
に、一般的に疎水性である指示薬部分の抗−指示薬成分
抗体の特異的結合部位への直接結合によるものである。
これは、トレーサーの水溶性に対してポジティブな効果
を有し、非特異的結合の程度の低下にもつながる。した
がって、本発明による複合体使用の結果、測定の正確度
の向上が達成できる。
【００２４】本発明による複合体の更なる利点は、複合
体の安定性の増大が達成できることである。指示薬成分
が加水分解に敏感なハプテントレーサーの場合では、水
溶液中での比較的長期の保存時に、程度の差はあれシグ
ナル活性の著しい低下が認められる。一般的に、抗−指
示薬成分抗体の特異的結合部位への指示薬成分の結合は
加水分解に対する有意な保護につながる。実施が簡単な
抗体１分子あたり２個の指示薬成分またはＦａｂフラグ
メントあたり１個の指示薬成分の導入によりシグナル活
性を有するハプテントレーサー抗体複合体が得られる。
体の安定性の増大が達成できることである。指示薬成分
が加水分解に敏感なハプテントレーサーの場合では、水
溶液中での比較的長期の保存時に、程度の差はあれシグ
ナル活性の著しい低下が認められる。一般的に、抗−指
示薬成分抗体の特異的結合部位への指示薬成分の結合は
加水分解に対する有意な保護につながる。実施が簡単な
抗体１分子あたり２個の指示薬成分またはＦａｂフラグ
メントあたり１個の指示薬成分の導入によりシグナル活
性を有するハプテントレーサー抗体複合体が得られる。
【００２５】
【発明の実施の形態】本発明を以下の実施例によって例
示する。 例１．（ＩｇＧ；コーティングチューブ） Ａ） Ｔ３（＝トリヨードサイロニン）ハプテントレー
サーの調製 調製したアクリジニウムアシルスルホンアミド標識トリ
ヨードサイロニンの構造式を図１ａに示す。図１ｂに示
した、Ａ′は−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ2−を意味し、ｎは２で
あるＴ３誘導体（ＥＰ ０ ４４２ ３７２にも記載され
ている）２２０mg（０.１６２mmol）を３mlの乾燥Ｎ,Ｎ
−ジメチル−ホルムアミド（ＤＭＦ）中にまず導入し、
２mlのＤＭＦ中BeriLux標識（Ｎ−ヒドロキシスクシン
イミジル反応基含有）１２４mg（０.１６２mmol）溶液
を添加し、混合物を室温で48時間撹拌する。溶媒を油圧
ポンプ真空下に留去する。残留物をプレパラティブ中圧
クロマトグラフィー（Buechiシステム）によって逆相カ
ラム〔固定相：LichroPrep C-18（Merck）；移動相：メ
タノール／水＝７０：３０＋０.１容量％のトリフルオ
ロ酢酸〕上にて精製する。１６７mg（５２％）の黄橙色
の粉末が単離される。〔Ｃ74Ｈ89Ｉ3Ｎ7Ｏ19Ｓ〕+（１
７９２）〔ＣＦ3ＣＯ2〕-（１１３）；ＭＳ：（ＦＡ
Ｂ）１９７２(Ｍ+）。
示する。 例１．（ＩｇＧ；コーティングチューブ） Ａ） Ｔ３（＝トリヨードサイロニン）ハプテントレー
サーの調製 調製したアクリジニウムアシルスルホンアミド標識トリ
ヨードサイロニンの構造式を図１ａに示す。図１ｂに示
した、Ａ′は−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ2−を意味し、ｎは２で
あるＴ３誘導体（ＥＰ ０ ４４２ ３７２にも記載され
ている）２２０mg（０.１６２mmol）を３mlの乾燥Ｎ,Ｎ
−ジメチル−ホルムアミド（ＤＭＦ）中にまず導入し、
２mlのＤＭＦ中BeriLux標識（Ｎ−ヒドロキシスクシン
イミジル反応基含有）１２４mg（０.１６２mmol）溶液
を添加し、混合物を室温で48時間撹拌する。溶媒を油圧
ポンプ真空下に留去する。残留物をプレパラティブ中圧
クロマトグラフィー（Buechiシステム）によって逆相カ
ラム〔固定相：LichroPrep C-18（Merck）；移動相：メ
タノール／水＝７０：３０＋０.１容量％のトリフルオ
ロ酢酸〕上にて精製する。１６７mg（５２％）の黄橙色
の粉末が単離される。〔Ｃ74Ｈ89Ｉ3Ｎ7Ｏ19Ｓ〕+（１
７９２）〔ＣＦ3ＣＯ2〕-（１１３）；ＭＳ：（ＦＡ
Ｂ）１９７２(Ｍ+）。
【００２６】Ｂ） Ｔ３ハプテントレーサー抗体複合体
の調製 ａ） 抗−指示薬成分抗体：BeriLux標識に対するモノ
クローナルマウス抗体（BW90ー9／016，BehringwerkeA
G，Marburg）を、０.５Ｍ酢酸ナトリウム、０.５Ｍ Ｎ
ａＣｌ、５０mM トリス塩酸塩pH７.０、０.０１％ナト
リウムアジド中に溶解させた。抗体の濃度は１１.５mg
／mlとした。
の調製 ａ） 抗−指示薬成分抗体：BeriLux標識に対するモノ
クローナルマウス抗体（BW90ー9／016，BehringwerkeA
G，Marburg）を、０.５Ｍ酢酸ナトリウム、０.５Ｍ Ｎ
ａＣｌ、５０mM トリス塩酸塩pH７.０、０.０１％ナト
リウムアジド中に溶解させた。抗体の濃度は１１.５mg
／mlとした。
【００２７】ｂ） 調製および精製 ６００μｌのインキュベーション緩衝液（１０mMリン酸
塩、８ｇのＮａＣｌ／リットルおよび０.２ｇのＫＣｌ
／リットル、pH７.３）、８.７μｌの抗−標識抗体溶液
（ａ参照）、６０μｌのアセトニトリルおよび２.５μ
ｌのＴ３ハプテントレーサー（Ａ）（１mg／mlアセトニ
トリル）を混合し室温で１５分間インキュベートする。
精製はゲルクロマトグラフィー（PD-10 Sephadex G-25
M；コード番号１７-０８５１−０１、床容量９ml、分画
サイズ０.５ml）によって行う。溶出像は図２に示す。
塩、８ｇのＮａＣｌ／リットルおよび０.２ｇのＫＣｌ
／リットル、pH７.３）、８.７μｌの抗−標識抗体溶液
（ａ参照）、６０μｌのアセトニトリルおよび２.５μ
ｌのＴ３ハプテントレーサー（Ａ）（１mg／mlアセトニ
トリル）を混合し室温で１５分間インキュベートする。
精製はゲルクロマトグラフィー（PD-10 Sephadex G-25
M；コード番号１７-０８５１−０１、床容量９ml、分画
サイズ０.５ml）によって行う。溶出像は図２に示す。
【００２８】Ｃ） ＦＴ３（遊離トリヨードサイロニン
含量）の定量のためのルミネセンスイムノアッセイにお
けるＴ３ハプテントレーサー抗体複合体の使用 ａ） 固相 用いられた固相はBeriLux FT3 キットのコーテイングチ
ューブである。 ｂ） トレーサー Ｂ）に記載したトレーサーは１５０ng／ml BeriLux FT3
トレーサー緩衝液の濃度で保存した。 ｃ） ＦＴ３標準 ＦＴ３標準は０〜５０pg／ml血清マトリックスの範囲の
濃度で使用した。 ｄ） アッセイ操作 １００μｌのサンプルと２００μｌのBeriLux FT3 イン
キュベーション緩衝液をピペットによってBeriLux FT3
でコーテイングしたチューブに採取した。チューブを室
温で３０分間振盪した（３００rpm）。各回０.５mlのＰ
ＢＳ緩衝液で２回洗浄後、２００μｌのトレーサーをピ
ペットで加え、混合物を室温にてさらに５分間振盪し
た。各回０.５mlのＰＢＳ緩衝液で３回洗浄したのちチ
ューブをBeriLux アナライザーで測定した。結果は図３
に示す(ＲＬＵは「相対光単位」)。
含量）の定量のためのルミネセンスイムノアッセイにお
けるＴ３ハプテントレーサー抗体複合体の使用 ａ） 固相 用いられた固相はBeriLux FT3 キットのコーテイングチ
ューブである。 ｂ） トレーサー Ｂ）に記載したトレーサーは１５０ng／ml BeriLux FT3
トレーサー緩衝液の濃度で保存した。 ｃ） ＦＴ３標準 ＦＴ３標準は０〜５０pg／ml血清マトリックスの範囲の
濃度で使用した。 ｄ） アッセイ操作 １００μｌのサンプルと２００μｌのBeriLux FT3 イン
キュベーション緩衝液をピペットによってBeriLux FT3
でコーテイングしたチューブに採取した。チューブを室
温で３０分間振盪した（３００rpm）。各回０.５mlのＰ
ＢＳ緩衝液で２回洗浄後、２００μｌのトレーサーをピ
ペットで加え、混合物を室温にてさらに５分間振盪し
た。各回０.５mlのＰＢＳ緩衝液で３回洗浄したのちチ
ューブをBeriLux アナライザーで測定した。結果は図３
に示す(ＲＬＵは「相対光単位」)。
【００２９】例２ （ＩｇＧ；磁性粒子）Ａ）およびＢ） 例１と同様である。 Ｃ） ＦＴ３の定量のためのルミネセンスイムノアッセ
イにおけるＴ３ハプテントレーサー抗体複合体の使用 ａ） 固相 Rhone-Poulenc（商品番号ＥＭ １−１００／２０）から
入手した磁性粒子をカルボジイミド法〔G. Wendlberge
r, P. Steizel, Synthesis of Peptides, partII（Meth
ods of Org. Chem.) Houben-Weyl, 第４版 1952, Vol.
XV／２, 1974〕を用いモノクローナル抗−Ｔ３抗体（Be
riLux FT3 抗体）でコーティングした。コーテイング濃
度は10％濃度の磁性粒子懸濁液１mlあたり抗体０.２５m
gとした。そのまま使用できる懸濁液における磁性粒子
濃度は２.５mg／ml保存緩衝液（１リットル中１０.３６
ｇのＣＨＥＳ、０.５ｇのナトリウムアジド、１ｇのウ
シＩｇＧ、pH８.０）とした。
イにおけるＴ３ハプテントレーサー抗体複合体の使用 ａ） 固相 Rhone-Poulenc（商品番号ＥＭ １−１００／２０）から
入手した磁性粒子をカルボジイミド法〔G. Wendlberge
r, P. Steizel, Synthesis of Peptides, partII（Meth
ods of Org. Chem.) Houben-Weyl, 第４版 1952, Vol.
XV／２, 1974〕を用いモノクローナル抗−Ｔ３抗体（Be
riLux FT3 抗体）でコーティングした。コーテイング濃
度は10％濃度の磁性粒子懸濁液１mlあたり抗体０.２５m
gとした。そのまま使用できる懸濁液における磁性粒子
濃度は２.５mg／ml保存緩衝液（１リットル中１０.３６
ｇのＣＨＥＳ、０.５ｇのナトリウムアジド、１ｇのウ
シＩｇＧ、pH８.０）とした。
【００３０】ｂ）およびｃ） トレーサーおよびＦＴ３
標準 例１と同様である。 ｄ） アッセイ操作 ２０μｌのコーティング磁性粒子（ａ）、１００μｌの
サンプル、および２００μｌのBeriLux FT3 インキュベ
ーション緩衝液をポリスチレンチューブ中３７℃で３０
分間インキュベートした。固相を各回０.５mlのＰＢＳ
緩衝液で２回洗浄したのち、２００μｌのトレーサーを
添加し、混合物を室温で５分間インキュベートした。各
回０.５mlのＰＢＳ緩衝液で３回洗浄したのち、チュー
ブをBeriLux アナライザーで測定した。結果は図４に示
す。
標準 例１と同様である。 ｄ） アッセイ操作 ２０μｌのコーティング磁性粒子（ａ）、１００μｌの
サンプル、および２００μｌのBeriLux FT3 インキュベ
ーション緩衝液をポリスチレンチューブ中３７℃で３０
分間インキュベートした。固相を各回０.５mlのＰＢＳ
緩衝液で２回洗浄したのち、２００μｌのトレーサーを
添加し、混合物を室温で５分間インキュベートした。各
回０.５mlのＰＢＳ緩衝液で３回洗浄したのち、チュー
ブをBeriLux アナライザーで測定した。結果は図４に示
す。
【００３１】例３ （Ｆａｂ；コーテイングチューブ） Ａ） Ｔ３ハプテントレーサーの調製 例１と同様である。 Ｂ） Ｔ３ハプテントレーサーと抗体Ｆａｂフラグメン
トの複合体の調製 ａ） 抗−指示薬成分抗体（Ｆａｂフラグメント） モノクローナルマウス抗体（BW90-9/016，Behringwerke
AG，Marburg）のパパイン切断によって得られたBeriLu
x標識に対するＦａｂフラグメントを０.５Ｍ酢酸ナトリ
ウム、０.５Ｍ ＮａＣｌ、５０mMトリス塩酸塩、pH７.
０、および０.０１％ナトリウムアジド中に溶解する。
Ｆａｂフラグメントの濃度は１mg／mlとした。 ｂ） 調製および精製 ５００μｌのインキュベーション緩衝液（１０mMリン酸
塩、８ｇのＮａＣｌ／リットルおよび０.２ｇのＫＣｌ
／リットル、pH７.３）、１００μｌの抗−標識抗体
（Ｆａｂ）溶液（ａ参照）、６０μｌのアセトニトリ
ル、ならびに７.６μｌのＴ３ハプテントレーサー
（Ａ）（１mg／mlアセトニトリル）を混合し室温で１５
分間インキュベートする。精製は、ゲルクロマトグラフ
ィー（PD-10 Sephadex G-25M; コード番号17-0851-01、
床容量９ml、分画サイズ０.５ml）により実施した。溶
出像を図５に示す。
トの複合体の調製 ａ） 抗−指示薬成分抗体（Ｆａｂフラグメント） モノクローナルマウス抗体（BW90-9/016，Behringwerke
AG，Marburg）のパパイン切断によって得られたBeriLu
x標識に対するＦａｂフラグメントを０.５Ｍ酢酸ナトリ
ウム、０.５Ｍ ＮａＣｌ、５０mMトリス塩酸塩、pH７.
０、および０.０１％ナトリウムアジド中に溶解する。
Ｆａｂフラグメントの濃度は１mg／mlとした。 ｂ） 調製および精製 ５００μｌのインキュベーション緩衝液（１０mMリン酸
塩、８ｇのＮａＣｌ／リットルおよび０.２ｇのＫＣｌ
／リットル、pH７.３）、１００μｌの抗−標識抗体
（Ｆａｂ）溶液（ａ参照）、６０μｌのアセトニトリ
ル、ならびに７.６μｌのＴ３ハプテントレーサー
（Ａ）（１mg／mlアセトニトリル）を混合し室温で１５
分間インキュベートする。精製は、ゲルクロマトグラフ
ィー（PD-10 Sephadex G-25M; コード番号17-0851-01、
床容量９ml、分画サイズ０.５ml）により実施した。溶
出像を図５に示す。
【００３２】Ｃ） ＦＴ３の定量のためのルミネセンス
イムノアッセイにおけるＴ３ハプテントレーサー抗体Ｆ
ａｂフラグメント複合体の使用 ａ）〜ｄ） 固相、トレーサー、ＦＴ３標準およびアッ
セイ操作 ５０ng／mlのトレーサー濃度を使用する以外は例１と同
様である。標準曲線は図６に示す。
イムノアッセイにおけるＴ３ハプテントレーサー抗体Ｆ
ａｂフラグメント複合体の使用 ａ）〜ｄ） 固相、トレーサー、ＦＴ３標準およびアッ
セイ操作 ５０ng／mlのトレーサー濃度を使用する以外は例１と同
様である。標準曲線は図６に示す。
【００３３】例４ （Ｆｅｂ；磁性粒子）Ａ）およびＢ） 例３と同様と同様である。 Ｃ） ＦＴ３の定量のためのルミネセンスイムノアッセ
イにおけるＴ３ハプテントレーサー抗体ＦＡＢフラグメ
ント複合体の使用 ａ）〜ｄ） 固相、トレーサー、ＦＴ３標準およびアッ
セイ操作 例２と同様である。標準曲線は図７に示す。
イにおけるＴ３ハプテントレーサー抗体ＦＡＢフラグメ
ント複合体の使用 ａ）〜ｄ） 固相、トレーサー、ＦＴ３標準およびアッ
セイ操作 例２と同様である。標準曲線は図７に示す。
【００３４】例５ （遊離ハプテントレーサーのシグナ
ル安定性） ハプテントレーサー溶液（遊離ハプテントレーサー、す
なわち抗−標識抗体で複合体を形成していないトレーサ
ーを含有する溶液）の不安定性を示すため、図１ａに示
すようなＴ３ハプテントレーサー０.３mgを０.３mlのア
セトニトリル中に溶解して、透明な溶液（１mg／ml）を
作成した。この溶液を、トレーサー緩衝液（８.８ｇの
ＮａＣｌ／リットル、１ｇのMergal K9N／リットル、２
ｇのウシＩｇＧ／リットル含有する１００mMリン酸塩緩
衝液、pH６.３)でＴ３ハプテントレーサー１０ng／ml濃
度まで希釈した（＝保存溶液）。
ル安定性） ハプテントレーサー溶液（遊離ハプテントレーサー、す
なわち抗−標識抗体で複合体を形成していないトレーサ
ーを含有する溶液）の不安定性を示すため、図１ａに示
すようなＴ３ハプテントレーサー０.３mgを０.３mlのア
セトニトリル中に溶解して、透明な溶液（１mg／ml）を
作成した。この溶液を、トレーサー緩衝液（８.８ｇの
ＮａＣｌ／リットル、１ｇのMergal K9N／リットル、２
ｇのウシＩｇＧ／リットル含有する１００mMリン酸塩緩
衝液、pH６.３)でＴ３ハプテントレーサー１０ng／ml濃
度まで希釈した（＝保存溶液）。
【００３５】様々な時間の経過後に、この保存溶液から
サンプルを採取してルミノメーターで測定した。図８は
免疫グロブリンの形で保護蛋白質が存在しているにもか
かわらずシグナル活性はサンプルごとに急激に低下する
ことを明瞭に示している。他方、複合体を形成したハプ
テントレーサーのシグナルは一定したままである。１７
時間後、保存溶液の一部を等量ずつ他の（同一寸法）容
器（ガラス、ポリスチレンまたはポリエチレン製）に移
した。図９から明らかなように、続いて新たな著しいシ
グナル活性の低下が起こり、これは順次、使用された容
器の材料に強く依存する。横軸上の時間情報は保存溶液
の調製後の時間である。
サンプルを採取してルミノメーターで測定した。図８は
免疫グロブリンの形で保護蛋白質が存在しているにもか
かわらずシグナル活性はサンプルごとに急激に低下する
ことを明瞭に示している。他方、複合体を形成したハプ
テントレーサーのシグナルは一定したままである。１７
時間後、保存溶液の一部を等量ずつ他の（同一寸法）容
器（ガラス、ポリスチレンまたはポリエチレン製）に移
した。図９から明らかなように、続いて新たな著しいシ
グナル活性の低下が起こり、これは順次、使用された容
器の材料に強く依存する。横軸上の時間情報は保存溶液
の調製後の時間である。
【図１】ａは本発明に用いられるハプテントレーサー複
合体の一例である、アクリジニウムスルホンアミド標識
トリヨードサイロニンの構造を示し、ｂはアクリジニウ
ムスルホンアミド標識トリヨードサイロニンの製造に用
いられるスペーサー基を有するトリヨードサイロニンの
構造を示す。
合体の一例である、アクリジニウムスルホンアミド標識
トリヨードサイロニンの構造を示し、ｂはアクリジニウ
ムスルホンアミド標識トリヨードサイロニンの製造に用
いられるスペーサー基を有するトリヨードサイロニンの
構造を示す。
【図２】ハプテン（トリヨードサイロニン）トレーサー
（アクリジニウムスルホンアミド）抗体(ＩｇＧ)複合体
の精製ゲルクロマトグラフィー溶出像(例１)を示す。
（アクリジニウムスルホンアミド）抗体(ＩｇＧ)複合体
の精製ゲルクロマトグラフィー溶出像(例１)を示す。
【図３】ハプテン（トリヨードサイロニン）トレーサー
（アクリジニウムスルホンアミド）抗体（ＩｇＧ）複合
体を用いた遊離トリヨードサイロニンのルミネセンスイ
ムノアッセイによる分析例（例１：コーティングチュー
ブ使用）を示す。
（アクリジニウムスルホンアミド）抗体（ＩｇＧ）複合
体を用いた遊離トリヨードサイロニンのルミネセンスイ
ムノアッセイによる分析例（例１：コーティングチュー
ブ使用）を示す。
【図４】ハプテン（トリヨードサイロニン）トレーサー
（アクリジニウムスルホンアミド）抗体（ＩｇＧ）複合
体を用いた遊離トリヨードサイロニンのルミネセンスイ
ムノアッセイによる分析例（例２：磁性粒子の使用）を
示す。
（アクリジニウムスルホンアミド）抗体（ＩｇＧ）複合
体を用いた遊離トリヨードサイロニンのルミネセンスイ
ムノアッセイによる分析例（例２：磁性粒子の使用）を
示す。
【図５】ハプテン（トリヨードサイロニン）トレーサー
（アクリジニウムスルホンアミド）抗体(Ｆａｂ)複合体
の精製ゲルクロマトグラフィー溶出像(例３）を示す。
（アクリジニウムスルホンアミド）抗体(Ｆａｂ)複合体
の精製ゲルクロマトグラフィー溶出像(例３）を示す。
【図６】ハプテン（トリヨードサイロニン）トレーサー
（アクリジニウムスルホンアミド）抗体（Ｆａｂ）複合
体を用いた遊離トリヨードサイロニンのルミネセンスイ
ムノアッセイによる分析例（例３：コーティングチュー
ブ使用）を示す。
（アクリジニウムスルホンアミド）抗体（Ｆａｂ）複合
体を用いた遊離トリヨードサイロニンのルミネセンスイ
ムノアッセイによる分析例（例３：コーティングチュー
ブ使用）を示す。
【図７】ハプテン（トリヨードサイロニン）トレーサー
（アクリジニウムスルホンアミド）抗体（Ｆａｂ）複合
体を用いた遊離トリヨードサイロニンのルミネセンスイ
ムノアッセイによる分析例（例４：磁性粒子の使用）を
示す。
（アクリジニウムスルホンアミド）抗体（Ｆａｂ）複合
体を用いた遊離トリヨードサイロニンのルミネセンスイ
ムノアッセイによる分析例（例４：磁性粒子の使用）を
示す。
【図８】遊離および複合体形成ハプテン（トリヨードサ
イロニン）トレーサーのシグナル安定性を示す。
イロニン）トレーサーのシグナル安定性を示す。
【図９】遊離ハプテン（トリヨードサイロニン）トレー
サー保存溶液のシグナル安定性における保存容器材質の
影響を示す。
サー保存溶液のシグナル安定性における保存容器材質の
影響を示す。
Claims (15)
- 【請求項１】 一方では直接またはスペーサー基を介し
て指示薬成分に連結するハプテンを含有し、他方では特
異的に指示薬成分と結合可能な抗体を含有するハプテン
トレーサー複合体。 - 【請求項２】 指示薬成分が化学ルミネセンス発生能を
有する基である請求項１に記載の複合体。 - 【請求項３】 指示薬成分がアクリジニウムアシルスル
ホンアミド、アクリジニウムエステル、ルミノール、イ
ソルミノール、ジオキセタン、シュウ酸エステルもしく
はシュウ酸アミドまたはこれらの化合物の一種の誘導体
からなる群より選択される化合物である請求項２に記載
の複合体。 - 【請求項４】 指示薬成分が蛍光ルミネセンス発生能を
有する基である請求項１に記載の複合体。 - 【請求項５】 指示薬成分が生物ルミネセンス発生能を
有する基である請求項１に記載の複合体。 - 【請求項６】 指示薬成分がエレクトロルミネセンス発
生能を有する基である請求項１に記載の複合体。 - 【請求項７】 指示薬成分がリン光発生能を有する基で
ある請求項１に記載の複合体。 - 【請求項８】 指示薬成分に対する抗体がモノクローナ
ル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント、化学
的に修飾された抗体または化学的に修飾された抗体フラ
グメントである請求項１〜７のいずれか一項に記載の複
合体。 - 【請求項９】 指示薬成分に対する抗体を、指示薬成分
に連結されたハプテンと水溶液中で混合し、この場合可
能であれば指示薬成分に連結されたハプテンの溶解性を
改良するために、水溶液が有機溶媒、とくにアセトニト
リル、ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシ
ドを含有する請求項１〜８のいずれか一項に記載の複合
体の製造方法。 - 【請求項１０】 請求項１〜８のいずれか一項に記載の
複合体を含有する、抗原および／またはハプテン検出の
ためのイムノアッセイ行う試験キット。 - 【請求項１１】 ルミネセンスイムノアッセイの実施の
ための試験キットである請求項１０に記載の試験キッ
ト。 - 【請求項１２】 競合イムノアッセイの実施に適した請
求項１０〜１１のいずれか一項に記載の試験キット。 - 【請求項１３】 さらにハプテンに対する抗体が結合し
ている磁化可能な粒子を含有する請求項１０〜１２のい
ずれか一項に記載の試験キット。 - 【請求項１４】 抗原および／またはハプテンの検出の
ためのイムノアッセイにおける請求項１〜８のいずれか
一項に記載の複合体の使用。 - 【請求項１５】 競合イムノアッセイが関与する請求項
１４に記載の使用。
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