JPH08233816A - 免疫学的測定法 - Google Patents
免疫学的測定法Info
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- JPH08233816A JPH08233816A JP6343295A JP6343295A JPH08233816A JP H08233816 A JPH08233816 A JP H08233816A JP 6343295 A JP6343295 A JP 6343295A JP 6343295 A JP6343295 A JP 6343295A JP H08233816 A JPH08233816 A JP H08233816A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】自動分析装置を用いて測定を行なう生体試料中
の微量成分の免疫学的測定法に於ける、測定用試液中の
蛋白成分が自動分析装置の構造上の何らかの要因により
変性して生じる、抗原抗体反応に起因しない非特異的濁
りによる測定値への影響を抑制あるいは低減して、測定
対象成分を高精度に再現性よく、迅速且つ簡便に測定で
きる方法及び試液を提供。 【構成】自動分析装置を用い、抗原抗体反応に起因する
濁度の変化又は散乱光強度の変化に基づいて測定を行な
う、生体試料中の微量成分の免疫学的測定法に於いて、
蛋白成分を含有する該測定用試液中に、親水基として糖
鎖残基を有する界面活性剤を共存させることを特徴とす
る免疫学的測定法及びそれに用いる測定用試液。
の微量成分の免疫学的測定法に於ける、測定用試液中の
蛋白成分が自動分析装置の構造上の何らかの要因により
変性して生じる、抗原抗体反応に起因しない非特異的濁
りによる測定値への影響を抑制あるいは低減して、測定
対象成分を高精度に再現性よく、迅速且つ簡便に測定で
きる方法及び試液を提供。 【構成】自動分析装置を用い、抗原抗体反応に起因する
濁度の変化又は散乱光強度の変化に基づいて測定を行な
う、生体試料中の微量成分の免疫学的測定法に於いて、
蛋白成分を含有する該測定用試液中に、親水基として糖
鎖残基を有する界面活性剤を共存させることを特徴とす
る免疫学的測定法及びそれに用いる測定用試液。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、例えば血清、血漿等の
生体試料中の微量成分を自動分析装置を用いて測定する
免疫学的測定法に於ける改良技術に関する。詳しくは、
自動分析装置の構造上の何らかの要因により試薬中の蛋
白成分が変性して生じる非特異的な濁りに起因する測定
誤差を排除し、目的物質のみを迅速且つ高精度に定量し
得る免疫学的測定法に関する。
生体試料中の微量成分を自動分析装置を用いて測定する
免疫学的測定法に於ける改良技術に関する。詳しくは、
自動分析装置の構造上の何らかの要因により試薬中の蛋
白成分が変性して生じる非特異的な濁りに起因する測定
誤差を排除し、目的物質のみを迅速且つ高精度に定量し
得る免疫学的測定法に関する。
【０００２】
【発明の背景】近年、多数検体、多項目同時分析が可能
な自動分析装置が普及し、抗原抗体反応に起因する濁度
の変化を測定することにより目的成分の測定を行なう所
謂免疫比濁法（ＴＩＡ）や、抗原抗体反応に起因する散
乱光強度の変化を測定することにより目的成分の測定を
行なう所謂免疫比ろう法（ＮＩＡ）等の免疫学的測定法
による生体試料中の微量成分の測定を自動分析装置へ適
用することが試みられている。
な自動分析装置が普及し、抗原抗体反応に起因する濁度
の変化を測定することにより目的成分の測定を行なう所
謂免疫比濁法（ＴＩＡ）や、抗原抗体反応に起因する散
乱光強度の変化を測定することにより目的成分の測定を
行なう所謂免疫比ろう法（ＮＩＡ）等の免疫学的測定法
による生体試料中の微量成分の測定を自動分析装置へ適
用することが試みられている。
【０００３】しかしながら、免疫学的測定法に於いて
は、自動分析装置を用いて連続的に測定を行なうと、自
動分析装置の構造上の何らかの要因により測定用試液中
の蛋白成分が変性して非特異的な濁りが生じ、その結果
測定誤差が生じて測定対象成分を高精度に測定すること
が妨げられるという問題点があり、このような問題点を
回避し得る方法の開発が望まれている状況にある。
は、自動分析装置を用いて連続的に測定を行なうと、自
動分析装置の構造上の何らかの要因により測定用試液中
の蛋白成分が変性して非特異的な濁りが生じ、その結果
測定誤差が生じて測定対象成分を高精度に測定すること
が妨げられるという問題点があり、このような問題点を
回避し得る方法の開発が望まれている状況にある。
【０００４】
【発明の目的】本発明は、上記した如き状況に鑑み成さ
れたもので、自動分析装置を用いて測定を行なう生体試
料中の微量成分の免疫学的測定法に於ける、測定用試液
中の蛋白成分が自動分析装置の構造上の何らかの要因に
より変性して生じる、抗原抗体反応に起因しない非特異
的濁りを抑制或いは低減することにより、測定対象の微
量成分を高精度に再現性よく、迅速且つ簡便に測定でき
る方法及び試液を提供することをその目的とする。
れたもので、自動分析装置を用いて測定を行なう生体試
料中の微量成分の免疫学的測定法に於ける、測定用試液
中の蛋白成分が自動分析装置の構造上の何らかの要因に
より変性して生じる、抗原抗体反応に起因しない非特異
的濁りを抑制或いは低減することにより、測定対象の微
量成分を高精度に再現性よく、迅速且つ簡便に測定でき
る方法及び試液を提供することをその目的とする。
【０００５】
【発明の構成】本発明は、自動分析装置を用い、抗原抗
体反応に起因する濁度の変化又は散乱光強度の変化に基
づいて測定を行なう、生体試料中の微量成分の免疫学的
測定法に於いて、蛋白成分を含有する該測定用試液中
に、親水基として糖鎖残基を有する界面活性剤を共存さ
せることを特徴とする免疫学的測定法の発明である。ま
た、本発明は、親水基として糖鎖残基を有する界面活性
剤が０．１〜１０重量％添加されていることを特徴とす
る、蛋白成分を含有する免疫学的測定用試液の発明であ
る。
体反応に起因する濁度の変化又は散乱光強度の変化に基
づいて測定を行なう、生体試料中の微量成分の免疫学的
測定法に於いて、蛋白成分を含有する該測定用試液中
に、親水基として糖鎖残基を有する界面活性剤を共存さ
せることを特徴とする免疫学的測定法の発明である。ま
た、本発明は、親水基として糖鎖残基を有する界面活性
剤が０．１〜１０重量％添加されていることを特徴とす
る、蛋白成分を含有する免疫学的測定用試液の発明であ
る。
【０００６】即ち、本発明者らは、免疫学的測定法によ
る測定を自動分析装置を用いて連続的に実施する際に生
じる現象、即ち、測定用試液中の蛋白成分（例えば、抗
体、アルブミン等）が、自動分析装置の試液分注系の構
造上の問題（おそらく切替弁内に於ける何らかの要因）
により変性されて非特異的濁りを生じ、それに起因して
測定誤差が生じるという現象を抑制或いは回避して、測
定対象の微量成分を高精度に測定し得る方法を見い出す
べく鋭意研究を重ねた結果、該免疫学的測定用試液中
に、親水基として糖鎖残基を有する界面活性剤を共存さ
せることにより、所期の目的が達せられることを見い出
し、本発明を完成するに至った。
る測定を自動分析装置を用いて連続的に実施する際に生
じる現象、即ち、測定用試液中の蛋白成分（例えば、抗
体、アルブミン等）が、自動分析装置の試液分注系の構
造上の問題（おそらく切替弁内に於ける何らかの要因）
により変性されて非特異的濁りを生じ、それに起因して
測定誤差が生じるという現象を抑制或いは回避して、測
定対象の微量成分を高精度に測定し得る方法を見い出す
べく鋭意研究を重ねた結果、該免疫学的測定用試液中
に、親水基として糖鎖残基を有する界面活性剤を共存さ
せることにより、所期の目的が達せられることを見い出
し、本発明を完成するに至った。
【０００７】本発明の測定法を実施するには、抗原抗体
反応を利用した免疫学的測定法に用いる、蛋白成分を含
む測定試液中に、親水基として糖鎖残基を有する界面活
性剤を共存させておくこと以外は、自体公知の免疫学的
測定法の測定条件（例えば反応時間、測定波長等）や、
測定操作法に準じて実施すればよい。また、測定時に使
用するその他の試薬や自動分析装置等も通常この分野で
使用されているものが何れも例外なく使用し得る。
反応を利用した免疫学的測定法に用いる、蛋白成分を含
む測定試液中に、親水基として糖鎖残基を有する界面活
性剤を共存させておくこと以外は、自体公知の免疫学的
測定法の測定条件（例えば反応時間、測定波長等）や、
測定操作法に準じて実施すればよい。また、測定時に使
用するその他の試薬や自動分析装置等も通常この分野で
使用されているものが何れも例外なく使用し得る。
【０００８】本発明に於いて用いられる、親水基として
糖鎖残基を有する界面活性剤としては、例えばｎ−ドデ
シル−β−Ｄ−マルトピラノシド、ｎ−オクチル−β−
Ｄ−グルコピラノシド、ｎ−オクチル−β−Ｄ−チオグ
ルコピラノシド、ｎ−ヘプチル−β−Ｄ−チオグルコピ
ラノシド、β−Ｄ−フルクトピラノシル−α−Ｄ−グル
コピラノシドモノドデカノエート、β−Ｄ−フルクトピ
ラノシル−α−Ｄ−グルコピラノシドモノデカノエート
等が代表的なものとして挙げられるが、中でもｎ−ドデ
シル−β−Ｄ−マルトピラノシド、ｎ−オクチル−β−
Ｄ−チオグルコピラノシド、β−Ｄ−フルクトピラノシ
ル−α−Ｄ−グルコピラノシドモノドデカノエート等
は、自動分析装置の構造上の何らかの要因により蛋白成
分が変性して生じる非特異的な濁りの測定値への影響を
回避する効果が特に大きいのでより好ましい。尚、これ
ら界面活性剤は単独で用いても、適宜２種以上組み合わ
せて用いても良いことは言うまでもない。
糖鎖残基を有する界面活性剤としては、例えばｎ−ドデ
シル−β−Ｄ−マルトピラノシド、ｎ−オクチル−β−
Ｄ−グルコピラノシド、ｎ−オクチル−β−Ｄ−チオグ
ルコピラノシド、ｎ−ヘプチル−β−Ｄ−チオグルコピ
ラノシド、β−Ｄ−フルクトピラノシル−α−Ｄ−グル
コピラノシドモノドデカノエート、β−Ｄ−フルクトピ
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等が代表的なものとして挙げられるが、中でもｎ−ドデ
シル−β−Ｄ−マルトピラノシド、ｎ−オクチル−β−
Ｄ−チオグルコピラノシド、β−Ｄ−フルクトピラノシ
ル−α−Ｄ−グルコピラノシドモノドデカノエート等
は、自動分析装置の構造上の何らかの要因により蛋白成
分が変性して生じる非特異的な濁りの測定値への影響を
回避する効果が特に大きいのでより好ましい。尚、これ
ら界面活性剤は単独で用いても、適宜２種以上組み合わ
せて用いても良いことは言うまでもない。
【０００９】本発明で用いられる、蛋白成分を含有する
免疫学的測定用試液中の、親水基として糖鎖残基を有す
る界面活性剤の濃度としては、使用する界面活性剤の種
類により若干変動するが、該測定用試液中の濃度として
通常０．１〜１０(W/V)％の範囲となるように適宜選択
される。尚、該界面活性剤の濃度を０．１(W/V)％より
も低くすると、目的の効果は充分には得られず、また、
該界面活性剤の溶解性を考慮すると、この濃度を１０(W
/V)％よりも高くしようとすることは実用上難しい。
免疫学的測定用試液中の、親水基として糖鎖残基を有す
る界面活性剤の濃度としては、使用する界面活性剤の種
類により若干変動するが、該測定用試液中の濃度として
通常０．１〜１０(W/V)％の範囲となるように適宜選択
される。尚、該界面活性剤の濃度を０．１(W/V)％より
も低くすると、目的の効果は充分には得られず、また、
該界面活性剤の溶解性を考慮すると、この濃度を１０(W
/V)％よりも高くしようとすることは実用上難しい。
【００１０】親水基として糖鎖残基を有する界面活性剤
を、免疫学的測定用試液中に共存させるには、該試液中
に添加、溶解する方法が最も簡便であるが、最終的に該
試液中に共存させることのできる方法であればこの方法
に限定されるものではない。
を、免疫学的測定用試液中に共存させるには、該試液中
に添加、溶解する方法が最も簡便であるが、最終的に該
試液中に共存させることのできる方法であればこの方法
に限定されるものではない。
【００１１】本発明で用いられる免疫学的測定用試液に
は、例えばトリス緩衝剤、リン酸緩衝剤、ベロナール緩
衝剤、ホウ酸緩衝剤、グッド緩衝剤等通常免疫学的測定
法に於いて用いられている緩衝剤が添加されていてもよ
く、また、該試液の測定反応時のｐＨとしては抗原抗体
反応を抑制しない範囲であれば特に限定されないが、通
常６〜１０、好ましくは７〜９の範囲から適宜選択され
る。
は、例えばトリス緩衝剤、リン酸緩衝剤、ベロナール緩
衝剤、ホウ酸緩衝剤、グッド緩衝剤等通常免疫学的測定
法に於いて用いられている緩衝剤が添加されていてもよ
く、また、該試液の測定反応時のｐＨとしては抗原抗体
反応を抑制しない範囲であれば特に限定されないが、通
常６〜１０、好ましくは７〜９の範囲から適宜選択され
る。
【００１２】尚、本発明で用いられる免疫学的測定用試
液には、通常この分野で用いられる界面活性剤（親水基
として糖鎖残基を有する界面活性剤以外のもの）が通常
この分野で用いられる濃度範囲で共存していてもよい。
このような界面活性剤共存下であっても、本発明の方法
によれば、測定用試液中の蛋白成分が自動分析装置の構
造上の何らかの要因により変性されるのを（非特異的濁
りを生じさせるのを）、抑制或いは低減することができ
る。
液には、通常この分野で用いられる界面活性剤（親水基
として糖鎖残基を有する界面活性剤以外のもの）が通常
この分野で用いられる濃度範囲で共存していてもよい。
このような界面活性剤共存下であっても、本発明の方法
によれば、測定用試液中の蛋白成分が自動分析装置の構
造上の何らかの要因により変性されるのを（非特異的濁
りを生じさせるのを）、抑制或いは低減することができ
る。
【００１３】また、本発明で用いられる免疫学的測定用
試液中には、反応促進剤（凝集反応促進剤）（例えばポ
リエチレングリコール、ポリビニルアルコール等）が通
常この分野で用いられる濃度範囲で共存していてもよ
く、これら反応促進剤共存下であっても本発明の方法に
よれば、測定用試液中の蛋白成分が、自動分析装置の構
造上の何らかの要因により変性されて非特異的濁りとな
ることを、抑制或いは低減することができる。
試液中には、反応促進剤（凝集反応促進剤）（例えばポ
リエチレングリコール、ポリビニルアルコール等）が通
常この分野で用いられる濃度範囲で共存していてもよ
く、これら反応促進剤共存下であっても本発明の方法に
よれば、測定用試液中の蛋白成分が、自動分析装置の構
造上の何らかの要因により変性されて非特異的濁りとな
ることを、抑制或いは低減することができる。
【００１４】本発明の測定方法により測定可能な生体試
料中の微量成分としては、通常の免疫学的測定法で測定
可能なものであれば何れにてもよく特に限定されない
が、例えばＣ反応性蛋白質（ＣＲＰ）、免疫グロブリン
Ｇ（ＩｇＧ）、免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）、免疫グロ
ブリンＭ（ＩｇＭ）、ＡＳＯ（抗ストレプトリジン
Ｏ）、アルブミン、尿中微量アルブミン、補体Ｃ3、補
体Ｃ4、トランスフェリン、ハプトグロブリン、α−フ
ェトプロテイン（ＡＦＰ）等が挙げられる。
料中の微量成分としては、通常の免疫学的測定法で測定
可能なものであれば何れにてもよく特に限定されない
が、例えばＣ反応性蛋白質（ＣＲＰ）、免疫グロブリン
Ｇ（ＩｇＧ）、免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）、免疫グロ
ブリンＭ（ＩｇＭ）、ＡＳＯ（抗ストレプトリジン
Ｏ）、アルブミン、尿中微量アルブミン、補体Ｃ3、補
体Ｃ4、トランスフェリン、ハプトグロブリン、α−フ
ェトプロテイン（ＡＦＰ）等が挙げられる。
【００１５】本発明の免疫学的測定用試液は、上記した
如き本発明の測定法を実施するために用いられるもので
あり、その構成要素の好ましい態様、具体例は上で述べ
た通りである。
如き本発明の測定法を実施するために用いられるもので
あり、その構成要素の好ましい態様、具体例は上で述べ
た通りである。
【００１６】以下に実施例を挙げて、本発明を更に詳細
に述べるが、本発明はこれら実施例により何ら制約を受
けるものではない。
に述べるが、本発明はこれら実施例により何ら制約を受
けるものではない。
【００１７】
実施例１． (1)被検試料及び検量線作成用試料 生理食塩液(150mM NaCl、CRP濃度:0mg/dl)及び「CRP管理
血清」(CRP表示値6.2mg/dl，和光純薬工業(株)製)を、CR
P濃度が0及び6.2mg/dlの２点検量線作成用試料として用
いた。また、該生理食塩液を被検試料としても用いた。 (2)測定用試液 第１試液 3.0w/v％ポリエチレングリコール6,000、0.1w/v％NaN3
及び150mM NaClを含む50mM ３−（Ｎ−モルホリノ）プ
ロパンスルホン酸(MOPS)-NaOH緩衝液（ｐＨ8.0）を第１
試液とした。 第２試液 抗ヒトCRP抗血清(ヤキ゛，和光純薬工業(株)製)1.0mgAb/ml、
150mM NaCl、0.1w/v％NaN3及び、親水基として糖鎖残基
を有する界面活性剤としてｎ−ドデシル−β−Ｄ−マル
トピラノシド、ｎ−オクチル−β−Ｄ−チオグルコピラ
ノシド若しくはβ−Ｄ−フルクトピラノシル−α−Ｄ−
グルコピラノシドモノドデカノエート(以上、(株)同仁
化学研究所製)の何れかを 1.0w/v％含む 50mM MOPS-NaO
H緩衝液（ｐＨ8.0）を第２試液とした。 (3)免疫比濁法によるCRP値測定 （測定操作）日立自動分析装置７３６形（検体処理能
力：１測定項目の場合で、５０検体／時間）を用いて、
以下のように測定を行なった。被検試料 10μｌと第１
試液 250μｌとを混合し、37℃で3分間加温した後、測
定波長 340nmに於ける吸光度（吸光度Ａとする）を測定
した。更に、これに第２試液 50μｌを分注し、37℃で
4.5分間反応させた後、測定波長 340nmに於ける吸光度
（吸光度Ｂとする）を測定し、得られた吸光度Ａ及びＢ
を下記式に当てはめて、反応に由来する吸光度変化値を
求めた。 吸光度変化値＝（吸光度Ｂ）−（２６０／３１０）×
（吸光度Ａ） 尚、測定操作を連続して30回行なった後、該日立自動分
析装置での測定を、被検試料並びに測定用試液をセット
したまま１時間中断した。中断後さらに、同じ被検試料
並びに測定用試液を用いて、上記と同様の操作にて連続
して60回測定を行なった。また、被検試料の代わりに検
量線作成用試料を用いた以外は上記と同じ試液を用い上
記と同様の測定操作を行ない、ＣＲＰ濃度が0及び6.2mg
/dlのときの吸光度変化値を求め、これらの値に基づい
て吸光度変化値とＣＲＰ濃度との関係を表わす検量線を
作成した。これに被検試料を連続測定して得られた吸光
度変化値をあてはめて、各測定に於けるＣＲＰ濃度を算
出した。 （結果）結果を図１に示す。尚、図１に於いて、□は界
面活性剤無添加の第２試液を用いた結果を、◇はｎ−ド
デシル−β−Ｄ−マルトピラノシドを添加した第２試液
を用いた結果を、△はｎ−オクチル−β−Ｄ−チオグル
コピラノシドを添加した第２試液を用いた結果を、▽は
β−Ｄ−フルクトピラノシル−α−Ｄ−グルコピラノシ
ドモノドデカノエートを添加した第２試液を用いた結果
を夫々示す。図１の結果から、親水基として糖鎖残基を
有する界面活性剤を添加することにより、自動分析装置
の構造上の何らかの要因に由来する非特異的濁りによる
測定への影響を低減させることができることが判る。ま
た、図１の結果から、免疫学的測定法による測定を自動
分析装置を使用して行なう場合、非特異的濁りによる影
響は、一旦測定を中断した後に、測定を再開すると徐々
に現われ始め、次第にそれが大きくなり急上昇してピー
クに達した後、徐々に下降している（測定誤差が山形に
増減している）ことが判る。このような現象に対しても
本発明の方法が有効であることが判る。尚、図１の結果
から、親水基として糖鎖残基を有する界面活性剤として
ｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド及びｎ−オク
チル−β−Ｄ−チオグルコピラノシドを用いた場合に、
特に効果が高いことも判る。
血清」(CRP表示値6.2mg/dl，和光純薬工業(株)製)を、CR
P濃度が0及び6.2mg/dlの２点検量線作成用試料として用
いた。また、該生理食塩液を被検試料としても用いた。 (2)測定用試液 第１試液 3.0w/v％ポリエチレングリコール6,000、0.1w/v％NaN3
及び150mM NaClを含む50mM ３−（Ｎ−モルホリノ）プ
ロパンスルホン酸(MOPS)-NaOH緩衝液（ｐＨ8.0）を第１
試液とした。 第２試液 抗ヒトCRP抗血清(ヤキ゛，和光純薬工業(株)製)1.0mgAb/ml、
150mM NaCl、0.1w/v％NaN3及び、親水基として糖鎖残基
を有する界面活性剤としてｎ−ドデシル−β−Ｄ−マル
トピラノシド、ｎ−オクチル−β−Ｄ−チオグルコピラ
ノシド若しくはβ−Ｄ−フルクトピラノシル−α−Ｄ−
グルコピラノシドモノドデカノエート(以上、(株)同仁
化学研究所製)の何れかを 1.0w/v％含む 50mM MOPS-NaO
H緩衝液（ｐＨ8.0）を第２試液とした。 (3)免疫比濁法によるCRP値測定 （測定操作）日立自動分析装置７３６形（検体処理能
力：１測定項目の場合で、５０検体／時間）を用いて、
以下のように測定を行なった。被検試料 10μｌと第１
試液 250μｌとを混合し、37℃で3分間加温した後、測
定波長 340nmに於ける吸光度（吸光度Ａとする）を測定
した。更に、これに第２試液 50μｌを分注し、37℃で
4.5分間反応させた後、測定波長 340nmに於ける吸光度
（吸光度Ｂとする）を測定し、得られた吸光度Ａ及びＢ
を下記式に当てはめて、反応に由来する吸光度変化値を
求めた。 吸光度変化値＝（吸光度Ｂ）−（２６０／３１０）×
（吸光度Ａ） 尚、測定操作を連続して30回行なった後、該日立自動分
析装置での測定を、被検試料並びに測定用試液をセット
したまま１時間中断した。中断後さらに、同じ被検試料
並びに測定用試液を用いて、上記と同様の操作にて連続
して60回測定を行なった。また、被検試料の代わりに検
量線作成用試料を用いた以外は上記と同じ試液を用い上
記と同様の測定操作を行ない、ＣＲＰ濃度が0及び6.2mg
/dlのときの吸光度変化値を求め、これらの値に基づい
て吸光度変化値とＣＲＰ濃度との関係を表わす検量線を
作成した。これに被検試料を連続測定して得られた吸光
度変化値をあてはめて、各測定に於けるＣＲＰ濃度を算
出した。 （結果）結果を図１に示す。尚、図１に於いて、□は界
面活性剤無添加の第２試液を用いた結果を、◇はｎ−ド
デシル−β−Ｄ−マルトピラノシドを添加した第２試液
を用いた結果を、△はｎ−オクチル−β−Ｄ−チオグル
コピラノシドを添加した第２試液を用いた結果を、▽は
β−Ｄ−フルクトピラノシル−α−Ｄ−グルコピラノシ
ドモノドデカノエートを添加した第２試液を用いた結果
を夫々示す。図１の結果から、親水基として糖鎖残基を
有する界面活性剤を添加することにより、自動分析装置
の構造上の何らかの要因に由来する非特異的濁りによる
測定への影響を低減させることができることが判る。ま
た、図１の結果から、免疫学的測定法による測定を自動
分析装置を使用して行なう場合、非特異的濁りによる影
響は、一旦測定を中断した後に、測定を再開すると徐々
に現われ始め、次第にそれが大きくなり急上昇してピー
クに達した後、徐々に下降している（測定誤差が山形に
増減している）ことが判る。このような現象に対しても
本発明の方法が有効であることが判る。尚、図１の結果
から、親水基として糖鎖残基を有する界面活性剤として
ｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド及びｎ−オク
チル−β−Ｄ−チオグルコピラノシドを用いた場合に、
特に効果が高いことも判る。
【００１８】比較例１． (1)被検試料及び検量線作成用試料 生理食塩液(150mM NaCl、CRP濃度:0mg/dl)及び「CRP管理
血清」(CRP表示値6.2mg/dl，和光純薬工業(株)製)を、CR
P濃度が0及び6.2mg/dlの２点検量線作成用試料として用
いた。また、該生理食塩液を被検試料としても用いた。 (2)測定用試液 第１試液 3.0w/v％ポリエチレングリコール6,000、0.1w/v％NaN3
及び150mM NaClを含む50mM MOPS-NaOH緩衝液（ｐＨ8.
0）を第１試液とした。 第２試液 抗ヒトCRP抗血清(ヤキ゛，和光純薬工業(株)製)1.0mgAb/ml、
150mM NaCl、0.1w/v％NaN3及び、界面活性剤として３−
［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］
プロパンスルホン酸（(株)同仁化学研究所製，商品名：
CHAPS）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノ
ラウレート（和光純薬工業(株)製）、ポリオキシエチレ
ン（１０）オクチルフェニルエーテル（和光純薬工業
(株)製）若しくはポリオキシエチレン（２３）ラウリル
エーテル（和光純薬工業(株)製）の何れかを 1.0w/v％
含む 50mM MOPS-NaOH緩衝液（ｐＨ8.0）を第２試液とし
た。 (3)免疫比濁法によるCRP値測定 （測定操作）実施例１の(3)と同様の操作によりＣＲＰ
値を求めた。 （結果）結果を図２に示す。尚、図２に於いて、□は界
面活性剤無添加の第２試液を用いた結果を、◇はCHAPS
を添加した第２試液を用いた結果を、△はポリオキシエ
チレン（２０）ソルビタンモノラウレートを添加した第
２試液を用いた結果を、×はポリオキシエチレン（１
０）オクチルフェニルエーテルを添加した第２試液を用
いた結果を、▽はポリオキシエチレン（２３）ラウリル
エーテルを添加した第２試液を用いた結果を夫々示す。
図２の結果から、親水基が糖鎖残基以外である界面活性
剤は、非特異的濁りによる測定値への影響を低減する効
果が殆どないことが判る。
血清」(CRP表示値6.2mg/dl，和光純薬工業(株)製)を、CR
P濃度が0及び6.2mg/dlの２点検量線作成用試料として用
いた。また、該生理食塩液を被検試料としても用いた。 (2)測定用試液 第１試液 3.0w/v％ポリエチレングリコール6,000、0.1w/v％NaN3
及び150mM NaClを含む50mM MOPS-NaOH緩衝液（ｐＨ8.
0）を第１試液とした。 第２試液 抗ヒトCRP抗血清(ヤキ゛，和光純薬工業(株)製)1.0mgAb/ml、
150mM NaCl、0.1w/v％NaN3及び、界面活性剤として３−
［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］
プロパンスルホン酸（(株)同仁化学研究所製，商品名：
CHAPS）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノ
ラウレート（和光純薬工業(株)製）、ポリオキシエチレ
ン（１０）オクチルフェニルエーテル（和光純薬工業
(株)製）若しくはポリオキシエチレン（２３）ラウリル
エーテル（和光純薬工業(株)製）の何れかを 1.0w/v％
含む 50mM MOPS-NaOH緩衝液（ｐＨ8.0）を第２試液とし
た。 (3)免疫比濁法によるCRP値測定 （測定操作）実施例１の(3)と同様の操作によりＣＲＰ
値を求めた。 （結果）結果を図２に示す。尚、図２に於いて、□は界
面活性剤無添加の第２試液を用いた結果を、◇はCHAPS
を添加した第２試液を用いた結果を、△はポリオキシエ
チレン（２０）ソルビタンモノラウレートを添加した第
２試液を用いた結果を、×はポリオキシエチレン（１
０）オクチルフェニルエーテルを添加した第２試液を用
いた結果を、▽はポリオキシエチレン（２３）ラウリル
エーテルを添加した第２試液を用いた結果を夫々示す。
図２の結果から、親水基が糖鎖残基以外である界面活性
剤は、非特異的濁りによる測定値への影響を低減する効
果が殆どないことが判る。
【００１９】実施例２． (1)被検試料及び検量線作成用試料 生理食塩液(150mM NaCl、CRP濃度:0mg/dl)及び「CRP管理
血清」(CRP表示値6.2mg/dl，和光純薬工業(株)製)を、CR
P濃度が0及び6.2mg/dlの２点検量線作成用試料として用
いた。また、該生理食塩液を被検試料としても用いた。 (2)測定用試液 第１試液 3.0w/v％ポリエチレングリコール6,000、0.1w/v％NaN3
及び150mM NaClを含む50mM MOPS-NaOH緩衝液（ｐＨ8.
0）を第１試液とした。 第２試液 抗ヒトCRP抗血清(ウサキ゛，和光純薬工業(株)製)1.0mgAb/m
l、150mM NaCl、0.1w/v％NaN3及びｎ−ドデシル−β−
Ｄ−マルトピラノシド((株)同仁化学研究所製)を所定濃
度含む 50mM MOPS-NaOH緩衝液（ｐＨ8.0）を第２試液と
した。 (3)免疫比濁法によるCRP値測定 （測定操作）実施例１の(3)と同様の操作によりＣＲＰ
値を求めた。 （結果）結果を図３に示す。尚、図３に於いて、□はｎ
−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド無添加の第２試
液を用いた結果を、◇はｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルト
ピラノシドを０．１w/v％添加した第２試液を用いた結
果を、△はｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシドを
１w/v％添加した第２試液を用いた結果を、×はｎ−ド
デシル−β−Ｄ−マルトピラノシドを５w/v％添加した
第２試液を用いた結果を、▽はｎ−ドデシル−β−Ｄ−
マルトピラノシドを１０w/v％添加した第２試液を用い
た結果を夫々示す。図３の結果から、添加するｎ−ドデ
シル−β−Ｄ−マルトピラノシドの濃度を増加させるこ
とにより、非特異的濁りによる測定への影響をより低減
させることができることが判る。
血清」(CRP表示値6.2mg/dl，和光純薬工業(株)製)を、CR
P濃度が0及び6.2mg/dlの２点検量線作成用試料として用
いた。また、該生理食塩液を被検試料としても用いた。 (2)測定用試液 第１試液 3.0w/v％ポリエチレングリコール6,000、0.1w/v％NaN3
及び150mM NaClを含む50mM MOPS-NaOH緩衝液（ｐＨ8.
0）を第１試液とした。 第２試液 抗ヒトCRP抗血清(ウサキ゛，和光純薬工業(株)製)1.0mgAb/m
l、150mM NaCl、0.1w/v％NaN3及びｎ−ドデシル−β−
Ｄ−マルトピラノシド((株)同仁化学研究所製)を所定濃
度含む 50mM MOPS-NaOH緩衝液（ｐＨ8.0）を第２試液と
した。 (3)免疫比濁法によるCRP値測定 （測定操作）実施例１の(3)と同様の操作によりＣＲＰ
値を求めた。 （結果）結果を図３に示す。尚、図３に於いて、□はｎ
−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド無添加の第２試
液を用いた結果を、◇はｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルト
ピラノシドを０．１w/v％添加した第２試液を用いた結
果を、△はｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシドを
１w/v％添加した第２試液を用いた結果を、×はｎ−ド
デシル−β−Ｄ−マルトピラノシドを５w/v％添加した
第２試液を用いた結果を、▽はｎ−ドデシル−β−Ｄ−
マルトピラノシドを１０w/v％添加した第２試液を用い
た結果を夫々示す。図３の結果から、添加するｎ−ドデ
シル−β−Ｄ−マルトピラノシドの濃度を増加させるこ
とにより、非特異的濁りによる測定への影響をより低減
させることができることが判る。
【００２０】
【発明の効果】以上述べたことから明らかな如く、本発
明は、自動分析装置を用いて測定を行なう生体試料中の
微量成分の免疫学的測定法に於いて、測定対象成分を高
精度に再現性よく、迅速且つ簡便に測定することができ
る方法を提供するものであり、本発明を利用することに
より、免疫学的測定用試液中の蛋白成分が自動分析装置
の構造上の何らかの要因により変性して生じる、抗原抗
体反応に起因しない非特異的濁りによる測定値への影響
を抑制或いは低減することができるので目的の測定をよ
り高精度に実施し得る、という効果を奏するものであ
り、斯業に貢献するところ極めて大なる発明である。
明は、自動分析装置を用いて測定を行なう生体試料中の
微量成分の免疫学的測定法に於いて、測定対象成分を高
精度に再現性よく、迅速且つ簡便に測定することができ
る方法を提供するものであり、本発明を利用することに
より、免疫学的測定用試液中の蛋白成分が自動分析装置
の構造上の何らかの要因により変性して生じる、抗原抗
体反応に起因しない非特異的濁りによる測定値への影響
を抑制或いは低減することができるので目的の測定をよ
り高精度に実施し得る、という効果を奏するものであ
り、斯業に貢献するところ極めて大なる発明である。
【００２１】
【図１】実施例１に於ける測定結果を示す。
【図２】比較例１に於ける測定結果を示す。
【図３】実施例２に於ける測定結果を示す。
【００２２】
図１に於いて、□は界面活性剤無添加の第２試液を用い
た結果を、◇はｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシ
ドを添加した第２試液を用いた結果を、△はｎ−オクチ
ル−β−Ｄ−チオグルコピラノシドを添加した第２試液
を用いた結果を、▽はβ−Ｄ−フルクトピラノシル−α
−Ｄ−グルコピラノシドモノドデカノエートを添加した
第２試液を用いた結果を夫々示す。図２に於いて、□は
界面活性剤無添加の第２試液を用いた結果を、◇は３−
［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］
プロパンスルホン酸を添加した第２試液を用いた結果
を、△はポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラ
ウレートを添加した第２試液を用いた結果を、×はポリ
オキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテルを添
加した第２試液を用いた結果を、▽はポリオキシエチレ
ン（２３）ラウリルエーテルを添加した第２試液を用い
た結果を夫々示す。図３に於いて、□はｎ−ドデシル−
β−Ｄ−マルトピラノシド無添加の第２試液を用いた結
果を、◇はｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシドを
０．１w/v％添加した第２試液を用いた結果を、△はｎ
−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシドを１w/v％添加
した第２試液を用いた結果を、×はｎ−ドデシル−β−
Ｄ−マルトピラノシドを５w/v％添加した第２試液を用
いた結果を、▽はｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノ
シドを１０w/v％添加した第２試液を用いた結果を夫々
示す。
た結果を、◇はｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシ
ドを添加した第２試液を用いた結果を、△はｎ−オクチ
ル−β−Ｄ−チオグルコピラノシドを添加した第２試液
を用いた結果を、▽はβ−Ｄ−フルクトピラノシル−α
−Ｄ−グルコピラノシドモノドデカノエートを添加した
第２試液を用いた結果を夫々示す。図２に於いて、□は
界面活性剤無添加の第２試液を用いた結果を、◇は３−
［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］
プロパンスルホン酸を添加した第２試液を用いた結果
を、△はポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラ
ウレートを添加した第２試液を用いた結果を、×はポリ
オキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテルを添
加した第２試液を用いた結果を、▽はポリオキシエチレ
ン（２３）ラウリルエーテルを添加した第２試液を用い
た結果を夫々示す。図３に於いて、□はｎ−ドデシル−
β−Ｄ−マルトピラノシド無添加の第２試液を用いた結
果を、◇はｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシドを
０．１w/v％添加した第２試液を用いた結果を、△はｎ
−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシドを１w/v％添加
した第２試液を用いた結果を、×はｎ−ドデシル−β−
Ｄ−マルトピラノシドを５w/v％添加した第２試液を用
いた結果を、▽はｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノ
シドを１０w/v％添加した第２試液を用いた結果を夫々
示す。
Claims (5)
- 【請求項１】自動分析装置を用い、抗原抗体反応に起因
する濁度の変化又は散乱光強度の変化に基づいて測定を
行なう、生体試料中の微量成分の免疫学的測定法に於い
て、蛋白成分を含有する該測定用試液中に、親水基とし
て糖鎖残基を有する界面活性剤を共存させることを特徴
とする該測定法。 - 【請求項２】親水基として糖鎖残基を有する界面活性剤
が、ｎ−ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、ｎ−オ
クチル−β−Ｄ−チオグルコピラノシド又はβ−Ｄ−フ
ルクトピラノシル−α−Ｄ−グルコピラノシドモノドデ
カノエートである請求項１に記載の測定法。 - 【請求項３】蛋白成分を含有する該測定用試液中に、親
水基として糖鎖残基を有する界面活性剤以外の界面活性
剤が共存している、請求項１又は２に記載の測定法。 - 【請求項４】蛋白成分を含有する該測定用試液中の、親
水基として糖鎖残基を有する界面活性剤の濃度が０．１
〜１０重量％である、請求項１〜３の何れかに記載の測
定法。 - 【請求項５】親水基として糖鎖残基を有する界面活性剤
が０．１〜１０重量％添加されていることを特徴とす
る、蛋白成分を含有する免疫学的測定用試液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6343295A JPH08233816A (ja) | 1995-02-27 | 1995-02-27 | 免疫学的測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6343295A JPH08233816A (ja) | 1995-02-27 | 1995-02-27 | 免疫学的測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08233816A true JPH08233816A (ja) | 1996-09-13 |
Family
ID=13229118
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6343295A Withdrawn JPH08233816A (ja) | 1995-02-27 | 1995-02-27 | 免疫学的測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08233816A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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1995
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