JPH09322791A - Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 マレイン酸を原料とし、酵素反応によりＬ−
アスパラギン酸を製造する方法において、酵素作用を継
続的に維持して、安定した連続操作が可能な方法を提供
する。 【解決手段】 工程の少なくとも異性化反応における
水溶液中の溶存酸素濃度を４ｐｐｍ以下に維持して実施
する、Ｌ−アスパラギン酸の製造方法。 工程：マレイン酸等を酵素の存在下異性化する反応
と、異性化反応物の少なくとも一部及びアンモニアを酵
素の存在下水溶媒中で反応させてＬ−アスパラギン酸ア
ンモニウムを生成する反応を順次又は同時に実施する工
程、 工程：工程で得た溶液にマレイン酸等を添加してＬ
−アスパラギン酸を析出させる工程、 工程：工程で得たＬ−アスパラギン酸を回収し、母
液を工程へリサイクルする工程。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、Ｌ−アスパラギン
酸の製造方法に関するものである。詳しくは、マレイン
酸及び／又は無水マレイン酸を原料とし、酵素作用によ
りＬ−アスパラギン酸を製造するための工業的に有利な
プロセスに関するものである。

【０００２】

【従来の技術】Ｌ−アスパラギン酸は医薬、食品添加物
として需要が増加している。また、新たな用途開発も検
討されているが、現在のところ、製造コストが高く、経
済的に優れた工業的プロセスは確立されていない。Ｌ−
アスパラギン酸の製造法としては、フマル酸アンモニア
をアスパルターゼ又はこれを産生する微生物の存在下、
酵素反応により得る方法が知られている。

【０００３】また、マレイン酸とアンモニアをイソメラ
ーゼ又はこれを産生する微生物の存在下異性化しフマル
酸を得た後、上記同様な酵素反応により、Ｌ−アスパラ
ギン酸を得る方法も知られている［Ｙ．Ｔａｋａｍｕｒ
ａ ｅｔ ａｌ．，Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，３０，Ｎｏ．４、３４５〜３５０（１９６
６）］。しかしながら、従来法は、酵素反応後のＬ−ア
スパラギン酸アンモニウムを硫酸又は塩酸により酸析す
るため、経済的価値の低い無機酸アンモニウム塩を大量
に副生し、結果的にＬ−アスパラギン酸の製造コストを
高めることとなっていた。

【０００４】この欠点を改良する方法として、酵素反応
後のＬ−アスパラギン酸アンモニウムをマレイン酸又は
無水マレイン酸により酸析し、Ｌ−アスパラギン酸結晶
を回収した後のマレイン酸アンモニウムを含む母液を原
料として再利用する方法が提案されている（米国特許第
４５６０６５３号明細書、特開平８−３３４９１号公
報）。これらの方法は、原料として大量に入手が容易
で、しかも安価な無水マレイン酸を用いるので、工業的
に非常に望ましい方法となり得る。

【０００５】しかしながら、上記提案では、マレイン酸
アンモニウムの異性化反応を、従来より知られている化
学反応又は酵素反応を適応させたもので、工業的に安定
した連続操作を継続的に行ない、Ｌ−アスパラギン酸を
安価にかつ効率的に製造することは未だ困難であった。
特に、異性化反応を酵素反応で実施し、酵素反応後のＬ
−アスパラギン酸アンモニウムをマレイン酸又は無水マ
レイン酸により酸析し、Ｌ−アスパラギン酸結晶を回収
した後のマレイン酸アンモニウムを含む母液を原料とし
て再利用する方法では、長期のリサイクル運転を実施す
るとイソメラーゼ又はこれを産生する微生物の酵素作用
が次第に低下してしまい、継続的に運転を維持させるこ
とは非常に困難である。

【０００６】また、Ｌ−アスパラギン酸アンモニウムの
晶析に当り、大量のマレイン酸を添加しないとＬ−アス
パラギン酸結晶の回収率を高めることができず、晶析工
程で添加するマレイン酸の量が、晶析すべきＬ−アスパ
ラギン酸の量を超える条件となっている。そのため、晶
析後のマレイン酸アンモニウムを含む母液を反応系にリ
サイクル使用すると、次第に、系内のＬ−アスパラギン
酸濃度が上昇する問題が生じ、連続運転が困難となり、
効率的な工業的製法とは言い難い。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、マレイン酸
及び／又は無水マレイン酸を原料とし、イソメラーゼ又
はこれを産生する微生物により水溶媒中でこれを異性化
し、次いでアスパルターゼ又はこれを産生する微生物、
及びアンモニアの存在下、水溶媒中で酵素反応させてＬ
−アスパラギン酸アンモニウムを得て、酵素反応後のＬ
−アスパラギン酸アンモニウムをマレイン酸及び／又は
無水マレイン酸により酸析し、Ｌ−アスパラギン酸結晶
を回収した後のマレイン酸アンモニウムを含む母液を酵
素反応工程にリサイクルするＬ−アスパラギン酸の製造
方法において、バランスのとれた安定した連続操作が可
能なＬ−アスパラギン酸の製造プロセスを提供し、か
つ、酵素反応におけるイソメラーゼ又はこれを産生する
微生物の酵素作用を継続的に維持する方法に関し新規な
方法を提供することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者等は上記実情に
鑑み鋭意検討した結果、酵素反応を効率的に行うために
は、イソメラーゼ又はこれを産生する微生物を用い、マ
レイン酸を異性化するに際し、水溶媒中の溶存酸素濃度
を４ｐｐｍ以下に維持して反応することにより、イソメ
ラーゼの活性の低下を抑制し安定的に酵素反応を進行さ
せることが可能なことを見出し、本発明を完成するに至
った。

【０００９】すなわち、本発明の要旨は、下記工程〜
を実施してＬ−アスパラギン酸を製造する方法におい
て、工程の少なくとも異性化反応における水溶液中の
溶存酸素濃度を４ｐｐｍ以下に維持することを特徴とす
るＬ−アスパラギン酸の製造方法に存する。 工程：マレイン酸及び／又は無水マレイン酸をイソメ
ラーゼ又はこれを産生する微生物の存在下異性化させる
反応、及び、前記異性化反応物の少なくとも一部及びア
ンモニアをアスパルターゼ又はこれを産生する微生物の
存在下水溶媒中で反応させてＬ−アスパラギン酸アンモ
ニウムを生成させる反応、を順次又は同時に実施する工
程 工程：工程で得た溶液にマレイン酸及び／又は無水
マレイン酸を添加してＬ−アスパラギン酸結晶を析出さ
せる工程 工程：工程で得たＬ−アスパラギン酸結晶を回収
し、母液を工程にリサイクルする工程

【００１０】

【発明の実施の形態】以下、本発明を更に詳細に説明す
る。 （工程）本発明では、マレイン酸及び／又は無水マレ
イン酸をイソメラーゼ又はこれを産生する微生物の存在
下、異性化させた後、異性化反応物の少なくとも一部及
びアンモニアをアスパルターゼ又はこれを産生する微生
物の存在下、水溶媒中で反応させてＬ−アスパラギン酸
アンモニウムを生成させる。反応は、マレイン酸アンモ
ニウムをフマル酸アンモニウムに異性化した後、これを
酵素としてアスパルターゼ又はこれを産生する微生物の
存在下、反応してアスパラギン酸アンモニウムを生成さ
せる二段反応法、又は、マレイン酸アンモニウムの異性
化とアスパラギン酸アンモニムの生成を同時に行なう一
段反応法のいずれでもよい。

【００１１】マレイン酸アンモニウムをフマル酸アンモ
ニウムに異性化する反応及びフマル酸アンモニウムをア
スパラギン酸アンモニウムに変換する反応は公知であ
り、本発明はこれらの反応自体は公知法に準じて実施す
ることができる。本発明に用いられるマレイン酸イソメ
ラーゼ活性を有する微生物としては、本活性を有する微
生物であれば特に限定されるものではないが、アルカリ
ゲネス属、シュードモナス属、キサントモナス属、バチ
ルス属に属する微生物が好適に用いられる。特にアルカ
リゲネス フェカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａ
ｅｃａｌｉｓ）ＩＦＯ １２６６９、同ＩＦＯ １３１
１１、同ＩＡＭ １４７３、アルカリゲネス ユウトロ
フス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｕ
ｓ）、シュウドモナス フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｌｅｓｃｅｎｓ）ＡＴＣＣ ２
３７２８、キサントモナス マルトモナス（Ｘａｎｔｈ
ｏｍｏｎａｓ ｍａｒｕｔｏｍｏｎａｓｕ）ＡＴＣＣ
１３２７０、バチルス ステアロサーモフィラス（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕ
ｓ）ＭＩ−１０１（ＦＥＲＭ Ｐ−１４８０１）、バチ
ルス ブレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）Ｍ
Ｉ−１０３（ＦＥＲＭ Ｐ−１４８０３）等が好適に用
いられる。さらに、上記、遺伝子を組換えた遺伝子改変
微生物を用いても何等差し支えない。

【００１２】培養した各菌体は、予め、リン酸緩衝液等
の緩衝液（ｐＨ７）等で洗浄した後用いることも出来
る。洗浄用のリン酸緩衝液の濃度は０．０５Ｍ〜０．２
Ｍ程度が好適に用いられる。菌体はそのまま使用するこ
とができるし、必要により、該菌体を超音波破砕等で処
理をした菌体破砕物や該破砕物を遠心分離した無細胞抽
出液、該無細胞抽出液を硫安分画法、イオン交換カラ
ム、ゲルろ過カラム等で精製した部分精製酵素、または
該菌体や菌体破砕物をアクリルアミドモノマー、アルギ
ン酸等の担体を用いて固定化した固定化物を用いること
もできる。菌体を用いる場合、予め菌体を凍結したり、
上記緩衝液中にＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、Ｔｗｅｅｎ
２０等の界面活性剤を０．０１〜０．２重量％添加し
た液中で、１５〜４０℃の温度で、１０〜１２０分菌体
を処理することにより菌体の透過性を高めてから使用す
ることもできる。

【００１３】本発明では、マレイン酸イソメラーゼ活性
を有する微生物またはその処理物をマレイン酸を含有す
る水溶液中で酵素反応させるに際し、マレイン酸を含有
する水溶液中の溶存酸素濃度（以下、ＤＯと略記するこ
とがある）を４ｐｐｍ以下、好ましくは１ｐｐｍ以下、
さらに好ましくは０．５ｐｐｍ以下に維持して反応させ
ることに特徴を有する。

【００１４】なお、溶存酸素濃度レベルは瞬時前記範囲
を越えることがあっても、実質的に前記範囲以下を異性
化反応の間、例えば、異性化反応の時間の９０％以上、
好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上の
間、維持すれば良い。工程の反応液中の溶存酸素濃度
が高いと、酵素イソメラーゼの安定性が低下し、異性化
反応を安定的に継続することが困難となる。

【００１５】特に、酵素反応後のＬ−アスパラギン酸ア
ンモニウムをマレイン酸又は無水マレイン酸により酸析
し、Ｌ−アスパラギン酸結晶を回収した後のマレイン酸
アンモニウムを含む母液を原料として利用する方法で
は、長期のリサイクル運転を実施するとイソメラーゼ又
はこれを産生する微生物の酵素作用が次第に低下してし
まい、継続的に運転を維持させることは非常に困難であ
る。

【００１６】本発明において異性化反応の水溶液中の溶
存酸素濃度を調節する方法としては、通常、水溶液中に
不活性なガスを流通させる方法、又は、脱酸素剤である
亜硫酸塩を水溶液に添加する方法が挙げられる。これら
の処理は反応に供する原料水溶液を対象として通常実施
されるが、反応系にて実施してもよく、更に、工程又
はの途中で実施してもよい。

【００１７】本発明に用いる反応に不活性なガスとは、
酸素を含むガスでなければ特に限定されるものではな
い。Ａｒ，Ｈｅのようないわゆる希ガス、窒素ガス、炭
酸ガス等から選択されるガスでよく、１種のガスか、２
種以上のガスを組み合わせてもよい。これらのガスによ
り処理する方法としては、例えば、マレイン酸水溶液中
に上記ガスを連続的又は間けつ的に吹き込みながら撹拌
する方法が一般的である。また、脱気した後は、マレイ
ン酸含有水溶液槽内を前記ガスでシールしておくことが
好ましい。

【００１８】本発明に用いる亜硫酸塩とは、亜硫酸の塩
であれば良く、例えば亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウ
ム、亜硫酸アンモニウム、亜硫酸水素アンモニウム、亜
硫酸カルシウム等の無機亜硫酸塩が例示でき、また、こ
れらが好ましいが、マレイン酸イソメラーゼ活性を阻害
することが知られる水銀、銅との塩は用いられない。亜
硫酸塩を添加する場合の濃度としては、１ｐｐｍ〜１０
００ｐｐｍ、好ましくは１０ｐｐｍ〜５００ｐｐｍが用
いられる。亜硫酸塩の添加位置としては、特に限定され
るものではなく、どの工程でも、またどの工程の間へで
も構わない。数カ所に分割して添加してもよい。

【００１９】本発明では、反応液中に反応に不活性な脱
酸素剤を添加することでＤＯを低下させてもよい。脱酸
素剤として、アスコルビン酸、プロトカテク酸、上記亜
硫酸塩等を例示することができる。また、本工程で用
いるマレイン酸アンモニウムを含有する反応液を脱気し
て、溶存酸素濃度を低下させた後、酵素反応させてもよ
い。

【００２０】特に、酵素反応後のＬ−アスパラギン酸ア
ンモニウムをマレイン酸又は無水マレイン酸により酸析
し、Ｌ−アスパラギン酸結晶を回収した後のマレイン酸
アンモニウムを含む母液を原料として利用する方法にお
いては、このリサイクル母液を予め脱気して、ＤＯを低
下させた後、酵素反応させることが好ましい。ここで、
脱気とは、リサイクル液中の溶存酸素を追い出す等によ
り、ＤＯを低下させることができる操作であれば、特に
限定されるものではない。

【００２１】例示すれば、溶存酸素を追い出す方法とし
て、リサイクル液を減圧下加熱する方法、超音波により
振動を与える方法などが挙げられる。また、飽和蒸気を
用いた自然循環型、強制循環型、薄膜遠心型等の一般的
な蒸発器（濃縮器）を用いる方法、あるいは蒸留操作に
よりボトムから脱気液を得る方法でも構わない。

【００２２】これら脱気操作は、常圧下でも減圧下でも
よく、１０〜１００℃の範囲で、好ましくは、２０〜７
０℃で行なう。低温下で脱気操作を行なうには、減圧度
を高めなくてはその効果が得られず、また操作上の制約
も大きくなる。高温下では、液組成の熱劣化を招くので
好ましくない。本発明において、フマル酸アンモニウム
をＬ−アスパラギン酸アンモニウムに変換するには、ア
スパルターゼあるいはアスパルターゼを産生する微生物
の存在下に実施されるが、この方法は公知の方法により
行なうことが出来る。アスパルターゼを産生する微生物
としては、フマル酸とアンモニアからＬ−アスパラギン
酸を生成しうる能力を有する微生物であれば特に制限が
なく、例えば、プレビバクテリウム属、エシェリヒア
属、シュードモナス属、バチルス属等の微生物が挙げら
れる。具体的には、ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂ
ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ）ＭＪ−２
３３（ＦＥＲＭ ＢＰ−１４９７）、同ＭＪ−２３３−
ＡＢ−４１（ＦＥＲＭ ＢＰ−１４９８）、ブレビバク
テリウム・アンモニアゲネス ＡＴＣＣ ６８７２、エ
シェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌ
ｉ）ＡＴＣＣ １１３０３、同ＡＴＣＣ ２７３２５等
を例示することが出来る。

【００２３】異性化反応及びＬ−アスパラギン酸を生成
させる反応の原料水溶液濃度は、通常、後述する工程
から回収されるマレイン酸モノアンモニウム水溶液の濃
度により決定される。本発明における工程における原
料水溶液の濃度は、通常、マレイン酸モノアンモニウム
換算で、４５〜７００ｇ／ｌ、好ましくは９０〜４５０
ｇ／ｌである。

【００２４】本発明における工程の異性化反応及びＬ
−アスパラギン酸を生成させる反応は、アンモニア以外
のアルカリ剤によるｐＨ調整下で実施することもでき
る。この際の前記反応系内のｐＨはそれぞれに通常、
７．５〜１０が好ましく、両反応を同時に同一反応槽で
実施しても差し支えない。同時に行なう場合には、各々
の性質を持つ菌を併用し、両反応に適した条件を選定し
て行なうことができる。また、両方の性質を有するもの
であれば併用の必要は必ずしもない。

【００２５】アルカリ剤としては、水酸化ナトリウム、
水酸化カリウムなど特に限定されるものではないが、Ｌ
−アスパラギン酸を生成させる反応の原料であるアンモ
ニアを使用することが、本発明においては好ましく、異
性化反応に対しても何ら悪影響を与えない。アンモニア
を単独で使用する場合のアンモニアの使用量は、原料マ
レイン酸モノアンモニウムに対して、１．０５〜２．０
モル倍であり、好ましくは１．１〜１．６モル倍であ
る。

【００２６】また、上記アルカリ剤をアンモニアと併用
する場合には、前記反応系内のｐＨ範囲になる量にアン
モニアおよびアルカリ剤の量が調整される。異性化反応
及びＬ−アスパラギン酸を生成させる反応の温度は、酵
素反応が効率的に行なわれる温度を選定し、通常、１０
〜８０℃、好ましくは１５〜６０℃である。

【００２７】酵素反応の反応操作としては、限定される
ものではないが、バッチ操作に比べて連続操作がより好
ましい。通常、反応方式として菌体を固定化した充填層
に原料水溶液を通液する方法、又は、菌体自体又は固定
化した菌体を懸濁した反応器中に原料水溶液を供給する
一方、反応液を抜き出し、これを分離膜や遠心分離機を
用いて菌体を分離し反応器に戻す方法が挙げられる。

【００２８】Ｌ−アスパラギン酸を生成させる反応で得
られる反応液はＬ−アスパラギン酸アンモニウムを主体
として含むが、このアンモニウム塩はモノアンモニウム
塩とジアンモニウム塩の混合物である。ジアンモニウム
塩の割合は通常、１０〜６０％モルである。また、この
反応液中には未反応のフマル酸アンモニウム及びマレイ
ン酸アンモニウムを含む場合もあるが、この場合の含有
量は５ｇ／ｌ以下、好ましくは２ｇ／ｌ以下に制御する
ことが望ましい。工程の酵素反応した後の反応液は、
常法により菌体を分離した後、次工程に送られる。通
常、分離膜や遠心分離機を用いて菌体を分離する。

【００２９】（工程）上記工程で得られた溶液にマ
レイン酸及び／又は無水マレイン酸を添加して、Ｌ−ア
スパラギン酸を晶析させる。添加するマレイン酸、無水
マレイン酸は、粉末でも、溶融液でも、水溶液でも、ま
たスラリーであってもよい。この二種類の酸を任意の比
で混合することも何ら制限をうけるものでない。

【００３０】工程で添加されるマレイン酸及び／又は
無水マレイン酸の量は、（マレイン酸＋無水マレイン
酸）／Ｌ−アスパラギン酸アンモニウムのモル比が、
０．５〜１．４、好ましくは０．６〜１．３となるよう
に添加される。このモル比が小さすぎると、晶析回収で
のＬ−アスパラギン酸の回収率が充分でなく、リサイク
ル系内のアスパラギン酸濃度が高くなり、また大きすぎ
ると、添加したマレイン酸および無水マレイン酸が効率
的に晶析に利用されない。

【００３１】晶析温度は通常、０〜９０℃、好ましく
は、１０〜８０℃である。あまり低温の場合、得られる
結晶が細かくなりすぎ、固液分離操作が面倒となる上、
リンス効率も悪化する。すなわち、固液分離で得られる
湿ケーキの母液保持量（含水液量）が多くなり、さらに
充分なリンス効果が得られないため、結晶純度が低下す
るか、リンス量を増やしてＬ−アスパラギン酸の回収率
を低下させるかの状況になる。一方、あまり高温では、
Ｌ−アスパラギン酸の回収率が低いばかりか、マレイン
酸の熱劣化が生ずる恐れがあり、好ましくない。

【００３２】また晶析工程の処理時間は通常０．５〜５
時間程度である。晶析は通常、撹拌槽タイプの晶析槽を
用いて実施される。マレイン酸及び／又は無水マレイン
酸の添加位置は晶析槽又はこれに通じる工程からの移
送配管中のいずれでもよい。また、晶析は、工程で得
られた溶液、又は必要により後述する工程で得られた
溶液と、マレイン酸及び／又は無水マレイン酸とを連続
的に供給する一方で、生成スラリーを連続的に抜き出す
連続式が望ましいが、一部、間けつ的操作もしくは回分
式で行なってもよい。

【００３３】（工程）上記工程で得られたスラリー
を固液分離し、必要に応じて、得られた結晶を水でリン
スすることによりＬ−アスパラギン酸結晶を回収する。
得られた結晶は常法により乾燥し純度９９％以上の製品
として回収することができる。固液分離で得られる母液
には、マレイン酸モノアンモニウムが含まれ、さらに溶
解度分のＬ−アスパラギン酸アンモニウムも含まれてい
る。この母液は上記工程にリサイクルされ、工程の
原料として再使用される。

【００３４】スラリーの固液分離は、特に限定するもの
ではないが、０〜８０℃の温度範囲、好ましくは、１０
〜５０℃で行なう。低温下ではスラリーの粘性が高く取
扱いが困難になり、高温下では、Ｌ−アスパラギン酸の
溶解度が高くなり、回収率が低下してしまう。必要に応
じて行なうリンス操作に用いる水の量は、特に限定する
ものではないが、湿ケーキに対して５重量倍以下、好ま
しくは、３重量倍以下で行なう。リンス量が少なすぎる
とリンス効果が充分でなく、多すぎるとＬ−アスパラギ
ン酸の回収率が低下する。リンス水の温度についても特
に限定されるものではない。

【００３５】分離操作は、限定されるものではないが、
例えば、ヌッチェ、遠心分離等の常法により行なうこと
ができる。固液分離で得られる母液は、主にマレイン酸
モノアンモニウムが含まれ、ｐＨが３〜６程度の酸性水
溶液である。必要に応じて濃縮工程により水を除去し、
更にアンモニアを加えて工程にリサイクルすることが
できる。

【００３６】本発明では、工程にリサイクルするマレ
イン酸を含有する水溶液を予め脱気して、溶存酸素濃度
を低下させてから用いることが好ましい。溶存酸素の濃
度レベルとしては４ｐｐｍ以下、好ましくは１ｐｐｍ以
下、さらに好ましくは０．５ｐｐｍ以下に脱気した液を
リサイクルする。脱気とは、リサイクル液中の溶存酸素
を追い出す等により、ＤＯを低下させることができる操
作であれば、特に限定されるものではない。

【００３７】例示すれば、溶存酸素を追い出す方法とし
て、リサイクル液を減圧下加熱する方法、超音波により
振動を与える方法などが挙げられる。また、脱気操作に
おいて、酵素反応に不活性なガスを供給しながら操作を
実施してもよい。不活性なガスとは、酸素を含むガスで
なければ特に限定されるものではない。Ａｒ，Ｈｅのよ
うないわゆる希ガス、窒素ガス、炭酸ガス等から選択さ
れるガスでよく、１種のガスか、２種以上のガスを組み
合わせてもよい。これらのガスは、脱気しているリサイ
クル液中に供給するのが好ましい。

【００３８】一方、リサイクル液を蓄える槽内に上記不
活性ガスを供給することにより、ＤＯを低下させてもよ
い。好ましくは、不活性ガスを連続的に供給し、酸素を
含むガスを連続的に排出する。例えば、リサイクル液中
に上記ガスを吹き込みながら撹拌する、槽内を上記ガス
でシールする等の方法が行われる。また、飽和蒸気を用
いた自然循環型、強制循環型、薄膜遠心型等の一般的な
蒸発器（濃縮器）を用いる方法、あるいは蒸留操作によ
りボトムから脱気液を得る方法でも構わない。

【００３９】これら脱気操作は、常圧下でも減圧下でも
よく、１０〜１００℃の範囲で、好ましくは、２０〜７
０℃で行なう。低温下で脱気操作を行なうには、減圧度
を高めなくてはその効果が得られず、また操作上の制約
も大きくなる。高温下では、液組成の熱劣化を招くので
好ましくない。本発明では、リサイクル液中に反応に不
活性な脱酸素剤を添加することでＤＯを低下させてもよ
い。脱酸素剤として、アスコルビン酸、プロトカテク
酸、亜硫酸塩等を例示することができる。

【００４０】（工程）本発明の方法においては、工程
で得た反応液を工程の実施の前に蒸留又はストリッ
ピングしてアンモニアの一部を除去することにより、Ｌ
−アスパラギン酸アンモニウムを実質的に、Ｌ−アスパ
ラギン酸モノアンモニウム塩とすることができ、さらに
有利なプロセスを提供しうる。

【００４１】本工程で得られるＬ−アスパラギン酸モノ
アンモニウム塩の割合は、全体のＬ−アスパラギン酸ア
ンモニウム塩に対して９０モル％以上、好ましくは９５
モル％以上、さらに好ましくは９８モル％以上である。
この脱アンモニア処理により、工程で用いるマレイン
酸又は無水マレイン酸の使用量が抑制でき、バランスの
とれた一層長期間の連続運転可能な工業的プロセスが実
現できるのである。

【００４２】好ましい態様として工程を実施する場合
のプロセスにおいて、工程で得られた液は、工程に
送られ酸析に供されるが、その場合のマレイン酸及び／
又は無水マレイン酸の添加量は、（マレイン酸＋無水マ
レイン酸）／Ｌ−アスパラギン酸モノアンモニウムのモ
ル比で、０．５〜１．１、好ましくは０．６〜１．０で
ある。このモル比が小さすぎると、晶析回収でのＬ−ア
スパラギン酸の回収率が充分でなく、リサイクル系内の
アスパラギン酸濃度が高くなり効率的でなく、また大き
すぎると、添加したマレイン酸および無水マレイン酸が
効率的に晶析に利用されない。

【００４３】工程を実施する場合のプロセスにおける
工程の他の晶析条件については、前記工程に記載し
た方法によればよい。蒸留操作又はストリッピング操作
（以下、アンモニア除去操作ということがある）は、常
圧下でも減圧下でもよく、３０〜１００℃の範囲で、好
ましくは、４０〜８０℃で行なうことができる。低温下
でアンモニア除去操作を行なうには、減圧度を高めなく
てはならず操作上の制約が大きくなる。

【００４４】一方、高温下では、液組成の熱劣化を招く
ので好ましくない。本発明の方法における全工程のう
ち、最も高温で処理することにもなり得る本工程の温度
条件、特に上限温度については、この観点から上記の様
に規定されるのが好ましい。アンモニア蒸留塔の形式は
通常の棚段塔又は充填塔が使用できる。工程の酵素反
応により得られたＬ−アスパラギン酸アンモニウム水溶
液を、上記の方法でアンモニア除去操作することによ
り、蒸留釜にはＬ−アスパラギン酸に対するアンモニア
のモル比が約１．０、すなわち、実質的全てがＬ−アス
パラギン酸モノアンモニウムを含む残液を得ることがで
きる。

【００４５】アンモニア除去操作で蒸気として分離され
るのは、アンモニアおよび水のみであり、冷却管等を用
いてこの蒸気を液として回収すれば、アンモニア水が得
られる。この得られるアンモニア水の濃度は、アンモニ
ア除去操作の温度、圧力および蒸気回収温度等に影響さ
れる。上記操作後の水溶液は工程に送り、Ｌ−アスパ
ラギン酸結晶を回収するが、晶析工程に供給する水溶液
中のＬ−アスパラギン酸アンモニウム温度は通常、５０
〜８００ｇ／ｌ、好ましくは１００〜５００ｇ／ｌであ
る。この濃度があまり低いと結晶回収率が低くなり、逆
にあまり高いと回収スラリーの濃度が高くなりすぎ操作
上好ましくない。

【００４６】工程のアンモニア除去操作で蒸気として
分離し、冷却管等で回収されたアンモニア水は、上記の
工程あるいは工程に必要に応じて再使用されるが、
好ましくは工程に加えられ、工程のリサイクル液と
共に脱気された後、工程へリサイクルされる。この場
合の供給温度は、特に限定されないが、それぞれの工程
の反応又は操作温度を考慮して５〜８０℃、好ましく
は、１０〜５０℃が採用できる。高温下では、アンモニ
アの蒸気圧が高くなり好ましくない。また、反応温度よ
り低温で供給しても何ら問題ない。

【００４７】（ブリード）本発明のＬ−アスパラギン酸
の製造方法では、リサイクルの工程を含むため不純物や
反応副生成物の蓄積を考慮して、必要に応じてブリード
を行なうことが好ましい。ブリードする位置としては、
特に限定するものではなく各工程後のいずれの位置から
ブリードしてもよい。また、複数の箇所においてブリー
ドすることも可能である。中でも、工程に供給される
水溶液から、即ち、工程と工程の間、又は工程と
工程の間からブリードするのが好ましい。

【００４８】ブリード量は、通常、釜残水溶液の容量ベ
ースで１〜２０％、好ましくは３〜１７％である。ブリ
ード率が低いとその効果が小さく意味がなく、高ければ
主工程と同じ程度の機器容積をブリード系がもつことに
なり、経済的に不利なプロセスを与える。ブリードする
方法は、このブリード率を満足する範囲において連続的
であっても、また、間けつ的であっても良い。

【００４９】ブリード液からＬ−アスパラギン酸を結晶
として回収するのが好ましく、その方法としては、通
常、硫酸又は塩酸等の無機酸を添加して行なうのが好ま
しい。無機酸の添加量はアスパラギン酸アンモニウムに
対して当量以上である。すなわち、Ｌ−アスパラギン酸
の等電点２．８になるようにブリード液に無機酸を加え
るのが回収率を向上させるために望ましい。

【００５０】上述のブリード液の処理により、含有され
るＬ−アスパラギン酸アンモニウムは損失することなく
回収でき、しかも、系内に蓄積する不純物はパージされ
る。本発明は工程〜のメインライン及び好ましくは
脱アンモニア工程からのアンモニア回収、また好ましく
はブリード液処理工程の各工程を連結することにより、
バランスのとれた安定した連続運転可能な工業的に有利
なプロセスを提供することができ、かつ、高純度のＬ−
アスパラギン酸の製造を可能にするものである。

【００５１】また、本発明では蒸気〜の各工程の処
理操作を逐次実施するが、〜の各工程は回分法で
も、連続法でもよい。例えば、全工程を回分法で実施す
る場合でも、本発明によれば、繰り返し反応を行なって
も、各工程とも同一処理量で同一条件にて操作すること
が可能である。もちろん、全工程を連続法で実施する場
合には、バランスのとれた安定したプロセスとなるので
ある。

【００５２】

【実施例】本発明を実施例により更に具体的に説明する
が、本発明はその要旨を超えない限り、実施例の記述に
限定されるものではない。尚、Ｌ−アスパラギン酸（以
下、ＡＳＰと略記する）、マレイン酸（以下、ＭＡと略
記する）およびフマル酸（以下、ＦＡと略記する）の分
析は高速液体クロマトグラフィーにより、ＡＳＰ結晶中
のアンモニア（以下、ＮＨ₃ と略記する）含量の分析は
イオンクロマトグラフィーにより定量した。

【００５３】［参考例］酵素の調整 （１）マレイン酸イソメラーゼ活性を有する微生物の培
養 肉エキス：１０ｇ、ペプトン：１０ｇ、ＮａＣｌ：５
ｇ、マレイン酸１０ｇ及び蒸留水：１０００ｍｌ（苛性
ソーダでｐＨ７．０に調整）の培地１００ｍｌを５００
ｍｌ容の三角フラスコに分注し、１２０℃、２０分間滅
菌処理したものに、アルカリゲネス フェカリス ＩＦ
Ｏ １２６６９菌株を植菌し、３０℃にて２４時間振と
う培養した。

【００５４】また、上記と同様の培地１０００ｍｌを３
Ｌ容のジャーファーメンターに入れ、１２０℃、２０分
間滅菌処理したものに、上記振とう培養液３０ｍｌを接
種し、これを３０℃にて２４時間培養した。得られた培
養液を遠心分離（８０００ｒｐｍ、１５分、４℃）して
集菌した菌体を、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
で１回洗浄し、以下の反応に供試した。

【００５５】（２）フマル酸よりアスパラギン酸生成能
を有する微生物の培養 尿素：４ｇ、（ＮＨ₄ ）₂ ＳＯ₄ ：１４ｇ、ＫＨ₂ ＰＯ
₄ ：０．５ｇ、Ｋ₂ ＨＰＯ₄ ：０．５ｇ、ＭｇＳＯ₄ ・
７Ｈ₂ Ｏ：０．５ｇ、ＦｅＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏ：２０ｍ
ｇ、ＭｎＳＯ₄ ・ｎＨ₂ Ｏ：２０ｍｇ、Ｄ−ビオチン：
２００μｇ、塩酸チアミン：１００μｇ、酵母エキス１
ｇ、カザミノ酸１ｇ及び蒸留水：１０００ｍｌ（ｐＨ
６．６）の培地１００ｍｌを５００ｍｌ容の三角フラス
コに分注し、１２０℃、１５分間滅菌処理したものに滅
菌済み５０％グルコース水溶液４ｍｌを加え、ブレビバ
クテリウム フラバム ＡＢ−４１菌株（ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−１４９８）を植菌し、３３℃にて２４時間振とう培
養した。

【００５６】また、上記と同様の培地１０００ｍｌを２
Ｌ容のジャーファーメンターに入れ、１２０℃、２０分
間滅菌処理したものに、上記振とう培養液２０ｍｌと滅
菌済み５０％グルコース水溶液２００ｍｌを加え、これ
を３３℃にて２４時間培養した。得られた培養液を遠心
分離（８０００ｒｐｍ、１５分、４℃）して集菌した。
本菌体は、夾雑するリンゴ酸副生活性を以下の方法で除
いた。すなわち、アスパラギン酸：１００ｇ、アンモニ
ア：１８０ｍｌ、塩化カルシウム：２．２ｇ、Ｔｗｅｅ
ｎ２０：０．８ｇ（水で全量１Ｌとする）よりなる組成
液に集菌体を懸濁し、４５℃、３時間振とうし、遠心分
離（８０００ｒｐｍ、１５分、４℃）して菌体を回収し
た。

【００５７】［実施例１］酵素反応 （１）予め窒素ガスを３０分吹き込みながら撹拌し、窒
素置換した反応液＜マレイン酸１５０ｇ、２５％アンモ
ニア水２２０ｍｌ（水で全量を１０００ｍｌにする）＞
を３Ｌ容のジャーファーメンターに移し、回収した両菌
体（イソメラーゼ菌２０ｇ、アスパルターゼ菌１２０
ｇ）を添加し、窒素ガスを０．０２ｖｖｍの速度で供給
して槽内を窒素ガスでシールし、反応中、溶存酸素濃度
を０．５ｐｐｍ以下に維持した。３０℃で４８時間反応
させたところ、反応液中にＬ−アスパラギン酸は、１７
０ｇ／ｌ得られた。

【００５８】（２）予め窒素ガスを３０分吹き込みなが
ら撹拌し、窒素置換した反応液＜マレイン酸１５０ｇ、
２５％アンモニア水２２０ｍｌ（水で全量を１０００ｍ
ｌにする）＞を密閉された３Ｌ容のジャーファーメンタ
ーに移し、溶存酸素濃度が安定になったところで回収し
た菌体（イソメラーゼ菌２０ｇ、アスパルターゼ菌１２
０ｇ）を添加した。反応中、溶存酸素濃度はおよそ３ｐ
ｐｍ以下に維持された。３０℃で４８時間反応させたと
ころ、反応液中にＬ−アスパラギン酸は、１３５ｇ／ｌ
得られた。

【００５９】（３）反応液＜マレイン酸１５０ｇ、２５
％アンモニア水２２０ｍｌ（水で全量を１０００ｍｌに
する）＞に０．２ｇ／ｌの亜硫酸ソーダを加え、密閉さ
れた３Ｌ容のジャーファーメンターに移し、溶存酸素濃
度が安定になったところで回収した菌体（イソメラーゼ
菌２０ｇ、アスパルターゼ菌１２０ｇ）を添加した。反
応中、溶存酸素濃度はおよそ３ｐｐｍ以下に維持され
た。３０℃で４８時間反応させたところ、反応液中にＬ
−アスパラギン酸は、１３２ｇ／ｌ得られた。

【００６０】（４）反応液＜マレイン酸１５０ｇ、２５
％アンモニア水２２０ｍｌ（水で全量を１０００ｍｌに
する）＞を３Ｌ容の耐圧ビンに入れ、水流アスピレータ
ーで吸引しながら、１５分間脱気をした。静かに常圧に
戻してから液を密閉されたジャーファーメンターに移
し、回収した両菌体（イソメラーゼ菌２０ｇ、アスパル
ターゼ菌１２０ｇ）を添加し、槽内を窒素ガスでシール
したところ、反応中、溶存酸素濃度が０．５ｐｐｍ以下
に維持された。３０℃で４８時間反応させたところ、反
応液中にＬ−アスパラギン酸は、１６７ｇ／ｌ得られ
た。

【００６１】［比較例１］酵素反応 溶存酸素低下処理を行わなかった反応液＜マレイン酸１
５０ｇ、２５％アンモニア水２２０ｍｌ（水で全量を１
０００ｍｌにする）＞を３Ｌ容のジャーファーメンター
に移し、回収した菌体（イソメラーゼ菌２０ｇ、アスパ
ルターゼ菌１２０ｇ）を添加し、反応中も特に溶存酸素
低下処理を行わなかった。反応中、溶存酸素濃度はおよ
そ７ｐｐｍであった。３０℃で４８時間反応させたとこ
ろ、反応液中にＬ−アスパラギン酸は、１０２ｇ／ｌ得
られた。

【００６２】［実施例２］リサイクル操作 （Ａ）実施例１（１）と同様な方法で得られた酵素反応
液をＤＯの上昇がないように窒素ガスでシールしたま
ま、限外ろ過膜（旭化成社製−ＡＣＶ−３０５０）を用
い、菌体を除去した。菌体の濃縮液は、窒素ガスシール
の容器に移し、４℃で冷蔵保存した。

【００６３】一方、得られた反応濾液１Ｌを２Ｌのナス
型フラスコに仕込み、ラボ用エバポレーターを用いて、
８０℃、３８０ｍｍＨｇの条件下、アンモニアを蒸留分
離した。得られる蒸気の回収を目的に、５０ｗｔ％エチ
レングリコールの冷却水が０℃で循環する冷却管をとり
つけた。１５分後、常圧に戻して、アンモニア除去操作
を終了した。

【００６４】蒸留釜の残液は、ＡＳＰが２０６ｇ／ｌ、
ＮＨ₃ が２６．４ｇ／ｌの組成で、８２７ｍｌの容量で
あった。この残液に蒸留水を加えて、ＡＳＰが２００ｇ
／ｌ、ＮＨ₃ が２５．９ｇ／ｌの組成（ＮＨ₃ ／ＡＳＰ
モル比は１．０、すなわち、実質的全てがＡＳＰモノア
ンモニウム塩）で８５０ｍｌの釜残液を作成した。冷却
管で得られた回収液は、ＮＨ₃ が２７ｇ／ｌのＮＨ₃ 水
１８３ｍｌであった。

【００６５】（Ｂ）上記（Ａ）で得られたＡＳＰモノア
ンモニウム水溶液８５０ｍｌを１０００ｍｌジャケット
付きセパラブルフラスコ内でジャケットに温水を流すこ
とで６０℃に保温し、撹拌しながらＭＡ１１９ｇ（ＭＡ
／ＡＳＰモル比は０．８０）を添加し、晶析した。ＭＡ
の添加後、撹拌を続けながら３０分間６０℃で保温した
後、１時間かけ、２０℃まで冷却し、さらに３０分間保
温した。

【００６６】（Ｃ）得られたスラリーは、ヌッチェで固
液分離し、さらに蒸留水４００ｇでリンスし、減圧下、
約６０℃で乾燥したところ、１３８．３ｇの白色固体を
得た。得られた固体は、ＡＳＰが９９．３重量％で、Ｍ
Ａアンモニウム０．６重量％、ＦＡアンモニウム０．１
重量％を含んでいた。ＡＳＰの回収率は、８０．８％で
あった。一方、固液分離で得られた母液は、ＡＳＰ２
７．０ｇ／ｌ、ＭＡ９８．７ｇ／ｌ、ＮＨ₃ １８．６ｇ
／ｌの組成であり、ｐＨは約４．５、容量１．２Ｌであ
った。なお、ここで得られたＭＡアンモニウムはそのＮ
Ｈ₃ バランスから見て実質的全てがモノアンモニウム塩
であった。

【００６７】（Ｄ）上記（Ｃ）で得られた母液１．２Ｌ
を、（Ａ）と同様の方法により８０℃、減圧（３００〜
４００ｍｍＨｇ）下、水を飛ばし濃縮した。得られた濃
縮液に２５％ＮＨ₃ 水、上記（Ａ）で回収したＮＨ₃ 水
１８５ｍｌ、および蒸留水を添加して、ｐＨ９．０、容
量約１Ｌの液を作成したところ、ＡＳＰ３２．８ｇ／
ｌ、ＦＡ０．８ｇ／ｌ、ＭＡ１１９．７ｇ／ｌ、ＮＨ₃
４４．５ｇ／ｌの組成であった。

【００６８】（Ｅ）上記（Ｄ）で得られた反応液を、上
記（Ａ）で冷蔵保存した菌体を用い、実施例１（１）と
同様の方法にて酵素反応したところ、３０℃、４８時間
でＡＳＰ１６９ｇ／ｌであった。 （Ｆ）さらに上記と同様の操作を条件を変えずに３回繰
り返した。結果を第１表に示す。

【００６９】

【表１】

【００７０】［比較例２］リサイクル操作 （Ａ）比較例１と同様な方法で酵素反応を行い、７２時
間後に反応が終了したことを確認した。反応中、溶存酸
素濃度はおよそ７ｐｐｍを維持していた。酵素反応液
は、限外ろ過膜（旭化成社製−ＡＣＶ−３０５０）を用
い、菌体を除去し、菌体の濃縮液は、容器に移し、４℃
で冷蔵保存した。

【００７１】一方、得られた反応濾液１Ｌを２Ｌのナス
型フラスコに仕込み、ラボ用エバポレーターを用いて、
８０℃、３８０ｍｍＨｇの条件下、アンモニアを蒸留分
離した。得られる蒸気の回収を目的に、５０ｗｔ％エチ
レングリコールの冷却水が０℃で循環する冷却管をとり
つけた。１５分後、常圧に戻して、アンモニア除去操作
を終了した。

【００７２】蒸留釜の残液は、ＡＳＰが２０５ｇ／ｌ、
ＮＨ₃ が２６．３ｇ／ｌの組成で、８２０ｍｌの容量で
あった。この残液に蒸留水を加えて、ＡＳＰが１９９ｇ
／ｌ、ＮＨ₃ が２５．７ｇ／ｌの組成（ＮＨ₃ ／ＡＳＰ
モル比は１．０、すなわち、実質的全てがＡＳＰモノア
ンモニウム塩）で８５０ｍｌの釜残液を作成した。冷却
管で得られた回収液は、ＮＨ₃ が２７ｇ／ｌのＮＨ₃ 水
１９０ｍｌであった。

【００７３】（Ｂ）上記（Ａ）で得られたＡＳＰモノア
ンモニウム水溶液８５０ｍｌを１０００ｍｌジャケット
付きセパラブルフラスコ内でジャケットに温水を流すこ
とで６０℃に保温し、撹拌しながらＭＡ１１８ｇ（ＭＡ
／ＡＳＰモル比は０．８０）を添加し、晶析した。ＭＡ
の添加後、撹拌を続けながら３０分間６０℃で保温した
後、１時間かけ、２０℃まで冷却し、さらに３０分間保
温した。

【００７４】（Ｃ）得られたスラリーは、ヌッチェで固
液分離し、さらに蒸留水４００ｇでリンスし、減圧下、
約６０℃で乾燥したところ、１３９．０ｇの白色固体を
得た。得られた固体は、ＡＳＰが９９．１重量％で、Ｍ
Ａアンモニウム０．６重量％、ＦＡアンモニウム０．１
重量％を含んでいた。ＡＳＰの回収率は、８１．２％で
あった。一方、固液分離で得られた母液は、ＡＳＰ２
７．０ｇ／ｌ、ＭＡ９７．８ｇ／ｌ、ＮＨ₃ １８．５ｇ
／ｌの組成であり、ｐＨは約４．５、容量１．２Ｌであ
った。なお、ここで得られたＭＡアンモニウムはそのＮ
Ｈ₃ バランスから見て実質的全てがモノアンモニウム塩
であった。

【００７５】（Ｄ）上記（Ｃ）で得られた母液１．２Ｌ
を、（Ａ）と同様の方法により８０℃、減圧（３００〜
４００ｍｍＨｇ）下、水を飛ばし濃縮した。得られた濃
縮液に２５％ＮＨ₃ 水、（Ａ）で回収したＮＨ₃ 水１８
５ｍｌ、および蒸留水を添加して、ｐＨ９．０、容量約
１Ｌの液を作成したところ、ＡＳＰ３３．０ｇ／ｌ、Ｆ
Ａ０．８ｇ／ｌ、ＭＡ１２０．０ｇ／ｌ、ＮＨ₃ ４４．
５ｇ／ｌの組成であった。

【００７６】（Ｅ）上記（Ｄ）で得られた反応液を、上
記（Ａ）で冷蔵保存した菌体を用い、比較例１と同様の
方法にて酵素反応したところ、３０℃、７２時間でＡＳ
Ｐ１０１ｇ／ｌ（反応回収率は５９％）であり、それ以
上反応が進行しなかった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:13） (Ｃ１２Ｐ 7/46 Ｃ１２Ｒ 1:05） (Ｃ１２Ｐ 39/00 Ｃ１２Ｒ 1:13 1:05） (72)発明者 三浦 深雪 三重県四日市市東邦町１番地 三菱化学株 式会社四日市総合研究所内

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記工程〜を実施してＬ−アスパラ
   ギン酸を製造する方法において、工程の少なくとも異
   性化反応における水溶液中の溶存酸素濃度を４ｐｐｍ以
   下に維持することを特徴とするＬ−アスパラギン酸の製
   造方法。 工程：マレイン酸及び／又は無水マレイン酸をイソメ
   ラーゼ又はこれを産生する微生物の存在下、異性化させ
   る反応、及び、前記異性化反応物の少なくとも一部及び
   アンモニアをアスパルターゼ又はこれを産生する微生物
   の存在下、水溶媒中で反応させてＬ−アスパラギン酸ア
   ンモニウムを生成させる反応、を順次又は同時に実施す
   る工程 工程：工程で得た溶液にマレイン酸及び／又は無水
   マレイン酸を添加してＬ−アスパラギン酸結晶を析出さ
   せる工程 工程：工程で得たＬ−アスパラギン酸結晶を回収
   し、母液を工程にリサイクルする工程
2. 【請求項２】 工程の異性化反応における水溶液中の
   溶存酸素濃度を反応に不活性なガスと接触させることに
   より調節することを特徴とする請求項１記載の方法。
3. 【請求項３】 工程の異性化反応における水溶液中の
   溶存酸素濃度を亜硫酸塩を添加することにより調節する
   ことを特徴とする請求項１記載の方法。
4. 【請求項４】 工程の異性化反応における水溶液中の
   溶存酸素濃度を０．５ｐｐｍ以下に維持することを特徴
   とする請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
5. 【請求項５】 工程と工程との間に下記工程を加
   えることを特徴とする請求項１記載の方法。 工程：工程で得られた反応液からアンモニアを除去
   して、反応液中に存在するＬ−アスパラギン酸アンモニ
   ウムの実質的全てをＬ−アスパラギン酸モノアンモニウ
   ムとする脱アンモニア工程
6. 【請求項６】 工程の反応を不活性なガスの雰囲気下
   で実施することを特徴とする請求項５記載の方法。
7. 【請求項７】 工程で回収したアンモニアを工程の
   リサイクル母液に混合することを特徴とする請求項５〜
   ６のいずれかに記載の方法。