JPH11507959A

JPH11507959A - ４’―トリフルオロメチルビフェニル―２―カルボン酸［２―（２ｈ―［１，２，４］トリアゾール―３―イルメチル）―１，２，３，４―テトラヒドロ―イソキノリン―６―イル］―アミドを調製する方法及びそのための中間体

Info

Publication number: JPH11507959A
Application number: JP9538686A
Authority: JP
Inventors: ウルバン，フランク，ジョン
Original assignee: ファイザーインク．
Priority date: 1996-04-30
Filing date: 1997-03-13
Publication date: 1999-07-13
Also published as: EP0902785A1; ZA973696B; WO1997041111A1; ES2180935T3; EP0902785B1; ATE223400T1; AR006876A1; BR9709137A; PT902785E; US5998623A; DE69715188T2; CN1216988A; CA2252621A1; KR20000065152A; IL126202A0; CA2252621C; PL329739A1; ID17294A; DK0902785T3; TR199802163T2

Abstract

(57)【要約】一般式（ＩＩＩ）の化合物｛ここで、Ｒは、ＨまたはＲ²であり、Ｒ²は、アリルまたは、置換基が１個から３個の（Ｃ₆−Ｃ₁₀）アリール基を含む置換メチル基から成る群から選ばれる（ここで、アリール基は、ニトロおよび（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシから選ばれる１つ以上の置換基で更に任意に置換される）｝を、ａ）一般式（Ｘ）の化合物｛ここで、Ｊは、ハロゲン原子、アジド基、（Ｃ₁−Ｃ₆）アシルオキシ基または（Ｃ₆−Ｃ₁₀）アロイルオキシ基のような脱離基、好ましくは塩素または臭素原子である｝で処理し；そしてｂ）ＲがＲ²である場合、工程ａ）の生成物を、酸で更に処理することを含む、一般式（Ｉ）の化合物を調製する方法。一般式（ＩＩ）の化合物（ここで、Ｒは、Ｒ²であり、Ｒ²は、上記で定義した通り、好ましくはＣＨ₃ＯＣ₆Ｈ₄ＣＨ₂−である）。

Description

【発明の詳細な説明】４´−トリフルオロメチルビフェニル−２−カルボン酸［２−（２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルメチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ− イソキノリン−６−イル］−アミドを調製する方法及びそのための中間体発明の分野本発明は、下記一般式Ｉの４´−トリフルオロメチルビフェニル−２−カルボン酸［２−（２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルメチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−６−イル］−アミドに関する。更に詳しくは、化合物Ｉの改良された調製法及びそのための中間体に関する。化合物Ｉは、ミクロソームトリグリセリド移送蛋白質Ｃおよび／またはアポリポ蛋白Ｂ（アポＢ）分泌の阻害物質であり、よって、アテローム動脈硬化症及びその臨床的後遺症の予防および治療、血清脂質の低下ならびに関連疾患に有用である。発明の背景ミクロソームトリグルセリド移送蛋白質（ＭＴＰ）は、トリグリセリド、コレステリルエステル、および燐脂質の輸送を触媒する。これは、アテローム動脈硬化疾患形成の一因であるアポ−Ｂ含有リポ蛋白質生体分子の集団にありそうな因子として包含されてきた。ヨーロッパ特許出願第０６４３０５７Ａ１、ヨーロッパ特許出願第０５８４４４６Ａ２、およびウェテロー(Wetterau)等，Sci ence，258，999-1001，(1992)参照。ＭＴＰを阻害および／またはアポＢ分泌を阻害する化合物は、従って、アテローム動脈硬化症の治療に有用である。このような化合物は、ＭＴＰおよび／またはアポＢ分泌を阻害することにより血清コレステロールおよびトリグリセリド水準を減少させることのできる他の疾患または症状の治療にも有用である。このような症状としては、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、膵炎、および肥満；ならびに膵炎、肥満、および糖尿病が関係した、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、および高脂質血症が挙げられる。発明の概要本発明は、下記一般式の化合物｛ここで、Ｒは、ＨまたはＲ²であり、Ｒ²は、アリルおよび、置換基が１個から３個の（Ｃ₆−Ｃ₁₀）アリール基を含む置換メチル基から選ばれる（ここで、アリール基は、ニトロおよび（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシから選ばれる１つ以上の置換基で任意に置換される）｝をａ）下記一般式の化合物｛ここで、Ｊは、ハロゲン原子、アジド基、（Ｃ₁−Ｃ₆）アシルオキシ基または（Ｃ₆−Ｃ₁₀）アロイルオキシ基のような脱離基、好ましくは塩素または臭素原子である｝で処理し；そしてｂ）ＲがＲ²である場合、工程ａ）の生成物を、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ｐ−トルエンスルホン酸（ＰＴＳＡ）、メタン−もしくはトリフルオロメタンスルホン酸および酢酸中のＨＢｒのような酸、好ましくはトリフルオロ酢酸で更に処理することを含む、下記一般式の化合物を調製する方法を提供する。゛複素環式゛という部分の解釈は、Ｏ、Ｎ、およびＳから独立に選ばれる少なくとも１個の環ヘテロ原子を有するいずれの単環または縮合環系をも意味する。従って、１つ以上の炭素環式縮合した、飽和、部分的に未飽和、または芳香族環（通常ベンゼン環）を有する多環式縮合環系は、その系が、前述のヘテロ原子の少なくとも１個を有する少なくとも１つの縮合環も有する限り、複素環の定義内に入る。置換基として、このような複素環式環は、炭素環式（例えば、ベンゼン）環または複素環式環のいずれか由来の分子の残基に結合することができる。゛１つ以上の環゛を有する部分の解釈は、この部分が、単または縮合環式部分を有することを意味するものである。これらの環は、炭素環式または複素環式、飽和または部分的に未飽和、および芳香族または非芳香族であっても良い。縮合多環式環系または基の解釈は、系中の全ての環が縮合していることを意味する。本明細書における゛ハロ゛の解釈は、特に断らない限り、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードを含む。゛アリール゛置換基（例えば、（Ｃ₆−Ｃ₁₀）アリール）の解釈は、環または置換基が、炭素環式であることを意味する。１個以上のヘテロ原子を有する芳香族部分は、上記で考察した゛複素環式゛という用語のサブセットとして含まれる。゛アシル゛置換基の解釈は、置換基が結合しているカルボニル基に結合した脂肪族または環式炭化水素部分を指す。゛アルキル゛および゛アルコキシ゛の解釈は、直鎖および、この部分が２個より多い炭素原子を有する場合、分枝の環式鎖基の両方を含むが、゛プロピル゛または゛プロポキシ゛のような個々の基の解釈は、直鎖（゛正゛）基、限定して呼ばれる゛イソプロピル゛または゛イソプロポキシ゛ような分枝鎖異性体のみを含むことは当然のことである。下記一般式の特定の中間体およびその互変異性体（ここで、Ｙは、ＮＨ₂またはＮＯ₂である）が、本発明の更なる特徴として更に提供される。上記の化合物は、その全てが本発明に含まれるいくつかの互変異性形態で存在することができることは、当業者の理解する処である。本発明により提供される別の中間体は、下記一般式の化合物（ここで、Ｒは、Ｒ²、好ましくはＣＨ₃ＯＣ₆Ｈ₄ＣＨ₂−である）である。発明の詳細な説明以下の反応模式図および説明において、Ｒ、Ｒ²、Ｊ、ＫおよびＹならびに構造式ＩからＸは、上記で定義した通りである。摸式図１模式図２模式図３模式図１に示すように、化合物ＩＸは、塩基の存在下で、１，２，４−トリアゾールと一般式Ｒ²Ｋの化合物（ここで、Ｋは、上記で定義した通りのハロである）とを反応させることにより調製する。好ましくは、Ｒ²Ｋは、塩化４−メトキシベンジルである。反応は、約室温で、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルカルボキサミド、例えばジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）およびジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）；ケトン、例えばアセトンおよびメチルエチルケトン；（Ｃ₁− Ｃ₆）アルカノール、例えばエタノール、メタノールおよびイソプロパノール；並びにその混合物のような極性溶媒中で行う。本発明のこの態様の実施に有用な塩基としては、水酸化、炭酸および炭酸水素アルカリ金属が挙げられる。好ましくは、溶媒は、ＤＭＦであり、塩基は、ＮａＯＨである。化合物ＶＩＩＩは、熱水中で化合物ＩＸをホルムアルデヒドと共に加熱することにより調製する。反応は、還流温度で、外的熱源を用い約１００から約１３５ ℃で行う。過剰に用いるホルムアルデヒドは、その３７％水溶液（ホルマリンとしてやはり知られている）又はその直鎖重合体（パラホルムアルデヒド）および三量体（トリオキサン）形態で供給することができる。パラホルムアルデヒドは、熱水中で、トリオキサンは、強酸を有する水溶液中で分解してホルムアルデヒドを生じる。ホルムアルデヒドの好ましい原料は、ホルマリンである。化合物ＶＩＩは、ミツノブ(Mitsunobu)反応で、トリフェニルホスフィンおよびジ（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルまたはアゾ二カルボン酸ジピペリジニルの存在下、化合物ＶＩＩＩをフタルイミドで処理することにより形成する。好ましいアゾ二カルボン酸エステルは、ジイソプロピルエステルである。反応は、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、イソプロピルエーテルおよびジオキサンのような非プロトン性溶媒中で約０から約６５℃の温度で達成することができる。好ましくは、反応は、ＴＨＦ中で約１５℃で行う。化合物ＶＩＩは、（Ｃ₁−Ｃ₆）アルカノール、例えばメタノール、エタノールまたはイソプロパノールのような非プロトン性懸濁媒体中に懸濁し、ヒドラジンで処理することにより化合物ＶＩに変換する。ヒドラジンは、好ましくは、その水和物の形態で提供し、好ましい懸濁媒体は、メタノールである。反応は、約室温から約６５℃の温度、好ましくは室温で達成することができる。化合物ＩＶ（Ｒ＝Ｒ²）は、塩基および非プロトン性溶媒の存在下、化合物ＶＩを｛ここで、Ｙは、ハロおよび任意に置換された（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキル−または（Ｃ₁−Ｃ₆）アリールスルホンオキシ基から選ばれる｝で処理することにより形成する。好ましくはＣＨ₃ＳＯ₃（メシルオキシ）である。反応は、窒素またはアルゴンのような不活性雰囲気下で、約常温から溶媒の還流温度の温度で達成する。用いることのできる塩基は、トリ（Ｃ₁−Ｃ₆）アルキルアミン類、ピリジンおよびＮ−メチルモルホリンのような有機塩基である。非プロトン性溶媒としては、ＴＨＦ、ＣＨ₂Ｃｌ₂およびＤＭＦが挙げられる。反応は、好ましくは、溶媒の還流温度で、窒素下、ＴＨＦ中で達成する。好ましい塩基は、トリエチルアミンである。Ｙがメシルオキシである化合物Ｖは、不活性雰囲気下低温で（Ｃ₁−Ｃ₆）ハロアルカン中の化合物Ｖ（ここで、Ｙは、ＯＨである）の懸濁液を、塩基の存在下で塩化メシルで処理することにより調製することができる。この態様の実施に有用な塩基は、上述のものから選ぶことができる。不活性雰囲気は、上述のものから選ぶことができる。温度は、約−４０から約０℃である。反応は、好ましくは、トリエチルアミンの存在下、約−３０℃で、窒素下で行う。模式図３に示すように、化合物ＩＶ（Ｒ＝Ｒ²）は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンもしくはトリフルオロメタンスルホン酸および酢酸中のＨＢｒのような酸、好ましくはトリフルオロ酢酸で処理することにより化合物ＩＶ（Ｒ＝Ｈ）に変換する。反応は、約室温から約６０℃の温度、好ましくは室温で行うことができる。ＴＦＡは、ニートで用いても良いし又はＣＨ₂Ｃｌ₂に溶解しても良い。Ｒが水素である化合物ＩＶは、水素化触媒および有機溶媒の存在下、約１から約３気圧の圧力で、水素で処理することにより、Ｒが水素である化合物ＩＩＩに変換する。水素化触媒としては、Ｐｄ、ｐｔおよびラネーＮｉが挙げられる。金属は、塩、例えばＰｄ（ＯＨ）₂の形態で、または担体、例えば炭素に担持させて用いることができる。水素化は、約室温から約５０℃の温度、好ましくは室温で達成する。好ましい水素化触媒は、１０％Ｐｄ／Ｃであり、好ましい溶媒は、メタノールである。Ｒが水素である化合物ＩＩＩは、溶媒および塩基の存在下、ハロゲン化物、アジ化物および混合した無水物から選ばれる４´−トリフルオロメチルビフェニル −２−カルボニル基源で処理することにより、化合物Ｉに変換する。反応は、約室温から約５０℃の温度、好ましくは室温で達成する。本発明の態様に有用な溶媒としては、上述のような非プロトン性溶媒、ハロアルカン類及びその混合物が挙げられる。好ましい溶媒は、塩化メチレン中のカルボニル化合物の溶液を、ＴＨＦ中の化合物ＩＩＩ（Ｒ＝Ｈ）の懸濁液に加えた場合に形成されるＴＨＦと塩化メチレンの混合物である。あるいは、模式図３に示すように、化合物Ｉは、ＲがＲ²である化合物ＩＩＩを上述のような４´−トリフルオロメチルビフェニル−２−カルボニル源で処理して一般式ＩＩの化合物を形成し、化合物ＩＩを上述のようにトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンもしくはトリフルオロメタンスルホン酸および酢酸中のＨＢｒのような酸、好ましくはトリフルオロ酢酸で処理することにより調製することができる。好ましくは、Ｒ²は、ｐ−ＣＨ₃ＯＣ₆Ｈ₄ＣＨ₂−であり、４´−トリフルオロメチルビフェニル−２−カルボニル源は、塩化物である。一般式Ｉの化合物及びその互変異性体は、酸付加塩を形成し、゛薬学的に許容することのできる塩゛という表現は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、燐酸塩、燐酸水素塩、燐酸二水素塩、酢酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩およびｐ−トルエンスルホン酸塩のような塩を包含することを意図しているが、これらに限定される訳ではない。それは、ポリ付加塩を形成することもできる。一般式Ｉの化合物及びその互変異性体の酸付加塩は、この塩基型と適切な酸とを反応させることにより容易に調製される。塩が、一塩基酸（例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、酢酸塩）、二塩基酸の水素型（例えば、硫酸水素塩、コハク酸塩）または三塩基酸の二水素型（例えば、燐酸二水素塩、クエン酸塩）である場合、少なくとも１モル当量そして通常１モルを超える酸を用いる。しかしながら、硫酸、ヘミコハク酸塩、燐酸水素塩または燐酸塩のような塩を所望である場合、適切且つ正確な化学当量の酸を、通常、用いる。遊離塩基および酸は、通常、所望の塩が析出するか、さもなければ濃縮および／または非−溶媒の添加により単離することのできる共−溶媒中で合わせる。一般式Ｉの化合物、その互変異性体、及びそれらの薬学的に許容することのできる酸塩（以後、゛活性化合物゛）は、経口的に投与可能であり、よって、薬学的に許容することのできる経口剤形に好適な担体または希釈剤と組み合わせて用いられる。好適な薬学的に許容することのできる担体としては、不活性な固形賦形剤または希釈剤および滅菌した水性もしくは有機溶液が挙げられる。活性化合物は、下記で述べる範囲の所望の用量を提供するのに十分な量でこのような医薬組成物中に存在する。従って、経口投与には、本化合物を適切な固形または液体担体または希釈剤と組み合わせて、カプセル剤、錠剤、散剤、シロップ剤、液剤、懸濁剤等を形成することができる。医薬組成物は、所望であれば、着香剤、甘味剤、医薬品添加物等のような更なる成分を含むことができる。上文で定義したような一般式Ｉの化合物および薬学的に許容することのできる担体を含む本活性化合物を含む医薬組成物は、アテローム動脈硬化症、膵炎、肥満、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高脂質血症、および糖尿病を含む症状の治療に好適である。他のメカニズムも同様に関連している可能性もあるかもしれないが、本活性化合物は、おそらくＭＴＰの阻害により、アポＢ分泌を阻害または減少させる。本化合物は、アポＢ、血清コレステロール、および／またはトリグリセリド水準が上昇するいずれの疾患または症状においても有用である。よって、本発明は、更に、そのような治療を必要とする哺乳類、特にヒトに、アポリポ蛋白質Ｂの分泌を減少させるのに十分な量の上記で定義した通りの一般式Ｉの化合物を投与することを含む、アテローム動脈硬化症、膵炎、肥満、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高脂質血症、および糖尿病から選ばれる症状を治療する方法を提供する。前述の症状のサブグループとしては、アテローム動脈硬化症、肥満、膵炎、および糖尿病が挙げられる。更に特定のサブグループとしては、アテローム動脈硬化症が挙げられる。活性化合物に関して本明細書で用いる゛治療゛という用語は、予防ならびに疾患緩和治療を含む。錠剤、丸剤、カプセル剤等は、トラガカントガム、アラビアゴム、トウモロコシデンプンまたはゼラチンのような結合剤；燐酸二カルシウムのような医薬品添加物；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、アルギン酸のような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤；およびショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤も含有することができる。単位剤形が、カプセルである場合、上記の型の材料に加えて、脂肪油のような液体担体を含有することができる。種々の他の物質が、コーティング剤として、または物理的単位剤形を改良するために存在することができる。例えば、錠剤は、シェラック、ショ糖又はその両方で被覆することができる。シロップ剤またはエリキシル剤は、有効成分に加え、甘味剤としてショ糖、保存料としてメチルおよびプロピルパラベン、染料ならびにサクランボまたはオレンジフレーバーのような着香剤を含有することができる。本活性化合物は、非経口的に投与することもできる。非経口投与には、本化合物を、滅菌した水性または有機媒体と合わせて注射用液剤または懸濁剤を形成することができる。これらの活性化合物の液剤または懸濁剤は、ヒドロキシプロピルセルロースのような表面活性剤と適切に混合した水中で調製することができる。分散液は、ゴマもしくは落花生油、エタノール、水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール）、それらの適切な混合物、植物油、油中のＮ−メチルグルカミン、ポリビニルピロリドン及びそれらの油中の混合物中で、ならびに本化合物の水溶性の薬学的に許容することのできる塩の水性液剤としても調製することができる。通常の貯蔵および使用条件下では、これらの製剤は、微生物の生育を阻止する保存料を含有する。この方法で調製した注射用液剤は、次いで、静脈、腹腔内、皮下、または筋肉内により投与することができる。注射用途に好適な医薬形態としては、滅菌水性液剤もしくは分散液剤および滅菌注射用液剤もしくは分散液剤の即時調製用滅菌散剤が挙げられる。全ての場合において、この形状物は、滅菌である必要があり、且つ容易な注射能が存在する程度に液状である必要がある。製造および貯蔵の条件下で安定である必要があり、細菌および真菌のような微生物の汚染作用から保護する必要がある。投与する活性化合物の用量は、通常、治療する症状の重篤度および投与経路を考慮して当業界で周知の原則により変える。通常、本活性化合物は、効果的な用量、通常、単位または分割量で投与する毎日の用量、例えば、約０．１から約１５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量、好ましくは約１から約５ｍｇ／ｋｇ体重を受け取るように温血動物（ヒトのような）に投与する。受け取る毎日の合計用量は、通常、１から１０００ｍｇ、好ましくは５から３５０ｍｇである。本活性化合物は、他の脂質低下薬を含む他の医薬品と合わせて用いることができる。このような薬物としては、コレステロール生合成阻害剤、特にＨＭＧＣｏＡレダクターゼ阻害剤およびスクアレン合成酵素阻害剤；胆汁酸封鎖剤；フィブレート；コレステロール吸収阻害剤；およびナイアシンが挙げられる。試験化合物は、以下のスクリーニングのいくつかで活性であれば、活性であると考えられる。活性化合物の活性は、ＨｅｐＧ２細胞におけるアポＢ分泌の阻害を測定することにより評価することができる。ＨｅｐＧ２細胞を、約７０％集密的になるまで、５％の二酸化炭素を含む湿潤雰囲気下で９６−ウェルの培養プレート中のダルベッコの改良イーグル培地および１０％ウシ胎児血清（生育培地；ギブコ(Gibco)）中で生育させる。試験化合物を、ジメチルスルホキシドに１０−２０ｍＭで溶解し、次いで、生育培地中で１μＭになるように希釈する。このストックの連続１：１希釈を生育培地中で行い、その１００μＬを、ＨｅｐＧ２細胞を入れた９６−ウェルの培養プレートのそれぞれのウェルに加える。２４時間後、生育培地を集め、特異的ＥＬＩＳＡによりアポＢおよび対照としてアポＡＩ濃度を測定する。阻害剤を、アポＡＩの分泌に影響することなく培地中へのアポＢ分泌を減少させる化合物として同定する。アポＢ用ＥＬＩＳＡを、以下の通りに実施する。ヒトアポＢに対するモノクローナル抗体（ケミコン(Chemicon)）を、燐酸緩衝生理食塩水／アジ化物（ＰＢＳ＋０．０２％Ｎａアジ化物）中に５μｇ／ｍＬになるように希釈し、その１００μＬを９６−ウェルのプレート（ＮＵＮＣマキシソーブ(Maxisorb)）の各ウェルに加える。室温で一晩のインキュベーション後、抗体溶液を除去し、ウェルを、ＰＢＳ／アジ化物で３回洗浄する。ＰＢＳ／アジ化物中で作成した１％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液中で１−３時間ウェルをインキュベートすることにより、このプラスチック上の非特異的部位をブロックする。ＨｅｐＧ２細胞またはアポＢ標準（０．００４％ツィーン２０／ＰＢＳ／アジ化物中の１％ＢＳＡ中に作成）からの生育培地による種々の希釈物１００μＬを、各ウェルに加え、１８時間インキュベートする。ウェルを吸出し、二次抗体、ヤギ抗− ヒトアポＢ（ケミコン）の１／１０００希釈物１００μＬを加える前に、３回洗浄する（ＰＢＳ中の０．１％ツィーン２０）。室温で３時間インキュベーション後、この溶液を吸出し、ウェルを、再度、上記の通りに３回洗浄する。アルカリホスファターゼに共役したラビット抗−ヤギＩｇＧ（シグマ(Sigma)）の１：１６００希釈物（ＰＢＳ／１％ＢＳＡ／２ｍＭのＭｇＣｌ₂中に）１００μＬを、次いで、各ウェルに加え、室温で１時間インキュベートする。吸出し後、ウェルを、上記の通りに４回洗浄し、２５ｍＭ重炭酸ナトリウム、２ｍＭのＭｇＣｌ₂ 中の１ｍｇ／ｍＬのｐ−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ；シグマ）ｐＨ９．５の１００μＬを各ウェルに加え、２０−３０分間インキュベートし、次いで、５０μＬの０．２ＮのＮａＯＨの添加により反応を終了させる。各ウェルの吸収を４０５ｎｍで読み取り、６５０ｎｍでのバックグラウンドを差し引く。同じ測定で平衡して行う精製ＬＤＬ標準から構築した標準曲線からアポＢ濃度を算定する。アポＢ用抗体の代わりにアポＡＩ用抗体（ケミコン）を用い、そして室温の代わりに３７℃で抗原のインキュベーションを行うことを除いては、同様の方法でアポＡＩを測定する。試験化合物がＭＴＰ活性を直接阻害するかどうか活性を確認することもできる。化合物によるＭＴＰ活性の阻害は、可溶性ヒトＭＴＰの存在下、供与小胞から受容小胞への放射線標識したトリグリセリドの移送の阻害を観察することにより測定することができる。ＭＴＰを調製する方法は、ウェテローおよびジルバースミット（Zilversmit）（Biochem．Biophys．Acta（1986）875:610）の方法に基づく。手短に説明すると、−８０℃で冷凍したヒト肝臓の塊を、氷上で解凍し、ミンチにし、氷冷０．２５Ｍのショ糖で数回すすぐ。引き続く全工程を、氷上で実施する。０．２５Ｍのショ糖中の５０％ホモジネートを、ポッター−エルビーエムテフロン乳棒を用いて調製する。ホモジネートを０．２５Ｍのショ糖で１：１に希釈し、４℃で１０，０００ｘｇで２０分間遠心分離する。ペレットをショ糖に再懸濁し、１０，０００ｘｇで２０分間再遠心分離する。上澄を合わせ、ミクロソームを、１０５，０００ｘｇで７５分間の遠心分離によりペレット化する。上澄を捨て、ミクロソームのペレットを、最小容量の０．２５Ｍのショ糖に懸濁し、出発肝臓重量ｇｍ当たり３ｍＬになるように０．１５Ｍのトリス −ＨＣｌｐＨ８．０で希釈する。この懸濁液を１２の画分に分け、１０５，０００ｘｇで７５分間遠心分離する。上澄を捨て、ミクロソームのペレットを、必要とするまで−８０℃で冷凍保存する。測定を行う前のＭＴＰの調製には、溶解したペレットを、１２ｍＬの冷５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、５０ｍＭのＫＣｌ、５ｍＭのＭｇＣｌ₂、ｐＨ７．４に懸濁し、１．２ｍＬの０．５４％デオキシコール酸塩（ｐＨ７．４）溶液を、攪拌しながら徐々に加えてミクロソーム膜を崩壊させる。穏やかに攪拌しながら氷上で３０分のインキュベーション後、懸濁液を１０５，０００ｘｇで７５分間遠心分離する。可溶性ＭＴＰ蛋白質を含有する上澄を、測定用バッファー（１５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、４０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、０．０２％のＮａＮ₃、ｐＨ７．４）を４回取り替えて２−３日間透析する。ヒト肝臓ＭＴＰを、４℃で貯蔵し、使用直前に測定用バッファーで１：５に希釈する。ＭＴＰ調製物は、３０日までの貯蔵で何ら顕著な移送活性の喪失を示していない。窒素下、測定用バッファー中の４００μＭの卵ホスファチジルコリン（ＰＣ）、７５μＭのウシ心臓カルジオリピン、および０．８２μＭの¹⁴Ｃ−トリオレイン（１１０Ｃｉ／モル）の分散液の室温での浴超音波処理により、リポソームを調製する。クロロホルム中の脂質を適切な量で加え、測定用バッファーで水化する前に窒素気流下で乾燥する。窒素下、測定用バッファー中の１．２ｍＭのＰＣ、２．３μＭのトリオレインおよび３０ｐＭの³Ｈ−ＰＣ（５０Ｃｉ／モル）の分散液の室温での浴超音波処理により、受容リポソームを調製する。供与および受容リポソームを、７℃で１６０，０００ｘｇで２時間遠心分離する。小さい一枚膜リポソームを有する上層８０％の上澄を慎重に取り出し、移送測定に用いるまで４℃で貯蔵する。供与および受容小胞と可溶性ＭＴＰおよび試験化合物とを混合することにより開始する移送測定を用いて、ＭＴＰ活性を測定する。１００μＬの５％ＢＳＡ（対照）または試験化合物を含有する５％ＢＳＡのいずれかに、５００μＬの測定用バッファー、１００μＬの供与リポソーム、２００μＬの受容リポソームおよび１００μＬの希釈ＭＴＰ蛋白質を加える。３７℃で４５分間のインキュベーション後、測定用バッファー中の５０％（ｗ／ｖ）ＤＥＡＥセルロース懸濁液５００μＬを加えることにより、トリグリセリド移送を終了させる。４分の攪拌後、ＤＥＡＥセルロースに結合した供与リポソームを、低速遠心分離により選択的に沈殿させる。受容リポソームを有する一定量の上澄をカウントし、一次速度則を用い受容リポソームの回収パーセントおよびトリグリセリド移送パーセントを算定するために、³Ｈおよび¹⁴Ｃカウントを用いる。試験化合物によるトリグリセリド移送の阻害は、試験化合物が存在しない対照と比較した¹⁴Ｃ放射能の減少として明示される。ＭＴＰ阻害剤としての試験化合物の活性は、以下の試験によりインビボでも測定することができる。雄性のマウス（２０−３０ｇ；種々の株）に、０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁した試験化合物を経口強制栄養により服用させる（０．２５ｍＬ／２５ｇ体重）。マウスを安楽死させ、血清の調製のため血液を集める前に、数日にわたって複数回または、９０分で１回のいずれかで化合物溶液を服用させる。市販の酵素的測定キット（トリグリセリドＧ：ワコーファインケミカルズ(Wako Fine Chemicals)）により、血清のトリグリセリド濃度を測定する。ＭＴＰ阻害剤を、賦形剤を服用させた対照のマウスと比較した血清トリグリセリドを低下させる能力により同定する。本発明を以下の実施例により具体的に説明する。しかしながら、本発明は、これらの実施例の特定の細部に制限されるものではないことは当然のことである。当業者等に公知の精製および分離の従来法および／または技法を用いて本発明の化合物を単離することができる。このような技法としては、全ての型のクロマトグラフィー（ＨＰＬＣ、シリカゲルのような普通の吸着剤を用いるカラムクロマトグラフィー、および薄層クロマトグラフィー）、再結晶化、ならびに分別（即ち、液体−液体）抽出技法が挙げられる。調製例１１−（４−メトキシベンジル）−１，２，４−トリアゾール１，２，４−トリアゾール（７．５ｇ、０．１０９モル）を、ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下、氷浴中で１０℃で攪拌し、そして部分的に粉砕した水酸化ナトリウム（１７．５ｇ、０．４３８モル）を一度に加えると約２５℃に発熱した。ＤＭＦ中の塩化４−メトキシベンジル（１５ｍＬ、０．１１１モル）溶液を２５℃で５分にわたって滴下した。室温で４時間攪拌した後、酢酸エチルおよび水を加えた。層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を、水で４回および食塩水で１回洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した。混合物を濾過し、濾液溶媒を真空で蒸発させて標記生成物を１４．１５ｇの油状物質として６９％収率で得た； ¹H NMR(CDCl₃)δ 8.00(s，1)，7.9 3(s，1)，7.19(d，2)，6.88(d，2)，5.23(s，2)，3.78(s，3)．質量スペクトル : m/z 109(M + 1)．調製例２５−（ヒドロキシメチル）−１−（４−メトキシベンジル）− １，２，４−トリアゾール調製例１の標記生成物（７．６ｇ、４０ミリモル）を３７％ホルムアルデヒド水溶液（２５ｍＬ）に溶解し、１３０℃の油浴中で４日間還流加熱した。ヒドロキシメチル化の経過を、溶出液として３：１の酢酸エチル：クロロホルムを用いるシリカゲル上のＴＬＣにより監視した。反応混合物を室温に冷まし、水に注ぎ入れ、酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を１ＮのＮａＯＨ、水および食塩水で洗浄した。硫酸マグネシウム上で溶液を乾燥した後、蒸発により粗生成物を得、少量の２−プロパノールを有するヘキサン類中でスラリー化して融点９５−１００℃の４．９ｇ（５６％）の標記生成物を得た。 ¹H NMR(CDCl₃)δ 7.7 2 (s，1)，7.21(d，2)，6.85(d，2)，5.70(bs，1，OH)，5.32(s，2)，4.69(s，2) ，3.78(s，3)． ¹³C NMR(CDCl₃)δ 159.6，149.8，145.6，129.2，127.0，114.3 ，55.3，54.9，52.0． IR（KBr）1610，1585，1512 cm^-1．質量スペクトル: m/ z 220(M + 1)． C₁₁H₁₃N₃O₂から算定した理論値： C，60.26; H，5.98; N，19.17．測定値： C，60.30; H，6.16; N，19.66．構造は、単結晶Ｘ線分析により確認した。調製例３５−（フタルイミドメチル）−１−（４−メトキシベンジル）− １，２，４−トリアゾール調製例２の標記生成物（８．５ｇ、３８．８ミリモル）、トリフェニルホスフィン（１１．２ｇ、４２．７ミリモル）およびフタルイミド（６．３ｇ、４２．７ミリモル）を、室温でテトラヒドロフラン（１２５ｍＬ）に溶解して濁った溶液を得た。テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）中のアゾ二カルボン酸ジイソプロピル（８．４ｍＬ、４２．７ミリモル）の溶液を、氷水浴で温度を約１５℃に保ちながら４０分にわたって滴下した。添加中に、生成物が、白色固形物として沈殿した。反応混合物を室温で一晩攪拌し、次いで、ヘキサン類（１２５ｍＬ）で希釈した。３０分間攪拌した後、白色固形物の標記生成物を集め、ヘキサン類で洗浄し、真空で乾燥した；１２．２ｇ、９１％収率；融点１６７−７２℃。 ¹H NM R(CDCl₃)δ 7.85(s，1)，7.81(m，2)，7.69(m，2)，7.09(d，2)，6.77(d，2)，5 .43(s，2)，4.89(s，2)，3.72(s，3)． ¹³C NMR(CDCl₃)δ 150.9，145.6，134.2 ，131.8，128.3，127.0，123.6，114.3，112.9，112.1，55.2，52.0，32.8． IR (KBr)1772，1720，1689，1612，1586，1519 cm^-l．質量スペクトル: m/z 349(M + 1)． C₁₉H₁₆N₄O₃から算定した理論値： C，65.50; H，4.63; N，16.08．測定値： C，65.35; H，4.80; N，16.18. 調製例４５−（アミノメチル）−１−（４−メトキシベンジル）− １，２，４−トリアゾール調製例３の標記生成物（５ｇ、１４．４ミリモル）をメタノール（５０ｍＬ）に懸濁し、攪拌しながらヒドラジン水和物（１．６ｍＬ、３２ミリモル）を加えた。数分後、透明な溶液を得、反応混合液を室温で一晩攪拌している間にフタロイルヒドラジドが沈殿した。反応混合物を塩化メチレン（５０ｍＬ）で希釈し、ヒドラジドのスラリーを、４５分間攪拌し、濾過し、固形物を塩化メチレンで洗浄した。濾液を真空で蒸発させ、残分を塩化メチレンおよび１ＮのＮａＯＨに溶解した。水層は、ｐＨ１２であった。層を分離し、水層を塩化メチレンで抽出し、有機層を合わせた。有機層を食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空での溶媒の蒸発により、標記生成物を、３ｇ、９７％の収率で無色油状物質として回収した。 ¹H NMR(CDCl₃)δ 7.79(s，1)，7.12(d，2)，6.81(d，2) ，5.27(s，2)，3.88(s，2)，3.74(s，3)，1.59(bs，2，NH ₂)． ¹³C NMR(CDCl₃) δ 150.3，145.6，130.4，129.0，128.8，127.3，114.3，55.3，51.7，37.7．調製例５２−［２−（４−メトキシベンジル）−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール− ３−イルメチル］−６−ニトロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン１）２−（２−ヒドロキシエチル）−５−ニトロベンジルアルコール（６．３８ｇ、３２．４ミリモル）およびトリエチルアミン（１１．３ｍＬ、８１ミリモル）を、窒素下で塩化メチレン（１００ｍＬ）に懸濁し、攪拌しながら−３０ ℃に冷却した。塩化メチレン（３２ｍＬ）中の塩化メタンスルホニル（５．５ｍＬ、７１．２ミリモル）溶液を、１５分にわたって滴下した。３０分後、冷浴を取り除き、１ＮのＨＣｌ（１３０ｍL）を加えた。混合液を１０分間攪拌し、層を分離した。有機層を、水、飽和重炭酸ナトリウム溶液および食塩水で洗浄した。有機層を、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過した。濾液を真空で蒸発させて黄色固形物を得、これを更に精製することなく用いた；１０．７ｇ、９４％収率。 ¹HNMR(CDCl₃)δ 8.17(m，2)，7.66(d，1)，5.39(s，2)，4.50(t，2)，3.28(t ，2)，3.10(s，3)，3.00(s，3)．２）調製例４の標記生成物（１．１ｇ、５ミリモル）およびトリエチルアミン（１．８ｍＬ、１２．７ミリモル）を、窒素雰囲気下でテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）に溶解し、テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中の工程１）の生成物（１．７５ｇ、５ミリモル）の溶液で滴下処理した。その結果できた溶液を、室温で２時間および還流で一晩攪拌した。反応混合液を冷まし、塩化メチレンおよび１ＮのＮａＯＨを加えた。層を分離し、水層を更なる塩化メチレンで抽出した。合わせた有機層を水および食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した。粗生成物を塩化メチレンから回収し、クロロホルム中の３０％酢酸エチルを用いるシリカゲル上のクロマトグラフィーにより精製して１．２ｇ、６３％収率の標記生成物を黄色油状物質として得、これは、徐々に固化した。 ¹H NMR(CDCl₃)δ 7.98( m，2)，7.88(s，1)，7.10(m，3)，6.76(d，2)，5.40(s，2)，3.81(s，2)，3.73( s，3)，3.63(s，2)，2.95(t，2)，2.80(t，2)． ¹³C NMR(CDCl₃)δ 159.4，151. 4，150.4，145.6，141.5，135.6，129.0，127.4，123.7，123.7，120.8，114.1 ，112.1，55.5，55.2，53.1，52.1，50.1，29.0． IR（KBr）1610，1584，1517 cm^-1．質量スペクトル: m/z 380(M + 1)．調製例６２−（２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルメチル）−６−ニトロ− １，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン調製例５の標記生成物（８．８ｇ、２３．２ミリモル）を、トリフルオロ酢酸（８８ｍＬ）に溶解し、室温で一晩攪拌した。反応混合液を、真空で油状物質へと蒸発させ、塩化メチレンに溶解した。溶液を、１ＮのＨＣｌ溶液で２回抽出し、合わせた酸性抽出物を塩化メチレンで１回洗浄した。酸性抽出物を、新たな塩化メチレンで層にし、１０％水性炭酸ナトリウムでｐＨを１０に調整して標記生成物を沈殿させ、集め、水および塩化メチレンで洗浄した；３．９９ｇ、６６％収率；融点１６３−６℃。 ¹H NMR(DMSO-d₆)δ 8.20(s，1)，7.97(d，1)，7.92( dd，1)，7.30(s，1)，3.82(s，2)，3.73(s，2)，2.92(t，2)，2.76(t，2)． ¹³C NMR(DMSO-d₆)δ 147.8，146.2，143.2，136.5，128.2，123.8，120.8，55.1，5 3.4，49.6，28.9．質量スペクトル: m/z 260(M + 1)． C₁₂H₁₃N₅O₂(0.15 CH₂Cl₂)から算定した理論値： C，53.65; H，4.93; N，25.9 8．測定値： C，53.65; H，4.93; N，25.75．実施例１６−アミノ−２−（２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルメチル） −１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン調製例６の標記生成物（４．４６ｇ、１７．４ミリモル）を、メタノール（２２０ｍＬ）に溶解し、５０ｐｓｉ（約３４５ｋＰａ）で４時間、炭素担持１０％により触媒を除去し、濾液中のメタノールを真空で蒸発させて標記生成物を３．５６ｇ、９１％収率、融点１９１−３℃の白色固形物として得た。 ¹H NMR(ジメチルスルホキシド-d₆)δ 6.65(d，1)，6.32(dd，1)，6.28(d，1)，4.79(s，2)， 3.71(s，2)，3.41(s，2)，3.34(s，2)． ¹³C NMR(ジメチルスルホキシド-d₆)δ 155.9，147.0，134.5，127.1，122.4，113.8，112.7，55.4，53.9，50.9，29.2 ． IR（KBr）1633，1612，1584，1513 cm^-1．質量スペクトル: m/z 230(M + 1) ． C₁₂H₁₅N₅から算定した理論値： C，62.86; H，6.59; N，30.55．測定値： C， 62.49; H，6.39; N，30.45．実施例２４´−トリフルオロメチル−ビフェニル−２−カルボン酸［２−（２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルメチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ− イソキノリン−６−イル］−アミド（Ｉ）Ａ）実施例１の生成物（３．３ｇ、１４．５ミリモル）を、トリエチルアミン（２．２３ｍＬ、１５．９ミリモル）を有する塩化メチレン（１００ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）に懸濁した。塩化メチレン（４０ｍＬ）中の塩化４´−トリフルオロメチルビフェニル−２−カルボニル（４．１３ｇ、１４．５ミリモル）溶液を滴下する間、懸濁液を室温で攪拌し、反応混合液を一晩攪拌した。水（４４０ｍＬ）中の炭酸ナトリウム（１７ｇ、０．２モル）を加え、混合物を１５分間攪拌した。層を分離し、水層を塩化メチレンで２回抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空で蒸発させて標記生成物を泡状物質として得た。これは、前の物質と同一であった。 ¹ H NMR(CDCl₃)δ 13.88(bs，1)，10.21(s，1)，7.74(d，2)，7.67 - 7.48(m，6) ，7.31(s，1)，7.20(dd，1)，6.91(d，1)，3.73(s，2)，3.56(s，2)，2.73(m，4 )． IR（KBr）1651，1618，1603，1541，1510 cm^-1．質量スペクトル: m/z 478(M⁺)．Ｂ）実施例４の標記生成物（０．４９ｇ、８．２ミリモル）を、トリフルオロ酔酸（５ｍＬ）に溶解し、室温で一晩攪拌した。揮発分を真空で除去し、残分を酢酸エチルに溶解し、１０％水性炭酸ナトリウムをこれに加えた。層を分離し、有機層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した。溶媒を真空で除去して標記生成物を得た。これは、方法Ａから得られた標記生成物と同一であった。実施例３６−アミノ−２−（２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルメチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン２−［２−（４−メトキシベンジル）−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール− ３−イルメチル］−６−ニトロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン（０．５ｇ、１．３ミリモル）を、メタノール（２５ｍＬ）中で、５０ｐｓｉ（約３４５ｋＰａ）で３時間、１０％Ｐｄ／Ｃ（０．２５ｇ）により水素化した。反応混合物を濾過し、溶媒を真空で蒸発させた。酢酸エチルおよび水を加え、ｐＨを固形炭酸ナトリウムで１０に調整した。層を分離し、水層を更なる酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を、食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、真空で油状物質へと蒸発させた；０．４ｇ、８７％収率。 ¹H NMR( CDCl₃)δ 7.86(s，1)，7.18(d，2)，6.79(m，3)，6.48(m，2)，5.42(s，2)，3.7 6(s，3)，3.73(s，2)，3.50(s，2)，2.80(m，2)，2.69(m，2)． IR（KBr）1613 ，1587，1513 cm^-1．質量スペクトル: m/z 348(M⁺ - 1)．実施例４４´−トリフルオロメチルビフェニル−２−カルボン酸［２−（２−（４−メトキシベンジル）−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルメチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−６−イル］−アミド実施例３の標記生成物（０．３８ｇ、１．１ミリモル）およびトリエチルアミン（０．１７ｍＬ、１．２ミリモル）を、塩化メチレン（１４ｍＬ）に溶解し、塩化メチレン（４０ｍＬ）中の塩化４´−トリフルオロメチルビフェニル−２− カルボニル（０．３１ｇ、１．１ミリモル）溶液を滴下する間、室温で攪拌した。４時間後、１０％炭酸ナトリウム水溶液を加え、混合物を３０分間攪拌した。塩化メチレン層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空で蒸発させて標記生成物を０．６３ｇ、９７％収率の硬い泡状物質として得た。 ¹H NMR(CD Cl₃)δ 7.79(s，1)，7.72(d，1)，7.64(d，2)，7.58 - 7.34(m，6)，7.12(d，2) ，7.01(s，1)，6.90 - 6.72(m，4)，5.38(s，2)，3.73(s，3)，3.69(s，2)，3.5 0(s，2)，2.79(t，2)，2.68(t，2)． IR（KBr）1668，1615，1599，1567，1536 ，1514 cm^-1．質量スペクトル: m/z 598(M⁺ + 1)．

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ (54)【発明の名称】４’―トリフルオロメチルビフェニル―２―カルボン酸［２―（２Ｈ―［１，２，４］トリアゾール―３―イルメチル）―１，２，３，４―テトラヒドロ―イソキノリン―６―イル］―アミドを調製する方法及びそのための中間体

Claims

【特許請求の範囲】１．下記一般式の化合物を調製する方法であって、下記一般式の化合物｛ここで、Ｒは、ＨまたはＲ²であり、Ｒ²は、アリルまたは、置換基が１個から３個の（Ｃ₆−Ｃ₁₀）アリール基を含む置換メチル基から成る群から選ばれる（ここで、アリール基は、ニトロおよび（Ｃ₁−Ｃ₆）アルコキシから選ばれる１つ以上の置換基で更に任意に置換される）｝をａ）下記一般式の化合物｛ここで、Ｊは、ハロゲン原子、アジド基、（Ｃ₁−Ｃ₆）アシルオキシ基または（Ｃ₆−Ｃ₁₀）アロイルオキシ基のような脱離基、好ましくは塩素または臭素原子である｝で処理し；そしてｂ）ＲがＲ²である場合、工程ａ）の生成物を、酸で更に処理することを含む、前記方法。２．当該酸が、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ｐ−トルエンスルホン酸（ＰＴＳＡ）、メタン−もしくはトリフルオロメタンスルホン酸および酢酸中のＨＢｒから成る群から選ばれる、請求項１に記載の方法。３．当核酸が、トリフルオロ酢酸である、請求項２に記載の方法。４．下記一般式の化合物をａ）水素化触媒の存在下、水素で処理して、ＲがＲ²である一般式ＩＩＩの化合物を形成するか；またはｂ）１）酸で処理し；そして２）水素化触媒の存在下、工程１）の生成物を水素で処理して、Ｒが水素である一般式ＩＩＩの化合物を形成することにより、Ｒが上記の通りに定義される一般式ＩＩＩの化合物を調製する、請求項１に記載の方法。５．塩基の存在下、下記一般式の化合物（ここで、Ｒは、Ｒ²である）を、下記一般式の化合物（ここで、Ｙは、上記で定義した通りである）で処理することにより、一般式ＩＶの化合物を調製する、請求項４に記載の方法。６．一般式Ｉの化合物を調製する方法であって、ａ）塩基の存在下、ＲがＲ²である一般式ＶＩの化合物を一般式Ｖの化合物（ここで、Ｙは、上記で定義した通りである）で処理することにより、ＲがＲ² である一般式ＩＶの化合物を調製し；ｂ）化合物ＩＶ（Ｒ＝Ｒ²）を１）ｉ）ＴＦＡで処理してＩＶ（Ｒ＝Ｈ）を形成し；ｉｉ）ＩＶ（Ｒ＝Ｈ）を、水素化触媒の存在下、水素で処理してＩＩＩ（Ｒ＝Ｈ）を形成し；そしてｉｉｉ）ＩＩＩ（Ｒ＝Ｈ）をＸで処理するか；または２）ｉ）水素化触媒の存在下、水素で処理してＩＩＩ（Ｒ＝Ｒ² ）を形成し；ｉｉ）ＩＩＩ（Ｒ＝Ｒ²）をＸで処理してＩＩ（Ｒ＝Ｒ²）を形成し；そしてｉｉｉ）ＩＩ（Ｒ＝Ｒ²）をＴＦＡで処理する工程を含む、前記方法。７．当該水素化触媒が、Ｐｄ／Ｃ、Ｐｄ（ＯＨ）₂、ラネーニッケルおよびＰｔＯ₂から選ばれる、請求項４に記載の方法。８．当該水素化触媒が、Ｐｄ／Ｃである、請求項７に記載の方法。９．下記一般式の化合物及びその互変異性体（ここで、Ｙは、ＮＨ₂またはＮＯ₂である）。１０．Ｙが、ＮＨ₂である、請求項９に記載の化合物及びその互変異性体。１１．Ｙが、ＮＯ₂である、請求項９に記載の化合物及びその互変異性体。１２．下記一般式の化合物（ここで、Ｒは、Ｒ²であり、Ｒ²は、上記で定義した通りである）。１３．Ｒ²が、ＣＨ₃ＯＣ₆Ｈ₄ＣＨ₂−である、請求項１２に記載の化合物。