JPH11514997A

JPH11514997A - 電離性あるいは非電離性電磁波に対する防御のための吸収可能な防護組成物

Info

Publication number: JPH11514997A
Application number: JP9514772A
Authority: JP
Inventors: ルグラン，シャルル; ブハミディ，ラシド
Original assignee: カンパニジェネラルデジェトテイック
Priority date: 1995-10-13
Filing date: 1996-10-10
Publication date: 1999-12-21
Also published as: DE69619846T2; EP0859623A1; US6242005B1; DE69619846D1; FR2740684A1; WO1997013521A1; RU2162703C2; ES2174111T3; FR2740684B1; AU7303796A; EP0859623B1

Abstract

(57)【要約】電離あるいは非電離性電磁波に対する防御を提供する吸収可能な防護組成物を調製するための、破砕ブドウの残砕片から得られる未精製抽出物の全部あるいは一部の使用が開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】電離性あるいは非電離性電磁波に対する防御のための吸収可能な防護組成物本発明は、電離性あるいは非電離性電磁波に対する防御を提供する吸収可能な防護組成物の調製のための、破砕ブドウの残砕片の使用に関する。フリーラジカル（遊離基）の生成、そして特に、酸化フリーラジカルの生成は、細胞レベルにおける通常の生理学的プロセスであり、人体には各種の防御システムが備わっているため、通常は有害な結果に至るものではない。これらの防御システムは、ＳＯＤ（スーパーオキシドジスムターゼ）などの、酸化フリーラジカルを捕捉する酵素システムや、カタラーゼなどの、二次毒性生成物（Ｈ₂Ｏ₂）を分解することのできる酵素システム、あるいは、ビタミンＥやグルタチオンなどの非酵素システムにより構成される。しかしながら、酸化フリーラジカルの生成量が防御システムの能力を越え、これらが生体細胞の他の分子と反応し、その結果として、膜完全性の激しい乱れや、多くの酵素システムの不活性化や、核酸の構造の大きな変化などを招くことがある。この酸化フリーラジカルの過剰生成は以下のいずれかの原因により生じる。 − 呼吸鎖のレベルにおけるエネルギー代謝や、炎症の場合に特に刺激されるマクロファージの活動など、酸化フリーラジカルのジェネレータとして知られる内因性メカニズムの活性化、あるいは： − 電磁波（電離放射あるいは非電離放射）や超過酸化(hyper oxygenation) などの外因性ファクターにより誘起される発生。酸化フリーラジカルの過剰な生成により誘起されるメカニズムの中で、科学者たちは一致して、最も重要なものはリポ過酸化であると考えている。これは、生体細胞の膜を構成するリン脂質中に存在するポリ不飽和脂肪酸のラジカル反応の作用のもとでの減成である。その結果、これらの分子種(molecular species)は、ラジカルの攻撃の特別なターゲットとなる。酸化フリーラジカルの作用のもとでは、ポリ不飽和脂肪酸の分子は、酸化しやすく、多数の減成生成物、中でも最も重要なものとしてアルデヒド類、特にマロンジアルデヒドを生成しやすいことを、経験的に断定することができた。この異化代謝の結果、ポリ不飽和脂肪酸の完全性と安定性の喪失を招き、これは細胞完全性における大きな変化として発現する。これらの現象は、リウマチ様多発性関節炎や、ある種の癌、ある種の神経退化性疾病（アルツハイマー病やパーキンソン病）、脳虚血や心虚血(cerebral and cariac ischemias)などの多岐にわたる病変、一般的に言えば、老化および細胞死に関与することが、一般的に認められている。上述した従来の防御システム（ＳＯＤ、カタラーゼ、ビタミンＥ、…）の他に、ここ数年、植物起源のある種のフラボノイド類がフリーラジカルの捕捉に優れていることが知られるようになった。そして、このグループにおいて最も興味深いものは、プロシアニドール（procyanidols）やプロアントシアニジンであることが確認できた。これらは、没食子酸やその誘導体のひとつがエステル化されているとともに酸媒質中での加水分解によりシアニドールを遊離することのできる糖質（glucidic）分子により構成される、加水分解可能なタンニン類である。高分子化の増進度に応じて、ポリシアニドールは、以下の用語により特徴づけられる。すなわち、モノマー（単量体）と、ダイマー（二量体）と、トリマー（三量体）と、テトラマー（四量体）と、オリゴマーと、凝縮物である。モノマーの中で最も一般的なものは、エピガロカテキンおよびエピガロカテキンガレート（没食子酸エピガロカテキン）である。実際に、これらの化合物は、本来備わっている効力が非常に高く、特に、ビタミンＥよりもはるかに活性的である。この一般的な知識から、日本国特開平４−１６４０３０号公報によれば、例えば放射線療法による治療を受けている患者や放射線照射装置の常勤オペレータに起こり得る放射能関連障害に対する保護のための防護組成物であって、経口的に吸収可能であり、その活性成分があらかじめ精製されたエピガロカテキンやエピガロカテキンガレートのモノマーである防護組成物が、すでに提案されている。この日本国公開公報は、この防護組成物が、緑茶の葉から得られた１／３の割合のエピガロカテキンとエピガロカテキンガレートの混合物により構成できることを示している。しかしながら、この組成物の調製には、長時間と多額の費用がかかる非常に不都合な抽出精製作業を必要とするという欠点がある。本発明によれば、電離性または非電離性放射に対する防御を提供する吸収可能な防護組成物を調製するために、あらかじめ単離すなわち個別に取り出した各成分に基づく組成物ではなく、破砕ブドウの残砕片の未精製抽出物、すなわち、多量に入手可能でありしたがって得ることの難しくない生成物を用いることにより、これらの欠点を解消するという概念が見い出された。本発明によれば、このような未精製抽出物は、種および／または茎および／または外皮を含んでいてもよい。また、ブドウ種子オイルの製造から生じる残留プレスケーキから得ることもできる。ワイン製造作業の過程においては、ブドウの房を押し潰して、すなわち、部分的に破砕して、約８０％の果汁と、主に種、茎、外皮により構成される２０％の固形物を含むブドウ液を遊離させる。次に、このブドウ液を発酵タンクに移し、その内部でマセレーションおよび発酵という異なる化学反応が生じ、ブドウのワインへの変成が可能となる。これらの反応の過程において、固形物中にもともと含まれていた成分の一部は果汁内に拡散する。次に、残留固形物を果汁から分離し圧搾して、「プレス」ワインとして知られるワインと、「搾り滓（マーク）」と呼ばれる残滓が得られる。この残滓は、蒸留してブランデーを製造することもでき、また、動物の飼料として用いることもできる。多少乾燥させたワイン製造搾り滓の別の用途としては、圧搾作業によるブドウ種子オイルの製造があり、この圧搾作業の過程で脂肪分がプレスケーキから分離される。ここで、静脈循環不調の治療のための医薬品の調製に、ワイン製造の副産物を、精製後、用いることはすでに提案されている。すなわち、エンドテロン^(R)である。上述した多様な可能性にもかかわらず、ワイン製造絞り滓とブドウ種子オイルの製造から生じるプレスケーキの大部分は、現在のところ、十分に利用されていない。しかしながら、さまざまな初期の研究によって、これらの残滓中に存在するブドウの種子は、特にプロシアニドールに富み、また、特に、大量のエピガロカテキンおよびエピガロカテキンガレートを含み、これらはモノマーの形だけではなく、ダイマー、トリマー、オリゴマーの形でも見られることを証明することができた。本発明によれば、これらのプロシアニドールは、カテキンなどの他の成分や、没食子酸やカフェー酸に加えて、やはり上述したワイン製造の副産物内に、少なくとも部分的に存在することが確認された。したがって、電離性あるいは非電離性電磁波に対する防御を提供する吸収可能な防護組成物を調製するために、破砕ブドウの残砕片の全てあるいは一部の未精製抽出物を用いることが提案された。このような未精製抽出物は、驚くべきことに、電磁波により誘起される脂質変化の防御において、単離したあるいは互いに結合したエピガロカテキンおよびエピガロカテキンガレートにくらべて、はるかに大きい効力をもつことがわかっている。上記を考慮して、本発明による使用は、ワイン製造用つる植物の副産物から価値をひきだすことを可能にするという利点がある。本発明は、さらに、電離性あるいは非電離性電磁波に対する防御を提供する吸収可能な防護組成物に関する。本発明によれば、この防護組成物は、カテキンと、エピカテキンと、没食子酸とを主に含み、上記カテキンおよびエピカテキンは没食子酸と結合させるかもしくは非ガロイレート（galloylated）形とすることができ、これらの化合物はモノマーの形もしくは異なる重合度を有する均一あるいは不均一オリゴマーの形であること、且つ、モノマー１０〜３０％と、ダイマー１０〜３０％と、トリマー１０〜３０％と、テトラマー３０〜６０％とを含むことを特徴とする。本発明の別の特徴によれば、上記組成物は微量のカフェー酸を含む。非限定的な例として、このような未精製抽出物は、 − ブドウの種子を基本とした材料を粉砕し、 − 得られた粉末にアセトンを用いて第１の抽出を行ない、 − 得られた抽出物をろ過により分離し、 − これに塩化ナトリウムを飽和点まで添加し、 − アセトンを蒸発させ、 − 抽出物を再び蒸留水を用いて処理し、 − 得られた溶液に酢酸エチルを用いて第２の抽出を行ない、 − 有機相を分離して取出しこれに凍結乾燥を行なって未精製抽出物を得るという、それ自体知られたプロセスにより、製造することができる。ここで、ドライアイスの存在下で基本材料の粉砕を行なうことが、より簡単にするため且つより高度な均一性を得るために、好ましい。さらに、この基本材料は、一般に、無極化合物に比較的富み、プロセスの最後に満足できる組成物を得るためにはこれを除くことが好ましい。この目的のため、第２の抽出を行なう前に、上記溶液に、ジエチルエーテルを用いて中間抽出を行なうことが望ましい。ボルドー産のブドウ種子の基本材料を、例えば、上記プロセスによって、第１の抽出に７０％アセトンを用いて処理した。凍結乾燥の後、得られた組成物は、カテキン３４％と、エピカテキン３６％と、没食子酸１１．６％と、カフェー酸０．００７％とを含んでいた。さらに、この組成物は、モノマー１９％と、ダイマー１８％と、トリマー２１％と、テトラマー４２％を含んでいることがわかった。その良好な腸内吸収および迅速な生体内拡散を考慮すると、上記未精製抽出物の毎日の「経口」投与は、防御のための内在能力を越える電磁波すなわち酸化ストレスの作用により誘起される酸化フリーラジカルの生成に抗することを可能とする定期的な栄養補給となる。使用のための勧めについて、摂取すべき抽出物の量は場合に応じて変わるが、一般に、成人男子に対しては毎日２０ｍｇ〜３ｇの投与量を用いることが望ましい。この範囲の下限は、例えば、弱い電磁波に定期的にさらされる人々に適用され、一方、上限は、短期間の強い照射を受ける人々に特に適している。さまざまな試験により、電離性電磁波（Ｘ線）および非電離性電磁波（ＵＶ− Ｃ）により誘起される変化に対する本発明による未精製抽出物の効力を証明することができた。この抽出物の効力を、まず、ＵＶ−Ｃ線（２００μＷ／ｃｍ²；２４時間）により酸化ストレスを誘起した後の純ポリ不飽和脂肪酸水溶液について研究した。媒質中の抽出物２ｍｇ／ｌから、これらの分子の全防御を達成することができた。つぎに、マウスの脳および肝臓の膜脂質に対してＵＶ−Ｃ線により誘起される攻撃に対する本抽出物の効果についての研究を行なった。濃度４ｍｇ／ｌから、本抽出物の完全な効力が再び証明された。第３のステップにおいて、培養基中のヒト繊維芽細胞に対するＵＶ−Ｃ放射とＸ線の作用、さらに、本発明による未精製抽出物により供与される防御についての研究を行なった。ＵＶ−Ｃ照射（２００μｍ／ｃｍ²；１時間）の後の細胞溶解の観察により、培養基中の細胞に対して本抽出物により与えられる防御は投与量に依存すること、また、それは抽出物濃度４０ｍｇ／ｌに対して５０％より大きいことがわかった。Ｘ線については、細胞生存度を考慮した。この指標は、細胞計数によってだけでなく、Ｘ線照射（２Ｇｙ／ｍｉｎのレートで３０グレイ）の後、再び培養基に入れた細胞の増殖力を観察することによっても評価した。これにより、媒質中の未精製抽出物２０ｍｇ／ｌから、死滅細胞数がかなり減少することが確認できた。さらに、本抽出物が存在しない状態で照射を受けた細胞において妨げられていた細胞増殖は、本抽出物の存在下で照射を受けた細胞においては大幅に回復されている。最後に、雄ラットにＸ線（３セッションで５Ｇｙ）を全身照射した後の造血系に対する本発明の抽出物の作用についての研究を行なった。前もって、一組のラットに抽出物６０ｍｇ／日を強制給餌しておいた。最後の照射の６日後に、これらの動物に麻酔をかけ、血液を頸動脈から採取した。各試料について血液分析を行なった。照射前には、本発明による試料を摂取済みの動物には、何の毒性作用も見られなかった。この実験の結果は、予備処置なしに照射を受けたラットにおいてすべての血液成分とパラメータ（赤血球、血小板、ヘマトクリット、ヘモグロビン、ポリ好中球、リンパ球、単球）が減少したこと、本発明による未精製抽出物を予め強制給餌した動物においては顕著な改善があったことを示している。例示として、対照動物と、被照射動物と、本発明による抽出物で予め処置した被照射動物に対して血小板計数を行なった。すると、以下の結果が得られた。 − 対照動物３２７．５±１０３．５Ｇ／ｌ − 被照射動物１５２．６６± ４９．９３Ｇ／ｌ − 処置後に照射を受けた動物２７７．６６± ７８．５４Ｇ／ｌこれらの結果は、明白に、本発明による抽出物の生体内効力を示している。日本国特開平４−１６４０３０号公報による単離されたエピガロカテキンおよびエピガロカテキンガレートと比較して、本発明による未精製抽出物の優位性を強調するために、エピガロカテキン（ＥＧＣ）と、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）と、本発明の未精製抽出物（Ｉ）のそれぞれの存在下で、ＵＶ−Ｃ（２００μＷ／ｃｍ²）を用いてヒヒ肝臓のミクロゾームの試料を１５時間照射した。常に同量すなわち１．４５ｍｇ／ｌのエピカテキンを有するように添加を行なった。つぎに、残留ポリ不飽和脂肪酸（ＡＧＰＩ）（２０：４ｎ−６および２２：６ｎ−３）を定量化し、さらにこれらの減成の生成物であるマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）を定量化した。この試験により次の結果が得られた。これらの結果は、ミクロゾームを照射すると、ポリ不飽和脂肪酸の減成と、マロンジアルデヒド生成の増加を招くことを示している。本発明の抽出物は、ミクロゾームに、これらの変化に対するかなりの防御を提供するものと考えられる。単離されたエピガロカテキンおよびエピガロカテキンガレートではそうではない。次いで、同じ試験を、本発明によるブドウの種子の未精製抽出物と、エピガロカテキン１／４およびエピガロカテキンガレート３／４の混合物のそれぞれの存在下で、より低い蛋白濃度のヒヒ肝臓のミクロゾームの試料を照射しながら繰り返した。やはり、すべての場合に１．４５ｍｇ／ｌのエピカテキンを有するように添加を行なった。上記試験と同様にして分析を行い、以下の結果を得たこの試験により、本発明の抽出物は、ＵＶ−Ｃ線により誘起される変化に対するミクロゾームの防御を可能にし、一方、エピガロカテキン／エピガロカテキンガレート混合物は、用いた投与量においては全く効果がないことを再び証明することができた。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年１２月８日【補正内容】請求の範囲１．電離性あるいは非電離性電磁波に対する防御作用を有する吸収可能な防護組成物の調製のための、破砕ブドウの残砕片の未精製抽出物の使用。２．破砕ブドウの残砕片から得られる未精製抽出物であって、カテキンと、エピカテキンと、没食子酸とをおもに含み、上記カテキンおよびエピカテキンは没食子酸と結合させるかもしくは非ガロイレート形とすることができ、これらの化合物は、モノマーの形もしくは異なる重合度を有する均一あるいは不均一オリゴマーの形であるような未精製抽出物の全部あるいは部分により構成されること、且つ、モノマー１０〜３０％と、ダイマー１０〜３０％と、トリマー１０〜３０％と、テトラマー３０〜６０％とを含むことを特徴とする、電離性あるいは非電離性電磁波に対する防御効果を有する吸収可能な防護組成物。３．微量のカフェー酸を含むことを特徴とする請求項２の組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．電離性あるいは非電離性電磁波に対する防御のための吸収可能な防護組成物を得るための、破砕ブドウの残砕片の未精製抽出物の使用。２．上記未精製抽出物は、カテキンと、エピカテキンと、没食子酸とを主に含み、上記カテキンおよびエピカテキンは没食子酸と結合させるかもしくは非ガロイレート形とすることができ、これらの化合物は、モノマーの形もしくは異なる重合度を有する均一あるいは不均一オリゴマーの形であり、且つ、上記未精製組成物は、モノマー１０〜３０％と、ダイマー１０〜３０％と、トリマー１０〜３０％と、テトラマー３０〜６０％とを含むことを特徴とする請求項１の使用。３．上記未精製抽出物は微量のカフェー酸を含むことを特徴とする請求項２の使用。