JPH1192390A

JPH1192390A - ストレス状態改善剤

Info

Publication number: JPH1192390A
Application number: JP9270571A
Authority: JP
Inventors: Yasuo Samegai; 靖雄鮫ケ井; Tetsuya Sakano; 哲也阪野
Original assignee: National Federation of Agricultural Cooperative Associations
Current assignee: National Federation of Agricultural Cooperative Associations
Priority date: 1997-09-17
Filing date: 1997-09-17
Publication date: 1999-04-06

Abstract

(57)【要約】【課題】優れたストレス状態改善効果を有し、かつ安
価に供給することができる、ストレス状態改善剤を提供
すること。【解決手段】夾膜を除去した菌体を有効成分とするス
トレス状態改善剤を提供した。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、家畜及び家禽のス
トレス状態を改善するためのストレス状態改善剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】現在、畜産における家畜及び家禽のスト
レスは様々で、子豚の群編成によるストレス、子牛の輸
送ストレス、暑熱ストレス、密飼いストレス、強制換羽
によるストレス、出産・産卵、採血等のストレスがあ
る。これらのストレス負荷によって、免疫機能の低下や
疾病に罹患しやすくなること、生産性が落ちることが知
られている。そこでストレスを改善する方法が望まれて
いる。その方法として飼養環境や飼養管理、飼料原料の
改善等の工夫が行われている。これら改善策の学問的裏
付けが望まれるが、飼養管理方法を変化させることによ
るストレス刺激を実験の系に持ち込むには客観化が困難
であり、試験の実施は容易ではない。

【０００３】一方、このような実験的制約のある中で、
マウスやラットを用いて環境温度によるストレスや長期
にわたる社会的心理ストレス（群内における強者・弱者
等の社会的順位に基づく心理的抑制によるストレス）に
関する報告がある。環境温度による影響については、白
血球百分率の変化、胸腺・脾臓重量比の減少、リンパ球
幼若化反応の低下、ＮＫ活性の低下、Ｔリンパ球割合の
低下が報告されている。社会的心理ストレスによる影響
については、通常の状態のマウスに比べて強者の方が抗
体産生が低く弱者の方が高いという報告もあるが、多く
の論文は、ストレス状態では抗体産生低下、リンパ球幼
弱化反応の低下、ＮＫ活性の低下、ＩＬ−２産生低下を
報告している。

【０００４】従来、家畜及び家禽のストレス状態の改善
剤として、Ｌ−トリプトファン（Ｌ−トリプトファン文
献集、第２号(1987)、昭和電工）、ビタミンＢ₂ （Seii
chiARAKI et al., J. Vet. Med. Sci. 57(4):599-602,
1995 ）、トランキライザーや抗生物質（鶏病研究会
報、第７巻１９７１年）等が知られている。しかしな
がら、これらのストレス状態改善剤の効果は必ずしも満
足できるものではなく、また、比較的高価である。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、優れたストレス状態改善効果を有し、かつ安価に供
給することができる、ストレス状態改善剤を提供するこ
とである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本願発明者らは、鋭意研
究の結果、夾膜を除去した菌体がストレス状態の改善に
有効であることを見出し、本発明を完成した。

【０００７】すなわち、本発明は、夾膜を除去した菌体
を有効成分とするストレス状態改善剤を提供する。

【０００８】

【発明の実施の形態】上述のように、本発明のストレス
状態改善剤は、菌体から夾膜を除去したものを有効成分
とするものである。菌体としては、いずれの細菌及び酵
母であってもよいが、ビフィドバクテリウム・サーモフ
ィラム（Bifidobacterium thermophilum) のようなビフ
ィドバクテリウム属細菌、バチルス・サブチリス（Baci
llus subtilis)のようなバチルス属細菌、コリネバクテ
リウム・オビス（Corynebacterium ovis) のようなコリ
ネバクテリウム属細菌、アクチノマイセス・ピオゲネス
（Actinomyces pyogenes) のようなアクチノマイセス属
細菌、ラクトバチルス・アシドフィラス（Lactobacillu
s acidophilus)のようなラクトバチルス属細菌、ストレ
プトコッカス・フィカァレス（Streptococcus faecali
s) のようなストレプトコッカス属細菌及びスタフィロ
コッカス・コーニイ（Staphylococcus cohnii)のような
スタフィロコッカス属に属する細菌並びにクルイベロミ
セス・ラクティス（Kluyveromyces lactis) 、サッカロ
ミセス・セレビシア（Saccharomycescerevisiae) のよ
うな酵母が好ましく、特に好ましくはビフィドバクテリ
ウム属細菌である。

【０００９】菌体は死菌であってもよいし、病原性がな
い場合には生菌であってもよい。

【００１０】本発明のストレス状態改善剤は、菌体を界
面活性剤で処理することにより製造することができ、他
の酵素処理等を要しない。界面活性剤による処理は、菌
体を界面活性剤溶液に懸濁することによっても行うこと
ができるし、菌体を予め水又は緩衝液に懸濁し、これに
界面活性剤を加えることによっても行うことができる。

【００１１】界面活性剤としては、いずれの種類の界面
活性剤をも用いることができるが、後の工程で比較的容
易に除去できる非イオン性界面活性剤が好ましい。この
ような非イオン性界面活性剤は市販のものを用いること
ができ、例えばトゥイーン（Tween)20（商品名）及びト
リトン（Triton)X-100（商品名）を挙げることができ
る。

【００１２】菌体を界面活性剤溶液で処理する場合に
は、使用する界面活性剤の濃度は0.05% ないし５％(v/
v) が好ましく、さらに好ましくは0.1%ないし1.5%(v/v)
である。また、使用する界面活性剤溶液の量は湿菌体
重量（3000〜8000 rpm、１０〜６０分間遠心沈殿菌体）
５０〜１００ｇに対し、１〜１０倍量（乾燥菌体ならば
１０〜１００倍量）が好ましい。なお、予め水又は緩衝
液に懸濁する場合には、懸濁後上記の割合で界面活性剤
を添加することができる。

【００１３】界面活性剤処理は室温下で行うこともでき
るし、３０℃ないし６０℃の加温下で行うこともでき
る。処理時間は１時間ないし２４時間が好ましい。処理
中は懸濁液を撹拌することが好ましい。

【００１４】処理後、菌体に付着している界面活性剤を
除去するために、水又は緩衝液で遠心洗浄又は限外濾過
による洗浄を行うことが望ましい。

【００１５】なお、細菌は独自の自己融解酵素を有して
おり、菌体の細胞壁を溶解することが知られている（船
津勝、鶴大典著、「溶菌酵素」１４頁、講談社、１９７
７年）。このため、界面活性剤処理を行う前に、自己融
解酵素を不活性化し、菌体の細胞壁を保護しておくこと
が好ましい。これは、菌体を熱処理することにより行う
ことができる。熱処理の条件は、自己融解酵素を完全に
不活性化し、その上菌体のタンパク質の加熱変性を防止
するために５６℃ないし７５℃で１５分間ないし６０分
間、あるいは沸騰水中で１０分間前後等の短時間処理が
望ましい。

【００１６】界面活性剤処理により夾膜を除去した菌体
は、そのまま用いることもできるし、さらに凍結乾燥し
て用いることもできる。

【００１７】本発明のストレス状態改善剤は、ストレス
状態にある、又はストレス状態になると予想される環境
下で飼育される、ブタ、ウシ、ウマ、ヤギ、イヌ、ネコ
及び齧歯動物等の家畜、鶏等の家禽並びに淡水魚である
コイ、ニジマス、アユ、ウナギ、テラピア、アナゴ、サ
ケ及びマス並びに海水魚であるタイ、ブリ、ヒラメ、ト
ラフグ及びエビ等のような養殖魚介類に対して投与する
ことができる。ストレスには、子豚の群編成によるスト
レス、子牛の輸送ストレス、暑熱ストレス、密飼いスト
レス、強制換羽によるストレス、出産・産卵、採血等の
ストレス等が包含されるがこれらに限定されるものでは
ない。

【００１８】本発明のストレス状態改善剤は、そのまま
家畜等の飼料に添加してもよいし、水に懸濁したものを
家畜等に経口投与し、又は他の賦形剤と混合し、乾燥し
たものを飼料に混合して投与してもよい。

【００１９】家畜等に対する投与量は、ストレス状態の
程度や家畜の週齢、種類等に応じて適宜選択されるが、
通常、体重１ｋｇ、１日あたり１０μｇないし１ｍｇ程
度である。

【００２０】

【実施例】以下、本発明を実施例に基づいてさらに具体
的に説明する。もっとも、本発明は、下記実施例に限定
されるものではない。

【００２１】実施例１ストレス状態改善剤の製造ビフィドバクテリウム・サーモフィラム（Bifidobacter
ium thermophilum PNA1-24 、理化学研究所より分与）
を常法によって培養し、得られた湿菌体１００ｇにつき
０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１リットルに懸
濁し、７５℃で３０分間加熱し、菌自体が保有する自己
融解酵素を失活させた。その後、０．５％（ｖ／ｖ）の
割に界面活性剤（Tween 20) を添加し、室温で１２時間
ないし１５時間撹拌した後、８０００ｒｐｍ、２０分間
遠心し、界面活性剤処理菌体を回収し、さらに遠心洗浄
を３回行って菌体を得た。この菌体を凍結乾燥して得ら
れた本発明のストレス状態改善剤を以下の実施例におい
て飼料原料とした。

【００２２】実施例２デキサメタゾン（以下、「Ｄｅ
ｘ」ということがある）による免疫抑制状況下における
本発明のストレス状態改善剤のストレス状態の改善効果ストレス状況下では副腎皮質ホルモンの分泌が亢進し、
免疫系が抑制されることが知られている。一般に、外来
性に高用量の副腎皮質ホルモン製剤を投与することによ
り免疫抑制状態を作出でき、この実験系を用いて多くの
免疫抑制試験が行われている（江田昭英編集：毒性試
験講座(10)免疫毒性、７０〜９４、地人書舘、１９９
１）。本実施例では、Ｄｅｘにより作出した免疫抑制状
態にある動物に対して実施例１で製造した本発明のスト
レス状態改善剤（以下、「ＰＧ」ということがある）を
給与し、免疫抑制状態の改善効果を検討した。

【００２３】免疫抑制条件は、ＢＡＬＢ／ｃ系マウス、
７週齢時にＤｅｘ２００μｇ／０．４ｍｌ皮下注射す
ることにより作出し、その１８時間後に免疫活性を測定
した。

【００２４】ＰＧ区（１群５匹）は、ＰＧ２０ｐｐｍ添
加飼料を、対照区（１群５匹）は非添加飼料を３週間給
与後、上記条件で免疫抑制処理したところ、Ｄｅｘ注射
により脾臓重量比が減少し（図１）、末梢リンパ球減少
／顆粒球増加（図２）し、ストレス状態が確認された。
さらに、リンパ球幼若化反応（図３、SASAKI T. ら、En
hanced Resistance of Mice to Escherichia coli Infe
ction Induced by Administration of Peptideglycan d
erived from Bifidobacterium thermophilum,J. Vet. M
ed. Sci. 56(3) 433-437, 1994 に記載の方法により測
定）、腹腔マクロファージの貪食活性（図４、SASAKI
T. ら、Phagocytosis of Splenetic Neutrophils of Mi
ce Enhanced by Orally Administered Peptideglycan f
rom Bifidobacterium thermophilum, J. Vet. Med. Sc
i. 58(1) 85-86, 1996に記載の方法により測定）、及び
脾臓好中球の貪食活性（図５、SASAKI T. ら、Phagocyt
osisof Splenetic Neutrophils of Mice Enhanced by O
rally Administered Peptideglycan from Bifidobacter
ium thermophilum, J. Vet. Med. Sci. 58(1) 85-86, 1
996に記載の方法により測定）はＤｅｘ注射により抑制
されたが、その程度はＰＧ添加飼料の給与により軽減さ
れた。また、ＮＫ活性もＤｅｘ注射により抑制された
が、ＰＧ添加飼料の給与により軽減された（図６、SASA
KI T. ら、Enhancement of Cytotoxic Activity of Lym
phocytes in Mice by Oral Administration of Peptide
glycan (PG) Derived from Bifidobacterium thermophi
lum, J. Vet. Med. Sci. 56(6) 1129-1133, 1994) に記
載の方法により測定）。以上のように、ＰＧ添加飼料を
長期給与している場合はＤｅｘによる免疫抑制状態は軽
減された。

【００２５】実施例３密飼い状況下におけるＰＧの改
善効果畜産生産現場では多頭羽飼育が行われており、しばしば
動物が密飼いとなっている。そのような状況下で密飼い
によるストレス負荷が動物にかかっている。そこでスト
レスの実験モデルとして、BALB/c系マウス、４週齢、雄
の密飼いによるストレス状況を設定し、ＰＧのストレス
改善効果を検討した。床面積約４３２ｃｍ² のケージを
用い、密飼い区（２０匹／ケージ）、通常密度飼育区
（５匹／ケージ）とした。

【００２６】密飼い３週間後にＰＧ５００μｇを１回強
制経口投与した。その結果、ＰＧ投与により通常密度飼
育及び密飼い区で脾臓重量比の有意な増加が認められた
（図７）。末梢血球百分比は密飼いでリンパ球が減少し
顆粒球が増加する傾向が見られたが、ＰＧによる明らか
な改善効果は見られなかった（図８）。リンパ球幼若化
反応（図９）、腹腔マクロファージの貪食活性（図１
０）は密飼いにより抑制されたが、ＰＧの１回経口投与
により改善され、ＰＧ投与密飼い群がＰＧ非投与通常密
度群よりも有意に高かった。脾臓好中球の貪食活性（図
１１）も密飼いにより抑制されたが、ＰＧ投与により改
善された。ＮＫ活性は密飼いにより低下する傾向にあっ
たが明らかな差は見られなかった（図１２）。

【００２７】以上のことから、密飼いにより免疫活性は
低下するが、ＰＧの１回経口投与により通常密度飼育と
同等かそれ以上に免疫活性が高まり、密飼いストレスが
軽減されていることが確認された。

【００２８】実施例４密飼いにおけるＰＧの長期間飼
料添加効果次に、実施例３の方法において、密飼いの期間中、ずっ
とＰＧ２０ｐｐｍ添加飼料を給与した試験を実施した。
その結果、密飼いによる脾臓重量比への影響はなかった
（図１３）。末梢血球百分比は密飼いでリンパ球が減少
し顆粒球が増加する傾向が見られた（図１４）。リンパ
球幼弱化反応は密飼いにより低下する傾向が見られた
が、ＰＧ投与により高まり、ＰＧ投与密飼い群でもＰＧ
非投与通常密度群と同等かそれ以上の成績であった（図
１５）。腹腔マクロファージの貪食活性（図１６）及び
脾臓好中球の貪食活性（図１７）は、密飼いにより低下
するが、ＰＧ投与により改善され、ＰＧ投与密飼い群で
もＰＧ非投与通常密度群よりも有意に高い値であった。
また、ＮＫ活性はＰＧ添加飼料の給与により高まった
（図１８）。

【００２９】以上のことから、密飼いにより免疫活性は
低下するが、ＰＧ添加飼料の給与により通常密度飼育と
同等かそれ以上に高まり、密飼いストレスが軽減されて
いることが確認された。

【００３０】

【発明の効果】本発明のストレス状態改善剤は、家畜、
家禽等のストレス状態を改善し、免疫活性の低下を防止
する上で優れた効果を発揮する。また、本発明のストレ
ス状態改善剤は、菌を培養し、界面活性剤で処理するだ
けで製造できるので、従来のストレス改善防止剤よりも
安価に製造することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の一実施例であるストレス状態改善剤を
添加した飼料を３週間給与後、デキサメタゾンを皮下注
射して免疫抑制状態とした場合の脾臓重量比を対照と比
較して示す図である。

【図２】本発明の一実施例であるストレス状態改善剤を
添加した飼料を３週間給与後、デキサメタゾンを皮下注
射して免疫抑制状態とした場合の末梢血球百分比を対照
と比較して示す図である。

【図３】本発明の一実施例であるストレス状態改善剤を
添加した飼料をマウスに３週間給与後、デキサメタゾン
を皮下注射して免疫抑制状態とした場合のリンパ球幼若
化反応を対照と比較して示す図である。

【図４】本発明の一実施例であるストレス状態改善剤を
添加した飼料をマウスに３週間給与後、デキサメタゾン
を皮下注射して免疫抑制状態とした場合の腹腔マクロフ
ァージの貪食活性を対照と比較して示す図である。

【図５】本発明の一実施例であるストレス状態改善剤を
添加した飼料をマウスに３週間給与後、デキサメタゾン
を皮下注射して免疫抑制状態とした場合の脾臓好中球の
貪食活性を対照と比較して示す図である。

【図６】本発明の一実施例であるストレス状態改善剤を
添加した飼料をマウスに３週間給与後、デキサメタゾン
を皮下注射して免疫抑制状態とした場合のＮＫ活性を対
照と比較して示す図である。

【図７】３週間密飼いしたマウスに対し、本発明の一実
施例であるストレス状態改善剤を１回強制経口投与した
場合の脾臓重量比を対照と比較して示す図である。

【図８】３週間密飼いしたマウスに対し、本発明の一実
施例であるストレス状態改善剤を１回強制経口投与した
場合の末梢血球百分比を対照と比較して示す図である。

【図９】３週間密飼いしたマウスに対し、本発明の一実
施例であるストレス状態改善剤を１回強制経口投与した
場合のリンパ球幼若化反応を対照と比較して示す図であ
る。

【図１０】３週間密飼いしたマウスに対し、本発明の一
実施例であるストレス状態改善剤を１回強制経口投与し
た場合の腹腔マクロファージの貪食活性を対照と比較し
て示す図である。

【図１１】３週間密飼いしたマウスに対し、本発明の一
実施例であるストレス状態改善剤を１回強制経口投与し
た場合の脾臓好中球の貪食活性を対照と比較して示す図
である。

【図１２】３週間密飼いしたマウスに対し、本発明の一
実施例であるストレス状態改善剤を１回強制経口投与し
た場合のＮＫ活性を対照と比較して示す図である。

【図１３】３週間密飼いしたマウスに対し、本発明の一
実施例であるストレス状態改善剤を密飼いの期間中ずっ
と給与した場合の脾臓重量比を対照と比較して示す図で
ある。

【図１４】３週間密飼いしたマウスに対し、本発明の一
実施例であるストレス状態改善剤を密飼いの期間中ずっ
と給与した場合の末梢血球百分比を対照と比較して示す
図である。

【図１５】３週間密飼いしたマウスに対し、本発明の一
実施例であるストレス状態改善剤を密飼いの期間中ずっ
と給与した場合のリンパ球幼若化反応を対照と比較して
示す図である。

【図１６】３週間密飼いしたマウスに対し、本発明の一
実施例であるストレス状態改善剤を密飼いの期間中ずっ
と給与した場合の腹腔マクロファージの貪食活性を対照
と比較して示す図である。

【図１７】３週間密飼いしたマウスに対し、本発明の一
実施例であるストレス状態改善剤を密飼いの期間中ずっ
と給与した場合の脾臓好中球の貪食活性の貪食活性を対
照と比較して示す図である。

【図１８】３週間密飼いしたマウスに対し、本発明の一
実施例であるストレス状態改善剤を密飼いの期間中ずっ
と給与した場合の脾臓好中球のＮＫ活性の貪食活性を対
照と比較して示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】夾膜を除去した菌体を有効成分とするス
トレス状態改善剤。
【請求項２】前記菌体は、ビフィドバクテリウム属細
菌の菌体である請求項１記載のストレス状態改善剤。