JPS5857703B2 - 電気泳動分析における分取方法 - Google Patents
電気泳動分析における分取方法Info
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- JPS5857703B2 JPS5857703B2 JP57205065A JP20506582A JPS5857703B2 JP S5857703 B2 JPS5857703 B2 JP S5857703B2 JP 57205065 A JP57205065 A JP 57205065A JP 20506582 A JP20506582 A JP 20506582A JP S5857703 B2 JPS5857703 B2 JP S5857703B2
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- tube
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
- G01N27/44717—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones
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Description
【発明の詳細な説明】
この発明は電気泳動分析における分取方法に関する。
更に詳しくは、この発明は泳動管の所定位置に配置した
検出器で、電気泳動法により泳動管内を分離しながら泳
動する単一成分イオンのゾーンを検出し、この検出信号
に基づいて前記泳動管の両端に付設したリーディングお
よびターミナル電解液槽に一定′電流を供給する高圧電
源回路を開放して泳動を停止するとともに、停止後所定
時間内に当該検出ゾーンの前記泳動管における停止位置
に対応して設けた分取機構を作動させて目的成分物質の
一定量を分取することを特徴とする電気泳動分析におけ
る分取方法に関する。
検出器で、電気泳動法により泳動管内を分離しながら泳
動する単一成分イオンのゾーンを検出し、この検出信号
に基づいて前記泳動管の両端に付設したリーディングお
よびターミナル電解液槽に一定′電流を供給する高圧電
源回路を開放して泳動を停止するとともに、停止後所定
時間内に当該検出ゾーンの前記泳動管における停止位置
に対応して設けた分取機構を作動させて目的成分物質の
一定量を分取することを特徴とする電気泳動分析におけ
る分取方法に関する。
細管式電気泳動法は、泳動細管路（キャピラリチューブ
）内にターミナル電解液とリーディング電解液とを充填
し、その境界面に荷電状態になる物質（アミノ酸類、ペ
プチド類、生体物質など）の試料を入れ、定電流による
電気泳動を行い被検出物を分離（又は分画）し、定性及
び／又は定量するものである。
）内にターミナル電解液とリーディング電解液とを充填
し、その境界面に荷電状態になる物質（アミノ酸類、ペ
プチド類、生体物質など）の試料を入れ、定電流による
電気泳動を行い被検出物を分離（又は分画）し、定性及
び／又は定量するものである。
ところで、定性は標準品との比較において決まるもので
あるから、標準品がない場合には定性ができない。
あるから、標準品がない場合には定性ができない。
このような場合は通常被検出物が分離されたゾーン（目
的ゾーン）を分取し、改めて別途に定性（又はそれと定
量）を行っていた。
的ゾーン）を分取し、改めて別途に定性（又はそれと定
量）を行っていた。
このような分取を具体的に行う機構としては、例えば、
泳動細管にセプタムを設け、そのセプタムを通じてマイ
クロシリンジによって分取するものが挙げられる。
泳動細管にセプタムを設け、そのセプタムを通じてマイ
クロシリンジによって分取するものが挙げられる。
一方上述の分取は、泳動電流を流した状態にて行われる
よう提案され、また実行されてきた。
よう提案され、また実行されてきた。
これは電流を切った後では拡散などによって分離ゾーン
の混合が生じるおそれがあると考えられていたからであ
る。
の混合が生じるおそれがあると考えられていたからであ
る。
また、この種の電気泳動装置には、きわめて高い電圧（
例えば１０に■）が供給されているので、危険防止、装
置保護などのため分取時の絶縁対策が大規模になされる
必要があった。
例えば１０に■）が供給されているので、危険防止、装
置保護などのため分取時の絶縁対策が大規模になされる
必要があった。
この発明者らは、これらの事情に鑑み鋭意研究を重ねる
うちに、細管式電気泳動分析においては、泳動電流を切
ってから、ある時間内に分取すれは、拡散の影響をそれ
ほど受けないことを見出し、この新しい知見にもとずい
て、ここに、拡散を防止でき、しかも分取機構の絶縁対
策を省略できると共に安全で且つ操作性がよい電気泳動
分析における新して分取方法を匪案するに至ったもので
ある。
うちに、細管式電気泳動分析においては、泳動電流を切
ってから、ある時間内に分取すれは、拡散の影響をそれ
ほど受けないことを見出し、この新しい知見にもとずい
て、ここに、拡散を防止でき、しかも分取機構の絶縁対
策を省略できると共に安全で且つ操作性がよい電気泳動
分析における新して分取方法を匪案するに至ったもので
ある。
すなイつち、この発明に係る電気泳動分析における分取
方法の主要な特徴の一つは、分取を、高電圧をかけない
で、つまり泳動を停止して行うことであり、もう一つの
特徴は泳動管の途中を屈曲させ、その屈曲に対応して特
定位置に検出器とセプタムを設置し、且つそのセプタム
に対応して本体ケースに分取器通過類を設けることにあ
り、更にもう一つの特徴は、その分取器通過類の開放に
よって高圧電源の開閉器を切ることにある。
方法の主要な特徴の一つは、分取を、高電圧をかけない
で、つまり泳動を停止して行うことであり、もう一つの
特徴は泳動管の途中を屈曲させ、その屈曲に対応して特
定位置に検出器とセプタムを設置し、且つそのセプタム
に対応して本体ケースに分取器通過類を設けることにあ
り、更にもう一つの特徴は、その分取器通過類の開放に
よって高圧電源の開閉器を切ることにある。
本願発明は、これらの特徴によって、分取器による分取
操作が、高圧電源を切らずして行いえないようにして安
全性を具体的に保障すると共に、自動化しやすい直線上
の往復移動で行なえるようにする。
操作が、高圧電源を切らずして行いえないようにして安
全性を具体的に保障すると共に、自動化しやすい直線上
の往復移動で行なえるようにする。
以下図に示す分析装置例に基いてこの発明の分取方法を
詳述する。
詳述する。
なお、これによってこの発明が限定されるものではない
。
。
まず第１図において、細管式等速電気泳動分析装置１は
、ターミナル液電極槽２と、試料注入口３及び分取用セ
ル４を設置したキャピラリチューブ５と、リーディング
液電極槽６と、これらの電極槽２，６の両電極の定電流
高圧電源回路７と、本体ケース８とから主として構成さ
れている。
、ターミナル液電極槽２と、試料注入口３及び分取用セ
ル４を設置したキャピラリチューブ５と、リーディング
液電極槽６と、これらの電極槽２，６の両電極の定電流
高圧電源回路７と、本体ケース８とから主として構成さ
れている。
前記分取用セル４は、第２図において、キャピラリチュ
ーブ５の途中に介設されて泳動流路に屈曲部９を形成し
、その屈曲部の前段には検出器１０と、その屈曲部には
セプタム１１とニードルガイド１２とをそれぞれ備えて
いる。
ーブ５の途中に介設されて泳動流路に屈曲部９を形成し
、その屈曲部の前段には検出器１０と、その屈曲部には
セプタム１１とニードルガイド１２とをそれぞれ備えて
いる。
つまり前記屈曲部９は、泳動流路をほぼ直角に曲げるよ
う構成され、前記セプタム１１とニードルガイド１２と
はその前段流路と同軸に配設されている。
う構成され、前記セプタム１１とニードルガイド１２と
はその前段流路と同軸に配設されている。
前記検出器１０は、所定間隔に配設された二つの電位勾
配電極１３，１４より主として構成され、これらによっ
て各分離物質の検出と共にその移動速度を測定すること
ができる。
配電極１３，１４より主として構成され、これらによっ
て各分離物質の検出と共にその移動速度を測定すること
ができる。
前記高圧電源回路７は、直流高圧電源１５と開閉器１６
と継電器１７とを備え、開閉器１６の開閉作動によって
継電器１７を通じその直流高圧電源１５を開・閉作動で
きる。
と継電器１７とを備え、開閉器１６の開閉作動によって
継電器１７を通じその直流高圧電源１５を開・閉作動で
きる。
なお、１８は直流高圧電源１５の操作開閉器である。
前記本体ケース８は、マイクロシリンジＭの通過側扉１
９を備え、この通過側扉は、その開放動作によって前記
開閉器１６を開作動させるよう軸２０に開閉自在に枢支
されている。
９を備え、この通過側扉は、その開放動作によって前記
開閉器１６を開作動させるよう軸２０に開閉自在に枢支
されている。
次に以上のような構成からなる支持体を用いない細管式
等速電気激動分析装置１の動作を説明し、それによって
分取方法を具体的に説明する。
等速電気激動分析装置１の動作を説明し、それによって
分取方法を具体的に説明する。
まず、キャピラリチューブ５の試料注入口３に試料より
易動度の大きい陰イオンを含む電解液（リーディング電
解液）と易動度の小さい陰イオンを含む電解液（ターミ
ナル電解液）の境界向を作り、その境界向に試料を注入
し定電流高圧電源１５より一定電流を供給して等速電気
泳動を行う。
易動度の大きい陰イオンを含む電解液（リーディング電
解液）と易動度の小さい陰イオンを含む電解液（ターミ
ナル電解液）の境界向を作り、その境界向に試料を注入
し定電流高圧電源１５より一定電流を供給して等速電気
泳動を行う。
かくして試料イオン（陰イオン）は易動度の大きさの順
に泳動細管内部で中−成分イオンのゾーン（バンド）に
分離（分画）され、互いに明確な境界面を保持しながら
、各ゾーンがイオン量で決まる一定の幅をもって等速度
で矢印Ａ方向に移動を始める。
に泳動細管内部で中−成分イオンのゾーン（バンド）に
分離（分画）され、互いに明確な境界面を保持しながら
、各ゾーンがイオン量で決まる一定の幅をもって等速度
で矢印Ａ方向に移動を始める。
この場合各ゾーンには易動度に応じてそれぞれ違った固
有の電位勾配が形成されるのでこの電位勾配を検出器１
０によって検出し分離された単一成分イオンを知ること
ができる。
有の電位勾配が形成されるのでこの電位勾配を検出器１
０によって検出し分離された単一成分イオンを知ること
ができる。
すなわち、その電位勾配値から分取すべき目的物質イオ
ンを検知することができる。
ンを検知することができる。
このように分取すべき目的物質ゾーンの前端境界面が検
知されると、その検知信号が適宜手段によって表示され
、その表示に基いて本体ケース８の通過側扉１９を開放
し、その開放口を通じて矢印Ｂ方向に分取用マイクロシ
リンジＭを移動させ、その針ｍをニードルガイド１２及
びセプタム１１を通じてキャピラリチューブ５内に挿通
ずる。
知されると、その検知信号が適宜手段によって表示され
、その表示に基いて本体ケース８の通過側扉１９を開放
し、その開放口を通じて矢印Ｂ方向に分取用マイクロシ
リンジＭを移動させ、その針ｍをニードルガイド１２及
びセプタム１１を通じてキャピラリチューブ５内に挿通
ずる。
すなわち、針ｍがマイクロシリンジＭのシリンダＣの前
端がニードルガイド１２に当接するまで、矢印Ｂ方向同
軸に挿通され、結局針ｍ先を予め設定した分取位置Ｐに
保持し、その位置に到達した目的物質の一定量をシリン
ダＣ内に吸引、つまり分取する。
端がニードルガイド１２に当接するまで、矢印Ｂ方向同
軸に挿通され、結局針ｍ先を予め設定した分取位置Ｐに
保持し、その位置に到達した目的物質の一定量をシリン
ダＣ内に吸引、つまり分取する。
ところで前述の本体ケース８の扉１９が開放した際には
開閉器１６が開作動し、それによって継電器１７が作動
し高圧電源回路７が開作動する。
開閉器１６が開作動し、それによって継電器１７が作動
し高圧電源回路７が開作動する。
従ってマイクロシリンジＭが分取セル４に接触する際に
は高圧電源回路７が開放されているので安全な操作がで
きる。
は高圧電源回路７が開放されているので安全な操作がで
きる。
以上のように分取セル４、本体ケース８の通過用扉１９
及びマイクロシリンジＭから主として構成される分取機
構の分取のための操作、つまり通過７ｊ１９の開放並び
にマイクロシリンジＭの矢印Ｂ方向への移動、吸引及び
後退移動のうち通過群１９の開放に連動して高′屯圧電
源回路を切るわけである。
及びマイクロシリンジＭから主として構成される分取機
構の分取のための操作、つまり通過７ｊ１９の開放並び
にマイクロシリンジＭの矢印Ｂ方向への移動、吸引及び
後退移動のうち通過群１９の開放に連動して高′屯圧電
源回路を切るわけである。
もちろんこのマイクロシリンジの移動を自動的に行って
もよい。
もよい。
次に実旅例を挙げ、第１〜２図の細管式等速電気泳動装
置１を用いた分取において、泳動電流を切ってからある
時間内であれば、分離ゾーン拡散の影響が小さいことを
示す。
置１を用いた分取において、泳動電流を切ってからある
時間内であれば、分離ゾーン拡散の影響が小さいことを
示す。
実験例
まずクエン酸ナトリウム：２９．４ｍｇ、アスパラギン
酸：１３．３ｍ９、グルタミン酸：１４７■の混合水浴
液１ＱＣＣを標阜試料として、そのうち２０μｌを注入
して分析した結果を第３図に示す。
酸：１３．３ｍ９、グルタミン酸：１４７■の混合水浴
液１ＱＣＣを標阜試料として、そのうち２０μｌを注入
して分析した結果を第３図に示す。
但し、その他の分析条件は次の通りである。
（１） リーディング電解液：０．０１Ｍ塩酸０．２
多トライトンＸ−−１００にβ−アラニン（ｐＨ３，６
）を添加 （２） ターミナル電解液：０．０１Ｍカプロン酸（
３）泳動電流：１００μＡ、償圧：５〜１５ＫＶ）（４
）キャピラリチューブ：内径０．５７ｍ１φ×長さ０Ｃ
ｒｒＬ （５） ａｌ ： １３ｍｍ、 ａ２ ： ２〜３關
（第２図参照）（６）マイクロシリンジ針：外径０．５
關φ（７）温度：室温 更にアスパラギン酸検出後３０秒に通過用扉１９を開放
しく泳動電流を切り）、更にその後時間ｔ：３０秒にマ
イクロシリジンＭを分取移動させて７ＩＬ１分取し、再
度本分析装置１に注入して分析した結果を第４図に示す
。
多トライトンＸ−−１００にβ−アラニン（ｐＨ３，６
）を添加 （２） ターミナル電解液：０．０１Ｍカプロン酸（
３）泳動電流：１００μＡ、償圧：５〜１５ＫＶ）（４
）キャピラリチューブ：内径０．５７ｍ１φ×長さ０Ｃ
ｒｒＬ （５） ａｌ ： １３ｍｍ、 ａ２ ： ２〜３關
（第２図参照）（６）マイクロシリンジ針：外径０．５
關φ（７）温度：室温 更にアスパラギン酸検出後３０秒に通過用扉１９を開放
しく泳動電流を切り）、更にその後時間ｔ：３０秒にマ
イクロシリジンＭを分取移動させて７ＩＬ１分取し、再
度本分析装置１に注入して分析した結果を第４図に示す
。
更に泳動電流を切ってから分取するまでの時間ｔを２分
、１０分、３０分、１時間、３時間に変え、同様の分析
操作を行ない、それぞれ得られた分取液の組成百分率グ
ラフを第５図に示す。
、１０分、３０分、１時間、３時間に変え、同様の分析
操作を行ない、それぞれ得られた分取液の組成百分率グ
ラフを第５図に示す。
なお、ここでは時間を二〇として泳動電流を流した状態
の結果も加えている。
の結果も加えている。
以上の如く、泳動電流を切ってから時間ｔ：３０分程度
までは、泳動電流を切らずに分取した場合とその分取液
の組成に大差がなく、従って泳動電流を切った後の分取
も有効であることがわかる。
までは、泳動電流を切らずに分取した場合とその分取液
の組成に大差がなく、従って泳動電流を切った後の分取
も有効であることがわかる。
第１図はこの発明に係る電気泳動分析における分取方法
を実施するための細管式電気泳動装置の一例を示す機能
説明図、第２図はその分取時における分取セル拡大断面
図、第３図は本装置を用いた分取しない場合の実験結果
を示す電位勾配のグラフ、第４図は分取した試料を用い
て同様の実験を行った場合の前回相当グラフ、第５図は
泳動電流を切ってから分取するまでの時間ｔを変化させ
た場合の分取液組成を示すグラフである。 １・・・・・・細管式等速電気泳動分析装置、２・・・
・・・ターミナル液電極槽、３・・・・・・試料注入口
、４・・・・・・分取用セル、５・・・・・・キャピラ
リチューブ、６・・・・・・リーディング液電極槽、７
・・・・・・高圧電源回路。
を実施するための細管式電気泳動装置の一例を示す機能
説明図、第２図はその分取時における分取セル拡大断面
図、第３図は本装置を用いた分取しない場合の実験結果
を示す電位勾配のグラフ、第４図は分取した試料を用い
て同様の実験を行った場合の前回相当グラフ、第５図は
泳動電流を切ってから分取するまでの時間ｔを変化させ
た場合の分取液組成を示すグラフである。 １・・・・・・細管式等速電気泳動分析装置、２・・・
・・・ターミナル液電極槽、３・・・・・・試料注入口
、４・・・・・・分取用セル、５・・・・・・キャピラ
リチューブ、６・・・・・・リーディング液電極槽、７
・・・・・・高圧電源回路。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 本体ケース内の泳動管の途中に屈曲部を設け、この
屈曲部及びその屈曲部の前段にそれぞれセプタム及び検
出器を設けると共に、このセプタムに対応する本体ケー
スの一面に分取器を通過させる扉を設け、 電気泳動法により泳動管内を分離しながら泳動する単一
成分イオンのゾーンを検出器によって検出し、この検出
信号に基づいて本体ケースの扉を開放し、その扉の開放
によって前記体動管の両端に付設したリーディングおよ
びターミナル電解液槽に一定電流を供給する高圧電源回
路の開閉器を開放して泳動を停止するとともに、停止後
所定時間内に分取器を扉の開放口を通じて泳動管内に挿
通し、目的成分物質の一定量を分取することを特徴とす
る電気泳動分析における分取方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57205065A JPS5857703B2 (ja) | 1982-11-22 | 1982-11-22 | 電気泳動分析における分取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57205065A JPS5857703B2 (ja) | 1982-11-22 | 1982-11-22 | 電気泳動分析における分取方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5892851A JPS5892851A (ja) | 1983-06-02 |
| JPS5857703B2 true JPS5857703B2 (ja) | 1983-12-21 |
Family
ID=16500843
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57205065A Expired JPS5857703B2 (ja) | 1982-11-22 | 1982-11-22 | 電気泳動分析における分取方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5857703B2 (ja) |
-
1982
- 1982-11-22 JP JP57205065A patent/JPS5857703B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5892851A (ja) | 1983-06-02 |
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