JPS5980612A - 免疫制御作用を有するペプタイドの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は免疫制御作用を有するペデタイドを主成分とす
る免疫制御剤の製造方法に関するものである。

血清中における免疫抑制作用物の存在の発見は１９５９
但、Ｂ．　Ｂ．カムリン（　Ｅ．　Ｂ．　Ｋｎｍｒｉｎ
　）　Ｋよってなされた（Ｂ．Ｂ．カムリン：プロンー
デインダス　オデ　勺゛　ソザイエテイ　フォア　エキ
スベリメンタル　バイオロジイ　アンド　メデイシン（
　　Ｐｒｏ　Ｃ．　　（）ｆ　　　ｔ；ｈｅ　　　Ｓｎ
ｃ．　　ｆｎｒ　　　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎ　士，ａｌ　
　ＢｊｒｌｌＣ：＋ｇｙ＆　Ｍｅｃｌｊｃｊ−ｎｐ　）
第１００巻、第５８ページ、１９５９）。この件文には
、その有効成分プ）″−α２−グロブリンの遭富１．ｃ
コーン画分に含まれＺ，こと、ヒト血清の有効因子はラ
ットに対しても有効で力。

す、種の区別を越えて作用すＺ）ことが報告されている
。その後、このものは１９７３年にオクチン（　Ｏｃｃ
ｈｉｎｏ　）らによってヒトの血清の＝１−ンＴＶ　−
１から単向１トされ、グロブリン類との非共有結合が酸
によって解かれた分子量約５０００のベプタイＦである
ことが判明した〔ず　ジャーナル　オプインムノロジイ
（　Ｔｌ〕ｐ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ　）第１１０巻第３号、１９７６年〕。そのベプ
タイＦはＩ　Ｒ　Ａ　（　Ｉｍｍｏｎｏｒｅ７＜ｕｌｏ
ｔｏｒｙα−ｇｌａｂｎｌｉｎ　）とボストン大学のク
ーパーバンド（　ＣｒＨ）ｐｅｒｂａｎｄ　）らによっ
てＩＩ’Ｆ’−　＆ｊｉ　＋１．て℃・る。本明細１９
におし・てもこのペラ０タイドをＩ　Ｊ．Ｎ　Ａと略称
する。

オクチンらの用いた方法は、コーンのＴＶ画分中に含ま
れるＩＲＡの４５％の活性量を含むコーンのＩＶ　−　
１画分を出発原料とし、４０％の硫安飽和において沈殿
する両分中のＩＦ（ＡをＤＥＡＥ−セルロースのような
強塩基性陰イオンセルロースに吸着させ、イオン強度０
．　３の酢酸ナトリウノ、水牌液で溶出、次（・で溶出
液を酸性において透析し、透析液にＩＲＡを集めるとい
う方法である。

この方法によると、ＩＲＡの精製度はよいが、取得率は
低く、画分ＩＶからの回収率は０４％にしか過ぎない。

本発明の目的は、工業的に回収率よくヒトの血液からＩ
ＲＡを製造する方法を提供するにｋ）る、、また他の目
的はＩＲＡ注射薬の提供にある。

」二記の目的は、ヒトの血液又はそのα２−グロブリン
含有画分の水牌液をＰＩ（　５，　Ｑ以゛ドにおいて酸
で処理し、処理溶液を限外濾過することによって、分子
量１　３，０　０　０より小さブよイプチＰ類を濾液中
に集め、濾液に含まれる不純物を陽イオン交換体に吸着
させて除去し、次いで濾液中の丁ＲＡを無機吸着体に吸
着させ、これを溶出することからなる注射することので
きるＩＩＲＡの本発明製造方法によって達成される。

本発明方法に用いられる原料のヒトの血液とは単に通常
の血液のみならず、溶血した血液、例えば胎盤血をも含
むものである８血液はそのまま用し・ることもできるが
、好ましくは、α２−グロブリンを含む両分をあらかじ
め採取して、これを用℃・る。

このようにして、上記血液のα２−／７゛ロブリンを濃
縮含有する血漿両分であって、しかもアルプミンプ！ど
の価値のある血清成分を採取する際に通常、廃棄される
コーンのＩＶ画分、更に好ま（７くはコーンのＩ■−１
画分は、本発明方法の原料と［７て好適である。

血液そのものを用℃・る場合は、これを希釈して用いる
のが好ましい。例えば、胎盤血を水又は食塩水で抽出■
２て得られる血液抽出物はそのまま本発明に用（・るこ
とかできる。

原料どなる血液又はα２−グロブリン含有画分の水ｍ液
は、ｐＨ５，０以下において酸で処理される。

用いられる酸は、塩酸、リン酸、硫酸１よどの鉱酸又は
酢酸、ギ酸などの有機酸であって、原料水溶液を、これ
らの酸又は緩衝剤の添加によって、Ｊ１５．０以下、好
ましくは、Ｈ１，５〜５．０、更に好ま１７くは、２．
０〜６．５に保つ。処理温度は室温で十分であり、処理
時間は３０分ないし２４時間である。

上記の処理によって、原料水溶液中のＩ　’ｌ’ｌ　Ａ
は〃゛ロブリンの非共有結合が断たれ遊離の状態と！、
ｃる。

遊離したＴＲＡｌ？−分離するために分子計が１３．０
００より小さい両分な限外濾過によって、選択的に濾過
し７て取り出す。このための好ましく・方法は、適当な
中空（ホロー）ノ゛アイパーを用いることであり、これ
によって操作は迅速、かつ効果的と７；ＣＺ）。すなわ
ち、米国、アミコン社製夕゛イアファイバー＠（Ｄｉａ
ｆｉｂｅｒ　）　（分子袖、１０，０００より小のもの
の濾過圧）、無化成社製ウルトラフィルトレージョン■
（分子−！ｉｉ３，０００より小のものの濾過圧）など
で作られたホローファイバーが用いられる。この限外濾
過によって原料中のタンパク質が除去される。

薊液としＣ得られたタンパク質を除いた溶液を陽イオン
交換体、例えばＣＭ−−ヒルロース（カルボキシメチル
セルロース、生化学工業株式会社販売 交ザ結合デキス）　ＩＪン、生化学工業株式会社販売）
、及び丁）−セルロース（ホスホセルロース、生化学工
柴株式会社販売）のよＭよ酸性基六〜有多糖質イオン交
換体と接触させ、含まれる抗原性σ）高し・夕べ雑物質
を吸着させて除去する。この［程−で２血圧降Ｆ性物質
も除去され、以後の新たな生成も最小とｆｉ、る。この
工程の処理条件としては、Ｐ１１２〜７、好まり、　＜
はＰ！（４〜５．５、塩濃度０．１〜０．５Ｍの緩衝液
で平衡させたイオン交換体を用いること７Ｊ″−好まし
い。この夾雑物を除いたＩＲＡ溶液を無機吸着体と接触
させるとＩＲＡは吸着体に吸着される。

無機吸着体によるＩＩＲＡの収得は発明者らが全く新規
に見いだしたものであり、オクチンらの陰イオン交換体
の使用に比して極めて安価であり、更に効果的であって
、処理が簡単であり、工挙的製法として極め゛Ｃ有効な
方法である。用（・られる無機吸着体としては、シリカ
ゲル、ベントナイト、酸性白土及び活性炭などが挙げら
れ、このうち、無機吸着体の使用量は限定的では１．ｃ
（・が、通常ＩＲＡ溶液１００容量当り、１〜５容１１
の割合に用いられる。その時、溶液のＰｌｌを５．５−
９．　ＯＫ、好ましくけＰｌｌ　７．　Ｑ〜８．０に調
整子ることによ−クー（良結果が・１↓１ｐ）れる。

ＴＴＩＡ溶液と吸着体との混合物を室温で、６０分間か
きまぜることによって、１）（Ａσ）約７５〜９５％は
吸着体に吸着される。夾Ｍ物は水溶液に〕ターり、ＩＴ
（Ａは、それを吸着ｌ、た無機吸着体）ｒ・ｔ７）溶出
させることに、「つて回収する。

この無（隔成着体からのＩＲＡの溶出は、酸性０行う。

溶出液の好ましいＰＩＩは２〜４であり、そσ）調節に
は、１話酸、リン酸、硫酸及びギ酸、酢酸などの無機又
は有機酸が用いられる。溶出されたＩ　ＲＡＭ液を、要
すれば中和し７た後、通常の方法に従って減圧乾燥する
か、又は凍結乾燥して、粉末状のＩＲＡを得る。本方法
による場合、コーンの画分ＩＶからの回収率は約１．２
％であ、ろ。まプこその精製は、約１日間で行うことか
でき、従来の６〜４日間の工程に比して、極めて効率的
である。この得られたＩＲＡの活性は、約１００〜１０
００γ（窒素として）で、ＰＨＡ法〔クーパーバンドＳ
、　Ｒ，（Ｃｏｏｐｅｒｂａｎｄ　、　Ｓ、　Ｒ，）ら
（ず　ジャーナルオデ　インノ、ノロシイ、第１０９巻
第１号、第１５４ページ、１９７２年）〕によって７０
〜１００％の免疫抑制作用を示す。この結果は、従来提
供されているＩＲＡと同程度の活性を示すものである。

このＩＲＡの性状は５６°Ｃ１６ｏ分間の熱処理に対し
て安定であり、セルロースアセテート膜電気泳動ではβ
−グロブリン領域にバンドが認められる。本物質は、セ
ファデックスゲル濾過法による分子量が約５０００のベ
プチｒである。

このようにし７て製造されたＩＲＡは原料が血漿、胎盤
血などの人体由来のものを出発物質としているので、抗
原性の心配なく、極めて安全な医薬ということができる
。また補体の存在下で、ヒトのリンパ細胞に対１−て細
胞毒性をほとんど、あるいは全く示さず、またＥ、ロゼ
ツト試験〔メン・戸イアンら（Ｍｅｎｚｏｉａｎ　ｅｔ
　ａｌ　）　　デ　ジャーナル　オデインムノロジイ第
１１６巻第２６６ページ（１９７４））では免疫細胞の
凝集を阻止する。

更に純度のよいＩＲＡを望む場合は、無機吸着体からの
溶出液を有機溶媒、例えばクロロホルムなどの塩素化炭
化水素、ジエチルエーテルなどのエーテル類によってＩ
ＲＡを抽出、精製することができる。この方法によって
純度は著［２く向−ヒする。

この抽出処理は、無機吸着体からＩＲＡを溶出させる工
程と組み合せることもできる。すなわち、的出を」−記
有機溶媒と溶出液とを混合１〜て行５ことができる。こ
のような操作においては、水と混合する溶媒、例えばア
セトンやアルコールを混合すべき溶媒として用いること
もできる。

また本発明のＩＲＡは、血圧降下性物質をほとんど含ま
ず、注射に際して安全である。肝炎ウィルスは通常はほ
とんどその活性は認められないが、原料によってはこれ
の混入は考えられろ。

そこで、本発明によって、肝炎ウィルス（ＨＢＶ　）の
不活化処理を施したＩＲＡをも提供するものである。本
発明によって製造したＩＲＡはその水溶液において前述
のようにかなり熱に対１．て安定であるとはいえ、血漿
タンパク成分のＨＢ　Ｖ不活化処理と１２で知「）れる
６０°Ｃの温度に−Ｉ６いて＋［１時間の加熱に対■２
てはその活性は減少する。

本発明者らはＩ　ＲＡ　ｙＪ＜溶液が中性アミノ酸１．
ｌｌｆ糖類、三糖類又は糖アルコール１．Ｃどの存在に
おいて熱に対ｔ７て安定化され、肝炎ウィルスの不活化
に要する、例えば６Ｄ’Ｃにおける１０時間の加熱に対
しても、その活性を著しく失うことがないことを見℃・
出した。

本発明方法における諸工程において、上記の熱安定化加
熱処理は製造中の℃・かｔｉ：る］二程Ｖ〆−おけるＩ
ＲＡ水溶液にも適用できる。しかし７ながら、この処理
はＩＲＡ水ｍ液を酸処理する前の二［程に組み入れるこ
とが好まし、い。安定剤の例は、グリシン、アラニン、
バリン、ロイシン、イソロイシンなどの中性アミノ酸（
モノアミノモノカルボン酸）、クルコース、マンノース
、ガラクトース、果糖すどの単糖類、ショ糖、麦芽糖、
乳糖などの三糖類、及びマンニット、ソルビット、キシ
リットなどの糖アルコール類である。用いられる安定剤
の量は水溶液に対して５％（ｖｖ’ｖ　）以−にである
が、好ましくけ１５〜２０％である。

肝炎ウィルス不活化のための加熱は、常法によって行わ
れ、最も一般的７１ｃ　６　ｒ〕’Ｏ１１［］時間の加
熱処理において適徂、の安定剤の添加１（よってＪ　Ｒ
，Ａの活性はなお９５％保持されている。Ｔ（）３Ｖの
不活化処理を行った水溶液中に残存する安定剤はＩＲＡ
を前記の吸着剤に吸着させて分離するか、又は透析に」
：って除去することができる。か＜ｌ−７て、本発明１
（よってＨＢ　Ｖの不活化処理が施され血圧降下性物質
の含量を最小と１７だ注射することのできるヒトの血液
由来のＴ　ＲＡ　製剤力１（ＩＪ供される。

この製剤は移植性の拒絶反応を抑制することから移植手
術に際１７て、拒絶反応の予防、治療及び手術後の良状
態維持に有効に用℃・ることができ、また細胞性免疫疾
患の治療にも用いられる。

このＩＲＡを医薬として治療に用いる時の最も好ましい
形態としては注射薬であり、静脈注射することが最適で
ある。その投与針として＆’ｌ、１限５〜４０ｍ９７に
９の投与で十分と考えられる。ラットの皮膚移植実験で
は１日、２ｏｍ９／ｋｇのＩＲＡを静脈注射で２０日連
続投与した結果、２０日口の観察で、８５％の生着が認
められた。更に、このＩＲＡの急性毒性実験をマウスを
用いて５００ｍｙ　／　ｋｇ、１０００　ｍ９／ｋｇを
投与したが、４８時間後の観察で死亡例は認められなか
った。

実施例１ コーンのアルコール分画法で得られるＰ　ＨＡ法で、４
　ｒｎ９／　ｍｌで７０％の阻害活性を有するコーンの
１ｖ−１画分のペースト１ｋｇを冷蒸留水４Ａ！に懸濁
し、４°Ｃで２時間かきまぜる。遠心分離を行って不溶
物を除き、得られた上清に氷酢酸を加えてＰｌ−１６，
５に調整し、１時間、緩やかにかきまぜる。

この液をホローファイバー（旭化成社製）による濾過に
かけ、分子量１３．０００以下め低分子開部分を集める
。この低分子量部分にＣＭ−セルロース（生化学工業社
製）を１容量％の割合に加え、６０分間かきまぜて、活
性のなし・夾雑物質を吸着させ、ＩＩ（Ａ活性部分な濾
液と１−、て得、ろ。この濾液に活性炭を４容量％の割
合に加え、ＰＬｌを８．０に調整して活性部分を活性炭
に吸着させる、活性外の溶出には１Ｍ酢酸を用いる。啓
出液な凍結乾燥して精ｆＪ■＃Ａ６ｇを得た。セルロー
スアセテート膜電気泳動では、β−グロブリン領域にパ
ンＰが認められ、その分子量は約５０００であった。

実施例２ 実施例１と同様に操作して得られたＩＲＡを吸着した活
性炭を同容量のクロロホルムと混合し、かきまぜた後ク
ロロホルム層を分取し７、これを減圧乾燥法で、クロロ
ホルム、を揮散させ、精製ＩＲ−Ａ５．８ｇを得た。こ
のＩＲＡ２［］ｒ／ｍＪはＰＨＡ法で、６０％、５００
γ／ｍｌでほぼ１００％の阻害活性を示した。

実施例６ ヒトの胎盤１００個を細断し、０．１　Ｍの塩化ナトリ
ウム溶液１０／に懸濁し、少時かきまぜる。

遠心分離を行い、澄明な抽出液約２１Ｍを得る。

抽出液な集め、２Ｎ塩酸を用いてＰＨ２，０に調整し、
室温にて２時間、緩やかにかきまぜる。７１二ローフア
イバー（米国アミコン社製）を用（・て分子量約１０．
０００より小さい低分子量部分を集める。得られた水ｆ
ｆ＋液にＣＭ−七ファヂツクスを１容量％の割合に加え
、６０分間かきまぜ、次いで濾過してＩｒ（Ａ水溶液を
得る。この水溶液にシリカゾル５容（１１％な添加し１
Ｎ水酸化ナトリウノ、でＰＨ９，０ＶＣ調整する。約５
０分間かきまぜた後、東洋濾紙／Ｉ６２を用いて吸着に
用し・たシリカケ８ルを濾し集める。０．１Ｍギ酸で醍
出後、減圧乾燥すると精製された工ＲＡ　９００　ｍｆ
ｌを得た。このＩＲＡ５００ｒ／ｍｌはＩ）　１１　Ａ
法で８５％の阻害活性を示ｔまた。電気泳動的、分子量
的分析によってＩＲＡと確認された。

実施例４ 実施例６と同様に操作して得られたＩＲＡを吸着させた
シリカケ９ルを、約１／２容量のアー［４トンと混合し
、かきまぜ、ＩＲＡを溶出させ、溶出液を減圧乾燥して
、精製工ＲＡ７５０ｍ９を得た。このＩＲＡは２０ｒ／
ｍｌで、ＰＨＡ法で約６５％、５００γ／ｍｌでほぼ完
全な阻害活性を示した。

実施例５ 実施例１と同じ方法で得られた二Ｔ−ンのＩＶ−１画分
ペーストの水抽出液にギ酸を加えて、Ｐ１１４．５に調
整し、２時間放置した。実施例１１てオ、巳・て用いた
のと同じホローファイバー（旭化成社製）による濾過に
かけ低分子量部分（分子用１３．０００以下）を集めＰ
−セルロース（生化学］−業社製）を２容量％加え、更
に１Ｎ水酸化ナトリウムでＰＨ７Ｏとした。夾雑物を吸
着したＦ−セルロースを濾別し、濾液に酸性白土３重帛
％加えて、ＩＲＡを酸性白土へ吸着さセた。０．５Ｎ酢
酸で溶出後更にクロロホルムで抽出した濃厚Ｉ　Ｒｈ溶
液を減圧乾燥［２てＩＲＡ約４．７ｇを得た。このもの
の免疫抑制作用をＰＨＡ法で測定し、５００γ／　ｍｌ
で８５％の阻害活性を示Ｌ７た。電気泳動的、分子量的
分析によってＩＲＡと確沼された。

実施例６ ヒトの胎盤８００個を用い、これを細かく粉砕し、０，
１Ｍの塩化ナトリウム溶液１００１を加え、少時かぎま
ぜる。抽出された胎盤血を遠心分離にかけ澄明な抽出液
２００１を得た。この胎盤抽出液から硫安５０％飽和に
よって沈殿する全タンパクを得た。この沈殿１　ｋｇ当
り、４〜６１の蒸留水を加えて溶解し、この溶解液に少
量の塩酸を加えて、ｐＨ５，０に調整し、室温にて２時
間、緩やかにかきまぜた。ホローファイバー（旭化成社
製）を用いて分子量約１３．０００より小さい低分子量
部分を集めた。この集めた溶液をＣＭ−セルロースのｐ
Ｈ５，０、ｏ、　１５　Ｍのリン酸緩衝液で平衡化した
カラムを用いて展開した。十分量の水を流１２て、溶出
液を集めた。この溶出液に酸性白土を４重量％加えて、
ＩＲＡを吸着させた。この吸着させた酸土白土を取り出
し、実施例５に準じて０．１Ｎ塩酸で溶出させ、減圧乾
燥して、精製Ｉ　ＲＡ　８　ｇを得た。この工Ｒ＊５０
０ｒ／ｍ／！はＰＨＡ法で９０％の阻害活性を示した。

電気泳動的、分子量的分析によってＩＲＡと確認された
。

実施例７ コーンのアルコール分画法で得られるＰＨＡ法で４　ｍ
ｑ　／　ｍｌで、７０％の阻害活性を有するＩＶ−１両
分ペースト１ｋｇを冷蒸留水４１に懸濁し２．４°Ｃで
、２時間かきまぜた。遠心分離し７て不溶物を除いて、
得られた上清に、グリシンを１５％（ｗ、、’ｖ）の濃
度に溶解した溶液を６０°Ｃで、１０時間加熱した。加
熱後、蒸留水で透析し、生じた沈殿を遠心分離して除去
し、澄明な溶液を得た。その溶液に氷酢酸を加えてｐｔ
ｌ　３．５に調整し、た。この液をボローファイバー（
旭化成社製）による濾過にかけ、分子量１３，０００よ
り小さい低分子量部分を集めた。この低分子量部分にＣ
Ｍ−セルロース（生化学工業社製）を１重量％の割合に
加え、かきまぜて活性のない夾雑物質を吸着させ、ＩＲ
Ａ活性部分を濾液中に得た。この濾液に活性炭を４取計
％の割合に加え、ｐｔｌを３８％アンモニア液によって
８．０に調整して活性部分を活性炭に吸着させた。

溶出には、（）、１Ｎ塩酸を用いた。得られた溶出液は
減圧乾燥して、精製■ＲＡ１０．ｏ、、！９を得た。こ
のＩＲＡ　５００　ｒ／ｍｌはＰ　ＨＡ法で７４％ノ阻
害活性を示した。セルロースアセテート膜電気泳動では
、β−グロブリン領域にパンＰが認められ、その分子量
は約５０００であり、ＩＲＡと確認された。

又、Ｈ１１３Ｖ活性の測定をオウスリア−１２５（Ａｕ
５ｒｊａ　−１２５＠）　（アボット社製）によるラジ
オインムノアツ七イ法（特開昭４８−４９９１９号）で
行った結果は陰性であった。

血圧降下性物質の測定を、成犬を用し・、薬液投与前の
平均動脈血圧に対する降下率によ−）て検定の結果、降
下率は約７５％で陰性と判断された。

実施例Ｂ 実施例７と同様にし、て得られた醋出液に約１／２Ｗ　
Ｊｔのエーテルを加え、十分にかきまぜた後、エーテル
層を分取し、減圧乾燥し、て、精製ＩＲＡ約６ｇを得た
。このＩ　ＲＡ、　２０　ｒ　７ｍｌはＰ　ＩＩ　Ａ法
で約６５％、５００ｒ／ｍｌでほぼ完全な阻害活性を示
しまた。’ｔ（ｆ、急派動的、分子量分析に」：つＣＩ
ＲＡと確認さＪし、又ＨＢＶ及び血圧降下性物質は陰性
であった。

実施例９ ヒトの胎盤１００個を細断し、０．１　Ｍの塩化ナトリ
ウム溶液１０Ａに懸濁し、少時かきまぜる。

遠心分離によって澄明な抽出液約２０１を得た。

抽出液を集め、マンニットを約１５％菫〜の濃度に添加
して、６０°Ｃ１１０時間の加熱処理し７た。

加熱後の溶液を生理食塩液で透析【７、生じた沈殿を遠
心分離して除去し、澄明な溶液を得た。その溶液を２Ｎ
塩酸な用（・てｐＨ２，０に調整ｌ〜、室温にて２時間
、緩やかにかきまぜた。ホローファイバー（アミコン社
製）を用（・て約１０，０００以下の低分子ｈ１゜部分
を集め、実施例１に準じＣＣＭ−ヒファデツクス処理を
行った。次にシリカケ９ル５重川％を投与し、１Ｎ水酸
化ナトリウムでｐＨ９，０にｒｔｌ’！整した。約６０
分間かきまぜた後、東洋浸紙１６２を用いて吸着に用い
たシリカケ９ルを濾集し、た。

シリカゾルと同容量のジエチルエーテルとメタノールと
の等計理合液で溶出後、除菌接遇し２、濾液を減圧乾燥
して精製■Ｒ人９００ｍｇを’ｆ４）だ。このＩ　ＲＡ
５００　ｒ／ｍｌはＰＨＡ法でｉｏｏ％の阻害活性を示
しまた。電気法ｑ）的、分子は的分析によってＩＲＡと
確認さハ、た。又、ＨＢＶ活性は陰性であり、血圧降下
性物質の存在も陰性であ′つた。

試験例１（薬理効果の確認及び安全性）実施例８及び９
で得られた、それぞれ血漿及び胎盤由来のＩＪ（Ａを用
いて動物試験を行った。

マウス１５匹を用い、その内５例は胎盤血性ＩＲＡ、他
の５例には血漿由来ＩＲＡを、それぞれ２０＋ｎｐ／ｋ
ｇ／日、２０日間連続静脈投ｉｊ、　Ｌ、ＩＲＡの皮膚
移植実験に対する効果をみた。■臥は実施例８及び９で
得たＩＲＡ粉末をそのまま、生理食塩水で溶解し、１０
重量％ＩＲＡ水溶液を作った。移植実験開始２４時間前
にあらかじめ２０ｍ９／に９を投与し、その後１日１回
、２０日間投与した。２０日後の表ｒＭ観察では、両Ｉ
ＲＡ投与群はコントロールの０％に対して約８５〜１０
０％の生着率を示した。このことは、本ＩＲＡ注射液の
免疫抑制剤としての薬理効果の有効性を示唆するもので
ある。

試験例２（急性毒性） 実施例８及び９で得られたＩＲＡを用いて急性毒性試験
を行った。マウス２０匹を用いて、１０例に５００ｍ！
？／ｋｇ及び１０例に１０００　ｍ？／に９　（７’）
ＩＲＡをそれぞれ溶かした液を、静脈投与して４８時間
の観察を行ったが、両例共死亡例は認められなかった。

代理人浅村　皓

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　　ヒト血液ホ）るいはそのα２−〃゛ロデリン
   含有画分をｐＨ１，，５〜５０で酸処理し、処理液を限
   外濾過して、分子バト１ろ、０００以下の両分を濾液中
   に集め、濾液中の不純物を陽イオン交換体上吸着さ・せ
   で除去し、？４？られる溶液を無機吸着体で処理し、無
   機吸着体から免疫制御α−グロブリンを溶出更に収得す
   ることを特徴とする注射することのできる免疫抑制α−
   グロブリン製剤の製造方法。 （２）人血液が血漿である特許請求の範囲第１項による
   方法。 （：３）　　血漿かコーンの両分ｔＶである特Ｗ（−請
   求の範囲第１項による方法。 （４）　　ヒト血液が胎盤面である特許請求の範囲第１
   項による方法。 （５）酸処理をＰＨ１，５〜５．０で行う特許’ｆＪＩ
   求の範囲第１項による方法。 （６）酸処理を、ｏ　２．　Ｄ〜６．５で行う特許請求
   の範囲第１項による方法。 （力　酸処理を室温で行う特許請求の範（１１（第１項
   による方法。 （８）酸処理を３０分〜２４時間行う特許請求の範囲第
   １項による方法。 （９）酸が有機酸である特許請求の範囲第１項による方
   法。 （１０１有機酸がギ酸又は酢酸である特許請求の範囲第
   ９項による方法。 （１１）酸が無機酸である特許請求の範囲第１項による
   方法。 θり　無機酸が塩酸、リン酸又は硫酸である特許請求の
   範囲第１１項による方法。 （１３）限外濾過をボローファイバーによって行う特許
   請求の範囲第１項による方法ゎ α４）陽イオン交換体への吸着をＰ１１２〜７で行わ棲
   る特許請求の範囲第１項による方法。 （１つ　吸着を、−１４〜５．５、塩濃度約０．５Ｍの
   緩衝液で行う特許請求の範囲第１４項による方法。 （１６）　　Ｉｉ！イオン交換体が、弱酸性基含有イオ
   ン交換多糖類である特許請求の範囲第１項による方法。 （１７）　　弱酸性基含有イオン交換多糖類が、カルボ
   キシメチルセルロース、カルボギンメチルクロスリンク
   ｒデキストリン、ホスホセルロースかイ選ばれる特許請
   求の範囲第１６項による方法。 ０樽　無機吸着体への吸着を、ｐｔ４５．５〜９０で行
   わせる特許請求の範囲第１項による方法。 （１１吸着をｐＨ７，０〜８．０で行わせる特許請求の
   範囲第１８項による方法。 （２１珍　無機吸着体が、シリカゲル、ベントナイト、
   酸性白土又は活性炭である特許請求の範囲第１項による
   方法。 （２１）　　無機吸着体が、活性炭である特許ｄｔｊ求
   の範囲第２０項による方法。 （２渇　　無機吸着体からのＩＲＡの溶出をＰＩ１２〜
   ４で行う特許請求の範囲第１項による方法。 （２３）　　ｐｉ（を、塩酸、リン酸、硫酸、ヤ酸又は
   酢酸で調整する１１ヲ許請求の範囲第２２項による方法
   。 （２４）　　無機吸着体からの免疫抑制α−グロブリン
   の溶出又は、無機吸着体から溶出された免疫抑制α−ダ
   ５ゾリンの収得を、ノ・ロデン化炭化水素、エーテル類
   又は−ｒセＩ・ンを使用して行う１特許請求の範囲第１
   項による方法。 Ｃ）５　　ｍ出液を、ハロゲン化炭化水素又はエーテル
   類で抽出処理する特許請求の範囲第１項による方法。 （２Ｇ）ハロゲン化炭化水素が、クロロホルムである特
   許請求の範囲第２４項又は第２５項による方法。 （２７）エーテルが、ジエチルエーテル求の範囲第２４
   項による方法７