JPS60168389A - 新規なａ−８９８物質，その製造法およびそれを有効成分とする抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なＡ−８９８物質、その製造法およびそれ
を有効成分とする抗腫瘍剤に関する。

近年、種々の微生物の産生する抗腫瘍物質について研究
が行なわれているが、現在のところその生産、単離、精
製のためのスクリーニング法は未だ確立されているとは
云えない。

本発明者らは、アルカリ性培地という特殊な条件下で生
育できる微生物の培養液のうち、マウス腎臓線維芽細胞
の８Ｖ４０腫瘍転換細胞に対して強い細胞毒性を示すも
のはｉｎ　ＶｉＶＯでの抗腫瘍活性を示す率が高いこと
を見出し、このスクリーニング方法を利用して各種の放
線菌が抗腫瘍物質を産生ずることを知見した。さらに、
この抗腫瘍物質を単離することに成功した。すなわち本
発明者らは、１ｎｖｉｔｒｏで上記ＳＶ４０腫瘍転換細
胞に対して細胞毒性を示し、ｉｎ　ｖｉｖｏでマウス肉
腫由来の腹水型同系腫瘍メス−Ａ　（Ｍａｔｈ　Ａ　）
に対し抗腫瘍性を示す物質を探索することを内容とする
抗腫瘍物質のスクリーニング法によりストレプトマイセ
ス属に属する放線菌が上記腫瘍の増殖を強力に阻止する
抗腫瘍物質を産生することを認め、さらにこれを単離、
精製することに成功し、本発明を完成したのである。

本発明の新規なＡ、　−８９８物質は下記の物理化学的
性質を有している。

＋１１形状 白色ないしは灰色の無定形粉末 （２）元素組成 ０：３３．４．９％、Ｈ：５．２９％、Ｎ：２．４０％
。

Ｓ　：　１．２２％、　灰分：１４．３４％（３）分子
量 約２４０００ （４）アミノ酸組成 Ａ−−８９８物質１分子中のアミノ酸残基数は下記の通
りである リジン　４〜６　イソロイシン　６ アスハラキン酸　１８　フルギニン　４〜６グルタミン
酸　８　セリン　８ アラニン　１４〜１６　グリシン　２０メチオニン　２
　バリン　１４ ヒスチジン　２　ロイシン　１０〜１２スレオニン　１
０　チロシン　２ ソ０１Ｊ　ン　６　フェニルアラニン　４１／２シスチ
ン　１〜２　トリプトファン　１〜２（５１糖含量 １６．７　％ （６）糖組成 マンノースおよびグルコース （７）赤外部吸収スペクトル 第１図に示した通り （８）紫外部吸収スペクトル 第２図に示した通り （９）等電点 ｐＴ　＝　３．７　５ 上記Ａ−８９８物質は、ストレプトマイセス属に属する
上記Ａ−８９８物質生産菌をアルカリ性液体培地に培養
し、培養物から該物質を採取することによって製造する
ことができる。

上記Ａ−８９８物質生産菌の１例として、本発明者らが
土壌から分離した放線菌ストレプトマイセスＡ−８９８
株がある。このストレプトマイセスＡ−８９８株の菌学
的性質は次の通りである。

１、形態的性質 菌糸の発育は充分で、栄養菌糸は断絶しない。

胞子のうの形成はみられず、気菌糸の着生が充分で、胞
子は連鎖状に着生する。さらに、胞子着生菌糸は単純分
岐で、単純分岐は形成しない。胞子柄はらせんを形成す
る。

■、ジアミノピメリン酸の型 細胞全加水分解物中のジアミノピメリン酸を’Ｉ’ＬＯ
にて分析した結果ＬＬ型を示した。

以上Ｉ、Ｈの結果から、本菌は８ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｔａ　−ｃｅａｅ科のＳｔｒｅｐｔＯｍ７ＣｅＳ属に属
することは明らかである。

■、生理的特徴 ｆｉｌ生育温度：２０〜３５℃ （２）酸素に対する挙動：好気的でｍ１ｃｒｏｄｅｒｏ
ｐｈｉｌｉｃではない。

（３）タンパク質に対する作用 ゼラチンの液化　＝（−） ミルクの凝固とペプトン化　：（ト） チロシナーゼ　：（ト） １（、Ｓの生成　：（イ） インドールの生成　：（ハ） Ｂ８の生成　：（ト） （４）デンプンの分解　：（至）　弱い（５）炭素源の
資化性（プリドハム・ゴドリーブ法による）Ｄ−ｇｌｕ
ｃｏｓｅ　＋　ｒａｆｆｉｎｏｓｅ　±Ｄ−ｘｙ４ｏｓ
ｅ　＋　Ｄ−ｍａｎｎｉｔｏ！　＋Ｌ−ａｒａｂｉｎｏ
ｓｅ　＋　１−ｉｎｏｓｉｔｏｌ　±Ｌ−ｒｈａｍｎｏ
ｓｅ　＋＋　５ａｌｉｃｉｎｅ　±Ｄ−ｆｒｕｃｔｏｓ
ｅ　＋：５ｕｃｒｏｓｅ　±Ｄ−ｇａｊａｃｔｏｓｅ　
＋　ｍａ、ｎｎｏｓｅ　−ｈ＋−（６）硝酸塩の還元　
十 ■、各種培地における生育状態 ｆｌＪショ糖硝酸塩寒天培地 栄養菌糸は白から灰色。発育は普通で気菌糸は白色で短
かい。全体に転調。可溶性色素は認められない。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地栄養菌糸は薄
肌色から白色。発育悪く気菌糸の着生もわずか。全体に
粘稠。可溶性色素は認められない。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地栄養菌糸は白
色。発育悪く気菌糸の着生もわずか。可溶性色素は薄赤
紫色である。

（４）デンプン・無機塩寒天培地 栄養菌糸は白から白黄色。発育悪く気菌糸の着生もわず
か。可溶性色素は認められない。

（５ｉチロシン寒天培地 栄養菌糸は白から灰色。発育は非常に良く気菌糸の着生
も密で灰色である。可溶性色素は焦茶色である。

（６）栄養寒天培地 栄養菌糸は白から薄赤紫色。生育は普通で気菌糸は白色
。全体に転調。可溶性色素は赤紫色である。

（７）イースト・麦芽寒天培地 栄養菌糸は白から灰色。生育は非常に良く、気菌糸は白
色。全体に転調。可溶性色素は黒色である。

（８）オートミール寒天培地 栄養菌糸は白から灰色。生育悪く気菌糸の着生もわずか
。可溶性色素は薄茶色である。

（９）グルコース・ペプトン！ゼラチン培地生育せず （１１脱脂牛乳 発育良好。凝固は特に観察されないが、ペプトン化は多
い。

０１）ペプトン・イースト・鉄寒天培地栄養菌糸は白か
ら黒色。生育悪く気菌糸の着生もわずか。全体に転調。

可溶性色素は赤茶色である。

（財）ベネット培地 栄養菌糸は灰色から茶色。生育は良好で気菌糸は薄茶色
。可溶性色素は赤茶色である。

０→アルカリ培地　（グルコース１．０％、アスパラギ
ン０．０５％、イーストエキス帆１％、硫酸アンモニア
０．０５％、燐酸二カリ０．０５％、炭酸ナトリウム１
．０％） 栄養菌糸は灰色。生育は非常に良好で気菌糸の着生も密
で灰色である。可溶性色素は焦茶色。

以」二の生理学的特徴および各種培地での培養的諸性質
から、本菌はバージ−のマニュアル・オブ・デターミナ
テイブ・バクテリオロジ−（１９７４年版）の記載によ
りストレグトマイセス・アクロモジェネス・サブスピー
シーズ・ルブラディリスｒｉｓ　）に類似した菌と推定
された。ただし、食塩耐性が異なり（本菌は７％食塩培
地で生育不能）また生育ｐＨが７．５〜１０である点に
おいても異なっている。それ故、本発明者らは本菌を新
菌株と認め、ストレプトマイセスＡ−１３９８株と命名
した。

本菌は工業技術院微生物工業技術研究所に受託されてお
り、その受託番号はＦＥＢＭ　Ｐ−７３４０である。

新規なムー８９８物質を生産するための微生物は上記Ａ
−８９８株に限定されず、Ａ−８９８株以外のストレプ
トマイセス属に属するものであって当該物質生産能を有
する菌株であれば使用することができる。

Ａ−８９８物質はストレプトマイセス属に属するＡ−８
９８物質生産菌をアルカリ性液体培地に培養することに
より製造することができる。

本発明により上記Ａ−８９８物質生産菌を培養するため
に用いる培地としては当該菌体が利用しうる炭素源、窒
素源、無機塩類等を含有するものであればよい。炭素源
としては例えばグルコース。

ラクトース、マルトース、グリセリン、澱粉等が用いら
れ、窒素源としては例えば肉エキス、酵母エキス、大豆
粉、ペプトン、コーンメチ−プリカー。硫酸アンモニウ
ム、アスパラギン等が用いられる。その他必要に応じて
適宜の無機地類、消泡剤等を添加することができる。本
発明において培地のｐＩ（は特に重要であり、アルカリ
性のｐｎとすべきで、ｐＨ８，０〜９．５が最適である
。アルカリ性ｐＨを維持するために、培地に対して炭酸
ナトリウムまたは重炭酸ナトリウムを０．３〜１．５％
、好ましくは１％を別個に滅菌し、滅菌した他の培地成
分に添加する。

前記のごとき栄養源を有する液体培地で大量培養するに
は、深部通気液体培養が有利であり、培養温度は２５〜
３０℃、特に２７〜２８℃が最適である。

Ａ−８９８物質の生産に最も適した培地、例えばグルコ
ース１％、Ｌ−アスパラギン０．０５％、硫酸アンモニ
ウム０．０５％、燐酸二カリウム帆０５％、炭酸ナトリ
ウム１％を含むｐＨ１０の培地を用い、２８℃でロータ
リー振盪培養を行なった場合、６日間培養するとｐＨ８
，８に低下し、培養液の抗腫瘍活性は最大となる。活性
区分は水溶性であり、上記培養液を濾過または遠心分離
等で液体と菌体を含む固形分に分離すると、主として液
体中に含まれる。

このようにして得られた培養ｐ液から本発明の目的物質
であるＡ−８９８物質を得るには目的物質と不純物との
間の性状の差を利用して分離精製する。すなわち、培養
ｐ液のｐＨを変化させ夾雑物を沈澱させる方法、硫酸ア
ンモニウム等を加え塩濃度を変えることにより分別沈澱
させる方法、エタノール、アセトン等を添加してその濃
度を変え分別沈澱させる方法あるいは透析膜、限界濾過
膜およびセファデックス、バイオゲル等のゲルを使用し
て分子量の差により分画する方法あるいはジエチルアミ
ノエチル（ＤＢＡＥ　）セルロース、　ＤＥＡＦセファ
デックス、カルボキシメチル（ＣＭ）セルロース、　０
Ｍセファデックス等のイオン交換セルロース、イオン交
換セファデックスに対する吸着能の差を利用して分離溶
出する方法等を利用して分取精製する。これらの方法は
必要に応じ単独に用いられ、任意の順序に組合せ、また
反復して適用することができる。

例えば培養ｐ液に硫酸アンモニウムを６０％（Ｗ／Ｖ）
加え目的物質を沈澱させる。得られた沈澱を少量の水に
溶かし、透析膜を用いて透析するか分画分子量１万以上
の限界濾過膜を用いて低分子物質を除く。得られた溶液
を低温下で減圧濃縮後、セファデックスＧ５０でゲル濾
過し、活性分画を凍結乾燥する。このようにして得た粗
Ａ−８９８物質の水溶液をＩ）ＥＡＲセファデックスイ
オン交換体のカラムに吸着させ、ｐＨ８，０のリン酸バ
ッファー等の緩衝液中で塩濃度を順次上げて溶出を行な
う。次に、透析膜またはゲル濾過法によりＡ−８９８物
質分画に含まれた緩衝液および塩の成分を除去する。活
性分画を凍結乾燥後、ショーテックスＯＨパックＢ−８
００、ウォーターズブロチインｌ−１２５等の高速液体
クロマトグラフィー用充填カラムを用いて高速ゲル濾過
にかけるとシンメトリカルな溶出像を示し、最純化され
たＡ−８９８物質を得ることができる。

前記のような種々の方法の組合せによって得られるＡ、
　−８９８物質は等電点電気泳動の場で単一なバンドを
示す。

このようにして得られるＡ−８９８物質の物理化学的性
状は次のごとくである。

（１）　形状 本物質の凍結乾燥品は白色ないし灰色の無定形粉末であ
る。

（２）　元素組成 ０：３３．４９％、Ｈ：５．２９％、Ｎ：２．４０％。

Ｓ：１．２２％、　灰分：１４．３４％（ただし、灰分
中に含まれる無機元素はＰ　：　２１．７％、　Ｏａ：
５．９％、　Ｎａ　：　３．３％、に：３．０％、　Ｍ
ｇ　：１．５％、　Ｚｎ：　Ｑ、９％等であった。） （３）　分子量 本物質が高分子物質である性質を利用してゲル濾過法に
より分子量を決定した。０．１モル塩化カリウムを含む
０．１モル燐酸緩衝液（ｐＨ７，０）で平衡化したセフ
ァデックスＧ−７５カラム（直径１．５ｆｉ、長さｘｍ
）を用いて分子量既知の蛋白質、すなわちウシ血清アル
ブミン（分子量６７．０００）、オーヴアアルプミン（
４３，０００）。

キモトリプシノーゲン（２５，０００）、リボヌクレア
ーゼＡ　（１３，７００）と共に同じ緩衝液でゲルｐ過
を行ない、それぞれの流出容量（Ｖｅ）を対数で目盛っ
た分子量の値と比較することにより、Ａ−８９８物質は
分子量約２４．０００と決定された。

（４）　アミノ酸組成 Ａ−８９８物質を６Ｎ−塩酸と減圧封管中で１１０’ｃ
、４４時間加水分解すると、第１表に示すようなアミノ
酸が検出される。トリプトファンはこの加水分解条件で
分解変性するため、５％チオグリコール酸を含む６Ｎ−
塩酸を用いて減圧封管中１１０℃、６４時間加水分解し
た。

これら加水分解物のアミノ酸分析結果から、Ａ−８９８
物質は分子中に２０種１４２〜１３８個のアミノ酸残基
を含むことが判明した。

第１表　Ａ−８９８物質のアミノ酸組成（５）糖含量 Ａ−８９８物質をフェノール硫酸法で含有する糖量な測
定すると、グルコース換算で１６．７％（ｗ／ｗ）の糖
を含有する糖タンパク質であることが判明した。

（６）糖組成 本物質を２規定のトリフルオロ酢酸で１００℃、３時間
加水分解して調製した液をＴＬＯで解析した結果、次の
ような糖を含有していることが判明した。

マンノースオヨヒクルコース （７）赤外部吸収スペクトル 第１図に示すごとく典型的な糖タンパク質の吸収を示し
ている。

（８）　紫外部吸収スペクトル 第２図に水溶液中での吸収スペクトルを示す。

（９）等電点 アンフオラインｐＨ３，５〜１ｏおよび　ＬＫ’Ｂ８１
ＱＯ等電点電気泳動装置を用いてＡ−８９８物質の等電
点な測定すると、ｐＩは３．７５であった（第３図）２
元素分析の結果から、この低い等電点は硫酸根、リン酸
根の存在によるものと推定される。

次に、新規な糖蛋白性物質Ａ−８９８の生物活性につい
て言及する。

（１１マウスの各種実験腫瘍に対する抗腫瘍性（イ）　
マウス腹水型肉腫メス−Ａに対する延命効果１群１０匹
、６週令メス、平均体重２０ｇのＥＡＬＢ／Ｃマウスに
１週間、同系のマウスの腹腔内で継代した癌細胞メス−
Ａをマウス１匹当りｌＸｌ０’個を腹腔内に移植し、翌
日から５日間試験群には生理食塩水に溶解したＡ−８９
８物質溶液０．１ｍｌを、対照群は生理食塩水のみを０
．１ｍｌずつ腹腔内に投与した。以後、生存日数を観察
して延命効果を次式により算出した。

結果を第２表に示す。

（ロ）　マウス白血病Ｐ−３８８に対する延命効果マウ
スの種類なりＤＦｌ、腫瘍なＰ−３８８におきかえたこ
と以外は上記と同様の方法で延命効果を試験した。結果
を第２表に示す。

（ハ）　マウス腹水型肝癌ＭＥ−１３４に対する延命効
果マウスの種類を０３Ｈ／Ｈｅ、腫瘍をＭＵ−１３４に
おきかえたこと以外は上記と同様の方法で延命効果を試
験した。結果を第２表に示す。

に）　マウス黒色肉腫メラノーマＢ−１６に対する延命
効果 １群１０匹、６退会メス、平均体重２０５１の０５７Ｂ
Ｌ／６のマウスに、１２日間同系のマウスの皮下で継代
したメラノーマ１３−１６の癌細胞を１ｇ／９ＩＩＬｌ
生理食塩水のホモジエネートにし、その０．５ｍｌを右
腋下皮下に移植し、以下＠）と同様に試験して得られた
延命効果を第２表に示ず。

（ホ）　マウス腹水型肉腫ザルコーマ−１８０に対する
延命効果マウスの種類をＩＯＲ，腫瘍をザルコーマ−１
８０におきかえたこと以外は上記（イ）と同様の方法で
延命効果を試験した。結果を第２表に示す。

−る− 上表から明らかなように、Ａ−８９８物質はマウスの各
種同系腫瘍および同種腫瘍に対して巾広い抗腫瘍スペク
トルを持っていることが判明した。特に同系腫瘍メス−
Ａに対しては延命率２００％を越える強い延命効果を示
した。

これらの結果から本物質は有効な抗癌剤となりうる資質
を有していると考えられる。

（２１ＳＶ４０腫瘍転換細胞に対する増殖阻害活性Ａ、
　−８９８物質はＳＶ４０　（シミアンウィルス４０）
で腫瘍転換［、たマウス腎臓由来線維芽細胞ＳＶ４．０
・０３．Ｔ（・２Ｋに対して５μｇ／ｍｌで完全に増殖
を阻害する。

（３）抗菌活性 Ａ−８９８物質は２０００　ｔｔ／ｌ／ｍｌでスタフィ
ロコッカス・アウレウス２０９Ｆ、ザルテイナ・ルテア
ＩＦＯ３２３２、バチルス・ズブチリスＰＯＩ２１９、
エシェリヒア・コリＩＡＭ　１（１１１、キャンテイダ
・アルビカンスＩＡＭ　８４４４に対して抗菌活性を全
く示さない。

一冴一 以上記述したＡ、　−８９８物質の性状は、この物質が
本発明者らによって得られた新物質であることを明らか
に示すものである。以下、本発明の態様を実施例におい
て示すが、各年−の採取手段の組合せによってＡ−８９
８物質は最高に純化することができる。これら実施例は
何ら本発明を限定するものでなく、前記の如く本物質の
諸性状が明らかにされた以上、たとえ本発明の範囲内に
具体的に示されなくともその変形あるいは修飾的手段を
用いても目的物質が得られることは明白である。

実施例１ グルコース１ク、Ｌ−アスパラギン０．０５％。

硫酸アンモニウム０．０５％、リン酸二カリウム０．０
５％、炭酸ナトリウム１％（別滅菌しておいて添加）の
組成を有する培地（ＩＪ９，５　）　１０　ｌを２０１
容の培養槽に調製し、１２０℃で１０分間加熱滅菌した
。予め同一組成の培地にて９６時間培養を行なったスト
レプトマイセスＡ−８９８株の種培養液０．３１を無菌
的に接種した。２８℃で通気攪拌培養（通気−３７１０
／／分・攪拌数１５　Ｏｒ、ｐ、ｍ・・内圧０．３　ｋ
ｇ／ｃｍ２）を９６時間行なった。遠心分離（８，００
０ｒ、ｐ、ｍ、　）で菌体を含む固形分を除き、培養瀝
液８１を得た。この培養ｐ液は０．３ｍ１．５回腹腔投
与でメスーＡ腹水癌（移植量Ｉ　Ｘ　Ｉ　Ｑ６個／マウ
ス）に対して１４２％の延部効果を示した。

この培養ｐ液中にはＡ、　−８９８物質が約５０■／ｌ
含まれている。

実施例２ 実施例１で得られた培養ｐ液に硫酸アンモニウムを６０
容量％（Ｗｈ）になるように加え、３時間攪拌の後４℃
以下で２４時間塩析した。生じた沈澱は遠心分離（８，
００Ｏｒ、ｐ、ｍ、　１０分間）で集めた。固形分に２
１の水を加え、ｐＨを８に調整した後、透析膜（セロフ
ァンチューブ）に注入し、４°Ｃで流水透析し硫酸アン
モニウムおよび低分子夾雑物を除いた。透析内液の沈澱
は遠心分離（１５，００Ｏｒ、ｐ、ｎ＋、、５分間）で
除去し、上澄液は凍結乾燥した。得られた凍結乾燥品は
２０．５１ｇであった。凍結乾燥品１ｇを水に溶かし、
予め水でよく洗浄したセファデックスＧ−５０カラム（
１０×１００ｃｒｎ）に注入しゲルｐ過を行なった。流
出液には純水を使用し、１２０ａｌ／ｈｒ、の流速で２
０ｍ１づつ分取した。各流出区分を抗腫瘍活性の指標と
ｔ、てＳＶ４０・０３ＬＴ・２に細胞に対する細胞毒性
を測定し、活性区分を分取して凍結乾燥した。ここで得
られた粉末は６．ｓｍｙ／ｋｇマウス５回腹腔投与でメ
スーＡ腹水癌に対して１９８％の延命効果を示した。

次に、この凍結乾燥品をＤＥＡＥセファデックスＡ２５
を０，０１モルのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）で充
分平衡化したカラム（２ｘ７０ｃｍ）に注入し、溶出液
として０．０１モルトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）　
２　ｄと同緩衝液に１モルになるように塩化ナトリウム
を加えた液２１を使用して直線的塩濃度勾配を作製し溶
出した。２０ｍ１づつ分取し２８０ｎｍにおける蛋白質
の吸光度とＳＶ４０・０３Ｈ・２に細胞に対する細胞毒
性を測定し、活性区分を分取し、透析膜（セロファンチ
ューブ）に注入して４℃で蒸溜水中で４８時間透析した
。透析内液を凍結乾燥後、少量の蒸溜水に溶かし、セフ
ァデックスＧ７５（蒸溜水で充分洗浄、２Ｘ１００ｃｍ
、）カラムに注入し、蒸溜水を使用し３　Ｑ　ｍｌ／ｈ
ｒ、で溶出し、３　ｍｌづつ分取して２８０ｎｍ（７）
吸光度とＳＶ４０・０３Ｉ（・２に細胞に対する細胞毒
性を測定した（第４図）。活性区分を凍結乾燥し、４４
．０ｍ９を得た。

本粉末の抗腫瘍活性は２．０〜／ｋｇマウス、５回腹腔
投与でメスーＡ腹水癌に対して２０３％以上の延命効果
を示した。

実施例３ 実施例２で得られた粉末をｐＨ７，０、０，０２モルリ
ン酸緩衝液で充分洗浄した水系高速液体クロマトグラフ
ィー用カラム（プロティンｌ−１２５，７，８Ｘ３０＋
ｍ２本）に注入しく　１０　ｍｔ２７ｍｌ溶液を１００
０μｍ　１回につき注入）、２８０　ｎｍの吸収を示す
ピークを分取した（第５図）。吸収ピークのＡを限界ｐ
過膜（ミリボア社製、イマーシブルＱＸ−１０゜排除限
界分子量１ｏ、０ｏｏ）を用いて濃縮脱塩した。

次いで、凍結乾燥し、１７８ｍｇの白色〜灰白色のＡ〜
８９８物質の粉末を得た。本粉末の抗腫瘍活性はメスー
Ａ腹水癌に対して１　タ／ｋｇマウス、５回腹腔投与で
２１０％以上の延命効果を示した。

【図面の簡単な説明】

第１図はＡ−８９８物質０．４１Ｒ９をＫＥｒ　２００
　ｍ９と一緒に真空加圧下で錠剤とした時の赤外吸収ス
ペクトル、第２図はＡ−８９８物質の紫外吸収スペクト
ル、第３図はＡ−８９８物質５〜をアンフオラインｐＨ
３〜１０でＬＫＥ８１００型エレクトロフォーカシング
装置を用いて４°Ｃ２４６時間、３００Ｖで等電点電気
泳動を行なった泳動図、第４図はセファデックス０７５
カラムの溶出図（溶出液は３０ｍ１／ｈｒ、蒸溜水、チ
ャージ量２０■）、第５図はＡ−８９８物質１ＴＩｕｉ
のウォーターズブロチインカラムｌ−１２５（２本接続
）の浴出図（溶出液は２威／ｍｉｎ、＋ｐＨ７，０、０
，０２モルリン酸緩衝液）である。 特許出願人　サッポロビール株式会社 第４図 り画靭（Ｉ金画） 第５図 イ米斗判キ田テｒＡｔ；２ｆつ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の物理化学的性質を有する新規なＡ−８９８物
   質。 （１）形状 白色ないしは灰色の無定形粉末 （２）元素組成 （ｊ：３３．４９％、Ｈ：５．２９％、Ｎ：２．４０％
   。 Ｓ’１．２２％、　灰分：１４．３４％（３）分子量 約２４０００ （４）アミノ酸組成 Ａ−８９８物質１分子中のアミノ酸残基数は下記の通り
   である リジン　４〜６　インロイシン　６ アスパラギン酸　１８　アルギニン　４〜６グルタミン
   酸　８　セリン　８ アラニン　１４〜１６　グリシン　２０メチオニン　２
   　バリン　１４ ヒスチジン　２　ロイシン　１０〜１２スレオニン　１
   ０　チロシン　２ プロ　リン　６　フェニルアラニン　４１／２シスチン
   　１〜２　トリプトファン　１〜２ｔ５１糖含量 １６．７　％ （６）糖組成 マンノースおよびグルコース （７）赤外部吸収スペクトル 第１図に示した通り （８）紫外部吸収スペクトル 第２図に示した通り （９）等電点 ｐＩ　＝　３．７５ ２、ストレプトマイセス属に属する下記Ａ−８９８物質
   生産菌をアルカリ性液体培地に培養し、培養物から下記
   Ａ−８９８物質を採取することを特徴とする下記の物理
   化学的性質を有する新規なＡ−８９８物質の製造法。 ｆｉｌ形状 白色ないしは灰色の無定形粉末 （２）元素組成 ０　：　３３．４９％、Ｈ：５．２９％、Ｎ：２．４０
   ％。 Ｓ：１．２２％、　灰分：　１４．３４％（３）分子量 約２４０００ （４）アミノ酸組成 Ａ、　−８９８物質１分子中のアミノ酸残基数は下記の
   通りである リジン　４〜６　イソロイシン　６ アスハラギン［１８フルギニン　４〜６グルタミン酸　
   ８　セリン　８ アラニン　１４〜１６　グリシン　２０メチオニン　２
   　バリン　１４ ヒスチジン　２　ロイシン　１０〜１２スレオニン　１
   ０　チロシン　２ プロ　リン　６　フェニルアラニン　４１／２シスチン
   　１〜２　トリプトファン　１〜２（５）糖含量 １６．７　％ （６）糖組成 マンノースおよびグルコース （７）赤外部吸収スペクトル 第１図に示した通り （８）紫外部吸収スペクトル 第２図に示した通り （９）等電点 ｐＩ　＝　３．７５ ３ストレプトマイセス属に属するＡ−８９８物質生産菌
   がストレプトマイセスＡ−８９８株（ＦＥＲＪ４ｐ−７
   ３４０）である特許請求の範囲第２項記載の方法。 ４、下記の物理化学的性質を有する新規なＡ−８９８物
   質を有効成分とする抗腫瘍剤。 （１）形状 白色ないしは灰色の無定形粉末 （２）元素組成 ０：３３．４．９％、　Ｈ：５．２９％、　Ｎ：２．４
   ０％。 Ｓ　：　１．２２％、　灰分：１４．３４％（３）分子
   量 約２４０００ （４）アミノ酸組成 Ａ−８９８物質１分子中のアミノ酸残基数は下記の通り
   である リジン　４〜６　インロイシン　６ アスパラギン酸　１８　アルギニン　４〜６グルタミン
   酸　８　セリン　８ アラニン　１４〜１６　グリシン　２０メチオニン　２
   　バリン　１４ ヒスチジン　２　ロイシン　１０〜１２スレオニン　１
   ０　チロシン　２ プロ　リ　ン　６　フェニルアラニン　４１／２シスチ
   ン　１〜２　トリプトファン　１〜２（５）糖含量 １６．７　％ （６）糖組成 マンノースおヨヒクルコース （７）赤外部吸収スペクトル 第１図に示した通り （８）紫外部吸収スペクトル 第２図に示した通り （９）等電点 ｐＩ　＝　３．７５