JPS6035270A - ヘモグロビンの分解防止方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヘモグロビンの分解防止方法及びこれに用い
る試薬、に関するものである。

ヘモグロビｙ゛は、血液中に約１５　？　／　ｄｉの磯
度で存在している分子１６７０００の蛋白で、その分子
中には４個のヘム部が存在し、とのへム部は、プロトポ
ルフィリン１分子と鉄１原子より成り立っていて、生体
内に於て、酸素及び二酸化炭素の運搬を司る重要な役割
を担っている。

このようなヘモグロビンは、しばしば、溶血により、赤
血球から一部溶は出してしまう。この溶血の原因として
あげられるものには、（１）物理的溶血（浸透圧、振と
う、温塵、音波、輻射線など）、（２）化学的溶血（非
ｉｎ質、酸、アルカリ、界面活性剤、脂肋痔剤など）、
（３）生物学的浴面（溶血性貧血、黄桓性浴血、生体内
溶血）などがあり、そのほか、臨床化♀分析に於ては、
水の混入、保存（運搬）条件及び病的原因が主な原因と
なっている。

溶血の際は、赤血球が破壊されるため、赤血球内の酵素
が溶出し、この酵素に関連した測定項目に正誤差を与え
たり、赤血球から遊離したヘモグロビンから鉄が分離す
るため血清鉄測定の際に正誤差を与え、その際、ヘモグ
ロビンの吸収（λｍａ’ｘ：４］５．５４０，５７５　
ｎｍ）近辺が経時的に減少し、Ｒａｔｅ測定項目に於て
上昇法では負誤差を、減少法では正誤差を与えたりして
いる。更に、溶血性黄痕、溶血性貧血の際は、血清鉄則
定値が重要な診断材料となるが、特に除蛋白せずに血清
鉄を測定する場合、ヘモグロビンより分離した鉄は、こ
の測定に致命的ともいえる正誤差を与えてし丑っている
。このように、被検試料が溶血しているときは、その測
定値は極めて信頼性が薄くなる場合カ多く、このことは
、被検試料が生体試料であって測定対象が体液成分であ
るような臨床化学分析に於て最も対策に苦慮していた問
題の１っである。

本発明者らは、この問題の解決に付き鋭意研究の結果、
ヘモグロビンの安定化剤、即ち、ヘモグロビンのヘム部
からの鉄の遊離を防止する、ヘモグロビンの分解防止剤
として、特だの含窒素化合物又はその塩、が、特に有効
に作用する、との知見を得、本発明を完成するに至った
。

即ち、本発明は、下記一般式の、（２）、■、（４つ、
■、■、■、■及び■がら成る群より選ばれた１種又は
２棟以上の含窒素化合物又は／及びその塩を有効成分と
し、ヘモグロビンのヘム部からの鉄の遊離を防止する、
ヘモグロビンの分解防止方法及びこれに用いる試薬、の
発明である。

■ピリジン及びその誘導体 （式中、Ａは、Ｈ，Ｃ）又はＣＨｔＯＨを、Ｑは、Ｈ又
はＯＨを、表わす。） ■イミダゾール及びその誘導体 ルキル基又は−ＣＨ２（）−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃｏ２Ｈを表
わし、Ｔは、Ｈ、Ｈｒ　ＮＣＨｔ　ＣＨｚ−を表ゎす。

） ■ピラゾール ■１−フェニルー３−アルキルー５−ピラゾロン （式中、Ｇは、炭素数１〜４の低級アルキル基を表わす
。） ■４−アミノアンチピリン及びその誘導体ｈ （式中、Ｘ又はＹは、炭素数１〜４の低級アルキル基を
表わす。） ■トリアゾール ■０−　）　ＩＪレジンびその誘導体 （式中、Ｌ又はＭは、炭素数１〜４の低級アルキル基を
表わす。） ■トリエタノールアミン Ｎ　（ＣＨｔＣ１（−ＯＨ）− 以上■〜■で示される含窒素化合物又はその塩のうち、
特に著しく効果的な化合物を挙げると、次のとおりであ
る。

（１）３−ヒドロキシピリジン （１１）２−１０ロー３−ヒドロキシピリジン（ｉｉｌ
）　３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチルピリジン （１ｖ）イミダゾール （■）１−メチルイミダゾール （ｖｌ）ヒスタミン （Ｖｎ）　（Ｅ）　−３−（４−（１−イミダゾルメチ
ル）フェニル）　−２−７’ロペノインクアシツド・　
ＨＣノ　・　Ｈ！０ （ｖｌｉｌ）　１−フェニル−３−メチｉレ−５−ｅラ
ン゛ロン （ｉｘ）　４−アミノアンチピリン 又、次の、そのほかの含窒素化合物又はその塩について
も、ヘモグロビンの安定化効果が少し認められる。

（ｘ）　２．５−ジメチルピペラジン （Ｘｌ）チオ尿素 （ｘｉｉ）塩酸グアニジン （ｘｔｉｔ　）リジン （ｘｌｖ））リプトフプン 又、そのほかの特定の含窒素化合物又はその塩について
探索すれば、本発明の化合物と等価で同等な効果を示す
化合物が得られることは、充分に予測される。

これら本発明に使用される含窒素化合物又はその塩とは
、例えばピリジン、２−アミノピリジン、２−クロロ−
３−ヒドロキシピリジン、３−ヒドロキシ−２−ヒドロ
キシメチルピリジン、γ−コリジン、イソニコチン酸、
ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、２，５−ジメチル
ピペラジン、ウラシル、２−（Ｎ−モルホリノ）エタン
スルホンば、バルビッール酸、カフェイン、２−メチル
イミダゾール、ピロール、トリプトファン、ピラゾール
、ヒスチジン、２−メチルイミダゾール、４−アミノア
ンチピリン、トリアゾール、ポリビニールピロリドン、
Ｐ−アミノ安息香酸、０−トリジンなどの化合物で、特
に有効な化合物としては、３−ヒドロキゾピリジン、イ
ミダゾール、１−メチルイミダゾール、ヒスタミン、（
Ｅ）　−３−１：　４−（１−イミグリルメチル）フェ
ニル〕−２−プロベノイックアシソド・ＨＣＪ・Ｌｏ、
１−フェニル−３−メチル−５−ピラゾロンなどの化合
物が挙けられる。第１表に、これらの化合物によるヘモ
グロビンの安定化効果を示す。即ち、これらの化合物を
ｐ　Ｈ６，５のリン酸緩衝液に添加して、ヘモグロビン
の分解量を測定した結果が、第１表に示されている。

〔試薬〕

緩衝液：０．１ＭＩＪン酸緩衝液ｐ　Ｈ６，５、チオグ
リコール酸０．２％、含窒素化合物又はその塩０．５％ 発色液：２−二トロン−５−（Ｎ−プロピル−Ｎ−スル
ホプロピルアミノ）フェノール １５ｍＭ溶液 〔操作法〕 試料（人ヘモグロビン　５００キ／ｄ７！、１０００■
／ｄｌ水溶液）２００μノに、緩衝液２．０−を加え、
室温（２５℃）で１０分放置（この間に検体盲検の吸光
度を測定する。）後、発色液を１滴加えた後、室温で１
５分放置して７５０　ｎｍの吸光度を測定する。鉄標準
液の吸光度と対比して鉄の溶出量をめ、ヘモグロビンか
らの鉄の浴出量を。

へそグロビンの分解防止剤無添加の場合の鉄の溶出量を
１００としたときの、これとの相対値で示しである。

ヘモグロビンが、グロビン中のヒスチジンのイミダゾー
ル基と、ヘム部の鉄とが結合し成り立つていることは周
知の事実でおり、ヒスチジンに鉄の遊離を防止する働き
があるのではないかとの着想が得られる。しかしながら
、第１表から明らかなように、実際に、ヒスチジンには
ヘモグロビン安定化能力がそれほどなく、むしろ、他の
含窒素化合物又はその塩の方が、ヘモグロビンの安定化
能力を有しているという事実は、実に意想外のことであ
る。即ち、ヒスチジンを添加した場合は、無添加の場合
と比べて約５俤の防止力しか示さないのに対し、３−ヒ
ドロキシピリジン、イミダゾール、ｌ−メチルイミダゾ
ール、ヒスタミン、　（Ｅ）−３−（１−（１−イミダ
ゾルメチル）フェニルツー２−プロペノイックアシッド
・ＨＣｊ＋・ＨｔＯ又は１−フェニル−３−メチル−５
−ビラゾロンノヨうな化合物を添加した場合は、無添加
の場合に比べてそのヘモグロビン分解度が約１／１０８
度に減少する。また、イミダゾールは捷れに緩衝剤とし
て使われたり、アンモニア（尿素）定量用の発色剤とし
て使用されることもあるが、これらにはヘモグロビンの
安定化作用を目的とした本発明とは何ら関連をもつもの
ではない。

第１図には、鉄の発色剤を含む緩衝液中に、ヘモグロビ
ンのみを添加した場合、ヘモグロビン及び血清を添、リ
シた場合、血清のみを添加した場合又はヘモグロビン及
びイミダゾールを添加した場合のヘモグロビンの分解度
の測定結果を示しである。ｐＨ５〜７の緩衝液中では、
ヘモグロビンのみを含む緩衝液はｐＨの高いもの程分解
速度が速いが、血清にヘモグロビンを添加したものは、
血清成分の安定化作用により、ｐ　Ｈ５，８付近を最大
にそれ以上のｐＨでは逆にヘモグロビンの分解度は低下
している。また、ヘモグロビンのみを含む緩衝液に０，
１％イミダゾールを添加したものの分解度を測定すると
、イミダゾールはｐＨの高い方がより有効に作用し、ｐ
　Ｈ６，５では無添加に比べ約１／２０となっている。

第２図に、ｐ　Ｈ６，５に於るイミダゾール添加量とヘ
モグロビンの分解量の関係を示す。イミダゾール０．１
５％の添加で、無添加に比べ１／１０以下に分１’Ｍｔ
ｌが低下することがわかる。

１だ、第２表には本発明の化合物でおるイミダゾール、
１−メチルイミダゾール又は３−ヒドロキシピリジンに
よるヘモグロビンの褪色防止効果を示す。即ち、第２表
は、０．１　Ｍ　トＩＩス緩衝液に基質溶解剤としてラ
ウリルベンゼンスルホン酸ナトリウム１，０％及びトリ
トンＸ−１００２係を加え、ｐＨを８４とした緩衝液に
本発明による化合物を添加して、ヘモグロビンの極太吸
収波長である４　１５　ｎｍに於る吸光度の変化を示し
たものである。

第２表　ヘモグロビンの褪色防止効果 本発明による化合物を無添加の場合、この条件下に於て
、ヘモグロビンは界面活性剤の作用もあって徐々に分解
し、その吸光度は経時的に減少する。従って、４１０ｎ
ｍ、５４０　ｎｍ又は５８０　ｎｍ付近で、上昇法のＲ
ａｔｅ測定方法′ヱＹは負６誤差−を与えることになる
が、本発明の化合物であるイミダゾールを添加したもの
の吸光度の変化量は、無添加のものに比べ著しく少なく
、ヘモグロビンの分解に起因する大幅な負誤差を回避で
きることを示している。

溶血した血清中の酵素活性を測定する際、例えばγ−グ
ルタミルトランスペプチダーゼ、ロイシンアミノペプチ
ダーゼ、シスチンアミノペプチダーゼ、アルカリホスフ
ァターゼ、コリンエステラーゼなどの酵素活性を測定す
るにあたり、本発明の化合物を添加することにより、一
般検体の測定値を変えず、溶血の影響を回避することが
できる。

更に、本発明の化合物は、ｐＨ５〜１２の範囲に於て適
当な酸との組合せで緩衝液としても働き、特に別途の緩
衝剤を必要としない場合もある。

このように、本発明は、本発明の化合物である特定の含
窒素化合物又はその塩の１種又は２種以上を、従来使用
してきた試液中に添加するのみで、ヘモグロビンから鉄
の溶出を防ぐとともにその吸収の減少を仰え、臨床化学
分析特に比色分析に与える正負の誤差を回避することが
でき、斯業に貢献するところ極めて犬なるものがある。

以下に実施例を示す。

実施例　１．血清鉄の測定 〔緩衝液〕 酢酸リチウム　２．７７Ｆ、ラウリル硫酸ナトリウム　
５２、イミダゾール　Ｑ、３ｒを水　８０ｍ１に溶解し
、ＨＣｉでｐ　Ｈ５，８とし、水で全ｌ１ｔ１００ゴと
する。使用時Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム２００■を
加える。

〔発色液〕

バソフェナンドロリンスルホン酸ナトリウム０．１７を
水　１０−に溶解する。

〔測定方法〕

血清試料　０．５　ｄに緩衝液　１．５−を加え、５３
５ｎｍの吸光度を測定してこれ全検体盲検とし、次に発
色試液１滴を加えて１０分間放置後、再び試薬ブランク
を対照に５３５　ｎｒｎの吸光度を測定して、盲検値を
差し引き検量線と対比させて血清鉄濃度を算出する。

比較例　１．血清鉄の測定 〔緩衝液〕 実施例　１．０組成からイミダゾールを除いたもの。

〔発色液〕

実施例　１．　に同じ。

〔測定方法〕

実施例　１．に同じ。

参考例　１゜血清鉄の測定（除蛋白法）〔第１液〕 ０．８ＮＨＣノ（０，２％チオグリコール酸を含む。）
〔第２液〕 １６％トリクロル酢酸 〔第３液〕 バソフェナンドロリンスルホン酸ナトリウム０．００１
Ｍ（酢酸ナトリウム　９％、水酸化ナトリウム　６．５
係） 〔測定方法〕 血清試料１．０−に第１液１．０−を加え混合、後、水
浴（８０〜９５℃）で約２分間、加温する。さらに第２
液１．０πｌを加え、１５分間呈温に放置後、１５分間
遠心沈殿分離（２５００ｒ、ｐ、ｍ、）　Ｌ、その上清
１．５ｒｎｌｋ別の試験管にとる。これに第３液０．５
　ｍｌをカロえよく振盪し混合して、Ｂノ（ブランク）
を対照に５３５　ｎｍの吸光度を測定し、検量線と対比
させて血清鉄濃度を算出する。

実施例１、比較例１及び参考例１による血清鉄の測冗結
果（＊印は溶血ゴロ清）を次表に示す。

このように本発明の化合物であるイミダゾールを添加し
ても、一般検体測定値を変えずに溶血による正誤差を回
避でき、除蛋白法とよい相関を示し１本発明により正確
に血清鉄が測定されていることがわかる。

実施例　２　γ−グルタミルトランスペプチダーゼの測
定 〔緩衝液〕 トリスヒドロキシメチルアミノメタン　１．２１２、ラ
ウリルベンゼンスルホンを俊ナトリウム　１９、トリト
ンＸ−１００２９、グリシルグリ７ン　０．５３ｇ、イ
ミダゾール　０，５ｖ、アジ化ナトリウム　０．１７を
水　８０ｒｎｌＫＭかし２て、塩酸でｐ　Ｈ８，４とし
、水で全量１００　ｍｅとする。

〔基質液〕 し−γ−グルタミルーｐ−ニトロアニリド２８５ｆｆｌ
Ｐｋ０．ＩＮ硫酸　５０７！に溶解する。

〔測定方法〕

血清試料　５０μノに緩衝液２．０ｍｌを加え、３７℃
で３分間加温する。基質液　０．５　ｍｌを加え、３７
℃で１分間加温後、４１０　ｎｍに於る吸光度の増加を
測定し、周知の方法によりｒ−グルタミルトランスペプ
チダーゼの活性値を算出する。

比較例　２．１−グルタミルトランスペプチダーゼの測
定 〔緩衝液〕 実施例　２．　の組成からイミダゾールを除いたもの。

〔基質液〕

実施例　２．に同じ。

〔測定方法〕

実施例　２．に同し。

実施例　３．　γ−グルタミルトランスペプチダーゼの
測定 〔緩衝液〕 トリスヒドロキシメチルアミノメタン　１．２１ｔ、ラ
ウリルベンゼンスルホン酸ナトリウム　１２、トリトン
Ｘ−１００２Ｆ、グリフルグリシン　０．５３　ｒ、１
−メチルイミダゾール　０．５２、アジ化ナトリウム　
０．１ｆｔ−水　８０ゴに溶かして、塩酸でｐ　Ｈ８，
４とし、水で全量　１００−とする。

〔基質液〕

実施例　２．に同じ。

〔測定方法〕

実施例　２．　に同じ。

実施例　４．　γ−グルタミルトランスペプチダーゼの
測定 〔緩衝液〕 トリスヒドロキシメチルアミノメタン　１．２１１、ラ
ウリルベンゼンスルホン酸ナトリウム　１２、トリトン
Ｘ−１００２１、グリシルグリシン　０．５３９、イミ
ダゾール　０．５２、アジ化ナトリウム　０．１９を水
　８０づに溶かして、塩酸でｐｆ（８，４とし、水で全
量１ｏｏｍｉとする。

〔基質液〕

実施例　２．に同じ。

〔測定方法〕

実施例　２．に同じ。

実施例　２１、実施例　３１、実施例　４．及び比較例
　２．　によるγ−グルタミルトランスペプチダーゼの
測定結果を次表に示す。（＊印は溶血血清）このように
本発明の化合物であるイミダゾール、１−メチルイミダ
ゾール又は３−ヒドロキシピリジンを添加しても、一般
検体測定値を変えずに溶血による負誤差を回避できるこ
とがわかる。

また、ロイシンアミノペプチダーゼ、シスチンアミノベ
プチターゼ、アルカリホスフプターゼ、コリンエステラ
ーゼなどの酵素活性測定の場合も、同様ＶＣ一般検体の
測定値を変えず溶血の影響を回避することができる。

実施例　５．不飽和鉄結合能測定（ｔＪＩＢｃ測定）に
於る溶血（ヘモグロビン）ノ影響 〔緩衝液〕 トリスヒドロキシメチルアミノメタン　１２．１？、ク
エン酸　２１０■、ブリッジ３５１２．１−メチルイミ
ダゾール　０．５７及び硫酸第一鉄アンモニウム’（ｉ
７Ｆｅとして　１００μｒｌｋ　８０ｍ１に浴解し、塩
酸でＰ　Ｈ８，６として、全量を水で１００−とする。

使用時、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム　２００■を添
加する。

〔発色液〕

２−ニトロン−５−（Ｎ−プロピル−Ｎ−スルホプロピ
ルアミノ）フェノール　０．１２を水１〇−に溶解する
。

〔測定方法〕

試料溶液として、人血清１００ｒｎｌ中にヘモグロビン
を各々２００．４００．６００．８００．１０’）ＯＷ
／ｄ／！添加したものを用いる。

試料溶液２００μノに上記鉄含有の緩衝液２．０−を加
え、３温で１５分間放瞳後、７５０　ｎｍ　の吸光度全
測定する。次に発色試液全１滴加え混４０俊、室温で１
５分間放置後、再び７５０　ｎｍの吸光度を測定し、検
体盲検を差し引いて鉄の減少量をめ不飽和鉄結合能をめ
ゐ。

比較例　３．不飽和鉄結合能測′）ｔに於る溶血（ヘモ
グロビン）の影響 〔緩衝液〕 実施例　５．　の組成から１−メチルイミダゾールを除
いたもの。

〔発色液〕

実施ｆ１１　５　に同じ。

〔測定方法〕

実施例　５　に同じ。

実施例　５０、及び比較例　３１、による不飽和鉄結合
能の測定結果を次表に示す。

このように、不飽和鉄結合叱測雉に於て、本発明化合物
である１−メチルイミダゾールを面別することにより、
容易に溶血（ヘモグロビン）の影響を回連できる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、鉄の発色剤を含む緩衝液中に、（１）へモグ
ロビン（５００■／１ｔｅ）のみを添加した場合、（２
）ヘモグロビン（５００’ｍｆ／ｄｌ）及び血清を添加
した場合、（３）血清のみを添加した場合、（４）ヘモ
グロビン（５００ｍｆ／ｄ／り及びイミダゾールを添加
した場合、の夫々に於けるヘモグロビンの分解量とｐＨ
の関ｖｆ、を表わしたもので、横軸はｐＨを、縦軸はＦ
ｅの溶出量（μｆ／ｄ７りを表わす。 第２図はｐＨ６，５に於るイミダゾール添加量とヘモグ
ロビンの分解量の関係を表わしたもので、横軸はイミダ
ゾール冷力日量（％）を、縦軸はＦｅの溶出量（μｒ／
ｄｇ）を表わす。（ヘモグロビン５００号儒水溶／’Ｉ
ｆｅ試料として用いる。） 特許出願人　和光縄薬工業株式会社 雲　Ｉ　Ｖ 第　２Ｖ イミダゾール添加量。 手続補正書動式） 昭和５８年１２月１ｑ日 １　事件の表示 昭、１１］５８年特許願第１４４２００号２　発明の６
称 ３　補正をする者 臭性どの関係　特許出願人 郵便番号　５４１ 連絡先　特許課（東京）　πＬ　０３−２７０−８５７
１５、　補正の対象 明細書。 ６　補正の内容 明細書の浄書（内容に変更なし）。 別紙の通り。 以上 手続補正書 昭和ケ９年／７月　７日 １　事件の表示 対和５８斗埼許願鴇１〃ゲ２００号 ２　発明の名称 ３　補正をする者 事件どの関係　特許出願人 郵便番号　５４１ 連絡先　特許課（東京）　置　０３−２７０−８５７１
５、補正によシ減少する発明の数　１ ６、補正の対象 明細書の発明の名称の欄、及び特許請求の範囲の欄。 ７、補正の内容 （１、発明の名称の欄に記載の「ヘモグロビンの分解防
止方法及びこれに用する試薬」を［ヘモグロビンの分解
防止方法］と補正する。 （２、特許請求の範囲を別紙のとおシ補正する。 以上 別　紙 ２、特許請求の範囲 （１）下記一般式■、■、■、■、■、■、■、■及び
■から成る群よシ選ばれた１種又は２種以上の含窒素化
合物又は／及びその塩を有効成分とし。 ヘモグロビンのヘム部からの鉄の遊離を防止する。 ヘモグロビンの分解防止方法。 ■ピリジン及びその誘導体 ０式中、Ａは、Ｈ，Ｃ１又はＣＨ，ＯＨを、Ｑは、Ｈ又
はＯＨを１表わす。） ■ピリダジン ■イミダゾール及びその誘導体 ０式中、Ｅは、Ｈ１炭素数１〜４の低級アを表わし、Ｔ
は、　Ｈ，Ｈ２Ｎ　ＣＨ２ＣＨ２−を表わす。） ■ピラゾール ■１−フェニルー３−フルキルー５−ピラゾロン ｈ ０式中、Ｇは、炭素数１〜４の低級アルキル基を表わす
。） ■４−アミノアンチピリン及びその誘導体覗 ｈ ０式中、Ｘ又はＹは、炭素数１〜４の低級アルキル基を
表わす、、） ■トリアゾール ■ｏ　−トＩＪジン及びその誘導体 ｃ式中、Ｌ又はＭは、炭素数１〜４の低級アルキル基を
表わす、、） ■トリエタノールアミン Ｎ　（ＣＨ２ＣＨ２０Ｈ）ａ （２）臨床化学分析に於る溶血の影響を回避する目的で
ヘモグロビンの分解を特徴する特許請求の範囲第１項記
載の、ヘモグロビンの分解防止方法。 （３）臨床化学分析が、血清鉄の分析である。特許請求
の範囲第２項記載の、ヘモグロビンの分解防止方法。 （４）臨床化学分析が、不飽和鉄結合能の分析である。 特許請求の範囲第２項記載の、ヘモグロビンの分解防止
方法。 （５）臨床化学分析が、γ−グルタミルトランスペプチ
ダーゼの分析である１％許請求の範囲第２項記載の、ヘ
モグロビンの分解防止方法。 （６）臨床化学分析が、ロイシンアミノペプチダーゼの
分析である、特許請求の範囲第２項記載の、ヘモグロビ
ンの分解防止方法。 （７）臨床化学分析が、Ｌ−シスチンアミノトランスペ
プチダーゼの分析である。特許請求の範囲第２項記載の
、ヘモグロビンの分解防止方法。 （８）臨床化学分析が、アルカリホスファターゼの分析
である。特許請求の範囲第２項記載の、ヘモグロビンの
分解防止方法。 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）下記一般式■、■、■、■、■、■、■、■及び
   ■から成る群より選ばれた１種又は２種以上の含窒素化
   合物又は／及びその塩を有効成分とし、ヘモグロビンの
   ヘム部からの鉄の遊離を防止する、ヘモグロビンの分解
   防止方法。 ■ピリジン及びその誘導体 （式中、Ａは、Ｈ，Ｃ）又はＣＨｔ　ＯＨを、Ｑは、Ｈ
   又はＯＲを、表わ丁。） ■ピリダジン ■イミダゾール及びその誘導体 （式中、Ｅは、Ｈ１炭素数１〜４の低級アルキル基又は
   −ＣＨｌ（）−ＣＩ（＝ＣＨ−Ｃｏ、Ｈを表わし、Ｔは
   、Ｈ，Ｈ，ＮＣＨ，ＣＨ，−を表わす。） ■ピラゾール ■Ｊ−フェニルー３−アルキルー５−ピラゾロン （式中、Ｇは、炭素数１〜４の低級アルキル基を表わす
   。） ■４−アミノアンチピリン及びその誘導体（式中、Ｘ又
   はＹは、炭素数１〜４の低級アルキル基を表わす。） ■トリアゾール ■０−　）　ＩＪレジンびその誘導体 （式中、Ｌ又はＭは、炭素数１〜４の低級アルキル基を
   表わす。） ■トリエタノールアミン Ｎ　（ＣＨＩＣＨ，ＯＨ）ｓ （２）臨床化学分析に於る溶血の影響を回避する目的で
   ヘモグロビンの分解を特徴する特許請求の範囲第１項記
   載の、ヘモグロビンの分解防止方法。 （３）臨床化学分析が、血清鉄の分析である、特許請求
   の範囲第２項記載の、ヘモグロビンの分解防止方法。 （４）臨床化学分析が、不飽和鉄結合能の分析である、
   特許請求の範囲第２項記載の、ヘモグロビンの分解防止
   方法。 （５）臨床化学分析が、γ−グルタミルトランスペプチ
   ダーゼの分析である、特許請求の範囲第２項記載の、ヘ
   モグロビンの分解防止方法。 （６）臨床化学分析が、ロイシンアミノペプチダーゼの
   分析である、特許請求の範囲第２項記載の、ヘモグロビ
   ンの分解防止方法。 （７）臨床化学分析が、Ｌ−シスチンアミノトランスペ
   プチダーゼの分析である、特許請求の範囲第２項記載の
   、ヘモグロビンの分解防止方法。 （８）臨床化学分析が、アルカリホスファターゼの分析
   である、特許請求の範囲第２項記載の、ヘモグロビンの
   分解防止方法。 （９）下記一般式■、■、■、■、■、■、■、■及び
   ■から成る群より選ばれた１種又は２棟以上の含窒素化
   合物又は／及びその塩を有効成分とし、ヘモグロビンの
   ヘム部からの鉄の遊離を防止する、ヘモグロビンの分解
   防止に用いる試薬。 ■ピリジン及びその誘導体 （式中、Ａは、Ｈ，ＣＡ又はＣＨ２０Ｈを、Ｑは、Ｈ又
   はＯＨを、表わす。 ■ピリダジン ■イミダゾール及びその誘導体 （式中、Ｅは、■、炭素数１〜４の低級アルキル基又は を表わし、Ｔは、Ｈ，Ｈ，ＮＣＨ，ＣＨ，−を表わす。 ） ■ピラゾール 鳥 ■１−フェニルー３−アルキルー５−ビランｐＨ （式中、Ｇは、炭素数１〜４の低級アルキル基を表わす
   。） ■４−アミノアンチピリン及びその誘導体ｈ （式中、Ｘ又はＹは、炭素数１〜４の低級アルキル基を
   表わす。） ■トリアゾール ■０−）リジン及びその誘導体 （式中、Ｌ又はＭは、炭素数１〜４の低級アルキル基を
   表わす。） ■トリエタノールアミン Ｎ　（ＣＨａ　Ｃ）Ｉ！　ＯＨ）ｘ ｑり臨床化学分析に於る溶血の影響を回避する目的でヘ
   モグロビンの分解を特徴する特許請求の範囲第９項記載
   の、ヘモグロビンの分解防止に用いる試薬。 ａρ臨床化学分析が、血清鉄の分析である、特許請求の
   範囲第１Ｏ項記載の、ヘモグロビンの分解防止に用いる
   試薬。 （６）臨床化学分析が、不飽和鉄結合能の分析である、
   特許請求の範囲第１０項記載の、ヘモグロビα罎臨床化
   学分析が、γ−グルタミルトランスペプチダーゼの分析
   でおる、特許請求の範囲第１０項記載の、ヘモグロビン
   の分解防止に用いる試薬。 α→臨床化学分析が、ロイシンアミノペプチダーゼの分
   析である、特許請求の範囲第１０項記載の、ヘモグロビ
   ンの分解防止に用いる試薬。 （へ）臨床化学分析が、Ｌ−シスチンアミノトランスペ
   プチダーゼの分析でるる、特許請求の範囲第１０項記載
   の、ヘモグロビンの分解防止に用いる試薬。 ＱＱ臨床化学分析が、アルカリホスファターゼの分析で
   ある、特許請求の範囲第１０項記載の、ヘモグロビンの
   分解防止に用いる試薬。