JPS61137893A - アンスラサイクリン化合物ｒ２０ｘ４ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 本発明は、新規なアンスラサイクリン化合物に関する。

制癌性抗生物質としてのアンスラサイクリン化合物は医
薬として１華な位置を占めており、既に各種のものが提
案されている。

一般に、化学物質の生理活性はその化学構造に依存する
ところが大きいから、アンスラサイクリン化合物につい
てもそのアグリコン部分および糖部分の種類または置換
基において既存のものと異なる化合物に対しては不断の
希求があるといえよう。

発明の概要 本発明は、上記の希求に応えるものである。

すなわち、本発明によるアンスラサイクリン化合物Ｒ２
０Ｘ４は、下式で示されるものである。本発明はこの化
合物の酸付加塩にも関する。

発明の詳細な説明 １）化学構造 本発明によるアンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｘ４は、
上記の式（Ａ）で示される化学構造を有する。

この化学構造は、下記のようにして決定された。

Ｒ２０Ｘ４を０．ＩＮ塩酸に溶解し、９０’Ｃで加分間
加水分解することにより、アグリコン部分と糖部分とを
得た。それぞれを薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）に
より、標準物質と比較した結果、アグリコンはＩ−ロド
マイシノン（７１−Ｒｈｏ拍ｖｅｉｎｏｎｅ　）為糖は
ダウノサミン（Ｄ＆ｕｎｏｓａｍｉｎｅ　）と一致した
◎さらに、Ｒ２０Ｘ４およびアグリコ／部の紫外部可視
部吸収スペクトル、赤外吸収スペクトル、核磁気共鳴ス
ペクトル、ＦＤマススペクトル、元素分析等の結果より
、Ｒ２０Ｘ４の構造は下記のとおりに決定された。

構造 ２）物理化学的性状 （１）外　　観：黒褐色粉末 分析値　６０，３１　５．９１　２，６１　３１．１７
計算値　６０．５７　５．６７　２，７２　３１．０４
（３）分子量：　５１５，５ （４）融　点：　１７５−１７７℃ （５）比旋光度 〔α）、＝＋８６°（Ｃ−０，０５、ＣＨＣ１ａ　：　
ＭｅＯＨ＝１　：　１　）（６）紫外部可視部吸収スペ
クトル 第１図に示した通りである。

メタノール中： λｍｙｃ　ｎｍ　（Ｅ　’％） ２３６（７３２）、２５２（４３５）、２９２（１７９
）、４７０（２２０）、４９６（２５８）、５１６（１
９９）、酸性メタノール中： １％ Ａ　ｍａｘ　ｒｒｎ　（Ｅ　１．、　）２３７（７７７
）、２５４（４６４）、２９４（１９３）、４７０（２
３２）、４９６（２７５）、５１８（２０２）、アルカ
リ性メタノール中： １％ λｍａｘ　ｎｍ　（Ｅ　１．　） ２４０（６７０）、２８２（１９５）、５６６　（２０
９）（７）ＦＤマススペクトル 第４図に示した通りである。

ｍ／ｚ　＝　５１６　　（ＭＬＩ　）＋（８）　　赤外
吸収スペクトル（臭化カリウム法）第２図に示した通り
である。

（９）　　プロトン核磁気共鳴スペクトル（１００メガ
ヘルツ、重クロロホルム中）第３図に示した通りである
。

（１０）　Ｒｆ値 展開系　　　Ｒｆ値 ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝　２　：　１　　　０．１５＝
９：３：０，１　０，２４ ＣＨＣｌ３：ＭａＯＨ：ＡｅＯＨ ＝９７３：０，１０．４２ （’５’Ｃ、メルク社シリカゲ号便用）（１ｊ）俗解性 酸性水、塩基性水、メタノール、エタノール、ｎ−ｆロ
バノール、アセトン、＠：酸エチル、クロロホルムに可
溶。水、ヘキサン、シクロヘキサン、ジエチルエーテル
、石γ由エーテルに不俗。

Ｒ２０Ｘ４はメタノール浴衣中で褐色であるが、アルカ
リ性で青紫色に変色する。

この化合物は糖部分に一級アミノ基を有するので、その
酸付加塩がありうる。この場合の酸としては、塩酸およ
び硫酸が代表的なものとして挙げられる。

Ｒ２０Ｘ４の製造 １）概要 アンス２サイクリン化合物Ｒ２０Ｘ４は現在のところ微
生物の培養によってのみしか得られていないが、類縁化
合物の合成化学的または微生物学的修飾によって製造す
ることも、あるいは全合成化学的に製造することもでき
よう。

微生物の培養による場合の菌株としては、アクチノマジ
ュラ属に禰するＲ２０Ｘ４生成能を有す、るものが使用
される。具体的には、本発明者らの分離したアクチノマ
ジュラ・ロゼオビラセエＲ２０がＲ２０Ｘ４を生理する
ことが本発明者らによって明らかにされているが、その
他の菌株については抗生物質生産菌単離の常法によって
適当なものを自然界より分離することが可能である。ま
た、Ａ。

ロゼオビオラセエＲ２０を含めてＲ２０Ｘ４生産菌を放
射線照射その他の処理に付して、Ｒ２０Ｘ４生産能を高
める余地も残されている。

２）　Ｒ２０株 アンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｘ４生産能を有するア
クチノマ、ジュラ属の菌株として本発明者らの見出して
いるＲ２０株は、下記の内容のものである。

（１）由来および寄託番号 Ｒ２０株は福岡県嘉穂郡嘉穂町大字小野谷の野菜畑で採
取した土壌から分離されたものであり、昭和お年７月５
日４Ｃ工業技術院做生物工業技術研究所に寄託されて［
微工研園寄第７１３８号」の番号を得ている。

（２）菌学的性状および生理学的性質 国際放８１１命名委員会（ＩＳＰ）の方法便覧に従って
行なった本菌株の特徴づけは、下記の通りである。

Ａ）形態性状 着生―糸は分枝しながら寒天培地表面に放射状に広がり
、耐糸の分断は観察されない。空中菌糸は主軸を長（伸
ばし、短枝をはｙ直角（主軸に対して）に分岐（単軸分
校）シ、その先端に１０個内外またはそれ以上の胞子か
らなる密な小螺旋状胞子鎖（１〜３回転、径２．０〜２
．５μ）及び擬似胞子嚢（径２．５〜３．５μ）や胞子
塊を形成する。

胞子鎖は巾０．５〜０．８μの円筒状シースに覆われ、
その表面は粗面状を呈し、個々の胞子は指骨状に連結す
る。胞子塊は不定形で、その胞子表面は粘質状物質で包
まれている。遊離胞子はまれに観察され、円筒形または
長円形、巾０．５〜０．８μ、長さ０．７〜１．１μ、
平滑表面を呈する。真正胞子詐、鞭毛胞子、菌核などは
観察されない。全細胞加水分解物中にメゾ型ジアミノピ
メリン酸とマジュロースを含むことから、細胞壁タイプ
は璽Ｂと判断される。

Ｂ）培養性状 各棟培地における培養性状（２７℃培養）の観察結果は
、表１に示す通りである。

Ｃ）生理的性状 生理的性状（炭素源の同化性を含む）は、表２に示す通
りである。

Ｄ）考察および同定 本菌株は、（１）細胞壁タイプがＩＩＢであり、（２）
胞子鎖は１０個またはそれ以上の胞子からなり、（３）
擬似胞子嚢や胞子塊を形成し、（４）真正胞子嚢及び鞭
毛胞子が観察されないことから、アクチノマジュラ（Ａ
ｃｔｉｎｏｒｍｄｕｒａ　）属に所属すると判断される
。

野々村の検索表（醗工、第５２巻、７１〜７７頁、１９
７４年〕と記載〔醗工、第４９巻、９０４〜９１２頁、
１９７１年〕より、本１株はＡ、ロゼオビオラセエ（Ａ
。

ｒｏｓｅｏｖｔｏｌａｅｅａ　）に最も、近緑であると
判断される。

そこで、本菌株と、Ａ、ロゼオビオラセエの標準菌株Ｃ
ＫＣＣＡ−１４５（野々村Ａ−５））を同条件下で培養
し、両菌株の主要な性状について比較した。結果は表３
に示されるように、菌兼色、夷面色及び最適生育温度に
僅少な差異がみられるものの、分類学的には極めてよく
類似している。よって、本菌株は、アクチノマジュラ・
ロビオビオラセエ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　ｒｏｓ
ｅｏｖｉｏｌａｃｅａ　Ｎｏｎｏｍｕｒ＠ｅｔ　０ｈａ
ｒａ１９７１　）であると同定された。

３）培養／Ｒ２０Ｘ４の生産 アンスラサイクリンＲ２０Ｘ４は、アクチノマジュラ属
に属するＲ２０Ｘ４生産菌を適当な培地で好気的に培養
し、培養物から目的物を採取することによって製造する
ことができる。

培地は、Ｒ２０Ｘ４生産菌が利用し５る任意の栄養源を
含有するものでありうる。具体的には、例えは、炭素源
としてグルコース、シェークロース、マルトース、スタ
ーチ、および油脂類などが使用でき、窒素源として大豆
粉、綿実粕、肉エキス、ペプトン、乾燥酵母、酵母エキ
ス、およびコーンスチーゾリカーなどの有機物並びにア
ンモニウム塩または硝酸塩、たとえば硫酸アンモニウム
、硝酸ナトリウム、および塩化アンそニウム等の無機物
が使用できる。また、必要に応じて、食塩、塩化カリウ
ム、リン酸塩、重金属塩なと無機塩類を添加することが
できる。発酵中の発泡を抑制する為に１常法に従って適
当な′消泡剤、たとえばシリコーンを添加することもで
きる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
の方法と同じく、好気的液体深部培養法が最も適してい
る。培養温度はδ℃〜４５℃が適当であるが、ｎ℃〜（
至）℃が好ましい。この方法でＲ２０Ｘ４の生産量は、
振糧培養、通気攪拌培養共に６日〜７日で最高に達する
。

このようにしてＲ２０Ｘ４の蓄積された培養物が　　　
　得られる。培養物中では、Ｒ２０Ｘ４はその一部は菌
体中に存在するが、その大部分は培養Ｆ液に存在する。

このような培養物からＲ２０Ｘ４　ｔ−採取するには、
合目的的な任意の方法が利用可能である。その一つの方
法は、抽出の原理に基くものであって、具体的には、た
とえば、培養Ｐ液中のＲ２０Ｘ４についてはこれを永年
協和性のＲ２０Ｘ４用浴媒（前記参照）例えば酢酸エチ
ル、クロロホルム、ブタノール等で抽出する方法（培養
Ｐ液は中性ないし微塩基性であると抽出効率が良好であ
る）、あるいは菌体内のＲ２０Ｘ４については濾過、遠
心分離等で得た一体集体をクロロホルム、酢酸エチル、
ブタノール、メタノール、エタノール、アセトン、塩酸
溶液または酢酸浴液なとで処理して回収することができ
る。菌体を分離せずに培養物そのま〜を上記の抽出操作
に付すこともできる。適当な溶媒を用いた向流分配法も
抽出の範叫に入れることができる。

培養物からＲ２０Ｘ４を採取する他の方法の一つは、吸
着の原理に基くものであって、既に液状となっているＲ
２０Ｘ４含有物、例えば培養戸液あるいは上記のように
して抽出操作を行なうことによって得られる抽出液、を
対象として、適当な吸着剤、例えは活性炭、アルミナ、
シリカゲル、［゛ダイヤイオンＨＰ２０Ｊ（三菱化成社
製）、等を用いたカラムクロマトグラフィー、液体クロ
マトグラフィー、その他によって目的Ｒ２０Ｘ４を吸着
させ、その後溶離させることによって、Ｒ２０Ｘ４を得
ることができる。このようにして得られたＲ２０Ｘ４浴
液を減圧濃縮乾固すれば、Ｒ２０Ｘ４の粗標品が得られ
る。

このようにして得られるＲ２０Ｘ４の粗標品をさらに精
製するためＫは、上記の抽出法および吸着法を必要に応
じて組合せて必要回数実施すればよい。例えば、シリカ
ゲル、弱酸性イオン交換樹脂、活性炭などの吸着剤また
はゲル濾過剤を用いたカラムクロマトグラフィー、適当
な溶媒を用いた液体クロマトグラフィー、および向流分
配法を適宜組合わせて実施することができる。具体的に
は、例えば、Ｒ２０Ｘ４粗標品を少量のクロロホルムに
浴解し、シリカゲルカラムを用いて、適当な溶媒で展開
して活性成分を溶出させ、浴出液を減圧濃縮後、吏ＫＴ
ＬＣで展開し、活性成分をかきとり、溶媒で溶出させる
とＲ２０Ｘ４が単一物質として分離されるから、これを
濃縮してから適当な溶媒から晶析させて、Ｒ２０Ｘ４を
結晶として得ることかできる。

Ｒ２０Ｘ４の用途 本発明によるアンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｘ４は、
マウス白血病培養細胞（Ｐ３８８　）の増殖を顕著に阻
害する活性を有し、制癌剤としての利用が期待される有
用な化合物である。

すなわち、所定量のＲ２０Ｘ４と１０％牛脂児血清とを
含むＲＰＭＩ　１６４０　培地（Ｒｏｓｅｗｅｌｌ　Ｐ
ａｒｋＷＩｅｍｏｒｉａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　１６
４０　）へＰ３８８培養細胞を５×１０４ケ／ｍｌ接種
し、３７℃炭酸ガス培養器中で培養して、それぞれ増殖
量を測定して対照区（薬剤無添加）の５０チ増殖阻害濃
度（ＩＤ５８μｇ／ｍｌ）を求めたところ、６．０３９
μｇ／ｍｌであった。

実　　　験　　　例 以下において「チ」はｒ　ｗ／ｖ　％　Ｊである。

実施例１ （１）種母の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解してｐＨ７，２に調整したものである。

ポリペプトン　　　　１％ モラセス　　　　　　１チ 肉エキス　　　　　　１％ 上記培地１００　ｍｌを５００　ｍｌ三角フラスコに分
注殺菌し、アクチノマジュラ・ロゼオビオラセエＲ２０
をスラントより１白金耳接柚し、２７’Ｃにて５日間ロ
ータリーシェーカー（２００ｒｐｍ　）で培養したもの
を種母とした。

（２）培養 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解してｐＨ７，４に調整したものである。

ブドウ楯　　　　　　　　２．５　％ 大豆粉　　　　　　　　１．５％ 乾燥酵母　　　　　　　０．２チ 炭酸カルシウム（沈降性）　　　０．４％上記培地δリ
ットルｔ−関リすトル容ジャーファーメンタ−に入れて
殺菌したものへ、上記種母３本分を接種した。通気ｆ１
　ｖ、ｖ、ｍ　、回転数２０゜ｒｐｍ、２７℃で７日間
培養を行った。

（３１Ｒ２０Ｘ４の採取 培養後、培養液ｔ−濾過し、菌体とＦ液とを分なした。

Ｐ液をＩＮ塩酸でｐ）Ｉ　２に調整し、「ダイヤイオン
１（Ｐ２０Ｊ（三菱化成社製）のカラム（１０Ｘ４０　
ｃｍ　）　　に吸着させた。蒸留水および５０％メタノ
ールで洗浄した後、メタノールで浴出した。

溶出液を漉網し、濃縮液をｐＨ８，５に調整し、クロロ
ホルム−メタノール（９：１）混液で３回反復抽出した
。この抽出液を濃縮し、６倍量のベキサンを加え、生じ
た沈澱を乾燥すると、赤色粉末２５０　ｍｇ　　を得た
（　Ｒ２０Ｘ４粗標品の取得）。

実施例２ 実施例１で得られたＲ２０Ｘ４粗標品２５０　ｍｇをク
ロロホルムに溶解し、シリカゲル２５０ｇをクロロホル
ムで平衡化したカラム（４Ｘ４０ｃｍＣにのせ、クロロ
ホルム：メタノール＝１０：１でカラムを洗浄した後、
クロロホルム；メタノール：水＝７　：　１　：　０．
１でＲ２０Ｘ４自分を溶出した。得られた画分を減圧乾
固した後、クロロホルム：メタノール：酢酸＝９７３：
０．１の温媒系を用いてＴＩ、Ｃにて展開し、Ｒｆ値０
．４２付近の橙色−分をかきとった。得られたシリカゲ
ルよりＲ２０Ｘ４をクセロホルム：メタノール＝１０：
１で抽出後、クロロホルム中で結晶化して、Ｒ２０Ｘ４
２ｍＷを得た。

１、　メタノール中 ２、酸性メタノール中

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 下式で示されるアンスラサイクリン化合物 Ｒ２０Ｘ４またはその酸付加塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼