JPS62126146A

JPS62126146A - センブラトリエントリオ−ルおよびその製造方法

Info

Publication number: JPS62126146A
Application number: JP26610785A
Authority: JP
Inventors: Yoshinari Yamazaki; 山崎　嘉也; Yoichi Mikami; 三上　洋一
Original assignee: Japan Tobacco Inc
Current assignee: Japan Tobacco Inc
Priority date: 1985-11-28
Filing date: 1985-11-28
Publication date: 1987-06-08
Also published as: JPH0523250B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、２，７．１１−センブラトリエン−４，６−
ジオールに微生物を作用させることにより得らｎる新規
な化合物２，７．１１−センプラトリエンー４，６．１
０−）ジオールに関するものである。本化合物はたばこ
用香喫味改良に有効な新規物質である。

〔従来技術〕

従来、たばこの製造工程で喫煙物に添加することにより
、より好ましい喫味や香味を付与したり、あるいは喫煙
物素材の有する香喫味を改善するのに有効な化合物は、
既に数多く知られている。２．７．１１−セングラトリ
エン−４，６−ジオールもその１つである。

〔発明が解決しようとする問題点）本発明は、最近の製品たばこの香喫味に対する消費者の
多様なニーズに対応しうる新しい加香料の開発と提供を
目的としてなされたものである。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、式（１）で示される２、７．１１−セン
プラトリエン・−４，６−ジオール〔以下、化合物（１
）という〕にバチルス・メガテリウム（１３ａｃｉｌｌ
ｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ　）　ＮＨ５（微工研菌寄第
４４４８号）を作用させることにより、変換物質として
没ｎた香喫味改良効果を有する式（１）で示される新規
な化合物２，７．１１−センブラトリエン−４＋　ｂ　
Ｔ　１０−トリオール〔以下、化合物（１）という〕が
得らｎることを見出し本発明をなすに至った。

以下に、分析データを示す。

分子式二〇、。ＨＩ３　ｏ。

分子量＝３２２赤外吸収スペクトル：　３４００ｃｍ−’　、　１６５
３ｃｆ’核磁気共鳴スペクトル。

’　Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ８．　ＴＭＳ　）　、δ（ｐ
ｐｍ）　：０．８１（３Ｈ，ａ　、Ｊ＝６．７　）０．
８４（３Ｈ，ａ　、Ｊ：＝６．５　）１．３９（３Ｈ，
ｓ）、１．５５（３Ｈ，ｓ）、１．６４（３Ｂ、ｓ）１
．８６１　ｉｎ、ｄｄ、ｔＴ＝ｓ、ａ、　１４．４）２
．０３（１）１．ｄｄ、Ｊ＝１．１，１４．７）２．１
０（１１−１，ｔ、　Ｊ＝１１．５）２．５８（１）１
．ｄｄ、Ｊ：４．９，１２．３）４．７６（１）Ｌ、　
ｔ　）５．１８（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝７．３）５．２３（ＬＨ，ａａ、Ｊ＝９．１，１５．７）５．３
３（ＩＨ，ａ、Ｊ＝９．８）５．３６（１）１．　ｄ　、Ｊ＝１５．６　）”Ｃ−Ｎ
ＭＲ，（ＣＤＣら、ＴＭＳ）、　　δ（ｐｐｍ）　　：
１４．６（ｓＪ、　　１６．２（ｓ）、　　１９．４（
ｓ）２０．４（ｓ）、　　２７．１（ｄ）、　　２８．
６（ｓ）３３．０（ｔ）、　　３６．２（ｄ）＋　　４
６．４（ｔ　）４８．７（ｄ）、　　５２．４（’ｄ）
、　　６４．１（ｔ）６４．６（ｔ）、　　７１．３（
ｑ）、　　１２８．０（ｔ）１３０．２（ｔ）、　　１
３３．２（ｑ）、　　１３３．４（ｔ）１３６．２（ｔ
）、　　　１４０．２（ｑ）質量分析スペクトル：ＧＣ−ＭＳ　（ＴＭＳ−ＨＴによるシリル化合物につい
てＭＳを測定した。）５３８（Ｍ　＋２１６．１）　　２７７（８）２２４（
２５ン、　　１６９（９９）、　　１５５（９９）１４
３（４５）、　　１１７（１７）、　　９３（１６）、
　７３（１００）比旋光度：〔α］”＋５５．５　　（エタノール、Ｃ：１．０８）
次に、化合物（Ｉｔ）の微生物変換による化合物（１）
の製造方法を順を追って説明する。

まず、バチルス・メガテリウムＮＨ５を例えば次のよう
な方法で４養して種菌とする。すなわち、固形培地ある
いは液体培地に該菌を接種し、３０〜４３℃で１〜２日
間培養する。これら種菌をさらに液体培地に接種し、３
７℃で２〜６時間振とう又は通気攪拌培養を行う。ここ
で用いる液体培地および種菌培養のための固形および液
体培地に用いる栄養源としては、グルコース、シジ糖、
コーンステイープリカー、ペプトン、肉エキス、酵母エ
キス、尿素、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸
アンモニウム、リン酸カリウム、塩化カリウム、硫酸鉄
、硫酸亜鉛、塩化カルシウム。

炭酸カルシウムなどの炭素源、窒素源、無機塩。

発育因子などの中から適当なものを選ん、で使用するこ
とができる。これらの栄養源は水溶液とし、また固形培
地とする場合には液体培地に１．５〜２．０チの寒天を
加え、加熱または濾過などにより無菌化して使用する。

次に、以上のようにして予め培養さｎた菌体培養液に化
合物（１）を添加し、引き続き振とう又は通気攪拌を行
う。この操作によって化合物（ＩＩ）は次第に化合物（
１）へ変換が行われる。化合物（ＩＩ）の添加量は通常
、菌体培養ｇｌｚ当り０．１〜１ｇが適当である。

培養液中において、化合物（ｎ）が変換さｎているか否
かの判定は、例えば次のような操作によって迅速に知る
ことができる。すなわち、変換が進行中のフラスコ又は
タンク中より３〜１０−の菌体を含む培養液を抜き取り
、ｐＨを調節することなく酢酸エチルなどの有機溶媒で
抽出し、直ちにガスクロマトグラフィー又は高速液体ク
ロマトグラフィーで分析する。所要時間はサンプリング
時間も含めて１時間以内である。

第１図　　　　　　　　　　　　　に変換操作開始後１
２０時間時間比合物（１）を含む変換物の典型的なガス
クロマトグラムを示す。なお、図のガスクロマトグラム
は次のような条件で得られたものである。すなわち、島
津ＧＣ−４ＣＭ型ガスクロマトグラフ装置にシリコン０
Ｖ−１０１をカラムの内壁にコーティングした内径０．
２８１ｕｌｌ、長さ３０ｍのガラスキャピラリーカラム
を装着し、カラム温度２５０℃で、キャリヤーガスとし
てヘリウムを毎分０．９６　ｍ流しつつ前記培養液の酢
酸エチル抽出液１μｌ　を試料として注入することによ
り測定した。

次に、変換物の培養物は、菌体ｆｔ濾別したのち有機溶
媒を用いてｐ液から香料成分を抽出した。

香料成分である化合物（１）を精製単離するためには、
まず変換培養物を濾過し菌体とｐ液とに分ける。

ＰＲに酢酸エチルなどの有機溶媒を加え、また菌体を洗
浄した有機溶媒を合して有機相とする。これを減圧下で
溶媒を留去して変換物を得る。得られた変換物をシリカ
ゲルを吸着剤とするカラムにかけ、ｎ−ヘキサン：酢酸
エチル混液を用いて溶出し、フラクションコレクターで
分画する。さらに必要に応じて高速液体クロマトグラフ
ィーにより、化合物（１）を単離する。

本発明の化合物（１）をたばこに添加し喫煙した場合は
、いずｎも、たばこ本来の香りとよく調和し、刺激を抑
え、さらに効果に持続性があるので、たばこの製造工程
中および製品保存中における逸散が少ないなど多くの優
れた効果を有する。

すなわち、本化合物はエタノール等の溶媒で適宜濃度に
希釈し、たばこの香喫味改良剤として便用に供すること
が出来る。本化合物は単独又は組合わせて使用すること
ができる。さらに他のたばこ用香料、添加物などを適宜
配合して使用することができる。添加量は製品たばこ月
割に対しく１１〜５０　ｐｐｍ（Ｗ／Ｗ）　、好ｔ　Ｌ
　（ハ１〜３０　ｐｐｍ（Ｖｖ／ｗ）で前述した効果を
発揮する。本発明の化合物を有効に適用し得るたばこの
種類は、特に限定されるものではなく、栽培により得ら
れるたばこのみならず、屑たばこを原料として製造され
た再生たばこ及びパイプたばこ等の香喫味の改良のため
にも有効である。

本発明に使用する菌は通産省工業技術院、微生物工業技
術研究所に寄託し、その寄託番号は倣工研菌寄第４４４
８号である。

以下に、本菌の歯学的性質をマニーアル・オプ・マイク
ロバイオロジカル・メンツ）”　（Ｍａｎｎｕａｌｏｆ
　Ｍｉｃｒｏｆｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄ）記
載の方法に準じて検討した結果を示す。

ｌ　形態的性質１、顕微鏡的所見桿菌、１．０〜１．５μ×３．５〜５．０μ、波状に連
鎖し、時に塊状、運動性あり、楕円形の内生胞子形成、
１．０〜１．２μ×１．５〜２．０μ、１細胞に１個、
位置は中央、胞子のうのふくらみなし、ダラム陽性、抗
酸性陰性。

２、培養上所見（１）平板培養円形、わずかに丘状隆起、平滑、金縁、不透明、わずか
に黄色を含む白色、やや光沢あり。

（２）　　Ｘ向培養生育旺盛、平滑、やや光沢あり、淡黄白色、不透明、芙
いなし、培地の変化なし。

（３）液体培養生育中程度、表面生育微弱、わずかに濁る、沈殿中程度
。

ｌ　生理的性質 ■　生育温度＝１５〜４２°Ｃ１最適３０〜３７°Ｃ■
　生育ｐＨ：ｐＨ３，５〜１０．０、最適６．５〜７．
５■　酸素要求性：好気性 ■　ゼラチンの液化ニー斗状に液化 ■　リドマスミルク：Ｉ！１１２．性、ベプト／化■　
インドールの生成：陰性 ■　硝酸塩の還元：陰性 ■　殿粉の加水分解：陽性 ■　メチルレッド反応　１易性０７オ一ゲスプロスカウエル反応：陰性０　カタラーゼ
の生成：陽性 ■　ウレアーゼの生成：陽性０　食塩濃度と生育＝７チまで生育する０　ソディウム
アザイドによる生育阻害：０．０２φで生育しない。

◎　リゾチームによる生育阻害：０．００１％で生育し
ない。

Ｏサブロー寒天培地での生育：生育するＯ　サブロー液
体培地での生育：生育する＠ｏ−ｉ；’テスト：発酵的０　発生的ダーゼ活性：陽性０　クエン酸の利用：陽性＠　レシチナーゼ活性：陰性＠　レバンの生成二陽性Ｏカゼインの加水分解：陽性０　フ１ニルアラニ／の脱アミノ反応：陽性Ｉ　糖の利
用性酸を生成し、ガスを生成しない：グルコー人、アラビノ
ース、マストール、酸もガスも生成しない：キシロース以上の歯学的性質を基にして、パージエイズ・マ二具ア
ル・オプ・デターミネイティブ・バクテリオロジー　第
８版（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｎｕａｌ　ｏｆＤｅｔ
ｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　８
　ｔｈ　Ｅｄｉｔｉｏｎ　）　　に従い検索すると重重
はバチルス属に属し、バチルス・メガテリウム（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ　ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ　）と同定されたＯ次に、実施例により本発明を具体的に説明する。

実施例　１゜試験管内にニー−トリエンド・アガー（Ｄｉｆｃ。

ｆｉ）培地を作り、これにバチルス・メガテリウムＮＨ
５を１白金耳接種し、２日間静置して胞子を形成させた
。次いでニュートリエンド・ブロス（Ｄｉｆｃ。

製）　０．８．９、水道水１００．ｊ　からなる殺菌済
み液体培地に前記菌を１白金耳接種し、２００ｒｐｍの
回転振とう機にかけ、３７℃で２４時間培養を行い種母
とした。この種母２ｗｔを、前記と同様の方法贅騙合で
調製した１１の培地を含む３ｔのコブ付三角フラスコに
接種し、３７℃、２００ｒｐｍで３時間回転振とう培養
を行い、６１０ｎｍにおける吸光度が０．３の菌体培養
液を得た。これに化合物（１１）０．１９を添加し引き
続き振とうを行った。変換５日後に培養物を取り出し、
遠心分離により菌体とＦｉとに分けた。ｐ液中の化合物
（１）を酢酸エチルで抽出し、この酢酸エチル層と菌体
を洗浄した酢酸エチルとを合した。この酢酸エチル溶液
を減圧濃縮することにより、ｏ、　ｏ　ｓ　ｇの濃縮物
を得た。

全く同様の操作を６回繰返して、合計０．３．９の濃縮
物を得た。次いでこの濃縮物から変換生成物である化合
物（１）を以下のようにして単離した。濃縮物０．３　
ｇを５０ｇのシリカゲルＧを元てんした直径３０１１１
１のガラスカラムの上部に添加し、次いでヘキサン−酢
酸エチルの混液（Ｖ／Ｖ）、８５：１５．８０：２０　
６０：４０，５０二５０をそ１ぞれ１２５０゜１５００
．９００．２３００−づつ加え順次溶出した。

次に、５０　：　５０画分を、移動相をヘキサン−アセ
トン６０：４０（ｖ／ｖ）を用いて５Ｉ６０　シリカゲ
ルカラム（、直径４朋、長さ２５ｃｒＩＬ、メルク社製
）を用いて高速液体クロマトグラフィーを行った。

主成分を分取し濃縮した後、このａｍ物についス移動相
をアセトニトリル−水６０　：　４０　（Ｖ／Ｖ）を用
いてＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂ　ＲＰ−１８カラム（直径４
」、長さ２５　ｃｍ　、メルク社製、１を用いて高速液
体クロマトグラフィーを行った。主成分を分取し、減圧
で濃縮した。濃縮物はわずかな結晶を伴う油状であった
。これにアセトニトリルを加えると不溶結晶が浮遊した
ので、これを戸別して溶媒を留去し、化合物（１）を得
た。収量は０．００５ｇであった。

実施例　２゜屑たばこを１００℃の熱水で抽出し、水溶性部と水不溶
性部（抽出残）に分けた後、水不溶部を叩解し、これに
その乾物重の１５％の針葉樹のクラフトパルプを加えた
混合物を薄紙状に成型し、この薄紙に上記の水溶性部を
もどして作ったシート状再生たばこ１００ｇに対して、
実施例１で得た化合物（１）　０．５９を３−のエタノ
ールに溶解して噴霧・添加した後、常法により才刻紙巻
し、化合物（１）０．５ダを上記と同様に処理した巻上
品を対照として、におい・味・刺激について２点識別法
により香喫味を比較した。特に訓練された専門ノくネル
２０人の評価は、第１表に示す通りであった。

パネルの大多数のメンバーの評価により、刺激が抑えら
れ、たばこらしさが付与されるとのコメントを得た。

第　　１　　表（注）加香品：本発明の化合物（Ｔ）’ｔ　５　ｐｐｍ
添加。

対照品：化合物（１）を５　ｐｐｍ添加。

数字は良いとした人数。簀簀印は、そｎぞれ危険率１％
で試料間に有意差のあることを示す。

〔発明の効果〕

本発明の化合物は、製品たばこ周到、パイプたばこ、再
生たばこ及び葉たばこに対してｐｐｍオーダーの添加に
より、たばこらしさを付与し、刺激を抑制して味がよく
なる効果、すなわち、たばこの香喫味改良効果を有し、
こｎによりたばこ製品の品質が向上する。

【図面の簡単な説明】

第１図は化合物（１）を本発明の方法によって微生物変
換したときの培養時間が１２０時間目のガスクロマトグ
ラムを示したものである。図中ピーク（１）は溶媒、ピ
ーク（２）は化合物（ｎ）、ピーク（３）は化合物（１
）、ピーク（４）と（５）は副生成物である６、縦軸は
ピーク高さを、横軸は保持時間を示す。

Claims

【特許請求の範囲】１、次式（ I ）で示される２，７，１１−センブラト
リエン−４，６，１０−トリオール。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）２、次式（II）で示される２，７，１１−センブラトリ
エン４，６−ジオールにバチルス属細菌（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ　ｓｐ．）を作用させることにより、次式（ I ）
で示される２，７，１１−センブラトリエン−４，６，
１０−トリオールを採取することを特徴とする次式（
I ）で示される化合物の製造法。 ▲数式、化学式、表等があります▼（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）