JPS62233761A - カテコ−ルアミン酸性代謝物の酵素標識体 - Google Patents
カテコ−ルアミン酸性代謝物の酵素標識体Info
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- JPS62233761A JPS62233761A JP7782686A JP7782686A JPS62233761A JP S62233761 A JPS62233761 A JP S62233761A JP 7782686 A JP7782686 A JP 7782686A JP 7782686 A JP7782686 A JP 7782686A JP S62233761 A JPS62233761 A JP S62233761A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、カテコールアミン類酸性代謝物の酵素免疫測
定に有用なカテコールアミン類酸性代謝物の酵ｉ４標識
体およびそのａａ法に関するものである。
定に有用なカテコールアミン類酸性代謝物の酵ｉ４標識
体およびそのａａ法に関するものである。
［従来の技術］
カテコールアミン類酸性代謝物のホモバニリン酸（ＨＶ
Ａ）とバニルマンデル酸（またはバニリルマンデル酸、
ＶＭＡ）はカテコールアミン類（以下、カテコールアミ
ンという）の最終代謝物でもあり、カテコールアミンや
他の中間代謝物に比べて数百〜数千倍の高濃度で尿中に
排泄されるため、成人の褐色細胞腫や小児の神経芽細胞
腫などのカテコールアミン産性腫瘍の診断としてその尿
中濃度の測定が行なわれている。特に、本年度から全国
の新生児に対して神経芽細胞腫の集団検診が施行されて
いる。
Ａ）とバニルマンデル酸（またはバニリルマンデル酸、
ＶＭＡ）はカテコールアミン類（以下、カテコールアミ
ンという）の最終代謝物でもあり、カテコールアミンや
他の中間代謝物に比べて数百〜数千倍の高濃度で尿中に
排泄されるため、成人の褐色細胞腫や小児の神経芽細胞
腫などのカテコールアミン産性腫瘍の診断としてその尿
中濃度の測定が行なわれている。特に、本年度から全国
の新生児に対して神経芽細胞腫の集団検診が施行されて
いる。
現在、主として１次スクリーニングのために実施されて
いるＶＭＡの測定法は、ジアゾカップリング反応による
呈色をろ紙上で判定するスポットテスト法である。しか
しながら、この方法は、共存する他のフェノール性化合
物の影響を受けやすく、擬陽性率が高い問題がある。
いるＶＭＡの測定法は、ジアゾカップリング反応による
呈色をろ紙上で判定するスポットテスト法である。しか
しながら、この方法は、共存する他のフェノール性化合
物の影響を受けやすく、擬陽性率が高い問題がある。
ＶＭＡとＨＶＡの同時測定法としては、高速液体クロマ
トグラフィー（ＨＰ Ｌ Ｃ）による分離定量法が行な
われているが、スポットテスト法に比べて簡便性に欠け
、多数の検体を測定するには不向きである。また、ガス
クロマトグラフィー−マススペクトロメトリーでもＶＭ
ＡとＨＶＡの同時測定が可能で、ＨＰＬＣより正確で感
度の高い測定値が得られるが、大型の機器と熟練した技
術を要する欠点がある。
トグラフィー（ＨＰ Ｌ Ｃ）による分離定量法が行な
われているが、スポットテスト法に比べて簡便性に欠け
、多数の検体を測定するには不向きである。また、ガス
クロマトグラフィー−マススペクトロメトリーでもＶＭ
ＡとＨＶＡの同時測定が可能で、ＨＰＬＣより正確で感
度の高い測定値が得られるが、大型の機器と熟練した技
術を要する欠点がある。
一方、免疫測定法は一般に簡便迅速に多数の検体を測定
できる利点がある。従来、カテコールアミン酸性代謝物
を免疫測定する方法としては、特開昭６０−１２３７６
５号公報に酵素免疫測定法が開示されているが、酵素標
識体についての記載がなく、そのシステムの詳細は不明
である。
できる利点がある。従来、カテコールアミン酸性代謝物
を免疫測定する方法としては、特開昭６０−１２３７６
５号公報に酵素免疫測定法が開示されているが、酵素標
識体についての記載がなく、そのシステムの詳細は不明
である。
本発明者らは、先に、カテコールアミン酸性代謝物に対
する抗体を得るためのハプテン抗原としてカテコールア
ミン酸性代謝物と担体蛋白とをマンニッヒ反応により結
合させたものを開発したが（日本薬学会第１０５年会講
演要旨集、第３９３頁、５Ｊ１１−３）、この方法を酵
素標識法に応用した場合、′Ｊｇｒａ酵素の酵素活性が
残存するかについては、全く知見がなかった。
する抗体を得るためのハプテン抗原としてカテコールア
ミン酸性代謝物と担体蛋白とをマンニッヒ反応により結
合させたものを開発したが（日本薬学会第１０５年会講
演要旨集、第３９３頁、５Ｊ１１−３）、この方法を酵
素標識法に応用した場合、′Ｊｇｒａ酵素の酵素活性が
残存するかについては、全く知見がなかった。
［発明が解決しようとする問題点］
本発明は、カテコールアミン酸性代謝物を酵素免疫測定
によって定量する方法に適用されるカテコールアミン酸
性代謝物の酵素標識体を開発することを目的とするもの
である。
によって定量する方法に適用されるカテコールアミン酸
性代謝物の酵素標識体を開発することを目的とするもの
である。
従来ハプテンの酵素標識化法としては、ＤＣＣ法、混合
酸無水物法、グルタルアルデヒド法が適用されている。
酸無水物法、グルタルアルデヒド法が適用されている。
しかしながら、ＤＣＣ法および混合酸無水物法をカテコ
ールアミン酸性代謝物に適用すると、カテコールアミン
酸性代謝物のカルボキシル基を介して酵素と結合するこ
とが考えられ、カテコールアミン酸性代謝物の特徴的な
構造部分が消失する。そのため、酵素免疫測定時の抗体
に対するハプテンと酵素標識体との競合反応における特
異性がなくなる。
ールアミン酸性代謝物に適用すると、カテコールアミン
酸性代謝物のカルボキシル基を介して酵素と結合するこ
とが考えられ、カテコールアミン酸性代謝物の特徴的な
構造部分が消失する。そのため、酵素免疫測定時の抗体
に対するハプテンと酵素標識体との競合反応における特
異性がなくなる。
また、グルタルアルデヒド法では、カテコールアミン酸
性代謝物に酵素を結合させることはできない。
性代謝物に酵素を結合させることはできない。
したがって、カテコールアミン酸性代謝物の特異性の高
い酵素免疫測定法を確立するために、カテコールアミン
酸性代謝物の構造上の特徴を失わない酵素ｅＡｍ体を調
製することが待望されていたのである。
い酵素免疫測定法を確立するために、カテコールアミン
酸性代謝物の構造上の特徴を失わない酵素ｅＡｍ体を調
製することが待望されていたのである。
［問題点を解決するための手段］
本発明者らは、上記の目的のもとに種々研究を重ねた結
果、ホルムアルデヒドを利用したマンニッヒ反応により
、カテコールアミン酸性代謝物と酵素を結合させると、
カテコールアミン酸性代謝物のハプテン構造上重要な水
酸基、メトキシル基およびカルボキシル基を結合に関与
させず、遊離の状態で酵素標識体を調製でき、しかもａ
識酵素の酵素活性も十分残存していることを知見し１本
発明を完成するに至った。
果、ホルムアルデヒドを利用したマンニッヒ反応により
、カテコールアミン酸性代謝物と酵素を結合させると、
カテコールアミン酸性代謝物のハプテン構造上重要な水
酸基、メトキシル基およびカルボキシル基を結合に関与
させず、遊離の状態で酵素標識体を調製でき、しかもａ
識酵素の酵素活性も十分残存していることを知見し１本
発明を完成するに至った。
すなねち、本発明は、一般式［Ｉ］
［式中、Ｒ１は水素原子またはメチル基、Ｒ２は水素原
子または水酸基を示す、］で表わされるカテコールアミ
ン酸性代謝物の酵素標識体を提供するものである。
子または水酸基を示す、］で表わされるカテコールアミ
ン酸性代謝物の酵素標識体を提供するものである。
また、本発明は、前記一般式［１］で表わされるカテコ
ールアミン酸性代謝物の酵素標識体を製造するにあたり
、一般式［■］ ［式中、Ｒ１およびＲ２は前記と同意義、］で表わされ
るカテコールアミン酸性代謝物を酵素とホルムアルデヒ
ドを用いるマンニッヒ反応により結合させることを特徴
とするカテコールアミン酸性代謝物の酵素標識体を製造
する方法を提供するものである。
ールアミン酸性代謝物の酵素標識体を製造するにあたり
、一般式［■］ ［式中、Ｒ１およびＲ２は前記と同意義、］で表わされ
るカテコールアミン酸性代謝物を酵素とホルムアルデヒ
ドを用いるマンニッヒ反応により結合させることを特徴
とするカテコールアミン酸性代謝物の酵素標識体を製造
する方法を提供するものである。
本発明において、カテコールアミン酸性代謝物とは、前
記一般式［１１］で表わされるものであり、具体的には
、ＨＶＡ ＣＲ”＝メｆルＪ＆、 Ｒ”＝水素原子”）
、ＶＭＡ （Ｒ”＝メチル基、Ｒ２＝水酸基）。
記一般式［１１］で表わされるものであり、具体的には
、ＨＶＡ ＣＲ”＝メｆルＪ＆、 Ｒ”＝水素原子”）
、ＶＭＡ （Ｒ”＝メチル基、Ｒ２＝水酸基）。
ジヒドロキシフェニル酢酸（ＤＯＰＡＣ，Ｒ１＝ＲＺ
＝＝水素原子）およびジヒドロキシマンデル酸（ＤＯＭ
Ａ、Ｒ１＝水素原子、ＲＺ ＝＝水酸基）から選ばれる
いずれかの化合物を意味する。
＝＝水素原子）およびジヒドロキシマンデル酸（ＤＯＭ
Ａ、Ｒ１＝水素原子、ＲＺ ＝＝水酸基）から選ばれる
いずれかの化合物を意味する。
また、カテコールアミン酸性代謝物の標識化に適用され
る酵素には特に制約はなく、一般の酵素免疫測定法に適
用される酵素を任意に選択すればよい、酵素の代表例と
しては、アルカリ性ホスファターゼ（ＡＬＰ）、グルコ
ースオキシダーゼ（Ｇ ＯＤ） 、パーオキシダーゼ（
西洋わさび）（ＨＲＰ）、 β−ガラクトシダーゼ、
アセチルコリンエステラーゼなどが挙げられる。
る酵素には特に制約はなく、一般の酵素免疫測定法に適
用される酵素を任意に選択すればよい、酵素の代表例と
しては、アルカリ性ホスファターゼ（ＡＬＰ）、グルコ
ースオキシダーゼ（Ｇ ＯＤ） 、パーオキシダーゼ（
西洋わさび）（ＨＲＰ）、 β−ガラクトシダーゼ、
アセチルコリンエステラーゼなどが挙げられる。
酵素４Ｆｆｆ！１体を調製するにあたり、マンニッヒ反
応は、たとえばカテコールアミン酸性代謝物を酵素に対
して数十〜数百倍モル量用いて、両者にｐＨ約６〜７の
条件下水性溶媒中で過剰量のホルムアルデヒドを反応さ
せることにより実施することができる。水性溶液のｐＨ
ｉ！ＩＮｇＩは、たとえば炭酸水素ナトリウム水溶液、
酢酸塩緩衝液などを用いればよい。反応は室温ないし酵
素活性が安定な範囲内での加温条件下で、数十分〜数十
時間で完了する。
応は、たとえばカテコールアミン酸性代謝物を酵素に対
して数十〜数百倍モル量用いて、両者にｐＨ約６〜７の
条件下水性溶媒中で過剰量のホルムアルデヒドを反応さ
せることにより実施することができる。水性溶液のｐＨ
ｉ！ＩＮｇＩは、たとえば炭酸水素ナトリウム水溶液、
酢酸塩緩衝液などを用いればよい。反応は室温ないし酵
素活性が安定な範囲内での加温条件下で、数十分〜数十
時間で完了する。
反応終了後、たとえば酢酸ナトリウム水溶液、水などに
対して透析処理などを施して過剰のホルムアルデヒドと
カテコールアミン酸性代謝物を除去し、そのままもしく
は凍結乾燥して酵素免疫測定用の酵素標識体試薬として
調製することができる。
対して透析処理などを施して過剰のホルムアルデヒドと
カテコールアミン酸性代謝物を除去し、そのままもしく
は凍結乾燥して酵素免疫測定用の酵素標識体試薬として
調製することができる。
本発明の酵素標識体は、カテコールアミン酸性代謝物に
対する抗体に対して測定試料中のカテコールアミン酸性
代謝物と酵素標識体とを競合的に反応させるいわゆる競
合的酵素免疫測定に適用することができる。競合的酵素
免疫測定の操作方法については、たとえば石川栄治ら編
、「酵素免疫測定法」第２版、株式会社医学書院、昭和
５７年１２月１５日発行などの成書や総説を参照すれば
よい。
対する抗体に対して測定試料中のカテコールアミン酸性
代謝物と酵素標識体とを競合的に反応させるいわゆる競
合的酵素免疫測定に適用することができる。競合的酵素
免疫測定の操作方法については、たとえば石川栄治ら編
、「酵素免疫測定法」第２版、株式会社医学書院、昭和
５７年１２月１５日発行などの成書や総説を参照すれば
よい。
〔発明の作用コ
カテコールアミン酸性代謝物と酵素のマンニッヒ反応は
次の反応式で表わされる。
次の反応式で表わされる。
Ｒ″＝水素原子、メチル基
Ｒ２＝水素原子、水酸基
したがって、このマンニッヒ反応には、カテコールアミ
ン酸性代謝物のハプテン構造上重要な官能基である水酸
基、メトキシル基、カルボキシル基は関与せず、これら
の官能基を酵素との結合に用いることなく、酵素標識体
を調製することができる。
ン酸性代謝物のハプテン構造上重要な官能基である水酸
基、メトキシル基、カルボキシル基は関与せず、これら
の官能基を酵素との結合に用いることなく、酵素標識体
を調製することができる。
［実施例］
以下１本発明酵素橿識体の調製例を実施例として、その
酵素免疫測定への適用例を応用例とじて示し、本発明の
実施態様の詳細な説明とする。
酵素免疫測定への適用例を応用例とじて示し、本発明の
実施態様の詳細な説明とする。
実施例
ハプテンのＶ Ｍ ＡとＨＶＡはそれぞれＶＭＡ５．９
ｍｇ、ＨＶＡ５．５ｍｇを用いた。酵素は、ＡＬＰ、Ｇ
ＯＤまたはＨＲＰを１０■用いた。
ｍｇ、ＨＶＡ５．５ｍｇを用いた。酵素は、ＡＬＰ、Ｇ
ＯＤまたはＨＲＰを１０■用いた。
ハプテンと酵素を０．３Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液１
ｏｏｎに溶解させ、３７％ホルマリン２０μＱを加えて
攪拌後、３７℃で１時間反応させた。
ｏｏｎに溶解させ、３７％ホルマリン２０μＱを加えて
攪拌後、３７℃で１時間反応させた。
反応終了後、ＡＬＰとＨＲＰの反応液は１０”Ｃの蒸留
水に対して、またＧＯＤの反応液は１０１１１Ｍ酢酸ナ
トリウム水溶液に対して数回透析した後。
水に対して、またＧＯＤの反応液は１０１１１Ｍ酢酸ナ
トリウム水溶液に対して数回透析した後。
凍結乾燥して６種の酵素標識体、ＶＭＡ−ＡＬＰ。
ＨＶＡ−ＡＬＰ、ＶＭＡ−ＧＯＤ、ＨＶＡ−Ｇ。
Ｄ、ＶＭＡ−ＨＲＰおよびＨＶＡ−ＨＲＰを得た。
襟識体の生成と酵素活性の残存の確認のために電気泳動
を行った。標識体溶液を１鴻ずつセルロースアセテート
膜にのせた。１ｍＡ／ａｍで１５分間。
を行った。標識体溶液を１鴻ずつセルロースアセテート
膜にのせた。１ｍＡ／ａｍで１５分間。
０．０７Ｍベローナル４１衝液（ｐＨ８，６）で泳動さ
せた膜をそれぞれの基質溶液に浸した。
せた膜をそれぞれの基質溶液に浸した。
ＡＬＰの基質溶液は、１６ｍＭ−Ｐ−ｍ＝トロフェニル
ホスフエイトと１１１Ｍ塩化マグネシウムを含有するＯ
、１Ｍトリス緩衝液（ＰＨ８，０）とした。
ホスフエイトと１１１Ｍ塩化マグネシウムを含有するＯ
、１Ｍトリス緩衝液（ＰＨ８，０）とした。
ＧＯＤの基質溶液は、１６．７ｍＭグルコース、４ｍＭ
４−アミノアンチピリン、７ｍＭフェノール。
４−アミノアンチピリン、７ｍＭフェノール。
６７ｘ／ｍ１ｌＨＲＰを含有するりん酸緩衝生理食塩水
（３，３ｍＭりん酸緩衝液、ｐｉ４７．３−５２ｍＭ塩
化ナトリウム）とした。
（３，３ｍＭりん酸緩衝液、ｐｉ４７．３−５２ｍＭ塩
化ナトリウム）とした。
ＨＲＰの基質溶液は、０．２■／ ｍＱ ｏ−−フェニ
レンジアミンと５．６ｍ％過酸化水素水を含有する０、
１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ５，０）とした。
レンジアミンと５．６ｍ％過酸化水素水を含有する０、
１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ５，０）とした。
かくして得られた電気泳動図を第１〜３図に示した。で
んぷんの移動点を原点とした場合、 ＶＭＡ−酵素とＨ
ＶＡ−酵素はそれぞれ未処理の酵素に比べてより陽極側
に移動していた。これは酵素に酸性物質のＶＭＡとＨＶ
Ａが結合したことによるものと結論づけられる６ 応用例 ■ 抗原の調製 ハプテンのＨＶＡまたはＶＭＡの０．３ｍモルと、担体
のヒト血清アルブミン（Ｈ５Ａ）１００■を０．３Ｍ炭
酸水素ナトリウム水溶液１ ｍｍに溶解させた。これに
３７％ホルマリン０．２−を加え、３Ｍ酢酸ナトリウム
水溶液でｐＨ６，０〜７．０に調整し、マンニッヒ反応
をさせた０反応液を２０’Ｃで３時間遮光放は後、１０
℃で蒸留水に対して数回透析し、凍結乾燥してＶＭＡ−
Ｈ８ＡおよびＨＶＡ−Ｈ５Ａを得た。
んぷんの移動点を原点とした場合、 ＶＭＡ−酵素とＨ
ＶＡ−酵素はそれぞれ未処理の酵素に比べてより陽極側
に移動していた。これは酵素に酸性物質のＶＭＡとＨＶ
Ａが結合したことによるものと結論づけられる６ 応用例 ■ 抗原の調製 ハプテンのＨＶＡまたはＶＭＡの０．３ｍモルと、担体
のヒト血清アルブミン（Ｈ５Ａ）１００■を０．３Ｍ炭
酸水素ナトリウム水溶液１ ｍｍに溶解させた。これに
３７％ホルマリン０．２−を加え、３Ｍ酢酸ナトリウム
水溶液でｐＨ６，０〜７．０に調整し、マンニッヒ反応
をさせた０反応液を２０’Ｃで３時間遮光放は後、１０
℃で蒸留水に対して数回透析し、凍結乾燥してＶＭＡ−
Ｈ８ＡおよびＨＶＡ−Ｈ５Ａを得た。
■ モノクローナル抗体の調製法
抗原の生理食塩水溶液（１■／−）と完全フロインドア
ジュバントとの１：１のエマルジョンを、Ｂａ１ｂ／Ｃ
マウス（雄、６週令）に２週問おきに数回腹腔内投与し
た。最終免疫に抗原５０μｇを静注し、マウスから牌臓
を摘出した。
ジュバントとの１：１のエマルジョンを、Ｂａ１ｂ／Ｃ
マウス（雄、６週令）に２週問おきに数回腹腔内投与し
た。最終免疫に抗原５０μｇを静注し、マウスから牌臓
を摘出した。
牌臓細胞とマウスミエローマ細胞Ｐ、Ｕ１とを常法に従
い、ポリエチレングリコールで融合した。
い、ポリエチレングリコールで融合した。
融合細胞をクローニングし、単クローンをマウス腹水中
で増殖させ１Ｍ１水を採取し、硫安分画により抗ＨＶＡ
または抗ＶＭＡモノクローナル抗体を精製した。
で増殖させ１Ｍ１水を採取し、硫安分画により抗ＨＶＡ
または抗ＶＭＡモノクローナル抗体を精製した。
その結果、ＨＶＡよりＶＭＡに対して１００倍以上の親
和性を有する抗ＶＭＡモノクローナル抗体Ｖｌ（サブク
ラス／タイプ、ＩｇＧ、／ Ｘ ）と、ＶＭＡよりＨＶ
Ａに対して１００倍以上の親和性を有する抗ＨＶＡモノ
クローナル抗体Ｈ１（サブクラス／タイプ、ＩｇＧ、
／に）を得た。
和性を有する抗ＶＭＡモノクローナル抗体Ｖｌ（サブク
ラス／タイプ、ＩｇＧ、／ Ｘ ）と、ＶＭＡよりＨＶ
Ａに対して１００倍以上の親和性を有する抗ＨＶＡモノ
クローナル抗体Ｈ１（サブクラス／タイプ、ＩｇＧ、
／に）を得た。
以下の酵素免疫測定には、抗ＶＭＡモノクローナル抗体
ｖ１と抗ＨＶＡモノクローナル抗体Ｈ１を用いた。
ｖ１と抗ＨＶＡモノクローナル抗体Ｈ１を用いた。
■ 酵素免疫測定（Ｅ Ｉ Ａ）
モノクローナル抗体のＰＢＳ溶液０．２５μｇ／−を５
０μΩずつマイクロプレートの各穴に分注した。プレー
トを４℃で１昼夜放置後、非特異的な吸着をブロックす
るために０．０５％ツイーン２０を含むＰＢＳ （Ｔ−
ＰＢＳ）で各穴を洗浄した。
０μΩずつマイクロプレートの各穴に分注した。プレー
トを４℃で１昼夜放置後、非特異的な吸着をブロックす
るために０．０５％ツイーン２０を含むＰＢＳ （Ｔ−
ＰＢＳ）で各穴を洗浄した。
酵素標識体０ 、２ ｉｔｇ／ ｍＱを２５４と各種濃
度の遊ＭＶＭＡ、ＨＶＡ溶液または尿２５ｄを同時に加
え、吸着抗体との結合に対して酵素標識体とハプテンを
競合させるため、３７℃で１時間反応させ、Ｔ−ＰＢＳ
で洗浄した。
度の遊ＭＶＭＡ、ＨＶＡ溶液または尿２５ｄを同時に加
え、吸着抗体との結合に対して酵素標識体とハプテンを
競合させるため、３７℃で１時間反応させ、Ｔ−ＰＢＳ
で洗浄した。
前記実施例で用いた基質溶液を６０鴻加えて３７°Ｃで
１時間反応させた後、反応液の吸光度を測定した。測定
波長は、ＡＬＰが４０５ｎｍ、ＧＯＤが４９２ｎｎ＋、
ＨＲＰが４５０ｎｍとした。
１時間反応させた後、反応液の吸光度を測定した。測定
波長は、ＡＬＰが４０５ｎｍ、ＧＯＤが４９２ｎｎ＋、
ＨＲＰが４５０ｎｍとした。
ＥＩＡでは、ハプテン濃度に対応してハプテンと酵素標
識体の競合による酵素結合量の相違を測定することがで
き、第４〜６図に示した用量反応曲線を描くことができ
た６ ［発明の効果］ 本発明のカテコールアミン酸性代謝物の酵素標識体は、
カテコールアミン酸性代謝物のハプテン構造上重要な水
酸基、メトキシル基、カルボキシル基を酵素との結合子
としないため、カテコールアミン酸性代謝物に特異的な
酵素免疫測定を実施することができる。かくして１本発
明によれば、尿中カテコールアミン酸性代謝物の１次ス
クリーニングとして有用な酵素免疫測定を確立すること
ができ、その測定用キットの酵素標識試薬として有用な
酵素標識体を調製することができる。
識体の競合による酵素結合量の相違を測定することがで
き、第４〜６図に示した用量反応曲線を描くことができ
た６ ［発明の効果］ 本発明のカテコールアミン酸性代謝物の酵素標識体は、
カテコールアミン酸性代謝物のハプテン構造上重要な水
酸基、メトキシル基、カルボキシル基を酵素との結合子
としないため、カテコールアミン酸性代謝物に特異的な
酵素免疫測定を実施することができる。かくして１本発
明によれば、尿中カテコールアミン酸性代謝物の１次ス
クリーニングとして有用な酵素免疫測定を確立すること
ができ、その測定用キットの酵素標識試薬として有用な
酵素標識体を調製することができる。
第１〜３図は、本発明実施例において調製された酵素標
識体の電気泳動図である。第４〜６図は。 応用例において本発明酵素標識体を用いて酵素免疫測定
して得られた用量反応曲線を示すものである。 特許出願人 （６７７）ヤマサ醤油株式会社＊ｔｔ−＠
ｖｓバー△ＬＦｏｆｆ４ｉ 扉り遣ｌ集す
ｊ
ＶルうＶＨＡ□（１
Ｍ） ＜）ＩＭ’？Ｚｈｍ ’！’５Ｕ９ ＶＭＡ−ＧＱＣ
）ｃｎｆｌｌ−３ｉ紘瑠塊ｉｃ６ｓＶＭＡ−ＨＦ？Ｆｔ
ｓｌｌＮｋａ＆−ｔ４に００４’；０−ｗ５ 手続補正Ｗ（自発） 昭和６１年５月２Ｉ日 １、事件の表示 昭和６１年特許願第７７８２６号 ２、発明の名称 カテコールアミン酸性代謝物の酵素標識体３、補正をす
る者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 ２８８ 住所 千葉県銚子市新生町２丁目１０番地の１明細書の
発明の詳細な説明の欄 ５、補正の内容
識体の電気泳動図である。第４〜６図は。 応用例において本発明酵素標識体を用いて酵素免疫測定
して得られた用量反応曲線を示すものである。 特許出願人 （６７７）ヤマサ醤油株式会社＊ｔｔ−＠
ｖｓバー△ＬＦｏｆｆ４ｉ 扉り遣ｌ集す
ｊ
ＶルうＶＨＡ□（１
Ｍ） ＜）ＩＭ’？Ｚｈｍ ’！’５Ｕ９ ＶＭＡ−ＧＱＣ
）ｃｎｆｌｌ−３ｉ紘瑠塊ｉｃ６ｓＶＭＡ−ＨＦ？Ｆｔ
ｓｌｌＮｋａ＆−ｔ４に００４’；０−ｗ５ 手続補正Ｗ（自発） 昭和６１年５月２Ｉ日 １、事件の表示 昭和６１年特許願第７７８２６号 ２、発明の名称 カテコールアミン酸性代謝物の酵素標識体３、補正をす
る者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 ２８８ 住所 千葉県銚子市新生町２丁目１０番地の１明細書の
発明の詳細な説明の欄 ５、補正の内容
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）一般式［ I ］ ▲数式、化学式、表等があります▼［ I ］ ［式中、Ｒ＾１は水素原子またはメチル基、Ｒ＾２は水
素原子又は水酸基を示す。］で表わされるカテコールア
ミン酸性代謝物の酵素標識体。 ２）一般式［ I ］ ▲数式、化学式、表等があります▼［ I ］ ［式中、Ｒ＾１は水素原子またはメチル基、Ｒ＾２は水
素原子又は水酸基を示す。］で表わされるカテコールア
ミン酸性代謝物の酵素標識体を製造するにあたり、一般
式［II］ ▲数式、化学式、表等があります▼［II］ ［式中、Ｒ＾１およびＲ＾２は前記と同意義。］で表わ
されるカテコールアミン酸性代謝物を酵素とホルムアル
デヒドを用いるマンニッヒ反応により結合させることを
特徴とするカテコールアミン酸性代謝物の酵素標識体の
製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7782686A JPH0792456B2 (ja) | 1986-04-04 | 1986-04-04 | カテコ−ルアミン酸性代謝物の酵素標識体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7782686A JPH0792456B2 (ja) | 1986-04-04 | 1986-04-04 | カテコ−ルアミン酸性代謝物の酵素標識体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62233761A true JPS62233761A (ja) | 1987-10-14 |
| JPH0792456B2 JPH0792456B2 (ja) | 1995-10-09 |
Family
ID=13644843
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7782686A Expired - Lifetime JPH0792456B2 (ja) | 1986-04-04 | 1986-04-04 | カテコ−ルアミン酸性代謝物の酵素標識体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0792456B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0244252A (ja) * | 1988-08-04 | 1990-02-14 | Oriental Yeast Co Ltd | カテコールアミン代謝産物の測定法 |
| JPH02227667A (ja) * | 1989-02-28 | 1990-09-10 | Daiichi Rajio Isotope Kenkyusho:Kk | Ｍｈｐｇに対する抗体の製造法 |
| JP2019168319A (ja) * | 2018-03-23 | 2019-10-03 | 国立大学法人名古屋大学 | 小児がん検査用尿中代謝物マーカー |
-
1986
- 1986-04-04 JP JP7782686A patent/JPH0792456B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0244252A (ja) * | 1988-08-04 | 1990-02-14 | Oriental Yeast Co Ltd | カテコールアミン代謝産物の測定法 |
| JPH02227667A (ja) * | 1989-02-28 | 1990-09-10 | Daiichi Rajio Isotope Kenkyusho:Kk | Ｍｈｐｇに対する抗体の製造法 |
| JP2019168319A (ja) * | 2018-03-23 | 2019-10-03 | 国立大学法人名古屋大学 | 小児がん検査用尿中代謝物マーカー |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0792456B2 (ja) | 1995-10-09 |
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