JPS6223822B2 - - Google Patents
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- JPS6223822B2 JPS6223822B2 JP55068040A JP6804080A JPS6223822B2 JP S6223822 B2 JPS6223822 B2 JP S6223822B2 JP 55068040 A JP55068040 A JP 55068040A JP 6804080 A JP6804080 A JP 6804080A JP S6223822 B2 JPS6223822 B2 JP S6223822B2
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- Japan
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- peptide
- lys
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- ala
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/605—Glucagons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/26—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
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- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は腸管グルカゴンの抗体の製造法に関す
る。
る。
本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護
基、活性基、その他に関し略号で表示する場合
IUPAC、IUBの規定或いは当該分野における慣
用記号に従うものとし、その例を次に挙げる。ま
たアミノ酸などに関し光学異性体がありうる場合
は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。
基、活性基、その他に関し略号で表示する場合
IUPAC、IUBの規定或いは当該分野における慣
用記号に従うものとし、その例を次に挙げる。ま
たアミノ酸などに関し光学異性体がありうる場合
は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。
Arg：アルギニン
Trp：トリプトフアン
Asn：アスパラギン
Asp：アスパラギン酸
Thr：スレオニン
Ser：セリン
Glu：グルタミン酸
Gln：グルタミン
Ala：アラニン
Val：バリン
Met：メチオニン
Leu：ロイシン
Phe：フエニルアラニン
Lys：リジン
Tyr：チロシン
ILe：イソロイシン
Cys：システイン
Cys
｜ ：シスチン
Cys
Gly：グリシン
His：ヒスチジン
Pro：プロリン
Ｚ：カルボベンゾキシ基
Su：コハク酸イミド基
Tos：ｐ−トルエンスルホニル基
Boc：第３級ブトキシカルボニル基
腸管グルカゴンは、糖吸収代謝に重要な働きを
有するホルモンの１種であり、腸管グルカゴンの
定量により、糖尿病をはじめとして腸管グルカゴ
ンの関与する各種病理状態の診断、例えば腸管疾
患、十二脂腸潰瘍、カルチノイド等の病気の診断
が可能となる所から、診断学、病理学、生理学等
の分野において腸管グルカゴンの定量が注目を集
めつつある。而して腸管グルカゴンの定量は、腸
管グルカゴンに対して反応する抗体（抗血清）を
用いたラジオイムアツセイ法（RIA法）等により
行なわれている。従来、腸管グルカゴンに対して
反応する抗体としてはラバゾーラ（Ravazzola）
等により作成された抗体（Ｒ−64）が知られてい
る〔Endocrinology、第105巻、第２号、第499〜
508頁（1979年）参照〕。しかしながら斯かる抗体
は腸管グルカゴンに対し特異的反応性を有するも
のではない。
有するホルモンの１種であり、腸管グルカゴンの
定量により、糖尿病をはじめとして腸管グルカゴ
ンの関与する各種病理状態の診断、例えば腸管疾
患、十二脂腸潰瘍、カルチノイド等の病気の診断
が可能となる所から、診断学、病理学、生理学等
の分野において腸管グルカゴンの定量が注目を集
めつつある。而して腸管グルカゴンの定量は、腸
管グルカゴンに対して反応する抗体（抗血清）を
用いたラジオイムアツセイ法（RIA法）等により
行なわれている。従来、腸管グルカゴンに対して
反応する抗体としてはラバゾーラ（Ravazzola）
等により作成された抗体（Ｒ−64）が知られてい
る〔Endocrinology、第105巻、第２号、第499〜
508頁（1979年）参照〕。しかしながら斯かる抗体
は腸管グルカゴンに対し特異的反応性を有するも
のではない。
本発明者らは、上記現状に鑑み、腸管グルカゴ
ンに対し特異的反応性を示し、RIA法等による腸
管グルカゴンの定量に極めて有効な抗体を得る方
法につき鋭意研究を進めてきた。その研究過程に
おいて、豚のグリセンチン（Glicentin）〔Horm.
Metab.Res.、８、366〜371（1976）参照〕のＮ
末端より第93〜100番のペプチド鎖即ちＨ−Lys
−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−ILe−Ala−OH
が腸管グルカゴンに対し特異的反応性を有する抗
体の抗原決定基となることを発見した。この新ら
しい知見に基づき更に研究を重ねた結果、上記特
定のペプチド鎖を含有するペプチド即ち下記一般
式(1)で表わされるペプチドをハプテンとする抗原
の合成に成功し、引き続き上記抗原から目的とす
る腸管グルカゴンに対し特異性の高い優れた抗体
を作成することに成功し、ここに本発明を完成す
るに至つた。
ンに対し特異的反応性を示し、RIA法等による腸
管グルカゴンの定量に極めて有効な抗体を得る方
法につき鋭意研究を進めてきた。その研究過程に
おいて、豚のグリセンチン（Glicentin）〔Horm.
Metab.Res.、８、366〜371（1976）参照〕のＮ
末端より第93〜100番のペプチド鎖即ちＨ−Lys
−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−ILe−Ala−OH
が腸管グルカゴンに対し特異的反応性を有する抗
体の抗原決定基となることを発見した。この新ら
しい知見に基づき更に研究を重ねた結果、上記特
定のペプチド鎖を含有するペプチド即ち下記一般
式(1)で表わされるペプチドをハプテンとする抗原
の合成に成功し、引き続き上記抗原から目的とす
る腸管グルカゴンに対し特異性の高い優れた抗体
を作成することに成功し、ここに本発明を完成す
るに至つた。
即ち本発明は、一般式
Ｒ−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−ILe
−Ala−OH (1)
〔式中Ｒは水素原子、アミノ酸基またはアミノ酸
基を２〜20個有するペプチド基を示す。〕 で表わされるペプチドに担体を結合させたペプチ
ド一担体複合体から成る腸管グルカゴン抗原を哺
乳動物体に投与し生成する抗体を採取することを
特徴とする腸管グルカゴン抗体の製造法に係る。
基を２〜20個有するペプチド基を示す。〕 で表わされるペプチドに担体を結合させたペプチ
ド一担体複合体から成る腸管グルカゴン抗原を哺
乳動物体に投与し生成する抗体を採取することを
特徴とする腸管グルカゴン抗体の製造法に係る。
本発明方法においては、ハプテンとして上記一
般式(1)で表わされるペプチドを用いることを必須
とする。上記一般式(1)においてＲで示されるアミ
ノ酸基としては例えばＨ−Arg−、Ｈ−Trp−、
Ｈ−Asn−、Ｈ−Ala−、Ｈ−Val−、Ｈ−Met
−、Ｈ−Leu−、Ｈ−Phe−、Ｈ−Lys−、Ｈ−
Tyr−、Ｈ−ILe−、Ｈ−Cys−、〓〓〓〓〓、Ｈ
−Gly−、Ｈ−His−、Ｈ−Pro−等を挙げること
ができる。またアミノ酸基を２〜20個有するペプ
チド基としては例えばＨ−Gly−Lys−、Ｈ−
Asn−Thr−、Ｈ−Met−Thr−Ａ、Ｈ−Met−
Asn−Ａ、Ｈ−Leu−Thr−Ａ、Ｈ−Trp−Thr−
Ａ、Ｈ−Phe−Val−Ａ、Ｈ−Gln−Ala−Ａ、Ｈ
−Asp−Arg−Ａ、Ｈ−Leu−Tyr−Ａ、Ｈ−Ser
−Lyr−Ａ、Ｈ−Met−Asn−Thr−Ａ、Ｈ−Leu
−Met−Asn−Thr−、Ｈ−Trp−Leu−Met−
Asn−Thr−、Ｈ−Gln−Trp−Leu−Met−Asn
−Thr−、Ｈ−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn
−Thr−、Ｈ−Phe−Val−Gln−Trp−Leu−Met
−Asn−Thr−、Ｈ−Asp−Phe−Val−Gln−
Trp−Leu−Met−Asn−Thr−、Ｈ−Gln−Asp
−Phe−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr
−、Ｈ−Ala−Gln−Asp−Phe−Val−Gln−Trp
−Leu−Met−Asn−Thr−、Ｈ−Arg−Ala−Gln
−Asp−Phe−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn
−Thr−、Ｈ−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe
−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−、Ｈ
−Ser−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−Val
−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−、Ｈ−
Asp−Ser−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−
Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−、Ｈ−
Leu−Asp−Ser−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−
Phe−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr
−、Ｈ−Tyr−Leu−Asp−Ser−Arg−Arg−
Ala−Gln−Asp−Phe−Val−Gln−Trp−Leu−
Met−Asn−Thr−、Ｈ−Lys−Tyr−Leu−Asp
−Ser−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−Val
−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−、Ｈ−Ser
−Lys−Tyr−Leu−Asp−Ser−Arg−Arg−Ala
−Glu−Asp−Phe−Val−Gln−Trp−Leu−Met
−Asn−Thr−等を挙げることができる。これら
のうちでＲが豚のグリセンチンのＮ未端より第73
〜92番のペプチド鎖のＮ未端から順次１〜19個の
アミノ酸を除去したペプチド基及びアミノ酸基で
あるのが好ましい。
般式(1)で表わされるペプチドを用いることを必須
とする。上記一般式(1)においてＲで示されるアミ
ノ酸基としては例えばＨ−Arg−、Ｈ−Trp−、
Ｈ−Asn−、Ｈ−Ala−、Ｈ−Val−、Ｈ−Met
−、Ｈ−Leu−、Ｈ−Phe−、Ｈ−Lys−、Ｈ−
Tyr−、Ｈ−ILe−、Ｈ−Cys−、〓〓〓〓〓、Ｈ
−Gly−、Ｈ−His−、Ｈ−Pro−等を挙げること
ができる。またアミノ酸基を２〜20個有するペプ
チド基としては例えばＨ−Gly−Lys−、Ｈ−
Asn−Thr−、Ｈ−Met−Thr−Ａ、Ｈ−Met−
Asn−Ａ、Ｈ−Leu−Thr−Ａ、Ｈ−Trp−Thr−
Ａ、Ｈ−Phe−Val−Ａ、Ｈ−Gln−Ala−Ａ、Ｈ
−Asp−Arg−Ａ、Ｈ−Leu−Tyr−Ａ、Ｈ−Ser
−Lyr−Ａ、Ｈ−Met−Asn−Thr−Ａ、Ｈ−Leu
−Met−Asn−Thr−、Ｈ−Trp−Leu−Met−
Asn−Thr−、Ｈ−Gln−Trp−Leu−Met−Asn
−Thr−、Ｈ−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn
−Thr−、Ｈ−Phe−Val−Gln−Trp−Leu−Met
−Asn−Thr−、Ｈ−Asp−Phe−Val−Gln−
Trp−Leu−Met−Asn−Thr−、Ｈ−Gln−Asp
−Phe−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr
−、Ｈ−Ala−Gln−Asp−Phe−Val−Gln−Trp
−Leu−Met−Asn−Thr−、Ｈ−Arg−Ala−Gln
−Asp−Phe−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn
−Thr−、Ｈ−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe
−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−、Ｈ
−Ser−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−Val
−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−、Ｈ−
Asp−Ser−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−
Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−、Ｈ−
Leu−Asp−Ser−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−
Phe−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr
−、Ｈ−Tyr−Leu−Asp−Ser−Arg−Arg−
Ala−Gln−Asp−Phe−Val−Gln−Trp−Leu−
Met−Asn−Thr−、Ｈ−Lys−Tyr−Leu−Asp
−Ser−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−Val
−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−、Ｈ−Ser
−Lys−Tyr−Leu−Asp−Ser−Arg−Arg−Ala
−Glu−Asp−Phe−Val−Gln−Trp−Leu−Met
−Asn−Thr−等を挙げることができる。これら
のうちでＲが豚のグリセンチンのＮ未端より第73
〜92番のペプチド鎖のＮ未端から順次１〜19個の
アミノ酸を除去したペプチド基及びアミノ酸基で
あるのが好ましい。
ハプテン結合される担体としては、通常抗原の
作成に当り慣用される高分子の天然若しくは合成
の蛋白質を広く使用でき、例えば馬血清アルブミ
ン、牛血清アルブミン、ウサギ血清アルブミン、
人血清アルブミン、ヒツジ血清アルブミン等の動
物の血清アルブミン類、馬血清グロブリン、牛血
清グロブリン、ウサギ血清グロブリン、人血清グ
ロブリン、ヒツジ血清グロブリン等の動物の血清
グロブリン類、馬チログロブリン、牛チログロブ
リン、ウサギチログロブリン、人チログロブリ
ン、ヒツジチログロブリン等の動物のチログロブ
リン類、馬ヘモグロビン、牛ヘモグロブリン、ウ
サギヘモグロブリン、人ヘモグロブリン、ヒツジ
ヘモグロブリン等の動物のヘモグロブリン類、動
物のヘモシアニン類、回虫より抽出された蛋白質
（アスカーリス抽出物、特開昭56−16414号参
照）、ポリリジン、ポリグルタミン酸、リジン−
グルタミン酸共重合体、リジン又はオルニチンを
含む共重合体等を挙げることができる。
作成に当り慣用される高分子の天然若しくは合成
の蛋白質を広く使用でき、例えば馬血清アルブミ
ン、牛血清アルブミン、ウサギ血清アルブミン、
人血清アルブミン、ヒツジ血清アルブミン等の動
物の血清アルブミン類、馬血清グロブリン、牛血
清グロブリン、ウサギ血清グロブリン、人血清グ
ロブリン、ヒツジ血清グロブリン等の動物の血清
グロブリン類、馬チログロブリン、牛チログロブ
リン、ウサギチログロブリン、人チログロブリ
ン、ヒツジチログロブリン等の動物のチログロブ
リン類、馬ヘモグロビン、牛ヘモグロブリン、ウ
サギヘモグロブリン、人ヘモグロブリン、ヒツジ
ヘモグロブリン等の動物のヘモグロブリン類、動
物のヘモシアニン類、回虫より抽出された蛋白質
（アスカーリス抽出物、特開昭56−16414号参
照）、ポリリジン、ポリグルタミン酸、リジン−
グルタミン酸共重合体、リジン又はオルニチンを
含む共重合体等を挙げることができる。
アスカーリス抽出物について以下に詳述する。
アスカーリス抽出物は、ブタ回虫
（Ascarissuum）の粉砕物より通常の蛋白抽出法
に従い抽出される。抽出溶媒としては例えば水、
生理食塩水、50％メタノールまたはエタノール水
溶液、中性付近の緩衝液等の公知の各種蛋白抽出
溶媒を使用でき、特に生理食塩水を用いるのが好
ましい。上記抽出物は、より具体的には、例えば
次の如くして製造される。即ちブタ回虫の内容物
を除去し、生理食塩水で洗浄後、抽出を容易とす
るため好ましくは細断し、該細断物を例えば生理
食塩水等の蛋白抽出溶媒中に添加し、ホモジネー
トしながら抽出する。この抽出は通常低温下にお
いて行なわれ、好ましくは約２〜10℃で有利に行
なわれる。かくして得られる抽出液を次いで遠心
分離し、上清を採取し透析後透析液を凍結乾燥す
るか又は更に上記透析液を再度遠心分離し、上清
を採取し、浮遊物を除去後凍結乾燥することによ
つて、目的とするアスカーリス抽出物が製造され
る。これは更に必要に応じて通常の蛋白精製手段
例えば透析法、ゲル過法、吸着法、クロマトグ
ラフ法等により精製後、本発明に利用することが
できる。また本発明に用いるアスカーリス抽出物
は、例えばJ.Immun.、111、260〜268（1973）、
J.Immun.、122、302〜308（1979）、J.Immun.、
98、893〜900（1967）及びAm.J.Physiol.、199、
575〜578（1960）に記載されたものまたはこれら
を更に精製したものであつてもよい。
アスカーリス抽出物は、ブタ回虫
（Ascarissuum）の粉砕物より通常の蛋白抽出法
に従い抽出される。抽出溶媒としては例えば水、
生理食塩水、50％メタノールまたはエタノール水
溶液、中性付近の緩衝液等の公知の各種蛋白抽出
溶媒を使用でき、特に生理食塩水を用いるのが好
ましい。上記抽出物は、より具体的には、例えば
次の如くして製造される。即ちブタ回虫の内容物
を除去し、生理食塩水で洗浄後、抽出を容易とす
るため好ましくは細断し、該細断物を例えば生理
食塩水等の蛋白抽出溶媒中に添加し、ホモジネー
トしながら抽出する。この抽出は通常低温下にお
いて行なわれ、好ましくは約２〜10℃で有利に行
なわれる。かくして得られる抽出液を次いで遠心
分離し、上清を採取し透析後透析液を凍結乾燥す
るか又は更に上記透析液を再度遠心分離し、上清
を採取し、浮遊物を除去後凍結乾燥することによ
つて、目的とするアスカーリス抽出物が製造され
る。これは更に必要に応じて通常の蛋白精製手段
例えば透析法、ゲル過法、吸着法、クロマトグ
ラフ法等により精製後、本発明に利用することが
できる。また本発明に用いるアスカーリス抽出物
は、例えばJ.Immun.、111、260〜268（1973）、
J.Immun.、122、302〜308（1979）、J.Immun.、
98、893〜900（1967）及びAm.J.Physiol.、199、
575〜578（1960）に記載されたものまたはこれら
を更に精製したものであつてもよい。
ハプテンと担体との結合は、通常抗原の作成に
当り慣用されている各種のハプテン−担体結合試
薬を用いて行なわれる。斯かる結合試薬として
は、具体的にはアミノ基とアミノ基とを架橋結合
させる、例えばグリオキサール、マロンジアルデ
ヒド、グルタールアルデヒド、スクシンアルデヒ
ド、アジポアルデヒド等の脂肪族ジアルデヒド
類、チオール基とチオール基とを架橋結合させ
る、例えばＮ・N′−ｏ−フエニレンジマレイミ
ド、Ｎ・N′−ｍ−フエニレンジマレイミド等の
ジマレイミド化合物、アミノ基とチオール基とを
架橋結合させる、例えばメタマレイミドベンゾイ
ル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、４
−（マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カ
ルボキシル−N′−ヒドロキシスクシンイミドエ
ステル等のマレイミドカルボキシル−Ｎ−ヒドロ
キシスクシンイミドエステル化合物、アミノ基と
カルボキシル基とをアミド結合させる通常のペプ
チド結合形成反応に用いられる試薬、例えばＮ・
Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−エチ
ル−N′−ジメチルアミノカルボジイミド、１−
エチル−３−ジイソプロピルアミノカルボジイミ
ド、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニ
ル−４−エチル）カルボジイミド等のカルボジイ
ミド類等の脱水縮合剤を挙げることができるが、
さらにはｐ−ジアゾニウムフエニル酢酸等のジア
ゾニウムアリールカルボン酸類と通常のペプチド
結合形成反応試薬、例えば上記脱水縮合剤とを組
み合わせたものも使用可能である。
当り慣用されている各種のハプテン−担体結合試
薬を用いて行なわれる。斯かる結合試薬として
は、具体的にはアミノ基とアミノ基とを架橋結合
させる、例えばグリオキサール、マロンジアルデ
ヒド、グルタールアルデヒド、スクシンアルデヒ
ド、アジポアルデヒド等の脂肪族ジアルデヒド
類、チオール基とチオール基とを架橋結合させ
る、例えばＮ・N′−ｏ−フエニレンジマレイミ
ド、Ｎ・N′−ｍ−フエニレンジマレイミド等の
ジマレイミド化合物、アミノ基とチオール基とを
架橋結合させる、例えばメタマレイミドベンゾイ
ル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、４
−（マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カ
ルボキシル−N′−ヒドロキシスクシンイミドエ
ステル等のマレイミドカルボキシル−Ｎ−ヒドロ
キシスクシンイミドエステル化合物、アミノ基と
カルボキシル基とをアミド結合させる通常のペプ
チド結合形成反応に用いられる試薬、例えばＮ・
Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−エチ
ル−N′−ジメチルアミノカルボジイミド、１−
エチル−３−ジイソプロピルアミノカルボジイミ
ド、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニ
ル−４−エチル）カルボジイミド等のカルボジイ
ミド類等の脱水縮合剤を挙げることができるが、
さらにはｐ−ジアゾニウムフエニル酢酸等のジア
ゾニウムアリールカルボン酸類と通常のペプチド
結合形成反応試薬、例えば上記脱水縮合剤とを組
み合わせたものも使用可能である。
本発明の抗原は上記ハプテンと担体とをハプテ
ン−担体結合試薬の存在下に反応させることによ
り製造される。上記反応は、水溶液もしくはPH７
〜10の通常の緩衝液中好ましくはPH８〜９の緩衝
液中で０〜40℃好ましくは室温付近で行なわれ、
約１〜24時間で反応は完結する。上記において用
いられる代表的緩衝液としては、次のようなもの
を例示できる。
ン−担体結合試薬の存在下に反応させることによ
り製造される。上記反応は、水溶液もしくはPH７
〜10の通常の緩衝液中好ましくはPH８〜９の緩衝
液中で０〜40℃好ましくは室温付近で行なわれ、
約１〜24時間で反応は完結する。上記において用
いられる代表的緩衝液としては、次のようなもの
を例示できる。
0.2N水酸化ナトリウム−0.2Mホウ酸−0.2M塩
化カリウム緩衝液、 0.2M炭酸ナトリウム−0.2Mホウ酸−0.2M塩化
カリウム緩衝液、 0.05M四ホウ酸ナトリウム−0.2Mホウ酸−
0.05M塩化ナトリウム緩衝液、 0.1Mリン酸二水素カリウム−0.05M四ホウ酸ナ
トリウム緩衝液 上記においてハプテン、ハプテン−担体結合試
薬及び担体の使用割合は適宜に決定できるが、通
常ハプテンに対して担体を２〜６倍重量好ましく
は３〜５倍重量、及びハプテン−担体結合試薬５
〜10倍モルとするのがよい。上記反応によりハプ
テン−担体結合試薬を仲介させて担体とハプテン
とが結合した本発明のペプチド−担体複合体から
成る腸管グルカゴンの抗原が収得される。反応終
了後得られる抗原は常法に従い、例えば透析法、
ゲル過法、分別沈殿法等により容易に単離精製
できる。また該抗原は通常の凍結乾燥法により保
存できる。かくして得られる本発明の抗原は、通
常蛋白質１モルに対しペプチドが平均５〜20モル
結合したものであり、いずれも引き続き再現性よ
く、腸管グルカゴンに対する特異性の高い抗体の
作成を可能とするものであるが、特に上記蛋白質
に対するペプチドの結合モル比が１：８〜15のも
のは、特異性が一層高く高力価、高感度の抗体を
作成し得るものであり好ましい。
化カリウム緩衝液、 0.2M炭酸ナトリウム−0.2Mホウ酸−0.2M塩化
カリウム緩衝液、 0.05M四ホウ酸ナトリウム−0.2Mホウ酸−
0.05M塩化ナトリウム緩衝液、 0.1Mリン酸二水素カリウム−0.05M四ホウ酸ナ
トリウム緩衝液 上記においてハプテン、ハプテン−担体結合試
薬及び担体の使用割合は適宜に決定できるが、通
常ハプテンに対して担体を２〜６倍重量好ましく
は３〜５倍重量、及びハプテン−担体結合試薬５
〜10倍モルとするのがよい。上記反応によりハプ
テン−担体結合試薬を仲介させて担体とハプテン
とが結合した本発明のペプチド−担体複合体から
成る腸管グルカゴンの抗原が収得される。反応終
了後得られる抗原は常法に従い、例えば透析法、
ゲル過法、分別沈殿法等により容易に単離精製
できる。また該抗原は通常の凍結乾燥法により保
存できる。かくして得られる本発明の抗原は、通
常蛋白質１モルに対しペプチドが平均５〜20モル
結合したものであり、いずれも引き続き再現性よ
く、腸管グルカゴンに対する特異性の高い抗体の
作成を可能とするものであるが、特に上記蛋白質
に対するペプチドの結合モル比が１：８〜15のも
のは、特異性が一層高く高力価、高感度の抗体を
作成し得るものであり好ましい。
本発明で用いられる一般式(1)のペプチドは公知
もしくは新規化合物を包含しており、斯かるペプ
チドは以下の方法によつて製造できる。
もしくは新規化合物を包含しており、斯かるペプ
チドは以下の方法によつて製造できる。
一般式(1)のペプチドは、ペプチド合成の常套手
段で製造し得る。固相合成法、液相合成法のいず
れによつてもよいが、液相合成法が有利な場合が
多い。そのようなペプチド合成の手段は、たとえ
ば“The Peptides”、第１巻（1966）、Schro¨der
and Luhke著、Academic Press、New York、
U.S.A.あるいは“ペプチド合成”、泉屋ら著、丸
善株式会社（1975年）に記載されており、たとえ
ばアジド法、クロライド法、酸無水物法、混酸無
水物法、DCC法、活性エステル法、ウツドワー
ド試薬Ｋを用いる方法、カルボジイミダゾール
法、酸化還元法、DCC／アデイテイブ（例
HONB、HOBt、HOSu）法などがあげられる。
段で製造し得る。固相合成法、液相合成法のいず
れによつてもよいが、液相合成法が有利な場合が
多い。そのようなペプチド合成の手段は、たとえ
ば“The Peptides”、第１巻（1966）、Schro¨der
and Luhke著、Academic Press、New York、
U.S.A.あるいは“ペプチド合成”、泉屋ら著、丸
善株式会社（1975年）に記載されており、たとえ
ばアジド法、クロライド法、酸無水物法、混酸無
水物法、DCC法、活性エステル法、ウツドワー
ド試薬Ｋを用いる方法、カルボジイミダゾール
法、酸化還元法、DCC／アデイテイブ（例
HONB、HOBt、HOSu）法などがあげられる。
一般式(1)のペプチドは、一般のポリペプチドの
合成法、例えば未端アミノ酸に順次１個づつアミ
ノ酸を縮合させる所謂ステツプワイズ法、数個の
フラグメントに分けてカツプリングさせていく方
法等に従い容易に製造できる。より詳細には上記
ペプチドは、その結合の任意の位置で２分される
２種のフラグメントの一方に相当する反応性カル
ボキシル基を有する原料と、他方のフラグメント
に相当する反応性アミノ基を有する原料をペプチ
ド合成の常套手段で縮合させ、生成する縮合物が
保護基を有する場合、その保護基を常套手段で脱
離させることにより製造し得る。
合成法、例えば未端アミノ酸に順次１個づつアミ
ノ酸を縮合させる所謂ステツプワイズ法、数個の
フラグメントに分けてカツプリングさせていく方
法等に従い容易に製造できる。より詳細には上記
ペプチドは、その結合の任意の位置で２分される
２種のフラグメントの一方に相当する反応性カル
ボキシル基を有する原料と、他方のフラグメント
に相当する反応性アミノ基を有する原料をペプチ
ド合成の常套手段で縮合させ、生成する縮合物が
保護基を有する場合、その保護基を常套手段で脱
離させることにより製造し得る。
一般式(1)のペプチドを製造する反応工程でアス
パラギン酸は通常保護しておくのが望ましい場合
が多く、最終工程としてはペプチドの構成アミノ
酸残基の少なくとも一つが保護された保護ペプチ
ドから保護基をすべて脱離することにより製造し
うる場合が多い。
パラギン酸は通常保護しておくのが望ましい場合
が多く、最終工程としてはペプチドの構成アミノ
酸残基の少なくとも一つが保護された保護ペプチ
ドから保護基をすべて脱離することにより製造し
うる場合が多い。
原料の反応に関与すべきでない官能基の保護及
び保護基、並びにその保護基の脱離、反応に関与
する官能基の活性化などもまた公知のものあるい
は手段から適宜選択し得る。
び保護基、並びにその保護基の脱離、反応に関与
する官能基の活性化などもまた公知のものあるい
は手段から適宜選択し得る。
原料のアミノ基の保護基としては、例えばカル
ボベンゾキシ、tert−ブチルオキシカルボニル、
tert−アミルオキシカルボニル、イソボルニルオ
キシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカ
ルボニル、２−クロル−ベンジルオキシカルボニ
ル、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオ
ロアセチル、フタリル、ホルミル、ｏ−ニトロフ
エニルスルフエニル、ジフエニルホスフイノチオ
イルなどが挙げられる。カルボキシル基の保護基
としては、例えばアルキルエステル（例メチル、
エチル、プロピル、ブチル、tert−ブチルなどの
エステル基）、ベンジルエステル基、ｐ−ニトロ
ベンジルエステル基、ｐ−メトキシベンジルエス
テル基、ｐ−クロルベンジルエステル基、ベンズ
ヒドリルエステル基、カルボベンゾキシヒドラジ
ド基、tert−ブチルオキシカルボニルヒドラジド
基、トリチルヒドラジド基等が挙げられる。
ボベンゾキシ、tert−ブチルオキシカルボニル、
tert−アミルオキシカルボニル、イソボルニルオ
キシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカ
ルボニル、２−クロル−ベンジルオキシカルボニ
ル、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオ
ロアセチル、フタリル、ホルミル、ｏ−ニトロフ
エニルスルフエニル、ジフエニルホスフイノチオ
イルなどが挙げられる。カルボキシル基の保護基
としては、例えばアルキルエステル（例メチル、
エチル、プロピル、ブチル、tert−ブチルなどの
エステル基）、ベンジルエステル基、ｐ−ニトロ
ベンジルエステル基、ｐ−メトキシベンジルエス
テル基、ｐ−クロルベンジルエステル基、ベンズ
ヒドリルエステル基、カルボベンゾキシヒドラジ
ド基、tert−ブチルオキシカルボニルヒドラジド
基、トリチルヒドラジド基等が挙げられる。
アルギニンのグアニジノ基の保護基としては、
例えばニトロ基、トシル基、ｐ−メトキシベンゼ
ンスルホニル基、カルボベンゾキシ、イソボルニ
ルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボ
ニル等が挙げられる。また、そのグアニジノ基は
酸（例、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン
酸、塩酸、硫酸など）塩の形で保護してもよい。
例えばニトロ基、トシル基、ｐ−メトキシベンゼ
ンスルホニル基、カルボベンゾキシ、イソボルニ
ルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボ
ニル等が挙げられる。また、そのグアニジノ基は
酸（例、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン
酸、塩酸、硫酸など）塩の形で保護してもよい。
スレオニンの水酸基は、例えばエステル化また
はエーテル化によつて保護することができる。こ
のエステル化に適する基としては例えばアセチル
基等の低級アルカノイル基、ベンゾイル基等のア
ロイル基、ベンゾイルオキシカルボニル基、エチ
ルオキシカルボニル基等の炭酸から誘導される基
等が挙げられる。またエーテル化に適する基とし
ては、例えばベンジル基、テトラヒドロピラニル
基、tert−ブチル基等である。しかしながらスレ
オニンの水酸基は必ずしも保護する必要はない。
メチオニンはスルホキサイドの形で保護しておい
てもよい。原料のカルボキシル基の活性化された
ものとしては、例えば対応する酸無水物、アジ
ド、活性エステル（ペンタクロロフエノール、ｐ
−ニトロフエノール、Ｎ−ヒドロキシサクシンイ
ミド、Ｎ−ヒドロキシベンズトリアゾール、Ｎ−
ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２・３−ジカル
ボキシイミド等とのエステル）等が挙げられる。
ペプチド結合形成反応は脱水剤（例ジシクロヘキ
シルカルボジイミド、カルボジイミダゾール等の
カルボジイミド試薬）の存在下に実施し得る場合
がある。
はエーテル化によつて保護することができる。こ
のエステル化に適する基としては例えばアセチル
基等の低級アルカノイル基、ベンゾイル基等のア
ロイル基、ベンゾイルオキシカルボニル基、エチ
ルオキシカルボニル基等の炭酸から誘導される基
等が挙げられる。またエーテル化に適する基とし
ては、例えばベンジル基、テトラヒドロピラニル
基、tert−ブチル基等である。しかしながらスレ
オニンの水酸基は必ずしも保護する必要はない。
メチオニンはスルホキサイドの形で保護しておい
てもよい。原料のカルボキシル基の活性化された
ものとしては、例えば対応する酸無水物、アジ
ド、活性エステル（ペンタクロロフエノール、ｐ
−ニトロフエノール、Ｎ−ヒドロキシサクシンイ
ミド、Ｎ−ヒドロキシベンズトリアゾール、Ｎ−
ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２・３−ジカル
ボキシイミド等とのエステル）等が挙げられる。
ペプチド結合形成反応は脱水剤（例ジシクロヘキ
シルカルボジイミド、カルボジイミダゾール等の
カルボジイミド試薬）の存在下に実施し得る場合
がある。
ペプチド結合形成反応は溶媒の存在下に行なう
ことができる。溶媒としては、ペプチド縮合反応
に使用し得ることが知られているものから適宜選
択でき、例えば無水または含水のジメチルホルム
アミド、ジメチルスルホキシド、ピリジン、クロ
ロホルム、ジオキサン、ジクロルメタン、テトラ
ヒドロフラン、酢酸エチル、Ｎ−メチルピロリド
ン或いはこれらの混合溶媒等が挙げられる。
ことができる。溶媒としては、ペプチド縮合反応
に使用し得ることが知られているものから適宜選
択でき、例えば無水または含水のジメチルホルム
アミド、ジメチルスルホキシド、ピリジン、クロ
ロホルム、ジオキサン、ジクロルメタン、テトラ
ヒドロフラン、酢酸エチル、Ｎ−メチルピロリド
ン或いはこれらの混合溶媒等が挙げられる。
反応温度はペプチド結合形成反応に使用され得
ることが知られている範囲から適宜選択され、通
常約−40〜約60℃、好ましくは約−20〜約０℃の
範囲から適宜選択される。
ることが知られている範囲から適宜選択され、通
常約−40〜約60℃、好ましくは約−20〜約０℃の
範囲から適宜選択される。
上記縮合反応終了後、生成物が保護基を有して
いる場合、それは常法により離脱できる。斯かる
常法としては、例えば還元的方法（例パラジウム
黒等の触媒を用いる水素添加、液体アンモニア中
金属ナトリウムによる還元）、アシドリシス（例
トリフルオロ酢酸、弗化水素、メタンスルホン酸
等の強酸によるアシドリシス）等が挙げられる。
いる場合、それは常法により離脱できる。斯かる
常法としては、例えば還元的方法（例パラジウム
黒等の触媒を用いる水素添加、液体アンモニア中
金属ナトリウムによる還元）、アシドリシス（例
トリフルオロ酢酸、弗化水素、メタンスルホン酸
等の強酸によるアシドリシス）等が挙げられる。
上記のようにして製造された一般式(1)のペプチ
ドは反応混合物からペプチドの分離手段例えば抽
出、分配、カラムクロマトグラフイー等により単
離精製される。
ドは反応混合物からペプチドの分離手段例えば抽
出、分配、カラムクロマトグラフイー等により単
離精製される。
RIA法において用いられる標識抗原の製造原料
である標識ペプチドは上記で製造されるペプチド
にI125、I131等の放射性ヨードを導入することによ
り製造される。該放射性ヨードの導入は通常のヨ
ード化法、例えばクロラミンＴを用いる酸化的ヨ
ード化法〔W.M.Hunter and F.C.Greenwood；
Nature、194、P495（1962）、Biochem.J.89、
P114（1963）参照〕により行なわれる。例えば
上記ヨード化法は、適当な溶媒例えば0.2Mリン
酸緩衝液（PH＝7.4）等の溶媒中、クロラミンＴ
の存在下室温付近にて10〜30秒程度で行なわれ
る。用いられるペプチド、放射性ヨード及びクロ
ラミンＴの使用割合としては、例えばチロシンに
放射性ヨードを１個導入する場合には、ペプチド
中に含まれるチロシン分子１ナノモルに対して放
射性ヨードを１ミリキユーリー程度、クロラミン
Ｔを10〜100ナノモル程度用いるのがよく、また
チロシンに放射性ヨードを２個導入する場合に
は、ペプチド中に含まれるチロシン分子１ナノモ
ルに対して放射性ヨードを２ミリキユーリー程
度、クロラミンＴを10〜100ナノモル程度用いる
のがよい。斯くして製造される放射性ヨードによ
り標識化されたペプチドは通常の分離手段例えば
抽出、分配、カラムクロマトグラフイー、透析等
により単離精製される。このようにして得られる
ペプチドは必要ならば凍結乾燥させて保存してお
くこともできる。
である標識ペプチドは上記で製造されるペプチド
にI125、I131等の放射性ヨードを導入することによ
り製造される。該放射性ヨードの導入は通常のヨ
ード化法、例えばクロラミンＴを用いる酸化的ヨ
ード化法〔W.M.Hunter and F.C.Greenwood；
Nature、194、P495（1962）、Biochem.J.89、
P114（1963）参照〕により行なわれる。例えば
上記ヨード化法は、適当な溶媒例えば0.2Mリン
酸緩衝液（PH＝7.4）等の溶媒中、クロラミンＴ
の存在下室温付近にて10〜30秒程度で行なわれ
る。用いられるペプチド、放射性ヨード及びクロ
ラミンＴの使用割合としては、例えばチロシンに
放射性ヨードを１個導入する場合には、ペプチド
中に含まれるチロシン分子１ナノモルに対して放
射性ヨードを１ミリキユーリー程度、クロラミン
Ｔを10〜100ナノモル程度用いるのがよく、また
チロシンに放射性ヨードを２個導入する場合に
は、ペプチド中に含まれるチロシン分子１ナノモ
ルに対して放射性ヨードを２ミリキユーリー程
度、クロラミンＴを10〜100ナノモル程度用いる
のがよい。斯くして製造される放射性ヨードによ
り標識化されたペプチドは通常の分離手段例えば
抽出、分配、カラムクロマトグラフイー、透析等
により単離精製される。このようにして得られる
ペプチドは必要ならば凍結乾燥させて保存してお
くこともできる。
上記で得られる抗原による抗体の作用に当つて
は、常法に従い抗原を哺乳動物に投与し、生体内
に産生される抗体を採取する方法を採用できる。
抗体の製造に供せられる哺乳動物としては特に制
限はないが、通常兎やモルモツトを用いるのが望
ましい。抗体の産生に当つては、上記により得ら
れる抗原の所定量を生理食塩水で適当濃度に希釈
し、フロインドの補助液（Complete Freund′s
Adjuvant）と混合して懸濁液を調整し、之を哺
乳動物体に投与すればよい。例えば兎に上記懸濁
液を皮内注射（抗原の量として0.5〜５mg／回）
し、以後２週間毎に２〜10ケ月好ましくは４〜６
ケ月間投与し免疫化させればよい。抗体の採取
は、上記懸濁液の最終投与後抗体が多量産出され
る時期、通常上記最終投与１〜２週間経過後、免
疫化された動物から採血し、之を遠心分離後血清
を分離採取することにより行なわれる。殊に本発
明方法によれば、用いる抗原の特殊性に基づい
て、常に安定して人及び動物の腸管グルカゴンに
対して非常に優れた特異性を有し、高力価、高感
度の抗体を再現性よく収得できる利点がある。
は、常法に従い抗原を哺乳動物に投与し、生体内
に産生される抗体を採取する方法を採用できる。
抗体の製造に供せられる哺乳動物としては特に制
限はないが、通常兎やモルモツトを用いるのが望
ましい。抗体の産生に当つては、上記により得ら
れる抗原の所定量を生理食塩水で適当濃度に希釈
し、フロインドの補助液（Complete Freund′s
Adjuvant）と混合して懸濁液を調整し、之を哺
乳動物体に投与すればよい。例えば兎に上記懸濁
液を皮内注射（抗原の量として0.5〜５mg／回）
し、以後２週間毎に２〜10ケ月好ましくは４〜６
ケ月間投与し免疫化させればよい。抗体の採取
は、上記懸濁液の最終投与後抗体が多量産出され
る時期、通常上記最終投与１〜２週間経過後、免
疫化された動物から採血し、之を遠心分離後血清
を分離採取することにより行なわれる。殊に本発
明方法によれば、用いる抗原の特殊性に基づい
て、常に安定して人及び動物の腸管グルカゴンに
対して非常に優れた特異性を有し、高力価、高感
度の抗体を再現性よく収得できる利点がある。
かくして得られる抗体は、上記の通り殊に優れ
た腸管グルカゴン特異性を有するものであり、斯
界で要望されているRIA法による人の腸管グルカ
ゴンの定量を高精度をもつて可能とする有用なも
のである。また該抗体は、これに酵素または螢光
物質で標識することによつてエンザイムイムノア
ツセイ（EIA）法、フローレツセンスイムノアツ
セイ（FIA）法等に使用できる。さらに該抗体は
公知の不溶化させる物質と反応させて不溶化抗体
とすることもできる。
た腸管グルカゴン特異性を有するものであり、斯
界で要望されているRIA法による人の腸管グルカ
ゴンの定量を高精度をもつて可能とする有用なも
のである。また該抗体は、これに酵素または螢光
物質で標識することによつてエンザイムイムノア
ツセイ（EIA）法、フローレツセンスイムノアツ
セイ（FIA）法等に使用できる。さらに該抗体は
公知の不溶化させる物質と反応させて不溶化抗体
とすることもできる。
以下本発明を更に詳しく説明するための参考例
及び実施例を挙げるが、本発明はこれに限定され
るものではない。
及び実施例を挙げるが、本発明はこれに限定され
るものではない。
尚参考例におけるＲf値はシリカゲル上の薄層
クロマトグラフイーにて下記混合溶媒を用いて測
定したものである。
クロマトグラフイーにて下記混合溶媒を用いて測
定したものである。
Ｒf I……１−ブタノール−酢酸−水（４：１：
５） Ｒf〓……１−ブタノール−ピリジン−酢酸−水
（30：20：６：24） ＜一般式(1)のペプチドの製造例＞ 参考例 １ (1) Ｚ−ILe−Ala−OHの製造 テトラヒドロフラン50mlに溶解したＺ−ILe
−OSu10.87ｇを氷冷下Ｈ−Ala−OH2.67ｇ及
びトリエチルアミン4.20mlを含む水溶液30mlに
加える。反応液を室温で20時間撹拌後溶媒を留
去し、残渣を２％トリエチルアミン水溶液100
mlに溶解し、酢酸エチルで３回洗浄する。水溶
液を3N−クエン酸で酸性にすると油状物が析
出する。これを酢酸エチルで抽出し、1N−ク
エン酸及び飽和食塩水で洗浄後溶媒を留去す
る。残留物をメタノール−エーテル混液から固
化して目的物6.5ｇを得る。
５） Ｒf〓……１−ブタノール−ピリジン−酢酸−水
（30：20：６：24） ＜一般式(1)のペプチドの製造例＞ 参考例 １ (1) Ｚ−ILe−Ala−OHの製造 テトラヒドロフラン50mlに溶解したＺ−ILe
−OSu10.87ｇを氷冷下Ｈ−Ala−OH2.67ｇ及
びトリエチルアミン4.20mlを含む水溶液30mlに
加える。反応液を室温で20時間撹拌後溶媒を留
去し、残渣を２％トリエチルアミン水溶液100
mlに溶解し、酢酸エチルで３回洗浄する。水溶
液を3N−クエン酸で酸性にすると油状物が析
出する。これを酢酸エチルで抽出し、1N−ク
エン酸及び飽和食塩水で洗浄後溶媒を留去す
る。残留物をメタノール−エーテル混液から固
化して目的物6.5ｇを得る。
融点 156〜161℃
〔α〕２０ Ｄ：−29.4゜（C1.0、メタノール）
(2) Ｚ−Asn−ILe−Ala−OHの製造
Ｚ−ILe−Ala−OH3.36ｇをメタノール20ml
及び水15mlの混液中パラジウム黒の存在下接触
還元する。得られるジペプチドをトリエチルア
ミン1.4mlを含む水20mlとテトラヒドロフラン
16mlに溶解し、−10℃に冷却する。この溶液
に、ジメチルホルムアミド15ml及びテトラヒド
ロフラン20mlの混合液中−10℃でＺ−Asn−
OH3.46ｇ、クロロギ酸イソブチル1.67ml及び
Ｎ−メチルモルホリン1.42mlから得たＺ−Asn
の混合酸無水物を添加し、反応混合物を０℃で
５分、15℃で30分間撹拌した後溶媒を留去す
る。残留物に1N−クエン酸を添加し、析出す
る沈殿を水洗、乾燥させ、さらにメタノール−
酢酸エチルより再沈殿により精製し、目的物
3.60ｇを得る。
及び水15mlの混液中パラジウム黒の存在下接触
還元する。得られるジペプチドをトリエチルア
ミン1.4mlを含む水20mlとテトラヒドロフラン
16mlに溶解し、−10℃に冷却する。この溶液
に、ジメチルホルムアミド15ml及びテトラヒド
ロフラン20mlの混合液中−10℃でＺ−Asn−
OH3.46ｇ、クロロギ酸イソブチル1.67ml及び
Ｎ−メチルモルホリン1.42mlから得たＺ−Asn
の混合酸無水物を添加し、反応混合物を０℃で
５分、15℃で30分間撹拌した後溶媒を留去す
る。残留物に1N−クエン酸を添加し、析出す
る沈殿を水洗、乾燥させ、さらにメタノール−
酢酸エチルより再沈殿により精製し、目的物
3.60ｇを得る。
融点 240〜244℃（分解）
〔α〕１９ Ｄ：−13.8゜（C1.0、ジメチルホルムアミ
ド） (3) Ｚ−Asn−Asn−ILe−Ala−OHの製造 Ｚ−Asn−ILe−Ala−OH4.74ｇを氷酢酸20
mlに溶解し、次に25％臭化水素−酢酸25mlを添
加し、室温で60分間放置した後、無水エーテル
を加え、生成する沈殿物を取し、エーテルで
洗浄後水酸化カリカム上で乾燥させる。このよ
うにして得られる脱カルボベンゾキシ化体をト
リエチルアミン3.08mlを含むジメチルホルムア
ミド50mlに溶解し、−10℃に冷却する。この溶
液に、Ｚ−Asn−OH4.18ｇ、Ｎ−メチルモル
ホリン1.60ml及びクロロギ酸イソブチルから生
成するＺ−Asnの混合酸無水物を添加し、上記
(2)と同様にして目的物3.60ｇを得る。
ド） (3) Ｚ−Asn−Asn−ILe−Ala−OHの製造 Ｚ−Asn−ILe−Ala−OH4.74ｇを氷酢酸20
mlに溶解し、次に25％臭化水素−酢酸25mlを添
加し、室温で60分間放置した後、無水エーテル
を加え、生成する沈殿物を取し、エーテルで
洗浄後水酸化カリカム上で乾燥させる。このよ
うにして得られる脱カルボベンゾキシ化体をト
リエチルアミン3.08mlを含むジメチルホルムア
ミド50mlに溶解し、−10℃に冷却する。この溶
液に、Ｚ−Asn−OH4.18ｇ、Ｎ−メチルモル
ホリン1.60ml及びクロロギ酸イソブチルから生
成するＺ−Asnの混合酸無水物を添加し、上記
(2)と同様にして目的物3.60ｇを得る。
融点 235℃（分解）
〔α〕２３ Ｄ：−10.1゜（C0.5、80％酢酸）
(4) Ｚ−Lys（Tos）−Asn−Asn−ILe−Ala−
OHの製造 Ｚ−Asn−Asn−ILe−Ala−OH3.41ｇを氷
酢酸15mlに溶解し、次に25％臭化水素−酢酸25
mlを添加し、上記(3)と同様にしてカルボベンゾ
キシ化する。得られる脱カルボベンゾキシ化体
をトリエチルアミン1.70mlを含むジメチルホル
ムアミド30mlに溶解し、この溶液にＺ−Lys
（Tos）−OH3.13ｇ、Ｎ−メチルモルホリン0.73
ml及びクロロギ酸イソブチル0.95ｇから得られ
る混合酸無水物を添加し、上記(2)と同様にして
目的物4.01ｇを得る。
OHの製造 Ｚ−Asn−Asn−ILe−Ala−OH3.41ｇを氷
酢酸15mlに溶解し、次に25％臭化水素−酢酸25
mlを添加し、上記(3)と同様にしてカルボベンゾ
キシ化する。得られる脱カルボベンゾキシ化体
をトリエチルアミン1.70mlを含むジメチルホル
ムアミド30mlに溶解し、この溶液にＺ−Lys
（Tos）−OH3.13ｇ、Ｎ−メチルモルホリン0.73
ml及びクロロギ酸イソブチル0.95ｇから得られ
る混合酸無水物を添加し、上記(2)と同様にして
目的物4.01ｇを得る。
融点 229〜230℃（分解）
〔α〕２３ Ｄ：−19.4゜（C1.0、ジメチルホルムアミ
ド） (5) Ｚ−Arg（NO2）−Asn−Lys（Tos）−Asn−
Asn−ILe−Ala−OHの製造 Ｚ−Lys（Tos）−Asn−Asn−ILe−Ala−
OH2.03ｇを氷酢酸20mlに溶解し、次に25％臭
化水素−酢酸20mlを添加し、上記(3)と同様にし
て脱カルボベンゾキシ化する。
ド） (5) Ｚ−Arg（NO2）−Asn−Lys（Tos）−Asn−
Asn−ILe−Ala−OHの製造 Ｚ−Lys（Tos）−Asn−Asn−ILe−Ala−
OH2.03ｇを氷酢酸20mlに溶解し、次に25％臭
化水素−酢酸20mlを添加し、上記(3)と同様にし
て脱カルボベンゾキシ化する。
一方Ｚ−Arg（NO2）−Asn−N2H2Boc4.19ｇ
をトリフロロ酢酸中に30分間室温放置して脱
Boc化した後ジメチルホルムアミド20mlに溶解
し、−15℃で6N−塩酸−ジオキサン3.61ml、次
いで亜硝酸イソアミル0.96mlを添加し、−10℃
にて５分間撹拌後トリエチルアミンでPH7.5に
調節する。この溶液を上記で得られる脱カルボ
ベンゾキシ化体とトリエチルアミン0.64mlとを
含むジメチルホルムアミド30mlに−10℃で添加
する。反応混合物を４℃にて20時間撹拌する。
溶媒を留去し、残留物に10％酢酸を加え、固化
物を取、水洗、乾燥させ、さらにメタノール
−酢酸エチルより再沈殿させて目的物2.19ｇを
得る。
をトリフロロ酢酸中に30分間室温放置して脱
Boc化した後ジメチルホルムアミド20mlに溶解
し、−15℃で6N−塩酸−ジオキサン3.61ml、次
いで亜硝酸イソアミル0.96mlを添加し、−10℃
にて５分間撹拌後トリエチルアミンでPH7.5に
調節する。この溶液を上記で得られる脱カルボ
ベンゾキシ化体とトリエチルアミン0.64mlとを
含むジメチルホルムアミド30mlに−10℃で添加
する。反応混合物を４℃にて20時間撹拌する。
溶媒を留去し、残留物に10％酢酸を加え、固化
物を取、水洗、乾燥させ、さらにメタノール
−酢酸エチルより再沈殿させて目的物2.19ｇを
得る。
融点 232〜234℃
〔α〕２１ Ｄ：−14.3゜（C1.0、80％酢酸）
(6) Ｚ−Lys（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−
Asn−Asn−ILe−Ala−OHの製造 Ｚ−Arg（NO2）−Asn−Lys（Tos）−Asn−
Asn−ILe−Ala−OH2.14ｇを50％酢酸50ml中
パラジウム黒の存在下に接触還元して脱カルボ
ベンゾキシ化する。得られる脱カルボベンゾキ
シ化体をトリエチルアミン2.52mlを含有するジ
メチルホルムアミド20mlに溶解する。Ｚ−Lys
（Tos）−OH2.40ｇ及びＮ−ヒドロキシコハク
酸イミド0.64ｇをジシクロヘキシルカルボジイ
ミド1.14ｇの存在下に反応させて生成するＺ−
Lys（Tos）−OSuを精製することなく、上記溶
液に添加する。反応混合物を室温で20時間撹拌
する。溶媒を留去し、残留物に10％酢酸を添加
し、固化させて目的物1.42ｇを得る。
Asn−Asn−ILe−Ala−OHの製造 Ｚ−Arg（NO2）−Asn−Lys（Tos）−Asn−
Asn−ILe−Ala−OH2.14ｇを50％酢酸50ml中
パラジウム黒の存在下に接触還元して脱カルボ
ベンゾキシ化する。得られる脱カルボベンゾキ
シ化体をトリエチルアミン2.52mlを含有するジ
メチルホルムアミド20mlに溶解する。Ｚ−Lys
（Tos）−OH2.40ｇ及びＮ−ヒドロキシコハク
酸イミド0.64ｇをジシクロヘキシルカルボジイ
ミド1.14ｇの存在下に反応させて生成するＺ−
Lys（Tos）−OSuを精製することなく、上記溶
液に添加する。反応混合物を室温で20時間撹拌
する。溶媒を留去し、残留物に10％酢酸を添加
し、固化させて目的物1.42ｇを得る。
融点 200〜204℃
〔α〕２３ Ｄ：−30.5゜（C1.0、80％酢酸）
(7) Boc−Leu−Met−Asn−Thr−Lys（Tos）−
Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−ILe−
Ala−OHの製造 Ｚ−Lys（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−
Asn−Asn−ILe−Ala−OH1.38ｇを氷酢酸５
mlに溶解し、25％臭化水素−酢酸７mlを添加
し、上記(3)と同様にして脱カルボベンゾキシ化
する。
Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−ILe−
Ala−OHの製造 Ｚ−Lys（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−
Asn−Asn−ILe−Ala−OH1.38ｇを氷酢酸５
mlに溶解し、25％臭化水素−酢酸７mlを添加
し、上記(3)と同様にして脱カルボベンゾキシ化
する。
Boc−Leu−Met−Asn−ThrN2H31.75ｇをジ
メチルホルムアミド15mlに溶解し、上記(5)と同
様にして、6N−塩酸−ジオキサン1.43ml及び
亜硝酸イソアミル0.38mlを用いて調製した。
Boc−テトラペプチドアジドを上記脱カルボベ
ンゾキシ体とトリエチルアミン0.28mlを含むジ
メチルホルムアミド15ml溶液に加える。反応混
合物を４℃で20時間撹拌後、溶媒を留去し、残
留物を１−ブタノール−２％酢酸系で向流分配
した後１−ブタノール層を集める。溶媒を留去
し、残留物に酢酸エチルを加え、固化して得ら
れる生成物をメタノールで洗浄して目的物1.10
ｇを得る。
メチルホルムアミド15mlに溶解し、上記(5)と同
様にして、6N−塩酸−ジオキサン1.43ml及び
亜硝酸イソアミル0.38mlを用いて調製した。
Boc−テトラペプチドアジドを上記脱カルボベ
ンゾキシ体とトリエチルアミン0.28mlを含むジ
メチルホルムアミド15ml溶液に加える。反応混
合物を４℃で20時間撹拌後、溶媒を留去し、残
留物を１−ブタノール−２％酢酸系で向流分配
した後１−ブタノール層を集める。溶媒を留去
し、残留物に酢酸エチルを加え、固化して得ら
れる生成物をメタノールで洗浄して目的物1.10
ｇを得る。
Ｒf I値：0.28
(8) Boc−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys
（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−
ILe−Ala−OHの製造 Boc−Leu−Met−Asn−Thr−Lys（Tos）−
Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−ILe−
Ala−OH1.05ｇをトリフロロ酢酸６ml中室温で
30分放置した後、乾燥エーテルを添加、沈殿物
を取、エーテルで洗浄し、水酸化カリウム上
で減圧乾燥し、脱Boc体を得る。
（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−
ILe−Ala−OHの製造 Boc−Leu−Met−Asn−Thr−Lys（Tos）−
Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−ILe−
Ala−OH1.05ｇをトリフロロ酢酸６ml中室温で
30分放置した後、乾燥エーテルを添加、沈殿物
を取、エーテルで洗浄し、水酸化カリウム上
で減圧乾燥し、脱Boc体を得る。
Boc−Trp−OSu（これはBoc−Trp−OH700
mgとＮ−ヒドロキシコハク酸イミド265mgをジ
シクロヘキシルカルボジイミド475mgの作用で
反応させて製造したものである）をジオキサン
20mlに溶解し、この溶液を上記Boc体とトリエ
チルアミン0.16mlのジメチルホルムアミド15ml
溶液に加える。反応混合物を室温で24時間撹拌
後、溶媒を留去し、残留物に酢酸エチルを加
え、固化して得られる生成物をエタノールで洗
浄して目的物798mgを得る。
mgとＮ−ヒドロキシコハク酸イミド265mgをジ
シクロヘキシルカルボジイミド475mgの作用で
反応させて製造したものである）をジオキサン
20mlに溶解し、この溶液を上記Boc体とトリエ
チルアミン0.16mlのジメチルホルムアミド15ml
溶液に加える。反応混合物を室温で24時間撹拌
後、溶媒を留去し、残留物に酢酸エチルを加
え、固化して得られる生成物をエタノールで洗
浄して目的物798mgを得る。
Ｒf〓値：0.44
(9) Boc−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−
Thr−Lys（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−
Asn−Asn−ILe−Ala−OHの製造 Boc−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys
（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−
ILe−Ala−OH777mgをトリフロロ酢酸４ml中
で処理し、上記(8)と同様にして脱Boc体を得
る。
Thr−Lys（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−
Asn−Asn−ILe−Ala−OHの製造 Boc−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys
（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−
ILe−Ala−OH777mgをトリフロロ酢酸４ml中
で処理し、上記(8)と同様にして脱Boc体を得
る。
Boc−Val−Gln−OSu513mgのジメチルホル
ムアミド10ml溶液を上記脱Boc体とトリエチル
アミン0.02mlのジメチルホルムアミド５ml溶液
に添加する。反応混合物を室温で24時間撹拌す
る。溶媒を留去し、10％酢酸を添加し、固化し
て得られる生成物を水及びエタノールで洗浄し
て目的物662mgを得る。
ムアミド10ml溶液を上記脱Boc体とトリエチル
アミン0.02mlのジメチルホルムアミド５ml溶液
に添加する。反応混合物を室温で24時間撹拌す
る。溶媒を留去し、10％酢酸を添加し、固化し
て得られる生成物を水及びエタノールで洗浄し
て目的物662mgを得る。
Ｒf〓値：0.26
(10) Ｈ−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−Val
−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys
（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−
ILe−Ala−OHの製造 (a) Boc−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−
Thr−Lys（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）
−Asn−Asn−ILe−Ala−OH645mgをトリフ
ロロ酢酸４ml、エタンジオール0.4ml及びア
ニソール0.2mlの存在下室温にて40分間放置
し、上記(8)と同様にして脱Boc化する。
−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys
（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−
ILe−Ala−OHの製造 (a) Boc−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−
Thr−Lys（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）
−Asn−Asn−ILe−Ala−OH645mgをトリフ
ロロ酢酸４ml、エタンジオール0.4ml及びア
ニソール0.2mlの存在下室温にて40分間放置
し、上記(8)と同様にして脱Boc化する。
Boc−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−
N2H3（融点158〜163℃（分解）、〔α〕２２ Ｄ：−
1.0゜（C1.0、ジメチルスルホキシド））783
mgをジメチルホルムアミド10mlに溶解し、−
15℃で6N−塩酸−ジオキサン0.35mlを添加
後亜硝酸イソアミル0.09mlを加え、−10℃で
５分間撹拌後トリエチルアミンでPH7.5に調
節する。この溶液を上記で得られる脱Boc化
体とトリエチルアミン0.12mlを含むジメチル
ホルムアミド10mlに−10℃で添加する。反応
混合物を４℃で20時間撹拌後溶媒を留去し、
酢酸エチルを加えて残留物を固化させ、
取、乾燥する。
N2H3（融点158〜163℃（分解）、〔α〕２２ Ｄ：−
1.0゜（C1.0、ジメチルスルホキシド））783
mgをジメチルホルムアミド10mlに溶解し、−
15℃で6N−塩酸−ジオキサン0.35mlを添加
後亜硝酸イソアミル0.09mlを加え、−10℃で
５分間撹拌後トリエチルアミンでPH7.5に調
節する。この溶液を上記で得られる脱Boc化
体とトリエチルアミン0.12mlを含むジメチル
ホルムアミド10mlに−10℃で添加する。反応
混合物を４℃で20時間撹拌後溶媒を留去し、
酢酸エチルを加えて残留物を固化させ、
取、乾燥する。
この反応生成物を精製することなく、エタ
ンジオール0.5mlの存在下トリエチルアミン
５mlにより脱Boc化する。該脱Boc体を１−
ブタノール−メタノール−水（１：１：１）
の混液20mlに溶解し、アンバーライトIRA−
410カラム（２×４cm）に添加し、酢酸塩に
変換する。得られる酢酸塩を凍結乾燥し、
1M−酢酸に溶解し、セフアデツクスG25カ
ラム（３×190cm）に添加し、1M酢酸を溶出
液として用いゲル過する。目的物を含む分
画（No.64〜80）を集め、溶媒を留去し、凍結
乾燥する。さらにこれをパートリツジ系（１
−ブタノール−酢酸−水＝４：１：５）の下
層５mlに溶解、同様の溶媒系の上層を用いて
液滴向流分配で精製する。目的物を含む画分
を集め、溶媒を留去した後凍結乾燥を行な
い、目的物260mgを得る。
ンジオール0.5mlの存在下トリエチルアミン
５mlにより脱Boc化する。該脱Boc体を１−
ブタノール−メタノール−水（１：１：１）
の混液20mlに溶解し、アンバーライトIRA−
410カラム（２×４cm）に添加し、酢酸塩に
変換する。得られる酢酸塩を凍結乾燥し、
1M−酢酸に溶解し、セフアデツクスG25カ
ラム（３×190cm）に添加し、1M酢酸を溶出
液として用いゲル過する。目的物を含む分
画（No.64〜80）を集め、溶媒を留去し、凍結
乾燥する。さらにこれをパートリツジ系（１
−ブタノール−酢酸−水＝４：１：５）の下
層５mlに溶解、同様の溶媒系の上層を用いて
液滴向流分配で精製する。目的物を含む画分
を集め、溶媒を留去した後凍結乾燥を行な
い、目的物260mgを得る。
Ｒf〓値：0.20、Ｒf〓値：0.65
酸分解物のアミノ酸分析値
Lys(2)2.11、Arg(3)2.60、Asp(5)4.74、Thr
(1)0.87、Glu(2)2.08、Ala(2)2.17、Val(1)
1.18、Met(1)1.03、ILe(1)0.95、Leu(1)
1.02、Phe(1)1.06 (b) Boc−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−
Thr−Lys（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）
−Asn−Asn−ILe−Ala−OH839mgをトリフ
ロロ酢酸5.2ml、エタンジチオール0.52ml及
びアニソール0.26mlの存在下室温にて40分間
放置し、上記(8)と同様にして脱Boc化する。
(1)0.87、Glu(2)2.08、Ala(2)2.17、Val(1)
1.18、Met(1)1.03、ILe(1)0.95、Leu(1)
1.02、Phe(1)1.06 (b) Boc−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−
Thr−Lys（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）
−Asn−Asn−ILe−Ala−OH839mgをトリフ
ロロ酢酸5.2ml、エタンジチオール0.52ml及
びアニソール0.26mlの存在下室温にて40分間
放置し、上記(8)と同様にして脱Boc化する。
Boc−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−
N2H3（融点158〜163℃（分解）、〔α〕２２ Ｄ：−
1.0゜（C1.0、ジメチルスルホキシド））1.02
ｇをジメチルホルムアミド13mlに溶解し、−
15℃で6N−塩酸−ジオキサン0.45mlを添加
後亜硝酸イソアミル0.12mlを加え、−10℃で
５分間撹拌後トリエチルアミンでPH7.5に調
節する。この溶液を上記で得られる脱Boc化
体とトリエチルアミン0.16mlを含むジメチル
ホルムアミド13mlに−10℃で添加する。反応
混合物を４℃で20時間撹拌後溶媒を留去し、
酢酸エチルを加えて残留物を固化させ、
取、乾燥する。
N2H3（融点158〜163℃（分解）、〔α〕２２ Ｄ：−
1.0゜（C1.0、ジメチルスルホキシド））1.02
ｇをジメチルホルムアミド13mlに溶解し、−
15℃で6N−塩酸−ジオキサン0.45mlを添加
後亜硝酸イソアミル0.12mlを加え、−10℃で
５分間撹拌後トリエチルアミンでPH7.5に調
節する。この溶液を上記で得られる脱Boc化
体とトリエチルアミン0.16mlを含むジメチル
ホルムアミド13mlに−10℃で添加する。反応
混合物を４℃で20時間撹拌後溶媒を留去し、
酢酸エチルを加えて残留物を固化させ、
取、乾燥する。
この反応生成物を精製することなく、エタ
ンジチオール0.65mlの存在下トリフルオロ酢
酸6.5mlにより脱Boc化する。該脱Boc体を１
−ブタノール−メタノール−水（１：１：
１）の混液26mlに溶解し、アンバーライト
IRA−410カラム（２×４cm）に添加し、酢
酸塩に変換する。得られる酢酸塩を凍結乾燥
し、1M−酢酸に溶解し、セフアデツクス
G25カラム（３×190cm）に添加し、1M酢酸
を溶出液として用いゲル過する。目的物を
含む分画（No.64〜80）を集め、溶媒を留去
し、凍結乾燥する。さらにこれをパートリツ
ジ系（１−ブタノール−酢酸−水＝４：１：
５）の下層6.5mlに溶解、同様の溶媒系の上
層を用いて液滴向流分配で精製する。目的物
を含む画分を集め、溶媒を留去した後凍結乾
燥を行ない、目的物338mgを得る。
ンジチオール0.65mlの存在下トリフルオロ酢
酸6.5mlにより脱Boc化する。該脱Boc体を１
−ブタノール−メタノール−水（１：１：
１）の混液26mlに溶解し、アンバーライト
IRA−410カラム（２×４cm）に添加し、酢
酸塩に変換する。得られる酢酸塩を凍結乾燥
し、1M−酢酸に溶解し、セフアデツクス
G25カラム（３×190cm）に添加し、1M酢酸
を溶出液として用いゲル過する。目的物を
含む分画（No.64〜80）を集め、溶媒を留去
し、凍結乾燥する。さらにこれをパートリツ
ジ系（１−ブタノール−酢酸−水＝４：１：
５）の下層6.5mlに溶解、同様の溶媒系の上
層を用いて液滴向流分配で精製する。目的物
を含む画分を集め、溶媒を留去した後凍結乾
燥を行ない、目的物338mgを得る。
Rf〓値：0.20、Rf〓値：0.65
酸分解物のアミノ酸分析値
Lys(2)2.11、Arg(3)2.60、Asp(5)4.74、Thr
(1)0.87、Glu(2)2.08、Ala(2)2.17、Val(1)
1.18、Met(1)1.03、ILe(1)0.95、Leu(1)
1.02、Phe(1)1.06、 (11) Ｈ−Ser−Lys（Tos）−Tyr−Leu−Asp−
Ser−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−Val
−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys
（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−
ILe−Ala−OHの製造 Boc−Ser−Lys（Tos）−Tyr−Leu−Asp−
Ser−N2H3（融点174〜175℃（分解）、〔α〕
２２ Ｄ：−21.8゜（C1.0、ジメチルホルムアミ
ド））485mgを、上記(10)と同様にして6N−塩酸
−ジオキサン0.15ml及び20％亜硝酸イソアミル
−ジメチルホルムアミド溶液0.31mlを用い、ア
ジド法により、Ｈ−Arg−Arg−Ala−Gln−
Asp−Phe−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn
−Thr−Lys（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）
−Asn−Asn−ILe−Ala−OHと縮合させる。
反応後溶媒を留去し、酢酸エチルを添加すると
固化する。この粗生成物をパートリツジ系（１
−ブタノール−酢酸−水＝４：１：５）の下層
５mlに溶解し、液滴向流分配により精製を行な
う。目的物を含む分画を集め溶媒を留去する。
残留物を１−ブタノール−メタノール−水
（１：１：１）の混液７mlに溶解し、セフアデ
ツクスLH20（３×108cm）のカラムに添加し、
１−ブタノール−メタノール−水（１：１：
１）を溶出液としてゲル過を行なう。目的物
を含む画分を集め、溶媒を留去し、残渣に酢酸
エチルを添加して固化させる。得られる固化物
をトリフロロ酢酸３ml及びエタンジチオール
0.2mlの存在下に処理し、脱Boc化する。乾燥さ
せた脱Boc化体を1M酢酸５mlに溶解し、セフ
アデツクスG50（３×145cm）カラムに添加
し、1M酢酸を溶出液としてゲル過を行な
う。目的物を含む分画（No.43〜57）を集め、溶
媒を留去し、残渣を凍結乾燥させて目的物93mg
を得る。
(1)0.87、Glu(2)2.08、Ala(2)2.17、Val(1)
1.18、Met(1)1.03、ILe(1)0.95、Leu(1)
1.02、Phe(1)1.06、 (11) Ｈ−Ser−Lys（Tos）−Tyr−Leu−Asp−
Ser−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−Val
−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys
（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−
ILe−Ala−OHの製造 Boc−Ser−Lys（Tos）−Tyr−Leu−Asp−
Ser−N2H3（融点174〜175℃（分解）、〔α〕
２２ Ｄ：−21.8゜（C1.0、ジメチルホルムアミ
ド））485mgを、上記(10)と同様にして6N−塩酸
−ジオキサン0.15ml及び20％亜硝酸イソアミル
−ジメチルホルムアミド溶液0.31mlを用い、ア
ジド法により、Ｈ−Arg−Arg−Ala−Gln−
Asp−Phe−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn
−Thr−Lys（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）
−Asn−Asn−ILe−Ala−OHと縮合させる。
反応後溶媒を留去し、酢酸エチルを添加すると
固化する。この粗生成物をパートリツジ系（１
−ブタノール−酢酸−水＝４：１：５）の下層
５mlに溶解し、液滴向流分配により精製を行な
う。目的物を含む分画を集め溶媒を留去する。
残留物を１−ブタノール−メタノール−水
（１：１：１）の混液７mlに溶解し、セフアデ
ツクスLH20（３×108cm）のカラムに添加し、
１−ブタノール−メタノール−水（１：１：
１）を溶出液としてゲル過を行なう。目的物
を含む画分を集め、溶媒を留去し、残渣に酢酸
エチルを添加して固化させる。得られる固化物
をトリフロロ酢酸３ml及びエタンジチオール
0.2mlの存在下に処理し、脱Boc化する。乾燥さ
せた脱Boc化体を1M酢酸５mlに溶解し、セフ
アデツクスG50（３×145cm）カラムに添加
し、1M酢酸を溶出液としてゲル過を行な
う。目的物を含む分画（No.43〜57）を集め、溶
媒を留去し、残渣を凍結乾燥させて目的物93mg
を得る。
Ｒf〓値：0.25、Ｒf〓値：0.54
酸分解物（6N−塩酸、110℃、24時間）のアミ
ノ酸分析値 Lys(3)2.80、Arg(3)2.89、Asp(6)6.10、Thr(1)
0.97、Ser(2)1.79、Glu(2)2.06、Ala(2)2.03、
Val(1)0.99、Met(1)0.87、ILe(1)1.00、Leu(2)
1.98、Thr(1)1.00、Phe(1)1.00 (12) Ｈ−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−
ILe−Ala−OHの製造 Ｚ−Lys（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−
Asn−Asn−ILe−Ala−OH25mgを液体アンモ
ニア30mlに溶解し、金属ナトリウムの少片を加
える。反応液が青色を呈したとき、乾燥塩化ア
ンモニウム0.5ｇを添加し、次いでアンモニア
を留去する。残渣を1M酢酸に溶解し、セフア
デツクスG10（４×43ml）を用い、1M酢酸を
溶出液としてゲル過を行なう。目的物を含む
分画を集め、溶媒を留去し、凍結乾燥して目的
物10mgを得る。
ノ酸分析値 Lys(3)2.80、Arg(3)2.89、Asp(6)6.10、Thr(1)
0.97、Ser(2)1.79、Glu(2)2.06、Ala(2)2.03、
Val(1)0.99、Met(1)0.87、ILe(1)1.00、Leu(2)
1.98、Thr(1)1.00、Phe(1)1.00 (12) Ｈ−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−
ILe−Ala−OHの製造 Ｚ−Lys（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−
Asn−Asn−ILe−Ala−OH25mgを液体アンモ
ニア30mlに溶解し、金属ナトリウムの少片を加
える。反応液が青色を呈したとき、乾燥塩化ア
ンモニウム0.5ｇを添加し、次いでアンモニア
を留去する。残渣を1M酢酸に溶解し、セフア
デツクスG10（４×43ml）を用い、1M酢酸を
溶出液としてゲル過を行なう。目的物を含む
分画を集め、溶媒を留去し、凍結乾燥して目的
物10mgを得る。
Ｒf〓値：0.01、Ｒf〓値：0.27
酸分解物のアミノ酸分析
Lys(2)1.84、Arg(1)0.94、Asp(3)3.08、Ala(1)
1.08、ILe(1)1.05 (13) Ｈ−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−
Thr−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−ILe
−Ala−OHの製造 Boc−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−
Thr−Lys（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−
Asn−Asn−ILe−Ala−OH10mgをトリフロロ
酢酸１ml及びエタンジチオール0.1mlの存在下
脱Boc化した後、上記(12)と同様にして液体アン
モニア中金属ナトリウムの処理を行ない脱保護
し、グル過により精製して目的物５mgを得
る。
1.08、ILe(1)1.05 (13) Ｈ−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−
Thr−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−ILe
−Ala−OHの製造 Boc−Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−
Thr−Lys（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−
Asn−Asn−ILe−Ala−OH10mgをトリフロロ
酢酸１ml及びエタンジチオール0.1mlの存在下
脱Boc化した後、上記(12)と同様にして液体アン
モニア中金属ナトリウムの処理を行ない脱保護
し、グル過により精製して目的物５mgを得
る。
Ｒf〓値：0.20、Ｒf〓値：0.49
〔α〕２３ Ｄ：−50.0゜（C0.07、1M酢酸）
(14) Ｈ−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−
Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys
−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−ILe−Ala−
OHの製造 Ｈ−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−Val
−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys
（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−
ILe−Ala−OH100mgを上記(12)と同様に処理し
て全保護基を脱離する。ゲル過により精製し
て目的物40mgを得る。
Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys
−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−ILe−Ala−
OHの製造 Ｈ−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−Val
−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys
（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−
ILe−Ala−OH100mgを上記(12)と同様に処理し
て全保護基を脱離する。ゲル過により精製し
て目的物40mgを得る。
Ｒf〓値：0.20、Ｒf〓値：0.51
〔α〕２３ Ｄ：−46.3゜（C0.2、1M酢酸）
(15) Ｈ−Ser−Lys−Tyr−Leu−Asp−Ser−
Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−Val−Gln
−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys−Arg−
Asn−Lys−Asn−Asn−ILe−Ala−OHの製造 Ｈ−Ser−Lys（Tos）−Tyr−Leu−Asp−
Ser−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−Val
−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys
（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−
ILe−Ala−OH10mgを上記(12)と同様に処理して
全保護基を脱離したのち、セフアデツクスＧ−
50（2.5×135cm）を用い、1M酢酸を溶出液と
してゲル過により精製する。目的物を含む画
分を集め、凍結乾燥して目的物４mgを得る。
Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−Val−Gln
−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys−Arg−
Asn−Lys−Asn−Asn−ILe−Ala−OHの製造 Ｈ−Ser−Lys（Tos）−Tyr−Leu−Asp−
Ser−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−Val
−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys
（Tos）−Arg−Asn−Lys（Tos）−Asn−Asn−
ILe−Ala−OH10mgを上記(12)と同様に処理して
全保護基を脱離したのち、セフアデツクスＧ−
50（2.5×135cm）を用い、1M酢酸を溶出液と
してゲル過により精製する。目的物を含む画
分を集め、凍結乾燥して目的物４mgを得る。
Ｒf〓値：0.20、Ｒf〓値：0.49
〔α〕２３ Ｄ：−60.9゜（C0.1、1M酢酸）
＜抗原の製造＞
参考例 ２
上記参考例１（14）で得られるペプチド（以下
「ペプチドＡ」と略記する）10mg及び牛血清アル
ブミン（以下「BSA」と略記する）５mgを酢酸
アンモニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlにと
かす。この溶液に0.1モルのグルタールアルデヒ
ド溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。そ
の後反応混合物を48時間、４℃で水１で透析す
る。透析中５回水を交換する。その後、ペプチド
−蛋白質複合体を含有する溶液を凍結乾燥して腸
管グルカゴン抗原（以下「抗原」と略記する）
14mgを得る。
「ペプチドＡ」と略記する）10mg及び牛血清アル
ブミン（以下「BSA」と略記する）５mgを酢酸
アンモニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlにと
かす。この溶液に0.1モルのグルタールアルデヒ
ド溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。そ
の後反応混合物を48時間、４℃で水１で透析す
る。透析中５回水を交換する。その後、ペプチド
−蛋白質複合体を含有する溶液を凍結乾燥して腸
管グルカゴン抗原（以下「抗原」と略記する）
14mgを得る。
上記で得られる抗原をさらにセフアデツクス
Ｇ−50（溶出液：生理食塩水、検出：0D280mm、
流出速度：３ml／時間、分取量：１mlずつ）でゲ
ル過する。BSAに結合したペプチドＡのフラ
クシヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＡの２量
体）のフラクシヨン〔〕とを分離し、フラクシ
ヨン〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後
凍結乾燥して白色粉末状のペプチドＡ−BSA複
合体（以下「抗原′」と略記する）７mgを得
る。この複合体はBSA1モルに対してペプチドＡ
が平均13モル結合したものである。尚この結合率
は、未反応のBSA及びペプチドＡの存在が認め
られないことにより、ペプチドＡの２量体の標準
濃度の検量線を作成し、該検量線より上記フラク
シヨンのペプチドＡの２量体の量を求め、之を出
発原料として用いたペプチドＡの量から差し引い
て求めた値がすべてBSAと結合しているとして
計算したものである。
Ｇ−50（溶出液：生理食塩水、検出：0D280mm、
流出速度：３ml／時間、分取量：１mlずつ）でゲ
ル過する。BSAに結合したペプチドＡのフラ
クシヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＡの２量
体）のフラクシヨン〔〕とを分離し、フラクシ
ヨン〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後
凍結乾燥して白色粉末状のペプチドＡ−BSA複
合体（以下「抗原′」と略記する）７mgを得
る。この複合体はBSA1モルに対してペプチドＡ
が平均13モル結合したものである。尚この結合率
は、未反応のBSA及びペプチドＡの存在が認め
られないことにより、ペプチドＡの２量体の標準
濃度の検量線を作成し、該検量線より上記フラク
シヨンのペプチドＡの２量体の量を求め、之を出
発原料として用いたペプチドＡの量から差し引い
て求めた値がすべてBSAと結合しているとして
計算したものである。
参考例 ３
上記参考例１と同様にして得られるペプチド、
Ｈ−Leu−Met−Asn−Thr−Lys−Arg−Asn−
Lys−Asn−Asn−ILe−Ala−OH（以下「ペプチ
ドＢ」と略記する）５mg及びBSA5mgを酢酸アン
モニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlにとか
す。この溶液に0.1モルのグルタールアルデヒド
溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。その
後反応混合物を48時間、４℃で水１で透析す
る。透析中５回水を交換する。その後、ペプチド
−蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥して腸管グ
ルカゴン抗原（以下「抗原」と略記する）９mg
を得る。
Ｈ−Leu−Met−Asn−Thr−Lys−Arg−Asn−
Lys−Asn−Asn−ILe−Ala−OH（以下「ペプチ
ドＢ」と略記する）５mg及びBSA5mgを酢酸アン
モニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlにとか
す。この溶液に0.1モルのグルタールアルデヒド
溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。その
後反応混合物を48時間、４℃で水１で透析す
る。透析中５回水を交換する。その後、ペプチド
−蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥して腸管グ
ルカゴン抗原（以下「抗原」と略記する）９mg
を得る。
この抗原をさらにセフアデツクスＧ−50でゲ
ル過し、BSAに結合したペプチドＢのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＢの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチドＢ−BSA複合体６
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドＢが平均10モル結合したものである。
ル過し、BSAに結合したペプチドＢのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＢの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチドＢ−BSA複合体６
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドＢが平均10モル結合したものである。
参考例 ４
上記参考例１(12)で得られるペプチド（以下「ペ
プチドＣ」と略記する）４mg及びBSA5mgを酢酸
アンモニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlにと
かす。この溶液に0.1モルのグルタールアルデヒ
ド溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。そ
の後反応混合物を48時間、４℃で水１で透析す
る。透析中５回水を交換する。その後、ペプチド
−蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥して腸管グ
ルカゴン抗原（以下「抗原」と略記する）7.5
mgを得る。
プチドＣ」と略記する）４mg及びBSA5mgを酢酸
アンモニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２mlにと
かす。この溶液に0.1モルのグルタールアルデヒ
ド溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌する。そ
の後反応混合物を48時間、４℃で水１で透析す
る。透析中５回水を交換する。その後、ペプチド
−蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥して腸管グ
ルカゴン抗原（以下「抗原」と略記する）7.5
mgを得る。
この抗原をさらにセフアデツクスＧ−50でゲ
ル過し、BSAに結合したペプチドＣのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＣの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチドＣ−BSA複合体5.5
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドＣが平均８モル結合したものである。
ル過し、BSAに結合したペプチドＣのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＣの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチドＣ−BSA複合体5.5
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドＣが平均８モル結合したものである。
参考例 ５
上記参考例１と同様にして得られるペプチド、
Ｈ−Lys−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−
ILe−Ala−OH（以下「ペプチドＤ」と略記す
る）４mg及びBSA5mgを酢酸アンモニウム緩衝液
（0.1モル、PH7.0）２mlに溶かす。この溶液に0.1
モルのグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、
室温で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時
間、４℃で水１で透析する。透析中５回水を交
換する。その後、ペプチド−蛋白質複合体を含む
溶液を凍結乾燥して腸管グルカゴン抗原（以下
「抗原」と略記する）８mgを得る。
Ｈ−Lys−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−
ILe−Ala−OH（以下「ペプチドＤ」と略記す
る）４mg及びBSA5mgを酢酸アンモニウム緩衝液
（0.1モル、PH7.0）２mlに溶かす。この溶液に0.1
モルのグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、
室温で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時
間、４℃で水１で透析する。透析中５回水を交
換する。その後、ペプチド−蛋白質複合体を含む
溶液を凍結乾燥して腸管グルカゴン抗原（以下
「抗原」と略記する）８mgを得る。
この抗原をさらにセフアデツクスＧ−50でゲ
ル過し、BSAに結合したペプチドＤのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＤの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチドＤ−BSA複合体６
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドＤが平均９モル結合したものである。
ル過し、BSAに結合したペプチドＤのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＤの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチドＤ−BSA複合体６
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドＤが平均９モル結合したものである。
参考例 ６
上記参考例１と同様にして得られるペプチド、
Ｈ−Tyr−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−
ILe−Ala−OH（以下「ペプチドＥ」と略記す
る）４mg及びBSA5mgを酢酸アンモニウム緩衝液
（0.1モル、PH7.0）２mlに溶かす。この溶液に0.1
モルのグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、
室温で５時間撹拌する。その後、反応混合物を48
時間、４℃で水１で透析する。透析中５回水を
交換する。その後、ペプチド−蛋白質複合体を含
む溶液を凍結乾燥して腸管グルカゴン抗原（以下
「抗原」と略記する）７mgを得る。
Ｈ−Tyr−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−
ILe−Ala−OH（以下「ペプチドＥ」と略記す
る）４mg及びBSA5mgを酢酸アンモニウム緩衝液
（0.1モル、PH7.0）２mlに溶かす。この溶液に0.1
モルのグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、
室温で５時間撹拌する。その後、反応混合物を48
時間、４℃で水１で透析する。透析中５回水を
交換する。その後、ペプチド−蛋白質複合体を含
む溶液を凍結乾燥して腸管グルカゴン抗原（以下
「抗原」と略記する）７mgを得る。
この抗原をさらにセフアデツクスＧ−50でゲ
ル過し、BSAに結合したペプチドＥのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＥの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチドＥ−BSA複合体５
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドＥが平均６モル結合したものである。
ル過し、BSAに結合したペプチドＥのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＥの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチドＥ−BSA複合体５
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドＥが平均６モル結合したものである。
参考例 ７
上記実施例１と同様にして得られるペプチド、
Ｈ−Gly−Lys−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−
Asn−ILe−Ala−OH（以下「ペプチドＦ」と略
記する）５mg及びBSA5mgを酢酸アンモニウム緩
衝液（0.1モル、PH7.0）２mlにとかす。この溶液
に0.1モルのグルタールアルデヒド溶液0.11mlを
加え、室温で５時間撹拌する。その後反応混合物
を48時間、４℃で水１で透析する。透析中５回
水を交換する。その後、ペプチド−蛋白質複合体
を含む溶液を凍結乾燥して腸管グルカゴン抗原
（以下「抗原」と略記する）９mgを得る。
Ｈ−Gly−Lys−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−
Asn−ILe−Ala−OH（以下「ペプチドＦ」と略
記する）５mg及びBSA5mgを酢酸アンモニウム緩
衝液（0.1モル、PH7.0）２mlにとかす。この溶液
に0.1モルのグルタールアルデヒド溶液0.11mlを
加え、室温で５時間撹拌する。その後反応混合物
を48時間、４℃で水１で透析する。透析中５回
水を交換する。その後、ペプチド−蛋白質複合体
を含む溶液を凍結乾燥して腸管グルカゴン抗原
（以下「抗原」と略記する）９mgを得る。
この抗原をさらにセフアデツクスＧ−50でゲ
ル過し、BSAに結合したペプチドＦのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＦの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチドＦ−BSA複合体６
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドＦが平均14モル結合したものである。
ル過し、BSAに結合したペプチドＦのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＦの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチドＦ−BSA複合体６
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドＦが平均14モル結合したものである。
参考例 ８
上記参考例１と同様にして得られるペプチド、
Ｈ−Ala−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−
ILe−Ala−OH（以下「ペプチドＧ」と略記す
る）４mg及びBSA5mgを酢酸アンモニウム緩衝液
（0.1モル、PH7.0）２mlにとかす。この溶液に0.1
モルのグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、
室温で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時
間、４℃で水１で透析する。透析中５回水を交
換する。その後、ペプチド−蛋白質複合体を含む
溶液を凍結乾燥して腸管グルカゴン抗原（以下
「抗原」と略記する）7.5mgを得る。
Ｈ−Ala−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−
ILe−Ala−OH（以下「ペプチドＧ」と略記す
る）４mg及びBSA5mgを酢酸アンモニウム緩衝液
（0.1モル、PH7.0）２mlにとかす。この溶液に0.1
モルのグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、
室温で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時
間、４℃で水１で透析する。透析中５回水を交
換する。その後、ペプチド−蛋白質複合体を含む
溶液を凍結乾燥して腸管グルカゴン抗原（以下
「抗原」と略記する）7.5mgを得る。
この抗原をさらにセフアデツクスＧ−50でゲ
ル過し、BSAに結合したペプチドＧのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＧの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチドＧ−BSA複合体5.5
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドＧが平均９モル結合したものである。
ル過し、BSAに結合したペプチドＧのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＧの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチドＧ−BSA複合体5.5
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドＧが平均９モル結合したものである。
参考例 ９
上記参考例１と同様にして得られるペプチド、
Ｈ−Gly−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−
ILe−Ala−OH（以下「ペプチドＨ」と略記す
る）４mg及びBSA5mgを酢酸アンモニウム緩衝液
（0.1モル、PH7.0）２mlにとかす。この溶液に0.1
モルのグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、
室温で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時
間、４℃で水１で透析する。透析中５回水を交
換する。その後、ペプチド−蛋白質複合体を含む
溶液を凍結乾燥して腸管グルカゴン抗原（以下
「抗原」と略記する）7.5mgを得る。
Ｈ−Gly−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−
ILe−Ala−OH（以下「ペプチドＨ」と略記す
る）４mg及びBSA5mgを酢酸アンモニウム緩衝液
（0.1モル、PH7.0）２mlにとかす。この溶液に0.1
モルのグルタールアルデヒド溶液0.11mlを加え、
室温で５時間撹拌する。その後反応混合物を48時
間、４℃で水１で透析する。透析中５回水を交
換する。その後、ペプチド−蛋白質複合体を含む
溶液を凍結乾燥して腸管グルカゴン抗原（以下
「抗原」と略記する）7.5mgを得る。
この抗原をさらにセフアデツクスＧ−50でゲ
ル過し、BSAに結合したペプチドＨのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＨの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチドＨ−BSA複合体６
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドＨが平均10モル結合したものである。
ル過し、BSAに結合したペプチドＨのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドＨの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチドＨ−BSA複合体６
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドＨが平均10モル結合したものである。
参考例 10
上記参考例１（15）で得られるペプチド（以下
「ペプチド」と略記する）122mg及びBSA5mgを
酢酸アンモニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２ml
にとかす。この溶液に0.1モルのグルタールアル
デヒド溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌す
る。その後反応混合物を48時間、４℃で水１で
透析する。透析中５回水を交換する。その後、ペ
プチド−蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥し
て、腸管グルカゴン抗原（以下「抗原」と略記
する）15mgを得る。
「ペプチド」と略記する）122mg及びBSA5mgを
酢酸アンモニウム緩衝液（0.1モル、PH7.0）２ml
にとかす。この溶液に0.1モルのグルタールアル
デヒド溶液0.11mlを加え、室温で５時間撹拌す
る。その後反応混合物を48時間、４℃で水１で
透析する。透析中５回水を交換する。その後、ペ
プチド−蛋白質複合体を含む溶液を凍結乾燥し
て、腸管グルカゴン抗原（以下「抗原」と略記
する）15mgを得る。
この抗原をさらにセフアデツクスＧ−50でゲ
ル過し、BSAに結合したペプチドのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチド−BSA複合体7.5
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドが平均10モル結合したものである。
ル過し、BSAに結合したペプチドのフラク
シヨン〔〕と他の生成体（ペプチドの２量
体）のフラクシヨンとを分離し、フラクシヨン
〔〕を0.6％食塩水で４℃、24時間透析後凍結乾
燥して白色粉末状のペプチド−BSA複合体7.5
mgを得る。この複合体はBSA1モルに対してペプ
チドが平均10モル結合したものである。
＜抗体の製造＞
実施例 １
参考例２で得られる抗原３mgを1.5mlの生理
食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5mlを
加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮内投与し、２週間毎に５回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に５回、最初投与した量
の半分の量を投与する。最終投与後10日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明の腸管グルカゴン抗体（以下「抗
体」と略記する）を得る。
食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5mlを
加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮内投与し、２週間毎に５回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に５回、最初投与した量
の半分の量を投与する。最終投与後10日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明の腸管グルカゴン抗体（以下「抗
体」と略記する）を得る。
実施例 ２
実施例１で得られる抗原′３mgを1.5mlの生理
食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5mlを
加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮内投与し、２週間毎に５回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に５回、最初投与した量
の半分の量を投与する。最終投与後10日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明の腸管グルカゴン抗体（以下「抗
体」と略記する）を得る。
食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5mlを
加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮内投与し、２週間毎に５回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に５回、最初投与した量
の半分の量を投与する。最終投与後10日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明の腸管グルカゴン抗体（以下「抗
体」と略記する）を得る。
実施例 ３
参考例10で得られる抗原３mgを1.5mlの生理
食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5mlを
加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮内投与し、２週間毎に５回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に５回、最初投与した量
の半分の量を投与する。最終投与後10日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明の腸管グルカゴン抗体（以下「抗
体」と略記する）を得る。
食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5mlを
加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮内投与し、２週間毎に５回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に５回、最初投与した量
の半分の量を投与する。最終投与後10日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明の腸管グルカゴン抗体（以下「抗
体」と略記する）を得る。
実施例 ４
参考例３で得られる抗原３mgを1.5mlの生理
食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5mlを
加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮内投与し、２週間毎に５回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に５回、最初投与した量
の半分の量を投与する。最終投与後10日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明の腸管グルカゴン抗体（以下「抗
体」と略記する）を得る。
食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5mlを
加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮内投与し、２週間毎に５回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に５回、最初投与した量
の半分の量を投与する。最終投与後10日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明の腸管グルカゴン抗体（以下「抗
体」と略記する）を得る。
実施例 ５
参考例４で得られる抗原３mgを1.5mlの生理
食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5mlを
加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮内投与し、２週間毎に５回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に５回、最初投与した量
の半分の量を投与する。最終投与後10日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明の腸管グルカゴン抗体（以下「抗
体」と略記する）を得る。
食塩水に溶解後之にフロインドの補助液1.5mlを
加えて調製した懸濁液を、３羽の兎（2.5〜3.0
Kg）に皮内投与し、２週間毎に５回同量投与す
る。更にその後１カ月毎に５回、最初投与した量
の半分の量を投与する。最終投与後10日経過して
のち試験動物から採血し、遠心分離して抗血清を
採取し、本発明の腸管グルカゴン抗体（以下「抗
体」と略記する）を得る。
実施例 ６
参考例５〜９で得られる抗原を用い、上記実施
例１と同様に処理すると、高力価で腸管グルカゴ
ンに特異性を有する抗体が得られる。
例１と同様に処理すると、高力価で腸管グルカゴ
ンに特異性を有する抗体が得られる。
参考例 11
Γ標識ペプチドの製造
Ｈ−Ser−Lys−Tyr−Leu−Asp−Ser−Arg−
Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−Val−Gln−Trp−
Leu−Met−Asn−Thr−Lys−Arg−Asn−Lys
−Asn−Asn−ILe−Ala−OHをクロラミンＴを
用いる方法で標識化する。即ち1.0モルのリン酸
塩緩衝液、PH7.4（20μ）に、徐々に上記ペプ
チド５mgの10μ水溶液と、〔125I〕Na（MEN）
１マイクロキユーリー及びクロラミンT20μｇの
10μ水溶液を加える。30秒後、100μｇのソジ
ウムメタジサルフエートの50μ水溶液を加える
ことで反応を終わらせる。反応混合物をセフアデ
ツクスＧ−10のカラム（1.0×30cm）にかける
（溶出液0.1M酢酸）。溶出液を各１mlずつ分取
し、No.８〜11のフラクシヨンの画分を集め、Ｈ−
Ser−Lys−〔I125−モノヨード−Tyr〕−Leu−
Asp−Ser−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−
Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys−
Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−ILe−Ala−OHの
溶液を得る。
Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−Val−Gln−Trp−
Leu−Met−Asn−Thr−Lys−Arg−Asn−Lys
−Asn−Asn−ILe−Ala−OHをクロラミンＴを
用いる方法で標識化する。即ち1.0モルのリン酸
塩緩衝液、PH7.4（20μ）に、徐々に上記ペプ
チド５mgの10μ水溶液と、〔125I〕Na（MEN）
１マイクロキユーリー及びクロラミンT20μｇの
10μ水溶液を加える。30秒後、100μｇのソジ
ウムメタジサルフエートの50μ水溶液を加える
ことで反応を終わらせる。反応混合物をセフアデ
ツクスＧ−10のカラム（1.0×30cm）にかける
（溶出液0.1M酢酸）。溶出液を各１mlずつ分取
し、No.８〜11のフラクシヨンの画分を集め、Ｈ−
Ser−Lys−〔I125−モノヨード−Tyr〕−Leu−
Asp−Ser−Arg−Arg−Ala−Gln−Asp−Phe−
Val−Gln−Trp−Leu−Met−Asn−Thr−Lys−
Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−ILe−Ala−OHの
溶液を得る。
Γ力価の測定
上記で得られる抗体の力価を次の通り測定す
る。即ち抗体をそれぞれ生理食塩水で10、102、
103、104、105……倍に希釈（イニシヤル）し、
これらの夫々100μに、I125標識ペプチド（上記
で得られる標識ペプチドを約１万ppmになるよ
うに希釈したもの）100μ及び0.05モルリン酸
緩衝液（PH＝7.5）〔0.25％BSA、0.01モルEDTA
及びトラシルオール500KIV／ml）を含む〕400μ
を加え、４℃で66時間インキユベートし、生成
した抗体とI125標識抗原との結合体を、デキスト
ラン−活性炭法及び遠心分離法（４℃、15分間、
3000rpm）により未反応（結合しない）I125標識
ペプチドから分離し、その放射線をカウントし、
各希釈濃度における抗体のI125標識ペプチドとの
結合率（％）を測定する。縦軸に抗体のI125標識
ペプチドとの結合率（％）及び横軸に抗体の希釈
倍率（イニシヤル濃度）をとり、各々の濃度にお
いて結合率をプロツトする。結合率が50％となる
抗体の希釈倍率即ち抗体の力価を求めると各々次
の通りである。抗 体 力 価 抗体 20000 抗体 25000 抗体 25000 抗体 10000 抗体 5000 Γ抗体の腸管グルカゴン特異性試験 供試試料として各種濃度の膵グルカゴン、各種
濃度のブタグリセンチン第80〜100番のペプチド
鎖及び各種濃度の腸管グルカゴン（Kenny.J.、J.
Clin.Endocr.、15、865（1955）に記載のピーク
）を使用する。また標準希釈剤として0.25％
BSA、0.01モルEDTA、トラジロオール
（500KIV／ml）及び0.01％のNaN3を含む0.05モル
リン酸塩−生理食塩水（PH7.5）を使用する。
る。即ち抗体をそれぞれ生理食塩水で10、102、
103、104、105……倍に希釈（イニシヤル）し、
これらの夫々100μに、I125標識ペプチド（上記
で得られる標識ペプチドを約１万ppmになるよ
うに希釈したもの）100μ及び0.05モルリン酸
緩衝液（PH＝7.5）〔0.25％BSA、0.01モルEDTA
及びトラシルオール500KIV／ml）を含む〕400μ
を加え、４℃で66時間インキユベートし、生成
した抗体とI125標識抗原との結合体を、デキスト
ラン−活性炭法及び遠心分離法（４℃、15分間、
3000rpm）により未反応（結合しない）I125標識
ペプチドから分離し、その放射線をカウントし、
各希釈濃度における抗体のI125標識ペプチドとの
結合率（％）を測定する。縦軸に抗体のI125標識
ペプチドとの結合率（％）及び横軸に抗体の希釈
倍率（イニシヤル濃度）をとり、各々の濃度にお
いて結合率をプロツトする。結合率が50％となる
抗体の希釈倍率即ち抗体の力価を求めると各々次
の通りである。抗 体 力 価 抗体 20000 抗体 25000 抗体 25000 抗体 10000 抗体 5000 Γ抗体の腸管グルカゴン特異性試験 供試試料として各種濃度の膵グルカゴン、各種
濃度のブタグリセンチン第80〜100番のペプチド
鎖及び各種濃度の腸管グルカゴン（Kenny.J.、J.
Clin.Endocr.、15、865（1955）に記載のピーク
）を使用する。また標準希釈剤として0.25％
BSA、0.01モルEDTA、トラジロオール
（500KIV／ml）及び0.01％のNaN3を含む0.05モル
リン酸塩−生理食塩水（PH7.5）を使用する。
各々の試験管に、標準希釈剤400μｌ、供試試
料100μｌ、実施例１で得られる抗体100ml（力
価20000）及び125標識ペプチド（上記で得られ
る標識ペプチドを約１万Cpmになるように希釈
したもの）100μｌを入れ、４℃で66時間インキ
ユベートし、次いで0.025％デキストランで被膜
した0.25％活性炭の懸濁液１mlを加え、４℃で30
分間インキユベートする。４℃、3000rpmの条件
下に遠心分離を行ない、抗体とI125標識ペプチド
との結合体及び未反応（結合しない）125標識
ペプチドを分離し、その放射線をカウントし、用
いた抗体の力価に相当する結合率（Bo）を100％
として、各供試試料の濃度及び希釈率における抗
体と125標識ペプチドとの結合体(B)の百分率を
求める。得られる結果を第１図に示す。第１図中
縦軸は結合％（Ｂ／Bo×100）を、横軸は供試試
料（膵グルカゴン及びブタグリセンチン第80〜
100番のペプチド鎖）の濃度と腸管グルカゴン
（ピークＩ）の希釈率とを示す。また該図におい
て曲線イは膵グルカゴンを、曲線ロはブタグリセ
ンチンの第80〜100番のペプチド鎖を、曲線ハは
腸管グルカゴンを夫々示す。第１図より抗体
は、膵グルカゴンに対する反応性と腸管グルカゴ
ンに対する反応性において明確に区別される曲線
を示し、このことより膵グルカゴンとは交叉しな
い極めて特異性の高い抗体であることが判る。
料100μｌ、実施例１で得られる抗体100ml（力
価20000）及び125標識ペプチド（上記で得られ
る標識ペプチドを約１万Cpmになるように希釈
したもの）100μｌを入れ、４℃で66時間インキ
ユベートし、次いで0.025％デキストランで被膜
した0.25％活性炭の懸濁液１mlを加え、４℃で30
分間インキユベートする。４℃、3000rpmの条件
下に遠心分離を行ない、抗体とI125標識ペプチド
との結合体及び未反応（結合しない）125標識
ペプチドを分離し、その放射線をカウントし、用
いた抗体の力価に相当する結合率（Bo）を100％
として、各供試試料の濃度及び希釈率における抗
体と125標識ペプチドとの結合体(B)の百分率を
求める。得られる結果を第１図に示す。第１図中
縦軸は結合％（Ｂ／Bo×100）を、横軸は供試試
料（膵グルカゴン及びブタグリセンチン第80〜
100番のペプチド鎖）の濃度と腸管グルカゴン
（ピークＩ）の希釈率とを示す。また該図におい
て曲線イは膵グルカゴンを、曲線ロはブタグリセ
ンチンの第80〜100番のペプチド鎖を、曲線ハは
腸管グルカゴンを夫々示す。第１図より抗体
は、膵グルカゴンに対する反応性と腸管グルカゴ
ンに対する反応性において明確に区別される曲線
を示し、このことより膵グルカゴンとは交叉しな
い極めて特異性の高い抗体であることが判る。
また上記と同様にして抗体、抗体及び抗体
についても腸管グルカゴン特異性試験を行な
い、得られる結果をそれぞれ第２図、第３図、第
４図に示す。
についても腸管グルカゴン特異性試験を行な
い、得られる結果をそれぞれ第２図、第３図、第
４図に示す。
第２図は抗体の特異性を示すグラフである。
第２図中縦軸は結合％（Ｂ／Bo×100）を、横軸
は供試試料（膵グルカゴン及びブタグリセンチン
第74〜100番のペプチド鎖）の濃度と腸管グルカ
ゴン（ピーク）の希釈率とを示し、また曲線イ
は膵グルカゴンを、曲線ハは腸管グルカゴンを、
曲線ニはブタグリセンチンの第74〜100番のペプ
チド鎖を夫々示す。
第２図中縦軸は結合％（Ｂ／Bo×100）を、横軸
は供試試料（膵グルカゴン及びブタグリセンチン
第74〜100番のペプチド鎖）の濃度と腸管グルカ
ゴン（ピーク）の希釈率とを示し、また曲線イ
は膵グルカゴンを、曲線ハは腸管グルカゴンを、
曲線ニはブタグリセンチンの第74〜100番のペプ
チド鎖を夫々示す。
第３図は抗体の特異性を示すグラフである。
第３図中縦軸は結合％（Ｂ／Bo×100）を、横軸
は供給試料（膵グルカゴン及びブタグリセンチン
第89〜100番のペプチド鎖）の濃度と腸管グルカ
ゴン（ピーク）の希釈率とを示し、また曲線イ
は膵グルカゴンを、曲線ハは腸管グルカゴンを、
曲線ホはブタグリセンチンの第89〜100番のペプ
チド鎖を夫々示す。
第３図中縦軸は結合％（Ｂ／Bo×100）を、横軸
は供給試料（膵グルカゴン及びブタグリセンチン
第89〜100番のペプチド鎖）の濃度と腸管グルカ
ゴン（ピーク）の希釈率とを示し、また曲線イ
は膵グルカゴンを、曲線ハは腸管グルカゴンを、
曲線ホはブタグリセンチンの第89〜100番のペプ
チド鎖を夫々示す。
第４図は抗体の特異性を示すグラフである。
第４図中縦軸は結合％（Ｂ／Bo×100）を、横軸
は供試試料（膵グルカゴン及びブタグリセンチン
第93〜100番のペプチド鎖）の濃度と腸管グルカ
ゴン（ピーク）の希釈率とを示し、また曲線イ
は膵グルカゴンを、曲線ハは腸管グルカゴンを、
曲線ヘはブタグリセンチンの第93〜100番のペプ
チド鎖を夫々示す。
第４図中縦軸は結合％（Ｂ／Bo×100）を、横軸
は供試試料（膵グルカゴン及びブタグリセンチン
第93〜100番のペプチド鎖）の濃度と腸管グルカ
ゴン（ピーク）の希釈率とを示し、また曲線イ
は膵グルカゴンを、曲線ハは腸管グルカゴンを、
曲線ヘはブタグリセンチンの第93〜100番のペプ
チド鎖を夫々示す。
第２図、第３図及び第４図から次のことが判
る。即ち抗体、抗体及び抗体はいずれも、
膵グルカゴンに対する反応性と腸管グルカゴンに
対する反応性において明確に区別される曲線を示
し、このことにより膵グルカゴンとは交叉しない
極めて特異性の高い抗体であることは明らかであ
る。
る。即ち抗体、抗体及び抗体はいずれも、
膵グルカゴンに対する反応性と腸管グルカゴンに
対する反応性において明確に区別される曲線を示
し、このことにより膵グルカゴンとは交叉しない
極めて特異性の高い抗体であることは明らかであ
る。
第１図、第２図、第３図及び第４図は本発明抗
体の特異性を示すグラフである。
体の特異性を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 一般式 Ｒ−Lys−Arg−Asn−Lys−Asn−Asn−ILe −Ala−OH 〔式中Ｒは水素原子、アミノ酸基またはアミノ酸
基を２〜20個有するペプチド基を示す。〕で表わ
されるペプチドに担体を結合させたペプチド−担
体複合体から成る腸管グルカゴン抗原を哺乳動物
体に投与し生成する抗体を採取することを特徴と
する腸管グルカゴン抗体の製造法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6804080A JPS56163456A (en) | 1980-05-21 | 1980-05-21 | Preparation of antigen |
| DK222081A DK159163C (da) | 1980-05-21 | 1981-05-20 | Fremgangsmaade til fremstilling af et tarm-glucagon-antistof |
| SE8103198A SE454301B (sv) | 1980-05-21 | 1981-05-20 | Forfarande for framstellning av tarmglukagonantigen och motsvarande antikropp |
| DE3120312A DE3120312C2 (de) | 1980-05-21 | 1981-05-21 | Verfahren zur Herstellung von Darm-Glucagon-Antigenen und deren Verwendung |
| US06/265,926 US4407965A (en) | 1980-05-21 | 1981-05-21 | Process for preparing antibody |
| FR8110140A FR2482861A1 (fr) | 1980-05-21 | 1981-05-21 | Procede de preparation d'un antigene et d'un anticorps du glucagon intestinal |
| BE0/204863A BE888906A (fr) | 1980-05-21 | 1981-05-21 | Procede de preparation d'un antigene et d'un anticorps du glucagon intestinal |
| GB8115648A GB2079289B (en) | 1980-05-21 | 1981-05-21 | Process for preparing antibody |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6804080A JPS56163456A (en) | 1980-05-21 | 1980-05-21 | Preparation of antigen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS56163456A JPS56163456A (en) | 1981-12-16 |
| JPS6223822B2 true JPS6223822B2 (ja) | 1987-05-25 |
Family
ID=13362282
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6804080A Granted JPS56163456A (en) | 1980-05-21 | 1980-05-21 | Preparation of antigen |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4407965A (ja) |
| JP (1) | JPS56163456A (ja) |
| BE (1) | BE888906A (ja) |
| DE (1) | DE3120312C2 (ja) |
| DK (1) | DK159163C (ja) |
| FR (1) | FR2482861A1 (ja) |
| GB (1) | GB2079289B (ja) |
| SE (1) | SE454301B (ja) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1249395A (en) * | 1982-09-30 | 1989-01-24 | Tetsuya Tachikawa | Human leukemia virus-related peptides, a process for production thereof, antibodies of the peptides and a process for production of the antibodies |
| CA1256795A (en) * | 1983-12-28 | 1989-07-04 | Dennis A. Carson | Anti-idiotype antibodies induced by synthetic polypeptides |
| US4545985A (en) * | 1984-01-26 | 1985-10-08 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Pseudomonas exotoxin conjugate immunotoxins |
| GB2160312B (en) * | 1984-04-13 | 1987-09-16 | South African Inventions | Adjuvant for immunisation |
| US5116725A (en) * | 1984-08-08 | 1992-05-26 | Scripps Clinic And Research Foundation | Assay for Epstein-Barr virus infection with solid phase bound synthetic polypeptides |
| US4654419A (en) * | 1984-08-08 | 1987-03-31 | Scripps Clinic And Research Foundation | Synthetic polypeptides and antibodies related to epstein-barr virus nuclear antigen |
| ATE71150T1 (de) * | 1984-09-19 | 1992-01-15 | Univ California | Retrovirale polypeptide in zusammenhang mit menschlicher transformation. |
| US4732863A (en) * | 1984-12-31 | 1988-03-22 | University Of New Mexico | PEG-modified antibody with reduced affinity for cell surface Fc receptors |
| JPH0792458B2 (ja) * | 1986-03-14 | 1995-10-09 | 郁男 山科 | 糖鎖特異抗体アツセイプレ−ト及びその製造方法 |
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