JPS62502933A - 分子量１３０，０００ダルトンと１５５，０００ダルトンを持つプラスモディウム・ファルシパルムのグリコホリン結合蛋白に対するｃＤＮＡのコ−ド付け - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 分子量１３０，０００ダルトンと１５５，０００ダルトンを持つプラスモディウ ム・ファルシパルムのグリコホリン結合蛋白に対するｃＤＮＡのコード付け。

本又里辺■見 ２１四ピａ艷 この発明はプラスモデイウム・ファルシパルムのメロゾイトのグリコホリン結合 蛋白に対する遺伝子に関する。より特異的にいえば、本発明はこの蛋白をコード している遺伝子、ｃＤＮＡを含むベクター、このｃ　Ｄ　Ｎ　Ａの導入によって 形質転換された微生物、その蛋白に対する抗体、その蛋白自体及びこれらを製造 する方法に関する。

プラスモチイウム類（マラリア病原虫）は哺乳類にマラリア感染を起こす原虫の 寄生虫である。いろいろな種がいろいろな哺乳動物の病気に関与しており、プラ スモディウム・ファルシパルムについてはヒトの病気の主要な原因である。

プラスモチイウム類の生活環は複雑で種族毎に決まっている６通常は生活環に３ ステージある。第１はスポロゾイト期として知られプロトシアが一般に蚊に食わ れることによって宿主の血液中に導入される形である。第２期は無性の血液期が 赤血球外のメロゾイトと赤血球内のシゾントを含み宿主に導入されてすぐ後に起 こる。この時期はマラリアの臨床的な表われを示している。このサイクルは寄生 虫が有性環に入って、すなわちガメトサイト型で完成し、蚊によって再び吸収さ れる。

マラリアは依然として重篤な健康問題である。原生動物は免疫応答が効果を示さ ない肝細胞や赤血液に迅速にとりこまれるので哺乳動物の宿主では免疫応答では 必ずしも保護できない。

免疫応答がつくように、ワクチンが調製されたと考えられているがそのようなワ クチンはいくつかの理由で利用できなかった。生活環の各ステージで免疫性の抗 原の同定がめられ、それによって免疫応答を起こすための十分な量の免疫原を得 ることできる。

抗体が抗原、通常は異物の蛋白または蛋白性の分子で感作されると免疫応答がお こる。ワクチンは患者に不活性化した抗原試料を導入されることによって作用す る。抗体は抗原が活性か不活性かによらず感作されるが通常は抗体は活性型の抗 原が導入されたときに効果が持続する。

プラスモディアの生活環に異なったステージがあるためにマラリアのワクチンを 作ることはむずかしい。

抗体は非常に特異的でしばしば１つの抗原にのみ応答する。マラリア抗原は原虫 の表層蛋白であることが知られており、これらはステージによって異なる。それ 故マラリアに対するワクチンはいくつかの異なる抗原から成っておらねばならず 、その各々が一つのテスージの特異的な抗原に対する抗体を感作する〔コラータ 、サイエンス、第２２６巻、６７９−６８２頁（１９８４年）〕。

メロゾイト期はプラスモディアの赤血球内の期の前駆体であるので、原虫がこの 期にあるとき感染をとめるようにするのが論理的である。それ故ワクチンは他の 期よりもこの期の表面蛋白に向けられべきである。

メロゾイト期の原虫の表面は非常に複雑で多くのいろいろな分子を含んでいる。

感染という過程でこれらの夫々の役割は不明確である。もしワクチンができれば 、理想的には完全にまたはある程度性格がわかり、寄生虫の生存に必須で感染を 起こすことのできる表面蛋白に向けられるべきである。

上記の項目を満足する２つのＰ、ファルシパルムのメロゾイトの表面蛍白がみつ けられた。その蛋白は夫々分子量が１５５，０００と１３０，０００であり、宿 主の赤血球を認識し赤血球の受容体のグリコホリンと高親和性と特異性をもって 反応する。これらの蛋白に向けられた抗体はメロゾイトの赤血球への侵入を阻害 する〔パーキンス、ジャーナル　オブ　エキスペリメンタル・メディシン、第１ ６０巻、７８８頁（１９８４年）〕。

この蛋白に対する抗体の産生はその蛋白試料自体がいる。少量の蛋白が得られた が大量の分離は極度にむづかしかった。加えて、その蛋白を精製するのに伴う内 在的問題が一且はメロゾイトから得られたがその蛋白をこのようにして得ること を妨げている要因である。

ＤＮＡ技術の最近の進歩が特別の蛋白を得るもう一つの手段を提供している。特 定の蛋白をコードしている遺伝子または遺伝多群を同定すればその遺伝子に対す る相補的なりＮＡすなわちｒｃＤＮＡＪを得ることができる。

「相補的ＤＮＡＪは一つの蛋白に対してのＤＮＡコードと同一かまたは殆ど同一 のヌクレオチド配列である。まず当該の遺伝子に相補的なＲＮ−Ａ（ｒｍＲＮＡ Ｊ）を得ることによってｃＤＮＡが得られる。それからそのｍＲＮＡ分子に対し て相補的なりＮＡ分子、すなわちｃＤＮＡが合成される。このｃＤＮＡは適当な ベクターあるいは微生物に挿入される。それでｃＤＮＡがコニドしている蛋白が 作られる。このようにして採取するのが困難あるいは不可能なタンパクが容易に 得られるようになる。

ここにＰ、ファルシパルムのメロゾイトの蛋白をコードしているｃＤＮＡを得る ために本発明の目的がある。

この発明のもう一つの目的はＰ、ファルシパルム感染に抵抗するのに使えるＰ、 ファルシパルムのメロゾイト蛋白に対する抗体を作ることである。

本発明の他の目的と同様に以上の目的がいかに成就したか以下に示す明細書にみ られる。

した　術の目線 最近の研究でいろいろな株のプラスモデイウムが直列にくり返し配列をもったア ミノ酸群を示すことがわかった（例えばコペル等、ネイチャー、第３０６巻、７ ５１−７５６頁（１９８３年）、ケーネン等、ネイチャー、第３１１巻。

３８７頁（１９８４年）（Ｐ、ファルシパルム赤白球期の抗原）；ゴッドソン等 、ネイチャー、第３０５巻、２９〜３３頁（１９８３年）（Ｐ、クノウレシのサ ーカムスポロゾイト抗原）；ディム等、サイエンス、２２５巻、５９３頁（１９ ８４年）；エネア等、サイエンス、第２２５巻、６２８頁（１９８４年）（Ｐ、 ファルシパルムのサーカムスポロゾイト抗原）；ラベツチ等。

ネイチャー、３２１巻、６１６頁（１９８４頁）（Ｐ、ロフェのヒスチジンに富 んだ蛋白）等をみよ。〕。

木ｌ更亘棗豊 Ｐ、ファルシパルムのメロゾイト期の表面蛋白で分子量約１３０，０００と１５ ５，０００ダルトンをもち赤血球の表面グリコホリンに特異的に結合する蛋白に 対するｅＤＮＡがみつけられた。このｃＤＮＡは１５０塩基のくり返し配列を示 し５０のアミノ酸の直列的くり返し配列をもった蛋白をコードしている。これ以 後ＧＢＰ１３０（ｒ１３０，０００ダルトんのグリコホリン結合蛋白」）あるい はＧＢＰ１５５，０００（ｒ１５ｓ、ｏｏｏダルトんのグリコホリン結合蛋白」 ）と同定された当該の蛋白はＰ、ファルシパルムの４株に保持されている遺伝子 によってコードされており、６．６ｋｂのｌｌｌＲＮＡとして表現され、それが シゾント後期に蓄積している。

図面の　単な　ロ 第１図はＰ、ファルシパルムのＧＢＰ１３０とβ−ガラクトシダーゼの間にＥ、 コリーで表現された融合蛋白のつ゛ニスタン・プロッティング分析を表わしてい る。

第２図はＰ、ファルシパルムのＧＢＰ１３０とＧＢＰ１５５のｃＤＮＡの制限酵 素分解地図を示している。

第３図はＰ、ファルシパルムのＧＢＰ１３０とＧＢＰ１５５のｃｌ）ＮＡのヌク レオチド配列を示している。

第４図はＰ、ファルシパルムのＧＢＰ１３０とＧＢＰ１５５のｃＤＮる。

第５図はヤギの抗ウサギ抗血清とウサギの抗マウス抗血清を使った免疫蛍光パタ ーンの比較を表わしている。

第６図はメロゾイトの蛋白分解物のウエスタンブロット分析の比較を示している 。

第７図は２株のＰ、ファルシパルムの制限酵素で消化したＤＮＡを比較している 。

第８図はＰ、ファルシパルムの生活環のステージにおけるＲＮＡ種を観察したも のである。

第９図はｃＤＮＡによってコードされている５０アミノ酸１、ＧＢＰ　１５５／ １３０に対するｃＤＮＡクローンの分離と発現 ヴイラーコマロフ等、Ｐ、Ｎ、Ａ、５　７５巻、３７２７（１９７８年）やオカ ヤマ等、モルキュラー　セル　バイオロジー、第２巻、１６１頁（１９８２年） の方法がＰ、ファルシパルムのシゾント後期に対するｃ　Ｄ　Ｎ　Ａライブラリ ーを作るために使われた。「後期」は感染に続く時期を考えておりこの場合には ４２時間である。上述についてのｃＤＮＡは後期シゾントのＤＮＡを発現ベクタ ーのｐＵＣ−９につなぎこみ、上記に述べられた方法で進められることによって 得られた。これでｓｏ、ｏｏｏの組換え体のライブラリーが作られ、ＧＢＰ１３ ０及びＧＢＰ１５５（１５５，０００ダルトンのグリコホリン結合タンパク）に 対して働らくウサギ抗血清によって認識される抗原決定基の発現について検索さ れた。検索にはそのまま行うコロニー免疫的検査法が使われる。

第１表に示すように１０ケのめられた抗原決定基を発現しているクローンが得ら れている。

１０ケの選ばれたクローンはさらに特徴を調べられた。

プラスミドＤＮＡをＩＰＴＧによって誘発されるＥ、　ｃｏｌｉのＪＭ１０３株 に、β−ガラクトシダーゼとｐＵｃ−９の融合タンパク及びそのｃＤＮＡを同定 できるように形質転換される。誘導された株と誘導されない株からの抽出物を１ ２゜５％ＳＤＳポリアクリルアミドゲルで分画しそれをニトロセルロース膜に移 した後ウサギの抗ＧＢＰ１５５／１３０または予め免疫した正常ウサギ血清で調 べた。

４株の分離株が免疫血清と反応する誘導性の蛋白を示したが他の株は構成的な発 現を示した。このことは添付の第１図にみられる。第１図はＰ、ファルシパルム のＧＢＰ１５５／１３０とβ−ガラクトシダーゼの間にＥ、　ｃｏｌｉ中に発現 した融合蛋白をウェスタン・プロット分析したものを示している。　ＧＢＰの決 定基を表現しているｃＤＮＡクローンを含む誘導されたＪＭ１０３株（Ｉ）また は誘導されていないＪＭ１０３株（Ｕ）の２００μＱまたは８　Ｘ　１０’ケの 菌に相当する同一の抽出物を上述のようにして処理した後１″″工化プロテイン Ａで処理した。クローン６．１１，１２．１４のクローンについての誘導がみら れ、クローン１．５．１０には構成的発現がみられる。コントロールのＰＵＣ− ９には蛋白のバンドはｗｔ察されない。

ｎ、ＧＢＰ１５５／１３０をコードしているクローンに対するｃＤＮＡのヌクレ オチド配列とＧＢＰ１５５／１３０に対するアミノ酸の一次配列。

誘導性の発現を示し、最も大きなｃＤＮＡの挿入のあったクローン６をさらに分 析した。制限酵素による分解と配列決定により第２図に示された制限酵素地図と 第３図の塩基配列を得た。

そのクローンに１位に始まり６７２位に終わる連続したオープンフレームがある ことがわかる。さらに５０のアミノ酸をコードしている１５０塩化のくり返しＤ ＮＡ配列がみつけられている。この配列は第９図に示されている。くり返し配列 は第４図にある。

解析されたクローンは４つのくり返し単位を示しており、６７３−６７５位のＴ ＡＡのヌクレオチド配列で終了している。Ａ−Ｔに富んだ配列が続きそれがプラ スモディウム属における非コード部分の特徴となっている〔オサギ等、旦、第３ ４巻、８１５〜８２２頁（１９８３年）、デイム等、サイエンス、　第２２５巻 、５９３−５９９（１９８４年）、ラベッチ等、ネイチャー、３１２巻、６１６ 頁（１９８４年）〕。

このクローンはｃＤＮＡクローニング戦略の結果である１つの反復で始まってい る。

別の２つの交叉結合するクローン（クローン８と１５５−１）の分析で４〜６コ ピーに直列的な反復配列があることが示されている。全てのクローンが交叉結合 し、ウサギの抗ＧＢＰ抗血清と反応する。このことから血清によって認識される エピトープは５０ケのアミノ酸のくり返しの中にコード化されていると結論され よう。

■、　反復配列の特徴 ｃＤＮＡ反復配列をもっと十分に精査するためにその配列を発現するｃＤＮＡク ローンをＩＰＴＧでＥ、　ｃｏｌｉのＪＭ１０３株に導入した。それから抽出物 を調製しマウスに免疫するのに使った。コントロールには、ベクターの配列のみ を形質導入したＥ、　ｃｏｌｉの抽出物でマウスを免疫した。感作された抗血清 を蛍光免疫測定及びウェスタンプロット分析に用いた。より特殊にはＰ、ファル シパルム株の標本を１０分間４℃でアセトンで固定する。標本を乾燥してから室 温で３０分間Ｅ、　ｃｏｌｉ中で発現されるクローン６からのマウスα−ｐＧＢ Ｐ１５５／１３０またはウサギの抗ＧＢＰ１５５／１３３抗血清とインキュベー トする。標本を十分にＰＢＳで洗って、ＦＩＴＣ化したヤギの抗ウサギＩｇＧ（ カペル社製）またはウサギの抗マウスＩｇＧのいづれかとインキュベートする。

この結果が第５図に示されている。

第５図の右側はＧＢＰ１５５／１３０のくり返し領域に対するマウス抗血清から の免疫的蛍光パターンを示している。

このパターンはシゾントとメロゾイトの免疫的蛍光を示している。これは表面蛋 白の染色と一致している。

左の図はウサギの抗ＧＢＰ１５５／１３０抗血清を用いたもので同様なパターン を示している。

この抗血清によって認識されるメロゾイトの蛋白をさらに精査することが企てら れている。メロゾイト蛋白の可溶化物を１０％５Ｏ５−ポリアクリルアミドゲル で分画しニトロセルロースに移しそれがらＥ、　ｃｏｌｉで発現されたくり返し 配列に対して感作したマウス抗血清で染色される。

同様な処理がウサギの抗ＧＢＰ１５５／１３０抗血清で企てられいている。コン トロールとして正常なマウスの血清或いはベクターだけに対するマウス血清が使 われる。

ウェスタンプロットが調製されているがこれらは第６図に示されている。レーン の１と６はコントロール、すなわち正常なマウスの血清（レーン１）とベクター だけに対するマウスの血清（レーン６）である。レーンの５はマウスの抗血清処 理の結果でありレーン４はウサギのそれである。

培養上清と５分間煮沸した培養上清を免疫的に転写すると、レーン４とレーン５ にあるものと同一の１３０゜０００．１２０，０００．１１０，０００の蛋白バ ンドが得られる。このことはマウスとウサギの抗血清によって認識される蛋白は 培養上清に放出され熱に安定であることを示しポリメンタル・メディシン、第１ ６０巻、７８８頁（１９８４年）〕では分子量１５５，０００と１３０，０００ にグリコホリン−アクリルアミドに結合する２つの免疫沈殿性の蛋白産物がみつ けられた。第６図のウェスタンプロットで検出される１３０，０００ダルメンの 蛋白バンドはこの免疫沈殿性蛋白と一緒に泳動する（レーン３，４．５に示され るように）。このことはｃＤＮＡクローンによってコードされたくり返し配列と グリコホリン結合蛋白の間に同等性があることを示している。さらに、ＧＢＰの 決定基を発現しているＥ、ｃｏｌｉの融合蛋白はグリコホリン−アクリルアミド に対してシゾント期の合成された１５５と１３０ｋｄのグリコホリン結合蛋白の 結合と競合するようである。

このことはｐＧＢＰ−６のｃＤＮＡクローンによってコード化された蛋白配列が ＧＰＢ１５５と１３０の相方のグリコホリン結合部位をコードしていることを示 していることを示唆している。

ＩＶ、ＧＢＰ１５５／１３０　ｃＤＮＡの染色体構造と発現クローン６の放射標 識したＤＮＡが制限酵素で消化されたＰ、ファルシパルムのＤＮＡのＤＮＡ断片 を同定するために使われる。２つの株が使われたすなわちホンジュラスとガンビ アと６種の制限酵素、　ＡｈａｌＩ［、ＸｍｎＩ、Ｘｂａｌ、　ＡｃｃＩ、Ｈｉ ｎｄ　Ｉ［Ｉ、ＥｃｏＲＩが使われた。消化されたＤＮＡは０．７５％アガロー スで分画され、ニトロセルロースに転写され、ラベルされたｃＤＮＡで検査され た（５０％ホルムアミド、１０％デキストラン硫酸、４０″、　０．ｌＸ５ＳＣ で５２℃で洗った）。第７図は株によって差がないことを示している。従って遺 伝子は株から株へ保持されている。リング、トロホゾイト及びシゾントに感染し た赤血球からＲＮＡを分離することによって遺伝子の発現の期待異性を決めた。

こうして得られるＲＮＡは変性している条件下で分子量的に分画され、放射ラボ ルしたＤＮＡで検出される。第８図は６．６キロベースのＲＮＡ種がみられるこ とを示しており、それが後分裂期に最高に安定状態のレベルに達している。

ｃＤＮＡをクローニングすることによって抗原性の蛋白の抗体を生産するために 使われる多量のＧＢＰ１５５／１３０を得られよう。ＧＢＰ１５５／１３０によ るワクチン投与もＰ、ファルシパルムによって起されるヒトのマラリア感染を減 弱または緩和する方法として使われる。

原核生物でＧＢＰ１５５／１３０のための遺伝子を発現させることはここで述べ てきたように、その感染の過程におけるいろいろな蛋白の部分構造の効果を調査 することのできる機会を提供している。

５０個のアミノ酸の直列につながったくり返し配列が１５０のヌクレオチドの縦 列くり返し配列によってコードされたＧＢＰ１５０／１３０にみつけられている 。この配列はＰ、ファルシパルムの２株に保持されていて、マラリア感染を抑止 するための抗体の産生に使われる候補となると思われる。

（以下余白） 第１表 ８　＋８５０　４０．３０　＋／− た１虹１１ ！τ入　＾ＣＣｋＧＣ２−（Ｊ　ＧＡＣＣＣＡ　Ｇ入入　ＧＧＴ　ＣＡＡ　Ａ丁 Ａ　＾’Ｉ”Ｇ　ＡＨ八　〇大入　ＴＡＴ　ＧＯでＱＣＴ　Ｇ入’１’Ｃｅ入　 ＧＡＣＴＡＴ　ｅＧＴ　Ａ人Ａ　ＧＡＣ↑ＴＡ　ＣＡＡ　＾丁入　ＴＴτ　Ｃλ Ｔ　入λ入　λＴ入”Ｐｔｋ　ＡＣ’！’　λ入ＣλＣＣＧ入τ　ＣＣＡ　λ入 ＴＧ入？　ＧＡＪｉ　ＧＴＡ　Ｇ大入　入Ｃ＾　八Ｃλ　入面’ｒ　ａｃｃＣＸ ’［’　入λ？　Ａ大入　Ｇ大入　Ｇ入ロム氾憇」 ■認■」 ｈ皿憇ユ 庄・フジ１ラス　ヵ゛ン巳°ア １２３４　Ｂ６　７８０１０１１１２ わ１ゴミ」 ｅ、ｅ−ｅ−軸 ４．２・ ２．０ ム匹■」 ｒ、ｉｕ　”ｔｋｓｒ　＆ｉａｔ　Ｂｕｔ　Ａｍｐ　Ｐｒｔ：ｂ　Ｇ）ｕ　Ｇｌ ｙ　Ｇｉｎ　Ｚｌ自　Ｍａｔ　入：ｇ　Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　λPａ Ａｉｍ　Ａｍｐ　νｒｏ　Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　入ｒｇ　Ｌｙｉ　Ｈｌｍ　Ｌ＠ｕ　 ＧＬｕ　１１ｍ　Ｉ’ｈ＊　Ｒｌｍ　Ｌｙ＃　！１ｍＬ＊ｕ　’ｉ’ｂｒ　λ紅 　丁ｈｒ　Ａｍｐ　Ｐｒｏ　Ａｍｎ　Ａｍｐ　Ｇｌｕ　Ｖａ！　Ｇｌｕ　Ａｒｇ 　Ａｒｇ　λ１ｎ　λｌ義Ａｍｐ　Ａｍｎ　ＬｙＩＩ　Ｇｌｕ　λｈｐ国際調査 報告 １″″″′″ａ＋ｗｌ　ｋｇｇｌｋ″”’　”’　ＰＣＴ／υ５８６１００３４ ７特衣昭６２−５０２９３３　（９）

Claims (29)

【特許請求の範囲】
1. １．グリコホリンに結合するプラスモディウム・ファルシパルムのメロゾイト蛋 白を発現するｃＤＮＡ。
2. ２．分子量が約１３０，０００ダルトンのプラスモディウム・ファルシパルムの メロゾイト蛋白を発現する特許請求の範囲第１項記載のｃＤＮＡ。
3. ３．分子量が約１５５，０００ダルトンのプラスモディウム・ファルシパルムの メロゾイト蛋白を発現する特許請求の範囲第１項記載のｃＤＮＡ。
4. ４．第３図のヌクレオチド配列をもつ特許請求の範囲第１項記載のｃＤＮＡ。
5. ５．第２図の制限酵素地図をもつ特許請求の範囲第１項記載のｃＤＮＡ。
6. ６．ほぼ同じくり返しのあるヌクレオチド配列を含む特許請求の範囲第１項記載 のｃＤＮＡ。
7. ７．ｃＤＮＡが以下のヌクレオチド配列を含む特許請求の範囲第１項記載のｃＤ ＮＡ。 【配列があります】
8. ８．グリコホリンに結合するプラスモディウム・ファルシパルムのメロゾイト蛋 白に対するｃＤＮＡを含むベクター。
9. ９．分子量が１３０，０００ダルトンのプラスモディウム・ファルシパルムのメ ロゾイト蛋白に対するｃＤＮＡを含む特許請求の範囲第８項記載のベクター。
10. １０．分子量が１５５，０００ダルトンのプラスモディウム・ファルシパルムの メロゾイト蛋白に対するｃＤＮＡを含む特許請求の範囲第８項記載のベクター。
11. １１．ベクターがｐＵＣ−９である特許請求の範囲第８項記載のベクター。
12. １２．グリコホリンに結合するプラスモディウム・ファルシパルムのメロゾイト 蛋白ＧＢＰ１５５／１３０に対するｃＤＮＡによって形質転換された微生物。
13. １３．微生物がＥ．ｃｏｌｉである特許請求の範囲第１２項記載の微生物。
14. １４．微生物がＪＭ０３株である特許請求の範囲第１３項記載の微生物。
15. １５．微生物がＩＰＴＧで誘導される特許請求の範囲第１２項記載の微生物。
16. １６．ｃＤＮＡの転写とその転写によって得られるｍＲＮＡの翻訳によって調製 されるプラスモディウム・ファルシパルムのグリコホリン結合蛋白。
17. １７．分子量が約１３０，０００ダルトンの特許請求の範囲第１６項記載の蛋白 。
18. １８．分子量が約１５５，０００ダルトンの特許請求の範囲第１６項記載の蛋白 。
19. １９．プラスモディウム・ファルシパルムのメロゾイトのグリコホリン結合蛋白 の抗体の生成をひき出すように検体動物をその蛋白に対するｃＤＮＡを含む細胞 または細胞群で免疫することを含むプラスモディウム・ファルシパルムのグリコ ホリン結合蛋白に対する抗体を感作させる方法。
20. ２０．細胞がそのｃＤＮＡを含むベクターで形質転換されたＥ．ｃｏｌｉである 特許請求の範囲第１９項記載の方法。
21. ２１．その細胞がＩＰＴＧで誘導されたＪＭ１３０である特許請求の範囲第２０ 項記載の方法。
22. ２２．特許請求の範囲第１９項記載の工程によって産生される抗体。
23. ２３．グリコホリンに結合し分子量が約１３０，０００ダルトンのプラスモディ ウム・ファルシパルムの本質的に純粋なメロゾイト蛋白。
24. ２４．グリコホリンに結合し分子量が約１５５，０００ダルトンのプラスモディ ウム・ファルシパルムの本質的に純粋なメロゾイト蛋白。
25. ２５．５０個のアミノ酸の本質的なくり返し単位を含む特許請求の範囲第２３項 または２４項記載の蛋白。
26. ２６．以下のアミノ酸配列を含む特許請求の範囲第２３項または２４項記載の蛋 白。 【配列があります】
27. ２７．被験動物をグリコホリンに結合するプラスモディウム・ファルシパルムの メロゾイト蛋白で免疫し、その免疫が抗体を産生することを含む抗生形成を誘導 する方法。
28. ２８．特許請求の範囲第２０項の工程によって生産される抗体。
29. ２９．グリコホリンに結合するプラスモディウム・ファルシパルムのメロゾイト 蛋白を発現するｃＤＮＡによって形質転換されたＥ．ｃｏｌｉによって生産され る融合蛋白。