JPS63184062A - 臨床的に興味ある免疫反応性物質の定量的標価方法 - Google Patents
臨床的に興味ある免疫反応性物質の定量的標価方法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
［発明の技術分野］
本発明は臨床上重要な免疫反応性物質の分析方法に関し
、ざらに本発明はこの方法を実施するための装置に関す
るものである。
、ざらに本発明はこの方法を実施するための装置に関す
るものである。
［従来の技術］
免疫反応性物質とは、主として全ての抗原（ハプテンを
含む）、並びに細胞融合により或いは自然若しくは誘発
免疫化により生成された抗体（モノクローナル若しくは
ポリクローナル）を意味する。
含む）、並びに細胞融合により或いは自然若しくは誘発
免疫化により生成された抗体（モノクローナル若しくは
ポリクローナル）を意味する。
臨床上重要な免疫反応性物質とは、医療診断、臨床試験
或いは病理学的過程又は用いる治療の監視においてヒ１
〜若しくは動物源の生物学的試料における分析に興味が
持たれれる主として全ての抗原若しくは抗体分子を意味
する。
或いは病理学的過程又は用いる治療の監視においてヒ１
〜若しくは動物源の生物学的試料における分析に興味が
持たれれる主として全ての抗原若しくは抗体分子を意味
する。
これらの免疫分析法に利用される免疫学的現象を第１図
に示す。
に示す。
第１図における曲線の使用に基づいた最も広く用いられ
る分析方法は次の通りである：放射線免疫拡散： 放射線免疫法、免疫酵素法、免疫蛍光法；比濁法： ざらに、「ラテックス免疫試験」、すなわち合成微小球
の凝集とい幾種かの定量法。
る分析方法は次の通りである：放射線免疫拡散： 放射線免疫法、免疫酵素法、免疫蛍光法；比濁法： ざらに、「ラテックス免疫試験」、すなわち合成微小球
の凝集とい幾種かの定量法。
これらは永年にわたって記載されている。現在まで、永
年にわたり広範に使用されているこれらの技術［Ｊ、Ｍ
、シンガー及びＣ，Ｍ、プロツツ、「ラテックス固定試
験」、アメリカン・ジャーナル・オブ・メジスン、第２
１巻、第８８８頁（１９５６） ］は、簡単かつ低価格
であるため、その形態において唯一の定性的（ストリッ
プ）又は半定量的（ウェル）であった。ざらに、ラテッ
クス免疫試験の定性（ストリップ）若しくは半定量型（
ストリップ−シート−ウェル）は現在で６臨床診断に広
く使用され続けており、特にウィルス学及び微生物学の
分野で多くの特許出願の主題となっている［Ｒ，Ｆ、カ
バズ、Ｈ，Ｃ，スタンドホード等、（１９８５）、「ラ
テックス凝集阻止試験による血清中のアミカシンの測定
」、ジャーナル・オブ・クリニカル・マイクロバイオロ
ジー、第２２巻、第６９９〜７０１頁、米国特許第３
、！１８８１５６号、ヨーロッパ特許出願用１８６９４
６＠］。これらのスクリーニング若しくは検出技術にお
いて、抗原若しくは抗体は合成微小球に固定されかつ対
応する抗原若しくは抗体による凝集の不存在若しくは存
在をチューブ内又はウェル内で肉眼測定し、或いは比濁
法によって測定する。
年にわたり広範に使用されているこれらの技術［Ｊ、Ｍ
、シンガー及びＣ，Ｍ、プロツツ、「ラテックス固定試
験」、アメリカン・ジャーナル・オブ・メジスン、第２
１巻、第８８８頁（１９５６） ］は、簡単かつ低価格
であるため、その形態において唯一の定性的（ストリッ
プ）又は半定量的（ウェル）であった。ざらに、ラテッ
クス免疫試験の定性（ストリップ）若しくは半定量型（
ストリップ−シート−ウェル）は現在で６臨床診断に広
く使用され続けており、特にウィルス学及び微生物学の
分野で多くの特許出願の主題となっている［Ｒ，Ｆ、カ
バズ、Ｈ，Ｃ，スタンドホード等、（１９８５）、「ラ
テックス凝集阻止試験による血清中のアミカシンの測定
」、ジャーナル・オブ・クリニカル・マイクロバイオロ
ジー、第２２巻、第６９９〜７０１頁、米国特許第３
、！１８８１５６号、ヨーロッパ特許出願用１８６９４
６＠］。これらのスクリーニング若しくは検出技術にお
いて、抗原若しくは抗体は合成微小球に固定されかつ対
応する抗原若しくは抗体による凝集の不存在若しくは存
在をチューブ内又はウェル内で肉眼測定し、或いは比濁
法によって測定する。
文献［たとえばＪ、Ｐ、リポール、Ａ、Ｍ、ロッホ、Ｇ
、Ａ、クワシュ及びＪ、グラシン（１９８０）ジャーナ
ル・オブ・イミュノロジカル・メソッズ、第３３巻、第
１５９〜１７３頁、ヨーロッパ特許出願用１８９３８９
号及び第５９７８号］に提案されたラテックス免疫試験
における幾つかの定量法は主として次の３つの工程を含
む： ■程■：抗原若しくは抗体を寸法０．０１卯〜５１１Ｉ
ｒＩの合成ポリマーよりなる微小球に固定する工程。こ
の固定はストリップ技術に記載された手段［たとえば米
国特許第４，２１７，３３８号］と同一の任意公知の手
段によって行なわれる。
、Ａ、クワシュ及びＪ、グラシン（１９８０）ジャーナ
ル・オブ・イミュノロジカル・メソッズ、第３３巻、第
１５９〜１７３頁、ヨーロッパ特許出願用１８９３８９
号及び第５９７８号］に提案されたラテックス免疫試験
における幾つかの定量法は主として次の３つの工程を含
む： ■程■：抗原若しくは抗体を寸法０．０１卯〜５１１Ｉ
ｒＩの合成ポリマーよりなる微小球に固定する工程。こ
の固定はストリップ技術に記載された手段［たとえば米
国特許第４，２１７，３３８号］と同一の任意公知の手
段によって行なわれる。
工程■：抗原若しくは抗体を有する合成微小球の免疫学
的凝集の工程。この方法における工程■（すなわち合成
微小球の免疫学的凝集）は次の２つの目的を有する： 粒子の非特異的凝集における最大減少；非特異的凝集と
は微小球又はこれに固定される蛋白質の間の弱い相互作
用（水素結合型、イオン型又はファンデルワールス型）
に基づく粒子の凝集を意味する； 粒子の特異的（免疫学的）凝集における最大増加。
的凝集の工程。この方法における工程■（すなわち合成
微小球の免疫学的凝集）は次の２つの目的を有する： 粒子の非特異的凝集における最大減少；非特異的凝集と
は微小球又はこれに固定される蛋白質の間の弱い相互作
用（水素結合型、イオン型又はファンデルワールス型）
に基づく粒子の凝集を意味する； 粒子の特異的（免疫学的）凝集における最大増加。
この工程の間、主として化学的若しくは生化学的手段を
用いて粒子を安定化させ、非特異的凝集を最小程度まで
減少させる。
用いて粒子を安定化させ、非特異的凝集を最小程度まで
減少させる。
この工程の間、さらに粒子の特異的凝集及びしたがって
分析の精度を増大させるための手段をも用いる。
分析の精度を増大させるための手段をも用いる。
粒子の非特異的凝集を減少させるため、米国特許第４．
３２９．１５２号は、１０にほぼ等しいｌ）Ｈにて電気
陰性にした牛アルブミンを固定することにより粒子を安
定化させることを提案している。反応体及び検量範囲に
対してこのように課せられた高塩基性ＤＨは蛋白質の生
存に対し不適合であり、使用困難な反応体にする。ざら
に、この方法の信頼性はこれらよって低下する。何故な
ら、このような塩基性のｐＨ値にて緩衝溶液は極めて不
安定であるからである。ざらに、疎水性結合により固定
された牛アルブミンはｐＨｌ０にて粒子から順次に分離
し、かつその安定化能力を次第に失う。
３２９．１５２号は、１０にほぼ等しいｌ）Ｈにて電気
陰性にした牛アルブミンを固定することにより粒子を安
定化させることを提案している。反応体及び検量範囲に
対してこのように課せられた高塩基性ＤＨは蛋白質の生
存に対し不適合であり、使用困難な反応体にする。ざら
に、この方法の信頼性はこれらよって低下する。何故な
ら、このような塩基性のｐＨ値にて緩衝溶液は極めて不
安定であるからである。ざらに、疎水性結合により固定
された牛アルブミンはｐＨｌ０にて粒子から順次に分離
し、かつその安定化能力を次第に失う。
残念ながら、しばしば粒子の非特異的凝集を減少させる
ために使用されるケーオトロープ剤は、抗原−抗体結合
を弱化させ若しくは破壊するという欠点を有する。
ために使用されるケーオトロープ剤は、抗原−抗体結合
を弱化させ若しくは破壊するという欠点を有する。
極めて複雑でありかつ工業的反応体に使用しえないよう
な他の安定化方法は、重質粒子と軽質粒子との混合物（
たとえばヨーロッパ特許第１６３３１２号）及び遠心操
作を利用する。
な他の安定化方法は、重質粒子と軽質粒子との混合物（
たとえばヨーロッパ特許第１６３３１２号）及び遠心操
作を利用する。
粒子の特異的凝集（すなわち免疫学的凝集）を促進する
には、記載された方法は一定の温度にて３７°Ｃ若しく
は４０’Ｃの水浴中で３０分間〜１時間の範囲にわたり
通常の撹拌を行なう。このような３７℃における培養時
間は、望ましくない非特異的粒子の凝集を促進するだけ
でなく、各チューブ中へシリーズとして反応体を最初に
導入する際の厳格かつ丹念な秒読みの時間管理を必要と
し、かつ一連のチューブにおける反応の中断工程を管理
する必要がある。
には、記載された方法は一定の温度にて３７°Ｃ若しく
は４０’Ｃの水浴中で３０分間〜１時間の範囲にわたり
通常の撹拌を行なう。このような３７℃における培養時
間は、望ましくない非特異的粒子の凝集を促進するだけ
でなく、各チューブ中へシリーズとして反応体を最初に
導入する際の厳格かつ丹念な秒読みの時間管理を必要と
し、かつ一連のチューブにおける反応の中断工程を管理
する必要がある。
粒子の特異的（免疫学的）凝集の増大は、しばしば反応
媒体へたとえば「デキストラン」 （登録商標）として
知られたデキストロース又はポリエチレングリコールの
ような添加剤を添加することにより行なわれる。これら
物質の欠点は、しばしばこれらの物質が極めて疎水性で
ありかつしたがって微小粒子に固定された抗体のＦｃ断
片（すなわちそれ自身が極めて疎水性である断片）に付
着して粒子に非免疫学的凝集を引起こし、かつそれによ
り干渉及び間違った陽性反応を誘発することである。
媒体へたとえば「デキストラン」 （登録商標）として
知られたデキストロース又はポリエチレングリコールの
ような添加剤を添加することにより行なわれる。これら
物質の欠点は、しばしばこれらの物質が極めて疎水性で
ありかつしたがって微小粒子に固定された抗体のＦｃ断
片（すなわちそれ自身が極めて疎水性である断片）に付
着して粒子に非免疫学的凝集を引起こし、かつそれによ
り干渉及び間違った陽性反応を誘発することである。
本発明の目的の１つは、粒子の非特異的凝集を除去する
と同時に、粒子の特異的免疫凝集を増大させ、しかも上
記の全ての欠点を導入せず、ざらに操作の時間を著しく
短縮することにある。
と同時に、粒子の特異的免疫凝集を増大させ、しかも上
記の全ての欠点を導入せず、ざらに操作の時間を著しく
短縮することにある。
工程■：結果の読取工程。
現在、定量的ラテックス免疫試験における凝集 、の結
果を読取る技術は次の通りである：粒子の計数； 濁度法としても知られた比濁法（しばしば可視若しくは
赤外で行なわれ、大抵の場合は近赤外で行なわれる）： レーザー比濁法：及び。
果を読取る技術は次の通りである：粒子の計数； 濁度法としても知られた比濁法（しばしば可視若しくは
赤外で行なわれ、大抵の場合は近赤外で行なわれる）： レーザー比濁法：及び。
遠心分析。
レーザー比濁法は、ラテックス粒子の凝集物によって分
散された光を測定する。たとえば次の論文［Ｊ、グラン
ジ、Ａ、Ｍ、ロツホ及びＧ、Ａ。
散された光を測定する。たとえば次の論文［Ｊ、グラン
ジ、Ａ、Ｍ、ロツホ及びＧ、Ａ。
クアシュ（１９７７） 、ジャーナル・オブ・イミュノ
ロジーカル・メソツズ、第１８巻、第３２６〜３７５頁
］に記載された技術は、高価かつ複雑な読取装置を必要
とする欠点を伴う。
ロジーカル・メソツズ、第１８巻、第３２６〜３７５頁
］に記載された技術は、高価かつ複雑な読取装置を必要
とする欠点を伴う。
たとえば次の論文［Ｃ，Ｇ、マグヌツソン、Ｐ。
Ｌ、メーソン、ジャーナル・オブ・アラ−ジー・クリニ
カル・アンド・イミュノロジー、第７０巻、第３２６頁
（１９８２） ］に記載された粒子の計数も複雑かつ高
価な装置を必要とし、数少ない実験室にしか利用しえな
い。
カル・アンド・イミュノロジー、第７０巻、第３２６頁
（１９８２） ］に記載された粒子の計数も複雑かつ高
価な装置を必要とし、数少ない実験室にしか利用しえな
い。
肉眼による比濁法とも呼ばれる肉眼的な濁度法は、粒子
！Ｊ濁物により透過される光、すなわち粒子によって吸
収されず又粒子により分散もされない光を測定する。ラ
テックス免疫試験の濁度法、（すなわち比濁法）は、定
量的であっても定性的であっても、粒子寸法にかなり近
い範囲の波長で行なわねばならない。濁度測定の信頼性
は高度に希釈した懸濁物を要求し、たとえばフランス特
許第７７／２５，０４９号に対する追加特許第７８／２
８．２５０号に示されたように所望のスクリーニング効
果が求められ、粒子による光の吸収を最小限まで低下さ
せることを要求する。
！Ｊ濁物により透過される光、すなわち粒子によって吸
収されず又粒子により分散もされない光を測定する。ラ
テックス免疫試験の濁度法、（すなわち比濁法）は、定
量的であっても定性的であっても、粒子寸法にかなり近
い範囲の波長で行なわねばならない。濁度測定の信頼性
は高度に希釈した懸濁物を要求し、たとえばフランス特
許第７７／２５，０４９号に対する追加特許第７８／２
８．２５０号に示されたように所望のスクリーニング効
果が求められ、粒子による光の吸収を最小限まで低下さ
せることを要求する。
粒子寸法に応じて、文献［たとえばＡ、Ｍ、パーナート
、Ｒ，Ｒ，ラウエリー（１９８２） 、クリ二カ・ケミ
力・アクタ、第１１９巻、第３３５〜３３９頁］に記載
されたラテックス免疫試験の肉眼的な濁度測定（Ｖなわ
ち濁度法）は、たとえば３６０．４００．４５０ｎｍ及
びそれより広い範囲ではＢｏｏ〜７５０ｎｍの範囲にお
ける種々の可視波長を用いる。濁度測定結果の精度は、
上記したように所望のスクリーニング効果の変化を生ぜ
しめかつラテックスによる吸光を最小限まで減少ざぜる
には粒子懸濁物を極めて希釈しなければならないので面
倒である。ざらに、結果の精度を増大させるには、２〜
４Ｃｍの程度の長い光学通路の読取セルをこれらの技術
に一般に使用せねばならない。
、Ｒ，Ｒ，ラウエリー（１９８２） 、クリ二カ・ケミ
力・アクタ、第１１９巻、第３３５〜３３９頁］に記載
されたラテックス免疫試験の肉眼的な濁度測定（Ｖなわ
ち濁度法）は、たとえば３６０．４００．４５０ｎｍ及
びそれより広い範囲ではＢｏｏ〜７５０ｎｍの範囲にお
ける種々の可視波長を用いる。濁度測定結果の精度は、
上記したように所望のスクリーニング効果の変化を生ぜ
しめかつラテックスによる吸光を最小限まで減少ざぜる
には粒子懸濁物を極めて希釈しなければならないので面
倒である。ざらに、結果の精度を増大させるには、２〜
４Ｃｍの程度の長い光学通路の読取セルをこれらの技術
に一般に使用せねばならない。
より）農厚なラテックス懸濁物を使用しかつ分析の精度
を増大させ、しかも可視又は紫外線におけるラテックス
の吸収による干渉を無くすには、フランス特許第７７／
２５，０４９号及びフランス特許第７８ ／ ２８２５
０ ＠の追加特許は粒子読取のための赤外濁度法を推奨
している。事実、ラテックスはもはや赤外において吸光
しない。この技術の欠点は、赤外線濁度法読取のために
高価かつ複雑な装置を必要とすることにある。
を増大させ、しかも可視又は紫外線におけるラテックス
の吸収による干渉を無くすには、フランス特許第７７／
２５，０４９号及びフランス特許第７８ ／ ２８２５
０ ＠の追加特許は粒子読取のための赤外濁度法を推奨
している。事実、ラテックスはもはや赤外において吸光
しない。この技術の欠点は、赤外線濁度法読取のために
高価かつ複雑な装置を必要とすることにある。
［発明の目的］
本発明の必須の目的は、したがって上記工程■及び■の
多くの欠点を克服することである。
多くの欠点を克服することである。
本発明の一目的は、使用が簡単でありかつ極めて迅速な
凝集法及び装置を提供することにある。
凝集法及び装置を提供することにある。
本発明の他の目的は、同様に簡単かつ極めて迅速であり
、しかも仝ゆる実験室で実施しうる結果の読取法を提供
することにある。
、しかも仝ゆる実験室で実施しうる結果の読取法を提供
することにある。
［発明の要点］
本発明の上記目的は、分析反応体として作用する免疫活
性物質を予め微小粒子にグラフトさせ；これら微小粒子
を臨床上重要な免疫反応性物質によって凝集させ： この凝集反応により得られた結果を検量範囲と比較して
読取りにより測定することからなる臨床上重要な免疫反
応性物質の分析方法により；ヱ成される。
性物質を予め微小粒子にグラフトさせ；これら微小粒子
を臨床上重要な免疫反応性物質によって凝集させ： この凝集反応により得られた結果を検量範囲と比較して
読取りにより測定することからなる臨床上重要な免疫反
応性物質の分析方法により；ヱ成される。
本発明による分析方法は、凝集工程を前記グラフトされ
た微小粒子を４〜４０ヘルツの周波数かつ数ｌｌＩｍ〜
数ｃｍの範囲のｊ辰幅の周期運動にかけることによって
行なわれる。
た微小粒子を４〜４０ヘルツの周波数かつ数ｌｌＩｍ〜
数ｃｍの範囲のｊ辰幅の周期運動にかけることによって
行なわれる。
今回、周波数が４ヘルツ未満であればこれは使用しうる
結果を得るには凝集工程の時間を増大させかつ非特異的
凝集に対する所要の効果が低下するのでこの方法の利点
を減殺し、他方周波数が４０ヘルツよりも高ければ凝集
した微小粒子により形成される凝集物（免疫複合体）の
破壊が生ずることが判明した。上記の説明から明らかな
ように、凝集工程（この方法の工程■）においては、上
記化学法の全ての欠点を解消して粒子の非特異的凝集を
減少させ或いはその免疫学的凝集を増大させるには、本
発明に用いる凝集手段はこれら目的の両者を同時に満足
する機械的方法を用いる。この機械的方法は、粒子間の
弱い相互作用（イオン型、水素型又はファンデルワール
ス型の結合）に関連した非特異的凝集が不可能となり、
或いはこれらに対し付与させる極めて低い振幅及び極め
て高い周波数の周知運動によりそれらの軌跡がいかなる
ものであっても（たとえば便利には矩形、円形若しくは
楕円形）著しく阻害されるという観察に基づいている。
結果を得るには凝集工程の時間を増大させかつ非特異的
凝集に対する所要の効果が低下するのでこの方法の利点
を減殺し、他方周波数が４０ヘルツよりも高ければ凝集
した微小粒子により形成される凝集物（免疫複合体）の
破壊が生ずることが判明した。上記の説明から明らかな
ように、凝集工程（この方法の工程■）においては、上
記化学法の全ての欠点を解消して粒子の非特異的凝集を
減少させ或いはその免疫学的凝集を増大させるには、本
発明に用いる凝集手段はこれら目的の両者を同時に満足
する機械的方法を用いる。この機械的方法は、粒子間の
弱い相互作用（イオン型、水素型又はファンデルワール
ス型の結合）に関連した非特異的凝集が不可能となり、
或いはこれらに対し付与させる極めて低い振幅及び極め
て高い周波数の周知運動によりそれらの軌跡がいかなる
ものであっても（たとえば便利には矩形、円形若しくは
楕円形）著しく阻害されるという観察に基づいている。
さらに、この種の方法は、対応の抗原若しくは抗体を有
する微小粒子の特異的（免疫学的）凝集を箸しく促進し
、したがってざらに室温で行なわれるような迅速な特異
的反応を可能にすることも示された。
する微小粒子の特異的（免疫学的）凝集を箸しく促進し
、したがってざらに室温で行なわれるような迅速な特異
的反応を可能にすることも示された。
したがって、本発明は臨床上重要な免疫反応性物質の分
析に際し： 分析反応体として作用する免疫活性物質を予め微小粒子
にグラフトさせ； この微小粒子を臨床上重要な免疫反応性物質によって凝
集させ； この凝集反応により得られた結果を検量範囲と比較して
読取りにより測定する分析方法において、結果の読取工
程は 先ず最初に凝集してない微小粒子の液体媒体における懸
濁物の紫外光及び可視光の粒子による最大吸収を測定し
、この測定を前記懸濁物の紫外吸収スペクトル及び可視
吸収スペクトルを得ることによって行ない、最大吸収に
対応する波長をλｍａｘとし、 次いでその結果を紫外吸収及び可視吸収分光光度法によ
って、予め決定された前記波長λｍａｘの近傍で操作し
て前記免疫凝集反応及び培地の希釈が公知方法で行なわ
れた後に読取る ことによって行なうことを特徴とする臨床上重要な免疫
活性物質の分析方法を提案する。
析に際し： 分析反応体として作用する免疫活性物質を予め微小粒子
にグラフトさせ； この微小粒子を臨床上重要な免疫反応性物質によって凝
集させ； この凝集反応により得られた結果を検量範囲と比較して
読取りにより測定する分析方法において、結果の読取工
程は 先ず最初に凝集してない微小粒子の液体媒体における懸
濁物の紫外光及び可視光の粒子による最大吸収を測定し
、この測定を前記懸濁物の紫外吸収スペクトル及び可視
吸収スペクトルを得ることによって行ない、最大吸収に
対応する波長をλｍａｘとし、 次いでその結果を紫外吸収及び可視吸収分光光度法によ
って、予め決定された前記波長λｍａｘの近傍で操作し
て前記免疫凝集反応及び培地の希釈が公知方法で行なわ
れた後に読取る ことによって行なうことを特徴とする臨床上重要な免疫
活性物質の分析方法を提案する。
驚くことに、特に微小粒子がラテックスである場合、こ
の読取工程はラテックス粒子の紫外吸収及び可視吸収を
用いて行なうことができ、ただし上記追加フランス特許
第７８／ ２８．２５０号公報はこの現象を主たる欠点
として記載している。本発明の読取方法においては、利
用するのは粒子自身による紫外光及び可視光の実際の吸
収であり、これが新規な工程を構成する。事実、濁度法
（比濁法）は粒子懸濁物の「見掛は吸収」、すなわち粒
子により実際には吸収されない光のみを測定する。
の読取工程はラテックス粒子の紫外吸収及び可視吸収を
用いて行なうことができ、ただし上記追加フランス特許
第７８／ ２８．２５０号公報はこの現象を主たる欠点
として記載している。本発明の読取方法においては、利
用するのは粒子自身による紫外光及び可視光の実際の吸
収であり、これが新規な工程を構成する。事実、濁度法
（比濁法）は粒子懸濁物の「見掛は吸収」、すなわち粒
子により実際には吸収されない光のみを測定する。
実際上、本発明の特徴の１つであるが、紫外光及び可視
光を吸収することができかつその寸法が０．０１〜５塵
の範囲で変化しうる合成ポリマーの微小粒子は、その寸
法及びその化学特性がどのようなものであっても（たと
えばポリスチレン、ポリビニルトルエン、アクリロニト
リル；スチレン−ブタジエン、アクリロニトリル−アク
リル酸コポリマー、アクリルエステル、ポリビニル−ブ
タジェンであっても）波長に応じた吸光係数をもって紫
外光及び可視光の特徴的な最大吸収を有することが観察
された。ざらに、この観察を本発明による読取方法に用
いるが、測定をこれらの凝集してない微小粒子の液体培
地における懸濁物で行ない、その際凝集してない微小粒
子による紫外光及び可視光の最大吸収に相当する波長λ
ｍａｘ（λｍａｘは所定の微小粒子に特徴的である）に
て吸収分光光度法を用いれば、その結果は媒体における
これらの同じ微小粒子の凝集物の存在により全く又は極
めて弱くしか影響を受けないことが示された。何故なら
、これら微小粒子の凝集物はその寸法に関係なく、もは
やこのλｍａｘにおいて紫外光及び可視光を吸収しない
からである。その最大吸収は前記λｍａｘよりもずっと
離れている。
光を吸収することができかつその寸法が０．０１〜５塵
の範囲で変化しうる合成ポリマーの微小粒子は、その寸
法及びその化学特性がどのようなものであっても（たと
えばポリスチレン、ポリビニルトルエン、アクリロニト
リル；スチレン−ブタジエン、アクリロニトリル−アク
リル酸コポリマー、アクリルエステル、ポリビニル−ブ
タジェンであっても）波長に応じた吸光係数をもって紫
外光及び可視光の特徴的な最大吸収を有することが観察
された。ざらに、この観察を本発明による読取方法に用
いるが、測定をこれらの凝集してない微小粒子の液体培
地における懸濁物で行ない、その際凝集してない微小粒
子による紫外光及び可視光の最大吸収に相当する波長λ
ｍａｘ（λｍａｘは所定の微小粒子に特徴的である）に
て吸収分光光度法を用いれば、その結果は媒体における
これらの同じ微小粒子の凝集物の存在により全く又は極
めて弱くしか影響を受けないことが示された。何故なら
、これら微小粒子の凝集物はその寸法に関係なく、もは
やこのλｍａｘにおいて紫外光及び可視光を吸収しない
からである。その最大吸収は前記λｍａｘよりもずっと
離れている。
ざらに、液体媒体における前記凝集してない（七ツマ−
）微小粒子の懸濁物の紫外吸収及び可視吸収の分光光度
測定はたとえ極めて高い粒子濃度においてもベール−ラ
ンバート法則に従うことが示され、これは極めて薄い懸
濁物を必要とする濁度測定の原理に関し明らかな利点を
与える。
）微小粒子の懸濁物の紫外吸収及び可視吸収の分光光度
測定はたとえ極めて高い粒子濃度においてもベール−ラ
ンバート法則に従うことが示され、これは極めて薄い懸
濁物を必要とする濁度測定の原理に関し明らかな利点を
与える。
実用上、有利には：
周期運動の軌跡は任意の種類としうるが、好ましくは円
形、矩形若しくは楕円形であり；凝集工程を室温で行い
： 凝集工程の際に微小粒子に加えられる周期運動の時間は
撮動の周波数、軌跡及び運動の振幅の関数であり、これ
は有利には２０ヘルツの周波数及び直径４ｍｍの周期的
円形運動については１０分間であり： 紫外吸収及び可視吸収の分光光度測定に適した微小粒子
は任意の吸光特性を有する天然若しくは合成材料、特に
ポリスチレン、ポリビニルトルエン、アクリロニトリル
、スチレン−ブタジエン、アクリロニトリル−アクリル
酸コポリマー、アクリルエステル及びポリビニルブタジ
エンコボリマー及び好ましくはポリスチレンであり；微
小粒子は任意の形状であるが好ましくは微小球の形態で
あり： 天然若しくは合成の微小球の直径は０．０１〜５柳の範
囲、好ましくは０．８ＩＪ！ｎに近く：微小粒子は吸光
性であるが無色の材料であり；ざらに、着色した吸光性
微小粒子を用いることもできる。この場合、紫外吸収及
び可視吸収の分光光度法による結果の分光光度測定は、
凝集してない粒子の材料の最大吸収に相当する波長にお
いて或いは問題とする粒子の着色の最大吸光に相当する
波長のいずれかで行なわれる。
形、矩形若しくは楕円形であり；凝集工程を室温で行い
： 凝集工程の際に微小粒子に加えられる周期運動の時間は
撮動の周波数、軌跡及び運動の振幅の関数であり、これ
は有利には２０ヘルツの周波数及び直径４ｍｍの周期的
円形運動については１０分間であり： 紫外吸収及び可視吸収の分光光度測定に適した微小粒子
は任意の吸光特性を有する天然若しくは合成材料、特に
ポリスチレン、ポリビニルトルエン、アクリロニトリル
、スチレン−ブタジエン、アクリロニトリル−アクリル
酸コポリマー、アクリルエステル及びポリビニルブタジ
エンコボリマー及び好ましくはポリスチレンであり；微
小粒子は任意の形状であるが好ましくは微小球の形態で
あり： 天然若しくは合成の微小球の直径は０．０１〜５柳の範
囲、好ましくは０．８ＩＪ！ｎに近く：微小粒子は吸光
性であるが無色の材料であり；ざらに、着色した吸光性
微小粒子を用いることもできる。この場合、紫外吸収及
び可視吸収の分光光度法による結果の分光光度測定は、
凝集してない粒子の材料の最大吸収に相当する波長にお
いて或いは問題とする粒子の着色の最大吸光に相当する
波長のいずれかで行なわれる。
ざらに、本発明は、上記の方法を実施するための装置に
おいて、 分析すべき物質の少なくとも１つの凍結乾燥された検ａ
範囲を含有する第１シリーズのチューブと、 免疫活性物質を含有しかつ分析試薬として作用し、微小
粒子にグラフトされ、「反応体」と呼ぶ懸濁物は直ちに
使用しうる液相とし、微小粒子の重ホ温度か０．１〜１
０％である第２シリーズのデユープと、 検量範囲の希釈溶液における凍結乾燥試料を含有する第
３シリーズの小チューブと から少なくとも構成した分析装置をも提供する。
おいて、 分析すべき物質の少なくとも１つの凍結乾燥された検ａ
範囲を含有する第１シリーズのチューブと、 免疫活性物質を含有しかつ分析試薬として作用し、微小
粒子にグラフトされ、「反応体」と呼ぶ懸濁物は直ちに
使用しうる液相とし、微小粒子の重ホ温度か０．１〜１
０％である第２シリーズのデユープと、 検量範囲の希釈溶液における凍結乾燥試料を含有する第
３シリーズの小チューブと から少なくとも構成した分析装置をも提供する。
本発明を実施しうる方法及びそれから得られる利点は、
限定せずに説明の目的で示す以下の実施例から添付図面
を参照して一層明らかとなるであろう。
限定せずに説明の目的で示す以下の実施例から添付図面
を参照して一層明らかとなるであろう。
以下の実施例は、微小球にグラフトされた抗体による抗
原の分析に対応する。同様に、同じ手順にしたがうが抗
原の代りに抗体を用いて又はその逆として、抗原により
抗体を分析しうろことも明らかである。
原の分析に対応する。同様に、同じ手順にしたがうが抗
原の代りに抗体を用いて又はその逆として、抗原により
抗体を分析しうろことも明らかである。
この種の分析の前に、抗体を先ず最初にラテックスとも
呼ばれる分類した合成微小球にグラフトさせる。たとえ
ば、これらはポリスチレン、ポリビニルトルエン、アク
リロニトリル、スチレン−ブタジエン、アクリロニトリ
ル−アクリル酸コポリマー、アクリルエステル、ポリビ
ニルブタジェンなどで作成される。たとえば、ラテック
スに１４０、 Ｋ １０９、Ｋ １６０．φ５１２、ψ
５１３、ψ４８０１ψ５０２（−０００Ｈ＞若しくはψ
１６９、ψ１８１（−ＣＯＮＨ２）などのローヌプラン
社によりこれらの市販名で販売されている粒子がこの方
法に極めて適している。
呼ばれる分類した合成微小球にグラフトさせる。たとえ
ば、これらはポリスチレン、ポリビニルトルエン、アク
リロニトリル、スチレン−ブタジエン、アクリロニトリ
ル−アクリル酸コポリマー、アクリルエステル、ポリビ
ニルブタジェンなどで作成される。たとえば、ラテック
スに１４０、 Ｋ １０９、Ｋ １６０．φ５１２、ψ
５１３、ψ４８０１ψ５０２（−０００Ｈ＞若しくはψ
１６９、ψ１８１（−ＣＯＮＨ２）などのローヌプラン
社によりこれらの市販名で販売されている粒子がこの方
法に極めて適している。
合成微小球に対する抗体のグラフト化は公知方法、すな
わちイオン性固定、疎水性固定又は共有固定で行なわれ
る。
わちイオン性固定、疎水性固定又は共有固定で行なわれ
る。
抗体とラテックス微小球との間のイオン型若しくは疎水
型の結合を用いる場合、単に蛋白７１と支持体とを合す
ることにより公知方法で生ずるこれらの結合は支持体か
らの蛋白質の脱着現象（塩析とも呼ばれる）をもたらす
。塩析現象の理由の１つは、このように固定された免疫
−Ｔ−グロブリンＧ型の抗体群と、しばしば分析すべき
試料中に存在する免疫−γ−グロブリンＧ詳との間に連
続的に交換が生ずることである。
型の結合を用いる場合、単に蛋白７１と支持体とを合す
ることにより公知方法で生ずるこれらの結合は支持体か
らの蛋白質の脱着現象（塩析とも呼ばれる）をもたらす
。塩析現象の理由の１つは、このように固定された免疫
−Ｔ−グロブリンＧ型の抗体群と、しばしば分析すべき
試料中に存在する免疫−γ−グロブリンＧ詳との間に連
続的に交換が生ずることである。
有利には、共有固定法がより信頼性を有し、この型の免
疫分析法が好適である。合成微小球、すなわちラテック
スに対する抗体若しくは抗原の共有固定法は周知されて
おり、これにつきここでざらに詳細に説明する必要はな
い。
疫分析法が好適である。合成微小球、すなわちラテック
スに対する抗体若しくは抗原の共有固定法は周知されて
おり、これにつきここでざらに詳細に説明する必要はな
い。
本発明の方法において、共有型の固定を用いる場合、有
利にはこの種の特許出願には従来記載されておらずかつ
良好な結果をもたらす固定法が用いられる。
利にはこの種の特許出願には従来記載されておらずかつ
良好な結果をもたらす固定法が用いられる。
この結合法によれば、微小球に存在しかつ作用に寄与す
る官能基は主として次のもので必るニーＣｏｏｌ−１，
−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ’−ＮＨ２及び−〇〇〇ＣＨ
３゜ これらの基は後記する方法によってアシルアジド（−Ｃ
ＯＮ３）に変換され、このアジドはグラフトさせること
を意図する生物学的分子（抗原若しくは抗体）の−ＮＨ
２、−８Ｈ若しくは一〇Ｈ基と反応する。
る官能基は主として次のもので必るニーＣｏｏｌ−１，
−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ’−ＮＨ２及び−〇〇〇ＣＨ
３゜ これらの基は後記する方法によってアシルアジド（−Ｃ
ＯＮ３）に変換され、このアジドはグラフトさせること
を意図する生物学的分子（抗原若しくは抗体）の−ＮＨ
２、−８Ｈ若しくは一〇Ｈ基と反応する。
たとえば、ラテックスψ１６９及びψ１８１を先ず最初
に溶液中のヒドラジンで処理し、次いで酸性亜硝酸酸ナ
トリウムの蒸気で緩和な条件下に処理した後、ポリ−し
一リシンー抗体）化合物と接触させる。カルボキシル化
されたラテックスψ４８０若しくはψ５０２を酸性メタ
ノールでカルボキシルメチル化し、次いで溶液中でヒド
ラジンにより処理し、次いで酸性亜硝酸ナトリウムの蒸
気により緩和な条件下で処理した俊、適当な割合にてポ
リーＬ−リシンー抗体混合物とグラフトさせる。
に溶液中のヒドラジンで処理し、次いで酸性亜硝酸酸ナ
トリウムの蒸気で緩和な条件下に処理した後、ポリ−し
一リシンー抗体）化合物と接触させる。カルボキシル化
されたラテックスψ４８０若しくはψ５０２を酸性メタ
ノールでカルボキシルメチル化し、次いで溶液中でヒド
ラジンにより処理し、次いで酸性亜硝酸ナトリウムの蒸
気により緩和な条件下で処理した俊、適当な割合にてポ
リーＬ−リシンー抗体混合物とグラフトさせる。
「実施例コ
それぞれ直径０．８及び０．８５＃＋を有するポリスチ
レンψ４８０及び５０２（ローヌプーラン社）の微小球
に対するヒト抗−免疫−γ−グロブリンＧ抗体及びヒト
抗−８２−マイクログロブリンのグラフト化。
レンψ４８０及び５０２（ローヌプーラン社）の微小球
に対するヒト抗−免疫−γ−グロブリンＧ抗体及びヒト
抗−８２−マイクログロブリンのグラフト化。
このグラフト化は下記に要約する種々の工程にしたがっ
て行なわれるニ ラテックスカルボキシル基のメチル化（ラテックスの遊
離カルボキシルのエステル化を酸性化されたメタノール
の浴中で最低３日問かつ最高１０日間にわたって行ない
、飽和水準は一般に平均５日間で生じ）； 水による激しい洗浄； ２０°Ｃにて撹拌しながら１〜１５時間にわたるヒドラ
ジンでのカルボキシメチル化ラテックスの処理：ＯｏＣ
における激しい水洗； 塩酸により酸性化した硝酸ナトリウムの蒸気での処理（
緩和な条件）（混合物の成分及び混合物はその場で作成
しかつ反応は０℃で行なう）：結合緩衝剤による激しい
洗浄： 抗体−ボリーＬ−リシン混合物のグラフト化（このよう
にして抗体−ラテックスに結合したポリーＬ−リジンは
グラフト部位（−ＣＯＮ３）に対し飽和作用を示し、か
つその貯蔵に際し反応体を立体的に安定化させ；抗体及
びポリーＬ−リジンの比率は合成微小球における抗体の
所望の濃度並びに第１図に示した曲線の当量点に対し右
側若しくは左側のいずれの部分を使用するかに応じて変
化し；本発明による方法は前記曲線の右側部分及び左側
部分の両者を用いうろことに注目すべきであり） ； イオン結合（３Ｍ ＫＣｊ、１５分間）により或いは
疎水性結合（ＫＳＣＮ １Ｍ、１０分間）による固定
された抗体の脱着； 洗浄； 貯蔵。
て行なわれるニ ラテックスカルボキシル基のメチル化（ラテックスの遊
離カルボキシルのエステル化を酸性化されたメタノール
の浴中で最低３日問かつ最高１０日間にわたって行ない
、飽和水準は一般に平均５日間で生じ）； 水による激しい洗浄； ２０°Ｃにて撹拌しながら１〜１５時間にわたるヒドラ
ジンでのカルボキシメチル化ラテックスの処理：ＯｏＣ
における激しい水洗； 塩酸により酸性化した硝酸ナトリウムの蒸気での処理（
緩和な条件）（混合物の成分及び混合物はその場で作成
しかつ反応は０℃で行なう）：結合緩衝剤による激しい
洗浄： 抗体−ボリーＬ−リシン混合物のグラフト化（このよう
にして抗体−ラテックスに結合したポリーＬ−リジンは
グラフト部位（−ＣＯＮ３）に対し飽和作用を示し、か
つその貯蔵に際し反応体を立体的に安定化させ；抗体及
びポリーＬ−リジンの比率は合成微小球における抗体の
所望の濃度並びに第１図に示した曲線の当量点に対し右
側若しくは左側のいずれの部分を使用するかに応じて変
化し；本発明による方法は前記曲線の右側部分及び左側
部分の両者を用いうろことに注目すべきであり） ； イオン結合（３Ｍ ＫＣｊ、１５分間）により或いは
疎水性結合（ＫＳＣＮ １Ｍ、１０分間）による固定
された抗体の脱着； 洗浄； 貯蔵。
粒子の官能基が−ＣＯＯＮｔ−（２（例１６９及び１８
１）である場合又は−〇〇〇〇Ｈ３である場合、ヒドラ
ジン工程はグラフト工程の第１段階を示している。
１）である場合又は−〇〇〇〇Ｈ３である場合、ヒドラ
ジン工程はグラフト工程の第１段階を示している。
・ 次の工程は微小球凝集工程に相当し、これは次のよ
うに行なうことができる。ラテックス微小球を２０ヘル
ツの周波数かつ４ｍｍの振幅の周期的円運動にかけ、こ
れを１０分間行なう。この工程は室温で行なわれ、装置
の顕著な縮小をもたらす（水浴を用いず又は他の任意の
種類の加熱装置を用いない）。このように行なうと、こ
の凝集工程は粒子の非特異的凝集を著しく減少させる。
うに行なうことができる。ラテックス微小球を２０ヘル
ツの周波数かつ４ｍｍの振幅の周期的円運動にかけ、こ
れを１０分間行なう。この工程は室温で行なわれ、装置
の顕著な縮小をもたらす（水浴を用いず又は他の任意の
種類の加熱装置を用いない）。このように行なうと、こ
の凝集工程は粒子の非特異的凝集を著しく減少させる。
事実、粒子の非特異的凝集の効率は極めて高い。上記方
法の１つを３７°Ｃにて潰用の撹拌を伴いながら水浴中
で３０分間行なえば、非特異的凝集は３０〜４０％の程
度となる。本発明による方法のこの非特異的凝集は僅か
２〜５％の範囲で変化す゛る。
法の１つを３７°Ｃにて潰用の撹拌を伴いながら水浴中
で３０分間行なえば、非特異的凝集は３０〜４０％の程
度となる。本発明による方法のこの非特異的凝集は僅か
２〜５％の範囲で変化す゛る。
さらに、この方法は牛アルブミンで安定化させるべき粒
子を必要とせず、或いはその他任意のイオン試薬を反応
体の貯蔵には不適合であるような高塩阜性若しくは高酸
性のｐＨ値にて電気陰性若しくは電気陽性にする必要が
ない。
子を必要とせず、或いはその他任意のイオン試薬を反応
体の貯蔵には不適合であるような高塩阜性若しくは高酸
性のｐＨ値にて電気陰性若しくは電気陽性にする必要が
ない。
その結果、この方法は反応体及び検借範囲を生理学的ｐ
Ｈ値（７近辺）に維持して、成分の極めて良好な一体性
及び良好な貯蔵性を確保することができる。得られる他
の利点はこの方法により可能となる蛋白安定化物質の使
用を回避することにあることが特記される。事実、蛋白
安定化物質（たとえばアルブミン）はバクテリヤ汚染の
原因となり、これは数ケ月にわたって貯蔵する必要のめ
る工業反応体において極めて不便である。
Ｈ値（７近辺）に維持して、成分の極めて良好な一体性
及び良好な貯蔵性を確保することができる。得られる他
の利点はこの方法により可能となる蛋白安定化物質の使
用を回避することにあることが特記される。事実、蛋白
安定化物質（たとえばアルブミン）はバクテリヤ汚染の
原因となり、これは数ケ月にわたって貯蔵する必要のめ
る工業反応体において極めて不便である。
ざらに、上記方法は粒子の特異的免疫凝集を顕著に増大
させと同時に、粒子の非特異的凝集を極めて顕著に低下
させ、これも本発明の利点である。
させと同時に、粒子の非特異的凝集を極めて顕著に低下
させ、これも本発明の利点である。
微小球の免疫学的凝集における飽和水準は、約１０分間
で急速に到達する。このような短い培養時間は、極めて
迅速に分析結果を得ることが使用者にとって極めて有利
である他、ざらに反応体の初期添加に際し或いは反応を
停止する段階に際し特定の面倒な時間的調節を必要とし
ない。
で急速に到達する。このような短い培養時間は、極めて
迅速に分析結果を得ることが使用者にとって極めて有利
である他、ざらに反応体の初期添加に際し或いは反応を
停止する段階に際し特定の面倒な時間的調節を必要とし
ない。
ざらに、特異的凝集に関する本発明の方法の効果は室温
にて撹拌を行ないうろことであり、かつ上記したように
これは加熱装置又は水浴の使用を必要とせず、疑いもな
く明らかに便利ざの点で有利である。
にて撹拌を行ないうろことであり、かつ上記したように
これは加熱装置又は水浴の使用を必要とせず、疑いもな
く明らかに便利ざの点で有利である。
本発明によれば、したがって粒子間の弱い相互作用（イ
オン型、水素型又はファンデルワールス型の結合）に関
連した非特異的凝集が、これに加えられる極めて低い振
幅及び極めて高い周波数の周期運動により、この周期運
動の軌跡（たとえば便利には矩形、円形若しくは楕円形
）の如何に拘らず不可能であり、或いは著しく阻害され
るという実験によって証明された。さらに、この種の方
法は抗原若しくは抗体を有する合成微小球の特異的（免
疫学的〉凝集を対応の抗原若しくは抗体の存在下で顕著
に促進し、したがって迅速かつ空温８ で行なわれる特
異的反応を可能にすることも証明された。
オン型、水素型又はファンデルワールス型の結合）に関
連した非特異的凝集が、これに加えられる極めて低い振
幅及び極めて高い周波数の周期運動により、この周期運
動の軌跡（たとえば便利には矩形、円形若しくは楕円形
）の如何に拘らず不可能であり、或いは著しく阻害され
るという実験によって証明された。さらに、この種の方
法は抗原若しくは抗体を有する合成微小球の特異的（免
疫学的〉凝集を対応の抗原若しくは抗体の存在下で顕著
に促進し、したがって迅速かつ空温８ で行なわれる特
異的反応を可能にすることも証明された。
凝集工程を行なった後、前記微小球を含有する培地を水
で約１〜４ｄの容積まで希釈する。この希釈は水、塩溶
液又は任意適当な緩衝溶液で行なうことができる。事実
、この容積は寸法１ｘ１ｃｍの慣用の分光光度セルの容
積に対応する。
で約１〜４ｄの容積まで希釈する。この希釈は水、塩溶
液又は任意適当な緩衝溶液で行なうことができる。事実
、この容積は寸法１ｘ１ｃｍの慣用の分光光度セルの容
積に対応する。
次いで読取り及び測定工程を行なう。これは次のように
行なうことができる。実際上、このような凝集工程を行
なう前に、凝集してない無色のポリスチレン微小球の水
性懸濁液における紫外及び可視吸収スペクトルを測定し
て、これらの粒子による紫外光及び可視光の最大吸収を
決定する。この最大吸収を示す波長をいわゆるλｍａｘ
と呼ぶ。
行なうことができる。実際上、このような凝集工程を行
なう前に、凝集してない無色のポリスチレン微小球の水
性懸濁液における紫外及び可視吸収スペクトルを測定し
て、これらの粒子による紫外光及び可視光の最大吸収を
決定する。この最大吸収を示す波長をいわゆるλｍａｘ
と呼ぶ。
所定の天然若しくは合成微小球に特徴的な最大吸収λｍ
ａｘは、この微小球が抗体若しくは抗原分子で被覆され
ていてもいなくても同一であることが示された。例とし
て第２図は直径Ｏ５８顯を有する無色ポリスチレンの微
小球の濃厚懸濁物における紫外領域及び可視領域の最大
吸収を示しており、このスペクトルは微小球が抗体若し
くは抗原で被覆されていてもいなくても同一である。し
かしながら、最大吸収のピークはミニ法則（分散光の強
度）により干渉されるため僅かに扁平となることが認め
られる。
ａｘは、この微小球が抗体若しくは抗原分子で被覆され
ていてもいなくても同一であることが示された。例とし
て第２図は直径Ｏ５８顯を有する無色ポリスチレンの微
小球の濃厚懸濁物における紫外領域及び可視領域の最大
吸収を示しており、このスペクトルは微小球が抗体若し
くは抗原で被覆されていてもいなくても同一である。し
かしながら、最大吸収のピークはミニ法則（分散光の強
度）により干渉されるため僅かに扁平となることが認め
られる。
このようにして決定したこの波長λｍａｘにより、免疫
凝集工程の後に紫外及び可視吸収分光光度法による結果
の読取りを、上記のように決定した波長λｍａｘの近傍
で操作して行なう。記載した例において、λｍａｘは３
８０ｎｍの数値を有する。
凝集工程の後に紫外及び可視吸収分光光度法による結果
の読取りを、上記のように決定した波長λｍａｘの近傍
で操作して行なう。記載した例において、λｍａｘは３
８０ｎｍの数値を有する。
実験が示すところでは、本発明によりこのようにして紫
外及び可視吸収分光光度法によりｊｑられた結果は微小
球のモノマーの吸光のみを示し、ピークの振幅（吸収程
度−光学密度−透過率）は媒体における七ツマー微小球
の濃度に比例する（ベール−ランバート法則）。
外及び可視吸収分光光度法によりｊｑられた結果は微小
球のモノマーの吸光のみを示し、ピークの振幅（吸収程
度−光学密度−透過率）は媒体における七ツマー微小球
の濃度に比例する（ベール−ランバート法則）。
この種の分析においては、免疫凝集反応が完結した後、
残留する非凝集モノマーの濃度は媒体における抗原の初
期濃度の対数に比例することか既に知られている。
残留する非凝集モノマーの濃度は媒体における抗原の初
期濃度の対数に比例することか既に知られている。
非凝集微小球の七ツマ−に対するλｍａｘの吸光値近傍
における紫外及び可視吸収分光光度法による反応の読取
り結果も、したがって媒体中の抗原の初期）閉度に比例
する。
における紫外及び可視吸収分光光度法による反応の読取
り結果も、したがって媒体中の抗原の初期）閉度に比例
する。
この方法は、ポリマーの性質（特に上記した性質）の如
何に拘らずかつ粒子の寸法又はその色の如何を問わずに
用いうろことに注目すべきである。
何に拘らずかつ粒子の寸法又はその色の如何を問わずに
用いうろことに注目すべきである。
ラテックス粒子が着色している場合、読取りは粒子のλ
ｍａｘ、或いはその着色のλｍａｘのいずれにおいても
行なうことができる。事実、着色したラテックスの場合
、紫外及び可視吸収スペクトルは２つのピークを示し、
その１つは物質（色と無関係）に相当し、使方はこの物
質の着色剤に相当する。
ｍａｘ、或いはその着色のλｍａｘのいずれにおいても
行なうことができる。事実、着色したラテックスの場合
、紫外及び可視吸収スペクトルは２つのピークを示し、
その１つは物質（色と無関係）に相当し、使方はこの物
質の着色剤に相当する。
これを第５図に示し、直径０．８卯の赤色ポリスチレン
微小粒子の懸濁物における吸光スペクトルの２つのピー
クを示している。３８０ｎｍにおける第１ピークは微小
粒子の物質の最大吸光に相当する。
微小粒子の懸濁物における吸光スペクトルの２つのピー
クを示している。３８０ｎｍにおける第１ピークは微小
粒子の物質の最大吸光に相当する。
５６０ｎｍにおける赤色微小粒子に対する第２ピークは
この物質の着色剤の最大吸収に相当する。
この物質の着色剤の最大吸収に相当する。
この現象を用いて加算効果を得ることができる。
これを第６図に示し、直径０．８ＩＩ！ｎの無色及び黄
色ポリスチレン微小球懸濁物における紫外及び可視吸収
スペクトルを示している。
色ポリスチレン微小球懸濁物における紫外及び可視吸収
スペクトルを示している。
微小球のｖ：を度はこれらの２つのスペク］〜ルにつき
同一である。
同一である。
無色微小球のスペクトルは３８０ｎｍにピークを示し、
これは微小球の最大吸収である。 −黄色微小球
のスペクトルも３８０ｎｍにピークを示すが、このピー
クは前者よりも高い。黄色着色剤の最大吸収は約３８０
ｎｍに存在することが知られている。したがってこの場
合、微小球の物質にあける最大吸収と物質の着色剤にお
ける最大吸収との間の加算効果が存在する。
これは微小球の最大吸収である。 −黄色微小球
のスペクトルも３８０ｎｍにピークを示すが、このピー
クは前者よりも高い。黄色着色剤の最大吸収は約３８０
ｎｍに存在することが知られている。したがってこの場
合、微小球の物質にあける最大吸収と物質の着色剤にお
ける最大吸収との間の加算効果が存在する。
この加算効果は分析の精度向上を可能にする。
この方法を実際に使用する場合、その性質、寸法又は色
が特に蛋白質の吸光に相当する２８０ｎｍの阻害性波長
を干渉しないような波長にて紫外及び可視最大吸収を有
する合成ポリマー微小粒子を選択するのが有利である。
が特に蛋白質の吸光に相当する２８０ｎｍの阻害性波長
を干渉しないような波長にて紫外及び可視最大吸収を有
する合成ポリマー微小粒子を選択するのが有利である。
有利には、本発明による方法は、たとえば直径０．８柳
程度の無色ボッスチレンのカルボキシル化微小球を用い
、その紫外及び可視吸収最大値は上記したように約３８
０ｎｍに存在する。ざらに、この波長は実際に２８０ｎ
ｍに存在する蛋白の最大吸光を阻害しない。３８０ｎｍ
のこの波長は、紫外ランプ若しくは可視ランプを用いる
かどうかとは無関係に、３８０止の数値が紫外線と可視
光との間の境界に位置することを考慮して任意の分光光
度計又は光度計を用いて選択することができる。ざらに
、可視範囲における３８０ｎｍの読取りは任意の実験室
光度計若しくは分光光度計装置の範囲内で市って、この
分析法に必要とされる装置を極めて単純化させる。
程度の無色ボッスチレンのカルボキシル化微小球を用い
、その紫外及び可視吸収最大値は上記したように約３８
０ｎｍに存在する。ざらに、この波長は実際に２８０ｎ
ｍに存在する蛋白の最大吸光を阻害しない。３８０ｎｍ
のこの波長は、紫外ランプ若しくは可視ランプを用いる
かどうかとは無関係に、３８０止の数値が紫外線と可視
光との間の境界に位置することを考慮して任意の分光光
度計又は光度計を用いて選択することができる。ざらに
、可視範囲における３８０ｎｍの読取りは任意の実験室
光度計若しくは分光光度計装置の範囲内で市って、この
分析法に必要とされる装置を極めて単純化させる。
ざらに経験が示すところでは、最大吸収λｍａｘは凝集
してない微小球の特徴であり、かつこれらの同じ微小球
の凝集はもはや寸法が極めて小さくてもこの最大値にて
吸光しない。事実、ポリマーの合成微小球の凝集物はそ
の寸法に特徴的な最大吸収を有することが観察された。
してない微小球の特徴であり、かつこれらの同じ微小球
の凝集はもはや寸法が極めて小さくてもこの最大値にて
吸光しない。事実、ポリマーの合成微小球の凝集物はそ
の寸法に特徴的な最大吸収を有することが観察された。
さらに、凝集物はその寸法が大きくなる程、長波長の方
向へ比例的に移動する最大吸収を有することも観察され
た。第３図（矢印）は凝集してない抗体ポリスチレン（
直径０．８＃）の無色微小球の最大吸収、及びこれらの
微小球の寸法を増大させた凝集物の最大吸収を示してい
る。これは次のことを示すニ一方では、抗原により凝集
されない残留微小球の吸光（λｍａＸ）、及び 他方では、抗原濃度を増大させることにより誘発された
増大する寸法の凝集物の吸光。
向へ比例的に移動する最大吸収を有することも観察され
た。第３図（矢印）は凝集してない抗体ポリスチレン（
直径０．８＃）の無色微小球の最大吸収、及びこれらの
微小球の寸法を増大させた凝集物の最大吸収を示してい
る。これは次のことを示すニ一方では、抗原により凝集
されない残留微小球の吸光（λｍａＸ）、及び 他方では、抗原濃度を増大させることにより誘発された
増大する寸法の凝集物の吸光。
上記から明らかに示されるように、七ツマー微小球とそ
の凝集物との混合物を含有する溶液の読取りは、非凝集
（モノマー）微小球の最大吸収λｍａｘに相当する波長
で操作される紫外及び可視吸収分光光度測定によって行
なわれ、次いでこのように行なった測定はこの最大値に
おいてのみ吸光するので粒子のモノマーのみを検出する
ことが判る。
の凝集物との混合物を含有する溶液の読取りは、非凝集
（モノマー）微小球の最大吸収λｍａｘに相当する波長
で操作される紫外及び可視吸収分光光度測定によって行
なわれ、次いでこのように行なった測定はこの最大値に
おいてのみ吸光するので粒子のモノマーのみを検出する
ことが判る。
本発明によるこの新規な読取法は、従来技術に記載され
たものと比較して多くの利点を有する：これは極めて複
雑かつ高価なたとえば粒子計数器、レーザー比濁計又は
赤外線比濁計のような装置の使用を必要とせず； 可視範囲における濁度測定技術と比較して、これは培地
における極めて高い粒子′ａ度につき用いることができ
、このことは可視範囲又は近赤外範囲の濁度測定（比濁
法）で得られないような極めて高い精度をもって分析を
行なうことができる。
たものと比較して多くの利点を有する：これは極めて複
雑かつ高価なたとえば粒子計数器、レーザー比濁計又は
赤外線比濁計のような装置の使用を必要とせず； 可視範囲における濁度測定技術と比較して、これは培地
における極めて高い粒子′ａ度につき用いることができ
、このことは可視範囲又は近赤外範囲の濁度測定（比濁
法）で得られないような極めて高い精度をもって分析を
行なうことができる。
例として、第１表は２種の極めて低濃度の対応する抗原
につき直径０．８ｔｕｒＩの抗体ポリスチレン無色微小
球の凝集で生じた結果を紫外°及び可視吸光の分光光度
測定で読取った光学密度を示している。
につき直径０．８ｔｕｒＩの抗体ポリスチレン無色微小
球の凝集で生じた結果を紫外°及び可視吸光の分光光度
測定で読取った光学密度を示している。
第１表
３８０ｎｍの波長は、非凝集上ツマー微小粒子による紫
外光及び可視光の最大吸収に相当する。
外光及び可視光の最大吸収に相当する。
本発明による読取法で可能となる精度は、さらに任意の
分光光度計の使用並びに一般的な型式の読取セルの使用
（ＩＸＩＣ…）を可能にする。
分光光度計の使用並びに一般的な型式の読取セルの使用
（ＩＸＩＣ…）を可能にする。
上記表に示した結果は、光学通路１ｃｍを有する慣用の
読取セルを用いて行なった測定に相当する。
読取セルを用いて行なった測定に相当する。
実用上達成困難な４ｃｍの光学通路が、濁度法を用いて
同じ精度を得るには必要とされるであろう。
同じ精度を得るには必要とされるであろう。
一般的型式の吸光分光光度計の他、上記方法を実施する
装置は分室化したケーシングと微小球を含有する溶液に
対し振動を付与するのに適した手段とを備える。
装置は分室化したケーシングと微小球を含有する溶液に
対し振動を付与するのに適した手段とを備える。
第７図に示した平行四辺形の分室化ケーシングは寸法１
３ｘ １６ｘ ４ｃｍであって、プラスチック製又は硬
質厚紙で作成した。これは４個の分室を供える： 第１分室（１）は複数の水平かつ平行な溶血管（４）を
備え、これらの溶血管を閉鎖すると共に標識しく抗原濃
度で標識）かつ凍結乾燥型の２〜４個の検苗範囲を有す
る。
３ｘ １６ｘ ４ｃｍであって、プラスチック製又は硬
質厚紙で作成した。これは４個の分室を供える： 第１分室（１）は複数の水平かつ平行な溶血管（４）を
備え、これらの溶血管を閉鎖すると共に標識しく抗原濃
度で標識）かつ凍結乾燥型の２〜４個の検苗範囲を有す
る。
さらに第２分室（２）゛も複数の水平かつ平行であるが
寸法の大きい溶血管（５）を備え、さらに直ちに使用し
うる反応体を含有し、この場合には適当な希釈剤に浸漬
された微小球にグラフトした抗体を含有する。実際上、
希釈剤は抗体の保存性、その経時的安定性及びその充分
な一体性を確保すべきである。
寸法の大きい溶血管（５）を備え、さらに直ちに使用し
うる反応体を含有し、この場合には適当な希釈剤に浸漬
された微小球にグラフトした抗体を含有する。実際上、
希釈剤は抗体の保存性、その経時的安定性及びその充分
な一体性を確保すべきである。
これらのチューブは標準範囲当り４本存在し、かつ２．
５ｄの反応体を含有する。微小粒子の重量濃度は０．１
〜１０％、好ましくは１〜５％の範囲である。
５ｄの反応体を含有する。微小粒子の重量濃度は０．１
〜１０％、好ましくは１〜５％の範囲である。
第３分室（３）は複数の閉鎖した直径の小ざいチューブ
（６）を備え、これらのチューブは凍結乾燥型の検量範
囲の希釈溶液試料を含有する。
（６）を備え、これらのチューブは凍結乾燥型の検量範
囲の希釈溶液試料を含有する。
凍結乾燥された希釈溶液の母は有利には生物学的試料を
希釈するのに必要とされる吊、たとえば既に蒸溜水で希
釈されている生物学的試料を１０倍希釈するのに必要な
量でおる。０．４５ｍ１若しくは０．９ｄのωが極めて
適している。
希釈するのに必要とされる吊、たとえば既に蒸溜水で希
釈されている生物学的試料を１０倍希釈するのに必要な
量でおる。０．４５ｍ１若しくは０．９ｄのωが極めて
適している。
第４分室（８）は少なくとも１個の希釈液濃厚物のフラ
スコ（７）を備える。
スコ（７）を備える。
高い周波数かつ低い振幅における微小球の開明的運動を
確保しうる手段は、カムを作動ざぜる垂直軸に固定され
たモータを備える。このカムは高い周波数かつ低い振幅
の周期運動を付与すると共に円形軌跡を有し、そのトレ
ーには平行チューブの支持体を固定する。全体的に長形
の前記トレーは常にその初期方向に対し平行な状態を維
持する。
確保しうる手段は、カムを作動ざぜる垂直軸に固定され
たモータを備える。このカムは高い周波数かつ低い振幅
の周期運動を付与すると共に円形軌跡を有し、そのトレ
ーには平行チューブの支持体を固定する。全体的に長形
の前記トレーは常にその初期方向に対し平行な状態を維
持する。
ざらに、周期運動を確保しうる手段は、モータ回転速度
と始動の表示を調整するためのジャッジを備える。運動
の振幅はこの場合４ｍｍに制限され、かつ表示周波数は
２０ヘルツを示す。
と始動の表示を調整するためのジャッジを備える。運動
の振幅はこの場合４ｍｍに制限され、かつ表示周波数は
２０ヘルツを示す。
たとえば溶液の抗原分析（たとえば腎不全の血清におけ
るβ２マイクログロブリンの分析）を行なう場合には、
分析すべき５０７の血清を先ず最初に採取し次いで０．
４５ ｒＩｄ２の蒸溜水をこれに加える。
るβ２マイクログロブリンの分析）を行なう場合には、
分析すべき５０７の血清を先ず最初に採取し次いで０．
４５ ｒＩｄ２の蒸溜水をこれに加える。
５０威の試料をこのように作成された溶液から採取して
分室（３）におけるチューブ（６）の１本に入れ、これ
には予め０．４５ｄの蒸溜水を入れておく。演出の均質
化を行なう。次いで、５０成をこのチューブから取出し
かつ５０成の直ちに使用しうる反応体（すなわち対応す
る抗体）と混合し、この抗体を微小球にグラフト化させ
て分室（２）のチューブ（５）の１本に存在せしめ、予
めホモゲナイズしておく。この反応体のポリスチレン微
小球゛の重量濃度は有利には約１％である。
分室（３）におけるチューブ（６）の１本に入れ、これ
には予め０．４５ｄの蒸溜水を入れておく。演出の均質
化を行なう。次いで、５０成をこのチューブから取出し
かつ５０成の直ちに使用しうる反応体（すなわち対応す
る抗体）と混合し、この抗体を微小球にグラフト化させ
て分室（２）のチューブ（５）の１本に存在せしめ、予
めホモゲナイズしておく。この反応体のポリスチレン微
小球゛の重量濃度は有利には約１％である。
このように作成した新たな溶液を、トレーに固定されて
有利には既に運動している支持体に載置し、高い周波数
及び低い振幅の周期運動を行なう。
有利には既に運動している支持体に載置し、高い周波数
及び低い振幅の周期運動を行なう。
この周期運動を１０分間施こし、撮動の周波数は２０ヘ
ルツでありかつ振幅は４ｍｍでおる。この凝集工程が終
了した後、希釈工程を行なう。
ルツでありかつ振幅は４ｍｍでおる。この凝集工程が終
了した後、希釈工程を行なう。
得られた容積は１００μ２から３．６ｍｌまで変化し、
すなわち分光光度計の分析セルに相当する容積である。
すなわち分光光度計の分析セルに相当する容積である。
次いで、チューブの内容物を１ｘ１ＣＩＩｌの読取セル
に注ぎ入れ、かつ分光光度分析を３８０１ｍの場合には
紫外及び可視範囲、すなわち可視範囲と紫外範囲との境
界における非凝集微小球の最大吸収にて行なう。実用的
観点から、溶血管は分光光度計に直接設置することがで
きる。ケーシングの分室（１）に存在する検量範囲の１
つを予め用いて、抗原濃度の光学密度と対数との間の関
係を示す直線をプロットしておく。得られた溶液の光学
密度を決定した後、これを検量曲線と比較しかつ初期血
清における抗原の濃度を極めて厳格に推定りる。
に注ぎ入れ、かつ分光光度分析を３８０１ｍの場合には
紫外及び可視範囲、すなわち可視範囲と紫外範囲との境
界における非凝集微小球の最大吸収にて行なう。実用的
観点から、溶血管は分光光度計に直接設置することがで
きる。ケーシングの分室（１）に存在する検量範囲の１
つを予め用いて、抗原濃度の光学密度と対数との間の関
係を示す直線をプロットしておく。得られた溶液の光学
密度を決定した後、これを検量曲線と比較しかつ初期血
清における抗原の濃度を極めて厳格に推定りる。
第４図は、本発明による方法及び装置を用いたヒト免疫
−λ−グロブリンＧの分析を示している。
−λ−グロブリンＧの分析を示している。
この例において、用いたのは第１図における曲線の当量
点の右側における部分である。１００種のセファロラチ
ジアン液及び血清につきこの分析で得られたレーデ−比
濁法との相関計数は１に近い。
点の右側における部分である。１００種のセファロラチ
ジアン液及び血清につきこの分析で得られたレーデ−比
濁法との相関計数は１に近い。
上記第■表は、本発明による方法を正常及び腎不全の血
清並びに透析液におけるヒトβ２マイクログロブリンの
分析に関する放射線免疫試験と比［効果］ 上記した利点に加え、本発明は伯の利点をも与え、その
うち次のものを挙げることができる：その場での分析、
すなわち患者のベッドサイドでの分析を行なうことがで
き、このことは使用する装置が高張るため従来は極めて
困離であった。
清並びに透析液におけるヒトβ２マイクログロブリンの
分析に関する放射線免疫試験と比［効果］ 上記した利点に加え、本発明は伯の利点をも与え、その
うち次のものを挙げることができる：その場での分析、
すなわち患者のベッドサイドでの分析を行なうことがで
き、このことは使用する装置が高張るため従来は極めて
困離であった。
極めて高い信頼性をもって極めて高速度で測定しかつ結
果を決定することができ、このことは緊急時の生化学若
しくは薬理学及びその後の医療学におけるこの方法の使
用を可能にする。
果を決定することができ、このことは緊急時の生化学若
しくは薬理学及びその後の医療学におけるこの方法の使
用を可能にする。
通常の室温範囲全体にわたって分析が可能である。
したがって、本発明は特に癩病理学、ホルモン学、内分
連字、臨床生化学、毒物学及び微生物学などにおける研
究及び医薬の多くの分野につき特に適している。
連字、臨床生化学、毒物学及び微生物学などにおける研
究及び医薬の多くの分野につき特に適している。
さらに、これは医薬工業及び血液透析における発熱物質
抑制の分野においても極めて興味がある。
抑制の分野においても極めて興味がある。
第１図は利用する免疫学的現象を示す特性曲線図、
第２図は直径０．８塵の（無色）ポリスチレンよりなる
（非凝集）微小球の水性懸濁物における紫外及び可視吸
収スペクトルを示す特性曲線図、第３図は直径０．８Ｊ
ＪＩｎの（無色）抗体ポリスチレン微小粒子の紫外及び
可視吸収スペクトルを示す特性曲線図であって、曲線■
は非凝集を示し、曲線■は５０ｎｇ／ｍｉの増大′ａ度
による凝集を示し、曲線■は１１００ｎ／ｄｌ、曲線Ｉ
Ｖは５００ｎＣＩ ／ｄ及び曲線Ｖは１μ９／ｄの対応
する抗原による凝集を示し、第４図は本発明の方法によ
るヒト免疫−γ−グロブリンＧの分析を示す特性曲線図
、 第５図は直径０．８１ＭＩの赤色ポリスチレン微小球の
水性懸濁物における紫外及び可視吸収スペクトルを示す
特性曲線図、 第６図は直径０．８ＩＪ！ｒＩの無色及び黄色ポリスチ
レン微小球の水性懸濁物であってこれら２種の場合同じ
微小球の濃度を有する紫外及び可視吸収スペクトルを示
す特性曲線図、 第７図は本発明を実施する方法に関する分室ケーシング
の略図である。
（非凝集）微小球の水性懸濁物における紫外及び可視吸
収スペクトルを示す特性曲線図、第３図は直径０．８Ｊ
ＪＩｎの（無色）抗体ポリスチレン微小粒子の紫外及び
可視吸収スペクトルを示す特性曲線図であって、曲線■
は非凝集を示し、曲線■は５０ｎｇ／ｍｉの増大′ａ度
による凝集を示し、曲線■は１１００ｎ／ｄｌ、曲線Ｉ
Ｖは５００ｎＣＩ ／ｄ及び曲線Ｖは１μ９／ｄの対応
する抗原による凝集を示し、第４図は本発明の方法によ
るヒト免疫−γ−グロブリンＧの分析を示す特性曲線図
、 第５図は直径０．８１ＭＩの赤色ポリスチレン微小球の
水性懸濁物における紫外及び可視吸収スペクトルを示す
特性曲線図、 第６図は直径０．８ＩＪ！ｒＩの無色及び黄色ポリスチ
レン微小球の水性懸濁物であってこれら２種の場合同じ
微小球の濃度を有する紫外及び可視吸収スペクトルを示
す特性曲線図、 第７図は本発明を実施する方法に関する分室ケーシング
の略図である。
【轟９】
ｏｌ
ＯＤ Ｑト
ＦＩＧ、４
Claims (18)
- （１）同種類の他の物質による臨床上重要な免疫反応性
物質の分析（抗体による抗原の分析又はその逆）に際し
： 分析反応体として作用する免疫活性物質を予め天然若し
くは合成の微小粒子にグラフトさせ、この微小粒子を分
析すべき臨床上重要な免疫反応性物質によって凝集させ
、 この凝集反応により得られた結果を検量範囲と比較して
読取りにより測定する分析方法において、読取工程は 先ず最初に凝集してない微小粒子の液体媒体における懸
濁物の紫外光及び可視光の粒子による最大吸収を測定し
、この測定を前記懸濁物の紫外吸収スペクトル及び可視
吸収スペクトルを得ることによって行ない、最大吸収に
対応する波長をλｍａｘとし、 次いでその結果を紫外吸収及び可視吸収分光光度法によ
って、予め決定された前記波長 λｍａｘの近傍で操作して前記免疫凝集反応及び培地の
希釈が公知方法で行なわれた後に読取る ことによって行なうことを特徴とする臨床上重要な免疫
反応性物質の分析方法。 - （２）紫外吸収及び可視吸収の分光光度測定に適した微
小粒子が、天然若しくは合成の任意の吸光特性を有する
微小粒子であることを特徴とする特許請求の範囲第１項
記載の分析方法。 - （３）微小粒子をビニルトルエン、アクリロニトリル、
スチレン−ブタジエン、アクリロニトリル−アクリル酸
誘導体、アクリルエステル、ビニルブタジエン及びポリ
スチレンの合成ポリマーよりなる群から選択することを
特徴とする特許請求の範囲第１項記載の分析方法。 - （４）微小粒子が微小球の形態であることを特徴とする
特許請求の範囲第１記載の分析方法。 - （５）微小球を検定し、かつ微小球が０．０１〜５μｍ
の直径を有することを特徴とする特許請求の範囲第４項
記載の分析方法。 - （６）微小球が無色であることを特徴とする特許請求の
範囲第１項記載の分析方法。 - （７）微小球が着色しており、紫外吸収及び可視吸収の
結果の分光光度測定を非凝集微小粒子の成分の最大吸収
に相当する波長（λｍａｘ）にて又は当該微小粒子の着
色の最大吸収に相当する波長のいずれかで行なうことを
特徴とする特許請求の範囲第１項記載の分析方法。 - （８）微小粒子の着色を、成分の最大吸収と粒子の着色
の最大吸収との間に加算効果を与えるよう選択すること
を特徴とする特許請求の範囲第７項記載の分析方法。 - （９）微小粒子の懸濁物が水性懸濁物であることを特徴
とする特許請求の範囲第１項記載の分析方法。 - （１０）同種類の他の物質により臨床上重要な免疫反応
性物質の分析（抗体による抗原の分析又はその逆）に際
し： 分析反応体として作用する免疫活性物質を天然若しくは
合成の微小粒子に予めグラフトさせ、前記微小粒子を分
析すべき臨床上重要な免疫反応性物質によって凝集させ
、 この凝集反応により得られた結果を検量範囲と比較して
読取りにより測定する分析方法において、凝集工程は前
記微小粒子を４〜４０ヘルツの周波数かつ数ｍｍ〜数ｃ
ｍの範囲の振幅を有する周期運動にかけて行なうことを
特徴とする臨床上重要な免疫反応性物質の分析方法。 - （１１）周期運動の軌跡が円形、矩形又は楕円形である
ことを特徴とする特許請求の範囲第１０項記載の分析方
法。 - （１２）凝集を室温で行なうことを特徴とする特許請求
の範囲第１０項記載の分析方法。 - （１３）凝集工程の際に微小粒子に加えられる周期運動
の持続時間が周期運動の周波数、軌跡及び振幅の関数で
あることを特徴とする特許請求の範囲第１０項記載の分
析方法。 - （１４）特許請求の範囲第１項乃至第１３項のいずれか
に記載の方法を実施するための装置において、 分析すべき物質の少なくとも１つの凍結乾燥された検量
範囲を含有する第１シリーズのチューブ（４）と、 免疫活性物質を含有しかつ分析試薬として作用し、前記
物質が微小粒子にグラフトされ、微小粒子の重量濃度が
０．１〜１０％である第２シリーズのチューブ（５）と
、 検量範囲の希釈溶液における凍結乾燥試料を含有する第
３シリーズの小チューブ（６）と から少なくとも構成したことを特徴とする分析装置。 - （１５）各溶液における凍結乾燥型の希釈溶液の量が０
．４５ｍｌ又は０．９０ｍｌであることを特徴とする特
許請求の範囲第１４項記載の装置。 - （１６）希釈溶液のフラスコ（７）をさらに備えること
を特徴とする特許請求の範囲第１４項記載の装置。 - （１７）支持体に固定するための手段をさらに備えて複
数の平行な単位チューブを収容すると共に、前記支持体
に対し４〜４０ヘルツの周波数かつ数ｍｍ〜数ｃｍの範
囲の振幅を有する周期運動を付与しうることを特徴とす
る特許請求の範囲第１４項記載の装置。 - （１８）平行な単位チューブの支持体に対し高周波数か
つ低振幅の周期運動を付与しうる手段がカムを作動させ
るモータで構成されて、４〜４０ヘルツの周波数かつ数
ｍｍ〜数ｃｍの範囲の振幅を有する周期運動を与えるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１７項記載の装置。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8613782A FR2604526B1 (fr) | 1986-09-30 | 1986-09-30 | Procede et dispositif de dosage de substances d'interet clinique reactives immunologiquement |
| FR86.13782 | 1986-09-30 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63184062A true JPS63184062A (ja) | 1988-07-29 |
| JP2648813B2 JP2648813B2 (ja) | 1997-09-03 |
Family
ID=9339508
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62242891A Expired - Lifetime JP2648813B2 (ja) | 1986-09-30 | 1987-09-29 | 臨床的に興味ある免疫反応性物質の定量的標価方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5043289A (ja) |
| EP (2) | EP0435851A1 (ja) |
| JP (1) | JP2648813B2 (ja) |
| DE (1) | DE3783209T2 (ja) |
| ES (1) | ES2038200T3 (ja) |
| FR (1) | FR2604526B1 (ja) |
| GR (1) | GR3007430T3 (ja) |
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| US10828440B2 (en) | 2011-04-15 | 2020-11-10 | Fisher & Paykle Healthcare Limited | Interface comprising a rolling nasal bridge portion |
| US10946155B2 (en) | 2012-09-04 | 2021-03-16 | Fisher & Paykel Healthcare Limited | Valsalva mask |
| US11559647B2 (en) | 2011-04-15 | 2023-01-24 | Fisher & Paykel Healthcare Limited | Interface comprising a nasal sealing portion |
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| US5252459A (en) * | 1988-09-23 | 1993-10-12 | Abbott Laboratories | Indicator reagents, diagnostic assays and test kits employing organic polymer latex particles |
| FR2651326B1 (fr) * | 1989-08-23 | 1993-04-23 | Indicia | Procede et dispositif de dosage rapide d'une pluralite d'echantillons contenant une substance d'interet clinique reactive immunologiquement. |
| DE4302012C1 (de) * | 1993-01-26 | 1994-07-21 | Serosearch Gmbh Entwicklung Un | Immunologischer Test |
| JP3249919B2 (ja) * | 1996-07-30 | 2002-01-28 | 株式会社堀場製作所 | 免疫測定方法 |
| US6855562B1 (en) | 1996-07-30 | 2005-02-15 | Horiba, Ltd. | Immunoassay method for lyzed whole blood |
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