JPS6382362A - 血液凝固促進剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は血Ｐｙ、凝固促進剤、特にヘパリン投与を受け
ている被検査者の血液検体の凝固を促進することの出来
る血液凝固促進剤に関する。

（従来の技術） 検査技術の目覚ましい進歩とあいまって血清生化学検査
、血清免疫学検査、血球検査などの血液検査が広く普及
し、病気予防や早期診断に役立っている。血液検査の多
くは血清検査であり、その検査に要する血清は、通常、
血液検査用容器に採取した血液を凝固させた後、遠心分
離によって、比重の異なる血餅（フィブリンと血球が混
合したゲル様塊状物）から分離し、ピペットを用いて、
あるいはデカンテーク１ンにより採取している。

被験者から採取された血液が凝固するには比較的長時間
を必要とする。例えば、血液凝固時間が比較的短いとさ
れるガラス製検査容器を用いても血液が凝固するまでに
４０〜６０分を必要とし、合成樹脂製検査容器を用いる
と、実に４時間以上の放置時間が必要となる。そのため
、検査に必要な血清を迅速に確保できないという欠点を
有する。これは、特に緊急に検査を実施する必要のある
場合に問題となる。

このようｉζ、従来の血清分取法によれば、血液凝固に
長時間を要するという問題のほか、凝固した全血を遠心
分離にかけて分離するときに血清と血餅とが良好に分離
しにくいという問題もある。分離状態が悪いと、血清部
分をピペットで吸い上げる場合および／もしくはデカン
テーシ讐ンを行う場合に、たとえ細心の注意を払っても
、赤血球の混入が避けられない。その結果、臨床検査結
果に悪影響をおよぼしたり、再度遠心分離する必要を生
じる。

人工透析を受けている患者や血栓症患者の血液検体をあ
りかう場合は、さらに、別の問題が生じる。このような
患者は、血栓防止のためにヘパリン投与が行われるため
、血液１０ｓｌあたり１〜２０単位のヘパリンが存在す
る。このヘパリンは、血液中のアンチトロンビン■と結
合して、トロンビンの作用を著しく阻害する。さらに、
第■因子などの血液凝固因子の作用をも阻害するといわ
れている。そのため、フィブリノーゲンのフィブリンへ
の転化が起こらず、その結果、血液が凝固しない。それ
ゆえ、血清の分取が困難となる。

これらのｒｌＲｌＩｌｌを解消するため、発明者は、（
ａ）下記一般式（Ｉ）で示され、かつ、該式中の隣接す
るカルボニル基が実質的に同一平面上に存在する環式有
機化合物と（ｂ）アミン塩右よび／または、第４級窒素
を有する有機化合物とを含有する血液凝固促進剤を提案
した（特開昭６０−２７８５８号公？＠）。

（Ｃ＝０ （ここで、Ａは環式化合物の残基を示す。）（Ｉ）式で
示される化合物としては、例えば、没食子酸アルキルエ
ステル酸化物、エラジン酸酸化物などが挙げられる。ア
ミン塩詔よび／または第４級窒素を有する有機化合物と
してはアルキルアミン塩酸塩などが用いられる。これら
の化合物を含有する血液凝固促進剤を用いると、含有さ
れる上記アミン塩などがヘパリンを吸着・中和して不活
性化し、かつ（Ｉ）式で示される化合物が血液中の血液
凝固因子因子を活性化して短時間で血液を凝固させるこ
とができる。

しかしながら、凝固後時間が経過すると血漿中に存在す
る分解酵素の作用により、フィブリンの凝固塊が溶解さ
れ始めることは避けることが出来ず、従って凝固後の経
時的な安定性についての問題点が残されていた。

（発明が解決しようとする問題点） 発明者は上記血液凝固促進剤をさらに検討し、ヘパリン
を含有しない血液のみならず、ヘパリンを含有する血液
をも速やかに凝固させることが出来、さらに凝固後にふ
ける安定性をも向上させることの出来る血液凝固促進剤
の開発を試みた。本発明の目的は、ヘパリン含有の有無
にかかわらず血液を速やかに凝固させることが出来、凝
固後の安定性も良好で、かっ血清分離性のよい血液凝固
促進剤を提供することにある。

（問題点を解決するための手段および作用）本発明の血
液凝固促進剤は、 （り一般式 （但し、人は環式化合物の残基を示す。）で表わされ、
且つ、上記二つの相隣るカルボニル基が立体的に実質的
に同一の平面上にある環式有機化合物、 （ｂ）　　アミン塩又は第４級窒素を有する有機化合物
、および （ｃ）抗線溶剤又は抗プラスミン剤 が含有されてなるものであり、そのことにより上記目的
が達成される。

本発明の血液凝固促進剤の成分として用いる上記環式有
機化合物は、二つの相隣るカルボニル基と残基Ａとが形
成する同素環式又は異部環式化合物のいずれであっても
よく、また、このような環式化合物は単環式であっても
、多環式化合物であってもよいが、本発明に詔いては少
なくとも二つのカルボニル炭素を含む環が６員環又は５
員環である環式化合物が好ましく用いられる。

特に、本発明において好ましく用いられる６員環式化合
物は次式 Ｉ （但し、Ｒ１−Ｒ４は水素、炭化水素基、極性置換基又
は多環式化合物における残基を示す。）で表わされる０
−キノン環を有する化合物であり、上記式に詔いて炭化
水素基は特に制限されるものではないが、好ましくはア
ルキル基であり、また、上記極性置換基も特に制限され
るものではないが、例えば、カルボキシル基、カルボン
酸エステル基、水酸基、アミノ基、メルカプト基等であ
る。従って、Ｏ−キノン環を有する化合物の好ましい具
体例として、例えば、〇−キノン、次の一般式 （但し、Ｒ５はアルキル基を示す。） で表わされる没食子酸アルキルエステル酸化物、次式 でそれぞれ表わされるニラジン酸部分酸化物及で表わさ
れる１、４−ジ（３，４−ジヒドロキシフェニル）２，
３−ジメチルブタン部分酸化物及び完全酸化物等を挙げ
ることができる。

また、二つのカルボニル炭素を含む環が５員環である同
素環式化合物の好ましい具体例として、 次式　　　　　　　　０ で表わされる１、２．３−　）リケトヒドロインデンを
挙げることができる。

更に、本発明において好ましく用いることができる異部
環式化合物の一つは、次の一般式（但し、Ｒ６は水素、
炭化水素基又は多環式化合物に＄ける残基を示し、Ｒ７
及びＲ８は水素、炭化水素基、極性置換基又は多環式化
合物における残基を示す。） で表わされ、ここに、上記炭化水素基及び極性置換基に
ついては前記と同じである。

このような化合物の好ましい具体例として、例えば、次
式で表わされるイサチンを挙げることができる。

これら−群の化合物は、いずれも分子内屹立体的に同一
の乃至は近似的に同一の平面上に二つの相隣るカルボニ
ル基をもち、詳細な作用機序は不明であるが、血液凝固
因子に対して特異的な効果を示す。

本発明血液凝固促進剤を構成する第２成分としてアミン
塩又は第４級窒素を有する有機化合物がある。

き、具体例として、塩酸のようなハロゲン化水素酸のほ
か、硫酸、亜硫酸等の無機酸塩やギ酸、酢酸等の有機酸
塩を挙げることができる。アミン塩の有機残基は通常ア
ルキル基であるが、このアルキル基はイミノ基やエーテ
ル基のような異種元素を含むアルキル基であってもよく
、また、アミン塩には分子内塩を含むものとする。

従って、好ましいアミン塩の具体例として、例えば、次
式 ％式％ で表わされるヘキサデシルジメチルアミン塩酸塩や、次
式 ％式％） で表わされるテトラデシルジ（アミノエチル）グリシン
を挙げることができる。

また、第４級窒素を有する有機化合物のうち、有機単量
体は、好ましくはテトラアルキルアンモニウムであるが
、しかし、一部にアリール基を有してもよく、また、前
記したように、アルキル基はイミノ基やエーテル基のよ
うな異種元素を含むアルキル基であってもよい。例えば
、好ましい具体例として、次式 ％式％［） で表わされるドデシルトリメチルアンモニウムクロライ
ドを挙げることができる。

第４級窒素を有する有機化合物のうちの重合体は好まし
くは次の一般式 （但し　Ｒ９は水素又はアルキル基、Ｘはハロゲン原子
又は酸根、Ｙはアルキレン基又は−アルキレン基−５ｏ
２−を示す。） で表わされる繰返し単位を有するポリカチオンである。

特に、次式 ％式％ で表わされる繰返し単位を有するポリカチオンが好まし
く用いられる。

一方、抗線溶剤又は抗プラスミン剤としては、従来より
臨床で用いられているアプロチニン、　　（大豆トリプ
シンインヒビター、Ｃ−アミノカブ　　１０ン酸、Ｐ−
アミノメチル安息香酸、アミノメチルシクロヘキサンカ
ルボン酸などを単独であるいは適宜組合わせて用いれば
よい。

本発明において、上記のような環式有機化合物とアミン
塩又は第４級窒素を有する単量体若しくは重合体と抗線
溶剤又は抗プラスミン剤とを血液凝固促進剤として血液
中に存在させるには、これらをそのままで、又は適宜の
溶剤に溶昨若しくは分散させて、血液中に添加してもよ
く、又は比表面積の大きい担体にこれら血液凝固促進剤
を担持させ、これを血液検査用容器中り血液に添加して
もよい。

上記担体としては、血液検査に有害な影響を与えず、大
きい比表面積を有するものであれば、寺に制限されるこ
となく、種々のものを用いる二とができるが、例えば、
不織布、織布、ｔＭ脂＝゛−ズ等を好適に用いることが
できる。このよ５な担体に血Ｆｉ、凝固促進剤を担持さ
せるには、司えば、その溶液や分！２［を塗布し、又は
これこ浸漬した後、乾燥して、担体に付着させればヒい
。また、アラビアゴム等の適宜の助剤と混合して水分散
液とし、これを急速凍結乾燥する等の方法により、血液
凝固促進剤を担持した粒子状物を得ることもできる。

上記化合物の血液中番ζ話ける存在量は、血液１ｄにつ
いて少なくともｌＸｌ０−”Ｐであり、これよりも少な
いときは、血液凝固の促進効果が乏しい。しかし、余り
に多量に存在させるときは、却って血液検査に種々の支
障を来す＄それがあるので、ｌＸ１０”ｙ以下とするの
が好ましい。

又、本発明の血液凝固促進剤においては、前記環式有機
化合物１００２１ｔ量部に対し、前記アミン塩又は第４
級窒素を有する有機化合物が５〜１０，０００重鳳部の
割合で含有されるのが血液の凝固促進の点で好ましく、
又、抗線溶剤又は抗プラスミン剤は臨床上の推奨量で用
いるのが好ましい。例えば、アプロチニンは血液１−あ
たり約１００〜６００ＫＩＵ（単位）の使用量で、大豆
トリプシンインヒビターは血液ｌｄあたり約５００〜４
．　ＯＯＯＦ　Ｕ　（単位）の使用量で、又、ε−アミ
ノカプロン酸、Ｐ−アミノメチ、、？ａｌｚｙ、；ｚ　
７−ｙ−Ｒンカルポン酸については、血ｗＩｌｄあたり
約１０−”　〜ｔｏ−’ｙのｆｆ用１？ｌ’用いるのが
好ましい。

本発明によれば、上に説明したアミン塩又は第４級窒素
を有する単量体若しくは重合体が、ヘパリンを含有する
血液と接触した際にヘパリンを吸着中和し、これと共に
沈殿して、速やかにヘパリンの作用を消失させ、このよ
うにして正常な血液の凝固機能を回復させると共に、前
記した環式化合物が血液凝固因子に対して特異的な効果
を有するため膠こ、血液検査用容器中の血液を短時間内
に凝固させ、従って、遠心分離によって血清を分離性よ
く得ることができる。

この点をより詳細に説明すれば、通常の血液においては
、血液と血液容器の内壁面との接触により直ちに凝固因
子中の第】因子の活性化が進みこれが起点となって連鎖
反応的に血液凝固が進行し、最終的にはプロトロンビン
の活性化によって生成されたトロンビンがフイブリノー
−ゲンに作用し、不溶性のフィブリン網を形成して凝固
を完了する。

一方、ヘパリン投与を受けている患者の血液中には、通
常、１０（！ｅ当り１単位乃至１０単位のヘパリンが存
在するとされており、このように、ヘパリンを含有する
血液の場合には、ヘパリンが血液中に存在するアンチト
ロンビンと協同的に作用して、トロンビンの作用を著し
く阻害する。このように、ヘパリンはトロンビンの作用
を阻害するのみならず、更に、第罵因子をはじめ、その
他の凝固因子の作用をも阻害するといわれており、従っ
て、通常、ヘパリンを含有する血液においてはフィブリ
ノーゲンのフィブリンへの転化が起こらず、その結果、
血液が凝固しないために血清を分離することができない
。

しかしながら、本発明によれば、前記したように、ヘパ
リンがアミン塩又は第４級窒素を有する単量体若しくは
重合体に吸着されて血液中から除去されるために、トロ
ンビンはじめその他の血液凝固因子が正常な血液凝固作
用を回復すると共に、前記環式有機化合物の特異的な作
Ｊによって、血液凝固が著しく促進されるのであろう。

さらに、抗線溶剤又は抗プラスミン剤は、血液の凝固反
応過程で拮抗的に生成してくるプラスミンのフィブリン
分解作用を阻害し、凝固を確実なものとし、又、凝固後
においても凝固状態を安定に保つことが出来る。

以上のように、本発明の血液凝固促進剤が血液中に存在
せしめられると、ヘパリンが血液中から除去されると共
に、血液凝固因子が迅速に活性化され、容器に血液を採
取後の凝固に要する時間が著しく短縮されると共に、血
清と血餅の分離が著しく容易となり、従って、分離採取
された血清中に血餅成分が混在する問題も解消される。

更に、本発明によれば、血餅成分の収縮が十分に行なわ
れる結果、血清の収量も著しく多い利点を有し、さらに
は、凝固後においても凝固状態を安定に保つことが出来
、経時的な安定性の問題を解消し得る。

以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこ
れら実施例により何ら限定されるものではない。

（実施例） 実施例１ 前記式（マ）で表わされるエラジン酸酸化物と前記式（
１■）で表わされるポリカチオンとアプロチニンの水分
散液をポリエステル系不織布に含浸させ、十分に乾燥さ
せた。不織布単位面積当りの上記各成分の量はそれぞれ
４　Ｘ　１０−’り、４Ｘ１０　　ｙ、５００ＫＩＵで
あった。

市販の５ｄポリエチレン製スピツツにヘパリンを１．０
　Ｉ　Ｕ／ｍｌの濃度で含む入断鮮血２　ｍｌを注入し
、次いで、上記成分を担持した不織布１５＃を入れ、緩
やかに攪拌した後、２０℃で放置した。放１ｉ１時間後
、及び３０時間後の血清を分取し、フィブリノーゲン及
びフィブリン分解産物（以下ＦＤＰと略す。）の測定を
行なった。

この結果を第１表に示すが、１時間後、３０時間後のＦ
ＤＰ測定値に差異がなく、血餅の分解反応がよく抑制さ
れていることがわかる。実施例２〜７、比較例の結果も
合わせて第１表に示す。

実施例２ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物とテトラデシルジ（アミノ
エチル）グリシンｔよびアプロチニンとをそれぞれ０．
５重量％、０．５重量％および１０、　ＯＯＯＫＩＵ／
ｌ（の濃度で含有する生理食塩水分散液を調製した。

市販の５　ｍｌポリエチレン製スピッツにヘパリンを１
．０ＩＵ／ｄの濃度で含む入断鮮血２ｄを注入し、次い
で上記分散液を５０μｌ！添加した後実施例１と同様に
処理し評価を行った。

実施例３ イサチン１２、ヘキサデシルジメチルアミン塩酸塩０．
４ｆ、アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸５０■お
よび平均粒径１．５　ｔｍのポリスチレンビーズ担体１
ｋｇを少量のエタノールを分散助剤として充分膠こ混合
した後、乾燥した。

市販の５ｍｌポリエチレン製スピッツにヘパリンを１．
ＯＩＵ／屑／の濃度で含有する入断鮮血２ｄを注入し、
次いで、上記血液凝固促進剤１２を加えた後、実施例１
と同様に処理し、評価を、行った。

実施例４ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物、テトラデシルジ（アミノ
エチル）グリシンおよびアプロチニンの代わりに０−キ
ノン、ポリカチオン（（１マ）式で表わされる化合物）
およびε−アミノカプロン酸を各々０．５１！量チ、０
．５重量％、および０、１　重量チの割合で用いたこと
以外は実施例２と同様にした。

実施例５ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物、テトラデシルジ（アミノ
エチル）グリシンおよびアプロチニンの代わりに、Ｉ・
２・３−トリケトヒドロインデン、ポリカチオン（（１
１）式で示される化合物）勿よびε−アミノカプロン酸
を用いたこと以外は実施例２と同様にした。

実施例６ テトラデシルジ（アミノエチル）グリシンの代わりにド
デシルトリメチルアンモニウムクロライドを用いたこと
以外は実施例２と同様にしたＯ 実施例７ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物＄よびテトラデシルジ（ア
ミノエチル）グリシンの代わりに１・４−ジ（３・４−
ジヒドロキシフェニル）２・３−ジメチルブタン酸化物
詔よびポリカチオン（＜ＸＶ＞式で示される化合物）を
用いたこと以外は実施例２と同様にした。

比較例１ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物とテトラデシルジ（アミノ
エチル）グリシンをそれぞれ０．５重ｆｆｉ％、０．５
！量チの濃度で含有する生理食塩水分散液を調製した。

市販の５ｄポリエチレン製スピツツにヘパリンを１．Ｏ
ＩＵ／Ｍｌの濃度で含む大所鮮血２　ｍｌを注入し、次
いで上記分散液を５０μｌ添加した後、実施例１と同様
に処理し評価を行った。

実施例８ 各実施例１〜７に詔ける凝固促進剤の調整及び採血用ス
ピッツの準備と該スピッツへのヘパリン含有入断鮮血の
注入を繰り返して行い、緩やかに攪拌後、２０℃で放置
して、全血が完全に流動しなくなるまでに要する時間、
すなわち血液凝固時間を測定した所、いずれの実施例で
も３０〜３５分で凝固した。

又、血液凝固後、直ちに３．　ＯＯＯ回転／分の回転速
度で５分間遠心分離し、血清分離状層を観察すると共に
ピペットによる血清の採取状況を調べた所、いずれの実
施例においても血清分離性及び血清収量は良好な結果を
示した。

（以下余白） （発明の効果） 本発明によれば、通常の血液検体のみならずヘパリンを
含有する血液をも速やかに凝固させつる血液凝固促進剤
を提供し得る。さらに、本発明凝固促進剤を用いた場合
は、凝固後における凝固状態を安定に保つことが出来、
又、血清と血餅とを分離した際の血清の収量も多くなる
。

この様な血液凝固促進剤は、ヘパリン投与を受けている
人工透析患者や血栓症患者の血液検査のための血清の採
取等に好適に用いられる。

特許出願人　積水化学工業株式会社 代表者　廣　１）　　馨

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （ａ）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （但し、Ａは環式化合物の残基を示す。） で表わされ、且つ、上記二つの相隣るカルボニル基が立
   体的に実質的に同一の平面上にある環式有機化合物、 （ｂ）アミン塩又は第４級窒素を有する有機化合物、お
   よび （ｃ）抗線溶剤又は抗プラスミン剤 が含有されてなる血液凝固促進剤。