KR20200024235A - 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 치료 및/또는 관리에 유용한 화합물 - Google Patents

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Abstract

피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 치료 및/또는 관리, 특히 피부의 장벽 기능을 개선하고, 피부에 에너지를 공급하고 그리고 항노화 제제로 유용한, 식 (I) R1-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-R2의 화합물이며, AA1은 Phe이고; AA2는 Trp이고; AA3은 Met, Leu 및 Ile으로 구성된 군으로부터 선택되고; AA4는 Lys, Arg 및 Gln으로 구성된 군으로부터 선택되고; AA5는 Arg이고; AA6은 Lys이고; AA7은 Arg, Lys 및 His으로 구성된 군으로부터 선택되고; AA8은 Val, Ile, Leu 및 Met으로 구성된 군으로부터 선택되고; AA9는 Pro이다.

Description

피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 치료 및/또는 관리에 유용한 화합물
본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 치료 및/또는 관리에 유용한 화합물에 관한 것이다. 본 화합물은 피부의 장벽 기능을 개선하고 피부에 에너지를 공급하는데 유용하고 항노화 제제로서 작용할 수 있다. 본 화합물은 피부의 일주기 리듬을 조절하고 이른 아침에 매일의 피부 특성을 피부에 전달하도록 작용할 수 있다.
일주기 리듬은 인간 생리적 사건이 낮 동안 환경 진동으로 인한 특이적 행동 패턴을 따를 수 있게 한다. 일주기 리듬은 약 24 시간의 내인성 진동을 나타내는 멜라토닌 분비, 코어 체온 조절, 코르티솔의 혈장 수준 등을 포함한 생물학적 시스템에서의 임의의 기능이다.
일주기 리듬 조절은 전측 시상하부의 시교차위 핵 (SCN)에서 발생하며, "시계 기계장치"로도 알려진 조율된 일주기 리듬 기계장치에 의해 엄격하게 조절된다 [1]. 이 시계 기계장치는 시계 유전자 세트를 포함하며, Bmal1/시계 단백질에 의해 형성된 전사 활성제 복합체로 인해 그 발현 패턴이 하루 종일 변동된다. 이 복합체는 시계 유전자의 프로모터 영역 (PER, CRY)에 결합하여, 낮 동안 이의 발현을 유발한다. 낮 동안 Cry 및 Per 단백질의 점진적인 축적은 또한 밤에 그들 자신 전사의 음성 조절인자를 작용하여, 일주기 리듬에 대한 피드백 루프를 제공한다 [2].
대부분의 말초 기관 및 조직은 또한 낮 동안 조직/장기 항상성의 자율적 제어를 야기하는 SCN으로부터 단리된 특정한 조직 기능을 조절하기 위해 일주기 진동을 나타낼 수 있는 것으로 보고되었다 [3]. 피부는 우리 신체에서 가장 외부 장벽이며 많은 이의 필수적인 특성도 일주기 조절을 따른다. 실제로, 피부는 또한 대부분의 그 생리적 기능을 제어하기 위해 그 자체의 내부 일주기 리듬 기계장치를 가지고 있다 [4-5].
피부의 주요 기능은 숙주의 내부와 환경 사이에 장벽을 형성하는 것이다. 피부는 화학물질, 자외선, 기계적 공격 및 병원성 미생물로부터 유기체를 보호해야 한다. 가장 중요하게, 피부는 물과 전해질의 손실을 막는 효율적인 투과성 장벽을 제공해야 한다. 피부는 표피, 진피 및 피하로 구성되어 있다. 표피는 4개 층: 세포 증식이 일어나는 미분화된 기저층, 가시층, 과립층 (SG), 및 각질층의 무세포성 층으로 구성된다. 투과성 장벽은 주로 각질층뿐만 아니라 과립층에 국재화된다.[6]
각질층 (SC)에서, 3가지 생리적 파라미터는 장벽 기능의 품질: 각질층 두께, 각질화된 외피를 형성하는 세포간 지질의 함량 및 조직화에 기여한다. 세라미드는 각질화된 외피 내에서 주요 지질 성분을 형성하며 스핑고신에 부착된 지방산 잔기로 각각 구성된 분자의 계열이다. 피부에서 세라미드의 양은 피부의 수-불투과성 특성과 관련이 있으며 따라서 피부 건조의 외관을 피하는 것과 관련이 있다. 오메가-3 지방산 계열은 또한 피부 기능성에 중요한 역할을 한다. 이들 중에서도, 도코사헥사엔산 (DHA)은 이중층 세포막 (PC-DHA (DHA와 접합된 포스파티딜콜린)과 총 포스파티딜콜린 수준 (PC) 사이의 비, 즉 PC-DHA/PC로 또한 지칭됨) 안으로의 혼입이 적절한 세포막 유체성을 유지하는 데 도움이 되는 장쇄 다중불포화된 지방산이다. 세포막에 대한 DHA 혼입에서의 증가는 피부 장벽 기능을 향상시킨다 [7].
피부 피지 분비는 정오 경에 피크를 가지며 커패시턴스 (커패시턴스는 피부 수화의 척도임)가 이른 낮 동안에 낮다. 또한 피부 혈류 또는 미세순환과 피부 장벽 기능은 늦은 오후 및 늦은 저녁에 정점에 도달하는 이른 낮에 피부 혈류가 낮은, 일주기 및 초일주기의 리듬을 나타낸다 [8-9]. 초일주기의 리듬은 24-시간 일주기 일 동안 반복되는 재발성 기간 또는 사이클이다.
최근에, 일주기 리듬의 후성 유전적 제어는 일주기 리듬의 주요 특징인 것으로 나타났다 [10]. JARID1A 단백질은 KDM5A 유전자에 의해 인코딩된 특이적 히스톤 탈메틸효소 라이신 4이며, 이는 시계 유전자의 프로모터 (프로모터는 시계 유전자의 발현을 제어하는 DNA 영역임)에서 Bmal1-Clock과 복합체를 형성한다. JARID1A 단백질은 Clock-Bmal1 의존 방식으로 PER 유전자의 전사를 향상시킨다. 이와 관련하여, JARID1A 단백질의 증가는 PER2 유전자 발현의 활성화를 유발시킨다는 것이 입증되었다 [11].
얼굴은 사회적 인식에서 중요한 역할을 한다. 수면 박탈, 스트레스, 질환 및 신체적 또는 정신적 격심한 활동은 피로와 안면 신호에 영향을 미치며 피로를 덜 느끼려는 욕구는 미용 치료를 받는 주요 동기 중 하나이다.
얼굴에서의 피로의 출현은 눈 및 피부 외관과 관련된 단서와 밀접한 관련이 있다. 수면은 피부의 외관과 기능에 중요한 역할을 한다. 피부의 완전성을 유지하는 데 있어 수면의 역할은 피부 병변이 장기간의 수면 박탈을 겪은 랫트에서 제1이고 가장 두드러진 결핍 중 하나라는 관찰에 의해 뒷받침된다. 또한, 폐쇄성 수면 무호흡증 환자에서 내피성 기능이상이 발견되었다. 수면 박탈은 창백한 피부, 주름 및 눈 밑의 다크서클을 유발한다.
정상적인 수면의 밤 후와 비교하여, 수면 박탈된 개체는 더 피로해 보이는 것으로 등급되는, 더 많은 눈꺼풀 처짐, 붉은 눈, 더 많은 부은 눈, 눈 밑의 다크서클, 창백한 피부, 눈 주위에 더 많은 주름 및 잔주름, 더 처지고 더 슬퍼보이는 입가의 코너를 가진다 [12].
노화는 내인성 (유전학, 세포 대사, 대사 과정) 및 외인성 (광 노출, 이온화 방사선, 환경 오염, 화학물질) 인자의 조합에 의해 영향을 받는 복잡한 생물학적 과정이다. 전자 전달계 기능의 결과로서 반응성 산소 종 (ROS)의 생성으로 인해 미토콘드리아가 노화 과정에서 중요한 역할을 수행한다는 것이 잘 확립되어 있다 [13].
환경 인자 예컨대 태양광에 직접적으로 노출되는 인간 피부 세포는 세포 탈조절 및/또는 손상에 대항하기 위해 많은 양의 에너지에 크게 의존한다. 그러나, 나이가 들어감에 따라 세포 에너지 준위는 감소한다. 피부 에너지 용량에서의 부족은 인간 피부의 구조에서 현저한 변화에 밀접하게 관련이 있으며 - 이는 주름의 형성을 이끄는 주요 기전 중 하나이다.
피부는 정상 조직 유지에 필요한 이의 대사 요구, 일정한 조직 재생 및 회복을 지원하기 위해 높은 에너지 요건을 갖는다. 피부는 또한 UV 조사 및 ROS를 생성하고 (미토콘드리아) DNA, 세포막, 촉매 및 구조 단백질 (예를 들어 콜라겐)에 유해한 변화를 일으키는 기타 외부 인자에 노출된다. 회복 기전이 페이스를 유지할 수 없으면, 피부 구조에서의 해로운 변화가 일어나 노화의 가시적인 징후로 이어질 수 있다. 연령 관련 변화의 정확한 기전은 완전히 이해되지는 않는다. 미토콘드리아는 세포에서 에너지 생산의 배터리이고, 미토콘드리아 기능 및 에너지 생산을 감소하는 것은 노화의 원인 및 효과 둘 모두로 간주될 수 있다.
몇몇 데이터는 에너지적으로 균형 잡힌 인간 피부 세포가 대사성으로 재활성화되고 따라서 인간 피부의 연령 관련 구조 변화에 대해 현저하게 보호되어 진피 유두의 밀도를 증가시키며, 이는 그 중에서도 잔주름 및 주름의 깊이 및 외관에서의 관측된 감소에 대한 하나의 주요한 인자인 것으로 보인다는 것을 입증한다 [14].
최근에, 미토콘드리아 복합체 II의 활성은 인간 진피 섬유모세포에서 나이가 들어감에 따라 감소하여, 진행성 미토콘드리아 기능 이상을 초래하고, 따라서 늙은 피부 세포에 의한 에너지 생산이 줄어드는 것으로 밝혀졌다 [15]. 또한, 미토콘드리아 복합체 I의 활성의 부분적인 억제가 수명을 연장시키는 것으로 입증되었다 [16]. 사실상, 미토콘드리아 복합체 I 활성의 상이한 억제제 (즉, 메트포르민, 로테논)로의 치료는 노화 과정을 늦출 수 있다 [17-18].
건조 피부, 비늘성 피부는 빈번하게 노인에게 보인다. 나이가 들어감에 따라 피부 장벽 기능의 파괴 또는 손실은 부분적으로 이러한 징후에 대한 책임이 있다. 손상된 장벽 기능의 회복은 노화된 피부에서 더 느리다는 것이 입증되었으며, 이는 건조성 전개에 더 큰 민감성을 초래한다. 이것은 부분적으로 라멜라 바디에서 보다 낮은 지질 수준과 표피의 상부층의 구조 단백질인, 필라그린에서의 감소에 기인한 다인성 과정이다. 노화된 피부에 의해 증가된 트랜스-표피 물 손실 (TEWL)이 또한 나타나, 각질층이 습도가 낮은 환경에서 보다 건조되기 쉽게 한다 [19].
피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 치료 및/또는 관리에 사용하기에 효과적인 새로운 활성제가 필요하다. 특히, 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 비-치료적, 화장 치료 및/또는 관리, 예컨대 피부 수화의 개선 및/또는 피부의 노화 또는 피부의 노화의 증상을 완화, 예방 및/또는 지연하는데 사용하기에 효과적인 새로운 활성제가 필요하다. 또한, 이의 미용 특성 예컨대 수화, 미세순환 및 장벽 기능을 개선하기 위해, 이른 아침에 피부를 치료하거나, 또는 이의 변경된 일주기 리듬을 갖는 피부를 치료하는 새로운 방법이 필요하다. 본 발명은 이들 필요성 중 하나 이상을 충족시키고자 한다.
제1 양태에서, 본 발명은 하기 식 (I)에 의해 제시된 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
R1-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-R2 (I),
식 중:
AA1은 Phe이고;
AA2는 Trp이고;
AA3은 Met, Leu 및 Ile으로 구성된 군으로부터 선택되고;
AA4는 Lys, Arg 및 Gln으로 구성된 군으로부터 선택되고;
AA5는 Arg이고;
AA6은 Lys이고;
AA7은 Arg, Lys 및 His으로 구성된 군으로부터 선택되고;
AA8은 Val, Ile, Leu 및 Met으로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고
AA9는 Pro이고;
W, X, Y 및 Z 각각은 독립적으로 아미노산이고;
m, n, p 및 q 각각은 독립적으로 0 또는 1이고;
m+n+p+q는 2 이하이고;
R1은 H, 폴리에틸렌 글리콜, 비-환형 지방족 그룹, 알리사이클릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴알킬, 아릴, 아르알킬 및 R5-CO-로부터 유래된 폴리머로 구성된 군으로부터 선택되고, 여기서 R5는 H, 비-환형 지방족 그룹, 알리사이클릴, 아릴, 아르알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로아릴알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2는 -NR3R4, -OR3, -SR3으로 구성된 군으로부터 선택되고, 여기서 R3 및 R4는 H, 폴리에틸렌 글리콜, 비-환형 지방족 그룹, 알리사이클릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴알킬, 아릴 및 아르알킬로부터 유래된 폴리머로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
R1 및 R2는 아미노산이 아님.
본 발명의 화합물은 피부 장벽 기능을 개선하고 항노화 제제로서 효과적인 것으로 밝혀졌다. 또한, 이들은 피부 수화 및 피부 혈류를 개선시키도록 작용할 수 있다. 그 결과, 본 발명의 화합물은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 보호, 치료 및/또는 관리에 유용하다. 특히, 본 발명의 화합물은 JARID1A 단백질의 발현이 일일 최대치보다 낮은 일주기 리듬에서의 한 시점에 있는 피부의 비-치료적 처치 및/또는 관리에 유용하다; CRY2, PER2 및/또는 PER3 시계 유전자의 발현은 일일 최대치보다 낮고; 및/또는 피부에 존재하는 세라미드의 양은 일일 최대치보다 낮다. 본 발명의 화합물은 피부의 일주기 리듬을 전진시키는 역할을 할 수 있고, 따라서 일주기 리듬의 주기에서 나중에 피부와 연관된 수화 수준, 장벽 기능성 및 미세순환과 같은 피부의 특성을 전달할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 적어도 하나의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 부형제 또는 아쥬반트와 함께, 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 조성물을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 치료 및/또는 관리를 위해, 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 조성물의 용도를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위해, 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염, 또는 이들을 포함하는 조성물의 용도를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 대상체에게 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염, 또는 이들을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 대상체의 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 치료 및/또는 관리의 방법을 제공한다. 전형적으로 본 발명의 화합물은 국소적으로 투여될 것이다.
일 양태에서, 본 발명은 대상체에게 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염, 또는 이들을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 대상체의 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리의 방법을 제공한다. 전형적으로 본 발명의 화합물은 국소적으로 투여될 것이다.
정의
본 발명 맥락에서 "피부"는 최상위 층 또는 각질층에서 최하위 층 또는 피하층까지 이 둘 모두를 포괄하여 포함하는 층인 것으로 이해된다. 이들 층은 그 중에서도 상이한 유형의 세포 예컨대 각질형성세포, 섬유모세포, 멜라닌세포, 비만 세포, 뉴런 및/또는 지방세포로 구성된다. 용어 "피부"는 또한 두피를 포함한다. 용어 "피부"는 포유동물의 피부를 포함하고 인간의 피부를 포함한다. 마찬가지로, 용어들 "모발, 손톱 및 점막"은 포유동물, 예를 들어 인간의 모발, 손톱 및 점막을 포함한다.
용어 "치료"는 질환 또는 장애를 완화 또는 제거하기 위해, 또는 상기 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 감소 또는 제거하기 위해 본 발명에 따른 화합물의 투여에 관한 방법을 포함하는 치료 방법을 포함한다. 용어 "치료"는 또한 질환 또는 장애의 생리적 결과를 경감시키거나 제거하는 것에 관한 요법의 방법을 포함한다.
용어들 "치료" 및 "관리"에 자격 "화장" 및/또는 "비-치료적"이 동반되는 경우, 본 치료 또는 관리가 그러한 것이고, 예를 들어, 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미적 외관을 개선하거나 유지하는 목적을 가지는 것을 의미한다. 특히, 치료는 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적 특성 예컨대, 예를 들어 여기에 제한되지 않지만, 그 특성이 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미적 외관에 영향을 주는 수화, 탄력성, 견고성, 광택, 톤 또는 텍스처의 수준을 개선하는 목적을 가질 수 있다. 본 명세서의 맥락에서 용어 "관리"는 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 특성의 유지를 지칭한다. 상기 특성은 건강한 대상체 뿐만 아니라 민감한 피부를 갖는 대상체 및, 예를 들어 여기에 제한되지 않지만, 그 중에서도, 피부에 대한 궤양 및 손상, 건선, 피부염, 여드름 또는 주사비와 같은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 질환 및/또는 장애가 존재하는 이들 모두에서 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 화장 치료 및/또는 관리에 의해 개선 또는 유지되는 대상체이다.
본 발명에서 사용되는 바와 같은, 용어 "예방"은 질환 또는 장애의 출현 또는 전개를 예방, 지연 또는 방해하거나, 또는 피부, 점막 및/또는 모발의 미용적 특성에서의 변화를 예방, 지연 또는 방해하는 본 발명의 화합물의 능력을 지칭한다. 본 발명에서 사용되는 바와 같은, 용어 "예방"은 용어 "억제"와 상호교환 가능하고, 즉, 이것은 질환 또는 장애의 출현 또는 전개를 억제하거나 피부, 점막 및/또는 모발의 미용적 특성에서의 변화를 억제하는 본 발명의 화합물의 능력을 지칭한다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "노화"는 나이든 피부 (시간노화) 또는 태양에의 노출 (광노화) 또는 환경 물질 예컨대 담배 연기, 차가운 또는 바람의 극단적인 기후 상태, 화학적 오염물질 또는 오염물질에 노출을 통한 경험된 변화를 지칭하고, 터치를 통한 모든 외부 가시적인 및/또는 인지가능한 변화, 예컨대 및 여기에 제한되지 않지만, 그 중에서도, 피부의 불연속성의 전개 예컨대 주름, 잔주름, 인상줄, 임신선, 고랑, 불규칙성 또는 조도, 기공의 크기 증가, 수화의 손실, 탄력성의 손실, 견고성의 손실, 평탄성의 손실, 변형을 회복하는 능력의 손실, 회복력 손실, 처지는 피부 예컨대 처지는 뺨, 눈 밑의 가방 모양 또는 이중 턱 모양, 피부 색상에 대한 변화 예컨대 마크, 붉어짐, 백 또는 과착색된 영역 예컨대 그 중에서도 노인 반점 또는 주근깨의 출현, 변칙적인 분화, 과케라틴화, 탄력증, 각화증, 탈모, 오렌지-껍질 피부, 콜라겐의 구조 손실 및 각질층, 진피, 표피, 혈관계 (예를 들어 거미 정맥 또는 모세혈관확장증의 출현) 또는 그 중에서도 피부에 밀접한 이들 조직의 다른 조직학적 변화를 포함한다. 용어 "광노화"는 그 중에서도 자외선을 포함하여 방사선에 피부가 장기간 노출에 기인한 일련의 과정을 함께 그룹화하며, 이는 피부의 조기 노화를 초래하고, 노화와 같은 물리적 특성 예컨대 여기에 제한되지 않지만, 연화, 처짐, 색소의 변색 또는 색소침착에서의 불규칙성, 비정상 및/또는 과도한 각질화를 나타낸다. 담배 연기 노출, 오염 노출, 및 추위 및/또는 바람과 같은 기후 조건과 같은 다양한 환경 요인의 합이 피부의 노화에 또한 기여한다.
본 설명에서 아미노산에 대해 사용된 약어는 Eur. J. Biochem., (1984), 138, 9-37 에 명시된 생화학적 명명법의 IUPAC-IUB 위원회의 규율에 따른다. 따라서, 예를 들어, Gly는 NH2-CH2-COOH를 나타내고, Gly-은 NH2-CH2-CO-를 나타내고, -Gly는 -NH-CH2-COOH를 나타내고 그리고 -Gly-는 -NH-CH2-CO-를 나타낸다. 따라서, 펩타이드 결합을 나타내는 하이픈은 기호의 오른쪽에 위치할 때 아미노산의 1-카르복실기 (여기서는 통상적인 비-이온화 형태로 나타냄)에서 OH를 제거하고, 기호의 왼쪽에 위치할 때 아미노산의 2-아미노기의 H를 제거하고; 양 변형은 동일한 기호에 적용될 수 있다 (표 1 참고).
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본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "비-환형 지방족 그룹"은 선형 (즉 직쇄 및 비분지형) 또는 분지형, 포화 또는 불포화된 하이드로카르빌기 예컨대 알킬, 알케닐 및 알키닐을 포함한다. 비-환형 지방족 그룹은 치환 (모노- 또는 폴리-) 또는 비치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "알킬"은 포화된 선형 및 분지형 알킬 그룹 둘 모두를 포함하며, 이것은 치환 (모노- 또는 폴리-) 또는 비치환될 수 있다. 알킬기는 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 결합된다. 알킬기는 1 내지 24, 바람직하게는 1 내지 16, 더 바람직하게는 1 내지 14, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 12, 더욱더 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소 원자를 갖는다. 용어 "알킬"은, 예를 들어, 메틸, 에틸, 이소프로필, 이소부틸, tert-부틸, 2-메틸부틸, 헵틸, 5-메틸헥실, 2-에틸헥실, 옥틸, 데실, 도데실, 라우릴, 헥사데실, 옥타데실 및 아밀을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "알케닐"은 하나 이상의 이중 탄소-탄소 결합을 함유하고 선형 또는 분지형 및 치환 (모노- 또는 폴리-) 또는 비치환될 수 있는 기를 지칭한다. 바람직하게는 이것은 1, 2 또는 3 이중 탄소-탄소 결합을 갖는다. 1 초과 이중 탄소-탄소 결합이 존재하는 경우, 이중 결합은 접합되거나 또는 접합되지 않을 수 있다. 바람직하게는 알케닐기는 2 내지 24, 바람직하게는 2 내지 16, 더 바람직하게는 2 내지 14, 더욱 더 바람직하게는 2 내지 12, 더욱더 바람직하게는 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소 원자를 갖는다. 알케닐기는 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 결합된다. 용어 "알케닐"은, 예를 들어, 비닐 (-CH2=CH2), 알릴 (-CH2-CH=CH2), 프레닐, 올레일, 리놀레일기 및 유사한 것을 포함한다.
용어 "알키닐" 하나 이상의 삼중 탄소-탄소 결합을 함유하고 선형 또는 분지형, 및 치환 (모노- 또는 폴리-) 또는 비치환될 수 있는 기를 지칭한다. 바람직하게는 알키닐기는 1, 2 또는 3 삼중 탄소-탄소 결합을 갖는다. 삼중 결합은 접합되거나 또는 접합되지 않을 수 있다. 알키닐기는 2 내지 24, 바람직하게는 2 내지 16, 더 바람직하게는 2 내지 14, 더욱 더 바람직하게는 2 내지 12, 더욱더 바람직하게는 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소 원자를 갖는다. 알키닐기는 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 결합된다. 용어 "알키닐"은, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 에티닐, 1-프로피닐, 2-프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐, 3-부티닐, 펜티닐, 예컨대 1-펜티닐, 및 유사한 것을 포함한다. 알키닐기는 또한 하나 이상의 이중 탄소-탄소 결합을 함유할 수 있고, 그리고 알키닐기는, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 부트-1-엔-3-이닐 및 펜트-4-엔-1-인일 그룹, 및 유사한 것을 포함한다.
용어 "알리사이클릴"은, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 지방족 환형 (지환족) 그룹 예컨대 사이클로알킬 또는 사이클로알케닐 또는 사이클로알키닐기를 커버하기 위해 본 명세서에서 사용된다. 용어 "알리사이클릴"은 탄소 원자의 하나 이상의 고리를 함유하는 모노라디칼을 지칭하고, 본 고리는 이들이 방향족이 아니라면 포화 (예를 들어, 사이클로헥실) 또는 불포화 (예를 들어, 사이클로헥세닐)될 수 있다. 더 구체적으로 알리사이클기는 3개 이상, 3 내지 24, 3 내지 12, 또는 6 내지 12, 고리 탄소 원자를 함유한다. 지환족 그룹은 단환형, 이환형, 또는 삼환형 고리계일 수 있고 본 고리는, 예를 들어, 단일 결합 또는 연결 기 예컨대 메틸렌 또는 다른 알킬렌기에 의해 융합 또는 연결될 수 있다. 지환족 그룹은 치환 (모노- 또는 폴리-) 또는 비치환될 수 있다. 일 구현예에서, 알리사이클릴기는 탄소 원자로 구성되고 선택적으로 1 또는 2 이중 결합을 함유하는 6 내지 12 원 고리계이다.
용어 "사이클로알킬"은 치환 (모노- 또는 폴리-) 또는 비치환될 수 있는 포화된 모노- 또는 다환형 알킬기를 지칭한다. 사이클로알킬기는 3 내지 24, 바람직하게는 3 내지 16, 더 바람직하게는 3 내지 14, 더욱 더 바람직하게는 3 내지 12, 더 더욱 더 바람직하게는 3, 4, 5 또는 6개의 탄소 원자를 갖는다. 사이클로알킬기는 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 결합된다, 사이클로알킬기는, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 메틸 사이클로헥실, 디메틸 사이클로헥실, 옥타하이드로인덴, 데카하이드로나프탈렌, 도데카하이드로페날렌 및 유사한 것을 포함한다.
용어 "사이클로알케닐"은 치환 (모노- 또는 폴리-) 또는 비치환될 수 있는 비-방향족 모노- 또는 다환형 알케닐기를 지칭한다. 사이클로알케닐기는 5 내지 24, 바람직하게는 5 내지 16, 더 바람직하게는 5 내지 14, 더욱 더 바람직하게는 5 내지 12, 더욱더 바람직하게는 5 또는 6개의 탄소 원자를 갖는다. 사이클로알케닐기는 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 결합된다. 바람직하게는 사이클로알케닐기는 1, 2 또는 3 이중 탄소-탄소 결합을 함유한다. 1 초과 이중 탄소-탄소 결합이 존재하는 경우, 이중 결합은 접합되거나 또는 접합되지 않을 수 있다. 사이클로알케닐기는, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 사이클로펜트-1-엔-1-일기 및 유사한 것을 포함한다.
용어 "사이클로알키닐"은 치환 (모노- 또는 폴리-) 또는 비치환될 수 있는 비-방향족 모노- 또는 다환형 알키닐기를 지칭한다. 사이클로알키닐기는 8 내지 24, 바람직하게는 8 내지 16, 더 바람직하게는 8 내지 14, 더욱 더 바람직하게는 8 내지 12, 더 더욱 더 바람직하게는 8 또는 9 탄소 원자를 가지고 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 결합된다. 바람직하게는 사이클로알키닐기는 접합되거나 또는 접합되지 않은, 1, 2 또는 3 삼중 탄소-탄소 결합을 함유한다. 사이클로알키닐기는, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 사이클로옥트-2-인-1-일기 및 유사한 것을 포함한다. 사이클로알키닐기는 또한 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 사이클로옥트-4-엔-2-이닐기 및 유사한 것을 포함하는, 하나 이상의 이중 탄소-탄소 결합을 함유할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "헤테로사이클릴" 또는 "복소환형"은 3 내지 10 구성원의 탄화수소 고리계를 지칭하고, 여기서 고리 또는 고리들 내 원자 중 하나 이상은 헤테로 원자 (즉 탄소 원자가 아님)이다. 따라서 "헤테로사이클릴" 또는 "복소환형"은 고리 원자가 탄소 및 하나 이상의 헤테로원자로 구성되는 환형 그룹을 지칭한다. 원자가를 만족하기 위해, 헤테로원자는 H 또는 치환체 그룹에 결합될 수 있다. 바람직하게는 고리 탄소 원자 중 1, 2 또는 3개는 헤테로원자이다. 각각의 헤테로원자는 O, N, S, P 및 B로 구성된 군, 또는 O, N, 및 S로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 헤테로사이클릴기는 치환 (모노- 또는 폴리-) 또는 비치환될 수 있다. 헤테로사이클릴기는 단환형, 이환형, 또는 삼환형 고리계일 수 있고, 본고리는, 예를 들어, 단일 결합 또는 연결기 예컨대 메틸렌 또는 다른 알킬렌기에 의해 융합 또는 연결될 수 있다. 헤테로사이클릴 라디칼에 존재하는 질소, 탄소 또는 황 원자는 선택적으로 산화될 수 있고 질소 원자는 선택적으로 사원화될 수 있다. 헤테로사이클릴 라디칼은 불포화되거나 또는 부분적으로 또는 완전히 포화될 수 있다. 헤테로사이클릴 라디칼은 지방족 또는 방향족일 수 있다. 일 구현예에서, 헤테로사이클릴은 지방족 (헤테로알리사이클릴로도 알려져 있음)이고 고리 또는 고리들의 원자가 탄소 원자 및 1 내지 4, 또는 1, 2 또는 3개 헤테로원자로 구성되는 3 내지 10 원 고리계이다. 일 구현예에서, 헤테로사이클릴기는 고리 또는 고리들의 원자가 탄소 원자 및 1 내지 4개 헤테로원자로 구성되고 고리계가 선택적으로 1 또는 2개 이중 결합을 함유하는 6 내지 10 원 고리계이다. 일 구현예에서, 헤테로사이클릴은 방향족 (헤테로아릴로도 알려져 있음)이고 고리 또는 고리들의 원자가 탄소 원자 및 1 내지 4, 또는 1, 2 또는 3개 헤테로원자로 구성되는 6 내지 10 원 고리계이다. 용어 헤테로사이클릴이 5 또는 6 구성원의 고리를 지칭하는 것이 가장 바람직하다. 포화된 헤테로알리사이클릴기의 예는 디옥산, 피페리딘, 피페라진, 파이롤리딘, 모폴린 및 티오모폴린이다. 방향족 헤테로사이클릴기의 예는 피리딘, 파이롤, 푸란, 티오펜, 벤조푸란, 이미다졸린, 퀴놀레인, 퀴놀린, 피리다진 및 나프티리딘이다.
용어 "아릴기"는 6 내지 30, 바람직하게는 6 내지 18, 더 바람직하게는 6 내지 10, 더 더욱 더 바람직하게는 6 또는 10 탄소 원자를 갖는 방향족 그룹을 지칭한다. 아릴기는 탄소-탄소 결합에 의해 연결되거나 또는 함께 융합될 수 있는, 1, 2, 3 또는 4개 방향족 고리를 포함할 수 있고, 예를 들어, 여기에 제한되지는 않지만, 그 중에서도 페닐, 나프틸, 디페닐, 인데닐, 펜안트릴 또는 트라닐을 포함한다. 아릴기는 치환 (모노- 또는 폴리-) 또는 비치환될 수 있다.
용어 "아르알킬기"는 7 내지 24개의 탄소 원자를 가지고, 예를 들어, 여기에 제한되지는 않지만, -(CH2)1-6-페닐, -(CH2)1-6-(1-나프틸), -(CH2)1-6-(2-나프틸), -(CH2)1-6-CH(페닐)2 및 유사한 것을 포함한, 방향족기에 의해 치환된 알킬기를 지칭한다.
용어 "헤테로아릴알킬"은 상기에서 정의된 바와 같은 헤테로아릴 (방향족 복소환형으로도 알려져 있음)기에 의해 치환된 알킬기를 지칭하며, 상기 알킬기는 1 내지 6개의 탄소 원자를 가지고, 헤테로아릴기는 2 내지 24개의 탄소 원자 및 1 내지 3 헤테로원자를 갖는다. 헤테로아릴알킬기는, 예를 들어, 여기에 제한되지 않지만 -(CH2)1-6-이미다졸릴, -(CH2)1-6-트리아졸릴, -(CH2)1-6-티에닐, -(CH2)1-6-퓨릴, -(CH2)1-6-피롤리디닐 및 유사한 것을 포함한다.
이 기술 분야에서 이해되는 바와 같이, 상기 언급된 기의 특정 치환도가 있을 수 있다. 특히, 이것이 명백하게 언급된 상기 확인된 임의의 그룹에 치환이 있을 수 있다. 상기에 언급된 치환된기 (라디칼)는 하나 이상의 치환체에 의해 이용가능한 하나 이상의 위치에서 치환된 그룹 (또는 라디칼)이다. 바람직하게는 치환은 1, 2 또는 3 위치, 더 바람직하게는 1 또는 2 위치, 더 더욱 더 바람직하게는 1 위치에 있다. 적합한 치환체는, 예를 들어, 여기에 제한되지 않지만: C1-C4 알킬; 하이드록실; C1-C4 알콕실; 아미노; 아미노-C1-C4알킬; C1-C4 카보닐옥실; C1-C4 옥시카보닐; 할로겐 예컨대 플루오라이드, 염소, 브롬 및 요오드; 시아노; 니트로; 아자이드; C1-C4 알킬설포닐; 티올; C1-C4 알킬티오; 아릴옥시 예컨대 페녹실; -NRb(C=NRb)NRbRc를 포함하고; 여기서 Rb 및 Rc는 H, C1-C4 알킬, C2-C4 알케닐, 알키닐, C3-C10 사이클로알킬, C6-C18 아릴, C7-C17 아르알킬, 3-10 구성원의 헤테로사이클릴 또는 아미노기의 보호 기에 의해 형성된 그룹으로부터 독립적으로 선택된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 포괄적이거나 또는 개방형이고 추가의 인용되지 않은 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않는, 용어 "포함하는"은 대안적인 구현예로, "~로 구성되는"이 명시되지 않은 임의의 요소 또는 단계를 배제하고, "~ 본질적으로 구성되는"이 고려 중인 조성물 또는 방법의 필수적이거나 기본적이고 신규한 특성에 물질적으로 영향을 주지 않는 추가의 인용되지 않은 요소 또는 단계의 봉입을 허용하는 어구 "~ 본질적으로 구성되는" 및 "~구성되는"을 포괄하는 것으로 의도된다.
본 발명의 화합물
제1 양태에서, 본 발명은 하기 식 (I)에 의해 제시된 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
R1-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-R2 (I),
식 중:
AA1은 Phe이고;
AA2는 Trp이고;
AA3은 Met, Leu 및 Ile으로 구성된 군으로부터 선택되고;
AA4는 Lys, Arg 및 Gln으로 구성된 군으로부터 선택되고;
AA5는 Arg이고;
AA6은 Lys이고;
AA7은 Arg, Lys 및 His으로 구성된 군으로부터 선택되고;
AA8은 Val, Ile, Leu 및 Met으로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고
AA9는 Pro이고;
W, X, Y 및 Z 각각은 독립적으로 아미노산이고;
m, n, p 및 q 각각은 독립적으로 0 또는 1이고;
m+n+p+q는 2 이하이고;
R1은 H, 폴리에틸렌 글리콜, 비-환형 지방족 그룹, 알리사이클릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴알킬, 아릴, 아르알킬 및 R5-CO-로부터 유래된 폴리머로 구성된 군으로부터 선택되고, 여기서 R5는 H, 비-환형 지방족 그룹, 알리사이클릴, 아릴, 아르알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로아릴알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
R2는 -NR3R4, -OR3, -SR3으로 구성된 군으로부터 선택되고, 여기서 R3 및 R4는 H, 폴리에틸렌 글리콜, 비-환형 지방족 그룹, 알리사이클릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴알킬, 아릴 및 아르알킬로부터 유래된 폴리머로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
R1 및 R2는 아미노산이 아님.
식 (I)의 화합물은 사슬로 연결된9, 10 또는 11개 아미노산을 포함하는 펩타이드이다. R1은 펩타이드의 아미노 말단 (N-말단)에 결합되고 R2는 펩타이드의 카복시-말단 (C-말단)에 결합된다.
R1은 H, 200 내지 35000 달톤 사이로 구성된 분자량 및 R5-CO-를 갖는 폴리에틸렌 글리콜로부터 유래된 폴리머로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, 여기서 R5는 C1-C24 알킬, C2-C24 알케닐, C2-C24 알키닐, C3-C24 사이클로알킬, C5-C24 사이클로알케닐, C8-C24 사이클로알키닐, C6-C30 아릴, C7-C24 아르알킬, 3-10 원 헤테로사이클릴 고리, 및 2 내지 24개의 탄소 원자와 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 헤테로아릴알킬로 구성된 군으로부터 선택되고, 여기서 알킬기는 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다.
R1은 H 및 R5-CO-로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, 여기서 R5는 C1-C18 알킬, C2-C24 알케닐, C3-C24 사이클로알킬로 구성된 군 또는 C1-C16 알킬, C2-C18 알케닐, C3-C7 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택된다. R5-CO-기는 알카노일기 예컨대 아세틸 (CH3-CO-, 본 명세서에서 "Ac-"로 약칭됨), 라우로일 (CH3-(CH2)10-CO-, 본 명세서에서 "Lau-"로 약칭됨), 미리스토일 (CH3-(CH2)12-CO-, 본 명세서에서 "Myr-"로 약칭됨) 및 팔미토일 (CH3-(CH2)14-CO-, 본 명세서에서 "Palm-"로 약칭됨)을 포함한다.
R1은 H 및 아세틸, tert-부타노일, 프레닐, 헥사노일, 2-메틸헥사노일, 사이클로헥산카복실, 옥타노일, 데카노일, 라우로일, 미리스토일, 팔미토일, 스테아로일, 올레오일 및 리놀레오일 로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
R1은 H 및 R5-CO-로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, 여기서 R5는 C1-C16 알킬 또는 C2-C18 알케닐로 구성된 군으로부터 선택된다.
R1은 H, 아세틸, 라우로일, 미리스토일 또는 팔미토일로 구성된 군 또는 H, 아세틸 및 팔미토일로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
R2는 -NR3R4, -OR3 및 -SR3으로 구성된 군, 또는 -NR3R4 및 -OR3으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, 여기서 R3 및 R4는 H, 폴리에틸렌 글리콜, C1-C24 알킬, C2-C24 알케닐, C2-C24 알키닐, C3-C24 사이클로알킬, C5-C24 사이클로알케닐, C8-C24 사이클로알키닐, C6-C30 아릴, C7-C24 아르알킬, 3-10 원 헤테로사이클릴 고리, 및 2 내지 24개의 탄소 원자와 1 내지 3개 헤테로원자를 함유하는 헤테로아릴알킬로부터 유래된 폴리머에 의해 형성된 그룹으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 알킬기는 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다. 선택적으로, R3 및 R4는 질소 원자와 함께 고리를 형성하는, 포화 또는 불포화된 탄소-탄소 결합에 의해 연결될 수 있다.
R2는 -NR3R4, -OR3 및 -SR3일 수 있고, 여기서 R3 및 R4는 H, 200 내지 35000 달톤으로 구성된 분자량을 갖는 폴리에틸렌 글리콜, 메틸, 에틸, 헥실, 도데실 및 헥사데실로부터 유래된 폴리머로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다. R3 및 R4는 H 및 C1-C16 알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 일 구현예에서 R2는 -NR3R4 또는 -OR3이고 여기서 R3은 H이고 R4는 H 및, 메틸, 에틸, 헥실, 도데실 및 헥사데실을 포함한 C1-C16 알킬에 의해 형성된 그룹으로부터 선택된다. 예를 들어, R2는 -OH 또는 -NHR4일 수 있고, 여기서 R4는 H이거나 또는 C1-C16 알킬, 예컨대 C6 알킬 (-C6H13) 또는 C16 알킬 (-C16H33)이다.
R2는 -NR3R4 및 -OR3으로부터 선택될 수 있고 여기서 R3 및 R4는 H 및 C1-C16 알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일 구현예에서, R2는 -OH, -NH2 및 -NHR4로 구성된 군으로부터 선택되고 여기서 R4는 C1-C16 알킬이다. R2는 -NR3R4일 수 있고 여기서 R3 및 R4 각각은 H 및 C1-C16 알킬로부터 독립적으로 선택된다. R4는 C6 알킬, 즉 -C6H13, 또는 C16 알킬, 즉 -C16H33일 수 있다. R4는 C1-6 알킬일 수 있다.
R1은 H 및 R5-CO-로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, 여기서 R5는 C1-C18 알킬, C2-C24 알케닐, C3-C24 사이클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되고; R2는 -NR3R4 또는 -OR3일 수 있고 여기서 R3 및 R4는 H 및 C1-C16 알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일 구현예에서, R3은 H이고 R4는 H 및 C1-C16 알킬에 의해 형성된 군으로부터 선택된다; 예를 들어, R2는 -OH, -NH2 및 -NHR4로 구성된 군으로부터 선택되고 여기서 R4는 C1-C16 알킬이다. R4는 C6 알킬, 즉 -C6H13, 또는 C16 알킬, 즉 -C16H33일 수 있다. R4는 C1-6 알킬일 수 있다.
R1은 H 및 아세틸, tert-부타노일, 프레닐, 헥사노일, 2-메틸헥사노일, 사이클로헥산카복실, 옥타노일, 데카노일, 라우로일, 미리스토일, 팔미토일, 스테아로일, 올레오일 및 리놀레오일로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고; 그리고 R2는 -NR3R4 또는 -OR3일 수 있고 여기서 R3 및 R4는 H 및 C1-C16 알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일 구현예에서, R3은 H이고 R4는 H 및 C1-C16 알킬에 의해 형성된 군으로부터 선택된다; 예를 들어, R2는 -OH, -NH2 및 -NHR4로 구성된 군으로부터 선택되고 여기서 R4는 C1-C16 알킬이다. R4는 C6 알킬, 즉 -C6H13, 또는 C16 알킬, 즉 -C16H33일 수 있다. R4는 C1-6 알킬일 수 있다.
R1은 H 및 R5-CO-로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, 여기서 R5는 C1-C16 알킬 또는 C2-C18 알케닐로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고 R2는 -NR3R4 또는 -OR3 일 수 있고 여기서 R3 및 R4는 H 및 C1-C16 알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일 구현예에서 R3은 H이고 R4는 H 및 C1-C16 알킬에 의해 형성된 군으로부터 선택된다; 예를 들어, R2는 -OH, -NH2 및 -NHR4로 구성된 군으로부터 선택되고 여기서 R4는 C1-C16 알킬이다. R4는 C6 알킬, 즉 -C6H13, 또는 C16 알킬, 즉 -C16H33일 수 있다. R4는 C1-6 알킬일 수 있다.
R1은 H, 아세틸, 라우로일, 미리스토일 또는 팔미토일로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고; 그리고 R2는 -NR3R4 또는 -OR3일 수 있고 여기서 R3 및 R4는 H 및 C1-C16 알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일 구현예에서 R3은 H이고 R4는 H 및 C1-C16 알킬에 의해 형성된 군으로부터 선택된다; 예를 들어, R2는 -OH, -NH2 및 -NHR4로 구성된 군으로부터 선택되고 여기서 R4는 C1-C16 알킬이다. R4는 C6 알킬, 즉 -C6H13, 또는 C16 알킬, 즉 -C16H33일 수 있다. R4는 C1-6 알킬일 수 있다.
R1은 H, 아세틸, 또는 팔미토일로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고; 그리고 R2는 -NR3R4 또는 -OR3일 수 있고 여기서 R3 및 R4는 H 및 C1-C16 알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일 구현예에서 R3은 H이고 R4는 H 및 C1-C16 알킬에 의해 형성된 군으로부터 선택된다; 예를 들어, R2는 -OH, -NH2 및 -NHR4로 구성된 군으로부터 선택되고 여기서 R4는 C1-C16 알킬이다. R4는 C6 알킬, 즉 -C6H13, 또는 C16 알킬, 즉 -C16H33일 수 있다. R4는 C1-6 알킬일 수 있다.
폴리에틸렌 글리콜로부터 유래된 폴리머의 가장 바람직한 구조는 하기이다: 그룹 (-CH2-CH2-O)r-H로 여기서 r은 4 내지 795 사이에 포함된 수임 및 그룹
Figure pct00002
여기서 s는 1 내지 125 사이에 포함된 수임.
본 발명은 식 (I)의 화합물을 제공하고, 여기서 적어도 하나의 R1은 H가 아니고; 그리고 R2는 OH가 아니다. 환언하면, 본 발명은 식 (I)의 화합물을 제공하고, 여기서 R1은 H가 아니고 및/또는 R2는 OH가 아니다.
본 발명은 식 (I)의 화합물을 제공하고 여기서 AA3는 Met이다. AA4는 Lys, Arg 및 Gln으로 구성된 군 또는 Lys 및 Arg로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, AA4는 Lys일 수 있거나 또는 AA4는 Arg일 수 있다. 일 구현예에서, AA3는 Met이고; AA4는 Lys, Arg 및 Gln으로 구성된 군으로부터 선택되고; AA7은 Lys 및 Arg으로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고 AA8은 Val, Ile 및 Leu으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, AA3는 Met이고; AA4는 Lys 및 Arg으로 구성된 군으로부터 선택되고; AA7은 Lys 및 Arg으로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고 AA8은 Val, Ile 및 Leu으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, AA3는 Met이고; AA4는 Lys이고; AA7은 Lys 및 Arg으로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고 AA8은 Val, Ile 및 Leu으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, AA3는 Met이고; AA4는 Arg이고; AA7은 Lys 및 Arg으로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고 AA8은 Val, Ile 및 Leu으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, AA3는 Met이고; AA4는 Arg이고; AA7은 Arg이고; 그리고 AA8은 Val 및 Ile으로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명은 식 (I)의 화합물을 제공하고 여기서 AA3은 Leu이다. AA4는 Lys, Arg 및 Gln으로 구성된 군, 또는 Lys 및 Arg로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, AA4는 Lys일 수 있거나 또는 AA4는 Arg일 수 있다. 일 구현예에서, AA3 은 Leu이고; AA4는 Lys 및 Arg로 구성된 군으로부터 선택되고; AA7은 Lys 및 Arg로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고 AA8은 Val 및 Ile으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, AA3 은 Leu이고; AA4는 Lys이고; AA7은 Lys 및 Arg로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고 AA8은 Val 및 Ile으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, AA3 은 Leu이고; AA4는 Arg이고; AA7은 Lys 및 Arg로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고 AA8은 Val 및 Ile으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, AA3 은 Leu이고; AA4는 Arg이고; AA7은 Lys이고; 그리고 AA8은 Ile이다.
본 발명은 식 (I)의 화합물을 제공하고, 여기서 AA3는 Ile이다. AA4는 Lys, Arg 및 Gln으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고 또는 AA4는 Gln일 수 있다. 일 구현예에서, AA3는 Ile이고; AA4는 Gln이고; AA7는 His이고; 그리고 AA8는 Met이다.
본 발명은 식 (I)의 화합물을 제공하고 , 여기서 R1은 H이고, R2는 OH이고, 그리고 m, n, p 및 q 각각은 0이고, 즉, 본 발명은 식: H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-OH (또한 AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9로 표기됨)을 갖는 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 제공하고, 식 중: AA1은Phe이고; AA2은Trp이고; AA3은 Met, Leu 및 Ile으로 구성된 군으로부터 선택되고; AA4은 Lys, Arg 및 Gln으로 구성된 군으로부터 선택되고; AA5은 Arg이고; AA6은 Lys이고; AA7은 Arg, Lys 및 His으로 구성된 군으로부터 선택되고; AA8은 Val, Ile, Leu 및 Met으로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고 AA9은 Pro [서열번호 1]이다. 상기에 고려된 바와 같은 AA3, AA4, AA7 및 AA8에서의 변동이 또한 이 구현예에 적용된다.
본 발명의 화합물은 각각의 아미노산 서열의 서열 식별자가 상세하게 된 표 2에 열거된 화합물로부터 선택된 하나 이상의 화합물, 이의 입체이성질체, 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
Figure pct00003
특히, 본 발명의 화합물은 각각의 아미노산 서열의 서열 식별자가 상세하게 된 표 3에 열거된 화합물로부터 선택된 하나 이상의 화합물, 이의 입체이성질체, 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
Figure pct00004
식 (I)에 따른 각각의 서열인 표 2 및 3의 아미노산 서열에서, R1 및 R2는 각각 H 및 OH이다. 본 발명의 화합물은 식 (I)에 대해 본 명세서에서 정의된 바와 같이 각각 다른 R1 및 R2 기에 의해 변형된 이의 N- 및 C- 말단을 갖는 표 2 및 3의 각각의 서열을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 C-말단 아미노산 잔기가, R1이 H가 아닌, 선택적으로 식 (I)에 대해 상기에서 정의된 바와 같이 R1로 종료된(변형된) 표 2 및 3의 각각의 서열을 포함한다. 또한, 본 발명의 화합물은 N-말단 아미노산 잔기가, R2가 OH가 아닌, 선택적으로 식 (I)에 대해 상기에서 정의된 바와 같이 R2로 종료된(변형된) 표 2 및 3의 각각의 서열을 포함한다.
따라서 본 발명은 식 (I)에 따른 화합물을 제공하고, 여기서 상기 화합물은 서열번호 1 내지 9로부터 선택된 아미노산 서열, 및 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염이고, 식 중, 선택적으로, 상기 서열은 R1이 H가 아닌 R1에 의해 변형된 이의 N-말단 및/또는 R2가 OH가 아닌 R2에 의해 변형된 이의 C-말단을 갖는다. 아미노산 서열은 서열번호 2, 서열번호 6 또는 서열번호 8일 수 있다. 아미노산 서열 서열번호 2일 수 있다.
본 발명의 화합물은 입체이성질체 또는 입체이성질체들의 혼합물; 예를 들어, 배치형태 L-, D-를 가질 수 있거나, 또는 서로 독립적으로 라세미일 수 있는 것들을 포함하는 아미노산으로 존재할 수 있다. 따라서, 비대칭 탄소의 수 및 이성질체 또는 이성질체 혼합물이 존재하는지 여부에 따라 이성질체 혼합물뿐만 아니라 라세미 혼합물 또는 부분입체이성질체 혼합물, 또는 순수한 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 얻는 것이 가능하다. 본 발명의 화합물의 바람직한 구조는 순수한 이성질체, 즉, 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체이다.
예를 들어, 식 (I)에서의 아미노산 중 하나가 Met인 것이 언급되는 경우, 이것은 L-Met, D-Met 또는 양자의 혼합물, 라세미 또는 비-라세미로부터 선택된다는 것이 이해되어야 한다. 본 문서에 기재된 제조 절차는 우형 배치형태를 갖는 아미노산을 선택함에 의해 본 발명의 화합물의 각각의 입체이성질체를 수득하는 것이 당해 기술의 숙련가에게 가능하다. 식 (I)에서의 아미노산은 L-아미노산일 수 있고, 즉 임의의 W, X, Y 및 Z가 존재하는 경우, 각각의 아미노산 AA1 내지 AA9 및 W, X, Y 및 Z은 L-아미노산이다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "아미노산"은 유전자 암호에 의해 인코딩된 아미노산뿐만 아니라, 이들이 천연이든 아니든, 비-인코딩된 아미노산을 포함한다. 비-인코딩된 아미노산의 예는, 제한 없이, 그 중에서도, 시트룰린, 오르니틴, 사르코신, 데스모신, 노르발린, 4-아미노부티르산, 2-아미노부티르산, 2-아미노이소부티르산, 6-아미노헥사노 산, 1-나프틸알라닌, 2-나프틸알라닌, 2-아미노벤조산, 4-아미노벤조산, 4-클로로페닐알라닌, 2,3-디아미노프로피온산, 2,4-디아미노부티르산, 사이클로세린, 카르니틴, 시스틴, 페니실아민, 파이로글루탐산, 티에닐알라닌, 하이드록시프롤린, 알로-이소류신, 알로-트레오닌, 이소니페코트산, 이소세린, 페닐글리신, 스타틴, β-알라닌, 노르류신, N-메틸 아미노산, α-아미노산 및 β-아미노산뿐만 아니라 이의 유도체이다. 비-천연 아미노산의 목록은 논문 "Unusual amino acids in peptide synthesis" by D.C. Roberts and F. Vellaccio, in The Peptides, Vol. 5 (1983), Chapter VI, Gross E. and Meienhofer J., Eds., Academic Press, New York, USA 또는 이 기술분야에서 특화된 회사의 상업적 카탈로그에서 찾아볼 수 있다.
본 발명의 맥락에서, W, X, Y 및/또는 Z 중 적어도 하나가 존재하는 경우, 즉 n, m, p 또는 q 중 적어도 하나가 0이 아닌 경우, W, X, Y 및/또는 Z의 특성은 본 발명의 화합물의 활성을 숨기지 않고, 대신에, 효과에 기여하거나 하지 않는다는 것이 이해된다. 일 구현예에서, W, X, Y 및 Z 각각은 Ala, Val, Ile 및 Gly로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다.
본 발명의 일 구현예에서 각각의 m, n, p 및 q는 0이고, 즉 식 (I)의 화합물은 사슬로 연결된 9개 아미노산을 포함하는 펩타이드이다. 일 구현예에서 m, n, p 및 q의 합은 1이고, 즉, 즉 식 (I)의 화합물은 사슬로 연결된 10개 아미노산을 포함하는 펩타이드이다. 일 구현예에서 m, n, p 및 q의 합은 2이고, 즉, 식 (I)의 화합물은 사슬로 연결된 11개 아미노산을 포함하는 펩타이드이다.
본 발명의 화합물은 표 4에 열거된 화합물의 군으로부터 선택된 하나 이상의 화합물, 이의 입체이성질체, 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
Figure pct00005
본 발명은 식 (I)에 따른 화합물을 제공하고, 여기서 상기 화합물은 표 4에 열거된 것들로부터 선택된 화합물이고, 특히, PEP-1, PEP-12 및 PEP-14로부터 선택될 수 있다.
본 발명에 의해 제공된 화합물의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염은 또한 본 발명의 분야 내에서 발견되어 진다. 용어 "화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염"은 동물, 예를 들어, 포유동물, 그리고 더 구체적으로 인간에서 이의 사용에 대해 인식된 염을 의미하고, 염기 부가 염을 형성하기 위해 사용된 염을 포함하고, 이들은 무기, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 망간, 구리, 아연 또는 알루미늄, 또는 이들은, 그 중에서도 유기, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 에틸아민, 디에틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 아르기닌, 라이신, 히스티딘 또는 피페라진 그 중에서도, 또는 산 부가 염, 이들은, 그 중에서도 유기, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 아세테이트, 시트레이트, 락테이트, 말로네이트, 말레에이트, 타르트레이트, 푸마레이트, 벤조에이트, 아스파르테이트, 글루타메이트, 석시네이트, 올레에이트, 트리플루오로아세테이트, 옥살레이트, 파모에이트 또는 글루코네이트, 또는 그 중에서도 무기, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 클로라이드, 설페이트, 보레이트 또는 카보네이트이다. 염의 특성은, 이것이 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능하다면 중요하지 않다. 본 발명의 화합물의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염은 선행기술 [Berge S.M. et al., "Pharmaceutical Salts", (1977), J. Pharm. Sci., 66, 1-19]에서 잘 알려진 종래의 방법에 의해 수득될 수 있다.
본 발명의 화합물이 제조 절차
본 발명의 화합물, 이의 입체이성질체, 이들의 혼합물 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 합성은 선행기술 [Stewart J.M. and Young J.D., "Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd edition", (1984), Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois; Bodanzsky M. and Bodanzsky A., "The practice of Peptide Synthesis", (1994), Springer Verlag, Berlin; Lloyd-Williams P. et al., "Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins", (1997), CRC, Boca Raton, FL, USA], synthesis in solution, enzymatic synthesis [Kullmann W. "Proteases as catalysts for enzymic syntheses of opioid peptides", (1980), J.Biol.Chem., 255(17), 8234-8238]에서 알려진 종래의 방법, 예컨대 고상 펩타이드 합성 방법 또는 이들의 임의의 조합에 따라 수행될 수 있다. 화합물은 합성, 예를 들어 고상 펩타이드 합성에 의해 합성될 수 있다. 화합물은 또한 원하는 서열을 생산할 목적으로 유전공학에 의해, 또는 원하는 서열을 함유하는 유리 펩타이드 단편을 초래하는 동물 또는 식물 기원, 예를 들어 미생물 또는 조류, 바람직하게는 식물로 단백질의 제어된 가수분해에 의해 변형되거나 또는 비변형된 세균 균주의 발효에 의해 수득될 수 있다.
예를 들어, 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및 이들의 혼합물을 획득하는 방법은 하기 단계를 포함한다:
- N-말단 유리이고 그리고 보호되거나 또는 고형 지지체에 결합된 C-말단을 갖는 아미노산과, N-말단 보호되고 C-말단 유리를 갖는 아미노산의 커플링;
- N-말단의 보호 기의 제거;
- 원하는 펩타이드 서열이 수득될 때까지 N-말단의 보호 기의 서열 커플링 및 제거의 반복;
- C-말단의 보호 기의 제거 또는 고형 지지체의 절단.
바람직하게는, C-말단은 고형 지지체에 결합되고 본 공정은 고상에서 수행되고, 따라서, N-말단 유리이고 그리고 중합체 지지체에 결합된 C-말단을 갖는 아미노산과, N-말단 보호되고 C-말단 유리를 갖는 아미노산의 커플링; N-말단의 보호 기의 제거; 원하는 길이의 화합물을 수득하기 위해 필요한 시간만큼 이 순서의 반복, 마지막으로 이어서 최초 중합체 지지체로부터 합성된 화합물의 절단을 포함한다.
아미노산의 측쇄의 작용기는 합성 전반에 걸쳐 일시적 또는 영구적 보호 기로 편리하게 보호되어 유지되고, 중합체 지지체로부터 펩타이드의 절단의 과정과 동시에 또는 직교적으로 비보호될 수 있다.
대안적으로, 고상 합성은 펩타이드를 중합체 지지체 또는 중합체 지지체에 이전에 결합된 펩타이드 또는 아미노산과 커플링하는 수렴 전략을 사용하여 수행될 수 있다. 수렴 합성 전략은 당해 분야의 숙련가에게 널리 알려져 있고 Lloyd-Williams P. et al., "Convergent Solid-Phase Peptide Synthesis", (1993), Tetrahedron, 49(48), 11065-11133에 기재되어 있다.
본 공정은 선행기술에 공지된 표준 절차 및 조건을 사용하여, 무차별적인 순서로 N-말단 및 C-말단의 탈보호의 추가 단계 및/또는 펩타이드를 중합체 지지체로부터 절단하는 단계를 포함할 수 있고, 그 후 이들 단부의 작용기는 변형될 수 있다. N-말단 및 C-말단의 선택적인 변형은 중합체 지지체에 고정된 식 (I)의 펩타이드로 또는 펩타이드가 중합체 지지체로부터 분리된 후에 수행될 수 있다.
선택적으로, R1은 적합한 염기 및 용매의 존재 하에서 친핵성 치환 반응을 통해 R1-X 화합물과 본 발명의 화합물의 N-말단의 반응에 의해 도입될 수 있고, 여기서 N-C 결합 형성에 관여하지 않는 작용기를 갖는 단편은 일시적 또는 영구적 보호 기로 적합하게 보호된다. R1은 상기에 정의된 바와 같고 X는 이탈기, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 그 중에서도 토실기, 메실기 및 할로겐기이다.
선택적으로 및/또는 추가로, R2 라디칼은 식 (I)의 펩타이드에 상응하는 상보성 단편과, R2는 적절한 용매 및 염기 예컨대 N,N-디이소프로필에틸아민 (DIEA) 또는 트리메틸아민, 또는 첨가제 예컨대 1-하이드록시벤조트리아졸 (HOBt) 또는 1-하이드록시아자벤조트리아졸 (HOAt), 및 탈수제 예컨대 그 중에서도 카보디이미드, 우로늄 염, 포스포늄 염 또는 아미디늄 염의 존재에서 -OH인, 화합물 HR2의 반응에 의하거나 또는, 예를 들어, 티오닐 클로라이드와 아실 할라이드의 사전 형성에 의해 도입될 수 있고, 그리고 그것에 의해 식 (I)의 본 발명에 따른 펩타이드를 수득하고, 여기서 N-C 결합 형성에 관여하지 않는 작용기를 갖는 단편은 일시적 또는 영구적 보호 기로 적합하게 보호된다. 대안적으로 다른 R2 라디칼이 중합체 담체로부터 펩타이드 절단에 대해 동시 편입에 의해 도입될 수 있다. R2는 -OR3, -NR3R4 또는 -SR3이고 여기서 R3 및 R4는 상기에 정의된 바와 같다.
당해 분야의 숙련가는 C-말단 및 N-말단의 탈보호/절단 단계 및 이의 후속적인 유도체화는 선행기술에서 알려진 공정에 따라 상이한 정도로 수행될 수 있다는 것을 쉽게 이해할 것이다.
용어 "보호 기"는 유기 작용기를 차단하고 제어된 조건에서 제거될 수 있는 기에 관한 것이다. 보호기, 이들의 상대적인 반응성 및 이들이 불활성으로 유지되는 조건은 당해 기술의 숙련가에게 공지되어 있다.
아미노기에 대한 대표적인 보호 기의 예는, 그 중에서도, 아미드, 예컨대 아미드 아세테이트, 아미드 벤조에이트, 아미드 피발레이트; 카바메이트 예컨대 벤질옥시카보닐 (Cbz 또는 Z), 2-클로로벤질 (CIZ), 파라-니트로벤질옥시카보닐 (pNZ), tert-부틸옥시카보닐 (Boc), 2,2,2-트리클로로에틸옥시카보닐 (Troc), 2-(트리메틸실릴)에틸옥시카보닐 (Teoc), 9-플루오레닐메틸옥시카보닐 (Fmoc) 또는 알릴옥시카보닐 (Alloc), 트리틸 (Trt), 메톡시트리틸 (Mtt), 2,4-디니트로페닐 (Dnp), N-[1-(4,4-디메틸-2,6-디옥소사이클로헥스-1-일리덴)에틸 (Dde), 1-(4,4-디메틸-2,6-디옥소-사이클로헥실리덴)-3-메틸부틸 (ivDde), 1-(1-아다만틸)-1-메틸에톡시카보닐 (Adpoc)이고, 바람직하게는 Boc 또는 Fmoc이다.
카복실기에 대한 대표적인 보호 기의 예는, 그 중에서도, 에스테르, 예컨대 tert-부틸 에스테르 (tBu), 알릴 에스테르 (All), 트리페닐메틸 에스테르 (Trt tester), 사이클로헥실 에스테르 (cHx), 벤질 에스테르 (Bzl), 오르토-니트로벤질 에스테르, 파라-니트로벤질 에스테르, 파라-메톡시벤질 에스테르, 트리메틸실릴에틸 에스테르, 2-페닐이소프로필 에스테르, 플루오레닐메틸 에스테르 (Fm), 4-(N-[1-(4,4-디메틸-2,6-디옥소사이클로헥실리덴)-3-메틸부틸]아미노) 벤질 에스테르 (Dmab)이고; 본 발명의 바람직한 보호 기는 All, tBu, cHex, Bzl 및 Trt 에스테르이다.
3작용성 아미노산의 측쇄는 N-말단 및 C-말단의 보호 기에 직교하여 일시적 또는 영구적 보호 기로 합성 과정 동안 보호될 수 있다.
이들 및 다른 보호 기의 예, 이의 도입 및 제거는 문헌 [Atherton B. and Sheppard R.C., "Solid Phase Peptide Synthesis: A practical approach", (1989), IRL Oxford University Press]에서 찾아볼 수 있다. 용어 "보호 기"는 또한 고상 합성에서 사용된 중합체 지지체를 포함한다.
합성이 전적으로 또는 부분적으로 고상에서 일어나는 경우, 본 발명의 공정에서 사용된 가능한 고형 지지체는 폴리스티렌 지지체, 폴리스티렌에 그라프팅된 폴리에틸렌 글리콜 및 유사한 것들, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, p-메틸벤즈하이드릴아민 수지 (MBHA) [Matsueda G.R. et al., "A p-methylbenzhydrylamine resin for improved solid-phase synthesis of peptide amides", (1981), Peptides, 2, 45-50], 2-클로로트리틸 수지 [ Barlos K. et al., "Darstellung geschutzter Peptid - Fragmente unter Einsatz substituierter Triphenylmethyl-Harze", (1989), Tetrahedron Lett ., 30, 3943-3946; Barlos K. et al., " Veresterung von partiell geschutzten Peptid - Fragmenten mit Harzen . Einsatz von 2- Chlorotritylchlorid zur Synthese von Leu1 - Gastrin I", (1989), Tetrahedron Lett ., 30, 3947-3951], TentaGel® 수지 (Rapp Polymere GmbH), ChemMatrix® 수지 (Matrix Innovation, Inc) 및 유사한 것들로, 불안정한 링커를 포함하거나 포함하지 않을 수 있는 것, 예컨대 5-(4-아미노메틸-3,5-디메톡시페녹시) 발레르산 (PAL) [Albericio F. et al., "Preparation and application of the 5-(4-(9-fluorenylmethyloxycarbonyl) aminomethyl-3,5-dimethoxy-phenoxy)valeric acid (PAL) handle for the solid-페이스 synthesis of C-terminal peptide amides under mild conditions", (1990), J. Org. Chem., 55, 3730-3743], 2-[4-아미노메틸-(2,4-디메톡시페닐)] 페녹시아세트산 (AM) [Rink H., "Solid-phase synthesis of protected peptide fragments using a trialkoxy-diphenyl-methylester resin" , (1987), Tetrahedron Lett., 28, 3787-3790], [Wang S.S., "p-Alkoxybenzyl Alcohol Resin and p-Alkoxybenzyloxycarbonylhydrazide Resin for Solid Phase Synthesis of Protected Peptide Fragments", (1973), J.Am.Chem.Soc., 95, 1328-1333] 및 유사한 것들을 포함하며, 이것은 중합체 지지체로부터 화합물의 동시 탈보호 및 절단이 가능하다.
적용
본 발명은 식 (I)의 화합물이 피부의 일주기 리듬을 조절하는데 효과적이고, 이 능력은 피부의 미용적 특성을 개선시키는데 이용될 수 있다는 발견에 부분적으로 기초한다. 특히, 본 발명은: 피부에서 JARID1A 단백질의 발현; 피부에서 CRY2, PER2 및/또는 PER3 시계 유전자의 발현; 피부에 존재하는 세라미드의 양; 및/또는 피부 세포막 안으로 편입된 DHA의 양에서 변동이 그 자체로 명백한 피부의 일주기 리듬에 관한 것이다. 일주기 리듬과 연관된 피부의 미용적 특성은 장벽 기능 및 피부 수화를 포함한다. 본 발명의 화합물은 JARID1A 단백질의 발현에서의 증가; CRY2, PER2 및/또는 PER3 시계 유전자의 발현에서의 증가; 세라미드의 양에서의 증가; 및/또는 피부 세포막 안으로 편입된 도코사헥사엔산 (DHA)의 양에서의 증가를 야기함에 의해 피부의 일주기 리듬을 조절하는 것으로 여겨진다. 따라서 본 발명의 화합물은: 피부에서 JARID1A 단백질의 발현이 매일 최대치보다 낮고; 피부에서 CRY2, PER2 및/또는 PER3 시계 유전자의 발현이 매일 최대치보다 낮고; 피부에 존재하는 세라미드의 양; 및/또는 피부 세포막 안으로 편입된 DHA의 양이 매일 최대치보다 낮은 일주기 리듬에서의 한 시점에서 피부를 치료하는데 유용하다. 피부에서 JARID1A 단백질의 발현은 각질형성세포에서의 JARID1A 단백질의 발현에 의해 제시될 수 있다. 피부에서 CRY2, PER2 및/또는 PER3 시계 유전자의 발현은 표피 각질형성세포에서의 CRY2, PER2 및/또는 PER3 시계 유전자의 발현에 의해 제시될 수 있다. 피부 세포막 안으로 편입된 DHA의 양 피부에서의 PC-DHA/PC의 비에 의해 제시될 수 있다.
피부에서 JARID1A 단백질의 발현, 피부에서 CRY2, PER2 및 PER3 시계 유전자의 발현, 피부에서 세라미드의 양 및 피부 세포막 안으로 편입된 DHA의 양은 예를 들어 "늦은 아침" 피부에서보다 이른 아침 피부에서 낮다. 이른 아침 피부는 이른 아침, 즉 정상적으로 깨어나는 시간, 예를 들어, 5.00 내지 8.00 am, 예를 들어, 7.30 am에서의 피부이다. 늦은 아침은 11.00 am 내지 정오 사이, 예를 들어 11.30 am이다. 따라서, 본 발명의 화합물은 "이른 아침" 피부의 치료 및/또는 관리에 유용하다. 따라서 일 양태에서 본 발명이 피부의 일주기 리듬을 진행시키는데 효과적인 경우 화합물 및 본 발명은 피부의 일주기 리듬을 조절하거나 진행시키기 위한 본 발명의 화합물의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 또한 예를 들어 시차증 또는 교대 작업으로 인해 피부의 일주일 리듬이 변경된 대상체에서의 피부의 치료에 유용하다. 피부는 피부에서 JARID1A 단백질의 매일이 최대치보다 낮고; 피부에서 CRY2, PER2 및/또는 PER3 시계 유전자의 발현이 매일 최대치보다 낮고; 피부에 존재하는 세라미드의 양; 및/또는 피부 세포막 안으로 편입된 DHA의 양이 매일 최대치보다 낮도록 이의 일주기 리듬이 변경되었을 수 있다. 본 발명의 화합물은 나이든 대상체에서 PER2 및 PER3 시계 유전자의 발현의 수준을 증가시키는데 특히 효과적인 것으로 밝혀졌다. 따라서 본 발명의 화합물은 26 세 이상인 대상체, 예를 들어 30 세 이상, 40 세 이상인 대상체의 피부 치료에 특히 유용하다. 상기 대상체는 50 세 이상, 또는 60 세 이상일 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물은 피부 세포의 에너지 대사 (에너지 생산)를 증가시키는데 효과적인 것으로 밝혀졌고, 따라서 피부에 에너지를 공급하고, 예를 들어 피부 피로의 증상을 완화 및/또는 예방하는 용도를 발견한다. 또한, 본 발명의 화합물은 피부 항노화 제제로 효과적인 것으로 밝혀졌다. 따라서 본 발명의 화합물은, 예를 들어, 피부의 일주기 리듬을 진전시킬 수 있고 따라서 이른 아침에 피부에 활력 효과 및 노화 방지 효과를 갖는 조합으로 매일의 피부 특성을 피부에 제공할 수 있다. 매일의 피부 특성은 1일 동안 피부와 연관된 특성이고 이들은 피부 장벽 기능, 피부 수화, 피부 미세순환 및/또는 피부 톤과 같은 특성을 포함하고, 이것들은 1일 중에 늦은, 예를 들어, 늦은 아침의 피부와 연관된다.
따라서 본 발명의 화합물은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 보호 및/또는 치료 및/또는 관리에 특히 유용하다. 특히, 보호, 치료 및/또는 관리는 피부의 보호, 치료 및/또는 관리이다. 본 발명의 맥락에서, 피부는 얼굴 피부 (눈 주위 피부를 포함함), 두피, 목선, 목, 데콜테지, 팔, 손, 다리, 발, 허벅지, 히프, 엉덩이, 위, 몸통 및 생식기 부위를 포함하는 전신의 피부를 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 치료 및/또는 관리를 위한, 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다.
본 용도는 화장품, 즉 비-치료제일 수 있다. 본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위한, 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염, 또는 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염을 포함하는 화장품 조성물의 용도를 제공한다.
본 발명은 피부의 장벽 기능을 유지 및/또는 개선하기 위한, 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 피부의 피부 장벽 기능은 또한 본 명세서에서 일명 피부의 물리적 장벽, 피부의 투과도 장벽 또는 단순히 피부 장벽이다. 이 장벽은 표피에서의 각질층 및 융합막에 의해 제공된다. 손상된 장벽 기능은 고유 또는 내부 일주기 조절제, 예를 들어 수면 박탈, 물리적 스트레스 또는 연령으로 인한 것일 수 있다. 손상된 장벽 기능은 예를 들어 피부로부터 물 및 전해질의 손실을 초래할 수 있다. 본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염을 제공하고, 여기서 상기 치료 및/또는 관리는 피부의 장벽 기능의 유지 또는 개선이다.
본 발명은 피부 수화를 유지 및/또는 개선하기 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 피부의 피부 수화는 매일 시간-의존적 패턴을 나타내며, 피부 수화 수준은 하루가 진행됨에 따라 이른 아침 낮은 수준에서 개선되고, 즉 증가한다. 피부 수화는 또한 본 명세서에서 피부 수화 수준 또는 피부 보습으로 지칭된다. 따라서, 본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염의 용도를 제공하고, 여기서 상기 피부의 치료 및/또는 관리는 피부 수화의 유지 및/또는 개선이다.
본 발명은 피부 미세순환 및/또는 피부 톤을 유지 및/또는 개선하기 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 피부 미세순환은 또한 본 명세서에서 일명 피부 혈류이고, 피부의 모세관 및 세동맥과 같은 피부의 작은 혈관에서의 혈류이다. 피부 미세순환은 매일 시간에 의존하는 패턴을 나타내며, 피부 미세순환의 수준은 하루가 진행됨에 따라 이른 아침 낮은 수준에서 개선되고, 즉 증가한다. 피부 톤은 피부 미세순환과 밀접한 관련이 있어, 개선된 피부 톤은 증가된 피부 미세순환과 연관된다. 따라서 본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염의 용도를 제공하고, 여기서 상기 피부의 치료 및/또는 관리는 피부 미세순환 및/또는 피부 톤의 유지 및/또는 개선이다.
본 발명은 피부에 에너지를 공급하기 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 피부에 에너지를 공급하는 것은 피부 세포의 에너지 대사를 증가시키는 것을 의미한다. 이것은 피부 톤을 유지 및/또는 개선하고; 및/또는 피부의 주름을 예방 및/또는 감소시키는 화장 이점을 가질 수 있다. 유익하게는, 이 에너지 공급 효과는 반응성 산소 종 (ROS) 생성을 피한다. 따라서 본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염의 용도를 제공하고, 여기서 상기 피부의 치료 및/또는 관리는 피부에 에너지를 공급하는 것이다.
본 발명은 피부 피로의 증상의 완화 또는 예방을 위한, 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 피부 피로의 증상은 눈 밑의 다크써클 모양, 안색의 칙칙함, 피부 톤의 상실 및 피부 건조증을 포함한다. 따라서 본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염의 용도를 제공하고, 여기서 상기 피부의 치료 및/또는 관리는 피부 피로의 증상의 완화 또는 예방이다.
본 발명은 피부의 노화 또는 피부 노화의 증상의 치료 및/또는 예방을 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 피부 노화의 증상은 피부 주름, 피부 건조, 피부 조도, 피부 톤의 손실 및 피부 장벽 변경의 치료 및/또는 예방을 포함한다. 피부 노화의 증상은 피부 주름, 피부 건조, 피부 톤의 손실 및 피부 장벽 변경일 수 있다. 피부 노화의 증상은 노화로 인한 피부에서 미토콘드리아 복합체 I의 활성화 및/또는 피부에서의 미토콘드리아 복합체 II 활성의 감소에 의해 생성된 ROS의 존재로 인한 노화의 증상을 포함할 수 있다. 유익하게는, 본 발명의 화합물은 인간 진피 섬유모세포에서 미토콘드리아 복합체 I 활성의 활성화를 감소시키고, 미토콘드리아 복합체 II 활성을 증가시키고 무시할 수 있는 반응성 산소 종 (ROS)을 생성하는 것으로 밝혀졌다. 미토콘드리아 복합체 II 활성은 노화로 인해 피부에서 감소한다. 또한, 미토콘드리아 복합체 I은 산화적 스트레스 및 노화를 유발하는 세포에서 ROS의 중요한 공급원이다. 이와 관련하여, 복합체 II 활성의 증가 및/또는 복합체 I의 부분적인 억제는 노화 방지 효과를 초래한다. 따라서 본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염의 용도를 제공하고, 여기서 상기 피부의 치료 및/또는 관리는 피부 노화 증상의 완화 및/또는 예방이다.
본 발명은 아이 백의 치료 및/또는 예방을 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 본 명세서에서 언급된 바와 같이 아이 백은 또한 눈 주위 부푼 붓기, "푹신한 눈" 또는 눈 밑의 처짐으로 지칭될 수 있으며, 통상적으로 눈 주위의 조직, 더 상세하게는 눈 아래 조직의 팽윤에 의해 특징지워진다. 아이 백은 수면 박탈과 같은 수면 패턴에서의 변화에 의해 악화되며 통상적으로 다크써클과 함께 존재한다. 아이 백의 치료는 아이 백의 양을 줄이는 것을 포함한다. 아이 백을 방지한다는 것은 아이 백이 나타나는 것을 방지한다.
본 발명은 피부 광도를 유지 및/또는 개선하기 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 용어 피부 광도는 숙련가에게 잘 알려져 있고 이것은 이의 가장 넓은 의미로 사용된다. 대체 명칭은 또한 통상적으로 문헌에서 "피부 명도" 또는 "피부 휘도"로 사용된다. 피부 광도는 일반적으로 피부의 건강한 외관과 연관된다.
본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염의 용도를 제공하고, 여기서 상기 치료 및/또는 관리는: 피부의 장벽 기능의 유지 또는 개선; 피부 수화의 유지 및/또는 개선; 피부 미세순환 및/또는 피부 톤의 유지 및/또는 개선; 피부 피로의 증상의 완화 또는 예방; 피부에 에너지를 공급하는 것; 아이 백의 치료 또는 예방; 피부 광도의 유지 또는 개선; 및/또는 피부 노화의 증상의 완화 및/또는 예방이다.
본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염의 용도를 제공하고, 여기서 상기 치료 및/또는 관리는: 피부의 장벽 기능의 유지 또는 개선; 피부 수화의 유지 및/또는 개선; 피부 미세순환 및/또는 피부 톤의 유지 및/또는 개선; 피부 피로의 증상의 완화 또는 예방; 피부에 에너지를 공급하는 것; 및/또는 피부 노화의 증상의 완화 및/또는 예방이다.
본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염의 용도를 제공하고, 여기서 상기 치료 및/또는 관리는: 피부의 장벽 기능의 유지 또는 개선; 피부 수화의 유지 및/또는 개선; 피부 미세순환의 유지 및/또는 개선; 피부에 에너지를 공급하는 것; 및/또는 피부 노화의 증상의 완화 및/또는 예방이다.
본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염의 용도를 제공하고, 여기서 상기 치료 및/또는 관리는: 피부의 장벽 기능의 유지 또는 개선; 피부 수화의 유지 및/또는 개선; 피부에 에너지를 공급하는 것; 및/또는 피부 노화의 증상의 완화 및/또는 예방이다.
본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염의 용도를 제공하고, 여기서 상기 치료 및/또는 관리는 상기에 기재된 바와 같고 여기서 상기 치료 및/또는 관리는 이른 아침 피부의 것이다. 특히, 상기 피부의 치료적 처치 및/또는 관리는 피부의 장벽 기능의 유지 또는 개선; 피부 수화의 유지 및/또는 개선; 및/또는 피부 미세순환의 유지 및/또는 개선일 수 있다. 이른 아침 피부는 피부에서 JARID1A 단백질의 발현은 매일 최대치보다 낮고; 피부에서 CRY2, PER2 및/또는 PER3 시계 유전자의 발현은 매일 최대치보다 낮고; 피부에 존재하는 세라미드의 양은 매일 최대치보다 낮고; 및/또는 피부 세포막 안으로 편입된 DHA의 양은 매일 최대치보다 낮은 일주기 리듬에서의 한 시점에서의 피부일 수 있다.
본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염의 용도를 제공하고, 여기서 상기 치료 및/또는 관리는 상기에 기재된 바와 같고 여기서 상기 치료 및/또는 관리는 이의 변경된 일주기 리듬을 갖는 피부의 것이다. 특히, 상기 피부의 치료적 처치 및/또는 관리는 피부의 장벽 기능의 유지 또는 개선; 피부 수화의 유지 및/또는 개선; 및/또는 피부 미세순환의 유지 및/또는 개선일 수 있다. 피부의 일주기 리듬은 변경될 수 있고 따라서 피부에서 JARID1A 단백질의 발현은 매일 최대치보다 낮고; 피부에서 CRY2, PER2 및/또는 PER3 시계 유전자의 발현은 매일 최대치보다 낮고; 피부에 존재하는 세라미드의 양은 매일 최대치보다 낮고; 및/또는 피부 세포막 안으로 편입된 DHA의 양은 매일 최대치보다 낮다. 피부는 그 일주일 리듬이 예를 들어 시차증 또는 교대 작업에 기인하여 변경된 대상체의 피부일 수 있다.
본 발명은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염의 용도를 제공하고, 여기서 상기 치료 및/또는 관리는 상기에 기재된 바와 같고 여기서 상기 치료 및/또는 관리는 26 세 이상인 대상체, 예를 들어 30 세 이상, 40 세 이상인 대상체인 피부의 것이다. 상기 대상체는 50 세 이상, 60 세 이상일 수 있다. 특히, 상기 피부의 치료적 처치 및/또는 관리는 피부의 장벽 기능의 유지 또는 개선; 피부 수화의 유지 및/또는 개선; 및/또는 피부 미세순환의 유지 및/또는 개선일 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 대상체에게 유효량의 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염 또는 화장용으로 또는 약제학적 유효량의 본 발명의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 대상체의 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 치료 및/또는 관리 방법을 제공한다. 상기 방법은 본 발명의 화합물의 적용 (사용)과 관계하여 상기에 기재된 바와 같은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 치료 및/또는 관리에 대한 것일 수 있다. 특히 치료 및/또는 관리 방법은 피부의 치료 및/또는 관리 방법이다. 본 발명의 화합물 또는 이를 포함하는 조성물의 투여는 국소 또는, 예를 들어, 경피일 수 있다. 상기 방법은 화장적, 비-치료적 방법 또는 치료 방법일 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명은 대상체에게 화장용으로 유효량의 본 발명의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염 또는 화장용으로 유효량의 본 발명의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염을 포함하는 화장품 조성물을 투여하는 것을 포함하는 대상체에서의 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 치료 및/또는 관리 방법을 제공한다. 본 발명의 화합물은 화장품 조성물, 예를 들어 본 명세서에서 기재된 바와 같은 화장품 조성물에 존재할 수 있다. 미용적, 비-치료적 방법은 본 발명의 화합물의 미용적, 비-치료적 방법 적용 (사용)과 관계하여 상기에 기재된 바와 같은 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 치료 및/또는 관리에 대한 것일 수 있다.
본 발명의 상기에 기재된 방법에 대해, 국소 또는 경피 적용은 이온침투요법, 초음파영동, 전기천공, 기계적 압력, 삼투압 구배, 폐쇄성 경화, 미세주입, 마이크로니들 (또는 다수의 마이크로니들), 압력 수단에 의한 바늘-없는 주사, 미세전기 패치, 안면 마스크 또는 이들의 임의의 조합에 의해 수행될 수 있다.
본 발명의 상기에 기재된 방법에 대해, 적용 또는 투여의 빈도는 각 대상체의 필요에 따라 크게 변할 수 있어, 한 달에 1 회 내지 하루에 10회, 바람직하게는 일주일에 1회 내지 1 일 4 회, 더 바람직하게는 일주일에 3회 내지 1일 2회, 더욱 더 바람직하게는 하루에 1 회로 권고된다. 본 발명의 화합물 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물의 적용 또는 투여는 이른 아침에 일어날 수 있다.
일 양태에서, 본 발명은 약제로서 사용하기 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조를 위한 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 일 양태에서, 본 발명은 대상체에게 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 이것을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는 질환 또는 장애의 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 조성물
본 발명의 화합물은 대상체의 신체, 바람직하게는 포유동물, 바람직하게는 인간의 신체에서 작용 부위와 화합물 사이에 접촉을 야기하는 임의의 수단에 의해 이의 적용으로, 그리고 이를 함유하는 조성물의 형태로 투여될 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 식 (I)에 따른 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 화장품 또는 약제학적 조성물을 제공한다. 특히, 본 발명은 식 (I)에 따른 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염을 포함하는 화장품 조성물을 제공한다
본 발명의 조성물은 전형적으로 적어도 하나의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 부형제 또는 아쥬반트를 포함한다. 특히, 본 발명은 적어도 하나의 화장용으로 허용가능한 부형제 또는 아쥬반트와 함께 식 (I)에 따른 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염을 포함하는 화장품 조성물을 제공한다. 이들 조성물은 당해 분야의 숙련가에게 알려진 통상적인 수단에 의해 제조될 수 있다 ["Harry's Cosmeticology", Seventh edition, (1982), Wilkinson J.B., Moore R.J., ed. Longman House, Essex, GB].
본 발명의 화합물은 이의 아미노산 서열의 성질 또는 N-말단 및/또는 C-말단에서의 임의의 가능한 변형에 따라 물에서 가변성 용해도를 갖는다. 따라서, 본 발명의 화합물은 수용액에 의해 조성물 안으로 혼입될 수 있고 물에서 가용성이 아닌 것들은 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 통상적인 용매 예컨대 여기에 제한되지는 않지만, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 부틸렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜 또는 이들의 임의의 조합에 용해될 수 있다.
본 발명의 조성물은 화장용으로 또는 약제학적으로 (치료적으로) 유효량의 본 발명의 화합물을 함유한다. 투여되어야 하는 화장용으로 또는 약제학적으로 (치료적으로) 유효량의 본 발명의 화합물, 뿐만 아니라 이의 투약량은 연령, 환자의 상태, 상태의 특성 또는 중증도, 치료 및/또는 관리되는 장애 또는 질환, 투여 경로 및 빈도 및 사용되는 화합물의 특정한 특성을 포함한 수 많은 인자에 의존할 것이다.
용어들 "화장용으로 유효량" 및 "약제학적으로 유효량"은 원하는 효과를 제공하는 본 발명의 화합물 또는 화합물들의 무독성이지만 충분한 양을 의미하는 것으로 이해된다. 용어들 "약제학적으로 효과적인" 및 "치료적으로 효과적인"은 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 본 발명의 화합물은 원하는 효과를 달성하는데 화장용으로 또는 약제학적으로 효과적인 농도; 예를 들어 조성물의 총 중량에 관하여 양으로 0.00000001 wt % 내지 20 wt %; 0.000001 wt % 내지 15 wt %; 0.00001 wt % 내지 10 wt %; 0.00005 wt % 내지 5 wt %; 0.00005 wt % 내지 1 wt %.; 0.00005 wt % 내지 0.1 wt %; 0.00005 wt % 내지 0.05 wt %; 0.00005 wt % 내지 0.01 wt %; 0.00005 wt % 내지 0.005 wt %; 0.0005 wt % 내지 0.01 wt %; 또는 0.0005 wt % 내지 0.005 wt %로 본 발명의 화장품 또는 약제학적 조성물에서 사용된다. 본 발명의 화합물은 조성물의 총 중량 중 적어도 0.00000001, 0.000001, 0.00001, 0.00005 또는 0.0005 wt %일 수 있다.
식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체, 이들의 혼합물 및/또는 이의 화장품 또는 약제학적으로 허용가능한 염은 또한 화장품 또는 약제학적 전달 시스템 및/또는 지속 방출 시스템 안으로 편입될 수 있다.
용어 "전달 시스템"은 본 발명의 화합물이 이들로 투여되어 지는 희석제, 아쥬반트, 부형제 또는 담체에 관한 것이다. 이들 화장품 또는 약제학적 캐리어는 액체, 예컨대 물, 오일 또는 계면활성제, 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것들을 포함함, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 땅콩 오일, 대두 오일, 광유, 참깨 오일, 피마자유, 폴리소르베이트, 소르비탄 에스테르, 에테르 설페이트, 설페이트, 베타인, 글리코사이드, 말토사이드, 지방 알코올, 노녹시놀, 폴록사머, 폴리옥시에틸렌, 폴리에틸렌 글리콜, 덱스트로스, 글리세롤, 디기토닌 및 유사한 것일 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 본 발명의 화합물이 투여될 수 있는 상이한 전달 시스템에서 사용될 수 있는 희석제, 아쥬반트 또는 부형제를 알고 있다.
용어 "지속 방출"은 일정 기간 동안, 그리고 바람직하게는, 꼭 그렇지는 않지만, 기간에 걸쳐 상대적으로 일정한 화합물 방출 수준으로 이 화합물의 점진적인 방출을 제공하는 화합물의 전달 시스템에 관한 통상적인 관점에서 사용된다.
전달 또는 지속 방출 시스템의 예는, 비제한적으로, 리포좀, 혼합된 리포좀, 올레오좀, 니오좀, 에토좀, 밀리입자, 극미립자, 나노입자 및 고형 지질 나노입자, 나노구조의 지질 캐리어, 스펀지, 사이클로덱스트린, 소포, 교질입자, 계면활성제의 혼합된 교질입자, 계면활성제-인지질 혼합된 교질입자, 밀리구형체, 마이크로구형체 및 나노구형체, 지방구형체, 밀리캡슐, 마이크로캡슐 및 나노캡슐, 뿐만 아니라 마이크로에멀션 및 나노에멀션을 포함하고, 이것은 활성 성분의 보다 큰 침투를 달성하고 및/또는 이의 약동학적 및 약력학적 특성을 개선하기 위해 첨가될 수 있다. 바람직한 전달 또는 지속 방출 시스템은 리포좀, 계면활성제-인지질 혼합된 교질입자, 마이크로에멀션, 더 바람직하게는 역 교질입자의 내부 구조를 갖는 유중수 마이크로에멀션 및 마이크로에멀션 나노캡슐이다.
일 구현예에서, 본 발명은 크림, 에멀션, 겔, 리포좀, 나노입자 및 연고로 구성된 군으로부터 선택된 식 (I)의 화합물 및 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 화장품 또는 약제학적 조성물을 제공한다.
지속 방출 시스템은 선행기술에서 알려진 방법에 의해 제조될 수 있고, 이를 포함하는 조성물은, 예를 들어, 접착성 패치, 비-접착성 패치, 폐쇄성 패치 및 미세전기 패치를 포함한 국소 또는 경피 투여에 의해, 또는 전신 투여, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 비강, 직장 또는 피하 이식 또는 주사, 또는 특정한 몸체부로 직접적인 이식 또는 주사를 포함한, 경구 또는 비경구 경로에 의해 투여될 수 있고, 그리고 바람직하게는 상대적으로 일정한 양의 본 발명의 화합물을 방출하여야 한다. 지속 방출 시스템에 함유된 화합물의 양은, 예를 들어, 본 조성물이 투여되는 장소, 본 발명의 화합물의 방출의 동력학 및 기간뿐만 아니라 상태의 본성, 치료 및/또는 관리되는 장애 및/또는 질환에 의존할 것이다.
본 발명의 화합물은 또한 고체 유기 폴리머 또는 고체 미네랄 지지체 예컨대 여기에 제한되지는 않지만, 그 중에서도, 탈크, 벤토나이트, 실리카, 전분 또는 말토덱스트린 상에 흡착될 수 있다.
식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체, 이들의 혼합물 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 함유하는 조성물은 또한 피부와 직접 접촉하는 패브릭, 부직포 및 의료 기기 안으로 편입될 수 있고, 따라서 신체의 수분, 피부의 pH 또는 체온에 기인한, 직물, 부직포 또는 의료 기기에 대한 결합 시스템의 생체내분해에 의하거나, 또는 이들과 신체 사이의 마찰에 의해 본 발명의 화합물을 방출한다. 게다가, 본 발명의 화합물은 신체와 직접 접촉하는 의복을 제조하기 위해 사용된 패브릭 및 부직포 안으로 편입될 수 있다.
상기에 기재된 전달 시스템 및/또는 지속 방출 시스템 중에서 화합물을 이들에 고정하기 위한 패브릭, 부직포, 의복, 의료 기기 및 수단의 예는 문헌에서 발견될 수 있고 선행기술에서 알려져 있다 [ Schaab C.K . (1986) HAPPI May 1986; Nelson G., "Application of microencapsulation in textiles", (2002), Int . J. Pharm., 242(1-2), 55 62; "Biofunctional Textiles and the Skin" (2006) Curr. Probl. Dermatol. v.33, Hipler U.C. and Elsner P., eds. S. Karger AG, Basel, Switzerland; Malcolm R.K. et al., "Controlled release of a model antibacterial drug from a novel self-lubricating silicone biomaterial", (2004), J. Cont. Release, 97(2), 313 320]. 바람직한 패브릭, 부직포, 의복 및 의료 기기는 붕대, 거즈, t-셔츠, 양말, 타이츠, 속옷, 거들, 글러브, 기저귀, 위생적인 냅킨, 드레싱, 침대보, 와이프, 접착성 패치, 비-접착성 패치, 폐쇄성 패치, 미세전기 패치 및/또는 안면 마스크이다.
본 발명의 화합물, 이의 입체이성질체, 이들의 혼합물 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 함유하는 화장품 또는 약제학적 조성물은 원하는 투여로 제형하기 위해 필요한 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 부형제를 선택적으로 포함하는 국소 또는 경피 적용을 위한 조성물의 상이한 유형에서 사용될 수 있다.
국소 또는 경피 적용을 위한 조성물은 임의의 고체, 액체 또는 반고형 제형, 예컨대 여기에 제한되지는 않지만, 크림, 다중 에멀션 예컨대 여기에 제한되지는 않지만, 물 에멀션 내 오일 및/또는 실리콘, 유중수 및/또는 실리콘 에멀션, 물/오일/물 또는 물/실리콘/물 유형 에멀션 및 오일/물/오일 또는 실리콘/물/실리콘 유형 에멀션, 무수 조성물, 수성 분산물, 오일, 밀크, 발삼, 포움, 로션, 겔, 크림 겔, 하이드로알코올성 용액, 하이드로글리콜 용액, 하이드로겔, 도찰제, 혈청, 비누, 샴푸, 컨디셔너, 세럼, 다당류 필름, 연고, 무스, 포마드, 분말, 바, 펜슬 및 스프레이 또는 에어로졸 (스프레이)로, 탈리 및 린스-오프 제형을 포함한 제형으로 생산될 수 있다. 이들 국소 또는 경피 적용 제형은 당해 기술의 숙련가에게 알려진 기술을 사용하여 상이한 유형의 고체 액세서리 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 붕대, 거즈, t-셔츠, 양말, 타이츠, 속옷, 거들, 글러브, 기저귀, 위생적인 냅킨, 드레싱, 침대보, 와이프, 접착성 패치, 비-접착성 패치, 폐쇄성 패치, 미세전기 패치 또는 안면 마스크로 편입될 수 있거나, 또는 상이한 메이크업 제품 예컨대 그 중에서도 메이크업 파운데이션, 예컨대 유체 파운데이션 및 컴팩트 파운데이션, 메이크업 제거 로션, 메이크업 제거 밀크, 눈 밑 콘실러, 아이섀도우, 립스틱, 입술 보호제, 입술 광택 및 분말 안으로 편입될 수 있다.
본 발명의 화장품 또는 약제학적 조성물은 본 발명의 화합물의 경피 흡수를 증가시키는 제제, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 그 중에서도, 디메틸설폭사이드, 디메틸아세트아미드, 디메틸포름아미드, 계면활성제, 아존 (1-도데실아자사이클로헵탄-2-온), 알코올, 우레아, 에톡시디글라이콜, 아세톤, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함할 수 있다. 게다가, 본 발명의 화장품 또는 약제학적 조성물은 본 발명의 펩타이드의 더 큰 침투를 달성하기 위해 이온침투요법, 초음파영동, 전기천공, 미세전기 패치, 기계적 압력, 삼투압 구배, 폐쇄성 경화, 미세주입 또는 압력 수단에 의한 바늘-없는 주사, 예컨대 산소 압력에 의한 주사, 또는 이들의 임의의 조합의 수단에 의해 치료되는 국소 영역에 적용될 수 있다. 적용 영역은 상태의 본성, 치료 및/또는 관리되는 장애 및/또는 질환에 의해 결정될 것이다.
일 구현예에서, 본 발명의 화장품 또는 약제학적 조성물은 화장품 (메이크업 및 모이스쳐라이저를 포함함) 및 위생 제품 (크렌징 제품을 포함함)에 전형적으로 함유된 화학적 자극제를 함유한다. 화학적 자극제는 피부에 대해 자극을 야기하는 화학물질을 의미한다. 따라서 본 발명의 화장품 또는 약제학적 조성물은 계면활성제; 산화제; 용매; 보존제; 지방산 또는 알코올; 화학적 햇볕차단제; 에톡실화된 화합물 및 다른 포름알데하이드 방출기; 방향제; 및/또는 화학 박피제로부터 선택된 하나 이상의 화학물질을 함유할 수 있다. 일 구현예에서 본 발명의 화장품 또는 약제학적 조성물은 하나 이상의 계면활성제를 함유한다.
게다가, 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체, 이들의 혼합물 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 함유하는 화장품 조성물은 경구 투여를 위한 상이한 유형의 제형, 바람직하게는 경구 화장품 또는 약물의 형태, 예컨대 여기에 제한되지는 않지만, 젤라틴 캡슐, 연질 캡슐, 경질 캡슐을 포함한 캡슐, 당 코팅 정제를 포함한 정제, 정제, 알약, 분말, 과립, 씹는 검, 용액, 현탁액, 에멀션, 시럽, 엘릭시르, 다당류 필름, 젤리 또는 젤라틴, 및 당해 기술의 숙련가에게 알려진 임의의 다른 형태로 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 화합물은 임의의 형태의 기능성 식품 또는 강화된 음식, 예컨대 여기에 제한되지는 않지만, 식이 바 또는 컴팩트 또는 비-컴팩트 분말 안으로 편입될 수 있다. 이들 분말은 물, 소다, 유제품, 콩 유도체에 용해될 수 있고 또는 식이 바 안에 편입될 수 있다. 본 발명의 화합물은 경구 조성물 또는 음식 보충물에 대한 공통 부형제 및 아쥬반트, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 음식 산업에서 일반적인 지방 성분, 수성 성분, 휴멕턴트, 보존제, 텍스쳐링제, 풍미제, 아로마, 산화방지제 및 착색제와 함께 제형화될 수 있다.
식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체, 이들의 혼합물 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 함유하는 화장품 또는 약제학적 조성물은 뿐만 아니라 국소 또는 경피 경로에 의해, 임의의 다른 적절한 경로, 예컨대 경구 또는 비경구 경로에 의해 또한 투여될 수 있고, 이를 위해 이들은 원하는 투여 형태의 제형화를 위해 필요한 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함할 것이다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "비경구"는 비강, 귓바퀴, 안과, 직장, 요도, 질, 피하, 진피내 경로, 혈관내 주사, 예컨대 정맥내, 근육내, 안구내, 유리체내, 각막내, 척수내, 수질내, 두개내, 자궁경부내, 뇌내, 수막내, 관절내, 간내, 흉내, 기관내, 척추강내 및 복강내, 및 임의의 또 다른 유사한 주사 또는 주입 기술을 포함한다. 당해 분야의 숙련가는 본 발명의 화합물을 함유하는 화장품 또는 약제학적 조성물이 투여될 수 있는 상이한 수단을 알고 있다.
본 발명에 기재된 화장품 또는 약제학적 조성물에 함유된 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 아쥬반트 중에는 화장품 또는 약제학적 조성물에서 통상적으로 사용된 추가의 성분, 예를 들어 여기에 제한되지 않지만 피부 장벽 기능을 개선 또는 회복하는 다른 제제, 천연 피부 미생물군집을 보호하는 제제, 세포 에너지 대사를 개선하는 제제, 미토콘드리아 기능을 개선 또는 보호하는 제제, 항-피로 제제, 목터닌 조절제, 미토콘드리아 대사를 촉진시키는 제제, 아디포넥틴 방출을 향상시키는 제제, 세포간 연통을 촉진시키는 제제, 피부 세포에서 코넥신을 증가시키는 제제, 피부의 자기-재생을 증진시키는 제제, 피부의 비대성 흉터를 예방하는 제제, DNA 보호 제제, DNA 회복 제제, 줄기 세포 보호 제제, 표피 줄기 세포의 풀을 재활성화하는 제제, 뉴런 엑소사이토시스를 억제하는 제제, 항콜린성 제제, 근수축을 억제하는 제제, 항노화 제제, 항-주름 제제, 발한억제제 제제, 항-염증성 및/또는 진통제, 항-가려움 제제, 진정제, 마취제, 아세틸콜린-수용체 응집의 억제제, 아세틸콜린에스테라제의 억제제, 피부 이완제 제제, 멜라닌 합성 자극 또는 억제제, 백화 또는 탈색 제제, 전안료화 제제, 자기-태닝 제제, NO-합성효소 억제제, 5α-환원효소 억제제, 라이실- 및/또는 프롤릴 하이드록실라제 억제제, 산화방지제, 자유 라디칼 포착제 및/또는 대기오염 대항 제제, 반응성타닐 종 포착제, 항-당화반응 제제, 탈독성화 제제, 항히스타민제 제제, 항바이러스제, 항기생충제, 유화제, 완화제, 유기 용매, 액체 추진제, 피부 병태개선제, 휴멕턴트, 수분을 함유하는 물질, 알파 하이드록시 산, 베타 하이드록시 산, 보습제, 가수분해의 표피 효소, 비타민, 아미노산, 단백질, 안료 또는 착색제, 염료, 생고분자, 겔화 폴리머, 증점제, 계면활성제, 연화제, 유화제, 결합제, 보존제, 아이 백을 감소 또는 치료할 수 있는 제제, 각질제거 제제, 각질용해약 제제, 박리 제제, 항미생물제, 항진균제, 정진균 제제, 살균 제제, 정균 제제, 진피 또는 표피 거대분자의 합성을 자극하고 및/또는 이의 열화를 억제 또는 방지할 수 있는 제제, 콜라겐 합성-자극 제제, 엘라스틴 합성-자극 제제, 데코린 합성-자극 제제, 라미닌 합성-자극 제제, 데펜신 합성-자극제, 차페론 합성-자극제, cAMP 합성-자극제, AQP-3 조절제, 아쿠아포린 합성-자극제, 아쿠아포린 계열의 단백질, 하이알루론산 합성-자극제, 글리코사미노글리칸 합성-자극제, 파이브로넥틴 합성-자극제, 시르투인 합성-자극제, 시르투인-활성화제, 열충격 단백질, 열충격 단백질 합성-자극제, 지질 및 각질층의 성분의 합성 자극하는 제제, 세라미드, 지방산, 억제하는 제제 콜라겐 열화, 카바밀화를 예방 또는 감소하는 제제, 라이실 하이드록실라제 조절제 , 콜라겐 섬유 가교결합을 개선하는 제제, 매트릭스 메탈로프로테이나제를 억제하는 제제, 엘라스틴 열화를 억제하는 제제, 세린 프로테아제 예컨대 칼리크레인, 엘라스타제 또는 카텝신을 억제하는 제제, 섬유모세포 증식을 자극하는 제제, 각질형성세포 증식을 자극하는 제제, 지방세포 증식을 자극하는 제제, 멜라닌세포 증식을 자극하는 제제, 각질형성세포 분화를 자극하는 제제, 지방세포 분화를 자극 또는 지연하는 제제, 항과케라토시스 제제, 면포용해 제제, 항-건선성 제제, 안정화제, 민감한 피부의 치료 및/또는 관리용 제제, 퍼밍 제제, 항-임신선 제제, 결합제, 피지 생산을 조절하는 제제, 지방분해 제제 또는 지방분해를 자극하는 제제, 지방생성 제제, PGC-1α 발현을 조절하는 제제, PPARγ의 활성을 조절하는 제제, 지방세포의 트리글리세라이드 함량을 증가 또는 감소하는 제제, 항-셀룰라이트 제제, PAR-2 활성을 억제하는 제제, 치유를 자극하는 제제, 코아쥬반트 치유 제제, 재상피화를 자극하는 제제, 코아쥬반트 재상피화 제제, 사이토카인 성장 인자, 모세관 순환 및/또는 미세순환에 작용하는 제제, 혈관신생을 자극하는 제제, 혈관 투과성을 억제하는 제제, 정맥강화 제제, 세포 대사에 작용하는 제제, 진피-표피 접합을 개선하는 제제, 모발 성장을 유도하는 제제, 모발 성장 억제 또는 지연 제제, 탈모를 지연하는 제제, 보존제, 방향제, 화장 및/또는 흡수제 및/또는 체취-마스킹 방취제, 킬레이트제, 식물 추출물, 에센셜 오일, 해양 추출물, 생물공학 종정으로부터 수득된 제제, 미네랄 염, 세포 추출물, 햇볕차단제 및 자외선 A 및/또는 B 선 및/또는 적외선 A 선에 대해 활성인 유기 또는 미네랄 광보호제, 또는 이들의 혼합물이 있고, 단 이들은 조성물의 나머지 성분 및 특히 본 발명의 화합물과 물리적으로 및 화학적으로 양립가능하다. 게다가, 이들 추가 성분의 특성은 본 발명의 화합물의 이점을 허용할 수 없게 변경하지 않아야 한다. 이들 추가 성분의 특성은 합성 또는 천연, 예컨대 식물 추출물일 수 있거나, 또는 생물공학 공정 또는 합성 절차와 생물공학 공정의 조합으로부터 유래한다. 추가의 예는 CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary & Handbook, 12th Edition (2008)에서 발견될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 생물공학 공정은 유기체 또는 그 일부에서 활성 성분 또는 그 일부를 생산하는 임의의 공정으로 이해된다.
일 구현예에서, 본 발명은 식 (I)의 화합물 및 하기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아쥬반트의 약제학적으로 또는 화장용으로 유효량을 포함하는 화장품 또는 약제학적 조성물을 제공한다: (i) 수분, 보습제 및 완화제를 함유하는 물질인 휴멕턴트에 의해 형성된 화장품 또는 약제학적 아쥬반트의 군으로부터 선택된 화합물, 오일 또는 왁스; (ii) 항-부종 특성을 가지고 혈관 투과도/미세순환을 개선하는 화합물; (iii) 세포 에너지 대사를 개선하고, 생기있게 하고, 활력을 부여하고, 세포의 활력 상태를 증가시키거나, 세포에서 에너지 수준 또는 ATP 생성을 증가시키는 화합물; (iv) 피부 상태를 개선하기 위한 항-피로 특성을 갖는 화합물, 또는 다크써클의 외관, 피곤한 특징, 둔한 안색, 톤 및 건조의 상실을 개선시키는 피부 외관 및 활력을 개선시키는 제제; (v) 반응성 카보닐 종 포착제, 자유 라디칼 포착제 및/또는 당화 방지, 탈독성화 제제, 산화 방지제 및/또는 오염 방지제; (vi) 피부 장벽 기능을 개선하는 화합물, 또는 표피간 물 손실 (TEWL)의 감소에 의해 피부의 건조를 방지하는 제제, 또는 피부 세포 층의 완전성을 보호하는 제제, 또는 지질을 개선하거나 또는 피부 장벽을 방어하는 제제; 및 (vii) 미토콘드리아 복합체의 활성의 조절을 통해 항노화 효과를 생성할 수 있고, 연령에 따른 미토콘드리아 기능성을 개선할 수 있거나, 또는 미토콘드리아 복합체 II의 활성의 향상 또는 미토콘드리아 복합체 I의 활성 감소로 인한 피부 노화로부터 보호할 수 있는 화합물.
본 발명의 화장품 또는 약제학적 조성물은 하기의 군으로부터 선택된 수분, 보습제 및 완화제를 함유하는 물질인 휴멕턴트에 의해 형성된 화장품 또는 약제학적 아쥬반트의 적어도 하나의 화합물, 오일 또는 왁스의 화장용으로 또는 약제학적으로 유료량을 포함한다: 예컨대 여기에 제한되지는 않지만, 폴리올 및 폴리에테르 예컨대 글리세린, 에틸헥실글리세린, 카프릴릴 글리콜, 펜틸렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 및 이의 유도체, 트리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세레쓰-26, 솔베쓰-30; 판테놀; 파이로글루탐산 및 이의 염 또는 유도체; 아미노산, 예컨대 세린, 프롤린, 알라닌, 글루타메이트 또는 아르기닌; 엑토인 및 이의 유도체; N-(2-하이드록시에틸)아세트아미드; 피롤리돈 카복실산 (PCA); N-라우로일-피롤리돈 카복실산; N-라우로일-L-라이신; N-알파-벤조일-L-아르기닌; 우레아; 크레아틴; 알파- 및 베타-하이드록시 산 예컨대 락트산, 글라이콜산, 말산, 시트르산, 타르타르산 또는 살리실산, 및 이의 염; 폴리글리세릴 아크릴레이트; 당류 및 다당류, 예컨대 글루코스, 아이소머레이트 당류, 소르비톨, 펜타에리트리톨, 이노시톨, 자일리톨, 소르비톨, 트레할로스 및 이의 유도체, 나트륨 글루쿠로네이트, 카라기난 (콘드러스 크리스퍼스) 또는 키토산; 글리코사미노글리칸 예컨대 하이알루론산 및 이의 유도체; 이의 임의의 형태로의 알로에 베라; 꿀; 가용성 콜라겐; 레시틴 및 포스파티딜콜린; 세라미드; 콜레스테롤 및 이의 에스테르; 토코페롤 및 이의 에스테르, 예컨대 토코페릴 아세테이트 또는 토코페릴 리놀레이트; 장쇄 알코올 예컨대 세테아릴 알코올, 스테아르산 알코올, 세틸 알코올, 올레일 알코올, 이소세틸 알코올 또는 옥타데칸-2-올; 장쇄 알코올 에스테르 예컨대 라우릴 락테이트, 미리스틸 아세테이트 또는 C12-C15 알킬 벤조에이트; 지방산 예컨대 스테아르산, 이소스테아르산 또는 팔미트 산; 다중불포화된 지방산 (PUFA); 소르비탄 예컨대 소르비탄 디스테아레이트; 글리세라이드 예컨대 글리세릴 모노라이시놀레이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 스테아레이트 시트레이트 또는 카프릴산 및 카프르산 트리글리세라이드; 당류 에스테르 예컨대 당류 팔미테이트 또는 당류 올레에이트; 부틸렌 글리콜 에스테르, 예컨대 디카프릴레이트 및 디카프레이트; 지방산 에스테르 예컨대 이소프로필 이소스테아레이트, 이소부틸 팔미테이트, 이소세틸 스테아레이트, 이소프로필 라우레이트, 헥실 라우레이트, 데실 올레에이트, 세틸 팔미테이트, 디-n-부틸 세바케이트, 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 이소프로필 스테아레이트, 부틸 스테아레이트, 부틸 미리스테이트, 이소프로필 리놀레이트, 2-에틸헥실 팔미테이트, 2-에틸헥실 코코에이트, 데실 올레에이트, 미리스틸 미리스테이트; 스쿠알렌; 밍크 오일; 라놀린 및 이의 유도체; 아세틸화된 라놀린 알코올; 실리콘 유도체 예컨대 사이클로메티콘, 디메티콘 또는 디메틸폴리실록산; Lipotec/Lubrizol에 의해 시판되는 Antarcticine® 해양 성분[INCI: 물 (Aqua), 가성알테로모나스 퍼멘트 추출물, 카프릴릴 글리콜], Xpertmoist® 분자 필름 [INCI: 글리세린, 가성알테로모나스 퍼멘트 추출물, 크산탄 검, 프롤린, 알라닌, 세린, 에틸헥실글리세린, 카프릴릴 글리콜], Bodyfensine® 펩타이드 [INCI: 아세틸 디펩타이드-3 아미노헥사노에이트], Hyadisine® 해양 성분 [INCI: 가성알테로모나스 퍼멘트 추출물] 또는 Diffuporine® 펩타이드 [INCI: 아세틸 헥사펩타이드-37]; Alban Muller에 의해 시판되는 Amiporine® ER [INCI: 글리세린, 푸니카 그라나툼 과일 추출물], HPS3® [INCI: 파니다 파보니카 엽상체 추출물] 또는 피토아민 바이오콤플렉스 [INCI: 심피튬 오피시날레 추출물, 자전초 오바타 씨드 추출물, 가수분해된 밀 단백질, 글루타민, 프롤린, 류신, 세린]; Aqua Bio Technology에 의해 시판되는 Dermaclarine™ [INCI: 가수분해된 난 단백질, 프로테아제]; Arch/Lonza에 의해 시판되는 Bio-Plex NMF [INCI: 나트륨 PCA, 락트산, 나트륨 락테이트, 우레아, 콜라겐 아미노산], DermaFlux® [INCI: 우레아, 효모 아미노산, 트레할로스, 이노시톨, 타우린, 베타인] 또는 ReGeniStem™ Red Rice [INCI: 오존처리된 오리자 사티바 (쌀) 캘러스 배양 추출물]; Lucas Meyer Cosmetics/Unipex에 의해 시판되는 Hydralphatine™ Asia [INCI: 수소첨가된 전분 가수분해물, 판테놀, 밤부사 불가리스 슈트 추출물, 넬럼보 누시페라 꽃 추출물, 수련 뿌리 추출물], Hydriame® [INCI: 글리코사미노글리칸, 스클레로튬 검], Hydraporine™ [INCI: 베타인, 수소첨가된 레시틴, 꿀, 펙틴] 또는 Exo-H™ [INCI: 알테로모나스 퍼멘트 추출물]; BASF에 의해 시판되는 PatcH2O™ [INCI: 트레할로스, 우레아, 세린, 글리세릴 폴리아크릴레이트, 알긴, 나트륨 하이알루로네이트, 풀루란]; BioSpectrum에 의해 시판되는 Cellike [INCI: 카프릴산/카프르산 트리글리세라이드, 수소첨가된 포스파티딜콜린, 시어 (Shea) 버터, 파이토스테롤, 글리세릴 카프릴레이트, 세라미드 NP]; Chemyunion에 의해 시판되는 Aquasense® [INCI: Piptadenia Colubrina 껍질 추출물]; CLR에 의해 시판되는 DayMoist™ CLR [INCI: 가수분해된 옥수수 전분, 베타 불가리스 (Beet) 뿌리 추출물]; Codif에 의해 시판되는 Hydranov [INCI: 나트륨 카라기난, 마리스 살] 또는 Hydrasalinol [INCI: 퉁퉁마디 허브 추출물, 카프릴산/카프르산 트리글리세라이드]; Coletica/Engelhard/BASF에 의해 시판되는 Marine Filling Spheres™ [INCI: 펜타에리트리틸 테트라이소스테아레이트, 실리카 디메틸 실릴레이트, 나트륨 콘드로이틴 설페이트, 아텔로콜라겐]; Evonik에 의해 시판되는 HyaCare® [INCI: 나트륨 하이알루로네이트] 또는 Skinmimics® [INCI: 세테아레쓰-25, 세틸 알코올, 베헨산, 콜레스테롤, 세라미드 NP, 세라미드 NS, 세라미드 EOS, 세라미드 EOP, 세라미드 AP, 카프로일 피토스핑고신, 카프로일 스핑고신]; Doosan에 의해 시판되는 DS-Sphyngomielin M [INCI: 스핑고지질]; DSM에 의해 시판되는 Syn-Up™ [INCI: 벤질설포닐 D-세릴 호모페닐알라닌 아미디노벤즈아미드 아세테이트]; Laboratoires Expanscience에 의해 시판되는 Aqualicia® [INCI: 가수분해된 아카시아 마과 씨드 추출물] 또는 Soline® [INCI: 헬리안투스 안누스 (해바라기) 종자유 불검화물]; Exsymol에 의해 시판되는 Arct'Alg® [INCI: 콘드러스 크리스푸스 추출물] 또는 Glistin® [INCI: 글루타밀아미도에틸 인돌]; Ganeden Biotech에 의해 시판되는 Bonicel™ [INCI: 바실러스 퍼멘트]; Gattefosse에 의해 시판되는 Gatuline® Renew [INCI: 크립토메리아 야포니카 버드 추출물]; Greentech에 의해 시판되는 Biotilys® [INCI: 락토바실러스 퍼멘트 용해물]; Infinitec에 의해 시판되는 Aqua Shuttle [INCI: 소르비톨, 라미나리아 디지타타 추출물, 규조토]; Vincience/ISP/Ashland에 의해 시판되는 Aquarize™ IS [INCI: 가수분해된 쌀 추출물] 또는 Aqua-Osmoline™ [INCI: 세라토니아 실리쿠아 (캐럽) 씨드 추출물]; L. Serobiologiques/Cognis/BASF에 의해 시판되는 Aqu'activ™ [INCI: 베헤닐 알코올, 글리세릴 올레에이트, 코카마이드 MIPA], Hibiscin® HP [INCI: 히비스커스 에스컬렌투스 씨드 추출물], Hyalurosmooth® [INCI: 카시아 안구스티폴리아 종자 다당류], Indinyl® CA [INCI: 카시아 안구스티폴리아 종자 다당류], Irwinol® [INCI: 옥틸도데칸올, 아프리카 망고 알맹이 버터, 수소첨가된 코코-글리세라이드], Lipodermol® [INCI: 옥틸도데칸올, 아라키딜 프로피오네이트, 토코페릴 아세테이트, 레티닐 팔미테이트, 에틸 리놀레이트, 에틸 리놀레네이트] 또는 Seanamin® SU [INCI: 소르비톨, 조류 추출물, 크론드러스 크리스푸스 (카라기난), 블래드랙엘지 추출물, 알긴]; Lipochemicals에 의해 시판되는 Lipocare HA/EC [INCI: 나트륨 하이알루로네이트, 에키나신]; Lipoid Kosmetik에 의해 시판되는 Hydro-Gain™ [INCI: 카놀라 오일, 수소첨가된 레시틴, 백년초 선인장 종자유, 베툴라 알바 나무껍질 추출물]; Merck에 의해 시판되는 RonaCare® RenouMer [INCI: 조류 추출물]; Mibelle에 의해 시판되는 AquaCacteen [INCI: 백년초 선인장 줄기 추출물], Snow Algae Powder [INCI: Coenochloris Signiensis 추출물] 또는 Trimoist KMF [INCI: 나트륨 스테아로일 락틸레이트, 세틸 알코올, 올루스 오일/식물성 오일, 토코페릴 아세테이트, 글리신 소야 (대두) 스테롤, 나트륨 카복시메틸 베타글루칸, 나트륨 락테이트, 카르노신, 락트산]; Pentapharm/DSM에 의해 시판되는 Alpaflor® Nectapure [INCI: 타이머스 불가리스 (Thyme) 꽃/잎 추출물, 부들레야 Davidii 추출물], Hyasol BT [INCI: 나트륨 하이알루로네이트], Pentavitin® [INCI: 당류 아이소머레이트] 또는 Phytaluronate® [INCI: 세라토니아 실리쿠아 (캐럽) 검]; Provital에 의해 시판되는 Hydromanil [INCI: 가수분해된 카에살피니아 스피노사 검, 카에살피니아 스피노사 검]; Rahn에 의해 시판되는 Aquarich® [INCI: 아베나 스트리고사 씨드 추출물], CellActive®-Hydro [INCI: 파이루스 말루스 (사과) 과일 추출물, 펙틴, 클로렐라 불가리스/Lu피누스 알부스 단백질 퍼멘트], CellActive®-Men [INCI: 타우린, 클로렐라 불가리스/Lu피누스 알부스 단백질 퍼멘트, 아칸토파낙스 센티코서스 (Eleuthero) 뿌리 추출물], Hydractin®-LMF [INCI: 폴리포디움 불가레 근경 추출물, 아이슬랜드 이끼 (Iceland Moos) 엽상체 추출물, 자주물이끼 추출물], Myramaze® [INCI: Myrothamnus Flabellifolia 추출물, 아스코르브산] 또는 Reforcyl® [INCI: 글루타민, 데실 글루코사이드, 펜에틸 알코올, 시스터스 인카누스 꽃/잎/줄기 추출물, 자이노스템마 펜타파일럼 잎/줄기 추출물]; Sederma/Croda에 의해 시판되는 Aqualance™ [INCI: 에리트리톨, 호마린 HCl], Hydraprotectol™ [INCI: 글리세릴 폴리메타크릴레이트, 알레우리틴 산, 효모 추출물 (Faex), 당단백질], Moist 24™ [INCI: Imperata Cylindrica 뿌리 추출물], Optim Hyal™ [INCI: 가수분해된 효모 추출물, 세틸 하이드록시에틸셀룰로스, 폴리글루쿠론산], Osmocide® 4 [INCI: 글리세린, 아크릴레이트/C10-30 알킬 아크릴레이트 가교중합체], Renovage™ [INCI: 카프릴산/카프르산 트리글리세라이드, 테프레논], Revidrate™ [INCI: 에틸헥실 팔미테이트, 소르비탄 올레에이트, 소르비탄 L아우레이트, 미리스틸 말레이트 포스폰산], Subliskin™ [INCI: 시노히조비움 멜리로티 발효 여과물, 세틸 하이드록시에틸셀룰로스]; Seppic에 의해 시판되는 Aquaxyl™ [INCI: 크실리틸글루코사이드 안하이드록실이톨, 자일리톨] 또는 Sepicalm™ S [INCI: 나트륨 코코일 아미노산, 사르코신, 칼륨 아스파르테이트, 마그네슘 아스파르테이트]; Silab에 의해 시판되는 Cohesium® [INCI: Ophiopogon Japonicus 뿌리 추출물]; Soliance에 의해 시판되는 Hydreis [INCI: 가수분해된 베타-글루칸], Hydrintense [INCI: Porphyridium 크루엔툼 추출물] 또는 RenovHyal [INCI: 나트륨 하이알루로네이트]; Symrise에 의해 시판되는 SymLift™ [INCI: 트레할로스, 베타-글루칸, 호르데움 불가레 씨드 추출물, 나트륨 하이알루로네이트]; 바셀린; 광유; 미네랄 및 합성 왁스; 밀랍 (케라 알바); 파라핀; 또는 식물 기원의 왁스 및 오일 예컨대 그 중에서도 칸델릴라 왁스 (등대풀속 세리페라), 카르나우바 왁스 (코페미시아 세리페라), 시어버터 나무 (부티로스퍼뮴 파르키), 코코아 버터 (테오브로마 카카오), 피마자유 (리시너스 콤머니스), 해바라기 오일 (헬리안투스 안누스), 올리브 오일 (올레아 유로파에아), 코코넛 오일 (코코스 누시퍼라), 야자 오일 (엘래이스 귀닌시스), 밀 배아 오일 (트리티쿰 불가레), 단맛 아몬드 오일 (프루누스 아미그달러스 둘세스), 머스크 장미 종자유 (로사 모샤타), 야생 대두 오일 (글리신 소야), 포도씨 오일 (비티스 비니페라), 카렌듈라 오일 (카렌듈라 오피시날리스), 호호바 오일 (심몬시스 차이넨시스), 망고 오일 (만기페라 인디카), 아보카도 오일 (페르세아 그라티시마), 및/또는 이들의 혼합물.
본 발명의 조성물은, 예를 들어, 여기에 제한되지는 않지만, 그 중에서도, Lipotec/Lubrizol에 의해 시판되는 Eyedeline™ 해양 성분 [INCI: 부틸렌 글리콜, 물 (Aqua), 플랑크톤 추출물], Eyeseryl® 펩타이드 [ INCI: 물 (Aqua), 부틸렌 글리콜, 아세틸 테트라펩타이드-5]; Provital에 의해 시판되는 Legactif [INCI: Ruscus Aculeatus 뿌리 추출물, 사이트루스 리몬 (레몬) 껍질 추출물, 솔리다고 벌가우레아 (Goldenrod) 추출물]; Sederma/Croda에 의해 시판되는 Legance™ [INCI: 진기베르 제럼벳 추출물] 및 Eyeliss [INCI: 헤스페리딘 메틸 칼콘, 디펩타이드-2, 팔미토일 테트라펩타이드-7]; Greentech에 의해 시판되는 Silidine® [INCI: 프로피리듐 크루엔툼 삼출물]; L. Serobiologiques/Cognis/BASF에 의해 시판되는 Biophytex [INCI: Escin, Ruscus Aculeatus 뿌리 추출물, 암모늄 글리시르히자테, 센텔라아시아티카 추출물, 가수분해된 효모 단백질, 카렌듈라 오피시날리스 꽃 추출물]; Gattefosse에 의해 시판되는 Cytobiol Lumin-Eye [INCI: 니아신아미드, Franxius Excelsior 나무껍질 추출물, 실란트리올 칼륨 시트레이트]; DSM에 의해 시판되는 Regu®-Age [INCI: 가수분해된 쌀 단백질, 옥시도 환원효소, 글리신 소야 (Soyben) 단백질]; Active Concepts에 의해 시판되는 AC Dermapeptide Warming PF [INCI: 락토바실러스/캅시쿰 푸루테센스 과일 퍼멘트 추출물, 류코노스톡/무 뿌리 발효 여과물]; 및/또는 이들의 혼합물로부터 선택된 혈관 투과도/미세순환을 개선하고 항-부종 특성을 갖는 적어도 하나의 추가의 화합물을 포함할 수 있다.
본 발명의 화장품 또는 약제학적 조성물은, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 그 중에서도 Ashland에 의해 시판되는 Chondricare™ IS biofunctional [INCI: 물, 프로판디올, 헥사펩타이드-42]; DSM에 의해 시판되는 Pepha®-ctive [INCI: 물, 조류 추출물] 또는 Revitalin® PF [INCI: 당단백질, 글루탐산, 발린, 트레오닌]; Sederma에 의해 시판되는 Chronodyn™ [INCI: 유글레나 그라실리스 추출물, 글리세린]; Seppic에 의해 시판되는 Sepitonic™ M3 [INCI: 마그네슘 아스파르테이트, 아연 글루코네이트, 구리 글루코네이트]; Naolys에 의해 시판되는 OvernightEnhance [MJ+C] [INCI: 미라빌리스 얄라파 가골 추출물]; Ashland에 의해 시판되는 Signaline™ S [INCI: 올레아 유러피아 (올리브) 과일 오일, 심몬드시아 차이넨시스 (호호바) 씨드 추출물]; 및/또는 이들의 혼합물로부터 선택된, 세포 에너지 대사를 개선하고, 생기있게 하고, 활력을 부여하고, 세포의 활력 상태를 증가시키거나, 세포에서 에너지 수준 또는 ATP 생성을 증가시키는 적어도 하나의 화합물의 화장용으로 또는 약제학적으로 유료량을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 그 중에서도 Lipotec/Lubrizol에 의해 시판되는 Vilastene™ 기능적 성분 [INCI: 물 (Aqua), 라이신 HCl, 레시틴, 카프릴릴 글리콜, 페녹시에탄올, 트리펩타이드-10, 시트룰린, 카보머, 수산화나트륨] 또는 dGlyage® 기능적 성분 [INCI: 물 (Aqua), 프로판디올, 라이신 HCl, 레시틴, 페녹시에탄올, 트리펩타이드-9 시트룰린]; Soliance에 의해 시판되는 StimulHyal [INCI: 칼슘 케토글루코네이트]; Rahn에 의해 시판되는 CellActive® V.I.P. [INCI:아쿠아, 클로렐라 불가리스/Lu피누스 알부스 단백질 퍼멘트, 안나스 사티부스 쥬스, 로즈마리누스 오피시날리스 추출물]; Sederma에 의해 시판되는 Chronodyn™ [INCI: 유글레나 그라실리스 추출물, 글리세린]; Silab에 의해 시판되는 Circagenyl® [INCI: 오약 뿌리 추출물]; Hallstar에 의해 시판되는 Life Oleobooster® [INCI: 브라씨카 캄페스트리스 종자유 (및) 폴리글리세릴-3-디이소스테아레이트 (및) 스테비아 레바우디아나 추출물 (및) 시스터스 몬스펠리엔세스 추출물]; 및/또는 이들의 혼합물로 선택된 적어도 하나의 추가의 피부 상태를 개선하기 위한 항-피로 특성을 갖는 화합물, 또는 다크써클의 외관, 피곤한 특징, 둔한 안색, 톤 및 건조의 상실을 개선시키는 피부 외관 및 활력을 개선시키는 제제를 포함할 수 있다.
본 조성물은, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 하기에 의해 형성된 군으로부터의 반응성 카보닐 종 포착제, 자유 라디칼 포착제 및/또는 당화 방지, 탈독성화 제제, 산화 방지제 및/또는 오염 방지제를 추가로 포함할 수 있다: 그 중에서도, 카르노신 및 이의 유도체, Vincience/ISP/Ashland에 의해 시판되는 GHK [INCI: 트리펩타이드-1], Quintescine IS [INCI: 디펩타이드-4] 또는 Blumilight™ Biofunctional [INCI: 물/아쿠아 (및) 부틸렌 글리콜 (및) 테오브로마 카카오 (코코아) 씨드 추출물]; Atrium Innovations/Lucas Meyer Cosmetics에 의해 시판되는 Melitane [INCI: 덱스트란, 아세틸 헥사펩타이드-1], Homeoxy [INCI: 납작파래, 팔마리아 팔마타 추출물] 또는 Lanatellis [INCI: 크리산텔륨 인디쿰 추출물, 카멜리아 시넨시스 잎 추출물] 또는 Exo-P™ [INCI: 물 (및) 부틸렌 글리콜 (및) 알테로모나스 발효 여과물]; CLR에 의해 시판되는 Protectan [INCI: 락토코쿠스 퍼멘트 용해물]; Codif에 의해 시판되는 Phycosaccharide [INCI: 가수분해된 알긴, 황산마그네슘, 망간 설페이트] 또는 Algowhite [INCI: 아스코필럼 노도섬 추출물]; Pentapharm/DSM에 의해 시판되는 Preregen [INCI: 글리신 소야 (대두) 단백질, 옥시도 환원효소], Edelweiss GC [INCI: 에델바이스 추출물], Lipogard [INCI: 스쿠알란, 유비퀴논], Nectapure [INCI: 부들레야 추출물, 타이머스 불가리스 추출물], Alpaflor Nectapure [INCI: 부들레야 추출물, 타이머스 불가리스 추출물] 또는 Dismutin-BT [INCI: 초과산화물 디스무타제]; Evonik Goldschmidt에 의해 시판되는 TEGO Turmerone [INCI: 쿠르쿠마 롱가 추출물]; Expanscience Laboratoires에 의해 시판되는 Hierogaline [INCI: 트리티쿰 불가레 (밀) 배아 오일 불검화물, 세사멈 인디컴 (참깨) 오일 불검화물]; Exsymol에 의해 시판되는 Glistin [INCI: 글루타밀아미도에틸 인돌], Glutrapeptide [INCI: 파이로글루타밀아미도에틸 인돌], Algisium C [INCI: 메틸실란올 만누로네이트], Silysin C [INCI: 실란트리올 라이시네이트], Exsy-Arl [INCI: 프롤린아미도에틸 이미다졸] 또는 OTZ-10 [INCI: 옥소티오졸리딘]; Gattefosse에 의해 시판되는 Gatuline Skin-Repair Bio [INCI: 스카치엉겅키 꽃/잎/줄기 추출물]; Lipotec/Lubrizol에 의해 시판되는 Preventhelia® 펩타이드 [ INCI: 디아미노프로피오노일 트리펩타이드-33], Aldenine® 기능적 성분 [INCI: 가수분해된 밀 단백질, 가수분해된 대두 단백질, 트리펩타이드-1], Lipochroman® 합성 분자 [INCI: 디메틸메톡시 크로만올], Thermostressine® 펩타이드 [INCI: 아세틸 테트라펩타이드-22], Bodyfensine® 펩타이드 [INCI: 아세틸 디펩타이드-3 아미노헥사노에이트] 또는 Pollushield™ 기능적 성분 [INCI: 디이소프로필 아디페이트, 레시틴, 아크릴산/아크릴아미도메틸 프로판 설폰산 공중합체, 디메틸메톡시 크로만올, 크산탄 검]; Greentech에 의해 시판되는 Setiline [INCI: 가수분해된 트리고넬라 포에넘-그라에쿰 씨드 추출물] 또는 PhytoBioactive Soliberine [INCI: 아쿠아, 프로판디올, 부들레야 오피시날리스 꽃 추출물]; BASF에 의해 시판되는 Sunactyl [INCI: 만니톨, 파이슘 사티붐 추출물, 히스티딘 HCl, 아르기닌, 사이클로덱스트린, 덱스트린, 효모 추출물, 아세틸 트리소인, 피리독신 HCl, 카야 세네갈렌시스 나무껍질 추출물, 니코틴아미드, 아데닌 디뉴클레오타이드, 디나트륨 석시네이트, 아스파르트산], 이미디닐 [INCI: 타마린드 종자 다당류], Phystrogene [INCI: Malva Sylvestris (아욱) 추출물, 크산탄 검] 또는 Purisoft [INCI: 모링가 프테로지스페르마 씨드 추출물]; Mibelle Biochemistry에 의해 시판되는 AquaCacteen [INCI: 백년초 줄기 추출물], Trimoist (KMF) [INCI: 나트륨 스테아로일 락틸레이트, 레틸 알코올, 식물성 오일, 토코페릴 아세테이트, 글리신 소야 스테롤, 나트륨 락테이트, 나트륨 바브옥시메틸 베타글루칸, 카르노신], MelanoBronze [INCI: Vitex Agnus Castus Extract (Monk's 후추 장과류 추출물 (식물-엔도르핀)), 아세틸 티로신], CM-Glucan [INCI: 나트륨 카복시메틸 베타글루칸], SunActin [INCI: 헬리안투스 안누스 (해바라기) 싹 추출물, 토코페롤, 레시틴], GSP-T skin [INCI: PEG-40 수소첨가된 피마자유, 비티스 비니페라 (포도) 씨드 추출물] 또는 Detoxophane [INCI: 레피듐 사티범 싹 추출물, 레시틴]; Sederma/Croda에 의해 시판되는 Bacocalmine [INCI: PEG-8, Bacopa Monniera 추출물, 하이드록시에틸셀룰로스], Kombuchka [INCI: 사카로마이세스/자일리넘 홍차 퍼멘트, 하이드록시에틸 셀룰로스], Citystem [INCI: 글리세린, 마루븀 불가레 추출물] 또는 Prodizia [INCI: 알비지아 율리브리신 추출물]; Seppic에 의해 시판되는 Extramel C [INCI: 하이드록시프로필트리모늄 말토덱스트린 가교중합체, 쿠쿠미스 멜로 (멜론) 과일 추출물]; Silab에 의해 시판되는 Defensine [INCI: 트리티쿰 불가레 배아 추출물], Antiglyskin [INCI: 헬리안투스 안누스 씨드 추출물], Apolluskin® [INCI: 타락사쿰 오피시날레 (Dandelion) 추출물] 또는 Detoxyl® [INCI: 물, 부틸렌 글리콜, 부티로스퍼럼 파르키 (시어버터 나무) 시드케이크 추출물]; Sinergia에 의해 시판되는 ATP 23 [INCI: 아젤로일 테트라펩타이드-23]; Solabia에 의해 시판되는 Glycofilm [INCI: 바이오당류 검-4]; Active Concepts에 의해 시판되는 AC Cinnamon Liposome [INCI: 물, 신나모멈 카시아 나무껍질 추출물, 인지질, 락토바실러스 퍼멘트], AC Moisturezyme Protect [INCI: 사이트루스 시넨시스 (오렌지) 과일 추출물, 알로에 바바덴시스 잎 추출물], ACB Mushroom Extract SM PF [INCI: 락토바실러스/가노데르마 루시덤 (레이시 버섯) Extract/Lentinus Edodes (시이타케 버섯) 발효 추출물 필트레이트 & 악토바실러스 퍼멘트], ACB 올리브 잎 추출물 PF [INCI: 락토바실러스/올리브 잎 퍼멘트 추출물], ACB Purslane Bio Ferment PF [INCI: 락토바실러스/포튤라카 올레라세아 퍼멘트 추출물, 류코노스톡/무 뿌리 발효 여과물], ACB 토마토 바이오퍼멘트 PF [INCI: 락토바실러스/토마토 과일 퍼멘트 추출물, 류코노스톡/무 뿌리 발효 여과물] 또는 AC 로얄 젤리 추출물 [INCI: 부틸렌 글리콜, 10-하이드록시데칸산, 세박산, 1,10-데칸디올]; Biolie에 의해 시판되는 Citruskin [INCI: 사이트루스 세망타 과일 추출물, 프로판디올] 또는 Paradisyl [INCI: 사이트루스 사이트루스 파라디시 과일 추출물, 프로판디올]; ID Bio에 의해 시판되는 Sens' flower [INCI: 프로판디올, 아쿠아, 크로쿠스 사티버스 꽃 추출물, 나트륨 벤조에이트, 칼륨 소르베이트]; Crodarom에 의해 시판되는 Crodarom Elfe flower [INCI: 글리세린, 아쿠라, 큰꽃 삼지구엽초] 또는 Phytessence 복숭아 꽃 [INCI: 글리세린, 아쿠아, 프루누스 페르시카 꽃 추출물]; Provital에 의해 시판되는 Lingostem [INCI: 아쿠아, 글리세린, 박시니움 비티스-아이대아 과일 추출물, 크산탄 검, 나트륨 벤조에이트, 시트르산, 글루코노락톤, 칼슘 글루코네이트]; Naturex에 의해 시판되는 Peppermint LG [INCI: 글리세린, 아쿠아, 멘타 피페리타 잎 추출물]; RAHN에 의해 시판되는 Radicare [INCI: 아쿠아, 멜리사 오피시날리스 잎 추출물]; Naolys에 의해 시판되는 Refine Ginger [INCI: 진기베르 오피시날레 잎 세포 추출물]; Spech-chem에 의해 시판되는 Spechwhite 02 [INCI: 아스코르빌 글루코사이드] 또는 Spechwhite 04 [INCI: 페닐에틸 레조르시놀]; 및/또는 이들의 혼합물.
본 발명의 조성물은, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 하기로부터 선택된, 피부 장벽 기능을 개선하는 화합물, 또는 표피간 물 손실 (TEWL)의 감소에 의해 피부의 건조를 방지하는 제제, 또는 피부 세포 층의 완전성을 보호하는 제제, 또는 지질을 개선하거나 또는 피부 장벽을 방어하는 제제를 추가로 포함할 수 있다: 그 중에서도, Lipotec/Lubrizol에 의해 시판되는 Fensebiome™ 펩타이드 [INCI: 아세틸 헵타펩타이드-4], Antarcticine® 해양 성분 [INCI: 물 (Aqua), 가성알테로모나스 퍼멘트 추출물, 카프릴릴 글리콜] 또는 Delisens™ 펩타이드 [INCI: 부틸렌 글리콜, 물 (Aqua), 시트르산, 아세틸 헥사펩타이드-49]; Silab에 의해 시판되는 Indufence® [INCI: 알리스마 자전초-아쿠아티카 추출물], Vederine® [INCI: 시코륨 인타이버스 (Chicory) 뿌리 추출물], Pro-Lipiskin® [INCI: 피치아 아노말라 추출물] 또는 Nerenyl® [INCI: 당류 가수분해물]; CLR에 의해 시판되는 ProRenew Complex [INCI: 락토코쿠스 퍼멘트 용해물] 또는 PhytoDefense CLR™ [INCI: 글리신 소야 (대두) 오일, 디카프릴릴 에테르, 마그놀리아 그랜디플로라 나무껍질 추출물, 라우릴 알코올]; Lonza에 의해 시판되는 ProSynergen™ DF [INCI: 락토바실러스/울케니아 아모에보이대 퍼멘트 추출 여과물] 또는 NAB® 로디올라 추출물 [INCI: 로디올라 로새 뿌리 추출물]; Evonik에 의해 시판되는 Skinmimmics® [INCI: 세테아레쓰-25, 글리세린, 세틸 알코올, 베헨산, 콜레스테롤, 세라미드 NP, 세라미드 NS, 세라미드 EOS, 세라미드 EOP, 세라미드 AP, 카프로일 피토스핑고신, 카프로일 스핑고신]; Mibelle에 의해 시판되는 PytoCellTec™ Alp Rose [INCI: Rhododendron Ferrugineum 잎 세포 배양 추출물, 아이소말트, 레시틴, 나트륨 벤조에이트, 락트산, 아쿠아/물] 또는 MAXnolia [INCI: 마그놀리아 오피시날리스 나무껍질 추출물, 비티스 비니페라/비티스 비니페라 (포도) 씨드 추출물, 토코페롤]; Ashland에 의해 시판되는 Stratixyl™ [제안된 INCI: 아쿠아/물, 글리세린, 가수분해된 옥수수 단백질]; Induchem에 의해 시판되는 Rubixyl® [제안된 INCI: 글리세린, 물, 헥사펩타이드]; Infinitec에 의해 시판되는 The Skin Maker® [INCI: 팔미토일 헵타펩타이드-27, 팔미토일 올리고펩타이드-78, 락트산/글라이콜산 공중합체, 폴리비닐 알코올, 팔미토일 옥타펩타이드-24]; Sederma/Croda에 의해 시판되는 Venuceane™ [INCI: 테르무스 써모필러스 퍼멘트] 또는 Calmosensine™ [INCI: 아세틸 디펩타이드-1 세틸 에스테르] 또는 Pacifeel™ [INCI: 미라빌리스 잘라파 추출물]; Provital에 의해 시판되는 Aquaxtrem™ [INCI: 륨 라폰티쿰 뿌리 추출물] 또는 Polyplant® Epithelizing (Provital) [INCI: 카렌듈라 오피시날리스, Hypericum Perforatum, Chamomilla Recutita, 로즈마리누스 오피시날리스]; L. Serobiologiques/Cognis/BASF에 의해 시판되는 Cytokinol® LS 9028 [INCI: 가수분해된 카세인, 가수분해된 효모 단백질, 라이신 HCl] 또는 Skinasensyl™ [INCI: 아세틸 테트라펩타이드 15]; BASF에 의해 시판되는 Symbiocell™ [INCI: 세스트럼 라티폴륨으로부터의 추출물] 또는 Deliner® [INCI: Zea May (옥수수) 알맹이 추출물]; Pentapharm/DSM에 의해 시판되는 Alpaflor® Imperatoria AO [INCI: Peucedanum Ostruthium 잎 추출물] 또는 OXY 229-BT [INCI: 사카로마이세스 용해물]; Lucas Meyer에 의해 시판되는 Drieline™ [INCI: 수소첨가된 전분 가수분해물, 효모 추출물]; Gattefosse에 의해 시판되는 Gatuline® Derma-Sensitive [INCI: 옥틸도데실 미리스테이트, 캅파리스 스피노사 과일 추출물] 또는 Neoskin™ [INCI: Mimosa Tenuiflora 나무껍질 추출물]; Symrise에 의해 시판되는 SymPeptide™ 222 [INCI: 미리스토일 펜타펩타이드-8], SymSitive® 1609 [INCI: 4 t 부틸사이클로헥산올], SymPeptide™ 225 [INCI: 미리스토일 펜타펩타이드-11] 또는 SymPeptide™ 230 [INCI: 미리스토일 헥사펩타이드-4]; Atrium에 의해 시판되는 Neutrazen™ [INCI: 덱스트란, 팔미토일 트리펩타이드 8]; Institut Europeen de Biologie Cellulaire에 의해 시판되는 Meliprene® [INCI: 덱스트란, 아세틸 헵타펩타이드 1]; 및/또는 이들의 혼합물.
본 발명의 조성물은, 예를 들어 여기에 제한되지는 않지만, 그 중에서도, Ashland에 의해 시판되는 펩타이드 Q10™ Biofunctional [INCI: 펜타펩타이드-34 트리플루오로아세테이트] 또는 Dynachondrine™ ISR [INCI: 글리세린, 가수분해된 대두 단백질, 물, 나트륨 벤조에이트, 칼륨 소르베이트]; Induchem에 의해 시판되는 Neodermyl® [INCI: 글리세린, 물, 메틸글루코사이드 포스페이트, 구리 라이시네이트/프롤리네이트]; Lucas Meyer에 의해 시판되는 Riboxyl™ [INCI: 리보오스]; Sederma에 의해 시판되는 Juvinity™ [INCI: 카프릴산/카프르산 트리글리세라이드, 제라닐제라닐프로판올]; Gelyma에 의해 시판되는 SEAVIE® [INCI: 물, 푸쿠스 세라터스 추출물]; CODIF에 의해 시판되는 EARLY BOOST PA [INCI: 글리세린, 물, 자니아 루벤스 추출물, 나트륨 카라기난, 펜에틸 알코올]; Lipotrue에 의해 시판되는 SIRTALICE™ [INCI: 바실러스 퍼멘트]; 및/또는 이들의 혼합물로부터 선택된, 미토콘드리아 복합체의 활성의 조절을 통해 항노화 효과를 생성할 수 있고, 연령에 따른 미토콘드리아 기능성을 개선할 수 있거나, 또는 미토콘드리아 복합체 II의 활성의 향상 또는 미토콘드리아 복합체 I의 활성 감소로 인한 피부 노화로부터 보호할 수 있는 적어도 하나의 화합물을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 제목 "적용" 하에서 상기에 논의된 임의의 적용 또는 용도에서 사용될 수 있다.
본 발명은 하기 비-제한적인 실시예에 의해 설명된다.
실시예
일반적인 방법론
모든 시약 및 용매는 합성 품질의 것이고 추가의 처리 없이 사용된다.
약어
아미노산에 대해 사용된 약어는 Eur. J. Biochem. (1984) 138:9-37에서 설명된 1983 IUPAC-IUB 공동 위원회의 생화학적 명명법 권고에 따른다.
(R), 수지; 2-ClTrt-(R), 2-클로로트리틸 수지; Ac, 아세틸; AcOH, 아세트산; Ala, 알라닌; AM, 2-[4-아미노메틸-(2,4-디메톡시페닐)] 페녹시아세트산; Arg, 아르기닌; Asn, 아스파라긴; Asp, 아스파르트산; Boc, tert-부틸옥시카보닐; DCM, 디클로로메탄; DIEA, N,N'-디이소프로필에틸아민; DIPCDI, N,N'-디이소프로필카보디이미드; DMF, N,N-디메틸포름아미드; ESI-MS, 전기분무 이온화 질량 분광분석법; Fmoc, 9-플루오르에닐메틸옥시카보닐; Gln, 글루타민; Glu, 글루탐산; Gly, 글리신; His, 히스티딘; HOBt, 1-하이드록시벤조트리아졸; HPLC, 고성능 액체 크로마토그래피; Ile, 이소류신; KOH, 수산화칼륨; Leu, 류신; Lys, 라이신; MBHA, p-메틸벤즈하이드릴아민; MeCN, 아세토니트릴; MeOH, 메탄올; Met, 메티오닌; Myr, 미리스토일; Palm, 팔미토일; Pbf, 2,2,4,6,7-펜타메틸디하이드로벤조푸란-5-설포닐; Pro, 프롤린; Ser, 세린; tBu, tert-부틸; TFA, 트리플루오로아세트산; Thr 트레오닌; Trt, 트리틸; Val, 발린.
화학적 합성
모든 합성 공정은 다공성 폴리에틸렌 디스크가 구비된 폴리프로필렌 주사기에서 수행된다. 모든 시약 및 용매는 합성 품질이고 임의의 추가의 처리 없이 사용된다. 용매 및 가용성 시약은 흡인에 의해 제거된다. Fmoc 기는 피페리딘-DMF (2:8, v/v) (1 x 1 min, 1 x 5 min, 5 ml/g 수지)로 제거된다 [Lloyd-Williams P. et al. (1997) "Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins" CRC, Boca Raton (FL, USA)]. 탈보호, 커플링 및, 다시, 탈보호의 단계간 세정은 10 ml 용매/g 수지를 사용하여 매번 DMF (3 x 1 min)로 수행된다. 커플링 반응은 3 ml 용매/g 수지로 수행된다. 커플링의 조절은 닌히드린 테스트 [Kaiser E. et al., Anal. Biochem. (1970), 34: 595-598] 또는 클로라닐 테스트 [Christensen T., Acta Chem. Scand., (1979), 33B, 763-766]를 수행함에 의해 수행된다. 모든 합성 반응 및 세정은 25℃에서 수행된다.
일부 아미노산은 측쇄가 보호된 이의 작용기로 사용된다. 사용된 보호기는 다음과 같다:
ㅇ 아미노산 Lys 및 T게에 대해 Boc, tert-부틸옥시카보닐;
ㅇ 아미노산 Arg에 대해 Pbf, 2,2,4,6,7-펜타메틸디하이드로벤조푸란-5-설포닐; 및
ㅇ 아미노산 Gln 및 His에 대해 Trt, 트리틸.
HPLC 크로마토그래피 분석은 30℃에서 온도조절된 역상 칼럼 (50 x 4.6 mm, Kromasil C18, 3.5 μm, Akzo Nobel, Sweden)을 사용하여 Shimadzu 장비 (Kyoto, Japan)로 수행된다. 용출은 1.6 mL/min의 유량에서 물 (+0.1% TFA) 내 아세토니트릴 (+0.07% TFA)의 구배를 사용하여 수행되고 검출은 220 nm에서 수행된다. 전기분무 이온화 질량 분광분석법은 이동상으로 MeCN:H2O 4:1 (+0.1% TFA)의 혼합물을 사용한 WATERS Alliance ZQ 2000 검출기에서 0.3 ml/min의 유량에서 수행된다.
실시예 1
AA 9 가 L-Pro인, H - AA 9 -O-2-ClTrt-(R) 수득.
중량이 정규화되었다. 0.83 당량의 DIEA가 첨가된, 20 mL의 DCM에 용해된 3.2 mmol (1 당량)의 Fmoc-L-Pro-OH가 작용화물 1.6 mmol/g로 건조 2-클로로트리틸 수지 (3.2 mmol) 상에 커플링된다. 본 혼합물은 5분 동안 교반되고, 그 후 1.63 당량의 DIEA가 첨가된다. 본 혼합물은 40 분 동안 반응기에 방치된다. 나머지 클로라이드기가 2 mL의 MeOH로 처리에 의해 차단된다.
실시예 2
AA 1 이 L-Phe이고; AA 2 가 L-Trp이고; AA 3 이 L-Met이고; AA 4 가 L-Lys이고; AA 5 가 L-Arg이고; AA6이 L-Lys이고; AA 7 이 Arg이고; AA 8 이 L-Val이고; AA 9 가 L-Pro인, Fmoc-AA 1 -AA 2 -AA 3- AA 4 -AA 5 -AA 6 -AA 7 -AA 8 -AA 9 -O-2-ClTrt-(R) 수득.
중량이 정규화되었다. 1.19 mmol/g (0.09 mmol)의 작용화물을 갖는 76 mg의 H-L-Pro-O-2-Cl-Trt 수지가 일반적인 방법에서 기재된 바와 같이 세정된다. 기재된 프로토콜에 따라, 5 당량의 Fmoc-Val-OH (Fmoc-AA8-OH)가 60 분 동안 용매로서 DMF를 사용하여 5.5 당량의 DIPCDI 및 5 당량의 HOBt의 존재에서 펩티딜 수지 상으로 커플링된다.
수지는 그 다음 일반적인 방법에서 기재된 바와 같이 세정되고 Fmoc 기의 탈보호 처리가 반복되어 다음 아미노산을 커플링한다. 이전에 기재된 프로토콜에 따라, 5 당량의 Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (Fmoc-AA7-OH)가 60 분 동안 용매로서 DMF를 사용하여 5.5 당량의 DIPCDI 및 5 당량의 HOBt의 존재에서 펩티딜 수지 상으로 커플링된다. 수지는 그 다음 일반적인 방법에서 기재된 바와 같이 세정되고 Fmoc 기의 탈보호 처리가 반복되어 다음 아미노산을 커플링한다. 이전에 기재된 프로토콜에 따라, 커플링의 단계, 세정 및 탈보호가 반복되어 순차적으로 5 당량의 Fmoc-L-Lys(Boc)-OH (Fmoc-AA6-OH); 5 당량의 Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (Fmoc-AA5-OH); 5 당량의 Fmoc-L-Lys(Boc)-OH (Fmoc-AA4-OH); 5 당량의 Fmoc-L-Met-OH (Fmoc-AA3-OH); 그리고 5 당량의 Fmoc-L-Trp(Boc)-OH (Fmoc-AA2-OH); 5 당량의 Fmoc-L-Phe-OH (Fmoc-AA1-OH)을 커플링하고; 이들 각각은 커플링 단계 동안 5 당량의 HOBt 및 5.5 당량의 DIPCDI의 존재에서 한다.
합성 후, 펩티딜 수지는 DCM (3 x 1 min)로 세정한다.
표 5에 나타난 모든 펩타이드는 이 실시예에서 기재된 프로토콜에 따라 합성될 수 있다.
Figure pct00006
실시예 3
AA 1 이 L-Phe이고; AA 2 가 L-Trp이고; AA 3 이 L-Met이고; AA 4 가 L-Lys이고; AA 5 가 L-Arg이고; AA6이 L-Lys이고; AA 7 이 Arg이고; AA 8 이 L-Val이고; AA 9 가 L-Pro이고; 그리고 m, n, p 및 q 각각은 0 Fmoc-Wm-Xn-AA 1 -AA 2 -AA 3- AA 4 -AA 5 -AA 6- AA 7 -AA 8 -AA 9 -Y p -Z q -AM-MBHA-(R)인, 수득
중량이 정규화되었다. 0.51 mmol/g의 작용화물을 갖는 240 mg (0.12 mmol)의 Fmoc-AM-pMBHA 수지가 Fmoc 기를 제거하기 위해 기재된 일반적인 프로토콜에 따라 피페리딘:DMF로 처리된다. 5 당량의 Fmoc-L-Pro-OH (Fmoc-AA9-OH)가 1시간 동안 용매로 DMF를 사용하여 5.5 당량의 DIPCDI 및 5 당량의 HOBt의 존재에서 탈보호된 수지 상으로 편입된다.
수지는 그 다음 일반적인 방법에서 기재된 바와 같이 세정되고 Fmoc 기의 탈보호 처리가 반복되어 다음 아미노산을 커플링한다. 이전에 기재된 프로토콜에 따라 5 당량의 Fmoc-Val-OH (Fmoc-AA8-OH); 그리고 후속으로 5 당량의 Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (Fmoc-AA7-OH); 5 당량의 Fmoc-L-Lys(Boc)-OH (Fmoc-AA6-OH); 5 당량의 Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (Fmoc-AA5-OH); 5 당량의 Fmoc-L-Lys(Boc)-OH (Fmoc-AA4-OH); 5 당량의 Fmoc-L-Met-OH (Fmoc-AA3-OH); 5 당량의 Fmoc-L-Trp(Boc)-OH (Fmoc-AA2-OH); 그리고 마지막으로 5 당량의 Fmoc-L-Phe-OH (Fmoc-AA1-OH)가 각각의 커플링 단계에서 5 당량의 HOBt 및 5.5 당량의 DIPCDI의 존재에서 순차적으로 커플링된다.
합성 후, 펩티딜 수지는 DCM (3 x 1 min)로 세정한다.
표 6에 나타난 모든 펩타이드는 이 실시예에서 기재된 프로토콜에 따라 합성될 수 있다.
Figure pct00007
실시예 4
Fmoc N-말단 보호 기의 제거를 위한 일반적인 과정.
실시예 1, 2 및 3에서 수득된 펩티딜 수지의 N-말단 Fmoc 기는 일반적인 방법 (DMF 내 20% 피페리딘, 1 x 1 min + 1 x 5 min)에서 기재된 바와 같이 탈보호된다. 펩티딜 수지는 DMF (5 x 1 min), DCM (3 x 1 min), 디에틸 에테르 (3 x 1 min)로 세정되고 그리고 진공 하에서 건조된다.
실시예 5
실시예 4에서 수득된 펩티딜 수지 상에 R 1 팔미토일기를 도입하는 과정.
DMF (1 ml) 내에 사전-용해된 180 mg (0.7 mmol; 5 당량) 또는 154mg (0.6 mmol, 5 당량)의 팔미트산이 107 mg (0.7 mmol; 5 당량) 또는 92 mg (0.6mmol, 5equiv)의 HOBt 및 127 μl의 DIPCDI (0.77 mmol; 5.5 당량) 또는 102 μl (0.66 mmol, 5.5 당량)의 DIPCDI의 존재에서 실시예 4에서 수득된 각각의 펩티딜 수지에 각각 0.14 mmol 또는 0.12 mmol에 첨가된다. 본 혼합물은 3 시간 동안 반응되도록 하고, 그 후 수지는 DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min), 디에틸 에테르 (3 x 1 min)로 세정되고 그리고 진공 하에서 건조된다.
실시예 6
실시예 4에서 수득된 펩티딜 수지 상에 R 1 아세틸기를 도입하는 과정.
실시예 4에서 수득된 0.12 mmol 또는 0.14 mmol의 펩티딜 수지는 용매로 2 mL의 DMF를 사용하여 25 당량의 DIEA의 존재 하에서 25 당량의 아세트산 무수물로 처리된다. 본 혼합물은 30 분 동안 반응되도록 하고, 그 후 수지는 DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min), 디에틸 에테르 (3 x 1 min)로 세정되고 그리고 진공 하에서 건조된다.
실시예 7
실시예 4, 5 및 6에서 수득된 펩티딜 수지의 중합체 지지체로부터 절단 과정.
실시예 4, 5 및 6에서 수득된 각각의 건조된 펩티딜 수지는 교반하에서 2 시간 동안 실온에서 3 mL의 TFA:H2O (95:5, v/v)로 처리된다. 그런 다음 이것은 다공성 폴리에틸렌 디스크가 구비된 폴리프로필렌 주사기를 통해 여과된다. 여액은 20 mL의 차가운 디에틸 에테르 상으로 수집되고 10 ml 디에틸 에테르로 5회 세정된다. 최종 여액은 진공 하에서 건조된다.
R1이 H, 아세틸 또는 팔미토일이고, m, n, p 및 q 각각은 0인 일반 식 R1-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-OH 또는 R1-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Y p -Z q -NH2의 펩타이드가 이 방법에 따라 수득된다.
H2O (+0.1% TFA) 내 MeCN (+0.07% TFA)의 구배에서 수득된 펩타이드의 HPLC 분석은 모든 경우에서 80%를 초과하는 순도를 나타냈다. 수득된 펩타이드의 동일성은 ESI-MS에 의해 확인된다.
실시예 8
중합체 지지체로부터 절단 과정 및 R 2 치환된 아민으로 작용화: AA 1 이 L-Phe이고; AA 2 가 L-Trp이고; AA 3 이 L-Met이고; AA 4 가 L-Lys이고; AA 5 가 L-Arg이고; AA 6 이 L-Lys이고; AA 7 이 L-Arg이고; AA 8 이 L-Val이고; AA 9 가 결합 또는 L-Pro이고; 그리고 m, n, p 및 q 각각은 0인, H-Wm-Xn -AA 1 -AA 2 -AA 3 -AA 4 -AA 5 -AA 6 -AA 7 -AA 8 -AA 9 -Y p -Z q -NH-(CH 2 ) 5 -CH 3 수득.
완전하게 보호된 측쇄를 갖는 펩타이드 H-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9 - Y p -Z q -OH가 KOH의 존재에서 진공 하에서 이전에 건조시킨, 실시예 4에서 수득된 299 mg의 펩티딜 수지 H-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Y p -Z q -O-2-ClTrt-(R)를 처리함에 의해 수득된다. 2 시간 동안 2.03 ml AcOH로 처리된 액상은 여과를 통해 분리된다. 여액은 수집되고 수지는 그런 다음 1 ml AcOH (1 x 1 min)로 세정된다. 모든 액상은 조합되고 동결건조된다.
0.03 mmol의 수득된 조 펩타이드가 플라스크에서 칭량되고 3 당량의 헥실아민. HOBt 및 2 mL의 무수 DMF가 첨가된다. 4 당량의 DIPCDI가 첨가되고, 자석 교반하에서 47℃에서 반응되도록 하였다. 상기 반응은 초기 생성물이 사라질 때까지 HPLC로 모니터링되고, 2-4 시간 후 완료한다. 용매는 증발 건조되고 그리고 DCM로 2회 동시-증발된다. 수득된 잔사는 4 mL의 TFA:H2O (95:5, v/v)의 혼합물에 용해시키고 2 시간 동안 실온에서 반응되도록 한다. 30 mL의 차가운 디에틸 에테르가 첨가되고, 침전물은 디에틸 에테르로 2회 세정된다. 잔사는 H2O 내 MeCN (v/v)의 혼합물에 용해되고 동결건조된다.
H2O (+0.1% TFA) 내 MeCN (+0.07% TFA)의 구배에서 수득된 펩타이드의 HPLC 분석은 모든 경우에서 80%를 초과하는 순도를 나타냈다. 수득된 펩타이드의 동일성은 ESI-MS에 의해 확인된다.
실시예 9
중합체 지지체로부터 절단 과정 및 R 2 치환된 아민으로 작용화: AA 1 이 L-Phe이고; AA 2 가 L-Trp이고; AA 3 이 L-Met이고; AA 4 가 L-Lys이고; AA 5 가 L-Arg이고; AA 6 이 L-Lys이고; AA 7 이 L-Arg이고; AA 8 이 L-Val이고; AA 9 가 결합 또는 L-Pro이고; 그리고 m, n, p 및 q 각각은 0인, H-Wm-Xn-AA 1 -AA 2 -AA 3 -AA 4 -AA 5 -AA 6 -AA 7 -AA 8 -AA 9 -Y p -Z q -NH-(CH 2 ) 15 -CH 3 수득.
완전하게 보호된 측쇄를 갖는 펩타이드 H- Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8 -AA9- Y p -Z q -OH가 KOH의 존재에서 진공 하에서 이전에 건조시킨, 실시예 4의 299 mg의 각각의 펩티딜 수지 H- Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Y p -Z q -O-2-ClTrt-(R)를 처리함에 의해 수득된다. 2 시간 동안 2.03 ml AcOH로 처리된 액상은 여과를 통해 분리된다. 여액은 수집되고 수지는 그런 다음 1 ml AcOH (1 x 1 min)로 세정된다. 모든 액상은 조합되고 동결건조된다.
0.03 mmol의 수득된 조 펩타이드가 플라스크에서 칭량되고 3 당량의 헥실아민.HOBt 및 2 mL의 무수 DMF가 첨가된다. 2 당량의 DIPCDI가 첨가되고, 자석 교반하에서 47℃에서 반응되도록 하였다. 상기 반응은 초기 생성물이 사라질 때까지 HPLC로 모니터링되고, 2-4 시간 후 완료한다. 용매는 증발 건조되고 그리고 DCM로 2회 동시-증발된다. 수득된 잔사는 54 mL의 TFA:H2O (95:5, v/v)의 혼합물에 용해시키고 2 시간 동안 실온에서 반응되도록 한다. 30 mL의 차가운 디에틸 에테르가 첨가되고, 침전물은 디에틸 에테르로 2회 세정된다. 잔사는 H2O 내 MeCN (v/v)의 혼합물에 용해되고 동결건조된다.
H2O (+0.1% TFA) 내 MeCN (+0.07% TFA)의 구배에서 수득된 펩타이드의 HPLC 분석은 모든 경우에서 80%를 초과하는 순도를 나타냈다. 수득된 펩타이드의 동일성은 ESI-MS에 의해 확인된다.
실시예 10:
실시간 PCR 어레이를 사용하여 성인으로부터의 동조화된 인간 표피 각질형성세포 (HEKa)에서 JARID1A 유전자 발현의 시험관내 연구.
일주기 시계에 관여된 단백질은 JARID1A로 불리는 히스톤 라이신 탈메틸효소 단백질이다. JARID1A 단백질은 CLOCK-BMAL1과 복합체를 형성하여 PER 유전자의 전사를 활성화시킨다. Jarid1A의 감소된 발현은 PER 유전자의 낮아진 발현 및 변경된 일주기 리듬으로 이어진다. 그 다음, 이른 아침에서 Jarid1A의 활성화 및 시계 유전자 발현은 생물학적 주기에서 진전으로 이어질 수 있어 매일의 피부 기능성을 부여할 수 있다. 따라서, 이 연구의 주요 목적은 동조화된 인간 각질형성세포에서 이른 아침에 일부 펩티드의 Jarid1A 발현을 증가시키는 능력을 평가하는 것이다.
HEKa 세포 (Life Technologies)는 12-웰 플레이트 내에 3.0 x 105 세포/웰로 씨딩되고 (조건 당 2개 웰들) 혼합 C39016-CaCl2 용액 (Promocell)이 보충된, 각질형성세포 성장 배지인 배양 배지에서 인큐베이션된다. 동기화를 위해, 세포는 5% CO2 가습된 공기에서 37 ℃에서 (낮 방식) 그리고 5% CO2 가습된 공기에서 33℃에서 (밤 방식) 각각 12 시간의 2 교대 주기를 거쳤다. 동기화 시작 12 시간 후, 세포는 각각의 펩타이드의 독성 효과에 따라 배양 배지에서 0.5 mg/ml 또는 (5μg/ml)의 펩타이드와 함께 인큐베이션된다 (무독성 조건이 선택됨). 배지 단독으로 처리된 세포는 기저 조건으로 사용된다.
동기화의 종료 시, 세포 용해물은 2개의 상이한 시간: 7:30 시간 (이른 아침 지점) 및 11:30 시간 (정오 지점)에서 수집된다. 간단히, 세포는 웰에 직접적으로 용해되고, 제조자의 프로토콜에 따라 RNeasy Mini 키트 (Qiagen)에 기재된 프로토콜에 따라 RNA를 정제한다. RNA 용출 후, RNA 샘플의 순도의 정량화 및 분석이 나노드롭 (Thermo)으로 수행된다. 각각의 샘플에 대해, 3 μg의 고품질 RNA가 최종 부피 20 μl의 iScript Advanced (BioRad)로 역전사된다. 완전한 반응 혼합물이 42℃에서 30 분 동안 열주기장치 (Eppendorf)에서 인큐베이션되고, 85℃에서 5 분 동안 반응은 중단된다. 상보성 DNA는 SYBR® Green (BioRad)과 함께 사용하기 위해 96-웰 플레이트에서 SYBR Green Supermix (BioRad)를 사용하여 실시간 PCR 열순환기 (BioRad)에서 qPCR에 의해 증폭된다. SYBR Green은 이중-가닥 DNA 분자에 결합하여 정량화된 형광을 방출하고, 형광 강도는 PCR 반응에서 생성물의 양에 비례한다. BioRad CFX96 기기의 사이클링 조건은: 3 분 동안 95℃, 이어서 5 초 동안 95℃에서 40 사이클의 변성, 30 초 동안 60℃에서 어닐링 및 연신이다. GAPDH (글리세르알데하이드 3-포스페이트 탈수소효소), TBP (TATA 박스 결합 단백질) 및 HRPT1 (하이포잔틴 포스포리보실전달효소 1)이 내인성 대조군으로서 사용된다. 샘플 유전자 및 참조 유전자의 발현에 대한 배수 변화는 CFX 매니저 소프트웨어 (BioRad)를 사용하여 정규화된 발현 (ΔΔ(Ct)) 방법을 사용하여 계산된다.
시험된 샘플에 대한 7:30 시간에서 기저 조건에 대한 7:30 시간에서 JARID1A 유전자의 배수 유도는 표 7에 나타나 있다. 배수 유도에 대한 데이터는 하나의 실험의 값을 나타낸다.
Figure pct00008
Figure pct00009
표 7에서의 결과는 본 발명의 펩타이드가 동조화된 인간 각질형성세포에서 이른 아침에 JARID1A 발현을 증가시킬 수 있음을 나타낸다.
실시예 11
JARID1A 단백질의 시험관내 연구는 비색계 검출에 기초한 ELISA 검정을 사용한 동조화된 인간 각질형성세포 상에 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH 2 (PEP-1)에 의한 단백질 수준을 증가시킨다.
많은 피부 기능은 일주기 리듬을 따른다: 피지 분비는 정오 경에 피크를 가지며 커패시턴스 (피부 수화의 측정)는 낮에 일찍 낮아진다. 피부 혈류 및 피부 장벽 기능은 또한 낮에 일찍 낮은 피하 혈류와 오후 늦게 및 늦은 저녁에 피크를 갖는 일주기 및 초일주기 (일보다 더 짧은 재발의 기간을 가짐) 리듬을 나타낸다.
포유 동물에서, 일주기 시계는 대부분의 모든 조직에서 발견되며, 피드백 조절 루프에 기초하며, 여기서 CLOCK-BMAL1 복합체는 하루 동안 일주기 시계 유전자 (예컨대 PER 및 CRY)의 전사를 구동한다. 일주기 시계에 관여된 단백질은 JARID1A 단백질이라고 불리는 히스톤 라이신 탈메틸효소 단백질이다. JARID1A 단백질은 CLOCK-BMAL1과 복합체를 형성하여 PER 유전자의 전사를 활성화시킨다. 이른 아침 피부에서 Jarid1A 발현의 활성화는 생물학적 주기의 전진으로 이어질 수 있어 이른 아침 피부에 매일의 피부 기능성을 부여하는 것으로 여겨진다. 따라서 이 연구의 주요 목표는 인간 각질형성세포가 낮-밤주기 후에 동조화될 수 있는 (일주기 리듬 사이클의 동일한 단계에서 동시에 진입함) 실험 모델에서 이른 아침에 Jarid1A 단백질 발현을 증가시키는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)의 능력을 평가하는 것이다.
HaCaT 세포 (인간 각질형성세포 세포주, Deutsches Krebsforschungszentrum)가 12-웰 플레이트 내에 200.000 세포/웰 (조건 당 2개 웰들)의 밀도로 씨딩된다. 세포는 10% (용적/용적) 우태 혈청 (Cultek)이 보충된 배양 배지 둘베코 변형 이글 배지 하이 글루타맥스 (Fisher Scientific)에 씨딩된다. 세포 온도 동기화를 위해, 세포는 5% CO2 가습된 공기에서 37 ℃에서 (낮 방식) 그리고 5% CO2 가습된 공기에서 33℃에서 (밤 방식) 각각 12 시간의 2 교대 주기를 거쳤다. 동기화 시작 12 시간 후, 세포는 배양 배지에서 0.5 mg/ml 용액의 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)로 처리된다. 동시에, 배양 배지 단독으로 처리는 기저 조건으로 사용된다.
동기화의 종료 시, 세포 용해물은 2개의 상이한 시간: 7:30 시간 (이른 아침 지점) 및 11:30 시간 (정오 지점)에서 수집된다. 간단히, 세포 용해물은 2개의 동결 및 해동 주기를 거쳐 핵막을 분해하고 Jarid1A 단백질을 방출한다. 핵 추출물을 분석하여 JARID1A 단백질의 수준 및 총 단백질 농도를 정량화하였다.
ELISA (효소-결합 면역흡착 검정) 테스트로 JARID1A 단백질 수준 (KDM5A)의 측정
JARID1A 단백질은 제조자의 프로토콜에 따라 효소 연결된 면역흡착 검정 (인간 라이신-특이적 탈메틸효소 5A (KDM5A) (CUSABIO)을 사용하여 정량화된다. 간단히 말해서, JARID1A 단백질은 키트에 제공된 항체로 검출되고 비색계 반응에 의해 정량화된다. 흡광도 정량화는 450nm 및 570nm로 설정된 마이크로플레이트 판독기 (ClarioStar®, BMG)를 사용하여 수행된다. 파장 정정을 위해, 570 nm에서의 판독치가 450 nm에서의 판독치로부터 공제되었다.
BCA 검정 ( 비시코닌산 )에 의한 총 단백질의 결정
세포 용해물의 총 단백질 농도는 Pierce BCA 단백질 검정 키트 (Thermo Scientific)를 사용하여 결정된다. 간단히, 표준 및 샘플이 분배되고 작동 시약이 샘플에 첨가된다. 60℃에서 인큐베이션 30 분 후, 색상의 변화가 562 nm에서 흡광도 마이크로플레이트 판독기 (Clariostar®, BMG)로 측정된다. 총 단백질 양은 샘플에서 ELISA 시험에 의해 수득된 JARID1A 단백질 농도의 수준을 표준화하는데 사용된다.
기저 조건에 대한 JARID1A 단백질의 백분율은 표 8에 제시되어 있다. 결과는 적어도 6가지 상이한 검정에 대한 기저 조건에서 7:30 시간에서 JARID1A 단백질 수준에 대해 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)로 처리 후 7:30 시간에 JARID1A 단백질 수준에 대한 백분율의 평균을 나타낸다.
Figure pct00010
표 8에서의 결과는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)가 기저 조건에서 동일한 시간에 관하여 동조화된 인간 각질형성세포에서 7:30 시간에 JARID1A 단백질 수준을 증가시킬 수 있음을 나타낸다.
실시예 12
비색계 검출에 기초한 검정을 사용한 미토콘드리아 복합체 I 활성의 억제.
미토콘드리아는 세포 내부의 에너지 생산을 담당하는 중심 소기관으로, ATP (아데노신 트리포스페이트)의 형태로 세포 에너지의 약 90 %를 생성한다. 이 과정은 전자 전달계 (ETC)를 이 구조에 걸친 양성자 플럭스로 인해 ATP 합성에 결합하는 복잡한 구조인, 미토콘드리아의 내막 내에서 발생한다. ETC는 NADH 및 FADH2 (당분해 및 시트르산 사이클 동안 생성됨)에서 산소 분자로의 전자 수송을 담당하여, 이 과정의 말단에서 H2O로 환원된다. ECT는 4가지 상이한 단백질 복합체로 구성된다. 복합체 I (NADH 탈수소효소)에서, 전자는 NADH에서 전자 전달계로 전달되며, 여기에서 이들은 나머지 복합체를 통해 흐른다. 그 결과, 미토콘드리아 복합체 I 활성은 NAD로 NADH 산화를 촉발시킨다.
미토콘드리아는 전자 전달계 기능의 결과로서 반응성 산소 종 (ROS)의 생성으로 인해 노화 과정 동안 중요한 역할을 한다. 지난 몇 년 동안, 미토콘드리아 복합체 I 활성의 부분적인 억제가 벌레에서부터 포유동물로 잘 보존된 과정인, 수명을 연장시키는 것으로 입증되었다. 실제로, 미토콘드리아 복합체 I 활성의 상이한 억제제 (즉, 메트포르민, 로테논)로의 치료는 노화 과정을 늦춘다. 따라서, 미토콘드리아 복합체 I 활성의 부분 감소는 미용 분야의 노화 방지 성분에 대한 새로운 표적으로서 사용될 수 있다. 이 실험의 주요 목적은 인간 진피 섬유모세포에서 미토콘드리아 복합체 I 활성을 부분적으로 감소시키는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)의 능력을 평가하기 위한 것이다.
성인으로부터 인간 진피 섬유모세포 (HDFa, Life Technologies)가 저혈청 성장 보충물 (Life Technologies)을 갖는 배양 배지 M106에 750.000 세포/75 cm2 플라스크 (조건당 1개 플라스크)의 밀도로 씨딩된다. 세포는 37℃에서 5% CO2 가습된 공기에서 8 일 동안 성장된다. 그런 다음, 배지는 제거되고 세포는 37℃에서 5% CO2 가습된 공기에서 48 시간 동안 배양 배지 내에 1, 0.5 및 0.1 mg/ml로 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)의 스칼라 희석으로 처리된다. 배양 배지 단독에서 인큐베이션된 비-처리된 세포가 기저 조건으로 사용된다. 양성 대조군으로, 세포는 배양 배지에서 제조된 10 mM 메트포르민 (Sigma)으로 처리되는데, 이는 이 화합물이 미토콘드리아 복합체 I 활성을 부분적으로 억제하는 것으로 알려져 있기 때문이다. 처리 48 시간 후, 세포는 트립신을 사용하여 탈착되고 60ul의 인산염 버퍼 염수 (Sigma)에서 재현탁된다. 총 단백질 농도는 700-1000 ug/ml 사이로 최종 단백질 농도를 조정하기 위해 제조자의 프로토콜에 따라 Pierce BCA 단백질 검정 키트 (BCA 검정, Thermo Scientific)에 의해 측정된다. 간단히, 표준 및 샘플이 분배되고 작동 시약이 샘플에 첨가된다. 37℃에서 인큐베이션 30 분 후, 흡광도가 562 nm에서 흡광도 마이크로플레이트 판독기 (Clariostar®, BMG)로 측정된다.
미토콘드리아 복합체 I 활성은 제조자의 프로토콜에 따라 복합체 I 효소 활성 마이크로플레이트 검정 키트 (Abcam)로 측정된다. 이 검정은 특이적 비색계 염료의 환원에 커플링된 NAD로 NADH의 산화에 따르고, 이것은 450nm에서 흡광도의 증가를 초래한다. 간단히 말해서, 200ul의 각각의 샘플 (700-1000 ug/ml의 총 단백질 양으로 조정됨)은 3 시간 동안 인큐베이션된다. 그 후, 웰들은 수회 세정되고 키트에 제공된 검정 용액 (NADH 및 특이적 염료로 구성됨)으로 인큐베이션된다. 미토콘드리아 복합체 I 활성의 결정을 위해, 1 시간에 따른 동력학 반응에서 450nm에서 광학 밀도 (OD)의 비색계 증가는 마이크로플레이트 판독기 (Clariostar®, BMG)로 측정된다. 결과는 경시적으로 선형 구역에서 두 지점 사이에서 450nm에서 OD의 증가율로 계산된다.
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)로 처리한 후 기저 조건에 대한 미토콘드리아 복합체 I 활성의 백분율은 표 9에 제시되어 있다. 이들 값은 적어도 3가지 독립적인 검정에 대한 평균을 나타낸다.
Figure pct00011
결과는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)가 시험된 농도에서 인간 진피 섬유모세포 세포 배양에서 미토콘드리아 복합체 I 활성을 감소시킬 수 있다는 것을 나타낸다. 미토콘드리아 복합체 I 활성의 억제는 용량-반응 효과를 나타내고 피부에서 노화 과정의 지연에 유익한 효과를 부여한다.
실시예 13
비색계 검출에 기초한 검정을 사용한 미토콘드리아 복합체 II 활성에서의 증가의 측정.
ATP 생산은 세포에서 약 90%의 에너지를 생성하는 특화된 소기관인 미토콘드리아의 내막 내에서 일어난다. 이 과정은 전자 전달계 (ETC)를 ATP 합성에 결합하는, 미토콘드리아의 내막 내에서 발생한다. ETC는 NADH 및 FADH2 (당분해 및 시트르산 사이클 동안 생성됨)에서 산소 분자로의 전자 수송을 담당하여, 이 과정의 말단에서 H2O로 환원된다. ECT는 4가지 상이한 단백질 복합체로 구성된다. 석시네이트-조효소 Q 환원효소 (SDH)로도 알려져 있는 미토콘드리아 복합체 II는 석시네이트로부터 유비퀴논 (Q)으로 전자 이동을 촉매하여, 유비퀴놀 (QH2)의 생산을 초래한다.
미토콘드리아 기능은 전자 전달계 효율의 진행성 손실에 기인하여 노화 과정과 연결된다. 사실상, 미토콘드리아 복합체 II 활성은 인간 진피 섬유모세포에서 노화에 따라 감소하여, 진행성 미토콘드리아 기능이상으로 이어지는 것이 나타났다. 그런 다음, 미토콘드리아 복합체 II 활성을 증가시키는 것은 신규한 피부 항노화 치료를 개발하기 위한 신규한 전략으로서 사용될 수 있다. 이 검정의 주요 목적은 인간 진피 섬유모세포에서 미토콘드리아 복합체 II 활성을 증가시키는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)의 능력을 평가하기 위한 것이다.
성인으로부터 인간 진피 섬유모세포 (HDFa, Life Technologies)가 저혈청 성장 보충물 (Life Technologies)을 갖는 배양 배지 M106에 750.000 세포/75 cm2 플라스크 (조건당 1개 플라스크)의 밀도로 씨딩된다. 세포는 37℃에서 5% CO2 가습된 공기에서 7 일 동안 성장된다. 그런 다음, 배지는 제거되고 세포는 37℃에서 5% CO2 가습된 공기에서 24 시간 동안 배양 배지 내에 1, 0.5 및 0.1 mg/ml로 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)의 스칼라 희석으로 처리된다. 배양 배지 단독에서 인큐베이션된 처리되지 않은 세포가 기저 조건으로 사용된다. 처리 24 시간 후, 세포는 트립신을 사용하여 탈착되고 40ul의 인산염 버퍼 염수 (Sigma)에서 재현탁된다. 총 단백질 농도는 2500-3000 ug/ml 사이로 최종 단백질 농도를 조정하기 위해 제조자의 프로토콜에 따라 Pierce BCA 단백질 검정 키트 (BCA 검정, Thermo Scientific)에 의해 측정된다. 간단히, 표준 및 샘플이 분배되고 작동 시약이 샘플에 첨가된다. 37℃에서 인큐베이션 30 분 후, 흡광도가 562 nm에서 흡광도 마이크로플레이트 판독기 (Clariostar®, BMG)로 측정된다.
미토콘드리아 복합체 II 활성은 제조가의 프로토콜에 따라 복합체 II 효소 활성 마이크로플레이트 검정 키트 (Abcam)로 측정된다. 이 검정은 특이적 비색계 염료 (DCPIP, 2,6-디클로로페놀인도페놀)의 환원에 커플링된 유비퀴놀 (QH2; 미토콘드리아 복합체 II에 의해 생산됨)의 생산에 따른다. 간단히 말해서, 50ul의 각각의 샘플 (2500-3000 ug/ml의 총 단백질 양으로 조정됨)은 2 시간 동안 인큐베이션된다. 그 후, 웰들은 수회 세정되고 키트에 제공된 활성 용액 (유비퀴논, 석시네이트 및 DCPIP로 구성됨)으로 인큐베이션된다. 미토콘드리아 복합체 II 활성의 결정을 위해, 30분에 따른 동력학 반응에서 600nm 광학 밀도 (OD)에서 DCPIP의 비색계 감소는 마이크로플레이트 판독기 (Clariostar®, BMG)로 측정된다. 결과는 경시적으로 선형 구역에서 두 지점 사이에서 600nm OD에서 흡광도의 감소율로 계산된다.
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)로 치료 후 기저 조건에 대한 미토콘드리아 복합체 II 활성의 백분율은 표 10에 제시되어 있다. 이들 값은 적어도 3가지 독립적인 검정에 대한 평균을 나타낸다.
Figure pct00012
결과는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)가 시험된 농도에서 인간 진피 섬유모세포 세포 배양에서의 미토콘드리아 복합체 II 활성을 증가시킬 수 있어 피부의 유익한 항노화 효과로 이어질 수 있다는 것을 나타낸다.
실시예 14
면역형광 검정에 의한 인간 진피 섬유모세포 (HDFa)에서 미토콘드리아 막 전위를 증가시키는 시험관내 연구.
미토콘드리아는 세포 대사에서 생명 유지 관련 역할을 담당하는 세포내 소기관이다. 미토콘드리아 막 전위 (MMP)는 이 구조에서 전자 전달계의 정상적인 기능에 의해 생성된 내부 미토콘드리아 막을 가로 지르는 전위의 척도이다. MMP는 많은 미토콘드리아 과정과 고도로 연관되어 있다. 구체적으로, MMP는 세포의 주요 에너지 원인 아데노신 트리포스페이트 (ATP) 합성의 직접적인 바이오마커이다. 이러한 이유로 MMP를 증가시킬 수 있는 제품은 세포에 에너지를 공급하고 피부 기능을 향상시킬 수 있다. 이 실험의 주요 목적은 인간 진피 섬유모세포에서 미토콘드리아 막 전위를 증가시키는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)의 능력을 평가하는 것이다.
성인으로부터 인간 진피 섬유모세포 (HDFa, Life Technologies)가 96-웰 플레이트에 6,000 세포/웰 (조건당 3개 웰들)의 밀도로 씨딩된다. 세포는 저혈청 성장 보충물 (Life Technologies)을 갖는 배양 배지 M106에서 37℃에서 5% CO2 가습된 공기에서 24 시간 동안 성장된다. 그런 다음, 배양 배지는 제거되고 세포는 37℃에서 5% CO2 가습된 공기에서 16 시간 동안 10% (부피/부피)의 우태 혈청 (FBS, Cultek)으로 보충된 둘베코 변형 이글 배지 (Life Technologies)에 용해된 0.5 mg/ml로 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)로 처리된다. 배지 단독에서 인큐베이션된 처리되지 않은 세포가 기저 조건으로 사용된다.
처리 16 시간 후, 세포는 제조자의 프로토콜에 따라 JC-1 미토콘드리아 막 전위 검정 키트 (Abcam)를 사용함에 의해 미토콘드리아 막 전위를 정량하기 위해 사용된다. 간단히, 세포는 37˚C, 5% CO2에서 30 분 동안 0.5 mg/ml의 펩타이드로 처리의 존재에서 보충된 희석 완충액으로 제조된 JC-1 작업 용액으로 인큐베이션된다. 나중에, 세포는 수회 세정되고 37˚C, 5% CO2에서 2.5 시간 동안 보충된 희석 완충액에 용해된 상응하는 처리로 인큐베이션된다 (각각의 처리는 항상 검정 동안 존재함). JC-1 염료는 높은 막 전위를 갖는 건강한 미토콘드리아에서 응집되거나 (초분극화; 활성화된 세포) 감소된 막 전위를 갖는 미토콘드리아에서 단량체로서 존재하는 경우 (탈분극; 비-활성화된 세포) 각각 적색 또는 녹색으로 형광을 발한다.
세포는 이미지화되고 미토콘드리아 막 전위는 Operetta® 높은 함량 이미지형성 시스템 (PerkinElmer, Inc)을 사용하여 측정된다. 활성화된 세포에서, 적색 응집체가 나타나고 520-550 nm로 여기될 때 염료는 560-630 nm에서 방출한다. 탈분극된 세포에서, 460-490 nm로 여기될 때 염료는 500-550 nm에서 방출한다. 세포 수는 dsDNA에 결합될 때 460nm에서 청색 형광을 방출하고 350nm에서 여기되는 세포-투과성 핵 대조염색인, Hoechst 33342 (ThermoFisher Scientific) 염색을 사용하여 정량화된다. 각각의 이미지에 대해, 활성화되고 탈분극된 세포로부터의 형광 강도가 핵의 수에 대해 정량화되고 정규화된다.
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)로 치료 후 기저 조건에 대비한 미토콘드리아 막 전위의 백분율의 평균은 표 1에 제시되어 있다. 이들 값은 적어도 4가지 독립적인 검정에 대한 값을 나타낸다.
Figure pct00013
결과는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)가 시험된 농도에서 미토콘드리아 막 전위를 증가시킴에 의해 인간 진피 섬유모세포를 활성화할 수 있다는 것을 나타낸다.
실시예 15
형광 접근법에 의한 인간 진피 섬유모세포 (HDFa)에 대한 반응성 산소 종 (ROS) 수준의 평가.
세포 대사는 세포가 성장 및 재생하고, 그 구조를 유지하며 환경 변화에 반응할 수 있게 하는 광범위한 화학 반응을 포함한다. 산소 대사의 결과로, 세포는 반응성 산소 종 (ROS)이라고 불리는 여러 가지 천연 부산물을 생성한다. ROS는 하이드록실 라디칼, 초과산화물 음이온, 과산화수소, 및 퍼옥시아질산염을 포함하는 고 반응성 산소 분자이다. 세포질 ROS 수준은 화학물질, 이온화 방사선 및 박테리아 또는 바이러스성 감염의 노출을 포함하여 다른 외부 공급원에 의해 증가될 수 있다.
정상적인 세포 대사 동안, ROS 수준은 몇몇 내인성 산화방지제 효소 (즉 초과산화물 디스무타제, 카탈라제 및 글루타티온 페록시다아제)의 서브셋에 의해 제어된다. 그러나, 산화적 스트레스-관련 상태 동안에, ROS는 세포 내부에 축적되고 해독 회복 기전은 세포 생존력을 유지하기에 충분하지 않다 미토콘드리아는 그 자체의 기능으로 인해 세포 내부 ROS의 주요 원천이다. 또한 미토콘드리아 스트레스를 유발하거나 이의 기능을 향상시키는 화학물질은 ROS 수준을 증가시킬 수 있다. 이러한 이유로, ROS 수준의 측정은 상이한 화학적 노출에 대한 산화적 스트레스 상태의 양호한 예측변수이다. 이 실험의 주요 목적은 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1.)가 인간 진피 섬유모세포 세포주에서 ROS 수준을 증가시키지 않음을 확인하는 것이다.
성인으로부터 인간 진피 섬유모세포 (HDFa, Life Technologies)가 저혈청 성장 보충물 (LSGS, Life Technologies)을 갖는 배양 배지 M106에서 96-웰 플레이트에 10,000 세포/웰 (조건당 3개 웰들)의 밀도로 씨딩된다. 세포는 37℃에서 5% CO2 가습된 공기에서 24 시간 동안 성장된다. 그런 다음, 배지는 제거되고 세포는 37℃에서 5% CO2 가습된 공기에서 16 시간 동안 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)로 처리된다. 배지 단독에서 인큐베이션된 처리되지 않은 세포가 기저 조건으로 사용된다. 양성 대조군으로, 세포는 인산염 버퍼 염수 (PBS, Sigma)에서 제조된 10 μl 과산화수소 (H2O2; Sigma) 0.5 mM로 처리되는데, 이는 이 화합물이 ROS 수준을 증가시키는 것으로 잘 알려져 있기 때문이다. 37℃에서 5% CO2 가습된 공기에서 30 분 후, 세포는 ROS 수준을 정량화하기 위해 사용된다.
ROS 수준은 제조자의 프로토콜에 따라 세포 반응성 산소 종 검출 검정 키트 (Abcam)을 사용하여 정량화된다. 간단히 말해서, 세포는 배양 배지에서 60 분 동안 100 μl의 ROS 오렌지 작업 용액으로 처리된다. 그 기간 후, 형광 신호는 Operetta® 공초점 현미경 (PerkinElmer, Inc)을 사용하여 결정된다. 형광 강도는 Mitotracker 오렌지 채널 (여기 필터: 520-550nm/방출 필터: 560-630nm)을 사용하여 측정되고 웰당 핵의 수의 결정에 의해 정정된다. 이 정량화를 위해, 세포는 dsDNA에 결합될 때 460nm에서 청색 형광을 방출하고 350nm에서 여기되는 세포-투과성 핵 대조염색인, Hoechst 33342 (ThermoFisher Scientific)의 용액 10 μl로 염색된다.
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)로 치료 후 기저 조건에 대한 인간 진피 섬유모세포에서 ROS 수준의 백분율은 표 12에 제시되어 있다. 이들 값은 적어도 3가지 독립적인 검정에 대한 평균을 나타낸다.
Figure pct00014
결과는 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)로의 치료가 미토콘드리아 막 전위에서의 증가에 의해 나타난 바와 같이 인간 진피 섬유모세포의 에너지를 증진하지만, 본 치료는 시험된 농도에서 세포 내 ROS 수준을 증가시키기 않는다는 것을 나타낸다.
실시예 16
동조화된 인간 전체-두께 피부 모델에서 수화 수준의 측정.
많은 필수적인 피부 기능은 일주기 리듬을 따른다: 피지 분비는 정오 경에 피크를 가지며, 피부 혈류 및 피부 장벽은 이른 아침에 낮고 오후 늦게 피크에 이른다. 온도 및 수화는 또한 하루 종일 피부에서 시간-의존적 패턴을 나타낸다. 이른 아침에 낮은 수준의 피부 수화는 정오 경에 증가된다. 피부 수화는 피부 조직 항상성을 유지하는 가장 중요한 인자 중 하나이다. 피부에서 적절한 수분 함량은 각질형성세포 층 내의 많은 생명 유지 관련 기능 예컨대 지질 층 완전성, 피부 장벽 기능의 보강 및 각질층의 기능적 및 구조적 조성물을 조절한다. 햇빛에 노출, 불량한 식이 요법 및 피부 관리 습관은 피부 탈수, 노화 촉진, 콜라겐의 파괴 및 인상 라인 및 주름의 형성으로 이어진다. 결과적으로 건조 피부는 비활동적이고 우울한 모습을 보인다.
표피 피부 수화는 다른 피부 성분에 대비한 수분 함량에 의존적인 피부의 전기 특성인 피부의 커패시턴스를 측정함으로써 평가될 수 있다. 이 실험의 주요 목적은 동조화된 인간 피부 모델에서 수화 수준을 개선하는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)의 능력을 평가하는 것이다.
도착하자마자, Phenion® 전체-두께 피부 모델 (HENKEL)은 ALI 배지 (HENKEL)에서 공급자의 지침에 따라 페트리 디쉬 (조건당 5개 피부 모델)에 배치된다. 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션 72 시간 후, 동기화 프로토콜이 초기화된다. 이러한 목적을 위해, 피부 모델은 5% CO2 가습된 공기에서 37 ℃에서 (낮 방식) 그리고 5% CO2 가습된 공기에서 33℃에서 (밤 방식) 각각 12 시간의 2 교대 주기를 거쳤다. 동기화의 개시에서, 7:30 시간에서 수화의 전-처리 측정이 피부 모델에서 시험된다. 표피의 수화 측정은 DPM 9003 BTTM (NOVA® Technology Corporation) 및 MoistureMeter SC (Delphin)로 수행된다. 전-처리 측정을 위해, 피부 모델의 표면은 5 mL의 포스페이트 완충 식염수 (PBS, Sigma)로 세정된다. 그런 다음, 이들은 피부 모델의 상기 표면에 대해 센서를 눌러 측정을 수행하는 건조 멸균 표면에 배치된다. 전-처리 측정 후, 피부 모델은 모델의 상기 표면 (50μl의 치료) 내 및 배지 함유 페트리 디쉬 내 양자에 0,5mg/ml로 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)로 처리된다. 배지 단독으로 처리된 피부 모델은 기저 대조군 조건으로 사용된다. 이 치료는 동일한 조건에서 24 시간 후 대체된다. 48 시간의 치료 후, 수화 측정은 전-처리 측정에 대해 기술된 동일한 프로토콜에 따라 오전 7:30 시간 및 11:30 시간에 수행된다.
표 13의 결과는 기저 조건에서의 수화 수준에 대한 치료의 48 시간 후 7:30 시간에서 수화 수준의 백분율의 평균을 나타낸다. 각각의 조건에 대해, 수화의 미가공 데이터 수준의 사전-정규화는 전-처리 값에 관하여 수행된다. 이들 값은 하나의 검정에 대해 계산된다. 수화 측정은 DPM9003 BTTM (NOVA® Technology Corporation)으로 수행된다.
Figure pct00015
표 14의 결과는 동시에 기저 조건에서의 수화 수준에 대한 치료의 48 시간 후 7:30 시간에서 수화 수준의 백분율의 평균을 나타낸다. 각각의 조건에 대해, 수화의 미가공 데이터 수준의 사전-정규화는 전-처리 값에 관하여 수행된다. 이들 값은 하나의 검정에 대해 계산된다. 수화 측정은 MoistureMeter SC (Delphin)로 수행된다.
Figure pct00016
표 13 및 표 14의 결과는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)가 동조화된 인간 피부 모델에서 7:30 시간에서 수화 수준을 증가시킬 수 있다는 것을 나타낸다. 치료 후 7:30 시간에서 수화 수준은 기저 조건에서 11:30 시간에서 수화의 결과와 비교하여 중간 값을 나타냈다.
실시예 17
실시간 PCR 검정을 사용한 성인으로부터 동조화된 인간 표피 각질형성세포 (HEKa)에서 시계 유전자 발현의 시험관내 연구.
많은 피부 기능은 일주기 리듬을 따른다: 피지 분비는 정오 경에 피크를 가지며 커패시턴스 (피부 수화의 측정)는 낮에 일찍 낮아진다. 피부 혈류 및 피부 장벽 기능은 또한 낮에 일찍 낮은 피하 혈류와 오후 늦게 및 늦은 저녁에 피크를 갖는 일주기 및 초일주기 리듬을 나타낸다.
포유 동물에서, 일주기 시계는 대부분의 모든 조직에서 발견되며, 피드백 조절 루프에 기초하며, 여기서 CLOCK-BMAL1 복합체는 하루 동안 일주기 시계 유전자 (예컨대 PER 및 CRY)의 전사를 구동한다. 일주기 시계에 관여된 단백질은 Jarid1A라고 불리는 히스톤 라이신 탈메틸효소 단백질이다. Jarid1A는 CLOCK-BMAL1과 복합체를 형성하여 PER 유전자의 전사를 활성화시킨다. Jarid1A의 감소된 발현은 PER 유전자의 낮아진 발현 및 변경된 일주기 리듬으로 이어진다. 그 다음, 이른 아침에서 Jarid1A의 활성화 및 시계 유전자 발현은 생물학적 주기에서 진전으로 이어질 수 있어 매일의 피부 기능성을 부여할 수 있다. 따라서 이 연구의 주요 목표는 동조화된 인간 각질형성세포에서 이른 아침에 시계 유전자 발현을 증가시키는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)의 능력을 평가하는 것이다.
HEKa 세포 (Life Technologies)는 12-웰 플레이트 내에 3.0 x 105 세포/웰로 씨딩되고 혼합 C39016-CaCl2 용액 (Promocell)이 보충된, 각질형성세포 성장 배지인 배양 배지에서 인큐베이션된다. 동기화를 위해, 세포는 5% CO2 가습된 공기에서 37 ℃에서 (낮 방식) 그리고 5% CO2 가습된 공기에서 33℃에서 (밤 방식) 각각 12 시간의 2 교대 주기를 거쳤다. 동기화 시작 12 시간 후, 세포는 배양 배지에서 0.5 mg/ml의 합성 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)로 인큐베이션된다. 배지 단독으로 처리된 세포는 기저 조건으로 사용된다.
동기화의 종료 시, 세포 용해물은 2개의 상이한 시간: 7:30 시간 (이른 아침 지점) 및 11:30 시간 (정오 지점)에서 수집된다. 간단히, 세포는 웰에 직접적으로 용해되고, 제조자의 프로토콜에 따라 RNeasy Mini 키트 (Qiagen)에 기재된 프로토콜에 따라 RNA를 정제한다. RNA 용출 후, RNA 샘플의 순도의 정량화 및 분석이 나노드롭 (Thermo)으로 수행된다. 각각의 샘플에 대해, 3 μg의 고품질 RNA가 최종 부피 20 μl의 iScript Advanced (BioRad)로 역전사된다. 완전한 반응 혼합물이 42℃에서 30 분 동안 열주기장치 (Eppendorf)에서 인큐베이션되고, 85℃에서 5 분 동안 반응은 중단된다. 상보성 DNA는 SYBR® Green (BioRad)과 함께 사용하기 위해 맞춤형 96-웰 플레이트에서 SYBR Green Supermix (BioRad)를 사용하여 실시간 PCR 열순환기 (BioRad)에서 qPCR에 의해 증폭된다. SYBR Green은 이중-가닥 DNA 분자에 결합하여 정량화된 형광을 방출하고, 형광 강도는 PCR 반응에서 생성물의 양에 비례한다. BioRad CFX96 기기의 사이클링 조건은: 3 분 동안 95℃, 이어서 5 초 동안 95℃에서 40 사이클의 변성, 30 초 동안 60℃에서 어닐링 및 연신이다. GAPDH (글리세르알데하이드 3-포스페이트 탈수소효소), TBP (TATA 박스 결합 단백질) 및 HRPT1 (하이포잔틴 포스포리보실전달효소 1)이 내인성 대조군으로서 사용된다. 샘플 유전자 및 참조 유전자의 발현에 대한 배수 변화는 CFX 매니저 소프트웨어 (BioRad)를 사용하여 정규화된 발현 (ΔΔ(Ct)) 방법을 사용하여 계산된다.
기저 조건에 대한 일주기 시계 유전자 CRY2 (크립토크롬 일주기 시계 2) 및 PER3 (기간 일주기 시계 3)의 배수 유도가 표 15 및 표 16에 나타나 있다. 본 값은 적어도 3가지 독립적인 검정에 대한 평균을 나타낸다.
Figure pct00017
Figure pct00018
표 15 및 16의 결과는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)가 기저 조건에서 동일한 시간에 대해 동조화된 인간 각질형성세포 세포 배양에서 7:30 시간에서 CRY2 및 PER3의 발현 수준을 증가시킬 수 있다는 것을 나타낸다. 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)로 치료 후 7:30 시간에서 CRY2 및 PER3 유전자 발현의 양은 11:30 시간에서 기저 조건에서 수득된 CRY2 및 PER3 유전자 발현의 유사한 수준에 도달한다.
실시예 18
실시간 PCR 검정을 사용한 젊은 및 노령 인간 표피 각질형성세포 (HEKa)에서 PER 유전자 발현의 시험관내 연구.
포유 동물에서, 일주기 시계는 대부분의 모든 조직에서 발견되며, 피드백 조절 루프에 기초하며, 여기서 CLOCK-BMAL1 복합체는 하루 동안 일주기 시계 유전자 (예컨대 PER 및 CRY)의 전사를 구동한다. 포유동물 일주기 시계의 파괴는 가속화된 노화를 초래하고 추가로 일주기 리듬은 노화로 더 손상된다. PER 유전자의 녹아웃에 의한 일주기 리듬의 유전적 파괴는 다양한 연령 관련 병리학 및 조로의 가시적인 징후를 유발시킨다. PER 유전자의 발현 수준은 노화로 인간 피부 세포에서 크게 감소된다. 따라서, 이 연구의 주요 목적은 실시간 PCR 검정을 사용한 26세 공여체 및 54세 공여체로부터 인간 각질형성세포에 대해 PER2 및 PER3 유전자 발현을 증가시키는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)의 능력을 평가하기 위한 것이다.
26세 공여체 및 54세 공여체로부터의 인간 표피 각질형성세포, (HEKa) 세포 (Life Technologies)가 12-웰 플레이트 내에 3.0 x 105 세포/웰로 씨딩되고 Mix C39016-CaCl2 용액 (Promocell)으로 보충된 각질형성세포 성장 배지인 배양 배지에서 인큐베이션된다. 동기화를 위해, 세포는 5% CO2 가습된 공기에서 37 ℃에서 (낮 방식) 그리고 5% CO2 가습된 공기에서 33℃에서 (밤 방식) 각각 12 시간의 2 교대 주기를 거쳤다. 동기화 시작 12 시간 후, 세포는 배양 배지에서 0.5 mg/ml의 합성 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)로 인큐베이션된다. 배지 단독으로 처리된 세포는 기저 조건으로 사용된다.
동기화의 종료 시, 세포 용해물은 7:30 시간 (이른 아침 지점)에서 수집된다. 간단히, 세포는 웰에 직접적으로 용해되고, 제조자의 프로토콜에 따라 RNeasy Mini 키트 (Qiagen)에 기재된 프로토콜에 따라 RNA를 정제한다. RNA 용출 후, RNA 샘플의 순도의 정량화 및 분석이 나노드롭 (Thermo)으로 수행된다. 각각의 샘플에 대해, 3 μg의 고품질 RNA가 최종 부피 20 μl의 iScript Advanced (BioRad)로 역전사된다. 완전한 반응 혼합물이 42℃에서 30 분 동안 열주기장치 (Eppendorf)에서 인큐베이션되고, 85℃에서 5 분 동안 반응은 중단된다. 상보성 DNA는 SYBR® Green (BioRad)과 함께 사용하기 위해 96-웰 플레이트에서 SYBR Green Supermix (BioRad)를 사용하여 실시간 PCR 열순환기 (BioRad)에서 qPCR에 의해 증폭된다. SYBR Green은 이중-가닥 DNA 분자에 결합하여 정량화된 형광을 방출하고, 형광 강도는 PCR 반응에서 생성물의 양에 비례한다. BioRad CFX96 기기의 사이클링 조건은: 3 분 동안 95℃, 이어서 5 초 동안 95℃에서 40 사이클의 변성, 30 초 동안 60℃에서 어닐링 및 연신이다. GAPDH (글리세르알데하이드 3-포스페이트 탈수소효소), TBP (TATA 박스 결합 단백질) 및 HRPT1 (하이포잔틴 포스포리보실전달효소 1)이 내인성 대조군으로서 사용된다. 샘플 유전자 및 참조 유전자의 발현에 대한 배수 변화는 CFX 매니저 소프트웨어 (BioRad)를 사용하여 정규화된 발현 (ΔΔ(Ct)) 방법을 사용하여 계산된다.
기저 조건에 대한 PER 유전자인, PER2 (기간 일주기 시계 2) 및 PER3 (기간 일주기 시계 3)의 배수 유도가 표 17에 나타나 있다. 본 값은 적어도 3가지 독립적인 검정에 대한 평균을 나타낸다.
Figure pct00019
표 17의 결과는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)가 상이한 나이에서 PER2 및 PER3 유전자의 발현 수준을 증가시킬 수 있다는 것을 나타낸다. 이 증가는 노화 동안 PER 유전자 발현의 감소에 반대작용하는 나이든 각질형성세포 (54세 공여체로부터의 것)에서 더 높다.
실시예 19
동조화된 인간 전체-두께 피부 모델에서 지질학 프로파일의 분석.
지질은 피부에서 필수적인 역할을 한다. 각질층 (피부의 외층)은 표피 세포 분화의 종점인 각화된 외피라 불리는 특화된 구조를 포함한다. 이 구조는 지질 외피로 둘러싸인 케라틴의 높은 가교결합된 메쉬로 구성된다. 각화된 외피 기능은 외인성 입자, 병원체 및 표피 수분 손실에 대한 물리적 장벽으로서 작용하여, 피부 항상성을 조절한다. 세라마이드 (각화된 외피 내의 주요 지질 성분)는 스핑고신과 지방산으로 구성된 분자 군이다. 피부에서 세라마이드의 양은 피부 건조의 외관을 피하면서 피부의 수-불투과 특성을 제공한다. 오메가-3 지방산 계열은 또한 피부 기능성에 중요한 역할을 한다. 이들 중에서, 도코사헥사엔산 (DHA)은 이중층 세포막으로의 그 혼입이 적절한 세포막 유동성을 유지하는데 도움이 되는 장쇄 다중불포화된 지방산이다 (DHA와 접합된 포스파티딜콜린과 총 포스파티딜콜린 수준 사이의 비, 즉 PC-DHA/PC로도 언급됨). DHA를 갖는 식이 보충제는 이의 피부 통합을 증가시켜 경피적 수분 손실의 감소 및 이에 따른 피부 수화의 증가에 의해 측정되는 피부 장벽 기능을 개선시킨다.
인간 피부 모델로부터의 지질학 프로파일은 초고성능 액체 크로마토그래피- 질량 분광분석법 (UHPLC-MS)을 사용하여 측정함에 의해 평가될 수 있다. 이 실험의 주요 목적은 세라미드 피부 함량 및 PC-DHA/PC 비를 결정하기 위해 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)로 치료 후 동조화된 인간 피부 모델의 지질학 프로파일을 평가하기 위한 것이다.
도착 후, Phenion® 전체-두께 피부 모델 (HENKEL)은 ALI 배지 (HENKEL)에서 공급자의 지침에 따라 페트리 디쉬 (조건당 5개 피부 모델)에 배치된다. 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션 72 시간 후, 동기화 프로토콜이 초기화된다. 이러한 목적을 위해, 피부 모델은 5% CO2 가습된 공기에서 37 ℃에서 (낮 방식) 그리고 5% CO2 가습된 공기에서 33℃에서 (밤 방식) 각각 12 시간의 2 교대 주기를 거쳤다. 피부 모델은 모델의 상기 표면 (50μl의 치료) 내 및 배지를 함유하는 페트리-디쉬 내 양자에 0,5mg/ml로 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)로 처리된다. 배지로 처리된 피부 모델은 기저 대조군 조건으로 사용된다. 이 치료는 동일한 조건에서 24 시간 후 대체된다. 48 시간의 치료 후, UHPLC-MS 분석을 위해 피부 모델은 7:30 시간 및 11:30 시간에 수집되고 -80℃에서 냉동된다. 간단히 말해서, 샘플은 해동되고 염화나트륨 (50 mM) 및 클로로포름/메탄올 (2:1) (부피:부피)과 혼합되고 균질화된다. 샘플 균질화 후, 추출물은 1시간 동안 -20℃에서 인큐베이션되고 18,000 x g에서 15 분 동안 원심분리된다. 유기상은 그 다음 수집되고 진공 하에서 건조된다. 건조된 추출물은 마지막으로 아세트로니트릴/이소프로판올 (1:1) (부피:부피)에서 재구성되고, 18,000 x g에서 5 분 동안 원심분리되고 UPLC®-MS 분석을 위한 바이알로 이전된다. 모든 데이터는 MassLynx 4.1 소프트웨어 (Waters Corp., Milford, USA)에 대한 TargetLynx 어플리케이션 매니저를 사용하여 가공된다.
표 14의 결과는 동시에 기저 조건에 대해 치료의 48 시간 후 7:30 시간에서 세라미드 양 (총 피부 세라미드의 68.9%로 구성된, 피부 내 다수 세라미드 군을 포함함)의 백분율의 평균을 나타낸다. 이들 값은 하나의 검정에 대해 계산된다.
Figure pct00020
표 18의 결과는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)가 동조화된 인간 피부 모델에서 7:30 시간에서 세라미드 수준을 증가시킬 수 있다는 것을 나타낸다. 치료 후 7:30 시간에서 세라미드 양은 기저 조건에서 11:30 시간에서 세라미드 수준의 결과와 비교하여 유사한 값을 나타냈다.
표 19의 결과는 기저 조건에 대해 치료의 48 시간 후 7:30 시간에서 PC-DHA/PC 비의 백분율의 평균을 나타낸다. 이들 값은 하나의 검정에 대해 계산된다.
Figure pct00021
표 19의 결과는 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)가 동조화된 인간 피부 모델에서 7:30 시간에서 PC-DHA/PC 비를 증가시킬 수 있다는 것을 나타낸다. 치료 후 7:30 시간에서 PC-DHA/PC 비는 기저 조건에서 11:30 시간에서 값과 비교하여 유사한 값을 나타냈다.
실시예 20
펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH 2 (PEP-1)를 포함하는 마이크로에멀션의 제조
적절한 용기에 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)가 물 [INCI: 물 (AQUA)] (페이스 A1)에 용해되고, 그리고 그 다음 별도의 수령체에 사전-혼합된 페이스 A2의 성분의 혼합물 (2-페녹시에탄올 [INCI: 페녹시에탄올], Structure® XL [INCI: 하이드록시프로필 전분 포스페이트], Zemea™ [INCI: 프로판디올], Amigel® [INCI: 스클레로튬 검], 및 나트륨 하이알루로네이트 [INCI: 나트륨 하이알루로네이트]; 표 16 참고)이 도입된다. 수득한 혼합물은 70℃에서 온화하게 교반하면서 가열되고 그 다음 Cola®Fax CPE-K [INCI: 칼륨 세틸 포스페이트]가 첨가된다 (페이스 A3).
또 다른 수령체에서, 페이스 B의 성분: Schercemol™ DIS 에스테르 [INCI: 디이소프로필 세바케이트] 및 Montanov™ 68 [INCI: 세테아릴 알코올; 세테아릴 글루코사이드]이 도입되고, 이들은 80℃에서 가열되고 그리고 상기 혼합물은 교반된다. 페이스 B는 강렬한 교반을 하면서 페이스 A 상으로 느리게 도입된다.
70-80℃로 온도를 유지하면서, 샘플은 30 초 동안 티타늄 프로브로 균질화된다.
Figure pct00022
실시예 21
실시예 20의 마이크로에멀션을 포함하는 지질 나노입자 조성물의 제조
실시예 20에서 제조된 마이크로에멀션은 적절한 수령체 (페이스 A) 안으로 도입된다.
별도로, 페이스 B (표 17 참고)는 N-Hance® CG-17 양이온성 구아르 [INCI: 구아르 하이드록시프로필트리모늄 클로라이드; 물 (AQUA)]를 물 [INCI: 물 (AQUA)]에 용해시킴에 의해 제조된다. 페이스 B는 강렬한 교반하에서 페이스 A에 첨가된다.
페이스 C (Structure® XL [하이드록시프로필 전분 포스페이트] 및 Amigel® [INCI: 스클레로튬 검]) 및 페이스 D (Heliogel™ [INCI: 나트륨 아크릴레이트 공중합체; 수소첨가된 폴리이소부텐; 레시틴; 폴리글리세릴-10 스테아레이트; 해바라기 (헬리안투스 안누스) 종자유; 토코페롤])의 성분이 강렬한 교반하에서 느리게 그리고 하나씩 첨가된다.
Figure pct00023
실시예 22
펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH 2 (PEP-1)를 포함하는 리포좀의 제조
적절한 용기에, 페이스 A가 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)를 물 [INCI: 물 (AQUA)]에 용해시킴에 의해 제조되고, ZemeaTM [INCI: 프로판디올] 및 2-페녹시에탄올 [INCI: 페녹시에탄올] (페이스 B)이 페이스 A에 첨가된다.
모든 이전의 성분이 용해될 때, 레시틴 [INCI: 레시틴] (페이스 C)이, 분산이 완료될 때까지, 강렬한 교반하에서 조금씩 첨가된다. 마지막으로 수득된 조성물이 표 22에 나타나 있다.
Figure pct00024
샘플은 30 초 동안 티타늄 프로브로 균질화된다.
실시예 23:
양이온성 폴리머에 결합된 실시예 22의 리포좀의 제조
실시예 22에서 수득된 리포좀은 느린 교반하에서 95:5의 리포좀:양이온성 폴리머 비 (w/w) 하에서 SENSOMER® CI-50 [INCI: 물 (AQUA); 전분 하이드록시프로필트리모늄 클로라이드; 우레아; 나트륨 락테이트; 염화나트륨; 나트륨 벤조에이트]에 첨가된다.
실시예 24
펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH 2 (PEP-1)를 함유하는 화장품 조성물 (유체 에멀션)의 제조
적합한 용기에, 페이스 A1의 성분: 물 [INCI: 물 (AQUA)], Zemea™ [INCI: 프로판디올], 글리세린 [INCI: 글리세린], Genencare™ OSMS BA [INCI: 베타인], Dissolvine® NA2 [INCI: 디나트륨 EDTA], 칼륨 소르베이트 [INCI: 칼륨 소르베이트]이 용해된다.
페이스 A2: Carbopol® ultrez 10 폴리머 [INCI: 카보머]가 이전의 혼합물에 첨가된다. 일단 분산되어 지면, 페이스 A3: Cola®Fax CPE-K [INCI: 칼륨 세틸 포스페이트]가 첨가된다. 수득한 혼합물은 70-75℃에서 가열된다.
또 다른 수령체에서, 페이스 B 성분: Massocare® HD [INCI: ISO헥사데칸], Lincol BAS [INCI: C12-15 알킬 벤조에이트], Gandak C [INCI: 세틸 알코올], 소르비탈 T 20 P [INCI: 폴리소르베이트 20], 2-페녹시에탄올 [INCI: 페녹시에탄올], 야채 스테아르산 50/50 [INCI: 스테아르산; 팔미트산]이 혼합되고 70-75℃에서 가열된다. 페이스 B는 터빈으로 강렬한 교반을 하면서 페이스 A 상으로 느리게 도입된다.
혼합물은 40℃로 냉각되고, 페이스 C: BRB CM 56-S [INCI: 사이클로메티콘], 물 및 옥탄-1,2-디올 [INCI: 물 (AQUA); 인산나트륨; 디나트륨 포스페이트; 카프릴릴 글리콜; 노나펩타이드-1] 내의 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)의 사전-혼합물, 방향 [INCI: 방향 (PARFUM)]이 첨가된다. pH는 페이스 D의 성분: 수산화나트륨 20% w/w [INCI: 물 (AQUA); 수산화나트륨]으로 6.0-6.5로 조정된다.
Figure pct00025
실시예 25
펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH 2 (PEP-1)를 함유하는 화장품 조성물 (크림)의 제조
적합한 용기에, 페이스 A1의 성분: 물 [INCI: 물 (AQUA)], Zemea™ [INCI: 프로판디올], Hydrolite® 5 [INCI: 펜틸렌 글리콜] 및 Dissolvine® NA2 [INCI: 디나트륨 EDTA]이 용해된다.
페이스 A2 성분: Carbopol® Ultrez 10 폴리머 [INCI: 카보머]이 이전의 혼합물에 첨가된다. 일단 분산되면, 페이스 A3: Cola®Fax CPE-K [INCI: 칼륨 세틸 포스페이트]가 도입된다. 그런 다음 혼합물은 70-75℃에서 가열된다.
별도의 용기에, 페이스 B 성분: Schercemol™ DIA 에스테르 [INCI: 디이소프로필 아디페이트], Phytocream® 2000 [INCI: 글리세릴 스테아레이트, 세테아릴 알코올, 칼륨 팔미토일 가수분해된 밀 단백질], Massocare® EC [INCI: 에틸헥실 코코에이트], Astro-sil 2C 350 [INCI: 디메티콘], 토코페릴 아세테이트 [INCI: 토코페릴 아세테이트] 및 Phenoxetol™ [INCI: 페녹시에탄올]이 혼합되고 수득한 혼합물은 70-75℃에서 가열된다.
에멀션은 터빈으로 빠른 교반하에서 페이스 A 상으로 페이스 B를 느리게 부가함에 의해 제조된다.
일단 혼합물이 40℃로 냉각되면, 페이스 C: Novemer™ EC-1 폴리머 [INCI: 광유 (파라피늄 리퀴듐); 물 (AQUA); 아크릴레이트/아크릴아미드 가교중합체; 폴리소르베이트 85], 방향 [INCI: FRAGANCE (PARFUM)], 및 물과 옥탄-1,2-디올 [INCI: 물 (AQUA); 인산나트륨; 디나트륨 포스페이트; 카프릴릴 글리콜; 노나펩타이드-1]) 내 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)의 사전-혼합물이 이전의 혼합물에 첨가된다.
pH는 페이스 D 성분 수산화나트륨 20% w/w [INCI: 물 (AQUA); 수산화나트륨])으로 6.0 - 6.5 조정된다.
Figure pct00026
실시예 26
H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH 2 (PEP-1)를 함유하는 화장품 조성물 (로션)의 제조
적합한 용기에, 페이스 A1의 성분: 물 [INCI: 물 (AQUA)], Zemea™ [INCI: 프로판디올], 글리세린 [INCI: 글리세린], 칼륨 소르베이트 [INCI: 칼륨 소르베이트] 및 Dissolvine® NA2 [INCI: 디나트륨 EDTA]이 용해된다.
페이스 A2 성분: Carbopol® Ultrez 30 폴리머 [INCI: 카보머]가 이전의 혼합물에 첨가된다. 일단 분산되면, 페이스 A3: 크산탄 검 [INCI: 크산탄 검]이 도입된다. 그런 다음 혼합물은 70-75℃에서 가열된다.
별도의 용기에, 페이스 B 성분: Fancor® 메도우포움 종자유 [INCI: 림난테스 알바 (메도우포움) 종자유], Kodasil 600 IDD 겔 [INCI: ISO도데칸; 비닐 디메티콘/라우릴 디메티콘 가교중합체; 디메티콘; 라우릴 디메티콘], Astro-sil 2C 350 [INCI: 디메티콘], Schercemol™ CATC 에스테르 [INCI: 코코일 아디프산/트리메틸올프로판 공중합체; 트리메틸올프로판], Schercemol™ DIS 에스테르 [INCI: 디이소프로필 세바케이트], 토코페릴 아세테이트 [INCI: 토코페릴 아세테이트] 및 Phenoxetol™ [INCI: 페녹시에탄올]이 혼합되고 수득한 혼합물은 70-75℃에서 가열된다.
에멀션은 터빈으로 빠른 교반하에서 페이스 A 상으로 페이스 B를 느리게 부가함에 의해 제조된다.
일단 혼합물이 40℃로 냉각되면, 페이스 C: Novemer™ EC-2 폴리머 [INCI: 물 (AQUA); 나트륨 아크릴레이트/헤베네쓰-25 메타크릴레이트 가교중합체; 수소첨가된 폴리데센, 라우릴 글루코사이드], SA-SB-300 (7%) [INCI: 실리카; 디메티콘], 방향 [INCI: FRAGANCE (PARFUM)], 및 물과 옥탄-1,2-디올 [INCI: 물 (AQUA); 인산나트륨; 디나트륨 포스페이트; 카프릴릴 글리콜; 노나펩타이드-1]) 내 펩타이드 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)의 사전-혼합물이 이전의 혼합물에 첨가된다.
pH는 페이스 D 성분 수산화나트륨 20% w/w [INCI: 물 (AQUA); 수산화나트륨])으로 6.0 - 6.5 조정된다.
Figure pct00027
실시예 27
겔-크림 조성물 (위약)의 제조
적합한 용기에, 페이스 A의 성분: 물 [INCI: 물 (AQUA)], Zemea™ [INCI: 프로판디올], Phenoxetol® [INCI: 페녹시에탄올], Dissolvine® NA2 [INCI: 디나트륨 EDTA] 및 칼륨 소르베이트 과립 [칼륨 소르베이트]이 분산된다.
페이스 A1 성분: Carbopol® Ultrez 21 폴리머 [INCI: 아크릴레이트/C10/30 알킬 아크릴레이트 가교중합체]가 교반하에서 이전의 혼합물에 첨가된다. 일단 분산되면, 페이스 A2: 크산탄 검 [INCI: 크산탄 검]이 이전의 혼합물 첨가되고 분산이 완료될 때까지 교반된다.
별도의 용기에, 페이스 B 성분: Schercemol™ 1818 에스테르 [INCI: 이소스테아릴 이소스테아레이트]가 칭량된다.
에멀션은 터빈으로 빠른 교반하에서 페이스 A 상으로 페이스 B를 느리게 부가함에 의해 제조된다.
pH는 페이스 D 성분: 수산화나트륨 20% w/w [INCI: 물 (AQUA); 수산화나트륨])으로 6.0 - 6.5 조정된다.
Figure pct00028
실시예 28
5%(w/w) H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH 2 (PEP-1)를 포함하는 겔-크림 조성물의 제조
적합한 용기에, 페이스 A의 성분: 물 [INCI: 물 (AQUA)], Zemea™ [INCI: 프로판디올], Phenoxetol® [INCI: 페녹시에탄올], Dissolvine® NA2 [INCI: 디나트륨 EDTA] 및 칼륨 소르베이트 과립 [칼륨 소르베이트]이 분산된다.
페이스 A1 성분: Carbopol® Ultrez 21 폴리머 [INCI: 아크릴레이트/C10/30 알킬 아크릴레이트 가교중합체]가 교반하에서 이전의 혼합물에 첨가된다. 일단 분산되면, 페이스 A2: 크산탄 검 [INCI: 크산탄 검]이 이전의 혼합물 첨가되고 분산이 완료될 때까지 교반된다.
별도의 용기에, 페이스 B 성분: Schercemol™ 1818 에스테르 [INCI: 이소스테아릴 이소스테아레이트]가 칭량된다.
에멀션은 터빈으로 빠른 교반하에서 페이스 A 상으로 페이스 B를 느리게 부가함에 의해 제조된다.
페이스 C: PEP-1 용액 [INCI: 물 (AQUA); 인산나트륨; 디나트륨 포스페이트; 카프릴릴 글리콜; 노나펩타이드-1]이 이전의 혼합물에 첨가된다.
pH는 페이스 D 성분: 수산화나트륨 20% w/w [INCI: 물 (AQUA); 수산화나트륨])으로 6.0 - 6.5 조정된다.
Figure pct00029
실시예 29
본 발명에 따른 활성 성분의 백인 피부 유형 여성 지원자에서 단기 적용의 활력있게 하는 효과의 평가에 대한 생체내 연구.
피부는 내부 시계를 갖는다. 이의 필수적인 특성은 일주기 조절과 얼굴 외관이 가장 좋아 보일 때인 이의 정오 경을 따른다. 그러나 작업-교대 또는 수면 부족과 같은 상태는 생물학적 피부 기능의 비동기화를 유발할 수 있다. 본 명세서에서의 실시예는 본 발명의 펩타이드를 포함하는 조성물이 활력있게 하는 효과를 가지며 피부 미세 순환, 아이 백 부피 및 피부 장벽 기능성의 측정에 의해 평가될 때 피부의 생체 시계를 전진시킬 수 있음을 입증하기 위해 수행되었다.
본 연구는 7 일 동안 수행된다. 36세에서 46세 사이의 18명의 백인 여성 지원자가 두 그룹으로 분할된다. 그룹 중 하나는 아침에 얼굴 전체에 실시예 28에 기재된 조성물 및 밤에 실시예 27에 기재된 위약 크림을 적용한다. 제2 그룹의 지원자들은 실시예 27에 기술된 위약 크림을 하루 2회, 아침 및 밤에 얼굴 전체에 적용한다. 대상체들은 그들 자신의 기준이 되고, 7 일 후에 얻은 결과는 초기에 얻은 결과와 비교된다. 수면 박탈 후 7 일 시점에 측정이 수행된다: 지원자들은 4 시간만 수면을 취하고 생성물 적용 1시간 후 이른 아침에 측정된다. 실시예 28의 조성물로 얻은 결과는 위약 크림으로 얻은 결과와 비교된다.
피부 미세순환
피부 미세순환 측정은 생성물 적용의 7 일 후 각각의 뺨에서 조직 생존력 이미지화기 (TiVi) (WheelsBridge™)로 수행되었다. 결과는 표 28에 도시되어 있다.
Figure pct00030
결과는 본 발명의 조성물의 적용의 7 일 후 위약에 비교하여 그리고 초기 시점 대비 미세순환에서의 증가가 있다는 것을 입증한다.
아이 백의 부피 (아이 백 부피)
아이 백 부피는 무작위로 선택된 하나의 눈에 생성물 적용의 7일 후 Primos lite 3D (Canfield) 시스템으로 측정된다. 결과는 표 29에 나타나 있다.
Figure pct00031
결과는 활성 성분의 적용의 7 일 후 위약에 비교하여 그리고 초기 시점 대비 아이 백 부피에서의 감소가 있다는 것을 입증한다.
피부 장벽 기능의 계수
피부 장벽 기능과 연관된 3개 상이한 파라미터가 활성 성분의 적용의 7 일 후 측정된다. 수화는 Corneometer® CM825 (Courage + Khazaka)로 측정되고, Vapometer (Delfin Technologies)로 경피 물 손실 (TEWL) 및 Sebumeter® SM810 (Courage + Khazaka)으로 피지 함량이 측정된다. 피부 장벽 기능의 계수는 수화 및 피지를 측정함에 의해 수득된 값을 더하고 TEWL 값을 차감에 의해 계산된다. 결과는 표 30에 나타나 있다.
Figure pct00032
결과는 활성 성분의 적용의 7 일 후 위약에 비교하여 그리고 초기 시점 대비 피부 장벽 기능의 계수의 증가가 있다는 것을 나타낸다.
따라서, 본 발명의 펩타이드를 포함하는 조성물은 수면 박탈 후에서도 이른 아침에 피부 미세순환 증가, 아이 백 부피의 감소 및 피부 장벽 기능의 개선에 의해 실증된 바와 같이 생체 시계를 전진시킬 수 있다.
실시예 30
백인 피부 유형 여성 지원자에 장기간 적용 후 활력화 및 항-노화 효과의 평가에 대한 생체내 연구.
노화 및 "시차증"은 내부 일주기 리듬 시계를 설정하는 피부 능력을 감소시켜 일에 따른 생물학적 피부 기능의 비동기화를 초래한다. 이 연구는 본 발명에 따른 활성 성분이 항노화 특성으로 이어지는 피부의 생체 시계를 전진시킬 수 있음을 입증하는 것을 목표로 하였다.
본 연구는 28 일 동안 수행된다. 31세에서 46세 사이의 41명의 백인 여성 지원자들은 두 그룹으로 분할된다. 그룹 중 하나는 아침에 얼굴 전체에 실시예 28에 기재된 조성물 및 밤에 실시예 27에 기재된 위약 크림을 적용한다. 제2 그룹의 지원자들은 실시예 27에 기술된 위약 크림을 하루 2회, 아침 및 밤에 얼굴 전체에 적용한다. 대상체들은 그들 자신의 기준으로 작용하고 28일 후에 얻은 결과는 초기 시점에 얻은 결과와 비교된다. 측정은 아침 일찍 수행된다. 실시예 28의 조성물로 얻은 결과는 위약 크림으로 얻은 결과와 비교된다.
얼굴에 대한 본 발명에 따른 활성 성분의 활성화 및 항노화 효과는 피부 광도, 주름의 가시성 및 아이 백 부피에 의해 평가된다.
피부 광도
지원자의 얼굴 이미지는 Camerascan (Orion Concept)으로 취해지고 생성물 적용의 28 일 후 광도 측정이 수행된다. 결과를 표 31에 나타낸다.
Figure pct00033
결과는 활성 성분의 적용의 28 일 후, 초기 시점에 비교하여 피부 광도의 통계적으로 유의미한 증가가 있다는 것을 입증한다. 피부 광도에서의 증가는 또한 위약 크림보다 활성 성분으로 더 높다.
주름의 가시성
지원자의 얼굴 이미지는 Camerascan (Orion Concept)으로 취해지고 생성물 적용의 28 일 후 주름의 가시성이 측정된다. 결과를 표 32에 나타낸다.
Figure pct00034
결과는 활성 성분의 적용의 28 일 후, 초기 시점에 비교하여 피부의 주름 가시성의 통계적으로 유의미한 감소가 있다는 것을 입증한다. 더욱이, 주름 가시성에서의 감소는 위약 크림보다 활성 성분으로 더 높다.
아이 백의 부피 (아이 백 부피)
아이 백 부피는 무작위로 선택된 하나의 눈에 생성물 적용의 28일 후 Primos lite 3D (Canfield) 시스템으로 측정된다. 결과는 표 33에 나타나 있다.
Figure pct00035
표 33에 나타난 이들 결과는 활성 성분의 적용의 28 일 후 위약에 비교하여 그리고 초기 시점 대비 아이 백 부피의 감소가 있다는 것을 입증한다.
따라서, 본 발명에 따른 활성 성분은 피부의 생체 시계를 전진시킬 수 있어, 주름의 가시성의 감소, 아이 백 부피에서의 감소 및 피부 광도의 증가에 의해 실증된 바와 같은 항노화 특성으로 이어질 수 있다.
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Claims (29)

  1. 하기 식 (I)의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염:
    R1-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-R2 (I),
    식 중:
    AA1은 Phe이고;
    AA2는 Trp이고;
    AA3은 Met, Leu 및 Ile으로 구성된 군으로부터 선택되고;
    AA4는 Lys, Arg 및 Gln으로 구성된 군으로부터 선택되고;
    AA5는 Arg이고;
    AA6은 Lys이고;
    AA7은 Arg, Lys 및 His으로 구성된 군으로부터 선택되고;
    AA8은 Val, Ile, Leu 및 Met으로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고
    AA9는 Pro이고;
    W, X, Y 및 Z 각각은 독립적으로 아미노산이고;
    m, n, p 및 q 각각은 독립적으로 0 또는 1이고;
    m+n+p+q는 2 이하이고;
    R1은 H, 폴리에틸렌 글리콜, 비-환형 지방족 그룹, 알리사이클릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴알킬, 아릴, 아르알킬 및 R5-CO-로부터 유래된 폴리머로 구성된 군으로부터 선택되고, 여기서 R5는 H, 비-환형 지방족 그룹, 알리사이클릴, 아릴, 아르알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로아릴알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
    R2는 -NR3R4, -OR3, -SR3으로 구성된 군으로부터 선택되고, 여기서 R3 및 R4는 H, 폴리에틸렌 글리콜, 비-환형 지방족 그룹, 알리사이클릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴알킬, 아릴 및 아르알킬로부터 유래된 폴리머로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
    R1 및 R2는 아미노산이 아님.
  2. 제1항에 있어서, AA3은 Met이고, 선택적으로, AA4는 Lys 및 Arg로 구성된 군으로부터 선택되거나 또는 AA4는 Lys이거나 또는 AA4는 Arg인 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  3. 제2항에 있어서, AA7은 Lys 및 Arg로 구성된 군으로부터 선택되고, 그리고 AA8은 Val, Ile 및 Leu으로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  4. 제1항에 있어서, AA3은 Leu이고, 선택적으로, AA4는 Lys 및 Arg로 구성된 군으로부터 선택되거나 또는 AA4는 Lys이거나 또는 AA4는 Arg인 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  5. 제4항에 있어서, AA4는 Lys 및 Arg로 구성된 군으로부터 선택되고, AA7은 Lys 및 Arg로 구성된 군으로부터 선택되고 그리고 AA8은 Val 및 Ile으로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  6. 제1항에 있어서, AA3은 Ile이고 그리고, 선택적으로, AA4는 Gln인 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  7. 제6항에 있어서, AA7은 His이고 AA8은 Met인 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  8. 제1항에 있어서, 상기 화합물은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 식의 것인 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
    R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-Yp-Zq-R2 (ii);
    R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Leu-Arg-Arg-Lys-Lys-Ile-Pro-Yp-Zq-R2 (iii);
    R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Ile-Gln-Arg-Lys-His-Met-Pro-Yp-Zq-R2 (iv);
    R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Leu-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-Yp-Zq-R2 (v);
    R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Met-Arg-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-Yp-Zq-R2 (vi);
    R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Lys-Val-Pro-Yp-Zq-R2 (vii);
    R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Ile-Pro-Yp-Zq-R2 (viii); 및
    R1-Wm-Xn-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Leu-Pro-Yp-Zq-R2 (ix),
    여기서, R1 R2, W, X, Y Z 및 m, n, p 및 q는 제1항에서의 식 (I)에 대해 정의된 바와 같음.
  9. 제8항에 있어서, 상기 화합물은 식 (ii)의 것인, 화합물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 H, 아세틸, 팔미토일, 라우로일 또는 미리스토일으로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고 R2는 -NR3R4 또는 -OR3이고 여기서 R3 및 R4는 H 및 C1-C16 알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는, 화합물.
  11. 제10항에 있어서, R1은 H, 아세틸 또는 팔미토일로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고 R2는 -NR3R4 또는 -OR3이고 여기서 R3 및 R4는 H 및 C1-C16 알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는, 화합물.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, R3은 H이고 R4는 H 및 C1-C16 알킬로 구성된 군으로부터 선택되는, 화합물.
  13. 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, R2는 -NR3R4 또는 -OR3이고 여기서 R3은 H이고 R4는 H 또는 C1-C6 알킬인, 화합물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, m+n+p+q는 제로인, 화합물.
  15. 제1항에 있어서, 상기 화합물은 하기로부터 선택되는, 화합물:
    H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1);
    Palm-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-2);
    Ac-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-3);
    H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-OH (PEP-4);
    Palm-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-OH (PEP-5);
    H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NHC6H13 (PEP-7);
    H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NHC16H33 (PEP-8);
    H-Phe-Trp-Leu-Arg-Arg-Lys-Lys-Ile-Pro-NH2 (PEP-9);
    H-Phe-Trp-Ile-Gln-Arg-Lys-His-Met-Pro-NH2 (PEP-10);
    H-Phe-Trp-Leu-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-11);
    H-Phe-Trp-Met-Arg-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-12);
    H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Lys-Val-Pro-NH2 (PEP-13);
    H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Ile-Pro-NH2 (PEP-14); 및
    H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Leu-Pro-NH2 (PEP-15).
  16. 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리를 위한 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
  17. 제16항에 있어서, 상기 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리는 피부의 노화의 증상의 치료 및/또는 예방인, 용도.
  18. 제17항에 있어서, 상기 피부의 노화의 증상은 피부에서 미토콘드리아 복합체 I 활성에 기인한 반응성 산소 종 생산 및/또는 피부에서 미토콘드리아 복합체 II 활성의 감소에 기인하는 것인, 용도.
  19. 제16항에 있어서, 상기 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리는 피부를 활성화시키는 것인, 용도.
  20. 제16항에 있어서, 상기 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리는 피부 장벽 기능의 유지 및/또는 개선인, 용도.
  21. 제16항에 있어서, 상기 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리는 피부 수화의 유지 및/또는 개선인, 용도.
  22. 제16항에 있어서, 상기 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리는 피부 미세순환 및/또는 피부 톤의 유지 및/또는 개선인, 용도.
  23. 제16항에 있어서, 상기 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리는 피부 피로의 증상의 치료 및/또는 예방인, 용도.
  24. 제16항에 있어서, 상기 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리는 아이 백의 치료 및/또는 예방인, 용도.
  25. 제16항에 있어서, 상기 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리는 피부 광도의 유지 및/또는 개선인, 용도.
  26. 제16항 내지 제23항 또는 제16항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피부는 이른 아침 피부이거나 또는 상기 피부는 일주기 리듬이 변경된 대상체의 것인, 용도.
  27. 제16항 내지 제24항 또는 제16항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리는 하기의 피부의 것인, 용도:
    (i) 피부에서 JARID1A 단백질의 발현은 매일 최대치보다 낮고; 피부에서 CRY2, PER2 및/또는 PER3 시계 유전자의 발현은 매일 최대치보다 낮고; 피부에 존재하는 세라미드의 양은 매일 최대치보다 낮고; 및/또는 피부 세포막 안으로 편입된 DHA의 양은 매일 최대치보다 낮은, 일주기 리듬에서의 한 시점에서의 피부; 또는
    (ii) 피부에서 JARID1A 단백질의 발현은 매일 최대치보다 낮고; 피부에서 CRY2, PER2 및/또는 PER3 시계 유전자의 발현은 매일 최대치보다 낮고; 피부에 존재하는 세라미드의 양은 매일 최대치보다 낮고; 및/또는 피부 세포막 안으로 편입된 DHA의 양은 매일 최대치보다 낮도록 변경된, 일주기 리듬을 갖는 피부.
  28. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 식 (I)의 화장용으로 유료량의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염, 및 적어도 하나의 화장용으로 허용가능한 부형제 또는 아쥬반트(adjuvant)를 포함하는 화장품 조성물.
  29. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 화장용으로 유효한 량의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염 또는 상기 화장용으로 유효한 량의 화합물, 이의 입체이성질체 및/또는 이의 화장용으로 허용가능한 염을 포함하는 화장품 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 미용적, 비-치료적 처치 및/또는 관리의 방법.
KR1020207001415A 2017-07-04 2018-06-05 피부, 모발, 손톱 및/또는 점막의 치료 및/또는 관리에 유용한 화합물 Active KR102797328B1 (ko)

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