KR20200024492A - 비타민나무 발효물을 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 비타민나무 발효물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물을 락토바실러스 람노서스 HK-9(기탁번호: KCCM11254P)로 발효시킨 비타민나무 발효물을 포함함으로써, 피부주름개선 효과, 미백 및 항염증 효과를 갖는다.

Description

비타민나무 발효물을 포함하는 화장료 조성물{Cosmetic compositions containing fermented extract of Hippophae rhamnoides L}

본 발명은 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물을 발효시킨 비타민나무 발효물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 각질층을 포함하는 표피와 진피, 그리고 결합조직으로 구성되어 있는데, 그 중 각질층은 표피(epidermis)의 기저세포인 케라티노사이트(keratinocyte)의 분화과정을 통해 형성되는 죽은 세포층으로 구성되어 있고 인체를 외부환경의 영향으로부터 보호해주는 역할을 담당하고 있다.

이러한 피부에서의 노화의 원인에 대해서는 크게 두 가지로 연구되고 있는데, 하나는 "내적 노화"로서 연령의 증가에 따른 피부의 구성단위인 세포의 기능변화에 기인한 것이고, 다른 하나는 "외적 노화"로서 외부 환경 즉 자외선, 공해, 스트레스 등에 의한 것으로 나눌 수 있다.

피부의 세포는 생체 내에서 필요한 에너지 공급을 위해 인간의 생체 내에서 필요한 에너지 공급을 위해 끊임없이 일어나는 생화학 반응에서 발생하는 활성산소종에 의해 산화적 스트레스가 가해지게 되면, 세포 구성 성분들인 지질, 단백질, 탄수화물과 DNA 산화적 손상 및 효소활성을 변화시켜 피부암 등의 각종 질병을 일으키는 원인이 되며, 노화를 촉진시킨다. 아울러 외적 노화의 원인 중에서 가장 큰 부분을 차지하고 있는 것은 자외선에 의한 광노화로서 UV에 지속적인 노출을 통해 피부암 등의 급성 및 만성적인 피부의 상해가 유발된다.

피부 진피층 기질을 이루는 중요한 성분의 하나인 콜라겐의 생합성과 분해는 피부 노화 억제에 핵심이 되고 있는데, 상기 활성산소종은 피부 섬유아세포에서 MMPs(matrix metalloproteinases)의 발현을 촉진하며, 자외선에 의한 콜라게나제의 합성을 촉진시킴으로써 피부 노화를 유발한다.

또한, 세포나 조직이 어떠한 원인에 의해 손상을 받으면, 그 반응을 최소화하고 손상된 부위를 원상으로 회복시키려하며 그 결과 염증이 발생하게 된다. 이러한 염증을 소실시키기 위해 염증원의 제거, 생체반응 및 증상을 감소시키는 작용을 하는 것을 항염제라고 한다. 현재까지 항염의 목적으로 이용되고 있는 물질로는 비스테로이드계로 프루폐나믹산(flufenamic acid), 이부프로펜(ibuprofen), 벤지다민(benzydamine), 인도메타신(indomethacin)등이 있고 스테로이드계통으로 프레드니솔론(prednisolone), 덱사메타손(dexamethasone)등이 있으며(김창종, 병태생리학, 한림상사, p61-69, 1988) 알란토인, 아즈렌,ε-아미노키프론산, 하이드로코티존(ⅴ), 감초산 및 그 유도체(β-글리칠레친산, 글리칠레친산유도체)등이 항염증에 효과가 있는 것으로 알려져 있다(광정무부, 신화장품학, 남산당, p162, 1993).

화장품 분야에서는 미백, 주름 개선효과, 형염증 등의 효과를 가지는 기능성 화장품에 대한 연구 및 개발이 활발하게 진행되고 있으며, 특히 피부에 독성이나 자극을 주지 않기 위하여 천연 물질을 이용한 연구가 계속되고 있다.

대한민국 공개특허 제2018-0041351호 대한민국 등록특허 제1881248호

본 발명의 목적은 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물을 발효시킨 비타민나무 발효물을 포함하는 화장료 조성물을 제공하는데 있다.

상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 화장료 조성물은 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물을 락토바실러스 람노서스 HK-9(기탁번호: KCCM11254P)로 발효시킨 비타민나무 발효물을 포함할 수 있다.

상기 비타민나무 발효물은 타입 I 프로콜라겐 단백질의 발현을 증가시키고, MMP-1 단백질의 발현을 억제시킬 수 있다.

상기 비타민나무 발효물은 티로시나아제를 억제시키고, 멜라민의 생성을 억제시킬 수 있다.

상기 비타민나무 발효물은 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물을 25 내지 45 ℃에서 36 내지 60시간 동안 발효시켜 수득될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 피부주름개선 효과, 미백 및 항염증 효과를 가질 수 있다.

상기 화장료 조성물은 화장수, 영양 크림, 아이 크림, 자외선 차단크림, 수분 크림, 로션, 마스크팩 및 에센스로부터 선택된 하나 이상의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 천연 물질로 구성되어 피부에 안전하고, 우수한 피부주름 예방 및 개선 효과, 미백효과, 항염증 효과를 갖는다. 보다 구체적으로는 본 발명의 조성물은 피부주름의 생성에 직접적으로 작용하는 MMP-1 및 MMP-3 단백질의 발현을 효과적으로 억제하고, 타입 I 프로콜라겐 단백질의 발현을 증가하여 피부주름의 예방 및 개선에 효과적으로 작용하며; 티로시나아제를 억제시키고, 멜라민의 생성을 억제시켜 미백에 효과적으로 작용할 뿐만 아니라; NO 생성을 억제시켜 항염활성을 증가시킴으로써 항염증에 효과적으로 작용할 수 있다.

도 1은 본 발명에 따라 제조된 실시예 1의 비타민나무 잎 발효물의 TLC 분석 결과를 나타낸 도면이다.
도 2는 대조군 1, 본 발명에 따라 제조된 실시예 1의 비타민나무 잎 발효물, 실시예 2의 비타민나무 열매 발효물, 비교예 1의 비타민나무 잎 열수추출물 및 비교예 2의 비타민나무 열매 열수추출물의 농도에 따른 DPPH 소거능을 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명에 따라 제조된 실시예 1의 비타민나무 잎 발효물, 실시예 2의 비타민나무 열매 발효물, 비교예 1의 비타민나무 잎 열수추출물 및 비교예 2의 비타민나무 열매 열수추출물의 농도에 따른 MMP-1을 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따라 제조된 실시예 1의 비타민나무 잎 발효물, 실시예 2의 비타민나무 열매 발효물, 비교예 1의 비타민나무 잎 열수추출물 및 비교예 2의 비타민나무 열매 열수추출물의 농도에 따른 타입 1 프로콜라겐 단백질 합성을 나타낸 도면이다.
도 5는 대조군 1, 본 발명에 따라 제조된 실시예 1의 비타민나무 잎 발효물, 실시예 2의 비타민나무 열매 발효물, 비교예 1의 비타민나무 잎 열수추출물 및 비교예 2의 비타민나무 열매 열수추출물의 농도에 따른 티로시나제 억제능을 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명에 따라 제조된 실시예 1의 비타민나무 잎 발효물, 실시예 2의 비타민나무 열매 발효물, 비교예 1의 비타민나무 잎 열수추출물 및 비교예 2의 비타민나무 열매 열수추출물의 농도에 따른 멜라닌 생성 억제능을 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명에 따라 제조된 실시예 1의 비타민나무 잎 발효물, 실시예 2의 비타민나무 열매 발효물, 비교예 1의 비타민나무 잎 열수추출물 및 비교예 2의 비타민나무 열매 열수추출물의 농도에 따른 NO 생성량을 나타낸 그래프이다.

본 발명은 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물을 락토바실러스 람노서스 HK-9(기탁번호: KCCM11254P)로 발효시킨 비타민나무 발효물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명의 화장료 조성물은 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물을 락토바실러스 람노서스 HK-9(기탁번호: KCCM11254P)로 발효시킨 비타민나무 발효물을 포함한다.

상기 비타민나무(Hippophae rhamnoides L)는 보리수과에 속하는 아교목성 식물로 동아시아와 유럽이 원산지로 강가나 바닷가 둔덕에서 잘 자라고 꽃이 없이 노란색에서 주홍색에 이르는 달걀 모양의 열매가 열리는 나무이다. 주요성분으로는 열매에는 많은 비타민을 함유하고 있는데, 그 중에서도 특히 비타민 A, C, E 및 P의 함량은 다른 과일이나 채소에 비하여 월등히 많다.

본 발명에서는 상기 비타민나무 중에서 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물을 이용하는 것이 줄기, 뿌리 등의 다른 부위를 사용하는 경우보다 화장료 조성물로 사용 시 피부주름개선 효과, 미백 및 항염증 효과가 우수하다.

상기 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물은 유산균, 바람직하게는 락토바실러스 람노서스 HK-9(Lactobacillus rhamnosus HK-9, 기탁번호: KCCM11254P)로 발효시켜 비타민나무 발효물을 수득한다.

일반적으로 화장료 조성물에 사용되는 유산균은 Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus MG501, Lactobacillus casei MG311, Lactobacillus rhamnosus MG315, Lactobacillus fermentum MG590, Lactobacillus plantarum MG208 및 Bifidobacterium longum MG723이지만, 상기 유산균들로 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물을 발효 시 우수한 피부주름개선 효과, 미백 및 항염증 효과를 발휘하지 못하므로 락토바실러스 람노서스 HK-9(기탁번호: KCCM11254P)를 사용하는 것 바람직하다.

특히, 상기 락토바실러스 람노서스 HK-9(기탁번호: KCCM11254P)를 25 내지 45 ℃에서 40 내지 80 rpm으로 36 내지 60시간 동안, 바람직하게는 30 내지 40 ℃에서 50 내지 60 rpm으로 40 내지 50시간 동안 배양시켜 1X10⁹ 내지 4X10⁹ cfu/mL의 농도로 수득한 후 상기 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물에 접종시킨다. 락토바실러스 람노서스 HK-9(기탁번호: KCCM11254P)의 농도가 상기 하한치 미만인 경우에는 원하는 수준의 효과를 얻을 수 없으며, 배양시간을 늘려도 상기 상한치를 초과하여 농도가 증가하지 못한다.

본 발명에서 사용되는 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물은 상기 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물을 분쇄한 분쇄물로서, 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물을 열수 추출법, 용매 추출법, 압착 추출법, 수증기 증류법 등으로 추출된 추출물 보다 상기 분쇄물을 사용함으로써 락토바실러스 람노서스 HK-9(기탁번호: KCCM11254P)로 발효 시 더욱 우수한 효과를 발휘한다.

본 발명의 비타민나무 발효물은 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물을 분쇄한 분쇄물과 락토바실러스 람노서스 HK-9(기탁번호: KCCM11254P)를 혼합하여 25 내지 45 ℃에서 36 내지 60시간 동안, 바람직하게는 30 내지 40 ℃에서 40 내지 50시간 동안 발효시켜 수득한다.

발효온도 및 시간이 상기 하한치 미만인 경우에는 발효가 원활히 수행되지 않을 수 있으며, 상기 상한치 초과인 경우에는 원하는 발효물이 아니라 다른 발효물이 수득될 수 있다.

본 발명의 비타민나무 발효물은 화장료 조성물로 제공하기 위하여 적당한 추출이나 여과 공정 등을 거칠 수 있다. 추출 방법은 열수 추출법, 용매 추출법, 압착 추출법, 수증기 증류법, 이산화탄소 초임계 추출법, 수증기 증류법, 마이크로 웨이브 공정 추출법, 페콜레이션 추출법 등의 다양한 추출 방법이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 압착 추출법을 이용하여 추출할 수 있다. 여과 방법으로는 막 분리법, 원심분리법, 침강법, 분별증류법 등이 있으며, 이외에도 다양한 방법이 사용될 수 있다. 바람직하게는 마이크로망을 이용한 여과 방법이 사용될 수 있다. 추가로 여과 단계가 반복 실행될 수 있으며, 바람직하게는 마이크로망을 이용한 여과 후 침강법 또는 원심분리법을 이용하여 발효물의 침전물을 제거할 수 있다. 설계 조건에 따라 상기 기재된 단계의 공정 외에도 농축, 추출 등의 공정이 추가로 수행될 수 있다.

또한, 본 발명의 비타민나무 발효물은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 15.0 중량%로 포함되는 것이 바람직하다.

본 발명에서 용어, "피부 주름"이란, 피부가 쇠하여 생긴 잔줄을 의미하는데, 유전자에 의한 원인, 피부 진피에 존재하는 콜라겐의 감소, 외부 환경 등에 의해 유발될 수 있다. 본 발명에서 "피부주름개선"이란, 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 말한다.

피부 섬유아세포의 주된 기능으로 세포외기질 합성과 증식을 통한 손상된 피부 조직 재생 등을 들 수 있는데, 광노화와 같은 외인성 노화 요인 또는 유리 산소에 의한 손상 누적, 텔로미어 단절로 인한 세포 노화 등에 따른 내인성 노화 요인들은 진피층 내에 있는 피부섬유아세포의 생리 활성 기능을 저하시키게 된다. 피부 세포외기질 중 95% 이상을 차지하고, 세포의 부착분자(adhesion molecule) 및 세포 골격(cytoskeleton) 등과의 상호 작용과 신호 교류를 통해 섬유아세포의 생리 활성에 매우 주요한 부분을 담당하는 제I형 콜라겐의 합성이 저하될 경우, 피부 조직 내 콜라겐 양이 감소되고, 이에 따라 표면 장력이 감소되어 피부 탄력이 저하되고 피부 주름이 형성될 뿐만 아니라, 세포의 증식 및 재생 기능을 포함하는 생리 활성 기능이 감소하는 악순환의 원인이 된다.

따라서, 피부섬유아세포의 콜라겐은 피부 재생, 피부 탄력, 피부 주름 형성 및 피부 손상 시 조직의 수복 또는 재생과 직접적인 관련이 있다고 볼 수 있다. 즉, 피부 섬유아세포의 콜라겐 또는 프로콜라겐의 합성이 촉진되거나, 콜라겐을 분해하는 기질 단백질 분해효소(matrix metallo-proteinase, 이하 'MMP'라 함)의 합성이 저해되면, 피부 탄력 개선, 피부 재생, 피부 주름 개선, 상처 치유, 손상된 피부 조직의 수복 및 재생; 및 피부 노화 방지 등의 효과를 얻을 수 있다.

본 발명의 비타민나무 발효물을 포함하는 조성물은 타입 I 프로콜라겐 단백질의 발현을 증가시키고, MMP-1 단백질의 발현을 억제하는 것을 특징으로 한다. 구체적으로, 본 발명의 상기 비타민나무 발효물을 포함하는 조성물은 콜라겐 분해를 촉진시키는 기질 단백질 분해효소-1(matrix metallo-proteinase)의 발현을 억제시키면서, 타입 Ⅰ 프로콜라겐의 생성을 증가시키는바, 피부 탄력 증가, 피부 재생, 피부 주름 개선, 상처 치유, 손상된 피부 조직의 수복 및 재생; 및 피부 노화 방지 등의 효과 등을 가질 수 있다. 즉, 피부주름의 예방 또는 개선의 효과를 가질 수 있다.

또한, 본 발명에서 용어, "미백"이란, 살갗이 아름답고 희게 하는 것으로서, 사람의 피부색은 피부 내부의 멜라닌(melanin) 농도와 분포에 따라 결정되는데, 유전적인 요인 외에도, 태양 자외선이나 피로, 스트레스 등의 환경적 또는 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다. 멜라닌은 피부 표피층에 있는 멜라노사이트에서 합성되는데, 멜라노사이트 내 소기관인 멜라노좀(melanosome)에서 아미노산의 일종인 티로신(tyrosine)에 티로시나제(tyrosinase)라는 효소가 작용하여 도파(DOPA), 도파퀴논(dopaquinone)으로 바뀐 후 비효소적인 산화반응을 거쳐 만들어진다. 이와 같은 멜라닌의 합성이 피부 내에서 과도하게 일어나면, 피부 톤을 어둡게 하고, 기미, 주근깨 등을 발생시킨다. 따라서, 피부 내의 티로시나제 활성을 저해하여 멜라닌 색소의 합성을 저해시키면, 피부 톤을 밝게 하여 피부 미백을 실현할 수 있을 뿐만 아니라 자외선, 호르몬 및 유전적인 원인에 기인하여 발생하는 기미, 주근깨 등의 피부 과색소 침착증을 개선시킬 수 있다.

이외에도 본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 지용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스 등을 더 포함할 수 있다.

상기 수용성 비타민으로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것도 될 수 있으나, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염(티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 상기 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물 배양물의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

상기 지용성 비타민으로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것도 될 수 있으나, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 지용성 비타민에 포함된다.

상기 고분자 펩티드로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것도 될 수 있으나, 바람직하게는 콜라겐, 가수분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 상기 고분자 펩티드는 미생물 배양액의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견 섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

상기 고분자 다당에는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것도 될 수 있으나, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 콘드로이틴 황산 또는 그 염(나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

상기 스핑고 지질로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것도 될 수 있으나, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당 지질 등을 들 수 있다. 상기 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

상기 해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것도 될 수 있으나, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또한, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합할 수 있다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 자외선 흡수제, pH 조정제, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한제, 정제수 등을 들 수 있다.

상기 유지 성분으로는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

상기 에스테르계 유지로는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

상기 탄화 수소계 유지로는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로 크리스탈린 왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

상기 실리콘계 유지로는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산 메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산 메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

상기 불소계 유지로는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

상기 동물 또는 식물 유지로는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 난황유, 우지, 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

상기 보습제로는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

상기 수용성 저분자 보습제로는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

상기 지용성 저분자 보습제로는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

상기 수용성 고분자로는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

상기 지용성 고분자로는 폴리비닐피롤리돈 에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈 헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

상기 에몰리엔트제로는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

상기 자외선 흡수제로는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

상기 pH 조정제로는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

상기 pH 조정제로는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

본 발명의 조성물을 함유하여 제조된 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

또한, 본 발명의 상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 안료 및 천연향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물은 피부주름개선 효과, 미백 및 항염증 효과를 갖는 화장품 또는 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다.

본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 자외선 차단크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 마스크팩 등과 같은 화장품류와 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저 등이 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시하나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범주 및 기술사상 범위 내에서 다양한 변경 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연한 것이다.

실시예 1. 비타민나무 잎 발효물

비타민나무의 잎을 분쇄한 분말을 준비하였다. 그리고, 한국미생물보존센터로부터 수득한 락토바실러스 람노서스 HK-9(기탁번호: KCCM11254P)를 55%의 MRS 배지와 0.5% L-Cysteine hydrochloride를 첨가하여 제조한 배지가 있는 진탕항온배양기에 넣고, 50~60 rpm, 37 ℃에서 48시간 동안 전배양하였다.

2 L 플라스크에 55% MRS 배지로 만든 유산균 배양 배지 1 L 및 바타민나무의 잎 분말 100 g을 첨가하고, 상기 전배양된 3X10⁹ cells/㎖ 농도의 락토바실러스 람노서스 HK-9 배양액을 5(v/v)% 접종한 후 37 ℃에서 48시간 동안 발효하였다.

상기 발효물을 3,000 rpm에서 10분 동안 원심분리하여 상등액을 취한 후 0.25 μM 여과지를 이용하여 여과하여 비타민나무의 잎 발효물을 수득하였다.

도 1은 본 발명에 따른 비타민나무 잎 발효물의 TLC 분석 결과를 나타낸 도면이다. 도 1에 도시된 바와 같이, 본 발명에 따른 비타민나무 잎 발효물의 유효성분이 발효가 진행됨에 따라 배당체(고분자)에서 비배당체(저분자)로 전환됨을 확인할 수 있다.

실시예 2. 비타민나무 열매 발효물

상기 실시예 1과 동일하게 실시하되, 비타민나무의 잎 대신 건조한 비타민나무의 열매를 분쇄한 분말을 사용하여 비타민나무 열매 발효물을 수득하였다.

비교예 1. 비타민나무 잎 열수추출물

비타민나무의 잎을 분쇄한 분말을 준비한 후 상기 비타민나무 잎 분말에 10배 중량의 정제수를 가한 후 100 ℃에서 추출한 후 여과 과정을 통해 이물질을 제거하여 비타민나무 잎 열수추출물을 수득하였다.

비교예 2. 비타민나무 열매 열수추출물

상기 비교예 1과 동일하게 실시하되, 비타민나무의 잎 대신 건조한 비타민나무의 열매를 분쇄한 분말을 사용하여 비타민나무 열매 열수추출물을 수득하였다.

<시험예>

모든 통계 분석은 SPSS 버전 18.0(IBM, Chicago, IL, USA)을 사용하여 수행되었다. Duncan의 post-hoc test를 이용한 일원 분산 분석(one-way ANOVA)을 사용하여 실험군 간의 평균값의 차이(p <0.05)를 결정하였다. 각각의 실험데이터는 평균 ± 표준 편차(SD)로 표시하였다.

시험예 1. MTT assay

세포 독성은 MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)환원 방법을 이용하여 측정하였다.

배양된 HaCaT 세포를 DMEM 배지에 잘 혼합한 후 1x10⁵ cells/mL로 조정한 다음, 24-well 배양판에 준비된 세포를 1 mL씩 첨가한 후 3-4일 배양하였다. 세포가 80% 정도 성장했을 때 우태아 혈청과 항생제를 첨가하지 않은 배지에 다양한 농도의 시료(0.01 및 0.05 μg/mL)로 처리한 후, 24시간 더 배양을 하고, 배양이 끝난 세포의 생존율은 MTT 환원 방법을 이용하여 측정하였다.

각 well에 MTT 용액(5 mg/mL)을 성장배지 부피의 10분의 1 가량 가한 후, 다시 37 ℃에서 4시간 더 배양하였다. 그리고, MTT를 환원시켜 생성된 formazan이 배지에 따라 나가지 않도록 조심하며 배지를 제거하고, 남아 있는 배지를 완전히 제거하기 위해 실온에서 30분간 방치한 후 DMSO를 이용하여 시료를 용해시킨 다음 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 생존율은 하기 수학식 1과 같이 계산한 후, 하기 표 1에 나타내었다.

[수학식 1]

세포 생존율 (%) = [시료처리군의 흡광도/대조군의 흡광도] x 100

구분	농도(㎍/㎖)
	0.01	0.05
무처리	100±1.2
실시예 1	95.7±2.8	94.9±1.9
실시예 2	90.6±0.8	87.6±3.1
비교예 1	95.6±1.4	93.4±0.8
비교예 2	91.2±0.4	89.5±0.5

위 표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 비타민나무 발효물은 인간 피부에 안전하게 사용될 수 있음을 확인하였다.

시험예 2. DPPH 소거능

상기 실시예 및 비교예에서 제조된 비타민나무 발효물 및 비타민나무 열수추출물을 각각 에탄올 또는 메탄올에 적정한 농도로 희석한 용액 2 ml와 0.2 mM DPPH(1,1-dipenyl-2-picrylhydrazyl) 2 ml씩을 균일하게 혼합하였다. 그리고, 상기 혼합용액을 실온에서 30분간 방치한 다음, 517 nm에서 흡광도를 측정하고, 하기 수학식 2와 같이 계산한 후, 그 결과를 도 2에 나타내었다. 대조군 1로는 아스코브산(ascorbic acid)을 이용하였다.

[수학식 2]

Free radical scavenging activity(%)

Ao(대조군의 흡광도 값) : 2ml DPPH solution + 2ml solvent

Ai(시료의 흡광도 값) : 2ml DPPH solution + 2ml sample solution

Aj(대조군의 흡광도 값) : 2ml Sample solution + 2ml solvent

도 2는 대조군 1, 본 발명에 따라 제조된 실시예 1의 비타민나무 잎 발효물, 실시예 2의 비타민나무 열매 발효물, 비교예 1의 비타민나무 잎 열수추출물 및 비교예 2의 비타민나무 열매 열수추출물의 농도에 따른 DPPH 소거능을 나타낸 도면이다.

도 2에 도시된 바와 같이, 비타민나무 잎의 경우에는 비타민나무 잎 발효물(실시예 1)이 비타민나무 잎 열수추출물(비교예 1)에 비하여 DPPH 소거능이 우수하였으며, 비타민나무 열매의 경우에는 비타민나무 열매 발효물(실시예 2)이 비타민나무 열매 열수추출물(비교예 2)에 비하여 DPPH 소거능이 우수한 것을 확인하였다.

더욱이, 실시예 2의 비타민나무 열매 발효물은 다른 군에 비하여 DPPH 소거능이 우수하며, 양성대조군(대조군 1)에 비하여 농도 의존적으로 거의 유사한 DPPH 소거능을 보이는 것을 확인하였다.

시험예 3. 주름생성 억제

3-1. MMP-1 단백질의 합성 저해

CCD-986sk를 1.5X10⁵ cells/㎖의 농도로 35 mm dish에서 약 80% confluency에 도달할 때까지 배양하였다. 그리고, 원래의 배지를 제거한 후 PBS로 세척하여 배지 내 serum 성분을 제거한 다음, 필터를 장착한 UV 광원기(Coralife, 35W, UV)를 이용하여 UVA(6.3 J/㎠)를 24시간 동안 조사(凋謝)하였다.

UVA 조사 후 FBS를 첨가하지 않은 DMEM 배지에 본 발명의 실시예 또는 비교예에 의한 시료를 0.1, 10 및 100 ug/㎖의 농도별로 각각 투여한 후 24시간 동안 배양하였다. 이와 같이 배양한 배지를 96 well plate에 분주하고 4 ℃ 에서 하룻밤 동안 반응시켰다.

UVA 조사에 의해 유도되는 MMP-1 발현량 측정은 Dunsmore 등이 사용한 방법을 이용하여 실시하였다.

먼저, 상기 배지를 TBS(phosphate bufferdsaline + 0.05% Tween20)로 3회 세척한 후, 3% PBS로 37 ℃에서 1시간 동안 blocking하였다. 이후, 1차 항체(monoclonal anti-MMP-1 antibody)를 blocking buffer로 1 : 3000으로 희석한 용액을 가하고 37 ℃에서 90분간 반응시켰다. 그리고, PBS로 세척한 다음 2차 항체(alkaline phosphatase conjugated Goat anti-mouse IgG)를 blocking buffer로 1 : 3,000으로 희석한 용액을 첨가하고 37 ℃에서 90분간 반응시켰다. 그리고, PBS로 세척한 다음 alkaline phosphatase 기질용액(1 ㎎/㎖, p-mitrophenylphosphate in diethanolamine buffer)을 첨가하여 실온에서 30분간 반응시킨 후, 3N NaOH로 반응을 중지시켰다. 다음으로, microplate reader를 이용하여 405 ㎚에서 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3은 본 발명에 따라 제조된 실시예 1의 비타민나무 잎 발효물, 실시예 2의 비타민나무 열매 발효물, 비교예 1의 비타민나무 잎 열수추출물 및 비교예 2의 비타민나무 열매 열수추출물의 농도에 따른 MMP-1을 나타낸 그래프이다.

도 3에 도시된 바와 같이, 고농도의 비타민나무 잎 발효물(실시예 1) 및 비타민나무 열매 발효물(실시예 2)에서 유의한 정도로 MMP-1 단백질의 생성을 효과적으로 억제하여 피부 주름의 예방 및 개선에 효과적으로 사용될 수 있음을 알 수 있었다.

특히, 고농도에서 비타민나무 열매 발효물(실시예 2)이 비타민나무 잎 발효물(실시예 1)에 비하여 MMP-1 단백질의 생성을 더욱 효과적으로 억제하는 것을 확인하였다.

3-2. 타입 1 프로콜라겐 단백질의 합성 촉진

실시예 1의 비타민나무 잎 발효물, 실시예 2의 비타민나무 열매 발효물, 비교예 1의 비타민나무 잎 열수추출물 및 비교예 2의 비타민나무 열매 열수추출물의 피부주름 개선효능을 확인하기 위해, 피부의 탄력을 유지하는 단백질 collagen의 생성량을 측정하고자 하였다.

섬유아세포를 48 well plate에 1X10⁴ cells/well의 밀도로 분주하고, 10% FBS를 함유한 DMEM 배지에서 24시간 배양한 후에, 실시예 또는 비교예의 시료를 50 및 100 ㎍/mL로 첨가하고 무혈청 배지에서 24시간 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 procollagen type I C-peptide EIA kit(MK101, Takara, Japan)을 이용하여 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 측정하여 ng/㎖ 환산하였으며, 이에 의해 합성된 콜라겐 양을 측정하여 도 4에 나타내었다.

도 4는 본 발명에 따라 제조된 실시예 1의 비타민나무 잎 발효물, 실시예 2의 비타민나무 열매 발효물, 비교예 1의 비타민나무 잎 열수추출물 및 비교예 2의 비타민나무 열매 열수추출물의 농도에 따른 타입 1 프로콜라겐 단백질 합성을 나타낸 도면이다.

피부주름 개선효능을 확인하기 위해, 피부의 탄력을 유지하는 단백질 collagen의 생성량을 측정하였는데 도 4에 도시된 바와 같이, 고농도의 비타민나무 잎 발효물(실시예 1) 및 비타민나무 열매 발효물(실시예 2)에서 타입 1 프로콜라겐의 생성을 촉진하는 것을 확인하였다.

즉, 본 발명의 비타민나무 잎 발효물(실시예 1) 및 비타민나무 열매 발효물(실시예 2)은 타입 1 프로콜라겐의 생성을 촉진시키고, 콜라겐 분해 효소인 MMP-1의 발현을 억제하는 작용을 통해, 주름 생성을 효과적으로 예방하고, 생성된 주름을 개선하는 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

시험예 4. 미백효능

4-1. 티로시나제 억제 효과

실시예 1의 비타민나무 잎 발효물, 실시예 2의 비타민나무 열매 발효물, 비교예 1의 비타민나무 잎 열수추출물 및 비교예 2의 비타민나무 열매 열수추출물에 대하여 미백 효능 평가 시험의 대표적 방법인 티로시나제 효소 활성 억제능 측정을 dopachrome 방법을 사용하여 하기와 같이 수행하였다.

150 ㎕의 mushroom tyrosinase-150 unit, 225 ㎕의 2.5 mM L-tyrosine, 225 ㎕의 0.4 M hepes buffer(pH 6.8)과; 여기에 300 ㎕의 에탄올 용액 또는 시료(0.5, 1 및 5 ㎎/㎖)용액을 섞은 후 배양 전과 15분간 배양 후 475 ㎚에서 흡광도를 각각 측정하였다. 티로시나제 억제능은 하기 수학식 3에 의해 계산하였으며, 그 결과를 도 5에 나타내었다.

[수학식 3]

Tyrosinase inhibition (%) = (C-D)-(A-B)/(C-D) X 100

(A : 시료 함유 용액의 배양 후의 흡광도, B : 시료 함유 용액의 배양 전의 흡광도, C : 시료 미 함유 용액의 배양 전의 흡광도, D : 시료 미 함유 용액의 배양 후의 흡광도)

도 5는 대조군 1, 본 발명에 따라 제조된 실시예 1의 비타민나무 잎 발효물, 실시예 2의 비타민나무 열매 발효물, 비교예 1의 비타민나무 잎 열수추출물 및 비교예 2의 비타민나무 열매 열수추출물의 농도에 따른 티로시나제 억제능을 나타낸 그래프이다.

도 5에 도시된 바와 같이, 고농도의 비타민나무 잎 발효물(실시예 1) 및 비타민나무 열매 발효물(실시예 2)에서 티로시나제 억제 효과가 우수한 것을 확인하였다.

더욱이, 고농도에서 비타민나무 잎 발효물(실시예 1)이 비타민나무 열매 발효물(실시예 2)에 비하여 티로시나제 억제 효과가 더욱 우수한 것을 확인하였다.

4-2. 멜라닌 생성 억제 효능

마우스 유래 melanocyte인 B16F1 세포는 멜라닌(melanin)을 생성하며, 멜라닌은 표피 기저층에 존재하는 melanocyte내의 소기관인 melanosome에서 생합성되고 이는 가시광선 영역대의 흡광도를 측정함으로써 생성량을 비교할 수 있다.

B16F1 세포 접종 후 3일간 시료를 처리하고 배지를 제거한 다음 세포를 PBS로 세척하고, 각 well당 1 ㎖의 1 N NaOH를 첨가한 후 교반하여 세포막을 융해함으로써 멜라닌 성분을 녹여 나오게 하여, 가시광선 영역대 중 가장 파장이 짧은 푸른색 가시광선영역인 400 ㎚에서 흡광도를 측정함으로써 생성량을 비교하였다.

도 6은 본 발명에 따라 제조된 실시예 1의 비타민나무 잎 발효물, 실시예 2의 비타민나무 열매 발효물, 비교예 1의 비타민나무 잎 열수추출물 및 비교예 2의 비타민나무 열매 열수추출물의 농도에 따른 멜라닌 생성 억제능을 나타낸 그래프이다.

도 6에 도시된 바와 같이, 저농도의 비타민나무 잎 발효물(실시예 1) 및 비타민나무 열매 발효물(실시예 2)에서 우수한 멜라닌 생성 억제능을 보이는 것을 확인하였다.

더욱이, 저농도에서 비타민나무 잎 발효물(실시예 1)이 비타민나무 열매 발효물(실시예 2)에 비하여 멜라닌 생성 억제 효과가 더욱 우수한 것을 확인하였다.

시험예 5. 항염증 효능: NO assay

마우스 유래 대식세포주 Raw264.7은 DMEM 배지에 배양한 후, 24 well plate에 4.5X10⁴ cells/well의 농도로 넣은 다음, 시료를 첨가한 것과 첨가하지 않은 두 가지 군을 나누어 모두 37 ℃, 5% CO2 배양기에 48시간 동안 배양한 후 LPS(lipipilysaccharide)를 200 ng/well의 농도로 처리하여 일정시간 동안 세포를 배양하였다.

LPS를 단독처리하거나 혹은 시료로 전 처리한 후 LPS를 처리한 마우스 유래 대식 세포주를 48시간 동안 37 ℃, 5% CO2 배양기에서 배양한 후 세포배양 상청액 100 μl을 채취하여 여기에 동양의 그리스 시약을 혼합하여 15분 동안 반응시킨 후 microplate reader를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하며, Nitrite의 표준물질로는 sodium nitrite를 사용하였다.

도 7은 본 발명에 따라 제조된 실시예 1의 비타민나무 잎 발효물, 실시예 2의 비타민나무 열매 발효물, 비교예 1의 비타민나무 잎 열수추출물 및 비교예 2의 비타민나무 열매 열수추출물의 농도에 따른 NO 생성량을 나타낸 그래프이다(일예로 0.1 mg/ml 그래프에서 4개의 막대 그래프는 순서대로 비교예 1, 실시예 1, 비교예 2 및 실시예 2를 의미한다).

도 7에 도시된 바와 같이, LPS만 처리한 대조군 2(LPS)에서 NO 생성량이 35.0 uM인 것은 내독소인 LPS에 의해 NO 생성이 다량 유발된 것을 의미한다.

농도 의존적으로 비타민나무 잎 발효물(실시예 1) 및 비타민나무 열매 발효물(실시예 2)에서 항염활성이 증가한 것을 확인하였다.

더욱이, 농도 의존적으로 비타민나무 열매 발효물(실시예 2)이 비타민나무 잎 발효물(실시예 1)에 비하여 항염활성이 더욱 증가한 것을 확인하였다. 이러한 결과는 고농도에서 더욱 두드러진 것을 확인하였다.

본 발명을 적용하기에 적합한 화장료 조성물의 제조예를 제시하기로 한다.

제조예 1: 화장수

실시예 2의 비타민나무 열매 발효물을 포함하는 화장료 중 화장수의 제조예는 하기 표 2와 같다.

성분	함량(중량%)
비타민나무 열매 발효물	5.0
글리세린	6.0
1,3-부틸렌글라이콜	3.0
피이지1500	1.0
알란토인	0.1
DL-판테놀	0.3
EDTA-2Na	0.02
벤조페논-9	0.04
소듐하이알루로네이트	5.0
에탄올	10.0
폴리소르베이트20	0.2
방부제, 향, 색소	미량
증류수	잔량
합계	100

제조예 2: 로션

실시예 2의 비타민나무 열매 발효물을 포함하는 화장료 중 로션의 제조예는 하기 표 3과 같다.

성분	함량(중량%)
비타민나무 열매 발효물	3.0
프로필렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
트리에탄올아민	1.2
토코페릴아세테이트	3.0
유동 파라핀	5.0
스쿠알란	3.0
마카다미너트오일	2.0
폴리소르베이트 60	1.5
소르비탄세스퀴올레이트	1.0
카르복시비닐폴리머	1.0
방부제, 향, 색소	미량
증류수	잔량
합계	100

제조예 3: 영양 크림

실시예 2의 비타민나무 열매 발효물을 포함하는 화장료 중 영양 크림의 제조예는 하기 표 4와 같다.

성분	함량(중량%)
비타민나무 열매 발효물	1.0
친유형 모노스테아린산글리세린	1.5
세테아릴 알코올	1.5
스테아린산	1.0
폴리소르베이트 60	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.6
이소스테아릴이소스테아레이트	5.0
스쿠알란	5.0
광물유	35.0
디메치콘	0.5
하이드록시에칠셀룰로오스	0.12
글리세린	6.0
트리에탄올아민	0.7
방부제, 향, 색소	미량
증류수	잔량
합계	100

제조예 4: 에센스

실시예 2의 비타민나무 열매 발효물을 포함하는 화장료 중 에센스의 제조예는 하기 표 5와 같다.

성분	함량(중량%)
비타민나무 열매 발효물	1.5
글리세린	10.0
베타인	5.0
PEG 1500	2.0
알란토인	0.1
DL-판테놀	0.3
EDTA-2Na	0.02
벤조페논-9	0.04
하이드록시에칠셀룰로오스	0.1
소듐하이알루로네이트	8.0
카르복시비닐폴리머	0.2
트리에탄올아민	0.18
옥틸도데칸올	0.3
옥틸도데세스-16	0.4
에탄올	6.0
방부제, 향, 색소	미량
증류수	잔량
합계	100

제조예 5: 마스크 팩용 유액

실시예 2의 비타민나무 열매 발효물을 포함하는 화장료 중 마스크 팩용 유액의 제조예는 하기 표 6과 같다.

성분	함량(중량%)
비타민나무 열매 발효물	1.0
폴리비닐알코올	15.0
셀룰로오스 검	0.15
글리세린	3.0
PEG 1500	2.0
사이클로덱스트린	0.15
DL-판테놀	0.4
알란토인	0.1
글리시리진산모노암모늄	0.3
니코틴아마이드	0.5
에탄올	6.0
PEG 40 경화 피마자유	0.3
방부제, 향, 색소	미량
증류수	잔량
합계	100

Claims (4)

1. 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물을 락토바실러스 람노서스 HK-9(기탁번호: KCCM11254P)로 발효시킨 비타민나무 발효물을 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 비타민나무 발효물은 타입 I 프로콜라겐 단백질의 발현을 증가시키고, MMP-1 단백질의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 비타민나무 발효물은 비타민나무의 잎, 열매 또는 이들의 혼합물을 25 내지 45 ℃에서 36 내지 60시간 동안 발효시켜 수득된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부주름개선 효과, 미백 및 항염증 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.

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