KR20200083969A

KR20200083969A - 신경학적 상태를 치료하기 위한 방법 및 개선된 신경보호 조성물

Info

Publication number: KR20200083969A
Application number: KR1020207007410A
Authority: KR
Inventors: 로버트 에이. 뉴먼; 오티스 씨. 애딩턴; 도날드 씨. 로; 린다 에스. 칼텐바흐
Original assignee: 피닉스 바이오테크놀러지 인코포레이티드.
Priority date: 2017-09-14
Filing date: 2018-09-04
Publication date: 2020-07-09
Also published as: WO2019055245A9; CA3075023A1; US20210008017A1; JP7370966B2; RU2020113349A3; RU2020113349A; CN111417384A; JP2020534299A; US20190076381A1; US10973785B2; US10722482B2; MX2020002884A; AU2018334467B2; EP3681477A4; AU2018334467A1; RU2758376C2; WO2020050865A1; IL273161A; EP3681477A1; WO2019055245A1

Abstract

개선된 트리테르펜-기반 신경보호 조성물의 투여에 의해 대상에서 신경학적 상태를 치료하는 방법. 알츠하이머병, 헌팅턴병, 파킨슨병 및 뇌졸중이 상기 조성물의 치료적 유효량을 투여함으로써 치료된다.

Description

신경학적 상태를 치료하기 위한 방법 및 개선된 신경보호 조성물

본 발명은 트리테르펜들의 조합을 포함하는 개선된 신경보호 조성물로 신경학적 상태를 치료하는 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 필요한 대상에 조성물을 투여함으로써 신경학적 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 개선된 신경보호 조성물을 함유하는 제약학적 조성물을 포함한다.

신경학적 질환 및 장애는 뇌 기능에 영향을 미친다. 이들 질환 및 장애에 대한 치유적 또는 완화적 요법을 개발하기 위해 많은 노력이 이루어졌다; 그러나, 다양한 상이한 질환 및 장애에 효과적인 것으로 입증된 많은 약물요법적 접근법이 있음에도 포괄적이거나 보편적인 치유적 요법은 개발되지 않았다.

헌팅턴병(HD)은 신경계에 영향을 미치는 뇌의 유전적 질환이다. 이것은 모체에서 아이로 전달되는 결함 유전자에 의해 야기된다. HD 유전자는 적절한 뇌 발달에 중요한 것으로 드러난 "헌팅턴"이라고 하는 특정 단백질의 제조를 방해한다. HD의 고전적인 징후는 감정, 인지 및 운동 교란을 포함한다. 헌팅턴병은 급격한 비자발적 움직임(무도병)을 특징으로 하지만, 때로는 비정상적 움직임이 없는 강직, 사지를 사용하는 것의 변화(행동불능), 신체 기능 통제 상실 및 치매를 야기하며, 여기에는 점진적 기억 저하, 생각의 속도, 판단, 및 문제 인식 및 계획의 부족이 포함된다. 헌팅턴병에는 알려진 치료법이 없다. 감정 및 움직임의 문제와 같은 HD와 관련된 증상을 제어하는데 도움이 되는 많은 의약들이 있지만, 이 질환의 경과를 멈추거나 반전시킬 수 있는 치료는 없다. 헌팅턴병은 일반적인 막 이상성을 가진 질환으로 인식되었다. Na,K-ATPase의 유의하게 상승된 수준 및 활성(10배 증가)이 정상 상태의 값과 비교하여 헌팅턴병 환자의 적혈구 및 기저 신경절의 막(Butterfield DA, Oeswein JQ, Prunty ME, Hisle KC, Markesbery WR, 헌팅턴병에서 적혈구 막에서의 증가된 나트륨, 칼륨 아데노신 트리포스파타아제 활성. Ann Neurology, 4:60-62, 1978), 및 헌팅턴병 환자의 피부로부터 얻어진 섬유아세포 막(Schroeder F, Goetz IE, Roberts E, 헌팅턴병 섬유아세포에서 막 비정상성. J. Neurochem. 43: 526-539, 1984)에서 관찰되었다.

알츠하이머병은 뇌의 지적 기능(기억, 방향감각, 계산 등)은 손상시키지만 일반적으로 운동 기능은 보존하는 신경퇴행성 질환인 치매의 한 형태이다. 알츠하이머병에서는 정신이 점차 퇴보하며, 기억 상실, 혼동, 방향감각 상실, 판단 저해 및 정상적인 일상 활동을 수행하는 능력에 영향을 미칠 수 있는 다른 문제들을 야기한다. 정신적 변화의 유형, 심각성, 순서 및 진행은 매우 다양하다. 알츠하이머병에도 알려진 치료법이 없으며, 진행을 늦출 수 있는 방법도 없다. 이 질환이 조기에 또는 중년 단계에 찾아온 사람의 경우, 타크린과 같은 의약이 일부 인지 증상을 완화시킬 수 있다. Aricept(도데페질) 및 Exelon(리바스티그민)은 가역적 아세틸콜린에스테라아제 억제제이며, 알츠하이머 타입의 경증 내지 중간증 치매의 치료를 위해 처방된다. 이들 약물(콜린에스테라아제 억제제라고 한다)은 뇌에서 신경전달물질 아세틸콜린의 수준을 증가시킴으로써 작용하며, 뇌 세포들 사이의 통신을 회복시키는데 도움을 준다. 일부 의약은 불면, 동요, 방황, 불안 및 우울과 같은 행동 증상을 제어하는데 도움이 될 수 있다. 이들 치료는 환자를 더 편안하게 만드는 것을 목표로 한다. 알츠하이머병을 치료한다고 알려진 의약은 없지만, 콜린에스테라아제 억제제는 일상 활동의 수행력을 개선하거나, 행동 문제를 줄일 수 있다. 현재 시험 중인 알츠하이머병의 치료를 위한 의약은 에스트로겐, 비-스테로이드계 항염제, 비타민 E, 세레길린(Carbex, Eldepryl) 및 식물성 제품인 징코 빌로바를 포함한다.

트리테르펜은 광범위한 치료 활성을 지닌 것으로 알려져 있다. 공지된 트리테르펜 중 일부는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산, 바르독솔론, 마스린산 등을 포함한다. 트리테르펜의 치료 활성은 트리테르펜의 조합으로서가 아니라 주로 개별적으로 평가되었다.

Rong et al.(Pharm. Biol. (Jan 2011), 49(1), 78-85)은 올레아놀산이 허혈성 뇌졸중을 약화시키는데 적합할 수 있다고 제안한다. So et al.(Arch. Pharm. Res. (Jun 2009), 32(6), 923-932)은 올레아놀산이 뇌졸중에서 신경변성의 예방 및 치료에 적합할 수 있다고 제안한다. Li et al.(Brain Res. (Feb. 2013), 1497, 32-39)은 우르솔산이 쥐에서 뇌 허혈 후 신경보호를 제공할 수 있다고 제안한다. Garcia-Morales et al.(Arch. Pharm. Res. (Jul 2015), 38(7), 1369-1379)은 부바르디아 테르니폴리아(Bouvardia ternifolia)의 추출물이 더 나아가 알츠하이머병을 치료하는데 적합하다고 제안한다. Zhang et al.(Neuroscience Letters (2014), 579, 12-17)은 우르솔산이 실험적 지주막 출혈 후 산화성 스트레스를 감소시킨다고 보고한다. Qian et al.(Eur. J. Pharmacol. (2011), 670(1), 148-153)은 마스린산이 래트에서 산소-글루코오스 박탈-유도 손상에 대해 피질 뉴런을 보호한다고 보고한다. Consejo Superior de Investigaciones Cientificas(Madrid, ES)에 의한 EP 2260851 A1은 다발성 경화증의 치료를 위한 올레아놀산의 사용을 제안한다. Yoo et al.(Molecules, (May 2012), 17(3), 3524-38)은 항-알츠하이머병 치료제로서 테르페노이드의 사용을 제안한다. Heo et al.(Mol. Cells (Feb. 2002), 13(1), 5-11)은 우르솔산이 아밀로이드 베타 단백질-유도 산화성 세포 사멸을 감소시킨다고 제안한다. Chung et al.(Mol. Cells (April 2001), 11(2), 137-143)은 우르솔산이 알츠하이머병에서 아세틸콜린에스테라아제의 강력한 억제제인 것 같다고 제안한다. Choi et al.에 의한 US 2007/0249711 A1(공개일 2007년 10월 25일)은 경증 인지 손상 및 치매를 예방하고 치료하기 위해 뇌 기능을 개선하기 위한 올레아놀산과 우르솔산의 사용을 제안한다.

올레아놀산은, 전사 인자 Nrf2의 활성화가 항산화제 전사 반응 요소(ARE)를 함유하는 하류 항산화 유전자의 프로그램에서 전사 증가를 초래하는, 선천적 세포 2기 해독 경로의 강력한 활성제인 것으로 나타난 바르독솔론과 같은 화합물에 의해 대표되는 트리테르페노이드의 유형에 속한다. 바르독솔론 자체는 염증성 상태의 임상 시험에서 광범하게 조사되었다; 그러나, 증가된 농도에서 바르독솔론을 포함하는 특정 트리테르페노이드의 공지된 세포 독성과 관련되었을 수 있는 부작용으로 인해 만성 신장 질환에 대한 3상 임상 시험이 종료되었다.

다른 치료 성분과 조합하여 트리테르펜을 함유하는 조성물은 식물 추출물로서 발견된다. Fumiko et al.(Biol. Pharm. Bull (2002), 25(11), 1485-1487)은 파동편모충증의 치료를 위해 로스마리무스 오피시날리스 엘.(Rosmarimus officinalis L.)의 메탄올 추출물을 평가한 것을 개시한다. Addington et al.(US 8481086, US 9220778, US 9358293, US　20160243143 A1)은 신경학적 상태의 치료를 위한 올레안드린과 트리테르펜을 함유하는 네리움 올레안데르(Nerium oleander)의 초임계 유체 추출물(SCF; PBI-05204)을 개시한다. Addington et al.(US　9011937, US 2015-0283191 A1)은 신경학적 상태의 치료를 위한 올레안드린과 트리테르펜을 함유하는 네리움 올레안데르의 SCF 추출물의 트리테르펜-함유 분획(PBI-04711)을 개시한다. Jager et al.(Molecules (2009), 14, 2016-2031)은 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 기타 성분의 혼합물을 함유하는 다양한 식물 추출물을 개시한다. Mishra et al.(PLoS One 2016 25;11(7):e0159430. Epub 2016 Jul 25)은 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 기타 성분의 혼합물을 함유하는 베툴라 유틸리스(Betula utilis) 껍질의 추출물을 개시한다. Wang et al.(Molecules (2016), 21, 139)은 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 기타 성분의 혼합물을 함유하는 알스토니아 스콜라리스(Alstonia scholaris)의 추출물을 개시한다. L. e Silva et al.(Molecules (2012), 17, 12197)은 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 기타 성분의 혼합물을 함유하는 에리오페 블란체티(Eriope blanchetti)의 추출물을 개시한다. Rui et al.(Int. J. Mol. Sci. (2012), 13, 7648-7662)은 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 기타 성분의 혼합물을 함유하는 유카플립투스글로불루스(Eucaplyptus globulus)의 추출물을 개시한다. Ayatollahi et al.(Iran. J. Pharm. Res. (2011), 10(2), 287-294)은 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 기타 성분의 혼합물을 함유하는 유포르비아 마이크로시아디아(Euphorbia microsciadia)의 추출물을 개시한다. Wu et al.(Molecules (2011), 16, 1-15)은 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 기타 성분의 혼합물을 함유하는 리구스트룸(Ligustrum) 종의 추출물을 개시한다. Lee et al.(Biol. Pharm. Bull (2010), 33(2), 330)은 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 기타 성분의 혼합물을 함유하는 포르시티아 비리디시마(Forsythia viridissima)의 추출물을 개시한다.

올레아놀산(O 또는 OA), 우르솔산(U 또는 UA) 및 베툴린산(B 또는 BA)은 PBI-05204(PBI-23; 네리움 올레안데르의 초임계 유체 추출물) 및 PBI-04711(PBI-05204의 트리테르펜-함유 분획 0-4)에서 발견된 3개의 주요 트리테르펜 성분이다. 우리(본 발명자 중 2명)는 뇌 슬라이스 산소 글루코오스 박탈(OGD) 모델 분석에서 유사한 농도에서 이들의 신경보호 활성을 비교함으로써 효능에 대한 트리테르펜들의 기여에 대해 이미 보고했다(Van Kanegan et al., in Nature Scientific Reports (May 2016), 6:25626. doi: 10.1038/srep25626). 우리는 PBI-05204(PBI) 및 PBI-04711(분획 0-4)이 신경보호 활성을 제공한다는 것을 발견했다(도 1). 다음에, 우리는 등몰 기준으로 OGD 분석에서 개별적으로 3개의 주요 개별 트리테르펜과 유바올(Uva)의 신경보호 활성을 평가했다(도 5). 우리는 OA가 UA보다 높은 활성을 제공하지만, BA 및 Uva(유바올)는 시험된 농도에서 활성을 거의 내지는 전혀 제공하지 않는다는 것을 발견했다. 우리는 이 분석에서 UA의 활성이 농도 의존적 방식으로 가변적 활성을 나타낸다는 것을 발견했다. 우리는 PBI-04711과 개별 트리테르펜의 기저 신경보호 활성의 가능한 메커니즘으로서 핵 인자 에리트로이드 2 관련 인자(Nrf2)-의존적 항산화 유전자의 활성화를 가정했다. 따라서, ARE-루시페라제 프로모터-리포터 분석을 이용하여, 우리는 뇌 슬라이스 OGD 분석에서 뉴런 및 신경교 세포 타입으로 이루어진 피질선조체 일차 뉴런성 공-배양물 시스템을 사용하여 뉴런에서 이들 조성물이 Nrf2-ARE(항산화 전사 반응 요소) 유전자 경로를 활성화하는 능력을 결정했다. 우리는 PBI-04711이 세포 항산화 방어 경로를 매개하는 전사 인자 NRF2의 활성화를 통해서 전형적 표적 ARE 유전자(글루타메이트-시스테인 리가아제, 촉매 서브유닛(Gclc); NAD(P)H:퀴논 옥시도리덕타아제 1(Nqo1); 설프레독신 항산화 단백질(Srx); 및 헤메옥시게나아제 1(Hmox1))의 발현을 증가시킨다는 것을 발견했다(도 2a-2d). 그러나, 개별 트리테르펜의 활성과 PBI-04711의 활성을 비교했을 때(도 3), 우리는 UA가 BA 및 OA와 비교하여 ARE 유전자 발현을 유도하는데 있어, 단일 제제로서, 상당히 더 강력한 것으로 보인다는 것을 발견했으며, 이것은 Srx 및 Hmox1의 유도가 OA나 BA의 활성보다 UA의 활성에 더 많이 기인하지만, UA는 여전히 신경보호 OGD 분석에서는 더 낮은 활성을 나타낸다는 것을 의미한다. 우리는 UA 및 BA가 유전자 발현에서는 가장 활성이지만 이들은 또한 유전자 발현을 유도하는데 필요한 농도보다 단지 2-3배 더 높은 농도에서 매우 독성임을 발견했다. 우리의 이전 결과는 UA 및 BA가 너무 독성이라서 생체내에서 완전한 ARE-유도 활성을 실현하는 용량을 달성하기 어려울 수 있다는 것을 시사했다. 우리의 이전 결과는 또한 OA가 비교적 비활성이기 때문에 몰 비율로 (PBI-05204 및 PBI-04711에서) 트리테르펜들을 조합하는 것은 세포 수준에서 독성이 아닌 용량에서 최적의 신경보호 활성을 달성하기 어려울 수 있다는 것을 시사했다.

US 8481086, US 922078, US 9358293, 및 US　2016-0243143 A1은 신경학적 상태의 치료를 위한 PBI-05204의 사용을 개시한다. US 9011937 및 US 2015-0283191 A1은 신경학적 상태의 치료를 위한 PBI-04711의 사용을 개시한다.

선행기술 중 어느 것도 트리테르펜이 여기 정의된 것과 같이 몰 비율로 존재하는 올레아놀산, 우르솔산 및 베툴린산으로부터 선택된 3개의 상이한 트리테르펜의 조합을 함유하는 신경보호 조성물이나 신경학적 상태의 치료를 위한 이러한 조성물의 사용을 제안하지 않는다. 선행기술 중 어느 것도 개별 트리테르펜의 투여 또는 트리테르펜들의 다른 조합의 투여와 비교하여 트리테르펜들의 이러한 조합의 투여에 의해 제공된 개선을 인정하지 않는다.

아래의 도면의 본 명세서의 일부를 형성하고, 선행기술의 일부와 청구된 발명의 예시적인 구체예들을 설명한다. 당업자는 이들 도면 및 본원의 설명에 비추여 과도한 실험 없이 본 발명을 실시할 수 있을 것이다.
도 1은 뇌 슬라이스 산소-글루코오스 박탈(OGD) 분석에서 PBI-05204(PBI)와 PBI-04711(PBI-05204의 분획 0-4)를 비교 평가한 결과를 도시한다(선행기술; Van Kanegan: 상동). 관상형 뇌 슬라이스 외식편이 준비되고 5.5분 일시 OGD가 수행되었다. 각 뇌 슬라이스에서 건강한 피질 추체 뉴런의 수가 24시간 후 기록되었다. 그래프에서 처음 3개 막대는 OGD가 수행되지 않은 대조군 뇌 슬라이스("대조군"); OGD가 수행되고 DMSO 담체로만 처리된 음성-대조군 뇌 슬라이스("OGD"); 및 OGD가 수행되고 완전 PBI-05204 추출물 24μg/ml로 처리된 양성-대조군 뇌 슬라이스("PBI 23")를 나타낸다. 이 분획들은 μg/ml의 단위로 나타낸 농도에서 시험되었다. 분획 0-4는 시험된 농도에서 유의한 신경보호를 제공했다(10μg/ml 이상의 분획 0-3의 농도는 독성을 나타냈다; 데이터 미도시).
도 2a-2d는 분획 0-4(PBI-04711)에 대한 ARE 유전자 발현 분석의 결과를 도시한다(선행기술: Van Kanegan: 상동): a) Gclc 발현(도 2a); b) Nqo1 발현(도 2b); c) Srx 발현(도 2c); 및 d) Hmox1 발현(도 2d). 일차 마우스 피질선조체 공-배양물이 6시간 동안 나타낸 농도에서 분획 0-4로 처리된 다음, 제시된 ARE 표적 유전자의 qPCR 분석을 위해 수집되고 가공되었다. 정량적 RNA 값이 GAPDH 기준 대조군에 대해 정규화되며, 1의 값으로 설정된 DMSO-담체 조건("0")에 대한 배수-발현 변화가 표시된다.
도 3은 분획 0-4 및 개별 트리테르펜 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 유바올(유바롤이라고도 한다)에 대한 ARE 유전자 발현 분석 결과를 도시한다(선행기술: Van Kanegan: 상동). "X" 기호는 독성을 유도했고 잔류 mRNA의 회수가 qPCR 분석을 지원하기에 불충분했던 화합물의 농도를 표시한다. 래트 일차 피질선조체 공-배양물이 분획 0-4(μg/ml 단위) 또는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산, 또는 유바올(모두 μM 단위)로 나타낸 농도에서 6시간 동안 처리된 다음, 제시된 ARE 표적 유전자의 qPCR 분석을 위해 수집되고 가공되었다. 정량적 RNA 값이 GAPDH 기준 대조군에 대해 정규화되며, 1의 값으로 설정된 DMSO-담체 조건("--")에 대한 배수-발현 변화가 표시된다. 검은색 막대는 p<0.05에서 스튜던트 t-검정에 의한 DMSO-담체 대조군에 대한 통계적으로 유의한 차이를 표시한다.
도 4는 분획 0-4 및 개별 트리테르펜 우르솔산 및 베툴린산에 대한 더 가까운 간격의 농도 범위에서의 발현 분석 결과를 도시한다. 래트 일차 피질선조체 공-배양물이 분획 0-4(μg/ml 단위) 또는 우르솔산 및 베툴린산(μM 단위)으로 나타낸 농도에서 6시간 동안 처리된 다음, 제시된 ARE 표적 유전자의 qPCR 분석을 위해 수집되고 가공되었다. 정량적 RNA 값이 GAPDH 기준 대조군에 대해 정규화되며, 1의 값으로 설정된 DMSO-담체 조건("--")에 대한 배수-발현 변화가 표시된다. 암청색 막대는 p<0.05에서 스튜던트 t-검정에 의한 DMSO-담체 대조군에 대한 통계적으로 유의한 차이를 표시한다. 베툴린산도 우르솔산과 마찬가지로 그것의 독성에도 불구하고 더 높은 농도에서 Srx 및 Hmox1의 명백한 상향조절을 유도할 수 있다.
도 5는 올레아놀산(OA), 우르솔산(UA), 베툴린산(BA) 및 유바올(Uva)을 신경보호 OGD 분석에서 비교 평가한 결과를 도시한다(선행기술: Van Kanegan: 상동). 뇌 슬라이스 OGD 분석에서 UA, BA, 및 Uva(모두 μg/ml 단위)에 대한 농도-반응 관계가 도시된다. 2번의 독립적 실험의 평균이 각 화합물에 대해 포함되며, OGD 음성-대조군 조건은 100%로 규모가 설정되고, 데이터는 비교의 용이성을 위해 동일한 축에 플롯팅된다. 양성 대조군은 4μg/ml 올레아놀산(O)이었다. 이들은 각 화합물에 대해 등몰 농도임을 주지하며, 모든 화합물에 대한 분자량은 유바올만 제외하고 동일하다. 유바올은 표시 목적을 위해 하나의 유의한 숫자로 반올림된 0.039, 0.39, 및 3.88μg/ml에서 시험되었다. 검은색 막대는 0.05 신뢰도 수준에서 ANOVA와 Dunnett의 post hoc 비교 검정에 의해 얻어진 OGD 음성 대조군에 대한 통계적으로 유의한 차이를 표시한다.
도 6a, 6b, 7a, 7b, 8a 및 8b는 아래 실시예에 따라서 평가된 신경교를 함유하는 일차 피질선조체 뉴런성 공-배양물에 대한 트리테르펜의 세포 독성을 비교한 결과를 도시한다: 우르솔산(도 6a, 6b), 베툴린산(도 7a, 7b) 및 올레아놀산(도 8a, 8b). 도 6a, 7a 및 8a의 경우, 요오드화프로피듐이 1시간 동안 첨가된 다음, PI-양성 세포의 수가 Cellomics ArrayScan VTI에서 자동 고-함량 분석으로 기록되었다. 도 6b, 7b 및 8b의 경우, MTS 기질이 2시간 동안 첨가된 다음, 공-배양물 웰이 멀티-웰 플레이트 리더를 사용하여 450nm에서 흡광도에 대해 측정되었다.
도 9a-9c는 실시예 3에 따라서 허혈성 뇌졸중에 대한 뇌 슬라이스 분석에서 결정된 트리테르펜 혼합물(조성물 I: O:U:B 몰비 3:2.2:1, PBI-04711 동일(Fxn 0-4; 도 9a); 조성물 II: O:U:B 몰비 7.8:7.4:1, PBI-05204 동일(도 9b); 및 조성물 III: O:U:B 몰비 약 10:1:1, 본 발명의 개선된 조성물(PBI-01011; 도 9c))의 신경보호를 비교한 결과를 도시한다. 뇌 슬라이스당 건강한 피질 추체 뉴런의 수가 산소-글루코오스 박탈(OGD) 및 비히클(DMSO)에 노출된 뇌 슬라이스의 100%로 설정된 음성 대조군 조건(각 그래프의 두 번째 막대)에 대해 도시된다. OGD에 노출되지 않은 양성 대조군 뇌 슬라이스에 대한 값은 각 그래프의 첫 번째 막대에 도시된다. 평균값 + SEM이 각 트리테르펜 혼합물에 대해 3-5회의 독립적 라운드에 걸쳐서 평균으로 표시된다; 연청색 막대는 p<0.05에서 ANOVA와 Dunnett의 post hoc 비교 검정에 의해 얻어진 OGD 음성 대조군에 대한 통계적으로 유의한 차이를 표시한다.
도 10a 및 10b는 PBI-05204, PBI-04711(Fxn 0-4로 언급된다)), 올레아놀산(O), 우르솔산(U), 베툴린산(B) 및 명시된 몰 비율로 존재하는 트리테르펜들의 조합에 대한 Srx(도 10a) 및 Hmox1(도 10b) 발현 분석을 비교한 결과를 도시한다. 정량적 RNA 값이 GAPDH 기준 대조군에 대해 정규화되며, 1의 값으로 설정된 DMSO-담체 조건에 대한 배수-발현 변화가 표시된다. 암청색 막대는 p<0.05에서 스튜던트 t-검정에 의해 얻어진 DMSO-담체 대조군에 대한 통계적으로 유의한 차이를 표시한다. 줄무늬 적색 막대는 10배를 넘는 정도의 과도한 수준의 ARE 유전자 발현을 유도했던 조건을 표시한다.

본 발명의 목적은 활성 성분으로서 복수의 트리테르펜을 포함하는 개선된 신경보호 조성물을 제공하는 것이며, 상기 조성물은 등몰 기준으로 다른 밀접하게 관련된 트리테르펜-기반 조성물과 비교하여 증가된 ARE 유전자 발현, 증가된 신경보호 및 감소된 세포 독성을 제공한다.

본 발명의 다른 목적은 과도한 세포 독성을 가져오지 않고 넓은 용량 범위에 걸쳐서 신경보호를 제공할 수 있는 ARE 유전자의 균형잡힌 발현을 제공하는 트리테르펜-기반 신경보호 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 등몰 기준으로 다른 밀접하게 관련된 트리테르펜-기반 조성물과 비교하여 더 넓은 용량 반응 곡선 및 더 넓은 치료 창을 제공하는 개선된 신경보호 조성물을 제공하는 것이다.

개선된 신경보호 조성물은 더 넓은 치료 창을 제공하며, 이것은 등몰 기준으로 다른 밀접하게 관련된 트리테르펜-기반 조성물과 비교하여, 특히 용량 범위의 상한에서 더 낮은 독성과 함께 더 넓은 용량 범위의 제공을 의미한다.

본 발명은 적어도 3개의 트리테르펜을 포함하는(으로 본질적으로 구성되는) 개선된 신경보호 조성물을 필요한 대상에 투여하는 단계를 포함하는 신경학적 상태를 치료하는 개선된 방법을 제공한다. 트리테르펜의 몰 비율은 신경보호 조성물(들)의 효능 및 안전성에 영향을 미치는 것으로 판명되었다. 본 발명의 구체예들은 트리테르펜의 몰 비율이 본 발명에 설명된 것과 같은 것들을 포함한다. 개선된 신경보호 조성물에서 트리테르펜의 몰 비율은 PBI-05204 및 PBI-04711에서 발견된 것과 상이하며 그것에 비해 개선된다. 일부 구체예에서, 신경보호 조성물은 단독 약리학적 활성 성분(제제)으로서 트리테르펜을 함유한다. 신경보호 조성물은 스테로이드, 강심성 글리코사이드, 생물학/약리학적 활성 다당류, 및/또는 비-강심성 글리코사이드 스테로이드를 배제할 수 있다.

한 양태에서, 본 발명은, 치료가 필요한 대상에서, 적어도 2개 또는 적어도 3개의 트리테르펜을 포함하는 신경보호 조성물로 신경학적 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은

대상이 신경학적 질환 또는 장애를 가지는지 결정하는 단계; 및

신경보호 조성물의 치료적 유효량을 대상에 투여하도록 처방하는 단계

를 포함한다.

한 양태에서, 본 발명은, 치료가 필요한 대상에서, 신경보호 조성물로 신경학적 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은

를 포함한다.

본 발명은 또한, 치료가 필요한 대상에서, 신경보호 조성물로 신경학적 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 신경보호 조성물의 치료적 유효량을 대상에 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 일부 구체예는 1) 신경보호 조성물의 치료적 관련 양을 대상에 처방하고 투여하는 것; 2) 처방된 투약 섭생에 따라서 신경보호 조성물을 투여하는 것; 3) 신경보호 조성물이 강심성 글리코사이드를 배제하는 것; 4) 신경보호 조성물이 강심성 글리코사이드의 치료적 유효량을 배제하는 것; 5) 신경보호 조성물이 올레안드린을 배제하는 것; 6) 신경보호 조성물이 네리이폴린을 배제하는 것; 7) 신경보호 조성물이 네리움 종 또는 테베티아(Thevetia) 종으로부터 얻어진 약리학적 활성 다당류를 배제하는 것; 또는 8) 상기 중 어느 것의 조합을 포함한다.

또한, 본 발명은 치료가 필요한 대상에서 신경학적 상태를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은

대상에서의 신경학적 상태가 알츠하이머병, 헌팅턴병, 뇌졸중, 파킨슨병 또는 다른 신경학적 상태인지 아닌지 결정하는 단계;

신경보호 조성물의 투여를 처방하는 단계;

일정 시간 기간 동안 처방된 초기 투약 섭생에 따라서 대상에 신경보호 조성물의 초기 용량을 투여하는 단계;

신경보호 조성물을 사용한 치료에 대한 대상의 임상 반응 및/또는 치료 반응의 적합성을 주기적으로 결정하는 단계; 및

대상의 임상 반응 및/또는 치료 반응이 충분하다면, 원하는 임상 종점이 달성될 때까지 필요에 따라 신경보호 조성물을 사용한 치료를 계속하는 단계; 또는

초기 용량 및 초기 투약 섭생에서 대상의 임상 반응 및/또는 치료 반응이 불충분하다면, 대상에서 원하는 임상 반응 및/또는 치료 반응이 달성될 때까지 신경보호 조성물의 용량을 상승 또는 저감시키는 단계

를 포함한다.

또한, 본 발명은 위험이 있는 대상의 집단에서 신경학적 상태의 발생 발병율을 예방 또는 감소시키는 방법을 제공하며, 이 방법은 알츠하이머병, 헌팅턴병, 파킨슨병, 뇌졸중 또는 다른 신경학적 상태에 걸릴 위험이 있는 대상의 집단에서 하나 이상의 대상에 연장된 시간 기간 동안 주기적 기준으로 신경보호 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하며, 이로써 상기 집단에서 신경학적 상태의 발병율을 예방 또는 감소시킨다.

또한, 본 발명은 a) 상기 방법이 하나 이상의 대상에 신경보호 조성물의 투여를 처방하는 단계를 더 포함하는 구체예; b) 상기 방법이 일정 시간 기간 동안 처방된 투약 섭생에 따라서 대상에 신경보호 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 더 포함하는 구체예; c) 상기 방법이 신경보호 조성물을 사용한 치료에 대한 하나 이상의 대상의 임상 반응 및/또는 치료 반응의 적합성을 주기적으로 결정하는 단계를 더 포함하는 구체예; d) 대상의 임상 반응 및/또는 치료 반응이 충분한 경우, 상기 방법이 원하는 임상 종점이 달성될 때까지 필요에 따라 신경보호 조성물을 사용한 치료를 계속하는 단계를 더 포함하는 구체예; e) 초기 용량 및 초기 투약 섭생에서 대상의 임상 반응 및/또는 치료 반응이 불충분한 경우, 상기 방법이 대상에서 원하는 임상 반응 및/또는 치료 반응이 달성될 때까지 신경보호 조성물의 용량을 상승 또는 저감시키는 단계를 더 포함하는 구체예; f) 신경보호 조성물이 집단 내 복수의 대상에 투여되는 구체예; g) 주기적 기준은 매일 한번, 이틀에 한번, 하루 걸러 한번, 3일에 한번, 4일에 한번, 5일에 한번, 6일에 한번, 매주 한번, 2주에 한번, 한주 걸러 한번, 3주에 한번, 매달 한번, 2달에 한번, 매월 2번, 2달에 한번, 한달 걸러 한번, 분기마다 한번, 1년에 2번, 1년에 3번, 계절마다 한번, 1년에 2번 및/또는 1년에 한번인 구체예; h) 연장된 기간이 1주 이상, 1개월 이상, 1분기 이상 및/또는 1년 이상인 구체예; i) 유효량이 하루 1회 이상 투여되는 구체예; j) 상기 방법이 알츠하이머병, 헌팅턴병, 파킨슨병, 뇌졸중 또는 다른 신경학적 상태와 같은 신경학적 상태에 걸릴 위험이 있는 대상의 집단을 확인하는 단계를 더 포함하는 구체예; k) 위험이 있는 대상의 집단은 대상의 노령화, 신경학적 상태의 가족력, 신경학적 상태 발생의 유전적 소인, 대상에서 ApoE4 유전자의 존재 및 발현, 여성(알츠하이머병은 남성보다 여성에서 2배 더 많다), 심혈관 질환(예를 들어, 고혈압 및 높은 콜레스테롤 수준), 당뇨병(특히 제2형 당뇨병 및 성인 개시형 당뇨병), 다운증후군, 두부 손상, 낮은 정규 교육 수준, 흡연, 과도한 알코올 소비 및/또는 약물 남용을 특징으로 하는 구체예; 또는 l) 이들의 조합을 포함한다.

또한, 본 발명은 대상에서 뇌졸중을 치료하는 시간-지연 방법을 제공하며, 이 방법은

대상이 뇌졸중에 걸린 후 지연 기간 내에, 초기 투약 섭생에 따라서 신경보호 조성물의 초기 용량을 투여하는 단계;

신경보호 조성물을 사용한 치료에 대한 대상의 임상 반응 및/또는 치료 반응의 적합성을 결정하는 단계; 및

를 포함한다.

본 발명의 일부 구체예는 1) 지연 기간이 10시간 이하, 8시간 이하, 6시간 이하, 4시간 이하, 3시간 이하, 2시간 이하, 1시간 이하, 45분 이하, 30분 이하, 20분 이하 또는 10분 이하인 구체예; 2) 대상의 임상 및/또는 치료 반응의 충분성을 결정하는 단계가 신체의 한쪽 편에서 얼굴, 팔 및/또는 다리의 약화, 신체의 한쪽 편에서 얼굴, 팔 및/또는 다리의 마비, 말하는 언어를 이해할 수 있는 능력의 상실, 말하거나 분명히 말할 수 있는 능력의 상실, 쓸 수 있는 능력의 상실, 현기증 및/또는 보행 불균형, 복시 및 일반적이지 않은 심한 두통의 평가에 의해 행해지는 구체예; 또는 3) 이들의 조합을 포함한다.

또한, 본 발명은 대상에서 신경학적 상태의 치료를 위한 의약의 제조에서 신경보호 조성물의 사용을 제공한다. 일부 구체예에서, 이러한 의약의 제조는 신경보호 조성물을 제공하는 단계; 제약학적 제형에 신경보호 조성물의 용량을 포함시키는 단계; 및 제약학적 제형을 포장하는 단계를 포함한다. 본 발명은 또한 대상에서 신경학적 상태의 치료를 위한 신경보호 조성물을 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다. 이것은 제조는 또한 하나 이상의 추가의 단계, 예컨대 포장된 제형을 판매자(소매업자, 도매업자 및/또는 유통업자)에게 송달하는 단계; 포장된 제형을 신경학적 상태를 가진 대상에게 판매하거나 다른 식으로 제공하는 단계; 사용, 투약 섭생, 투여, 내용물 및 제형의 독성 프로파일에 대한 설명서를 라벨 및 포장 삽입물을 의약과 함께 포함시키는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 신경학적 상태의 치료는 대상이 신경학적 질환 또는 장애를 가지는지 결정하는 단계; 투약 섭생에 따라서 대상에 신경보호 조성물을 투여하도록 처방하는 단계; 신경보호 조성물을 함유하는 하나 이상의 제약학적 제형을 대상에 투여하는 단계를 포함하며, 상기 하나 이상의 제약학적 제형은 상기 투약 섭생에 따라서 투여된다.

일부 구체예에서, 신경학적 상태를 가진 대상, 즉 치료가 필요한 대상은 이러한 대상의 집단의 일부이다. 본 발명은 신경학적 상태를 가진 대상들의 집단에서 대상의 통계적으로 유의한 수의 임상 상태를 개선하는 방법을 제공하며, 이 방법은 본 발명에 설명된 것과 같은 신경보호 조성물을 대상들의 집단에 투여하는 단계; 및 대상들의 임상 상태를 결정하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 통계적으로 유의한 수는 집단의 적어도 5%이다.

일부 구체예에서, 신경학적 상태는 알츠하이머병, 헌팅턴병, 뇌졸중, 파킨슨병, 타우병증 또는 본 발명에 설명된 것과 같은 다른 신경학적 상태이다.

신경보호 조성물을 사용한 대상의 치료는 필요에 따라 계속된다. 용량 또는 투약 섭생은 질환과 관련된 특정 신경학적 증상의 감소 또는 완화와 같은 원하는 임상 종점(들)에 환자가 도달할 때까지 필요에 따라 조정될 수 있다. 임상 반응 및/또는 치료 반응의 적합성의 결정은 치료될 신경학적 상태에 익숙한 임상의에 의해 결정될 수 있다.

일부 구체예에서, 신경학적 상태는 신경학적 질환, 신경학적 장애, 타우병증 및 뇌졸중으로 구성되는 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 신경학적 질환은 신경퇴행성 질환이다. 일부 구체예에서, 신경학적 질환은 헌팅턴병, 알츠하이머병, 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증, 광우병, 다발성 경화증, 당뇨병성 신경병증, 자폐증 및 소아 신경 세로이드 리포푸신증으로 구성되는 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 뇌졸중은 뇌졸중-매개 허혈성 손상이다. 일부 구체예에서, 신경학적 상태는 타우병증이며, 이것은 대상에서 Tau3R/Tau4R 비의 불균형과 관련된 병인을 가진 신경퇴행성 질환이다. 타우병증은 사람 뇌에 tau 단백질의 병적인 축적으로 인한 신경퇴행성 질환의 한 유형이다. 일부 구체예에서, 타우병증은 다운증후군, 픽병, 피질기저부 변성, 프리온 질환의 일부 변이형, 알츠하이머병, 진행성 핵상 마비 또는 전측두엽 치매이다. 본 발명의 방법의 개별 단계들은 별도의 시설에서 또는 동일한 시설 내에서 수행될 수 있다.

일부 구체예에서, 본 발명은 대상에 투여되었을 때 본 발명에 설명된 것과 같은 치료 활성을 나타내는 신경보호 조성물을 제공한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 방법은 본 발명에 설명된 것과 같은 신경보호 조성물을 이용한다.

일부 구체예에서, 본 발명의 신경보호 조성물은 적어도 2개의 트리테르펜을 포함한다(으로 본질적으로 구성된다). 일부 구체예에서, 본 발명의 신경보호 조성물은 적어도 3개의 트리테르펜을 포함한다(으로 본질적으로 구성된다).

일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 올레아놀산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 우르솔산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 선택적으로 적어도 하나의 다른 트리테르펜을 포함하며(으로 본질적으로 구성되며), 트리테르펜들의 몰 비율은 본 발명에 설명된 것과 같다. 예들 들어, 상기 조성물은 베툴린산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 또는 적어도 하나의 다른 트리테르펜을 더 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 올레아놀산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 베툴린산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 선택적으로 적어도 하나의 다른 트리테르펜을 포함하며(으로 본질적으로 구성되며), 트리테르펜들의 몰 비율은 본 발명에 설명된 것과 같다. 예들 들어, 상기 조성물은 우르솔산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 또는 적어도 하나의 다른 트리테르펜을 더 포함할 수 있다.

본 발명의 일부 구체예는 적어도 올레아놀산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그), 베툴린산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그), 및 우르솔산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)을 포함하는(으로 본질적으로 구성되는) 신경보호 조성물을 제공한다.

제약학적 제형은 신경보호 조성물과 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.

일부 구체예에서, 신경보호 조성물은 트리테르펜인 올레아놀산, 우르솔산, 및 베툴린산을 포함하며(으로 본질적으로 구성되며), 트리테르펜들의 몰 비율은 본 발명에 설명된 것과 같다. 일부 구체예에서, 신경보호 조성물은 적어도 하나의 제약학적으로 허용되는 부형제를 더 포함하는 제약학적 조성물에 포함된다.

일부 구체예에서, 신경보호 조성물에서 약리학적 활성 성분의 대부분은 올레아놀산이다. 올레아놀산은 우르솔산 및 베툴린산에 비해 몰 과량으로 존재한다. 올레아놀산과 우르솔산은 함께(총 합계) 또는 개별적으로 베툴린산에 비해 몰 과량으로 존재할 수 있다. 올레아놀산과 베툴린산은 함께(총 합계) 또는 개별적으로 우르솔산에 비해 몰 과량으로 존재할 수 있다.

올레아놀산(또는 그것의 염, 유도체 또는 프로드러그), 우르솔산(또는 그것의 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 베툴린산(또는 그것의 염, 유도체 또는 프로드러그)이 주요 또는 단독 트리테르펜으로 존재하는 경우, 올레아놀산(O):우르솔산(U):베툴린산(B)의 몰 비는 약 10 : 약 1 : 약 1, 약 9-11 : 약 0.5-1.5 : 약 0.5-1.5, 약 9.5-10.5 : 약 0.75-1.25 : 약 0.75-1.25, 약 9.5-10.5 : 약 0.8-1.2 : 약 0.8-1.2, 약 9.75-10.5 : 약 0.9-1.1 : 약 0.9-1.1, 약 9-12 : 약 0.15-2.5 : 약 0.15-2.5, 약 9-12 : 약 0.2-2.5 : 약 0.2-2.5, 약 9-12 : 약 0.25-2.5: 약 0.25-2.5, 약 9-12 : 약 0.35-2.5: 약 0.35-2.5, 약 9-12 : 약 0.45-2.5: 약 0.45-2.5, 약 9-12 : 약 0.5-5: 약 0.5-2.5, 약 9-12 : 약 0.16-2 : 약 0.16-2, 약 9-12 : 약 0.2-2 : 약 0.2-2, 약 9-12 : 약 0.25-2 : 약 0.25-2, 약 9-12 : 약 0.25-2 : 약 0.25-2, 약 9-12 : 약 0.45-2 : 약 0.45-2, 약 9-12 : 약 0.5-2 : 약 0.5-2, 약 9-12 : 약 0.16-1.5 : 약 0.16-1.5, 약 9-12 : 약 0.2-1.5 : 약 0.2-1.5, 약 9-12 : 약 0.25-1.5 : 약 0.25-1.5, 약 9-12 : 약 0.7-1.5 : 약 0.35-1.5, 약 9-12 : 약 0.45-1.5 : 약 0.45-1.5, 약 9-12 : 약 0.5-1.5 : 약 0.5-1.5, 약 9-12 : 약 0.16-1 : 약 0.16-1, 약 9-12 : 약 0.2-1 : 약 0.2-1, 약 9-12 : 약 0.25-1 : 약 0.25-1, 약 9-12 : 약 0.35-1 : 약 0.35-1, 약 9-12 : 약 0.45-1 : 약 0.45-1, 약 9-12 : 약 0.5-1 : 약 0.5-1, 약 10-1 : 약 0.5-2.5 : 약 0.5-2.5, 약 10-1 : 약 0.1-1.5 : 약 0.1-1.5, 약 9-12 : 약 0.25-0.75 : 약 0.25-0.75, 약 9.5-10.5 : 약 0.35-0.7 : 약 0.35-0.7, 약 9.5-10.5 : 약 0.4-0.6 : 약 0.4-0.6, 또는 약 9.75-10.5 : 약 0.45-0.6 : 약 0.45-0.6이다.

올레아놀산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 우르솔산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)이 주요 또는 단독 트리테르펜으로 존재하는 경우, 올레아놀산:우르솔산의 몰 비는 약 9-12 : 약 0.33-5, 약 9-12 : 약 0.4-5, 약 9-12 : 약 0.5-5, 약 9-12 : 약 0.7-5, 약 9-12 : 약 0.9-5, 약 9-12 : 약 1-5, 약 9-12 : 약 0.33-4, 약 9-12 : 약 0.4-4, 약 9-12 : 약 0.5-4, 약 9-12 : 약 0.7-4, 약 9-12 : 약 0.9-4, 약 9-12 : 약 1-4, 약 9-12 : 약 0.33-3, 약 9-12 : 약 0.4-3, 약 9-12 : 약 0.5-3, 약 9-12 : 약 0.7-3, 약 9-12 : 약 0.9-3, 약 9-12 : 약 1-3, 약 9-12 : 약 0.33-2, 약 9-12 : 약 0.4-2, 약 9-12 : 약 0.5-2, 약 9-12 : 약 0.7-2, 약 9-12 : 약 0.9-2, 약 9-12 : 약 1-2, 약 10-1 : 약 1-5, 약 10-1 : 약 1-3, 약 9-12 : 약 0.5-1.5, 약 9-11 : 약 0.5-1.5, 약 9.5-10.5 : 약 0.75-1.25, 약 9.5-10.5 : 약 0.8-1.2, 또는 약 9.75-10.5 : 약 0.9-1.1이다.

올레아놀산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 베툴린산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)이 주요 또는 단독 트리테르펜으로 존재하는 경우, 올레아놀산:베툴린산의 몰 비는 약 9-12 : 약 0.33-5, 약 9-12 : 약 0.4-5, 약 9-12 : 약 0.5-5, 약 9-12 : 약 0.7-5, 약 9-12 : 약 0.9-5, 약 9-12 : 약 1-5, 약 9-12 : 약 0.33-4, 약 9-12 : 약 0.4-4, 약 9-12 : 약 0.5-4, 약 9-12 : 약 0.7-4, 약 9-12 : 약 0.9-4, 약 9-12 : 약 1-4, 약 9-12 : 약 0.33-3, 약 9-12 : 약 0.4-3, 약 9-12 : 약 0.5-3, 약 9-12 : 약 0.7-3, 약 9-12 : 약 0.9-3, 약 9-12 : 약 1-3, 약 9-12 : 약 0.33-2, 약 9-12 : 약 0.4-2, 약 9-12 : 약 0.5-2, 약 9-12 : 약 0.7-2, 약 9-12 : 약 0.9-2, 약 9-12 : 약 1-2, 약 10-1 : 약 1-5, 약 10-1 : 약 1-3, 약 9-12 : 약 0.5-1.5, 약 9-11 : 약 0.5-1.5, 약 9.5-10.5 : 약 0.75-1.25, 약 9.5-10.5 : 약 0.8-1.2, 또는 약 9.75-10.5 : 약 0.9-1.1이다.

본 발명의 방법의 개별 단계들은 별도의 시설에서 또는 동일한 시설 내에서 수행될 수 있다. 본원에 설명된 본 발명의 방법 중 어느 것은 본원에 설명된 본 발명의 조성물 중 어느 것과 조합하여 사용될 수 있다.

본 발명은 본원에 개시된 본 발명의 양태들, 구체예들 및 하위구체예들의 모든 조합을 포함한다.

발명의 상세한 설명

본 발명에 사용된 개별적으로 명명된 트리테르펜은 각각의 경우에 그것의 자생(미변형, 유리 산) 형태, 염 형태, 유도체 형태, 프로드러그 형태, 또는 이들의 조합에서 독립적으로 선택될 수 있다. 트리테르펜의 중수소화 형태를 함유하는 조성물 및 그것을 이용한 방법도 본 발명의 범위 내에 포함된다.

올레아놀산 유도체, 프로드러그 및 염은 Gribble et al.에 의한 US 2015-0011627 A1(2014년 11월 20일 공개), Xu et al.에 의한 US 20140343064 A1(2014년 11월 20일 공개, Anderson et al.에 의한 US 20140179928 A1(2014년 6월 26일 공개), Bender et al.에 의한 US 20140100227 A1(2014년 4월 10일 공개), Jiang et al.에 의한 US 20140088188 A1(2014년 3월 27일 공개), Jiang et al.에 의한 US 20140088163 A1(2014년 3월 27일 공개), Jiang et al.에 의한 US 20140066408 A1(2014년 3월 6일 공개), Anderson et al.에 의한 US 20130317007 A1(2013년 11월 28일 공개), Gribble et al.에 의한 US 20130303607 A1(2013년 11월 14일 공개), Anderson et al.에 의한 US 20120245374(2012년 9월 27일 공개), Jiang et al.에 의한 US 20120238767 A1(2012년 9월 20일 공개), Shode et al.에 의한 US 2012-0237629 A1(2012년 9월 20일 공개), Anderson et al.에 의한 US 20120214814 A1(2012년 8월 23일 공개), Lee et al.에 의한 US 20120165279 A1(2012년 6월 28일 공개), Arntzen et al.에 의한 US 20110294752 A1(2011년 12월 1일 공개), Majeed et al.에 의한 US 20110091398 A1(2011년 4월 21일 공개), Arntzen et al.에 의한 US 20100189824 A1(2010년 7월 29일 공개), Jiang et al.에 의한 US 20100048911 A1(2010년 2월 25일 공개), 및 Arntzen et al.에 의한 US 20060073222 A1(2006년 4월 6일 공개)에 개시되며, 이들의 전체 내용이 본 발명에 참고로 포함된다.

우르솔산 유도체, 프로드러그 및 염은 Gribble et al.에 의한 US 20150011627 A1(2015년 1월 8일 공개), Gribble et al.에 의한 US 20130303607 A1(2013년 11월 14일 공개), Yoon et al.에 의한 US 20150218206 A1(2015년 8월 6일 공개), Fritsche et al.에 의한 US 6824811(2004년 11월 30일 발행), Ochiai et al.에 의한 US 7718635(2010년 5월 8일 발행), Lin et al.에 의한 US 8729055(2014년 5월 20일 발행), 및 Yoon et al.에 의한 US　9120839(2015년 9월 1일 발행)에 개시되며, 이들의 전체 내용이 본 발명에 참고로 포함된다.

베툴린산 유도체, 프로드러그 및 염은 Gribble et al.에 의한 US 20150011627 A1(2015년 1월 8일 공개), Gribble et al.에 의한 US 20130303607 A1(2013년 11월 14일 공개), Shode et al.에 의한 US 20120237629 A1(2012년 9월 20일 공개), Regueiro-Ren et al.에 의한 US 20170204133 A1(2017년 7월 20일 공개), Nitz et al.에 의한 US 20170096446 A1(2017년 4월 6일 공개), Parthasaradhi Reddy et al.에 의한 US 20150337004 A1(2015년 11월 26일 공개), Parthasaradhi Reddy et al.에 의한 US 20150119373 A1(2015년 4월 30일 공개), Yan et al.에 의한 US 2014-0296546 A1(2014년 10월 2일 공개), Swidorski et al.에 의한 US 20140243298 A1(2014년 8월 28일 공개), Parthasaradhi Reddy et al.에 의한 US 20140221328 A1(2014년 8월 7일 공개), Leunis et al.에 의한 US 20140066416 A1(2014년 3월 6일 공개), Durst et al.에 의한 US 20130065868 A1(2013년 3월 14일 공개), Regueiro-Ren et al.에 의한 US 20130029954 A1(2013년 1월 31일 공개), Zhang et al.에 의한 US 20120302530 A1(2012년 11월 29일 공개), Power et al.에 의한 US 20120214775 A1(2012년 8월 23일 공개), Honda et al.에 의한 US 20120101149 A1(2012년 4월 26일 공개), Bullock et al.에 의한 US 20110224182(2011년 9월 15일 공개), Hemp et al.에 의한 US 20110313191 A1(2011년 12월 22일 공개), Pichette et al.에 의한 US 20110224159 A1(2011년 9월 15일 공개), Parthasaradhi Reddy et al.에 의한 US 20110218204(2011년 9월 8일 공개), Safe et al.에 의한 US 20090203661 A1(2009년 8월 13일 공개), Krasutsky et al.에 의한 US 2009-0131714 A1(2009년 5월 21일 공개), Krasutsky et al.에 의한 US 20090076290(2009년 3월 19일 공개), Leunis et al.에 의한 US 20090068257 A1(2009년 3월 12일 공개), Mukherjee et al.에 의한 US 20080293682(2008년 11월 27일 공개), Pezzuto et al.에 의한 US 20070072835 A1(2007년 3월 29일 공개), Jansen et al.에 의한 US 20060252733 A1(2006년 11월 9일 공개), 및 O'Neill et al.에 의한 US 2006-025274 A1(2006년 11월 9일 공개)에 개시되며, 이들의 전체 내용이 본 발명에 참고로 포함된다.

본 발명은 치료가 필요한 대상에 신경보호 조성물의 유효 용량(치료적 유효 용량)을 투여함으로써 신경학적 상태를 치료하는 방법을 제공한다. 신경보호 조성물은 대상에 가장 적합한 투약 섭생에 따라서 투여되며, 용량의 적합성 및 투약 섭생은 종래의 임상 관습 및 치료될 신경학적 상태에 대한 임상적 치료 종점에 따라서 임상적으로 결정된다.

일부 구체예에서, 치료될 신경퇴행성 장애 또는 신경학적 상태는 대상에서 tau 단백질의 과발현 및/또는 Tau3R/Tau4R 비의 불균형과 관련된 병인을 가진다. 이러한 상태는 타우병증으로 칭해진다. 전형적인 타우병증은 다운증후군, 픽병, 프리온 질환의 일부 변이형, 알츠하이머병, 진행성 핵상 마비 또는 전측두엽 치매, 피질기저부 변성, 괌 파킨슨 치매 복합질환, 호은성 과립 치매, 니만피크병 제C형, 및 복싱 치매를 포함한다.

일부 구체예에서, 치료될 신경퇴행성 장애 또는 신경학적 상태는 아밀로이드 베타 전구체 단백질의 비정상적 또는 비전형적 단백질 가수분해, 뉴런의 시냅스에 아밀로이드 베타 단백질의 축적, 뉴런의 시냅스에 아밀로이드 피브릴의 형성, 또는 뉴런의 시냅스에 아밀로이드 플라크의 형성과 관련된 병인을 가진다. 전형적인 이러한 장애 또는 질환은 알츠하이머병이다. 본 발명에 따라서 치료되는 대상은 치료 반응을 나타낼 것이다. "치료 반응"은 질환 또는 장애에 걸린 대상이 신경보호 조성물을 사용한 치료의 결과로서 다음의 임상적 이익 중 적어도 하나를 경험하게 된다는 것을 의미하며, 임상적 이익은 질환 또는 장애의 완화, 질환 또는 장애와 관련된 증상 발생의 감소, 질환 또는 장애의 부분적 차도, 질환 또는 장애의 완전한 차도, 또는 진행까지의 늘어난 시간이다. 다시 말해서, 치료 반응은 완전한 또는 부분적 치료 반응일 수 있다.

치료 반응은 또한 신경퇴행성 질환에 침범당한 환자의 삶의 질이 개선되는 것으로 설명될 수 있다. 삶의 질의 개선은, 예를 들어 질환과 관련된 증상의 발생, 빈도 또는 중증도의 감소를 통해서 일어날 수 있다(예를 들어, 떨림, 비자발적 근육 움직임, 신경-근육 조화의 상실 또는 부분적 상실, 기억 유지 등).

"위험이 있는 대상의 집단에서 신경학적 상태의 발생 예방"은 신경학적 상태에 걸릴 위험이 있는 대상들의 인구통계학적으로 정해진 집단에서 정해진 시간 기간 동안 신경학적 상태가 일어나지 않을 것이라는 것을 의미한다. 정해진 시간 기간 동안의 예방은 해당 집단 내의 대상에 본 발명에 따른 신경보호 조성물을 투여한 결과로서 일어난다. 한 예로서, 신경보호 조성물이 뇌졸중에 걸릴 위험이 있는 대상의 집단에서 대상에 정해진 시간 기간 동안 투여되었을 때, 이들 대상에서 뇌졸중은 정해진 시간 기간 동안 발생하지 않을 것이다. 특히, 신경보호 조성물은 알츠하이머병 또는 타우병증 관련 질환 중 어느 것에 걸릴 위험이 있는 대상의 집단에 1년의 기간에 걸쳐서 만성적으로 투여되고, 이 집단 내의 대상은 1년 기간 동안 알츠하이머병과 관련된 증상을 나타내지 않는다.

"위험이 있는 대상의 집단에서 신경학적 상태의 발생 발병율의 감소"는 "발병율의 예방"과 의미에서 관련되며, 단 "발생 발병율의 감소"는 대상의 인구통계학적으로 정해진 집단에서 신경학적 상태의 발생을, 본 발명에 따른 신경보호 조성물이 투여되지 않은 위험이 있는 대상의 다른 인구통계학적으로 유사한 정해진 집단과 비교하여 감소된 발생 속도 또는 중중도 수준에서 허용한다는 의미이다.

본 발명에서 사용된 "진행까지의 시간"은 질환이 진단된(또는 치료된) 후 그 질환이 악화되기 시작할 때까지의 시간 기간, 길이 또는 지속기간이다. 이것은 질환의 수준이 질환의 더 이상의 진행 없이 유지되는 시간 기간이며, 질환이 다시 진행되기 시작했을 때 상기 시간 기간은 종료된다. 질환의 진행은 치료법의 개시 전에 또는 개시할 때 신경학적 상태에 걸린 대상을 "단계화"함으로써 결정된다. 예를 들어, 대상의 신경학적 건강이 치료법의 개시 전에 또는 개시할 때 결정된다. 다음에, 대상은 신경보호 조성물로 치료되고, 신경학적 건강이 주기적으로 모니터링된다. 후기 시점에서, 신경학적 상태의 증상이 악화될 수 있으며, 따라서 질환의 진행 및 "진행까지의 시간"의 종료가 뚜렷해진다. 질환이 진행되지 않았던 또는 질환의 수준이나 중증도가 악화되지 않았던 시간 기간이 "진행까지의 시간"이다.

투약 섭생은 투약 일정에 따라서 투여되는 신경보호 조성물의 치료적 관련 용량(또는 치료적 유효 용량)을 포함한다. 따라서, 치료적 관련 용량은 신경보호 조성물을 사용한 치료에 대한 질환 또는 장애의 치료 반응이 관찰되고, 과도한 양의 원치않는 또는 해로운 부작용 없이 신경보호 조성물이 대상에 투여될 수 있는 치료적 용량이다. 치료적 관련 용량은 환자에서 일부 부작용을 야기할 수는 있지만 대상에 대해 비-치명적이다. 그것은 신경보호 조성물이 투여된 대상에서 임상적 이익의 수준이 신경보호 조성물의 투여로 인해 대상이 경험하게 되는 해로운 부작용의 수준을 초과하는 용량이다. 치료적 관련 용량은 다양한 확립된 약리학적, 약동학적 및 약역학적 원리에 따라서 대상마다 변할 것이다. 그러나, 치료적 관련 용량은 전형적으로 고체, 액체 또는 반고체 형태인 신경보호 조성물 0.1 내지 100 마이크로그램의 범위일 것이다. 대상에서 목표 치료 결과를 제공하는데 필요한 약리학적 활성 성분/제제의 실제 양은 기본적 제약학 원리에 따라서 대상마다 변할 수 있다.

치료적 관련 (유효) 용량이 신경학적 또는 신경퇴행성 질환 또는 장애의 치료에서 전형적으로 사용되는 투약 섭생에 따라서 투여될 수 있다. 치료적 관련 용량은 매일 1번, 2번, 3번 또는 그 이상의 투약 일정으로 투여될 수 있다. 그것은 이틀에 한번, 3일에 한번, 4일에 한번, 5일에 한번, 매주 2번, 매주 한번, 2주에 한번, 3주에 한번, 4주에 한번, 매달 한번, 2달에 한번, 매월 2번, 3달에 한번, 4달에 한번, 1년에 2번, 1년에 한번, 또는 적합한 투약 일정에 도달하기 위한 상기 중 어느 것의 조합에 따라서 투여될 수 있다. 예를 들어, 치료적 관련 용량은 1주 이상 동안 매일 1회 투여될 수 있다.

아래 실시예는 신경학적 질환, 신경학적 장애 및 뇌졸중과 같은 신경학적 상태를 치료하는데 있어 신경보호 조성물의 효능의 증거를 포함한다. 실시예 7은 신경보호 조성물 또는 신경보호 조성물과 하나 이상의 다른 치료제의 조합을 사용한 알츠하이머병의 치료 방법을 상세히 설명한다. 실시예 8은 신경보호 조성물 또는 신경보호 조성물과 하나 이상의 다른 치료제의 조합을 사용한 헌팅턴병의 치료 방법을 상세히 설명한다. 실시예 9는 신경보호 조성물 또는 신경보호 조성물과 하나 이상의 다른 치료제의 조합을 사용한 뇌졸중-매개 및 비-뇌졸중-매개 허혈성 뇌 손상의 치료 방법을 상세히 설명한다. 실시예 10은 신경보호 조성물 또는 신경보호 조성물과 하나 이상의 다른 치료제의 조합을 사용한 파킨슨병의 치료 방법을 상세히 설명한다.

일반적으로, 신경학적 상태를 가진 대상은 다음과 같이 치료된다. 신경학적 상태를 가진 대상은 신경학적 상태가 알츠하이머병, 헌팅턴병, 뇌졸중, 파킨슨병 또는 다른 신경학적 상태인지 아닌지를 결정하기 위해 평가된다. 대상이 양성으로 진단된다면, 신경보호 조성물의 투여가 처방된다. 조성물의 초기 용량이 일정 시간 기간 동안 처방된 투약 섭생에 따라서 대상에 투여된다. 대상에서 임상 반응 및 치료 반응의 수준이 주기적으로 결정된다. 치료 반응의 수준이 하나의 용량에서 너무 낮다면, 대상에서 치료 반응의 원하는 수준이 달성될 때까지 정해진 용량 상승 일정에 따라서 용량이 상승된다. 대상이 바람직하지 않은 부작용 또는 허용되지 않는 수준의 부작용을 나타낸다면, 대상에서 치료 반응 수준 대 부작용 프로파일의 바람직한 균형이 달성될 때까지 용량이 저감된다. 신경보호 조성물을 사용한 대상의 치료는 필요에 따라 계속된다. 용량 또는 투약 섭생은 환자가 질환 자체의 중지, 질환 관련 증상의 감소 및/또는 질환 과정 진행의 감소와 같은 원하는 임상 종점(들)에 도달할 때까지 필요에 따라 조정될 수 있다.

실시예 3은 뇌졸중-매개 허혈성 뉴런 손상의 치료를 위한 신경보호 조성물의 효능을 평가하기 위해 사용된 시험관내 분석의 상세한 설명을 제공한다. 이 분석은 24시간까지 건강한 피질 뉴런의 ≥50% 상실을 유도하기 위해 사용된 산소 및 글루코오스 박탈(OGD)에 대한 뇌 슬라이스-기반 분석이다. 샘플 비히클이 양성 대조군으로 사용된다.

다양한 조성물이 OGD 처리된 뇌 슬라이스(뇌졸중 모델) 및 비-OGD 처리된(즉, 대조군) 뇌 슬라이스(비-뇌졸중 모델)에서 시험되었다. 조성물 I(PBI-04711과 유사한 트리테르펜 몰 비율), 조성물 II(PBI-05204와 유사한 트리테르펜 몰 비율) 및 조성물 III(PBI-01011과 유사한 트리테르펜 몰 비율)에 대해 데이터(도 9a-9c)가 얻어졌다. 이 데이터는 조성물의 각각은 신경보호를 제공하지만, 개선된 신경보호 조성물(조성물 III)은 더 넓은 용량 범위(더 넓은 농도 범위)에 걸쳐서 신경보호를 제공한다는 것을 나타낸다. 예를 들어, 조성물 I은 10μM에서는 신경보호를 제공하지만 1μM 이하의 농도에서는 신경보호를 제공하지 않는다. 조성물 II는 1μM 및 10μM에서는 신경보호를 제공하지만 0.1μM 이하의 농도에서는 신경보호를 제공하지 않는다. 한편, 조성물 III은 0.1μM(100Nm), 1μM 및 10μM에서 신경보호를 제공한다.

따라서, 개선된 신경보호 조성물은 총 등몰 기준으로 다른 트리테르펜-기반 조성물보다 더 넓은 용량 범위 또는 더 넓은 용량 반응을 제공한다. 개선된 조성물은 개별 트리테르펜에 의해 야기될 수 있는 바람직하지 않은 부정적 이벤트(부작용)을 실질적으로 증가시키지 않고 트리테르펜들의 조합을 더 높은 용량으로 투여하는 것을 허용한다. 실제로, 임상의는 트리테르펜 혼합물을 높은 또는 낮은 용량으로 투여할 수 있고, 또한 트리테르펜-관련된 부정적 이벤트의 낮은 발생을 기대할 수 있다.

본 발명은 산소 고갈된 및/또는 글루코오스-고갈된 상태에 노출됨으로써 야기되는 활성의 상실을 최소화하고, 활성의 상실 속도를 감소시키고, 활성의 상실을 중단시키고, 활성의 상실의 개시를 지연시키고, 및/또는 뉴런의 기능을 보호하기 위해, 산소 고갈된 및/또는 글루코오스-고갈된 뉴런을 개선된 트리테르펜-기반 신경보호 조성물의 유효향에 노출함으로써 산소 고갈 또는 산소-글루코오스 고갈에 의해 야기된 활성의 상실에 대해 뉴런을 보호하는 방법을 제공한다.

우리는 조성물 I 및 II의 감소된 신경보호 활성이 개별 트리테르펜 중 하나 이상의 세포 독성으로 인한 것인지의 여부를 결정했다. 우리는 두 가지 독립적인 세포 사멸 측정: 핵 파괴에 대한 요오드화프로피듐(PI) 염색 및 세포 대사 활성에 대한 MTS 분석을 사용하여 올레아놀산(OA), 우르솔산(UA), 및 베툴린산(BA)의 세포 독성에 관한 직접적인 연구를 수행했다. PI는 손상된 막을 가진 세포로 들어가서 DNA를 염색시키며, Cellomics Arrayscan VTI에서 이미지-기반 고-함량 분석을 사용하여 죽은/살아 있는 세포를 검출한다. MTS 분석은 웰-기반 분석으로서, 미토콘드리아 효소에 의한 테트라졸륨 리포터의 절단이 비색성 결과를 내고, 이것이 건강한 세포의 상대적 수로서 기록된다. 이 데이터(UA에 대해 도 6a 및 6b, BA에 대해 도 7a 및 7b, OA에 대해 도 8a 및 8b)는 UA와 BA가 용량-의존적 방식으로 매우 독성인 화합물일 수 있음을 확인했고, 이들은 각각 5-15μM 범위에서 대사 활성의 50% 상실을 초래했다. 반면, OA의 시험된 최고 농도인 75μM까지 OA의 경우 MTS 활성의 유의한 감소는 관찰되지 않았다.

트리테르펜들의 혼합물의 잠재적인 부가 및 상승작용적 성능은 이들의 성능을 개별적으로 그리고 상이한 혼합물에서 유전자 발현 분석에 의해 분석함으로써 결정되었다. 우리는 다양한 상이한 농도(μM)에서 Hmox1 및 Srxn의 ARE 유전자 발현을 유도할 수 있는 다양한 조성물을 상대적 활성을 결정했다. 우르솔산 및 베툴린산에 의한 ARE 유전자의 활성화는 간격이 더 가까운 농도 단계를 사용하여 시험되었다. 베툴린산은, 우르솔산과 마찬가지로, 더 높은 농도에서의 독성에도 불구하고 Srx 및 Hmox1의 명백한 상향조절을 유도할 수 있다(도 4). 이 데이터(도 10a 및 10b)는 OA가 단일 제제로서는 시험된 모든 농도에서 인지가능한 ARE 유전자 발현을 유도할 수 없었다는 것을 나타냈다. 낮은 농도에서도 UA 및 BA는 세포 독성을 야기했다. OA + UA 및 OA + UA + BA의 많은 조합은 ARE 유전자 발현을 유의한 정도로 유도했고, 그 조건에 대해 시험된 최고 농도까지 10배를 꽤 넘는 정도로는 유도했다(Srxn1에 대한 줄무늬 적색 막대). 이러한 과도한 유도는 24시간 처리에 의한 더 긴 기간의 세포 독성과 관련된다. 이것은 9μM에서 단일 제제로서 시험된 UA를 포함했다. 시험된 혼합물 중 단지 10:1:1 OA:UA:BA만이 ARE 유전자의 유의한 유도를 유도했지만, 시험된 전체 농도 범위 내에서는 <5-10배 정도였다. 따라서, 10:1:1 OA:UA:BA 혼합물은 제안된 표적 프로파일에 대한 두 기준, 즉 1) 이 비율에서 단일 성분은 독성으로 인한 용량-제한을 받지 않을 것; 및 2) ARE 표적 유전자가 유의하게 유도되지만 최고 5 내지 10배 이하일 것을 모두 만족했다. 본 발명에 설명된 범위 내에서 다른 밀접하게 관련된 몰 비율도 과도한 세포 독성 없이 실질적인 신경보호를 제공한다. ARE-루시페라제 리포터의 유의한 유도는 OGD, APP, 및 tau 뇌 슬라이스 신경보호 분석에서 신경보호를 제공했던 유사한 농도 범위에서도 볼 수 있다.

본 발명의 결과는 놀라우며 예상치 못한 것이었다. 따라서, 우리는 개선된 조성물 III과 다른 밀접하게 관련된 조성물(더 높은 몰 함유량의 올레아놀산과 실질적으로 더 낮은 몰 함유량의 우르솔산 및 베툴린산을 가진 것들)이 더 높은 용량에서 비교적 감소된 세포 독성과 매우 낮은 농도에서 비교적 증가된 효능을 동시에 제공한다고 판정했다.

일부 구체예에서, 본 발명의 신경보호 조성물은 적어도 2개의 트리테르펜(그것의 유리 산, 염, 유도체, 또는 프로드러그)을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 적어도 우르솔산과 올레아놀산의 조합 또는 적어도 베툴린산과 올레아놀산의 조합을 포함하는 신경보호 조성물을 제공하며, 올레아놀산은 각각 우르솔산 및 베툴린산에 비해 실질적인 몰 과량으로 존재한다.

일부 구체예에서, 본 발명의 신경보호 조성물은 적어도 3개의 트리테르펜(그것의 유리 산, 염, 유도체, 또는 프로드러그)을 포함한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 신경보호 조성물은 올레아놀산, 우르솔산 및 적어도 하나의 다른 트리테르펜을 포함한다. 예를 들어, 상기 조성물은 베툴린산 또는 적어도 하나의 다른 트리테르펜을 더 포함할 수 있다.

신경보호 조성물은 강심성 글리코사이드, 약리학적 활성 다당류, 및 스테로이드를 배제한다. 예를 들어, 신경보호 조성물은 올레안드린, 네리이폴린 또는 네리움 종 식물로부터 얻어진 약리학적 활성 다당류를 배제한다.

올레아놀산(O; 그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 우르솔산(U; 그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)이 조성물에서 주요 또는 단독 트리테르펜으로 존재할 때, O:U의 몰 비는 변화될 수 있으며, 약 9-12 : 약 0.33-5, 약 9-12 : 약 0.4-5, 약 9-12 : 약 0.5-5, 약 9-12 : 약 0.7-5, 약 9-12 : 약 0.9-5, 약 9-12 : 약 1-5, 약 9-12 : 약 0.33-4, 약 9-12 : 약 0.4-4, 약 9-12 : 약 0.5-4, 약 9-12 : 약 0.7-4, 약 9-12 : 약 0.9-4, 약 9-12 : 약 1-4, 약 9-12 : 약 0.33-3, 약 9-12 : 약 0.4-3, 약 9-12 : 약 0.5-3, 약 9-12 : 약 0.7-3, 약 9-12 : 약 0.9-3, 약 9-12 : 약 1-3, 약 9-12 : 약 0.33-2, 약 9-12 : 약 0.4-2, 약 9-12 : 약 0.5-2, 약 9-12 : 약 0.7-2, 약 9-12 : 약 0.9-2, 약 9-12 : 약 1-2, 약 10-1 : 약 1-5, 약 10-1 : 약 1-3, 약 9-12 : 약 0.5-1.5, 약 9-11 : 약 0.5-1.5, 약 9.5-10.5 : 약 0.75-1.25, 약 9.5-10.5 : 약 0.8-1.2, 또는 약 9.75-10.5 : 약 0.9-1.1의 범위일 수 있다.

올레아놀산(O; 그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 베툴린산(B; 그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)이 조성물에서 주요 또는 단독 트리테르펜으로 존재할 때, O:B의 몰 비는 변화될 수 있으며, 약 9-12 : 약 0.33-5, 약 9-12 : 약 0.4-5, 약 9-12 : 약 0.5-5, 약 9-12 : 약 0.7-5, 약 9-12 : 약 0.9-5, 약 9-12 : 약 1-5, 약 9-12 : 약 0.33-4, 약 9-12 : 약 0.4-4, 약 9-12 : 약 0.5-4, 약 9-12 : 약 0.7-4, 약 9-12 : 약 0.9-4, 약 9-12 : 약 1-4, 약 9-12 : 약 0.33-3, 약 9-12 : 약 0.4-3, 약 9-12 : 약 0.5-3, 약 9-12 : 약 0.7-3, 약 9-12 : 약 0.9-3, 약 9-12 : 약 1-3, 약 9-12 : 약 0.33-2, 약 9-12 : 약 0.4-2, 약 9-12 : 약 0.5-2, 약 9-12 : 약 0.7-2, 약 9-12 : 약 0.9-2, 약 9-12 : 약 1-2, 약 10-1 : 약 1-5, 약 10-1 : 약 1-3, 약 9-12 : 약 0.5-1.5, 약 9-11 : 약 0.5-1.5, 약 9.5-10.5 : 약 0.75-1.25, 약 9.5-10.5 : 약 0.8-1.2, 또는 약 9.75-10.5 : 약 0.9-1.1의 범위일 수 있다.

올레아놀산(O; 그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그), 우르솔산(U; 그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 베툴린산(B; 그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)이 조성물에서 주요 또는 단독 트리테르펜으로 존재할 때, 올레아놀산:우르솔산:베툴린산의 몰 비는 약 10 : 약 1 : 약 1, 약 9-11 : 약 0.5-1.5 : 약 0.5-1.5, 약 9.5-10.5 : 약 0.75-1.25 : 약 0.75-1.25, 약 9.5-10.5 : 약 0.8-1.2 : 약 0.8-1.2, 약 9.75-10.5 : 약 0.9-1.1 : 약 0.9-1.1, 약 9-12 : 약 0.15-2.5 : 약 0.15-2.5, 약 9-12 : 약 0.2-2.5 : 약 0.2-2.5, 약 9-12 : 약 0.25-2.5: 약 0.25-2.5, 약 9-12 : 약 0.35-2.5: 약 0.35-2.5, 약 9-12 : 약 0.45-2.5: 약 0.45-2.5, 약 9-12 : 약 0.5-5: 약 0.5-2.5, 약 9-12 : 약 0.16-2 : 약 0.16-2, 약 9-12 : 약 0.2-2 : 약 0.2-2, 약 9-12 : 약 0.25-2 : 약 0.25-2, 약 9-12 : 약 0.25-2 : 약 0.25-2, 약 9-12 : 약 0.45-2 : 약 0.45-2, 약 9-12 : 약 0.5-2 : 약 0.5-2, 약 9-12 : 약 0.16-1.5 : 약 0.16-1.5, 약 9-12 : 약 0.2-1.5 : 약 0.2-1.5, 약 9-12 : 약 0.25-1.5 : 약 0.25-1.5, 약 9-12 : 약 0.7-1.5 : 약 0.35-1.5, 약 9-12 : 약 0.45-1.5 : 약 0.45-1.5, 약 9-12 : 약 0.5-1.5 : 약 0.5-1.5, 약 9-12 : 약 0.16-1 : 약 0.16-1, 약 9-12 : 약 0.2-1 : 약 0.2-1, 약 9-12 : 약 0.25-1 : 약 0.25-1, 약 9-12 : 약 0.35-1 : 약 0.35-1, 약 9-12 : 약 0.45-1 : 약 0.45-1, 약 9-12 : 약 0.5-1 : 약 0.5-1, 약 10-1 : 약 0.5-2.5 : 약 0.5-2.5, 약 10-1 : 약 0.1-1.5 : 약 0.1-1.5, 약 9-12 : 약 0.25-0.75 : 약 0.25-0.75, 약 9.5-10.5 : 약 0.35-0.7 : 약 0.35-0.7, 약 9.5-10.5 : 약 0.4-0.6 : 약 0.4-0.6, 또는 약 9.75-10.5 : 약 0.45-0.6 : 약 0.45-0.6이다.

실시예 11은 알츠하이머병의 치료에서 신경보호 조성물의 효능을 평가하기 위해 사용된 시험관내 분석의 상세한 설명을 제공한다. 이 분석은 피질 추체 뉴런의 APP/Aβ-유도(APP: 아밀로이드 전구체 단백질) 변성에 대한 뇌 슬라이스-기반 분석이다. 세크레타아제 효소에 의한 절단시, APP는 Aβ 펩타이드로 환원되며, 이것은 베타-아밀로이드 플라크 형성에서 원인 인자인 것으로 생각된다. Aβ 단백질은 베타-아밀로이드 플라크 형성과 관련되고, 알츠하이머병의 홀마크, 아니면 병인 인자인 것으로 생각된다. 유전자총 트랜스펙션이 YFP(마커 황색 형광 단백질)와 같은 생체 마커를 도입하고 뇌 슬라이스의 동일한 뉴런성 집단에 질환 유전자 구성물을 도입하기 위해 사용된다. YFP는 APP 동형과 함께 공-트랜스펙션됨으로써 뇌 슬라이스 제조 및 트랜스펙션 후 3-4일 경과에 걸쳐서 피질 추체 뉴런의 점진적 변성을 초래한다. 이 데이터는 신경보호 조성물이 APP-트랜스펙션된 뇌 슬라이스에 대해 농도-의존적 신경보호를 제공한다는 것을 시사한다. 조성물 III(O:U:B 몰비 10:1:1, PBI-01011 동일)은 조성물 II(O:U:B 몰비 7.8:7.4:1, PBI-05204 동일) 및 조성물 I(O:U:B 몰비 3:2.2:1, PBI-04711 동일)보다 더 많은 신경보호를 제공한다. 이 데이터는 문헌에 제시된 몇몇 화합물 또는 치료 전략이 알츠하이머병의 대표적인 이 시험관내 분석에서 뉴런의 유의한 보호를 나타냈다는 점에서 유의성을 가진다.

본 발명의 신경보호 조성물은 또한 피질 뉴런 변성이 CNS 신경변성에 연루된 유전자, 즉 아밀로이드 전구체 단백질(APP) 및 tau에 대한 발현 구성물의 유전자총 트랜스펙션에 의해 유도된 2개의 추가적 뇌 슬라이스 모델에서 강한 신경보호를 제공한다. 이들 모델에서, APP 및 tau 트랜스펙션은 뇌 슬라이스 모델에서 24시간 기간에 걸쳐서 일어나는 OGD에 의해 야기된 뉴런 손상 및 사멸과는 반대로, 3-4일의 경과에 걸쳐서 피질 뉴런의 점진적 신경변성을 유도한다.

데이터는 어떤 강심성 글리코사이드를 함유하지 않는다해도 신경보호 조성물이 이 분석에서 신경보호를 제공한다는 것을 나타낸다. 신경보호 조성물은 APP 및 tau 뇌 슬라이스 신경변성 모델에서 모두 유의한 농도-의존적 신경보호를 제공한다.

신경보호 조성물은 tau 구성물이 사용된 것을 제외하고는 APP 분석과 유사한 tau4R 뇌 슬라이스-기반 알츠하이머병 분석을 사용하여 평가된다(실시예 11). 건강한 피질 뉴런의 수가 결정된다. 이 분석에서 효능은 다양한 양의 신경보호 조성물의 존재하에 건강하지 않은 뉴런 수 및 변성된 뉴런의 퍼센트에 대한 건강한 뉴런의 상대적 총 수로서 또는 그것에 기초하여 정의된다. 이들 실험에서 음성 대조군은 OGD에는 노출되지 않은 뇌 슬라이스로 구성되고, OGD에 노출되고 신경보호 조성물로 처리되지 않은 뇌 슬라이스는 내부 양성 대조군으로 사용된다. 신경보호 조성물은 이 분석에서 신경보호를 제공한다.

따라서, 본 발명은 알츠하이머병에 의해 야기된 활성의 상실에 대해 뉴런을 보호하는 방법을 제공하며, 이 방법은 알츠하이머병에 의해 야기된 뉴런의 활성의 상실을 최소화하고, 활성의 상실 속도를 감소시키고, 활성의 상실을 중단시키고, 활성의 상실의 개시를 지연시키고, 및/또는 중요한 기능화를 위해 트리테르펜-기반 신경보호 조성물의 유효량에 알츠하이머병의 특징을 나타내는 뉴런을 노출시키는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 신경보호 조성물의 유효량을 이용한다.

실시예 6은 헌팅턴병의 치료에서 신경보호 조성물의 효능을 평가하기 위해 사용된 분석의 상세한 설명을 제공한다. 돌연변이 htt 단백질이 전기천공을 통해서 피질 뉴런, 선조 뉴런 및 신경교의 고 밀도 혼합 공-배양물에 도입된다. 선조 및 피질 뉴런은 상이한 색의 형광 단백질로 트랜스펙션되고, 이것은 공-배양물에서 상이한 타입의 뉴런의 개별적 확인을 용이하게 한다. 색 형광 단백질은 형광성이며, 적절한 파장의 광원으로 활성화되면 색을 "방출"한다. 이 데이터는 신경보호 조성물이 헌팅턴병을 치료하는데 사용될 수 있다는 것을 시사한다.

따라서, 본 발명은 헌팅턴병에 의해 야기된 활성의 상실에 대해 뉴런을 보호하는 방법을 제공하며, 이 방법은 헌팅턴병에 의해 야기된 뉴런의 활성의 상실을 최소화하고, 활성의 상실 속도를 감소시키고, 활성의 상실을 중단시키고, 활성의 상실의 개시를 지연시키고, 및/또는 정상 기능을 위해 신경보호 조성물의 유효량에 헌팅턴병의 특징을 나타내는 뉴런을 노출시키는 단계를 포함한다.

실시예 3, 4 및 12는 뇌졸중 후 지연 기간의 완료 후에 대상에서 뇌졸중의 치료에서 신경보호 조성물의 효능을 평가하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 뇌-슬라이스 분석을 상세히 설명한다. 산소 글루코오스 박탈을 사용한 뇌-슬라이스 분석은 본 발명에 설명된 대로 수행된다; 그러나, 조성물로 예방적으로 뇌 슬라이스를 처리하는 것 대신, 뇌 슬라이스가 0, 1, 2, 4, 및 6시간의 지연 기간 후에 조성물로 처리된다. 이 데이터는 신경보호 조성물이 뇌졸중 후 최대 1시간, 최대 2시간, 최대 3시간, 최대 4시간, 최대 5시간, 최대 약 6시간의 지연 기간 동안 유의한 신경보호를 제공하는데 효과적임을 증명한다.

따라서, 본 발명은 대상이 뇌졸중에 걸린 후 그 대상에 신경보호 조성물의 어떤 용량을 투여함으로써 대상에서 뇌졸중을 치료하는 시간-지연 방법을 제공한다. 대상이 뇌졸중에 걸린 후 허용되는 지연 기간 내에서, 신경보호 조성물의 초기 용량이 초기 투약 섭생에 따라서 투여된다. 다음에, 상기 조성물을 사용한 치료에 대한 대상의 임상 반응 및/또는 치료 반응의 적합성이 결정된다. 대상의 임상 반응 및/또는 치료 반응이 충분하다면, 원하는 임상 종점이 달성될 때까지 필요에 따라 조성물이 계속된다. 또는, 초기 용량 및 초기 투약 섭생에서 대상의 임상 반응 및/또는 치료 반응이 불충분하다면, 대상에서 원하는 임상 반응 및/또는 치료 반응이 달성될 때까지 용량이 상승되거나 저감된다. 용량 상승 또는 저감은 투약 섭생의 변화, 예컨대 투약 빈도 또는 전체 용량 투여 기간의 변화와 함께 수행될 수 있다.

본 발명에서 뇌 슬라이스 분석은 뇌 조직이 OGD 전에 신경보호 조성물로 처리되는 조건하에서 수행된다. 이들 조건하에서 데이터는 뇌졸중에 의해 야기된 손상에 대해 신경보호를 예방적으로 제공하는데 있어 상기 신경보호 조성물의 활용성을 증명한다.

본 발명자들은 본 발명의 신경보호 조성물이 트리테르펜(들)에 의한 항산화 전사 반응 요소(ARE)를 통해서 매개된 신경보호를 제공한다는 것을 발견했다. 트리테르펜(들)은 또한 신경보호를 제공할 수 있는 핵 인자 에리트로이드 2 관련 인자 2(Nrf2)-의존적 항산화 유전자를 유도한다. 신경보호 조성물이 그것이 필요한 대상에 투여되었을 때, 이 조성물은 적어도 2배 메커니즘을 통해서 신경보호를 제공한다. 신경보호 조성물이 그것이 필요한 대상에 투여되었을 때, 이 조성물은 적어도 ARE 상향조절을 통해서 신경보호를 제공한다.

임상의가 트리테르펜-기반 신경보호 조성물과 하나 이상의 다른 치료제의 조합으로 신경학적 상태를 가진 대상을 치료하고자 의도하고, 대상이 가진 특정한 신경학적 상태가 적어도 부분적으로 상기 하나 이상의 다른 치료제를 사용한 치료에 치료적 반응한다고 하면, 본 발명의 방법은 트리테르펜-기반 신경보호 조성물의 치료적 관련 용량 및 상기 하나 이상의 다른 치료제의 치료적 관련 용량을 치료가 필요한 대상에 투여하는 단계를 포함하며, 상기 신경보호 조성물은 제1 투약 섭생에 따라서 투여되고, 상기 하나 이상의 다른 치료제는 제2 투약 섭생에 따라서 투여된다. 일부 구체예에서, 제1 및 제2 투약 섭생은 동일하다. 일부 구체예에서, 제1 및 제2 투약 섭생은 상이하다.

치료될 신경학적 상태가 알츠하이머병인 경우, 하나 이상의 다른 치료제는 BACE 억제제 또는 아세틸콜린에스테라아제 억제제로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 다른 치료제는 Namenda™(메만틴 HCl), Aricept™(도네페질), Razadyne™(갈란타민), Exelon™(리바스티그민), 및 Cognex™(타크린)로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다.

치료될 신경학적 상태가 헌팅턴병인 경우, 하나 이상의 다른 치료제는 천연 생성물, 항경련제, NMDA(n-메틸 d-아스파르테이트) 수용체 길항제, 및 나트륨 채널 차단제로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다. 예시적인 제제는 비타민 E, Baclofen(CoQ10의 유도체), Lamotrigine(항경련제), 레마세미드(저친화성 NMDA 길항제인 마취제) 및 릴루졸(Na 채널 차단제)을 포함한다. 이들 각 제제의 효능은 그 자체는 낮은 것으로 생각된다(Mestre T. et al, Chochrane Database Systematic Reviews July 8, 2009; 8(3): CD006455); 그러나, 이들 다른 제제 중 하나 이상을 받고 있는 대상에 신경보호 조성물을 함유하는 제형의 투여는 신경보호 조성물 없이 이들 제제를 투여한 것과 비교하여 개선된 임상적 효과를 신경학적 장애를 가진 대상에게 제공할 것이다.

치료될 신경학적 상태가 뇌졸중-매개 허혈성 뇌 손상(허혈성 뇌졸중)인 경우, 문헌(Gutierrez M. et al. "허혈성 뇌졸중에서 대뇌 보호, 뇌 수선, 가소성 및 세포 치료법" Cerebrovasc. Dis. 2009; 27 Suppl 1:177-186)에 개시된 치료적 처치, 예를 들어 정맥내 혈전용해가 신경보호 조성물에 더하여 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 다른 치료제는 Alteplase(혈전용해제)와 같은 약물로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다.

치료될 신경학적 상태가 파킨슨병인 경우, 하나 이상의 다른 치료제는 카비도파와 레보도파의 조합, 라사길린, 프라미펙솔, 로핀롤, 아만타딘, 메만틴, 엔타카폰, 로티고틴, 벤즈트로핀, 세레길린, 비페리덴, 카비도파와 레보도파와 엔타카폰의 조합, 트리헥실페니딜, 리바스티그민, 아포모르핀, 레보도파, 카비도파, 브로모트립틴, 벨레도나, 톨카폰, 또는 이들의 조합을 포함한다.

하나 이상의 다른 치료제는 BACE(베타-세크레타아제 1; 베타-부위 아밀로이드 전구체 단백질 절단 효소 1, 베타-부위 APP 절단 효소 1, 막-결합 아스파르틱 프로테아제 2, 메맙신-2, 아스파르틸 프로테아제 2, 및 ASP2) 억제제, AZD3293, 아세틸콜린에스테라아제 억제제, Namenda™(메만틴 HCl), Aricept™(도네페질), Razadyne™(갈란타민), Exelon™(리바스티그민), Cognex™(타크린), 항경련제, NMDA(n-메틸 d-아스파르테이트) 수용체 길항제, 나트륨 채널 차단제, 비타민 E, Baclofen(CoQ10의 유도체), Lamotrigine(항경련제), 레마세미드(저친화성 NMDA 길항제인 마취제), 릴루졸(Na 채널 차단제), Alteplase(혈전용해제), 레보도파, 카비도파, 아만타딘, COMT(카테콜 O-메틸 트랜스페라아제) 억제제, 톨카폰, 엔타카폰, 오피카폰, 도파민 효현제, 브로모크립틴, 페르골리드, 프라미펙솔, 로피니롤, 피리베딜, 카베르골린, 아포모르핀, 리수리드, MAO-B(모노아민 옥시다아제-B) 억제제(선택적 및 비-선택적 MAO-B 억제제), 항콜린제, 콜린에스테라아제 억제제, 이소카복사지드, 니알라미드, 페넬진, 하이드라카바진, 라사길린, 세레길린, 리네졸리드, 또는 이들의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다.

하나 이상의 다른 치료제는 치료적으로 유효하다고 임상의에 의해 인정된 용량으로 이러한 투약 섭생에 따라서 또는 아-치료적으로(sub-therapeutically) 유효하다고 임상의에 의해 인정된 용량으로 투여될 수 있다. 신경보호 조성물과 하나 이상의 다른 치료제의 조합의 투여에 의해 제공된 임상적 이익 및/또는 치료 효과는 추가적이거나 상승작용적일 수 있으며, 이익 또는 효과의 이러한 수준은 개별 신경보호 조성물과 하나 이상의 다른 치료제의 투여와 상기 조합의 투여를 비교함으로써 결정된다. 하나 이상의 다른 치료제는 U.S. Food and Drug Administration (U.S.F.D.A.), World Health Organization (W.H.O), European Medicines Agency (E.M.E.A.), Therapeutic Goods Administration (TGA, Australia), Pan American Health Organization (PAHO), Medicines and Medical Devices Safety Authority (Medsafe, New Zealand) 또는 다양한 세계보건기구들에 의해 제안되거나 설명된 것과 같은 용량으로 이러한 투약 섭생에 따라서 투여될 수 있다.

본 발명의 신경보호 조성물은 개별 성분들을 혼합물로 혼합함으로써 제조될 수 있다(실시예 1-2). 예를 들어, 신경보호 조성물은 적어도 올레아놀산 및 우르솔산, 및 선택적으로 베툴린산을 본 발명에서 설명된 몰 비율에 따라서 혼합함으로써 제조될 수 있다.

우리는 트리테르펜이 본 발명에 설명된 신경보호 OGD 분석에서 상이한 수준의 활성을 나타낸다고 결정했다. 따라서, 이들을 함유하는 신경보호 조성물의 효능 및 세포 독성에 대한 개별 트리테르펜의 기여 수준. 우리는 트리테르펜-기반 신경보호 조성물에서 트리테르펜의 몰 비율이 감소된 세포 독성 수준을 유지하면서 신경보호 효능의 최대 수준을 제공하기 위해서는 정확하게 균형이 이루어져야 한다는 것을 발견했다.

신경보호 OGD 분석에서 UA의 낮은 활성은 놀라운 일이다. 발현 분석으로부터 얻어진 데이터는 분획 0-4가 Nrf2, Srx 및 Hmox1의 실질적인 발현과 Gclc 및 Nqo1의 낮은 발현을 유도한다는 것을 증명한다; 그러나, 이 데이터는 또한 Srx 및 Hmox1의 유도가 OA 또는 BA보다는 UA의 활성에 더 많이 기인한다는 것도 증명한다. 복수의 트리테르펜을 포함하는 조성물의 효능(특히 넓은 용량 반응 곡선 및 낮은 농도에서의 높은 효능 수준)은 신경보호를 제공하기 위해 상승작용적으로 작동하는 다양한 상이한 메커니즘 때문인 것으로 보인다.

우리는 본 발명의 조성물에 의해 제공된 신경보호의 수준이 O:U 또는 O:U:B 또는 O:B의 적합한 몰 비율을 지닌 조성물을 이용함으로써 개선될 수 있다는 것을 발견했다. 트리테르펜(들)을 다음의 몰 비율로 함유하는 용액들이 제조되었고(실시예 1-2), 본 발명에서 설명된 대로 신경보호 활성 및 ARE 유전자 유도 활성에 대해 평가되었다.

일부 구체예에서, 개선된 신경보호 조성물은 본 발명에서 설명된 것과 같은 OA 대 UA의 몰 비율로 존재하는 적어도 올레아놀산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 우르솔산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)을 포함한다. OA는 UA에 비해 더 몰 과량으로 존재한다.

일부 구체예에서, 개선된 신경보호 조성물은 본 발명에서 설명된 것과 같은 OA 대 BA의 몰 비율로 존재하는 적어도 올레아놀산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 베툴린산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)을 포함한다. OA는 BA에 비해 더 몰 과량으로 존재한다.

일부 구체예에서, 개선된 신경보호 조성물은 본 발명에서 설명된 것과 같은 OA 대 UA 대 BA의 몰 비율로 존재하는 적어도 올레아놀산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그), 우르솔산 (그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 베툴린산(그것의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)을 포함한다. OA는 BA에 비해 더 몰 과량으로 존재한다. OA는 UA 및 BA 모두에 비해 더 몰 과량으로 존재한다.

개선된 신경보호 조성물은 각각의 트리테르펜보다 더 넓은 용량 반응 곡선을 제공하고, 총 등몰 기준으로 비교했을 때, 특히 용량 범위의 상한에서 비교했을 때 감소된 세포 독성을 제공한다.

신경보호 조성물은 임의의 적합한 제약학적으로 허용되는 제형으로 제제화될 수 있다. 비경구, 귀, 눈, 코, 흡입성, 볼, 혀밑, 장, 국소, 경구(oral 및 peroral), 및 주사가능한 제형이 특히 유용하다. 특정한 제형은 고체 또는 액체 제형을 포함한다. 예시적인 적합한 제형은 정제, 캡슐, 삼투 장치, 알약, 당의정, 트로쉐, 사쉐, 용액, 현탁액, 분산액, 바이알, 백, 보틀, 주사가능한 액체, i.v.(정맥내), i.m.(근육내) 또는 i.p.(복강내) 투여가능한 액체 및 제약 과학에서 당업자에게 알려진 다른 이러한 제형들을 포함한다.

신경보호 조성물을 함유하는 적합한 제형은 본 발명에서 설명된 것과 같이 또는 Pi et al.("용해 속도 및 생체이용율 증진을 위한 우르솔산 나노결정: 상이한 입자 크기의 영향" in Curr. Drug Deliv. (Mar 2016), 13(8), 1358-1366), Yang et al.("올레아놀산의 개선된 경구 생체이용율을 위한 자기-미세유화 약물 송살 시스템: 디자인 및 평가" in Int. J. Nanomed. (2013), 8(1), 2917-2926), Li et al.(습식 볼 밀링에 의해 제조된 최적화된 수크로오스 에스테르 안정화 올레아놀산 나노현탁액의 개발 및 평가와 실험 디자인" in Biol. Pharm. Bull. (2014), 37(6), 926-937), Zhang et al.("지질 나노스피어를 통한 트리테르펜의 경구 생체이용율의 증진: 제조, 특성화 및 흡수 평가" in J. Pharm. Sci. (June 2014), 103(6), 1711-1719), Godugu et al.("신규 항암제 베르베린 및 베툴린산의 경구 생체이용율 및 효과를 개선하기 위한 접근법" in PLoS One (Mar 2014), 9(3):e89919), Zhao et al.("용매침전 방지에 의한 경구 하이포글리세믹 약물을 위한 베툴린 나노입자의 제조 및 특성화" in Drug Deliv. (Sep 2014), 21(6), 467-479), Yang et al.("초임계 항-용매(SAS) 과정을 사용한 우르솔산 나노입자의 물리화학적 특성 및 경구 생체이용율" in Food Chem. (May 2012), 132(1), 319-325), Cao et al.("PEPT1-매개 수송을 위한 올레아놀산의 에틸렌글리콜-결합 아미노산 디에스테르 프로드러그: 합성, 장 투과성 및 약역학" in Mol. Pharm. (Aug. 2012), 9(8), 2127-2135), Li et al.("올레아놀산의 수크로오스 에스테르-안정화 나노현탁액의 제제, 생물학적 및 약역학적 연구" in Pharm. Res. (Aug 2011), 28(8), 2020-2033), Tong et al.("올레아놀산의 개선된 용해 및 경구 생체이용율을 위한 폴리비닐피롤리돈 및 소듐 카프레이트를 사용한 분무 동결 건조, BCS 유형 IV 화합물" in Int. J. Pharm. (Feb 2011), 404(1-2), 148-158), Xi et al.("올레아놀산의 자기-나노유화 약물 송달 시스템의 제제 개발 및 생체이용율 평가" in AAPS PharmSciTech (2009), 10(1), 172-182), Chen et al.("올레아놀산 나노현탁액: 제조, 시험관내 특성화 및 증진된 간보호 효과" in J. Pharm. Pharmacol. (Feb 2005), 57(2), 259-264)에 설명된 대로 제약학적으로 허용되는 부형제와 신경보호 조성물을 혼합함으로써 제조될 수 있으며, 이들의 전체 내용은 본 발명에 참고로 포함된다.

적합한 제형은 또한 Addington에 의한 US 8187644 B2(2012년 5월 29일 발행), Addington에 의한 US 7402325 B2(2008년 7월 22일 발행), Addington et al.에 의한 US 8394434 B2(2013년 3월 12일 발행)에 따라서 제조될 수 있으며, 이들의 전체 내용은 본 발명에 참고로 포함된다. 적합한 제형은 또한 실시예 13-15에 설명된 대로 제조될 수 있다.

경구 투여를 위한 바람직한 용량은 최대 5개 제형이며, 더 적거나 더 많을 수도 있고, 10개 제형이 단일 용량으로 투여될 수도 있다. 예시적인 제형은 용량당 총 0.1 내지 500mg(1 내지 10개 용량 수준)에 대해 제형당 신경보호 조성물을 0.01-5 또는 0.01-10mg 함유한다. 용량은 대상에서 특정한 치료 반응 또는 임상적 이익을 달성하기 위해 정해지고 및/또는 맞춰질 수 있는 투약 섭생에 따라서 투여될 것이다.

제형의 일부 구체예는 장용 코팅이 없고, 0.5 내지 1시간 이하의 기간 내에 신경보호 조성물의 내용물을 방출한다. 제형의 일부 구체예는 장용 코팅되고, 위의 하류에서, 예컨대 공장, 회장, 소장, 및/또는 대장(결장)으로부터 신경보호 조성물의 내용물을 방출한다. 장용 코팅된 제형은 경구 투여 후 1-10시간 이내에 전신 순환계에 신경보호 조성물을 방출할 것이다.

신경보호 조성물은 신속 방출, 즉각 방출, 제어 방출, 지속 방출, 연장 방출, 확장 방출, 버스트 방출, 연속 방출, 지연 방출, 또는 맥동 방출 제형으로 또는 이들 방출 타입 중 둘 이상을 나타내는 제형으로 포함될 수 있다. 제형으로부터 트리테르펜의 방출 프로파일은 0차, 위-0차, 1차, 위-1차 또는 S자형 방출 프로파일일 수 있다. 신경보호 조성물이 투여된 대상에서 트리테르펜의 혈장 농도 프로파일은 하나 이상의 최대값을 나타낼 수 있다.

본 발명의 용량에 포함된 신경보호 조성물의 양은 적어도 하나 이상의 제형 상태일 것이며, 공지된 약학의 원리에 따라서 선택될 수 있다. 치료적 화합물의 유효량 또는 치료적 관련 양이 구체적으로 고려된다. 용어 "유효량"은, 예를 들어 제약과 관련하여 제약학적 유효량이 고려된다는 것이 이해된다. 제약학적 유효량은 필요하거나 원하는 치료 반응에 충분한 활성 성분의 양 또는 정량, 또는 다시 말해서 환자에 투여되었을 때 주목할만한 생물학적 반응을 도출하기에 충분한 양이다. 주목할만한 생물학적 반응은 활성 물질의 단일 또는 다수 용량의 투여 결과로서 일어날 수 있다. 용량은 하나 이상의 제형을 포함할 수 있다. 임의의 환자에 대한 구체적인 용량 수준은 치료될 징후, 징후의 중증도, 환자 건강, 나이, 성별, 체중, 식이상태, 약리학적 반응, 이용된 특정 제형, 및 다른 이러한 요인들을 포함하는 다양한 요인에 의존할 것이라는 것이 이해될 것이다.

신경보호 조성물은 존재하는 트리테르펜들의 개선된 조합 및 이들이 존재하는 몰 비율로 인해 낮은 내지는 높은 용량으로 투여될 수 있다. 사람에 대한 치료적 유효 용량은 체중 kg당 신경보호 조성물 대략 100-1000mg이다. 이러한 용량은 24시간 기간 내에 최대 10회 투여될 수 있다.

본 발명의 화합물은 본 발명의 제제에서 하나 이상의 기능을 지닐 수 있다는 것이 주지되어야 한다. 예를 들어, 화합물은 계면활성제 및 수 혼화성 용매로서 또는 계면활성제 및 수 비환화성 용매로서 작용할 수 있다.

액체 조성물은 하나 이상의 제약학적으로 허용되는 액체 담체를 포함할 수 있다. 액체 담체는 수성, 비-수성, 극성, 비-극성, 및/또는 유기 담체일 수 있다. 액체 담체는, 제한은 아니지만 예로서, 수 혼화성 용매, 수 비환화성 용매, 물, 버퍼 및 이들의 혼합물을 포함한다.

본 발명에서 사용된 용어 "수용성 용매" 또는 "수 혼화성 용매"는 상호 교환하여 사용되며, 물과 이상 혼합물을 형성하지 않거나 액체상의 분리 없이 용매의 적어도 5%를 함유하는 수성 용매 혼합물을 제공할 수 있을만큼 물에 충분히 가용성인 유기 액체를 말한다. 이 용매는 사람 또는 동물에 투여하기에 적합하다. 예시적인 수용성 용매는, 제한은 아니지만 예로서, PEG(폴리(에틸렌 글리콜)), PEG 400(약 400의 대략적인 분자량을 가진 폴리(에틸렌 글리콜)), 에탄올, 아세톤, 알칸올, 알코올, 에테르, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 트리아세틴, 폴리(프로필렌 글리콜), PVP(폴리(비닐 피롤리돈)), 디메틸설폭사이드, N,N-디메틸포름아미드, 포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 피리딘, 프로판올, N-메틸아세트아미드, 부탄올, 솔루포어(2-피롤리돈), 파라마솔브(N-메틸-2-피롤리돈)를 포함한다.

본 발명에서 사용된 용어 "수 불용성 용매" 또는 수 비혼화성 용매"는 상호 교환하여 사용되며, 물과 이상 혼합물을 형성하거나 물에서 용매의 농도가 5%를 초과할 때 상 분리를 제공하는 유기 액체를 말한다. 이 용매는 동물 또는 사람에 투여하기에 적합한다. 예시적인 수 불용성 용매는, 제한은 아니지만 예로서, 중간쇄/장쇄 트리글리세라이드, 오일, 피마자유, 옥수수유, 비타민 E, 비타민 E 유도체, 올레산, 지방산, 올리브유, 소프티산 645(디글리세릴카프릴레이트/카프레이트/스테아레이트/하이드록시 스테아레이트 아디페이트), 미글리올, 카프텍스(Captex 350: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트/라우레이트 트리글리세라이드; Captex 355 EP/NF: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트 중간쇄 트리글리세라이드)를 포함한다.

적합한 용매는 "산업 Q3C 불순물:잔류 용매에 대한 인체 사용(ICH) 가이드라인에 대한 제약 등록을 위한 기술 요건의 조정에 대한 국제 컨퍼런스"(1997)에 열거되며, 이것은 제약에서의 안전성을 고려한 잔류 용매의 양에 대한 권고도 하고 있다. 예시적인 용매는 제2류 또는 제3류 용매로서 열거된다. 제3류 용매는, 예를 들어 아세트산, 아세톤, 아니솔, 1-부탄올, 2-부탄올, 부틸 아세테이트, tert-부틸메틸 에테르, 쿠멘, 에탄올, 에틸 에테르, 에틸 아세테이트, 에틸 포르메이트, 포름산, 헵탄, 이소부틸 아세테이트, 이소프로필 아세테이트, 메틸 아세테이트, 메틸-1-부탄올, 메틸에틸 케톤, 메틸이소부틸 케톤, 2-메틸-1-프로판올, 펜탄, 1-펜탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 또는 프로필 아세테이트를 포함한다.

본 발명에서 수 비혼화성 용매로서 사용될 수 있는 다른 물질은 Captex 100: 프로필렌 글리콜 디카프레이트; Captex 200: 프로필렌 글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트; Captex 200 P: 프로필렌 글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트; 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트; Captex 300: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트; Captex 300 EP/NF: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트 중간쇄 트리글리세라이드; Captex 350: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트/라우레이트; Captex 355: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트; Captex 355 EP/NF: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트 중간쇄 트리글리세라이드; Captex 500: 트리아세틴; Captex 500 P: 트리아세틴(제약 등급); Captex 800: 프로필렌 글리콜 디(2-에틸텍사노에이트); Captex 810 D: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트/리놀레에이트; Captex 1000: 글리세릴트리카프레이트; Captex CA: 중간쇄 트리글리세라이드; Captex MCT-170: 중간쇄 트리글리세라이드; Capmul GMO: 글리세릴 모노올레에이트; Capmul GM0-50 EP/NF: 글리세릴 모노올레에이트; Capmul MCM: 중간쇄 모노- & 디글리세라이드; Capmul MCM C8: 글리세릴 모노카프릴레이트; Capmul MCM C10: 글리세릴 모노카프레이트; Capmul PG-8: 프로필렌 글리콜 모노카프릴레이트; Capmul PG-12: 프로필렌글리콜 모노라우레이트; Caprol 10G10O: 데카글리세롤 데카올레에이트; Caprol 3GO: 트리글리세롤 모노올레에이트; Caprol ET: 혼합 지방산의 폴리글리세롤 에스테르; Caprol MPGO: 헥사글리세롤 디올레에이트; Caprol PGE 860: 데카글리세롤 모노-, 디올레에이트를 포함한다.

본원에서 사용된 "계면활성제"는 극성 또는 하전된 친수성 부분뿐만 아니라 비-극성 소수성(친지질성) 부분을 포함하는 화합물을 말한다; 즉, 계면활성제는 양쪽성이다. 용어 계면활성제는 하나 또는 화합물들의 혼합물을 말한다. 계면활성제는 가용화제, 유화제 또는 분산제일 수 있다. 계면활성제는 친수성 또는 소수성일 수 있다.

친수성 계면활성제는 제약학적 조성물에 사용하기에 적합한 임의의 친수성 계면활성제일 수 있다. 이러한 계면활성제는 음이온성, 양이온성, 쯔위터이온성 또는 비-이온성일 수 있고, 비-이온성 친수성 계면활성제가 본 발명에서 바람직하다. 상기 논의된 대로, 이들 비-이온성 친수성 계면활성제는 일반적으로 약 10을 초과하는 HLB 값을 가질 것이다. 친수성 계면활성제의 혼합물이 또한 본 발명의 범위 내이다.

유사하게, 소수성 계면활성제도 제약 조성물에 사용하기에 적합한 임의의 소수성 계면활성제일 수 있다. 일반적으로, 적합한 소수성 계면활성제는 약 10 미만의 HLB 값을 가질 것이다. 소수성 계면활성제의 혼합물이 또한 본 발명의 범위 내이다.

추가의 적합한 가용화제의 예들은 알코올 및 폴리올, 예컨대 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 벤질알코올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 부탄디올 및 이들의 이성질체, 글리세롤, 펜타에리트리톨, 소르비톨, 만니톨, 트랜스큐톨, 디메틸이소소르바이드, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리비닐알코올, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 및 다른 셀룰로오스 유도체, 시클로덱스트린 및 시클로덱스트린 유도체; 약 200 내지 약 6000의 평균 분자량을 가진 폴리에틸렌 글리콜의 에테르, 예컨대 테트라하이드로푸르푸릴 알코올 PEG 에테르(글리코푸롤, BASF로부터 상표명 Tetraglycol로 상업적 이용가능함) 또는 메톡시 PEG(Union Carbide); 아미드, 예컨대 2-피롤리돈, 2-피페리돈, 카프로락탐, N-알킬피롤리돈, N-하이드록시알킬피롤리돈, N-알킬피페리돈, N-알킬카프로락탐, 디메틸아세트아미드, 및 폴리비닐피롤리돈; 에스테르, 예컨대 에틸프로피오네이트, 트리부틸시트레이트, 아세틸 트리에틸시트레이트, 아세틸 트리부틸시트레이트, 트리에틸시트레이트, 에틸 올레에이트, 에틸 카프릴레이트, 에틸 부티레이트, 트리아세틴, 프로필렌 글리콜 모노아세테이트, 프로필렌 글리콜 디아세테이트, 카프로락톤 및 그것의 이성질체, 발레로락톤 및 그것의 이성질체, 부티로락톤 및 그것의 이성질체; 및 본 분야에 공지된 다른 가용화제들, 예컨대 디메틸 아세트아미드, 디메틸 이소소르바이드(Arlasolve DMI(ICI)), N-메틸 피롤리돈(Pharmasolve (ISP)), 모노옥타노인, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르(Gattefosse로부터 상표명 Transcutol로 이용가능함), 및 물을 포함한다. 가용화제의 혼합물이 또한 본 발명의 범위 내이다.

표시된 것만 제외하면, 본 발명에서 언급된 화합물은 표준 상업적 공급원으로부터 쉽게 이용할 수 있다.

투명한 액체 조성물은 육안으로 보기에 투명하며, 조성물의 합계 중량에 기초하여 현탁된 고체를 5 중량% 미만, 3 중량% 미만, 1 중량% 미만 함유할 것이다.

필수적이지는 않지만, 본 발명의 조성물 또는 키트는 킬레이트제, 보존제, 항산화제, 흡착제, 산성화제, 알칼리화제, 거품방지제, 완충제, 착색제, 전해질, 염, 안정제, 장성조정제, 희석제, 다른 제약학적 부형제, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "항산화제"는 산화를 억제하는 제제를 의미하며, 따라서 산화성 과정에 의한 제조물의 열화를 방지하기 위해 사용된다. 이러한 화합물은, 제한은 아니지만 예로서, 아스코르브산, 아스코르빅 팔미테이트, 비타민 E, 비타민 E 유도체, 부틸화 하이드록시아니솔, 부틸화 하이드록시톨루엔, 차아인산, 모노티오글리세롤, 프로필 갈레이트, 소듐 아스코르베이트, 소듐 비설파이트, 소듐 포름알데하이드 설폭실레이트, 소듐 메탈비설페이트 및 당업자에게 공지된 다른 이러한 물질들을 포함한다.

본 발명에서 사용된 용어 "킬레이트제"는 용액에서 금속 이온과 킬레이트를 형성하는 화합물을 의미한다. 예시적인 킬레이트제는 EDTA(테트라소듐 에틸렌디아민테트라아세테이트), DTPA(펜타소듐 디에틸렌트리아민펜타아세테이트), HEDTA(N-(하이드록시에틸)-에틸렌-디아민트리아세트산의 트리소듐 염), NTA(트리소듐 니트릴로트리아세테이트), 디소듐에탄올디글리신(Na₂EDG), 소듐 디에탄올글리신(DEGNa), 시트르산 및 당업자에게 공지된 다른 화합물들을 포함한다.

본원에서 사용된 용어 "흡착제"는 물리적 또는 화학적(화학수착) 수단에 의해 표면 위에 다른 분자를 보유할 수 있는 제제를 의미한다. 이러한 화합물은, 제한은 아니지만 예로서, 분체상 및 활성화 챠콜 및 당업자에게 공지된 다른 물질들을 포함한다.

본 발명에서 사용된 용어 "알칼리화제"는 알칼리성 매체를 제공하기 위해 사용된 화합물을 의미한다. 이러한 화합물은, 제한은 아니지만 예로서, 암모니아 용액, 탄산암모늄, 디에탄올아민, 모노에탄올아민, 수산화칼륨, 붕산나트륨, 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 수산화나트륨, 트리에탄올아민, 및 트롤아민 및 당업자에게 공지된 다른 물질들을 포함한다.

본 발명에서 사용된 용어 "산성화제"는 산성 매체를 제공하기 위해 사용된 화합물을 의미한다. 이러한 화합물은, 제한은 아니지만 예로서, 아세트산, 아미노산, 시트르산, 푸마르산 및 다른 알파-하이드록시 산, 염산, 아스코르브산, 및 질산 및 당업자에게 공지된 다른 물질들을 포함한다.

본 발명에서 사용된 용어 "거품방지제"는 충전 조성물의 표면에 형성되는 거품을 방지하거나 그 양을 감소시키는 화합물 또는 화합물들을 의미한다. 적합한 거품방지제는, 제한은 아니지만 예로서, 디메티콘, SIMETHICONE, 옥톡시놀 및 당업자에게 공지된 다른 물질들을 포함한다.

본 발명에서 사용된 용어 "완충제"는 희석이나 산 또는 알칼리의 첨가시 pH의 변화에 저항하기 위해 사용되는 화합물을 의미한다. 이러한 화합물은, 제한은 아니지만 예로서, 메타인산칼륨, 인산칼륨, 모노베이직 소듐 아세테이트 및 시트르산나트륨 무수물 및 탈수물 및 당업자에게 공지된 다른 이러한 물질들을 포함한다.

본 발명에서 사용된 용어 "희석제" 또는 "충전제"는 정제 및 캡슐의 제조에서 원하는 벌크, 유동 특성 및 압축 특성을 가지기 위해 충전제로서 사용되는 비활성 물질을 의미한다. 이러한 화합물은, 제한은 아니지만 예로서, 다이베이직 칼륨 포스페이트, 카올린, 락토오스, 수크로로스, 만니톨, 미세결정 셀룰로오스, 분체상 셀룰로오스, 침전 탄산칼슘, 소르비톨, 및 녹말 및 당업자에게 공지된 다른 물질들을 포함한다.

본 발명에서 사용된 용어 "보존제"는 미생물의 성장을 방지하기 위해 사용된 화합물을 의미한다. 이러한 화합물은, 제한은 아니지만 예로서, 염화벤잘코늄, 염화벤제토늄, 벤조산, 벤질 알코올, 염화세틸피리디늄, 클로로부탄올, 페놀, 페닐에틸 알코올, 페닐질산수은, 페닐아세트산수은, 티메로살, 메타크레졸, 미리스틸감마 염화피콜리늄, 벤조산칼륨, 소르브산칼륨, 벤조산나트륨, 프로피온산나트륨, 소르브산, 티몰, 및 메틸, 에틸, 프로필, 또는 부틸 파라벤 및 당업자에게 공지된 다른 물질들을 포함한다.

본 발명에서 사용된 용어 "착색제"는 제약학적 제조물에 색을 부여하기 위해 사용된 화합물을 의미한다. 이러한 화합물은, 제한은 아니지만 예로서, FD&C Red No. 3, FD&C Red No. 20, FD&C Yellow No. 6, FD&C Blue No. 2, FD&C Green No. 5, FD&C Orange No. 5, FD&C Red No. 8, 카라멜, 및 산화철(흑색, 적색, 황색), 다른 FD&C 염료 및 천연 착색제, 예컨대 포도 껍질 추출물, 비트레드 분말, 베타-카로텐, 아나토, 카민, 투메릭, 파프리카, 이들의 조합 및 당업자에게 공지된 다른 이러한 물질들을 포함한다.

본 발명에서 사용된 용어 "안정제"는 제제의 치료 활성을 감소시킬 수 있는 물리적, 화학적 또는 생화학적 과정에 대해 활성제를 안정화시키기 위해 사용된 화합물을 의미한다. 적합한 안정제는, 제한은 아니지만 예로서, 알부민, 시알산, 크레아티닌, 글리신 및 다른 아미노산, 니아신아미드, 소듐 아세틸트립토포네이트, 산화아연, 수크로오스, 글루코오스, 락토오스, 소르비톨, 만니톨, 글리세롤, 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 카프릴레이트 및 소듐 사카린 및 당업자에게 공지된 다른 물질들을 포함한다.

본 발명에서 사용된 용어 "장성조정제"는 액체 제제의 장성을 조정하기 위해 사용될 수 있는 화합물 또는 화합물들을 의미한다. 적합한 장성조정제는 글리세린, 락토오스, 만니톨, 덱스트로오스, 염화나트륨, 황산나트륨, 소르비톨, 트레할로오스 및 당업자에게 공지된 다른 물질들을 포함한다.

본 발명의 조성물은 또한 오일, 예컨대 고정유, 땅콩유, 참깨유, 면실유, 옥수수유 및 올리브유; 지방산, 예컨대 올레산, 스테아르산 및 이소스테아르산; 및 지방산 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트, 지방산 글리세라이드 및 아세틸화 지방산 글리세라이드를 포함할 수 있다. 조성물은 또한 알코올, 예컨대 에탄올, 이소프로판올, 헥사데실 알코올, 글리세롤 및 프로필렌 글리콜; 글리세롤 케탈, 예컨대 2,2-디메틸-1,3-디옥소란-4-메탄올; 에테르, 예컨대 폴리(에틸렌글리콜) 450; 석유 탄화수소, 예컨대 미네랄 오일 및 페트롤라툼; 물; 제약학적으로 허용되는 계면활성제, 현탁제 또는 유화제; 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.

제약학적 제제의 분야에서 사용된 화합물들은 일반적으로 다양한 기능 또는 목적을 위해 작용한다는 것이 이해되어야 한다. 따라서, 본 발명에서 명명된 화합물이 단지 한번 언급된다면 또는 둘 이상의 용어를 규정하기 위해 사용된다면, 그것의 목적 또는 기능은 명명된 목적(들) 또는 기능(들)에만 제한되는 것으로 해석되어서는 안 된다.

제제의 성분들 중 하나 이상은 그것의 유리 염기 또는 제약학적으로 또는 분석학적으로 허용되는 염 형태로 존재할 수 있다. 본 발명에서 사용된 "제약학적으로 또는 분석학적으로 허용되는 염"은 이온결합쌍을 형성하기 위해 필요에 따라 산 또는 염기와 그것을 반응시킴으로써 변형된 화합물을 말한다. 허용되는 염의 예들은, 예를 들어 비-독성 무기 또는 유기 산으로부터 형성된 종래의 비-독성 염을 포함한다. 적합한 비-독성 염은 염화수소산, 브롬화수소산, 황산, 설폰산, 설팜산, 인산, 질산 및 당업자에게 알려진 다른 산들과 같은 무기 산으로부터 유래된 것들을 포함한다. 염은 아미노산, 아세트산, 프로피온산, 석신산, 글리콜산, 스테아르산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 팜산, 말레산, 하이드록시말레산, 페닐아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 설파닐산, 2-아세톡시벤조산, 푸마르산, 톨루엔설폰산, 메탄설폰산, 에탄디설폰산, 옥살산, 이세티온산, 및 당업자에게 알려진 다른 산들과 같은 유기산으로부터 제조된다. 다른 적합한 염들의 리스트는 Remington's Pharmaceutical Sciences, 17^th. ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, p. 1418에서 찾을 수 있으며, 이것의 관련 내용은 본 발명에 참고로 포함된다.

문구 "제약학적으로 허용되는"은 정통한 의학적 판단의 범위 내에서 사람 및 동물의 조직과 접촉시켜 사용하기에 적합하고 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 임의의 다른 문제나 합병증이 없으며 타탕한 이익/위험 비를 가진, 화합물, 물질, 조성물 및/또는 제형을 말하기 위해 본 발명에서 이용된다.

제형은 제약 산업에 공지된 임의의 종래의 수단에 의해 제조될 수 있다. 액체 제형은 용기에 적어도 하나의 액체 담체와 신경보호 조성물을 제공함으로써 제조될 수 있다. 하나 이상의 다른 부형제가 액체 제형에 포함될 수 있다. 고체 제형은 적어도 하나의 고체 담체와 신경보호 조성물을 제공함으로써 제조될 수 있다. 하나 이상의 다른 부형제가 고체 제형에 포함될 수 있다.

제형은 종래의 포장 장비 및 재료를 사용하여 포장될 수 있다. 그것은 팩, 보틀, 바이알, 백, 시린지, 엔벨롭, 패킷, 블리스터 팩, 박스, 앰풀, 또는 다른 이러한 용기에 포함될 수 있다.

본 발명은 신경학적 상태를 가진 대상들의 집단에서 대상의 통계적으로 유의한 수의 임상적 상태를 개선하는 방법을 포함하며, 이 방법은 신경보호 조성물을 대상의 집단에 투여하는 단계; 및 대상의 임상 상태를 결정하여 개선된 임상 상태를 확립하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 통계적으로 유의한 수는 집단의 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90%이다. 일부 구체예에서, 신경보호 조성물은 하나 이상의 다른 약리학적 활성 화합물을 포함한다.

본 발명에서 사용된 "유도체"는 a) 제1 화학 물질과 구조적으로 관련되고 그것으로부터 이론적으로 유도될 수 있는 화학 물질; b) 유사한 제1 화합물 또는 제1 화합물의 1개의 원자가 다른 원자 또는 원자 그룹으로 대체된다면 다른 제1 화합물로부터 발생할 수 있다고 상상될 수 있는 화합물로부터 형성된 화합물; c) 모 화합물로부터 유도되거나 얻어지며 모 화합물의 필수 원소를 함유하는 화합물; 또는 d) 하나 이상의 단계에서 유사한 구조의 제1 화합물로부터 생성될 수 있는 화학적 화합물이다. 예를 들어, 유도체는 중수소 형태, 산화된 형태, 탈수된, 불포화, 중합체 콘쥬게이트 또는 글리코실화된 형태를 포함할 수 있거나, 또는 에스테르, 아미드, 락톤, 상동체, 에테르, 티오에테르, 시아노, 아미노, 알킬아미노, 설프히드릴, 헤테로환, 헤테로환 고리-융합, 중합된, 페그화된, 벤질리덴일, 트리아졸일, 피페리진일 또는 중수소 형태를 포함할 수 있다.

상기 설명 및 아래 실시예에 비추어, 당업자는 과도한 실험 없이 청구된 바와 같은 본 발명을 실시할 수 있을 것이다. 전술한 내용은 본 발명의 구체예들의 준비 과정을 상세히 설명한 아래의 실시예를 참조하여 더 잘 이해될 것이다. 이들 실시예에서 이루어진 모든 참조는 예시의 목적을 위한 것이다. 아래의 실시예는 배타적인 것으로 간주되어서는 안 되며, 본 발명에 의해 고려되는 많은 구체예들 중 단지 소수만을 예시할 뿐이다.

트리테르펜은 Sigma Chemical Co.(St. Louis, MO)로부터 구입할 수 있다.

실시예 1

트리테르펜 혼합물의 제조

나타낸 대략적인 몰 비율로 명시된 트리테르펜들을 혼합하여 아래의 조성물을 제조했다.

각 조성물에 대해, 3개의 상이한 각각의 용액을 제조했고, 각 용액에서 트리테르펜의 농도는 대략 9μM, 18μM, 또는 36μM이었다.

실시예 2

신경보호 조성물의 제조

각각의 트리테르펜 성분을 혼합하여 혼합물을 형성함으로써 신경보호 조성물이 제조될 수 있다. 신경보호를 제공하는 상기 제조된 트리테르펜 혼합물은 신경보호 조성물로 제제화되었다.

- 올레아놀산 및 우르솔산을 사용한 신경보호 조성물

기지량의 올레아놀산과 우르솔산을 여기 정의된 것과 같은 성분들의 정해진 몰 비율에 따라서 혼합했다. 성분들은 고체 형태로 혼합되거나 또는 용매(들), 예를 들어 메탄올, 에탄올, 클로로포름, 아세톤, 프로판올, 디메틸설폭사이드(DMSO), 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸아세트아미드(DMAC), N-메틸피롤리돈(NMP), 물 또는 이들의 혼합물에서 혼합되었다. 결과의 혼합물은 본 발명에 설명된 것과 같은 상대적 몰 비율로 성분들을 함유했다.

제약학적으로 허용되는 신경보호 조성물을 위해 적어도 하나의 제약학적으로 허용되는 부형제를 약리학적 활성제 중에 혼합했다. 신경보호 조성물은 포유류에 투여하기 위해 제제화되었다.

올레아놀산과 베툴린산을 사용한 신경보호 조성물

기지량의 올레아놀산과 베툴린산을 여기 정의된 것과 같은 성분들의 정해진 몰 비율에 따라서 혼합했다. 성분들은 고체 형태로 혼합되거나 또는 용매(들), 예를 들어 메탄올, 에탄올, 클로로포름, 아세톤, 프로판올, 디메틸설폭사이드(DMSO), 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸아세트아미드(DMAC), N-메틸피롤리돈(NMP), 물 또는 이들의 혼합물에서 혼합되었다. 결과의 혼합물은 본 발명에 설명된 것과 같은 상대적 몰 비율로 성분들을 함유했다.

올레아놀산, 우르솔산 및 베툴린산을 사용한 신경보호 조성물

기지량의 올레아놀산, 우르솔산 및 베툴린산을 여기 정의된 것과 같은 성분들의 정해진 몰 비율에 따라서 혼합했다. 성분들은 고체 형태로 혼합되거나 또는 용매(들), 예를 들어 메탄올, 에탄올, 클로로포름, 아세톤, 프로판올, 디메틸설폭사이드(DMSO), 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸아세트아미드(DMAC), N-메틸피롤리돈(NMP), 물 또는 이들의 혼합물에서 혼합되었다. 결과의 혼합물은 본 발명에 설명된 것과 같은 상대적 몰 비율로 성분들을 함유했다.

실시예 3

뇌 슬라이스-기반 OGD 분석에서 조성물의 평가

관상형 뇌 슬라이스(250μm 두께)를 어느 한 성별의 10마리 Sprague-Dawley 래트 새끼로부터 출생일에 준비하고 기관형 배양을 수행했다. 동물을 Duke IACUC 승인 및 감시하에 NIH 가이드라인에 따라서 죽였다. 간단히 말해서, 뇌 조직 슬라이스를 얼음-냉각된 인공 뇌척수액(ACSF)에서 절단하고 0.5% 시약-등급 아가로오스에 셋팅된 배양 배지(15% 열-비활성화 말 혈청, 10mM KCl, 10mM HEPES, 100 U/ml 페니실린/스트렙토마이신, 1mM 나트륨 피루베이트, 및 1mM L-글루타민으로 보충된 Neurobasal A 배지) 위에서 계면 형태로 평판했다. 허혈성 손상을 모델링하기 위해, 뇌 슬라이스를 O₂를 적게(<0.5%) 함유하는 글루코오스-무함유, N₂-버블 ACSF에 5.5분간 노출하여 산소-글루코오스 박탈(OGD)을 행했다.

1시간 후에, 대조군 및 OGD-처리된 뇌 슬라이스를 황색 형광 단백질(YFP)을 암호화하는 DNA로 유전자총 방식으로 트랜스펙션했다. AD 또는 FTD에서 신경변성 모델링 분석을 위해, 뇌 슬라이스를 WT 아밀로이드 전구체 단백질(APP)로의 발현 구성물과 함께 YFP로, 또는 말 암호화된 사람 Tau4R0N(NCBI 기준 서열 NM_016834와 동일)에서 구성된 cDNA와 함께 YFP로 공-트랜스펙션했다. 다음에, 뇌 슬라이스 외식편을 OGD 분석을 위해 37℃에서 5% CO₂ 하에 24시간 동안; 또는 APP- 및 tau4R0N-유도 신경변성 분석을 위해 3일 동안 인큐베이션했다. 뇌 슬라이스 외식시에 배양 배지에 나타낸 농도로 조성물을 첨가했다.

모든 뇌 슬라이스 분석을 위해, 각 뇌 슬라이스의 피질 영역에 있는 건강한 추체 뉴런의 수를 Leica MZIIIFL 형광 입체현미경으로 영상화했다. 피질 추체 뉴런은 피질판에서 이들의 특징적인 위치 및 배향에 의해, 그리고 연막 표면을 향해서 방사상으로 펼쳐진 단일, 정점 수지상돌기의 두드러진 확장에 의해 쉽게 확인되었다. 건강한 피질 추체 뉴런은 1) 피질의 추체 뉴런층 내에 위치된 튼튼하며 밝게 표지된 세포체를 나타내고; 2) 슬라이스의 연막 표면을 향해서 방사상으로 확장된 투명한 정점 수지상돌기를 보유하고; 3) 뉴런 체세포로부터 직접 긴 ≥2 투명 기저 수지상돌기≥세포체 직경을 나타내고; 및 4) 체세포에 그리고 모든 뉴런성 과정을 통틀어서 YFP 시각 마커에 의한 투명하고 연속적인 세포질 표지를 나타내는 것들로 간주되었다. 음성 대조군 조건(DMSO 담체로만 처리된, APP-트랜스펙션된, 또는 tau4R-트랜스펙션된, OGD)에 대하여 통계적으로 유의한 차이는 조건당 N=12 뇌 슬라이스를 사용하여, 0.05 신뢰도 수준에서 ANOVA와 Dunnett의 post hoc 비교 검정을 차례로 사용하여 결정했다. 각 실험은 적어도 2회 수행되었다.

실시예 4

신경보호의 결정을 위한 시간-지연 뇌-슬라이스 분석

이 분석은 다음의 변화가 이루어진 것을 제외하고는 실시예 3에 따라서 수행되었다. OGD와 평가될 조성물의 도입 사이에 명시된 길이의 시간이 허용되었다. OGD 처리 시기에 비해 처리가 지연된 경우 뇌 슬라이스에 대한 신경보호를 제공하는 조성물의 능력을 결정했다.

실시예 5

Nrf2 활성화 및 ARE 유전자 발현 Nrf2 활성화에 대한 조성물의 평가

일차 피질선조체 뉴런 공-배양물을 어느 한 성별의 E18 Sprague-Dawley 래트 또는 C57B1/6 마우스 배아로부터 제조했다. 루시페라제 리포터 분석에, Cignal 항산화제 반응 리포터 키트(Qiagen)를 사용했다. 40:1 루시페라제:Renilla 플라스미드의 5xARE 루시페라제 리포터 혼합물을 Amaxa 전기천공 장치(Lonza)를 사용하여 피질 및 선조 뉴런에 따로 트랜스펙션했다. 전기천공 후, 뉴런을 모으고 성숙한 신경교 배양물을 함유하는 96웰 플레이트에 즉시 평판했다. 96시간 배양 후, 조성물을 7시간 또는 24시간 동안 나타낸 농도에 첨가한 다음, Dual-Glo 루시페라제 분석 시스템 프로토콜 및 시약(Promega)을 사용하여 수거했다. SpectraMax L 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices)를 사용하여 이중-파장 발광을 검출했다. 루시페라제 값을 내부 Renilla 대조군에 대해 정규화했고, DMSO으로만 처리한 대조군에 대한 배수-발현을 계산했다. 4-6개의 생물학적 복제물을 사용하여 적어도 3회의 독립적 실험을 수행했다.

ARE 유전자 발현

ARE 표적 유전자 발현 수준의 qPCR 정량을 위해, 피질 및 선조 뉴런을 성숙한 신경교 배양물을 함유하는 96웰 플레이트 위에 평판하고 96시간 배양했다. 조성물을 6시간 동안 나타낸 농도로 배양물에 첨가했다. 처리 기간의 종료시에 세포를 용해하고, 절대적 RNA 미니-프렙 키트(Agilent Technologies/Stratagene)을 사용하여 총 RNA를 분리했다. cDNA를 올리고 dT 프라이머와 Superscript II 역전사효소(Invitrogen)를 사용하여 생성했다. 결과의 cDNA는 유전자 전사체의 정량적 PCR에 사용되며, 이것은 SYBR Green 실시간 PCR 마스터 믹스(Life Technologies)와 다음의 마우스 프라이머, Gclc(포워드-5'-TGGCCACTATCTGCCCAATT-3' 및 리버스-5'-GTCTGACACGTAGCCTCGGTAA-3'), Nqo1(포워드-5'-GCCCGCATGCAGATCCT-3' 및 리버스-5'-GGTCTCCTCCCAGACGGTTT-3'), Srx(포워드-5'-GCTTCCTCTCGGGAGTCCTT-3' 및 리버스-5'-CAGCAACAGCGACTACGAAGTAA-3'), 및 Hmox1(포워드-5'-CCTCACTGGCAGGAAATCATC-3' 및 리버스-5'-CCTCGTGGAGACGCTTTACATA-3')(Integrated DNA Technologies)를 사용한다. 래트 피질선조체 공-배양물 샘플의 경우, 사용된 qPCR 프라이머는 이미 설명된 것과 같았다(van Roon-Mom, W. M. et al. 돌연변이 헌팅턴은 헌팅턴병의 PC12 모델에서 Nrf2-반응성 유전자를 활성화하고 도파민 합성을 손상시킨다. BMC Molecular Biology(2008), 9, 1-13, doi:10.1186/1471-2199-9-84). 각 생물학적 샘플은 ViiA 7 실시간 PCR 기기(Applied Biosystems)에서 3번 중복하여 측정되었다; 배수 발현이 상응하는 대조군 GAPDH 수준에 대해 정규화된 후 계산되었다.

실시예 6

헌팅턴병에 대한 시험관내 피질선조체 공-배양물 분석에서 조성물의 평가

이 분석에서는, 무손상 뇌 슬라이스를 사용하는 대신, 돌연변이 htt를 전기천공을 통해서 96웰 플레이트에 배열된 피질 뉴런, 선조 뉴런 및 신경교의 고 밀도 혼합 공-배양물에 도입한다. 이 분석 플랫폼의 목표는 생체내 질환-관련 뉴런성 집단의 상호연결성의 핵심 양태를 개략하는 복합 일차 배양 시스템의 생물학/임상적 관련성을 대규모 완전 자동화 스크리닝 전략과 조합하는 것이다. 이 분석에서, 시험관내 1-2주 경과에 걸쳐서, 트랜스펙션된 돌연변이 htt 구성물은 선조 뉴런과 피질 뉴런에서 모두 점진적 변성을 유도하며, 이것은 이어서 Cellomics Arrayscan VTI 플랫폼에서 자동 이미지 획득 및 객체 검출 알고리즘을 사용하여 정량된다. 각 데이터 포인트는 6개 웰로부터 도출되며, 각 웰에서 16개 이미지가 자동 캡쳐되고, 가공되고, Cure Huntington's Disease Initiative와 함께 수행 중인 대규모 스크리닝 전략 동안 프로토콜을 사용하여 Cellomics Arrayscan에서 분석된다. 완전한 라운드에서, 주당 4회 사이클씩, 각 사이클에서 25,000개 이미지가 수집되고 분석된다.

피질선조체 공-배양물 분석 플랫폼

뉴런 평판에 앞서 순수한 신경교 배양물을 준비하고, 컨플루언트 신경교 층을 가진 96웰 플레이트를 만든다. 다음에, 피질 및 선조 조직을 따로 절제하고, 적절한 DNA 구성물들로 "뉴클레오펙션"하며, 이것은 나중에 YFP, CFP 및 mCherry와 같은 상이한 형광 단백질의 발현에 의해 구별될 수 있다. 다음에, 이렇게 따로 트랜스펙션된 선조 및 피질 뉴런을 완전히 혼합하고, 앞서 평판된 신경교 단층을 함유하는 96웰 플레이트에 평판한다. 조성물을 이 피질선조체 공-배양물 플랫폼에서 시험한다.

실시예 7

제한은 아니지만 알츠하이머병을 포함하는 신경학적 상태의 치료

방법 A. 신경보호 조성물 요법

알츠하이머병을 가진 대상에 신경보호 조성물을 처방하고, 치료상 관련된 용량을 일정 시간 기간 동안 처방된 투약 섭생에 따라서 대상에 투여한다. 대상의 치료 반응의 수준을 주기적으로 결정한다. 치료 반응 수준이 하나의 용량에서 너무 낮으면, 대상에서 치료 반응의 원하는 수준이 달성될 때까지 정해진 용량 상승 일정에 따라서 용량을 상승시킨다. 신경보호 조성물을 사용한 대상의 치료는 필요에 따라 계석되며, 용량 또는 투약 섭생은 환자가 원하는 임상 종점에 도달할 때까지 필요에 따라 조정될 수 있다.

방법 B. 조합 치료법: 신경보호 조성물과 다른 치료제

알츠하이머병, 또는 그것의 증상의 치료를 위해 하나 이상의 다른 치료제와 조합하여 신경보호 조성물이 대상에 처방되고 투여되는 것을 제외하고는 상기 방법 A에 따른다. 다음에, 하나 이상의 다른 치료제는 신경보호 조성물 이전에, 이후에 또는 함께 투여될 수 있다. 하나 이상의 다른 치료제의 용량 상승(또는 저감)이 또한 행해질 수 있다. 적합한 하나 이상의 다른 치료제는 Namenda™(메만틴 HCl), Aricept™(도네페질), Razadyne™(갈란타민), Exelon™(리바스티그민), Cognex™(타크린), 및 아만타딘을 포함한다.

실시예 8

제한은 아니지만 헌팅턴병을 포함하는 신경학적 상태의 치료

방법 A. 신경보호 조성물 요법

헌팅턴병을 가진 대상에 신경보호 조성물을 처방하고, 치료상 관련된 용량을 일정 시간 기간 동안 처방된 투약 섭생에 따라서 대상에 투여한다. 대상의 치료 반응의 수준을 주기적으로 결정한다. 치료 반응 수준이 하나의 용량에서 너무 낮으면, 대상에서 치료 반응의 원하는 수준이 달성될 때까지 정해진 용량 상승 일정에 따라서 용량을 상승시킨다. 신경보호 조성물을 사용한 대상의 치료는 필요에 따라 계석되며, 용량 또는 투약 섭생은 환자가 원하는 임상 종점에 도달할 때까지 필요에 따라 조정될 수 있다. 투여된 용량은 본 발명에 설명된 것들과 유사할 수 있다.

방법 B. 조합 치료법: 신경보호 조성물과 다른 치료제

헌팅턴병, 또는 그것의 증상의 치료를 위해 하나 이상의 다른 치료제와 조합하여 신경보호 조성물이 대상에 처방되고 투여되는 것을 제외하고는 상기 방법 A에 따른다. 다음에, 하나 이상의 다른 치료제는 신경보호 조성물 이전에, 이후에 또는 함께 투여될 수 있다. 하나 이상의 다른 치료제의 용량 상승(또는 저감)이 또한 행해질 수 있다. 적합한 하나 이상의 다른 치료제는 비타민 E, Baclofen(CoQ10의 유도체), Lamotrigine(항경련제), 라마세미드(저 친화성 NMDA 길항제인 마취제), 및 릴루졸(Na 채널 차단제)을 포함한다.

실시예 9

제한은 아니지만 허혈성 뇌졸중을 포함하는 신경학적 상태의 치료

방법 A. 신경보호 조성물 요법

방법 B. 조합 치료법: 신경보호 조성물과 다른 치료제

허혈성 뇌졸중, 또는 그것의 증상의 치료를 위해 하나 이상의 다른 치료제와 조합하여 신경보호 조성물이 대상에 처방되고 투여되는 것을 제외하고는 상기 방법 A에 따른다. 다음에, 하나 이상의 다른 치료제는 신경보호 조성물 이전에, 이후에 또는 함께 투여될 수 있다. 하나 이상의 다른 치료제의 용량 상승(또는 저감)이 또한 행해질 수 있다.

실시예 10

제한은 아니지만 파킨슨병을 포함하는 신경학적 상태의 치료

방법 A. 신경보호 조성물 요법

파킨슨병을 가진 대상에 신경보호 조성물을 처방하고, 치료상 관련된 용량을 일정 시간 기간 동안 처방된 투약 섭생에 따라서 대상에 투여한다. 대상의 치료 반응의 수준을 주기적으로 결정한다. 치료 반응 수준이 하나의 용량에서 너무 낮으면, 대상에서 치료 반응의 원하는 수준이 달성될 때까지 정해진 용량 상승 일정에 따라서 용량을 상승시킨다. 신경보호 조성물을 사용한 대상의 치료는 필요에 따라 계석되며, 용량 또는 투약 섭생은 환자가 원하는 임상 종점에 도달할 때까지 필요에 따라 조정될 수 있다. 투여된 용량은 본 발명에 설명된 것들과 유사할 수 있다.

방법 B. 조합 치료법: 신경보호 조성물과 다른 치료제

파킨슨병, 또는 그것의 증상의 치료를 위해 하나 이상의 다른 치료제와 조합하여 신경보호 조성물이 대상에 처방되고 투여되는 것을 제외하고는 상기 방법 A에 따른다. 다음에, 하나 이상의 다른 치료제는 신경보호 조성물 이전에, 이후에 또는 함께 투여될 수 있다. 하나 이상의 다른 치료제의 용량 상승(또는 저감)이 또한 행해질 수 있다. 적합한 하나 이상의 치료제는 카비도파와 레보도파의 조합, 라사길린, 프라미펙솔, 로핀롤, 아만타딘, 메만틴, 엔타카폰, 로티고틴, 벤즈트로핀, 셀레길린, 비페리덴, 카비도파와 레보도파와 엔타카폰의 조합, 트리헥실페니딜, 리바스티그민, 아포모르핀, 레보도파, 카비도파, 브로모크립틴, 벨라도나, 톨카폰, 또는 이들의 조합을 포함한다.

실시예 11

알츠하이머병에 대한 시험관내 분석에서 신경보호 조성물의 평가(tau4R 및 APP)

피질 추체 뉴런의 APP/Abeta-유도 변성에 대한 래트 뇌 슬라이스 모델에서 유전자총 트랜스펙션은 YFP와 같은 생체 마커를 도입하는 것 뿐만 아니라 뇌 슬라이스의 동일한 뉴런성 집단에 질환 유전자 구성물을 도입하기 위해 사용된다. 따라서, APP/Aβ 뇌 슬라이스 모델에 APP 동형과 함께 YFP를 공-트랜스펙션하며, 이것은 뇌 슬라이스 제조 및 트랜스펙션 후 3-4일의 경과에 걸쳐서 피질 추체 뉴런의 점진적 변성을 초래한다. 이 데이터는 신경보호 조성물이 APP-트랜스펙션된 뇌 슬라이스에 대해 농도-의존적 신경보호를 제공한다는 것을 증명한다.

실시예 12

뇌졸중 및 비-뇌졸중에 대한 시험관내 분석에서 신경보호 조성물의 평가

방법 A. 뇌졸중: 피질 뇌 슬라이스 및 OGD의 준비

PND 7마리의 Sprague-Dawley 래트 새끼로부터 신생피질 뇌 슬라이스를 준비했다. 대뇌피질을 절제하고 400μ 두께 슬라이스로 절단하고, 1μM MK-801과 함께 차가운 인공 뇌척수액을 함유하는 용기에 옮긴 후 평판했다; MK-801은 후속 과정에는 포함되지 않았다. 일시적 산소-글루코오스 박탈(OGD)을 사용하여 허혈성 손상을 의태하기 위해, 각 뇌의 한쪽 반구로부터 얻은 슬라이스를 글루코오스-무함유, N₂-버블 인공 뇌척수액에 O₂가 적은(0.5%) 환경에서 7.5분간 노출시켰다. 다음에, OGD 슬라이스를 니트로셀룰로오스 또는 Millicell(Millipore) 투과성 막 위에 반대쪽 반구로부터 얻은 대조군 슬라이스와 함께 나란히 평판했으며, 이것은 OGD가 없는 것을 제외하고는 동일하게 준비되었다. 평판 30분 후에, 뇌 슬라이스 쌍을 트랜스펙션하고 24-웰 플레이트로 옮기고, 가습 챔버에서 5% CO₂ 하에 37℃에서 인큐베이션했다. 각 실험에서, 5-6분의 산소-글루코오스 박탈(OGD)을 사용하여 24시간까지 건강한 피질 뉴런의 >50% 상실을 유도했다. 설정된 농도의 대조군 물질은 내부 양성 대조군으로 사용되었다. 다양한 농도의 조성물이 평가된다.

방법 B. 비-뇌졸중: 뇌 슬라이스 분석

조성물을 "비-뇌졸중" 뇌 슬라이스, 즉, 슬라이스되고 YFP로 트랜스펙션되었지만 OGD를 통한 추가의 외상은 겪지 않은 것에 대해 시험했다. 상기 개략된 실험 과정을 참조한다.

실시예 13

신경보호 조성물을 함유하는 제형의 제조

방법 A. Cremophor-기반 약물 송달 시스템

아래의 성분들을 나타낸 양으로 제공한다.

부형제를 병에 넣고 60℃에서 24시간 동안 New Brunswick Scientific C24KC 냉장 인큐베이터 쉐이커에서 진탕하여 균질성을 확보했다. 다음에, 샘플을 꺼내고 가용화를 육안 검사했다.

방법 B. GMO/Cremophor-기반 약물 송달 시스템

아래의 성분들을 나타낸 양으로 제공한다.

방법 A의 과정에 따른다.

방법 C. Labrasol-기반 약물 송달 시스템

아래의 성분들을 나타낸 양으로 제공한다.

방법 A의 과정에 따른다.

방법 D. 비타민 E-TPGS 기반 미셀 형성 시스템

아래의 성분들을 나타낸 양으로 제공한다.

방법 A의 과정에 따른다.

방법 E. 다중-성분 약물 송달 시스템

아래의 성분들을 나타낸 양으로 제공한다.

방법 A의 과정에 따른다.

실시예 14

장용 코팅 캡슐의 제조

단계 I: 액체-충전 캡슐의 제조

경질 젤라틴 캡슐(50개, 00 사이즈)이 실시예 13의 액체 조성물로 충전된다. 이들 캡슐에 제제 80mg을 충전한 다음 50% 에탄올/50% 물 용액으로 손으로 밀봉한다. 다음에, 캡슐을 나타낸 양으로 아래의 성분을 함유하는 22% 젤라틴 용액으로 손으로 밴딩한다.

젤라틴 용액을 충분히 혼합하고 1-2시간 동안 팽윤시켰다. 팽윤 기간 후 용액을 타이트하게 피복하고 55℃ 오븐에 넣고 액화시켰다. 전체 젤라틴 용액이 액체가 되면 밴딩을 수행한다. 포인티드 라운드 3/0 아티스트 브러시를 사용하여 젤라틴 용액을 캡슐 위에 도포한다. Shionogi에 의해 제공된 밴딩 키트를 사용한다. 밴딩 후, 캡슐을 12시간 동안 주변 온도에 방치하여 밴드를 경화시킨다.

단계 II: 액체-충전된 캡슐의 코팅

코팅 분산액을 아래 표에 기재된 성분들로부터 제조한다.

단계 I에 따라서 밴딩된 캡슐이 사용된다면, 분산액을 캡슐에 20.0mg/cm² 코팅 수준으로 적용한다. 아래의 조건을 사용하여 캡슐을 코팅한다.

* 스프레이 노즐은 노즐과 스프레이 경로가 입구 공기의 유로 아래에 있도록 설정되었다.

실시예 15

신경보호 조성물을 포함하는 정제의 제조

3 % 실로이드(Syloid) 244FP 및 97 % 미정질 셀룰로오스(MCC)의 초기 정제 혼합물을 혼합하였다. 이어서, 실시 예 3에 따라 제조된 기존의 배치 조성물을 습식 제립법(wet granulation)을 통해 실로이드/MCC 혼합물에 혼입시켰다. 이 혼합물은 아래 표에서 "초기 정제(tabletting) 혼합물"로 표시되어 있다. 추가적인 MMC가 압축률을 높이기 위해 추가-과립으로 첨가되었다. 초기 정제 혼합물에 대한 이러한 첨가는 "추가-과립(extragranular) 첨가"로 표시되어 있다. 추가-과립 첨가로부터의 결과적인 혼합물은 "최종 정제 혼합물"과 동일한 조성이었다.

실로이드 244FP는 그레이스 데이비슨(Grace Davison)에 의해 제조된 콜로이드 이산화 규소이다. 콜로이드 이산화 규소는 일반적으로 흡착제, 활택제(glidant) 및 정제 붕해제와 같은 여러 기능을 제공하는 데 사용된다. 실로이드 244FP는 오일에서 그 중량의 3 배를 흡착하는 능력 및 5.5 미크론 입자 크기 때문에 선택되었다.

본 발명에서 사용된 용어 "약" 또는 "대략"은 달리 명시되지 않는 한 명시된 값의 ±10%, ±5%, ±2.5% 또는 ±1%를 의미하는 것으로 해석된다. 본 발명에서 사용된 용어 "실질적으로"는 달리 명시되지 않는 한 "상당한 정도", "적어도 대부분", 70% 초과, 85% 초과, 90% 초과, 95% 초과, 98% 초과 또는 99% 초과를 의미하는 것으로 해석된다.

본 발명에서 범위가 명시되었을 때 그 범위는 그 안의 모든 수를 포함한다.

이상은 본 발명의 특정 실시예들에 대한 상세한 설명이다. 본 발명의 특정 실시예들은 예시의 목적으로 여기 설명되었지만, 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 다양한 변형이 이루어질 수 있다는 것이 인정될 것이다. 따라서, 본 발명은 첨부된 청구범위에 의해서만 제한된다. 본 발명에서 개시되고 청구된 모든 구체예는 본 개시에 비추어 과도한 실험없이 이루어지고 실행될 수 있다.

Claims

주된 약리학적 활성 성분으로서,
올레아놀산인 제 1 트리테르펜; 및
a) 우르솔 산 및 b) 베툴린산으로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 제 2 트리테르펜;을 포함하고,
상기 제 1 트리 테르펜 : 적어도 하나의 제 2 트리테르펜의 몰비는 약 9-12 : 약 0.33-5이고;
상기 제 1 트리테르펜 및 상기 적어도 하나의 제 2 트리테르펜은 각각의 경우에, 그 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그로부터 독립적으로 선택되는 신경보호 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 제 1 트리테르펜 : 상기 적어도 하나의 제 2 트리테르펜의 몰비는 9-12 : 약 0.33-5, 약 9-12 : 약 0.4-5, 약 9-12 : 약 0.5-5, 약 9-12 : 약 0.7-5, 약 9-12 : 약 0.9-5, 약 9-12 : 약 1-5, 약 9-12 : 약 0.33-4, 약 9-12 : 약 0.4- 4, 약 9-12 : 약 0.5-4, 약 9-12 : 약 0.7-4, 약 9-12 : 약 0.9-4, 약 9-12 : 약 1-4, 약 9-12 : 약 0.33- 3, 약 9-12 : 약 0.4-3, 약 9-12 : 약 0.5-3, 약 9-12 : 약 0.7-3, 약 9-12 : 약 0.9-3, 약 9-12 : 약 1-3, 약 9-12 : 약 0.33-2, 약 9-12 : 약 0.4-2, 약 9-12 : 약 0.5-2, 약 9-12 : 약 0.7-2, 약 9-12 : 약 0.9- 2, 약 9-12 : 약 1-2, 약 10-1 : 약 1-5, 약 10-1 : 약 1-3, 약 9-12 : 약 0.5-1.5, 약 9-11 : 약 0.5- 1.5, 약 9.5-10.5 : 약 0.75-1.25, 약 9.5-10.5 : 약 0.8-1.2, 또는 약 9.75-10.5 : 약 0.9-1.1인 신경보호 조성물.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
제 1 트리테르펜은 올레아놀산 또는 이의 염이고;
적어도 하나의 제 2 트리테르펜은 a) 우르솔 산 또는 이의 염; 및 b) 베툴 린산 또는 이의 염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 신경보호 조성물.
제 1 항에 있어서, 주된 약리학적 활성 성분으로서,
올레아놀산 또는 이의 염, 유도체 또는 프로드러그(OA);
우르솔 산 또는 이의 염, 유도체 또는 프로드러그(UA); 및
베툴린산 또는 이의 염, 유도체 또는 프로드러그(BA);를 포함하고,
OA : UA : BA의 몰비는 약 9-12 : 약 0.2-2.5 : 약 0.2-25인 신경보호 조성물.
제 16 항에 있어서, OA:UA:BA의 몰 비는 약 10 : 약 1 : 약 1, 약 9-11 : 약 0.5-1.5 : 약 0.5-1.5, 약 9.5-10.5 : 약 0.75-1.25 : 약 0.75-1.25, 약 9.5-10.5 : 약 0.8-1.2 : 약 0.8-1.2, 약 9.75-10.5 : 약 0.9-1.1 : 약 0.9-1.1, 약 9-12 : 약 0.15-2.5 : 약 0.15-2.5, 약 9-12 : 약 0.2-2.5 : 약 0.2-2.5, 약 9-12 : 약 0.25-2.5: 약 0.25-2.5, 약 9-12 : 약 0.35-2.5: 약 0.35-2.5, 약 9-12 : 약 0.45-2.5: 약 0.45-2.5, 약 9-12 : 약 0.5-2.5: 약 0.5-2.5, 약 9-12 : 약 0.16-2 : 약 0.16-2, 약 9-12 : 약 0.2-2 : 약 0.2-2, 약 9-12 : 약 0.25-2 : 약 0.25-2, 약 9-12 : 약 0.25-2 : 약 0.25-2, 약 9-12 : 약 0.45-2 : 약 0.45-2, 약 9-12 : 약 0.5-2 : 약 0.5-2, 약 9-12 : 약 0.16-1.5 : 약 0.16-1.5, 약 9-12 : 약 0.2-1.5 : 약 0.2-1.5, 약 9-12 : 약 0.25-1.5 : 약 0.25-1.5, 약 9-12 : 약 0.7-1.5 : 약 0.35-1.5, 약 9-12 : 약 0.45-1.5 : 약 0.45-1.5, 약 9-12 : 약 0.5-1.5 : 약 0.5-1.5, 약 9-12 : 약 0.16-1 : 약 0.16-1, 약 9-12 : 약 0.2-1 : 약 0.2-1, 약 9-12 : 약 0.25-1 : 약 0.25-1, 약 9-12 : 약 0.35-1 : 약 0.35-1, 약 9-12 : 약 0.45-1 : 약 0.45-1, 약 9-12 : 약 0.5-1 : 약 0.5-1, 약 10-1 : 약 0.5-2.5 : 약 0.5-2.5, 약 10-1 : 약 0.1-1.5 : 약 0.1-1.5, 약 9-12 : 약 0.25-0.75 : 약 0.25-0.75, 약 9.5-10.5 : 약 0.35-0.7 : 약 0.35-0.7, 약 9.5-10.5 : 약 0.4-0.6 : 약 0.4-0.6, 및 약 9.75-10.5 : 약 0.45-0.6 : 약 0.45-0.6인 신경보호 조성물.
제 4 항 또는 제 5 항에 있어서, 주된 약리학적 활성 성분으로서,
올레아놀산 또는 이의 염;
우르솔산 또는 이의 염; 및
베툴린산 또는 이의 염을 포함하는 신경보호 조성물.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 신경보호 조성물은 강심 배당체, 스테로이드 및 약리학적 활성 다당류를 배제하는 신경보호 조성물.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 다른 치료 유효 제제를 추가로 포함하는 신경 보호 조성물.
제 20 항에 있어서, 하나 이상의 다른 치료적으로 효과적인 제제는 BACE(베타-세크레타아제 1; 베타-부위 아밀로이드 전구체 단백질 절단 효소 1, 베타-부위 APP 절단 효소 1, 막-결합 아스파르틱 프로테아제 2, 메맙신-2, 아스파르틸 프로테아제 2, 및 ASP2) 억제제, AZD3293, 아세틸콜린에스테라아제 억제제, Namenda™(메만틴 HCl), Aricept™(도네페질), Razadyne™(갈란타민), Exelon™(리바스티그민), Cognex™(타크린), 항경련제, NMDA(n-메틸 d-아스파르테이트) 수용체 길항제, 나트륨 채널 차단제, 비타민 E, Baclofen(CoQ10의 유도체), Lamotrigine(항경련제), 레마세미드(저친화성 NMDA 길항제인 마취제), 릴루졸(Na 채널 차단제), Alteplase(혈전용해제), 레보도파, 카비도파, 아만타딘, COMT(카테콜 O-메틸 트랜스페라아제) 억제제, 톨카폰, 엔타카폰, 오피카폰, 도파민 효현제, 브로모크립틴, 페르골리드, 프라미펙솔, 로피니롤, 피리베딜, 카베르골린, 아포모르핀, 리수리드, MAO-B(모노아민 옥시다아제-B) 억제제(선택적 및 비-선택적 MAO-B 억제제), 항콜린제, 콜린에스테라아제 억제제, 이소카복사지드, 니알라미드, 페넬진, 하이드라카바진, 라사길린, 세레길린, 리네졸리드, 또는 이들의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항의 신경보호 조성물 및 적어도 하나의 약제학적 부형제를 포함하는 약제학적 제형.
신경학적 상태를 치료하기 위하여 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항의 신경보호 조성물 또는 제 10 항의 약제학적 제형 중 하나 이상을 필요로 하는 대상체에 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 신경학적 상태를 치료하는 방법.
제 11 항에 있어서,
대상체의 신경학적 상태가 알츠하이머병, 파킨슨병, 뇌졸중, 헌팅턴병, 타우병증, 및 아밀로이드 베타 전구체 단백질의 과도한 단백질 가수분해, 대상의 뉴런의 시냅스에 아밀로이드 베타 단백질의 축적, 대상의 뉴런의 시냅스에 아밀로이드 피브릴의 형성, 또는 대상의 뉴런의 시냅스에 아밀로이드 플라크의 형성과 관련된 병인을 갖는 상태인지 여부를 결정하는 단계;
일정 기간 동안 처방된 초기 투여 요법에 따라 대상체에게 초기 투여량의 신경보호 조성물을 투여하는 단계;
신경보호 조성물에 의한 치료에 대한 대상체의 임상적 반응 및/또는 치료적 반응의 적절성을 주기적으로 결정하는 단계; 및
대상체의 임상적 반응 및/또는 치료적 반응이 적절한 경우, 원하는 임상 종점에 도달 할 때까지 필요에 따라 신경보호 조성물로 치료를 계속하고; 또는
대상체의 임상적 반응 및/또는 치료적 반응이 초기 용량 및 초기 투여 요법에서 부적절한 경우, 대상체에서 원하는 임상적 반응 및/또는 치료적 반응이 달성 될 때까지 투여량을 증량 또는 감량하는 단계;
를 포함하는 방법.
제 12 항에 있어서, 상기 방법은 상기 신경학적 상태로 고통받을 위험이 있는 대상체 집단을 식별하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제 13 항에 있어서, 위험에 처한 대상체의 집단은 대상체의 연령, 신경학적 상태의 가족력, 신경학적 상태의 발생에 대한 유전적 소인, 대상체에서 ApoE4 유전자의 존재 및 발현, 여성 성별, 심혈관 질환(예 : 고혈압 및 높은 콜레스테롤 수치), 당뇨병(특히 타입 2 또는 성인 발병 형태), 다운 증후군, 머리 부상, 낮은 수준의 공 교육, 흡연, 과도한 알코올 소비 및/또는 약물 남용을 특징으로 하는 방법.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 신경보호 조성물은 연장된 기간에 걸쳐서 반복적으로 투여되며, 여기서 a) 반복적 기준은 매일 한번, 이틀에 한번, 하루 걸러 한번, 3일에 한번, 4일에 한번, 5일에 한번, 6일에 한번, 매주 한번, 2주에 한번, 한주 걸러 한번, 3주에 한번, 매달 한번, 2달에 한번, 매월 2번, 2달에 한번, 한달 걸러 한번, 분기마다 한번, 1년에 2번, 1년에 3번, 계절마다 한번, 1년에 2번 및/또는 1년에 한번이고; b) 연장된 기간은 1주 이상, 1개월 이상, 1분기 이상 및/또는 1년 이상이고; 및/또는 c) 유효 용량은 하루 1회 이상 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
대상에서 뇌졸중을 치료하는 시간-지연 방법으로서,
대상이 뇌졸중에 걸린 후 지연 기간 내에, 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 신경보호 조성물의 초기 투용량을 초기 투여 요법에 따라 투여하는 단계;
상기 신경보호 조성물을 사용한 치료에 대한 대상의 임상 반응 및/또는 치료 반응의 적합성을 결정하는 단계; 및
대상의 임상 반응 및/또는 치료 반응이 적절하다면, 원하는 임상 종점이 달성될 때까지 필요에 따라 상기 신경보호 조성물을 사용한 치료를 계속하는 단계; 또는
초기 용량 및 초기 투약 요법에서 대상의 임상 반응 및/또는 치료 반응이 부적절한하다면, 대상에서 원하는 임상 반응 및/또는 치료 반응이 달성될 때까지 투여량을 증량 또는 감량시키는 단계;
를 포함하는 방법.
제 16 항에 있어서, 상기 지연 기간은 10 시간 이하, 8 시간 이하, 6 시간 이하, 4 시간 이하, 3 시간 이하, 2 시간 이하, 1 시간 이하, 45 분 이하, 30 분 이하, 20 분 이하 또는 10 분 이하인 방법.
제 16 항 또는 제 17 항에 있어서, 대상의 임상 및/또는 치료 반응의 충분성을 결정하는 단계는 신체의 한쪽 편에서 얼굴, 팔 및/또는 다리의 약화, 신체의 한쪽 편에서 얼굴, 팔 및/또는 다리의 마비, 말하는 언어를 이해할 수 있는 능력의 상실, 말하거나 분명히 말할 수 있는 능력의 상실, 쓸 수 있는 능력의 상실, 현기증 및/또는 보행 불균형, 복시 및 일반적이지 않은 심한 두통의 평가에 의해 행해지는 것을 특징으로 하는 방법.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 하나 이상의 다른 치료 학적 유효제를 추가로 포함하는 방법.
주요 약리학적 활성제로서 적어도 2 개의 트리테르펜을 포함하는 신경보호 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상에서 신경학적 상태를 치료하는 방법에 있어서,
제 1 트리테르펜은 올레아놀산이고;
적어도 하나의 제 2 트리테르펜은 a) 우르솔 산 및 b) 베툴린산으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
제 1 트리테르펜 및 적어도 하나의 제 2 트리테르펜은 각각의 경우에 그 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그로부터 독립적으로 선택되고;
제 1 트리테르펜은 상기 적어도 하나의 제 2 트리테르펜에 비해 적어도 4 배 몰 과량으로 존재하는 방법.
제 20 항에 있어서, 올레아놀산, 우르솔산 및 베툴린 산이 존재하고, 올레아놀산은 각각의 우르솔산 및 베툴린산에 대해 개별적으로 4 배 몰 과량으로 존재하는 방법.
제 21 항에 있어서, 우르솔 산의 몰 함량이 베툴린산의 몰 함량에 근접하는 방법.
전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 신경보호 조성물은 강심 배당체, 스테로이드 및 약리학적 활성 다당류를 배제하는 발명.