KR20200083973A - 허혈을 치료하기 위한 점성 조성물 - Google Patents

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린 엘.에이치. 황
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엑셀 메드, 엘엘씨
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Abstract

코어 구성요소 및 매트릭스 구성요소를 포함하며, 여기에서 코어 구성요소는 혈전용해 약물을 포함하고 매트릭스 구성요소는 히알루로난 또는 그의 유도체를 포함하며, 매트릭스 구성요소의 점도는 10 mPa·s를 초과하는, 허혈성 조직을 치료하기 위한 약제학적 조성물.

Description

허혈을 치료하기 위한 점성 조성물
관련 출원과의 상호 참조
본 출원은 2017년 9월 1일자로 출원된 미국 가출원 제62/553,269호에 대한 우선권을 주장하며, 그의 내용은 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
허혈에서는 기관 또는 조직의 혈액 함량이 감소된다. 허혈은 전신성 빈혈의 국소적 소견 또는 국소적 혈액 순환 장애의 결과일 수 있다. 허혈의 유형은 하기를 포함한다: 1) 예를 들어, 혈관 내강의 협착 또는 폐색을 유발하는 종양, 조이는 붕대, 및 삼출로부터의 동맥 혈관 상의 압력에 의해 압박 허혈이 야기될 수 있다. 임상적으로, 장기적인 와상으로부터 형성된 치질 또는 궤양은 측혈관의 압박으로 인한 허혈에 의해 야기되는 조직 괴사의 경우이며, 이는 근육 손상을 유발할 수 있다. 2) 동맥 혈전증 또는 색전증으로부터의 폐쇄성 허혈은 혈관 폐색을 유발할 수 있으며, 이는, 예를 들어 사지 또는 심장으로의 혈액 공급의 차단을 유발한다. 3) 복부 기관 내로 다량의 혈액이 신속하게 유동하여 다른 기관 및 조직의 허혈을 유발함으로써 측부 사지 허혈이 야기될 수 있다.
하지의 말초 동맥 질환을 가진 환자는 주로 60 세를 초과하며, 환자의 약 1/2은 당뇨병을 가지고 있다. 현재, 허혈성 하지에 대한 혈관신생 치료(angiogenesis treatment)가 시판되고 있다. 예를 들어, AutoloGel 시스템은 환자의 자가 고농도 혈소판-풍부 플라스마(PRP)를 추출하고 상처 치유를 촉진하는 성장 인자 및 젤라틴성 물질을 형성하는 사이토카인을 첨가함으로써 제조된 상처 드레싱이다. 그러나, 이러한 치료가 단지 만성 상처를 치료하기 위해 사용되지만, 그들은 기저의 허혈을 치료할 수 없다. 혈관 폐색을 해소하기 위해서는 우회로 이식, 혈관확장, 및 혈관 스텐트의 설치와 같은 다른 치료가 필요하다.
허혈성 하지에 대한 다수의 연구는 혈관신생 치료제, 예컨대 혈관신생 신호전달과 관련된 사이토카인 또는 재조합 성장 인자, 예컨대 혈관신생을 자극하는 VEGF 및 FGF를 활발하게 개발하고 있다. 혈소판-유래 성장 인자(PDGF)는 발생 조직 또는 성체 조직에서 중간엽 세포 증식, 이동, 및 분화를 자극하는 것으로 확인되었으며, 환자의 골수로부터 내피-유래 세포의 방출을 촉진하여 혈관 증식을 달성하기 위해 사용된다. 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC)는 또한 혈관신생을 자극하는 혈관신생 신호전달에 직접 관련되는 물질에 의해 자극될 수 있다. 조직 플라스미노겐 활성화제(tPA) 및 HUVEC을 사용하는 치료는, 치료 효과를 달성하기 위해 골수로부터 혈관으로 이동하여 혈관 내피 회춘을 촉진하는 내피 전구 세포의 수를 증가시키기 위해 제공된다.
당뇨병에 의해 야기되는 고혈당증의 생리학적 병태는 내피 성장 인자의 분비를 감소시키며, 중증 혈관 질환의 경우에 이는 절단을 유발할 수 있다. 대부분의 현재의 치료 방법은 혈관신생 인자를 수반하며, 이는 임상적 사용 또는 의학적 효능에 있어서 다수의 난점에 직면한다. 오늘날, 허혈 조직을 재생시키기 위한, 그렇더라도 절단으로부터 사지를 구제하기 위한 효과적인 요법이 여전히 없다. 그러므로, 대부분의 환자에게 적합한 허혈 조직에 대한 치료 조성물의 개발은 해결해야 할 중요한 문제이다.
일 태양에서 본 명세서에는, 코어 구성요소 및 매트릭스 구성요소를 포함하며, 여기에서 코어 구성요소는 혈전용해 약물을 포함하고 매트릭스 구성요소는 히알루로난 또는 그의 유도체를 포함하며, 약제학적 조성물의 점도는 10 mPa·s를 초과하는, 허혈성 조직을 치료하기 위한 약제학적 조성물이 기재된다. 일부 실시 형태에서, 점도는 10 내지 10000 mPa·s이다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 1 mg/ml 내지 100 mg/ml의 히알루로난을 함유한다.
일부 실시 형태에서, 히알루로난의 평균 분자량은 100 kDa 내지 5000 kDa이다. 예를 들어, 히알루로난의 평균 분자량은 700 kDa 내지 2000 kDa일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물의 점도는 700 내지 2000 kDa의 평균 분자량을 가진 3 내지 10 mg/ml의 히알루로난의 점도 범위 이내이다. 일부 실시 형태에서, 점도는 1560 kDa의 평균 분자량을 가진 5 mg/ml의 히알루로난의 점도와 동일하다. 히알루로난의 평균 분자량은 700 내지 2000 kDa일 수 있고 히알루로난의 농도는 3 내지 10 mg/ml일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 히알루로난의 평균 분자량은 1560 kDa이고 히알루로난의 농도는 5 mg/ml이다.
일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물 내의 매트릭스 구성요소는 콜라겐, 세포외 매트릭스 인자, 단백질, 또는 다당류를 추가로 포함한다.
약제학적 조성물 내의 혈전용해 약물은 티클로피딘, 와파린(warfarin), 조직 플라스미노겐 활성화제, 에미나제, 레타바제, 스트렙타제, 조직 플라스미노겐 활성화제, 테넥테플라제, 아보키나제(abbokinase), 킨리틱(kinlytic), 유로키나제, 프로유로키나제, 아니소일레이트화 정제 스트렙토키나제 활성화제 복합체(APSAC: anisoylated purified streptokinase activator complex), 피브린, 및 플라스민으로 구성된 그룹 중에서 선택될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 혈관신생 화합물(예를 들어, 혈관 내피 성장 인자)을 추가로 포함한다.
다른 태양에서 본 명세서에는, 허혈성 조직을 치료하는 방법이 제공된다. 본 방법은 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물을 대상에서 허혈성 조직에 직접 투여하는 단계(단, 약제학적 조성물은 정맥내 투여되지 않음)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 허혈성 조직은 궤양이거나, 대상에서 심장 또는 사지에 있다. 허혈성 조직은 근육일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대상은 당뇨병을 가진다.
하나 이상의 실시 형태의 상세사항이 하기 첨부 도면 및 상세한 설명에 기술되어 있다. 실시 형태의 다른 특징, 목적, 및 이점은 상세한 설명 및 도면으로부터, 그리고 청구범위로부터 명백할 것이다.
소정의 점도를 가진 히알루로난 및 혈전용해 약물을 함유하는 약제학적 조성물이 허혈성 조직의 치료에 효과적임을 의외로 발견하였다.
약제학적 조성물
따라서, 본 명세서에는 허혈성 조직을 치료하기 위한 약제학적 조성물이 기재된다. 약제학적 조성물은 코어 구성요소 및 매트릭스 구성요소를 포함하며, 코어 구성요소는 혈전용해 약물을 포함하고 매트릭스 구성요소는 히알루로난 또는 그의 유도체를 포함한다. 약제학적 조성물의 점도는 10 mPa·s를 초과한다. 점도 측정을 위해 선택되는 파라미터(예를 들어, 스핀들(spindle) 및 회전 속도)에 따라, 조성물의 점도는 10 내지 10000 mPa·s(예를 들어, 10-100, 50-150, 100-200, 150-250, 250-500, 500-1000, 1000-1500, 1500-2000, 2000-2500, 2500-3000, 3000-3500, 3500-5000, 5000-6000, 6000-7000, 7000-8000, 8000-9000, 또는 9000-10000)의 범위일 수 있다.
약제학적 조성물의 점도는 700 내지 2000 kDa(예를 들어, 700, 800, 900, 1000, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 또는 2000)의 평균 분자량을 가진 3 내지 10 mg/ml(예를 들어, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 또는 10 mg/ml)의 히알루로난의 점도 범위 내에 들어갈 수 있다. 하기 표 2 내지 5를 참조한다. 일부 실시 형태에서, 조성물의 점도는 1560 kDa의 평균 분자량을 가진 5 mg/ml의 히알루로난의 점도와 동일하다. 예를 들어, 하기 기재된 데이터는 4 mg/ml의 2000 kDa 히알루로난, 5 mg/ml의 1,560 kDa 히알루로난, 및 6.5 mg/ml의 700 kDa 히알루로난의 점도가 대략 동일함을 나타낸다.
약제학적 조성물 내의 히알루로난의 분자량은 4 kDa 내지 5000 kDa의 범위일 수 있다(예를 들어, 4 내지 20, 20 내지 100, 100 내지 500, 500 내지 1000, 1000 내지 2000, 2000 내지 2500, 2500 내지 5000, 5, 10, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 750, 1000, 1500, 1800, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 또는 5000 kDa). 약제학적 조성물 내의 히알루로난의 농도는 1 내지 100 mg/ml일 수 있다(예를 들어, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100 mg/ml). 특히, 평균 분자량이 700 내지 2000 kDa인 히알루로난을 사용하는 경우에 약제학적 조성물 내의 히알루로난의 농도는 3 내지 10 mg/ml일 수 있다(예를 들어, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 또는 10 mg/ml). 당업자는 목적하는 점도를 가진 조성물을 달성하기 위해 분자량과 농도의 적절한 조합을 선택할 수 있을 것이다. 당업자는 또한 당업계에 알려진 방법 및 구매가능한 기기를 사용하여 조성물의 점도를 결정할 수 있을 것이다.
용어 "히알루로난"은 N-아세틸글루코사민 및 D-글루쿠론산의 반복되는 이당류 단위를 포함하는 천연-발생 음이온성 비-설페이트화 글리코사미노글리칸, 및 그의 유도체를 지칭한다. 천연-발생 히알루로난(히알루론산 또는 히알루로네이트로도 알려짐)은 그의 천연 공급원, 예를 들어, 스트렙토코키(Streptococci)의 캡슐, 닭 벼슬, 연골, 관절 활액, 제대, 피부 조직, 및 눈의 유리체로부터 관용적인 방법을 통해 단리할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Guillermo Lago et al. Carbohydrate Polymers 62(4): 321-326, 2005]; 및 문헌[Ichika　Amagai et al. Fisheries Science 75(3): 805-810, 2009]을 참조한다. 대안적으로, 그것은 상업적 공급사, 예를 들어, Genzyme Corporation, Lifecore Biomedical, LLC, 및 Hyaluron Contract Manufacturing으로부터 구매할 수 있다. 천연-발생 히알루로난의 유도체는 히알루로난 에스테르, 아디픽 디하이드라지드-변형 히알루로난, 히알루로난 아미드 산물, 가교결합된 히알루론산, 석신산의 헤미에스테르 또는 그의 중금속 염 히알루론산, 히알루론산의 부분 또는 전체 에스테르, 설페이트화 히알루론산, N-설페이트화 히알루론산, 및 아민 또는 디아민 변형 히알루론산을 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 그의 기능기(예를 들어, 카르복실산 기, 하이드록실 기, 환원성 말단 기, N-아세틸 기) 중 하나 이상을 화학적으로 변형시킴으로써 그들을 얻을 수 있다. 카르복실 기는 에스테르화 또는 카르보디이미드 및 비스하이드라지드에 의해 매개되는 반응을 통해 변형될 수 있다. 하이드록실 기의 변형은 설페이트화, 에스테르화, 이소우레아 커플링, 시아노겐 브로마이드 활성화, 및 퍼요오데이트 산화를 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 환원성 말단 기는 환원성 아민화에 의해 변형될 수 있다. 이는 또한 인지질, 염료(예를 들어, 형광단 또는 발색단), 또는 친화도 매트릭스의 제조에 적합한 제제에 연결될 수 있다. 천연-발생 히알루로난의 유도체는 또한 가교결합제(예를 들어, 비스에폭사이드, 디비닐설폰, 비스카르보디이미드, 작은 동종이기능성 링커, 포름알데히드, 사이클로헥실 이소시아나이드, 및 리신 에틸 에스테르, 금속 양이온, 하이드라자이드, 또는 그의 혼합물)를 사용하거나 내부 에스테르화, 광-가교결합, 또는 표면 플라스마 처리를 통한 가교결합에 의해 얻어질 수 있다. 히알루로난 용액을 제조하기 위해, 히알루로난을 포스페이트 완충 용액(예를 들어, ≤ 0.05 M, pH 7±1) 및/또는 NaCl(예를 들어, ≤ 0.9%)에 용해시킬 수 있다.
조성물의 점도가 목적하는 범위 이내에 유지되는 한, 매트릭스 구성요소는 하나 이상의 다른 매트릭스 분자를 함유할 수 있다. 매트릭스 분자는 젤라틴, 콜라겐, 히알루로난, 피브로넥틴, 엘라스틴, 테나신, 라미닌, 비트로넥틴, 폴리펩티드, 헤파란 설페이트, 콘드로이틴, 콘드로이틴 설페이트, 케라탄, 케라탄 설페이트, 데르마탄 설페이트, 카라기난, 헤파린, 키틴, 키토산, 알기네이트, 아가로스, 아가, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 카르복실 메틸 셀룰로스, 글리코겐, 및 그의 유도체를 포함할 수 있다. 부가적으로, 매트릭스 구성요소는 피브린, 피브리노겐, 트롬빈, 폴리글루탐산, 합성 중합체(예를 들어, 아크릴레이트, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 또는 폴리(락트-코-글리콜산), 또는 가교결합제(예를 들어, 제니핀, 글루타르알데히드, 포름알데히드, 또는 에폭사이드)를 포함할 수 있다.
혈전용해 약물은 티클로피딘, 와파린, 조직 플라스미노겐 활성화제(t-PA), 에미나제(아니스트레플라제), 레타바제(레테플라제), 스트렙타제(스트렙토키나제, 카비키나제), 액티바제, 테넥테플라제(TNKase), 아보키나제, 킨리틱(rokinase), 유로키나제, 프로유로키나제, 아니소일레이트화 플라스미노겐 스트렙토키나제 활성화제 복합체(APSAC), 피브린, 플라스민일 수 있다. 약제학적 조성물은 하나 이상의 혈전용해 약물을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 혈전용해 약물을 권장되는 임상적 투여량과 유사하거나 그보다 더 낮은 투여량으로 함유할 수 있다.
약제학적 조성물은 혈관 내피 성장 인자(VEGF)와 같은 혈관신생 화합물을 추가로 포함할 수 있다.
치료 방법
유효량의 약제학적 조성물을 환자에게 투여하여 허혈성 조직을 치료할 수 있다. 그것은 허혈성 조직(예를 들어, 근육)에 직접, 또는 그 부근에 투여될 수 있다(예를 들어, 주사되거나 적용됨). 주도에 있어서 젤라틴성이거나 점성인 조성물은 정맥내 투여되지 않는다.
적합한 치료 기간, 예를 들어, 1 내지 4 주, 1 내지 12 개월, 또는 1 내지 3 년 동안, 예를 들어, 매일 1 내지 5회, 주당 1 내지 5회, 월당 1 내지 5회, 필요에 따라 조성물을 대상에게 투여할 수 있다. 허혈 또는 허혈성 손상이 발생한 후에 가급적 빨리(예를 들어, 0 내지 48 시간 또는 1-7 일 이내) 그것을 투여하는 것이 바람직하다.
투여되는 약제학적 조성물의 양은 치료 화합물, 예를 들어, 혈전용해 약물의 유효 용량을 제공하기에 충분해야 한다. 유효 용량은 혈전용해 약물의 효능에 따라, 예를 들어 대상의 체중 그램당 0.00001 내지 10 ㎍(예를 들어, 0.00001 내지 0.001, 0.001 내지 0.005, 0.005 내지 0.01, 0.05 내지 0.1, 0.1 내지 0.5, 0.5 내지 1, 0.00001, 0.0001, 0.0005, 0.001, 0.005, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 ㎍)일 수 있다.
"치료"는 장애, 장애의 증상, 장애에 부차적인 질환 상태, 또는 장애에 대한 질병소질을 치료하거나, 경감시키거나, 완화하거나, 구제하거나, 그의 발병을 지연시키거나, 예방하거나, 개선하는 목적으로 장애를 앓고 있거나 장애가 발생할 위험이 있는 대상에게 약제학적 조성물을 투여하는 것을 지칭한다. "유효량"은 치료하는 대상에서 의학적으로 바람직한 결과를 생성할 수 있는 조성물의 양을 지칭한다. 치료 방법은 단독으로, 또는 다른 약물 또는 요법과 함께 수행될 수 있다. 치료할 대상은 인간 또는 실험 동물 또는 가축일 수 있다.
하기 특이적 예는 단지 예시적일 뿐이고, 어떠한 임의의 방식으로도 본 개시의 나머지를 제한하지 않는 것으로 해석되어야 한다. 추가의 상술 없이, 당업자는 본 명세서의 상세한 설명에 기초하여 본 개시를 충분히 이용할 수 있다고 생각된다. 본 명세서에 인용된 모든 간행물은 원용에 의해 전체적으로 본 명세서에 포함된다.
도 1은 VEGF를 함유하는 약제학적 조성물로 치료한 하지 허혈을 가진 당뇨병 마우스의 외관 점수를 나타내는 막대 그래프이다.
도 2는 VEGF를 함유하는 약제학적 조성물로 치료한 하지 허혈을 가진 당뇨병 마우스의 혈류를 나타내는 막대 그래프이다.
도 3은 티클로피딘을 함유하는 약제학적 조성물로 치료한 하지 허혈을 가진 당뇨병 마우스의 외관 점수를 나타내는 막대 그래프이다.
도 4는 티클로피딘을 함유하는 약제학적 조성물로 치료한 하지 허혈을 가진 당뇨병 마우스의 혈류를 나타내는 막대 그래프이다.
도 5는 와파린을 함유하는 약제학적 조성물로 치료한 하지 허혈을 가진 당뇨병 마우스의 외관 점수를 나타내는 막대 그래프이다.
도 6은 와파린을 함유하는 약제학적 조성물로 치료한 하지 허혈을 가진 당뇨병 마우스의 혈류를 나타내는 막대 그래프이다.
도 7은 와파린을 함유하는 약제학적 조성물로 치료한 하지 허혈을 가진 당뇨병 마우스의 혈류를 나타내는 그래프이다.
도 8은 와파린을 함유하는 약제학적 조성물로 치료한 하지 허혈을 가진 당뇨병 마우스의 기능적 분석을 나타내는 그래프의 세트이다.
도 9는 와파린을 함유하는 약제학적 조성물로 치료한 하지 허혈을 가진 당뇨병 마우스의, 허혈이 생성된 후 상이한 시점에서의 외관 점수를 나타내는 그래프이다.
도 10은 상이한 분자량의 히알루로난 및 와파린을 함유하는 약제학적 조성물로 치료한 하지 허혈을 가진 당뇨병 마우스의 외관 점수를 나타내는 그래프이다.
도 11은 상이한 분자량의 히알루로난 및 와파린을 함유하는 약제학적 조성물로 치료한 하지 허혈을 가진 당뇨병 마우스의 혈류를 나타내는 그래프이다.
도 12는 유사한 점도의 히알루로난 및 와파린을 함유하는 약제학적 조성물로 치료한 하지 허혈을 가진 당뇨병 마우스의 외관 점수를 나타내는 그래프이다.
실시예 1: 당뇨병 하지 허혈 마우스 모델
C57BL/6 웅성 마우스(male mouse)는 국립 성공 대학교(NCKU: National Cheng Kung University) 실험 동물 센터 또는 BioLASCO Taiwan Co., Ltd로부터 공급되었다. 실험을 수행하기 전에 그들을 환경에 적응시키기 위해 적어도 1 주 동안 NCKU 생명과학 연구소의 동물 시설에서 그들을 사육하였다. 수행된 모든 실험은 NCKU에서 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC: Institutional　Animal　Care and Use Committees)에 의해 사전-승인되었다.
하지 허혈에 대한 요법 치료를 연구하기 위해 이 실험 동물 모델을 확립하였다. 고령의 특징 및 치유가 느린 창상 당뇨병 조직(slow-to-heal wounded diabetic tissues)을 나타내기 위해 월령 6 개월 이상의 마우스를 50 mg/kg 체중의 스트렙토조토신(STZ) 용액으로 처리하여 I형 당뇨병을 유도하였다. 마우스에서 낮은 혈당 수준은 결과를 방해할 것이므로 혈당 수준이 400 mg/dl 내지 550 mg/dl의 범위 이내인 마우스를 실험에 사용하였으며, 생명을 위협하는 높은 혈당 수준을 피하기 위해 소량의 인슐린을 마우스에 적용할 수 있었다. 자가-재생 신혈관형성의 가능성을 피하기 위해, 마우스의 하지에서 대퇴 동맥 및 그의 말초 혈관을 절단하였다. 모델은 혈관 재생의 가능성을 최소화하였으며, 이는 시험 약물의 혈관신생 능력의 더 정확한 평가를 가능하게 했다.
하지 허혈을 유도하기 위해, 분당 가스 리터당 1-3% 이소플루란을 함유한 통풍 가스가 있는 가스 마취 박스에 제모한 당뇨병 마우스를 넣었다. 마우스가 의식을 잃은 후에, 그것을 수술대로 옮기고 가스 마취 하에 유지하였다. 통기성 테이프를 사용하여 사지를 고정한 후에, 37 ℃ 가열 패드로 마우스의 체온을 일정하게 유지하였다. 마우스의 하복부 및 사지를 소독한 후, 좌측 발목에서의 작은 개구로부터 대퇴부까지 사지의 피부를 절개하였다. 마우스 종아리 근육의 배면 상의 2개의 측혈관의 양측 말단을 수술용 봉합사로 결찰하고, 혈관을 제거하여 배혈관의 혈류를 차단하였다. 이어서, 복측 대퇴 동맥의 분지 및 주혈관을 차단하였다. 발목 부근의 동맥의 말단 및 그의 주변 혈관을 수술용 봉합사로 결찰하여 대퇴 동맥 및 말초 혈류가 완전히 차단되는 것을 보장하였다.
혈관을 삭제(truncationg)한 후, 허혈에 대한 그의 치료 효과에 대해 시험할 약제학적 조성물을 조직 상에 직접 적용하거나 8개의 부위에서 비복근 내로 주사하고, 수술 개구를 봉합하였다. 마우스에 1 mg/kg 체중의 케토롤락 진통제 및 리도카인-HCl 국소 마취제를 피하 주사하고, 또한 1 ml의 식염수 용액을 투여하여 통증을 완화하고 수분을 보충하였다. 필요할 때마다, 글루코스 용액을 투여하여 체력을 유지하였다.
수술후 제0일, 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일, 제7일, 제14일, 제21일, 및 제28일에, 표 1에 나타낸 점수 시스템 및 레이저 도플러 혈류측정법을 각각 사용하여 마우스에서 하지의 분명한 외관 및 혈류를 평가하였다. 수술후 치료하지 않은 우측 하지의 혈류 신호에 대한 좌측 하지의 혈류 신호의 비로서 ROI를 계산하였으며, 백분율 단위의 비를 수술 전에 얻은 혈류 신호에 기초하여 정규화하였다.
당뇨병 마우스의 하지 허혈 외관 점수.
점수 병태/외관 점수 병태/외관
0 대퇴부 절단 8 1개 발가락 절단
1 대퇴부 괴사 9 다중 발가락 괴사
2 종아리 절단 10 1개 발가락 괴사
3 종아리 괴사 11 다중 발가락 흑화(blackened toe)
4 발목 관절 괴사 12 1개 발가락 흑화
5 발톱 절단 13 다중 발톱 흑화/파손
6 발톱 괴사 14 1개 발톱 흑화/파손
7 다중 발가락 절단 15 정상
실시예 2: 히알루로난 점도 시험
다양한 분자량을 가진 상이한 농도의 히알루로난을 함유하는 조성물을 제조하였다.
DV2TRV 점도계(미국 소재의 Brookfield)를 사용하여 매뉴얼에 따라 약제학적 조성물의 점도를 시험하였다. 점도에 따라 적절한 스핀들(CPE40 또는 CPE52)을 선택하였다. 시험 전에, 기계를 보정하고 1 분 동안 25 ℃에서 20 rpm으로 실행되도록 설정하였다. 점도 피펫(viscosity pipette)으로 각각의 샘플 500 ㎕를 샘플 플레이트에 이전하고 실행 버튼을 눌러 샘플의 점도 결정을 시작하였다. 평균 분자량이 1,560 kDa, 700 kDa, 및 2,000 kDa인 히알루로난의 5 mg/ml에서의 점도를 결정하였으며, 결과는 표 2에 나타낸다. 평균 분자량이 1,560 kDa인 5 mg/ml의 히알루로난의 점도를 기준으로 사용하였고, 평균 분자량이 700 kDa 및 2,000 kDa인 다양한 농도의 히알루로난의 점도를 표 3 및 4에 나타낸 바와 같이 측정하였다. 이어서, 기준 점도의 것에 근접한 점도에서의 평균 분자량이 700 kDa 및 2,000 kDa인 히알루로난의 농도를 계산하고 각각 6.5 및 4 mg/ml로 조정하였다.
표 5에 나타낸 바와 같이, 측정 파라미터가 변화한 경우에 농도 및 분자량 범위가 동일한 히알루로난의 점도가 변화했음이 분명했다.
상이한 분자량을 가진 5 mg/ml의 히알루로난의 점도
5 mg/ml의 히알루로난
(20 rpm)		 히알루로난의 평균 분자량
2000 kDa 1560 kDa 700 kDa
점도(mPa·s) 137.30 86.33 41.20
토크(%) 84 52.8 25.2
전단 응력(다인/cm2) 206.0 129.5 61.8
전단율(1/s) 150.0
평균 분자량이 700 kDa인 히알루로난의 상이한 농도에서의 점도
~700 kDa의 히알루로난
(20 rpm)		 히알루로난의 농도
5 mg/ml 6 mg/ml 7 mg/ml 8 mg/ml
점도(mPa·s) 41.20 66.87 106.3 138.8
토크(%) 25.2 40.9 65.0 84.9
전단 응력(다인/cm2) 61.8 100.3 159.4 208.2
전단율(1/s) 150.0
평균 분자량이 2000 kDa인 히알루로난의 상이한 농도에서의 점도
~2000 kDa의 히알루로난(20 rpm) 히알루로난의 농도
1 mg/ml 2 mg/ml 3 mg/ml 4 mg/ml 5 mg/ml
점도(mPa·s) 7.36 20.27 52.16 87.15 137.3
토크(%) 4.5 12.4 31.9 53.3 84
전단 응력(다인/cm2) 11.04 30.41 78.23 130.7 206.0
전단율(1/s) 150.0
평균 분자량이 1~1.8 MDa인 히알루로난의 상이한 농도에서의 점도
히알루로난의 점도
(mPa·s)		 히알루로난의 농도(mg/ml)
1 2 3 4 5 6 7
50 rpm 16.6 42.0 61.7 89.6 121.1 - -
Y=25.66X-10.77, R2=0.9935
10 rpm 47.1 82.4 151.7 302.8 427.7 564.4 -
Y=130.8X-222.37, R2=0.9993
2 rpm 127.5 189.7 349.9 977.7 1436 1995 2596
Y=541.39X-1226.5, R2=0.9964
실시예 3: 혈관 내피 성장 인자(VEGF)를 함유하는 약제학적 조성물
평균 분자량이 1,560 kDa인 5 mg/ml의 히알루로난 및 VEGF를 함유하는 조성물(DIV)을 마우스에 투여하고 하지 및 혈류에 대한 그들의 효과를 상기 실시예 1에 기재된 바와 같이 평가하였다. 수술 후에 조성물로 치료하지 않은 당뇨병 마우스를 대조군으로 사용하였다. VEGF 약물은 혈관신생 효과를 가지는 것으로 문헌에 기재되어 있다. 인간에서의 VEGF의 최대 및 최소 유효 용량을 체중에 따라 마우스에 대한 용량으로 전환하였다.
외관 점수는 도 1에 나타낸다. 100 ㎕의 DIV를 투여하는 것은 마우스에게 3.125 ng/g 체중의 VEGF를 제공하는 것에 해당하였다. 3.125 ng/g의 VEGF(DIV2)를 마우스에게 투여하는 것은 대조군과 비교하여 더 높은 외관 점수를 유발하였다. VEGF의 용량을 0.3 ng/g으로 낮춘 경우(DIV1), 외관 점수가 대조군의 것들보다 더 낮았음이 관찰되었다. VEGF의 용량을 15 ng/g으로 증가시킨 경우(DIV3), 하지의 허혈 및 괴저가 악화되었음이 관찰되었다.
혈류 측정의 결과는 도 2에 나타낸다. 대조군과 비교하여, 3.125 ng/g의 VEGF만이 수술후 제14일 이후에 혈류를 유의적으로 증가시켰다. 결과는 0.3 ng/g 내지 15 ng/g의 특이적 용량에서만 VEGF가 효과적이었음을 나타냈다.
실시예 4: 티클로피딘을 함유하는 약제학적 조성물
분자량 범위가 1000 내지 1800 kDa인 5 mg/ml의 히알루로난 및 티클로피딘을 함유하는 조성물(DIT)을 마우스에 투여하고 하지 및 혈류에 대한 그들의 효과를 상기 실시예 1에 기재된 바와 같이 평가하였다. 수술 후에 조성물로 치료하지 않은 당뇨병 마우스를 대조군으로 사용하였다. 인간에서의 티클로피딘의 최대 및 최소 유효 용량을 체중에 따라 마우스에 대한 용량으로 전환하였다.
수술후 외관 점수는 도 3에 나타낸다. 100 ㎕의 DIT를 투여하는 것은 마우스에게 0.7 ㎍/g 체중의 티클로피딘(DIT2)을 제공하는 것에 해당하였다. 그 용량에서, 제2일 내지 제28일의 외관 점수는 대조군에서의 것들과 유의적으로 상이하였다(P < 0.05). 외관 점수는 또한 0.07 ㎍/g의 티클로피딘(DIT1)을 투여한 경우에 대조군에서의 것들과 유의적으로 상이하였다.
그러나, 용량을 7 ㎍/g 체중(DIT3) 또는 110 ㎍/g 체중(DIT4)으로 증가시킨 경우, 관찰 기간 중에 외관 점수는 대조군의 것들과 유의적으로 상이하지 않았다. 결과는 또한, 티클로피딘이 더 낮은 용량에서 허혈에 의해 야기된 괴저를 효과적으로 경감시킬 수 있었으나 용량이 소정의 역치 미만인 경우에는 효과가 감소되었음을 나타냈다.
혈류 측정의 결과는 도 4에 나타낸다. 결과는 0.07 ㎍/g(DIT1) 및 0.7 ㎍/g(DIT2) 체중의 티클로피딘에서, 수술후 제7일부터 허혈성 하지에서의 혈류 신호가 대조군에 비교하여 유의적으로 증가했음을 나타냈다(P < 0.05). 그러나, 더 높은 용량(DIT3 및 DIT4)에서는, 대조군에 비교하여 혈류의 유의적인 차이가 없었다.
실시예 5: 와파린을 함유하는 약제학적 조성물
평균 분자량이 1,560 kDa인 5 mg/ml의 히알루로난 및 와파린을 함유하는 조성물(DIW)을 마우스에 투여하고 하지 및 혈류에 대한 그들의 효과를 상기 실시예 1에 기재된 바와 같이 평가하였다. 수술 후에 조성물로 치료하지 않은 당뇨병 마우스를 대조군으로 사용하였다. 인간에서의 와파린의 최대 및 최소 유효 용량을 체중에 따라 마우스에 대한 용량으로 전환하였다.
수술후 외관 점수는 도 5에 나타낸다. 100 ㎕의 DIW를 투여하는 것은 마우스에게 70 ng/g 체중의 와파린을 제공하는 것에 해당하였다. 이 용량(DIW2)에서, 제2일 내지 제28일의 외관 점수는 대조군에서의 것들과 가장 유의적으로 상이하였다(P < 0.05). 부가적으로, 용량을 140 ng/g 체중(DIW4)으로 2배 증가시킨 경우, 제5일 내지 제28일의 외관 점수 또한 대조군에서의 것들과 가장 유의적으로 상이하였다(P < 0.001-0.05). 반면에, 용량을 210 ng/g 체중(DIW5)으로 3배 만큼 증가시킨 경우, 외관 점수는 대조군의 것들과 유의적으로 상이하지 않았다. 결과는 DIW의 최적 용량이 70 ng/g 체중의 와파린임을 시사했으며, 이는 하지의 외관 온전성을 유지했고 허혈성 곤란(ischemic distress)의 경우에 조직 괴저를 방지했다.
혈류 측정의 결과는 도 6에 나타낸다. 결과는 와파린의 용량이 70 ng/g 체중(DIW2)인 경우에, 수술 후 제7일부터 시작하여 하지의 혈류 신호가 대조군의 것들과 유의적으로 상이했음을 나타냈다. 용량이 35 ng/g(DIW1), 105 ng/g(DIW3), 140 ng/g(DIW4), 또는 210 ng/g(DIW5)인 경우에, 수술후 제14일부터 시작하여 하지 혈류 신호가 대조군의 것들과 유의적으로 상이했다. 그러나, 210 ng/g의 와파린에서는, 수술후 제28일에 대조군과 비교하여 유의적인 차이가 없었다.
DIV(실시예 3), DIT(실시예 4), 및 DIW로 얻어진 결과를 비교하면, 70 ng/g 체중의 와파린(DIW2)에서의 DIW 투여가 가장 효과적인 것으로 보였다. DIW2 군에서는 수술후 관찰 기간 중에 하지의 발톱의 원위 말단만이 경미하게 흑화된 것으로 관찰되었다. 반면에, 대조군에서는 수술 후 제3일에 좌측 하지가 흑화 외관을 가진다. 또한, 수술후 제7일에 일부 조직 탈락을 관찰할 수 있었으며, 수술후 제14일에는 하지의 괴저를 관찰할 수 있었다. 따라서, 허혈에 의해 야기된 괴저의 외관이 DIW2의 투여에 의해 유의적으로 경감될 수 있었다.
부가적으로, 레이저 도플러에 의해 검출되는 혈류 신호의 분포는 DIW2 군에서의 혈류 신호가 수술후 제14일 후에 점진적으로 증가했음을 나타냈다. 역으로, 대조군에서는 혈류 신호의 증가가 관찰되지 않았다. 부가적으로, 하지의 괴저로 인해, 레이저 도플러 영상화기가 대조군에서는 하지의 혈류를 검출할 수 없었다. 결과는 하지에서 괴저의 외관이 대조군에 비교하여 DIW2 군에서 유의적으로 감소되었음을 추가로 나타냈다.
대조군 및 DIW2 군에서 수술 후 하지에서의 혈류 변화의 추가의 분석을 산소농도계를 사용하여 실행하였다. 도 7에 나타낸 바와 같이, 대조군 및 DIW2 군에서 하지에서의 혈류는 수술 직후에 감소하기 시작했다. DIW2 군은 수술후 제7일에 혈류를 회복하기 시작했고, 관찰 기간 중에 혈류가 약 100-200 AU에 도달했다. 대조군은 28-일 관찰 기간 중에 임의의 혈류 회복을 나타내지 않았으며, 사실상 경미한 감소를 나타냈다.
실시예 6: 와파린을 함유하는 약제학적 조성물로 치료한 마우스의 기능적 평가
DIW2 군 및 대조군의 마우스를 기능적으로 추가로 평가하였다. 평가는 수술후 제35일에 수행하였다.
각각의 마우스를 플랫폼 위에 놓고 약 5 cm의 고정 높이로 꼬리를 당겨 그의 기립 파지 자세(standing grip pose)를 관찰하였다. 기립 자세에서 DIW2 군의 마우스는 여전히 정상 마우스 만큼 잘 파지할 수 없었음이 관찰되었다. 그럼에도 불구하고, DIW 군의 보폭 길이 및 동요 길이는 대조군의 것들과 비교하여 유의적으로 증가했고(P < 0.001) 정상 마우스의 것들과 유사하였음이 확인되었다. 도 8(A) 및 (B)를 참조한다. 결과는, DIW2 군의 마우스의 하지가 수술 후에 위축되기 시작함에 따라, 그들의 걸음이 완전히 정상으로 복귀할 수는 없었으나, 그들은 대조군에 비교하여 여전히 유의적으로 더 양호했음을 나타냈다.
부가적으로, 마우스를 런닝 트랙(running track) 상에 놓고 그들의 족적에 따라 그들의 걸음걸이를 분석하였다. 5 rpm에서 DIW2 군의 마우스 및 정상 마우스는 유사한 기간의 시간 동안 추락하지 않고 트랙 상에 머무를 수 있었던 반면에, 대조군의 마우스는 유의적으로 더 짧은 기간 후에 추락했음이 관찰되었다. 도 8(C)를 참조한다. 회전 속도를 10 rpm으로 증가시킨 경우, DIW2 군의 마우스는 정상 마우스보다 훨씬 더 일찍 추락했으나 대조군 마우스보다는 여전히 유의적으로 더 오래 머물렀음이 관찰되었다. 도 8(D)를 참조한다.
실시예 7: 치료 시기의 효과
실시예 1에 기재된 바와 같이 하지 허혈을 가진 당뇨병 마우스를 생성시켰다. 상기 기재된 DIW2 군의 마우스와 같이, 그러나 수술 후 상이한 시점에, 와파린 및 분자량 범위가 1000 내지 1800 kDa인 5 mg/ml의 히알루로난을 함유하는 조성물로 70 ng/g 체중의 와파린 용량으로 마우스를 치료하였다. 도 9에 나타낸 바와 같이, 수술 후에 치료가 지연된 경우에 하지 외관 점수가 지연의 길이에 의존적인 방식으로 감소하였음이 관찰되었다. 그럼에도 불구하고, 심지어 수술 후 48 시간 만큼 늦게 치료를 투여한 경우에도, 수술후 제28일에 외관 점수가 여전히 약 9 점이었으며, 이는 사지의 일부가 여전히 발가락만의 괴사로 유지되었음을 의미한다. 치료가 72 시간 동안 지연된 경우, 하지의 괴사를 구제할 수 없었다.
실시예 8: 치료 효능에 대한 상이한 분자량의 히알루로난의 효과
상이한 분자량의 히알루로난이 치료 효과에 영향을 미쳤는지 여부를 조사하였다.
와파린 및 상이한 평균 분자량, 즉, 74 kDa, 357 kDa, 700 kDa, 1560 kDa, 2000 kDa, 및 2590 kDa의 5 mg/ml의 히알루로난을 함유하는 조성물을 제조하였다. 하지 허혈을 가진 당뇨병 마우스에 70 ng/g 체중의 와파린 용량으로 조성물을 투여하고 실시예　1에 기재된 바와 같이 평가하였다.
도 10에 나타낸 바와 같이, 평균 분자량이 1,560 kDa인 히알루로난을 함유하는 조성물이 최상의 치료 효과를 나타냈다. 평균 분자량이 2,000 kDa으로 증가함에 따라, 외관 점수는 대조군의 것들보다 더 양호했으나, 1,560 kDa 히알루로난의 것들보다 더 낮았다. 부가적으로, 평균 분자량이 1,560 kDa 미만인 히알루로난은 외관 점수를 감소시키는 경향이 있었다. 수술 후 제28일에 357 kDa 및 74 kDa 군의 외관 점수는 대조군과 비교하여 악화되었다.
도 11에 나타낸 바와 같이, 수술후 제14일 후에 2,000 kDa 및 1,560 군의 혈류 신호는 대조군과 비교하여 유의적으로 증가하였다.
실시예 9: 치료 효능에 대한 점도의 효과
점도가 약제학적 조성물의 치료 효과에 영향을 미쳤는지 여부를 조사하였다.
4 mg/ml의 평균 2000 kDa의 히알루로난, 5 mg/ml의 평균 1,560 kDa의 히알루로난, 또는 6.5 mg/ml의 평균 700 kDa의 히알루로난을 각각 함유하는 조성물을 제조하였다. 3개 모두 유사한 점도를 가지도록 히알루로난의 농도를 선택하였다. 상기 표 2, 3, 및 4를 참조한다. 각각을 와파린과 혼합하여 젤라틴성 조성물을 제조하였다. 하지 허혈을 가진 당뇨병 마우스에 70 ng/g 체중의 와파린 용량으로 조성물을 투여하고 실시예 1에 기재된 바와 같이 평가하였다.
도 12에 나타낸 바와 같이, 상이한 분자량의 히알루로난을 함유하는 조성물로 치료한 마우스들 사이의 하지 외관 점수는 관찰 기간 중에 매우 상이하지 않았다. 따라서, 히알루로난의 점도가 그의 분자량보다 더 결정적인 것으로 보였다. 도 10 및 11에 나타낸 바와 같이, 5 mg/ml의 평균 1560 kDa 히알루로난 및 5 mg/ml의 평균 2000 kDa 히알루로난이 동일한 농도에서 더 높거나 더 낮은 분자량의 히알루로난보다 유의적으로 더 효과적이었음에 유의한다. 이들 결과 또한 소정의 범위의 점도가 최적임을 시사한다.
다른 실시 형태
본 명세서에 개시된 모든 특징은 임의의 조합으로 조합될 수 있다. 본 명세서에 개시된 각각의 특징은 동일하거나 등가이거나 유사한 목적을 제공하는 대안적인 특징에 의해 대체될 수 있다. 따라서, 명시적으로 달리 언급되지 않는 한, 각각의 개시된 특징은 등가이거나 유사한 특징의 포괄적인 시리즈의 예일 뿐이다.
상기 상세한 설명으로부터, 당업자는 기재된 실시 형태의 필수적 특징을 용이하게 확인할 수 있으며, 그의 사상 및 범위로부터 이탈하지 않으면서, 그것을 다양한 용법 및 조건에 대해 조정하기 위해 실시 형태의 다양한 변화 및 변형을 실행할 수 있다. 따라서, 다른 실시 형태 또한 청구범위 내에 있다.

Claims (32)

  1. 코어 구성요소 및 매트릭스 구성요소를 포함하는, 허혈성 조직을 치료하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기에서 코어 구성요소는 혈전용해 약물을 포함하고 매트릭스 구성요소는 히알루로난 또는 그의 유도체를 포함하며, 약제학적 조성물의 점도는 10 mPa·s를 초과하는 약제학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    점도가 10 내지 10000 mPa·s인 약제학적 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    히알루로난의 평균 분자량이 100 kDa 내지 5000 kDa인 약제학적 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    히알루로난의 평균 분자량이 700 kDa 내지 2000 kDa인 약제학적 조성물.
  5. 제3항에 있어서,
    1 mg/ml 내지 100 mg/ml의 히알루로난을 함유하는 약제학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    점도가, 700 내지 2000 kDa의 평균 분자량을 가진 3 내지 10 mg/ml의 히알루로난의 점도 범위 이내인 약제학적 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    점도가 1560 kDa의 평균 분자량을 가진 5 mg/ml의 히알루로난의 점도와 동일한 약제학적 조성물.
  8. 제6항에 있어서,
    히알루로난의 평균 분자량이 700 내지 2000 kDa이고 히알루로난의 농도가 3 내지 10 mg/ml인 약제학적 조성물.
  9. 제7항에 있어서,
    히알루로난의 평균 분자량이 1560 kDa이고 히알루로난의 농도가 5 mg/ml인 약제학적 조성물.
  10. 제1항에 있어서,
    매트릭스 구성요소가 콜라겐, 세포외 매트릭스 인자, 단백질, 또는 다당류를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    혈전용해 약물이 티클로피딘, 와파린, 조직 플라스미노겐 활성화제, 에미나제, 레타바제, 스트렙타제, 조직 플라스미노겐 활성화제, 테넥테플라제, 아보키나제(abbokinase), 킨리틱(kinlytic), 유로키나제, 프로유로키나제, 아니소일레이트화 정제 스트렙토키나제 활성화제 복합체(APSAC: anisoylated purified streptokinase activator complex), 피브린, 및 플라스민으로 구성된 그룹 중에서 선택되는 약제학적 조성물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    혈관신생 화합물을 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
  13. 제12항에 있어서,
    혈관신생 화합물이 혈관 내피 성장 인자(VEGF)인 약제학적 조성물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    허혈성 조직에 직접 투여되지만 정맥내 투여되지는 않는 약제학적 조성물.
  15. 제14항에 있어서,
    허혈성 조직이 궤양이거나, 대상에서 심장 또는 사지에 있는 약제학적 조성물.
  16. 제15항에 있어서,
    허혈성 조직이 근육인 약제학적 조성물.
  17. 약제학적 조성물을 허혈성 조직에 직접 투여하되, 단, 약제학적 조성물은 정맥내 투여하지 않는 단계를 포함하는, 대상에서 허혈성 조직을 치료하는 방법으로서,
    여기에서 약제학적 조성물은 코어 구성요소 및 매트릭스 구성요소를 함유하고, 코어 구성요소는 혈전용해 약물을 포함하고 매트릭스 구성요소는 히알루로난 또는 그의 유도체를 포함하며, 여기에서 약제학적 조성물의 점도는 10 mPa·s를 초과하는 방법.
  18. 제17항에 있어서,
    허혈성 조직이 궤양이거나, 대상에서 심장 또는 사지에 있는 방법.
  19. 제18항에 있어서,
    허혈성 조직이 근육인 방법.
  20. 제17항에 있어서,
    대상이 당뇨병을 가지는 방법.
  21. 제17항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    점도가 10 내지 10000 mPa·s인 방법.
  22. 제21항에 있어서,
    히알루로난의 평균 분자량이 100 kDa 내지 5000 kDa인 방법.
  23. 제22항에 있어서,
    히알루로난의 평균 분자량이 700 kDa 내지 2000 kDa인 방법.
  24. 제21항에 있어서,
    약제학적 조성물이 1 mg/ml 내지 100 mg/ml의 히알루로난을 함유하는 방법.
  25. 제21항에 있어서,
    점도가, 700 내지 2000 kDa의 평균 분자량을 가진 3 내지 10 mg/ml의 히알루로난의 점도 범위 이내인 방법.
  26. 제21항에 있어서,
    점도가, 1560 kDa의 평균 분자량을 가진 5 mg/ml의 히알루로난의 점도와 동일한 방법.
  27. 제25항에 있어서,
    히알루로난의 평균 분자량이 700 내지 2000 kDa이고 히알루로난의 농도가 3 내지 10 mg/ml인 방법.
  28. 제26항에 있어서,
    히알루로난의 평균 분자량이 1560 kDa이고 히알루로난의 농도가 5 mg/ml인 방법.
  29. 제17항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    매트릭스 구성요소가 콜라겐, 세포외 매트릭스 인자, 단백질, 또는 다당류를 추가로 포함하는 방법.
  30. 제17항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    혈전용해 약물이 티클로피딘, 와파린, 조직 플라스미노겐 활성화제, 에미나제, 레타바제, 스트렙타제, 조직 플라스미노겐 활성화제, 테넥테플라제, 아보키나제, 킨리틱, 유로키나제, 프로유로키나제, 아니소일레이트화 정제 스트렙토키나제 활성화제 복합체(APSAC), 피브린, 및 플라스민으로 구성된 그룹 중에서 선택되는 방법.
  31. 제17항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    혈관신생 화합물을 추가로 포함하는 방법.
  32. 제31항에 있어서,
    혈관신생 화합물이 혈관 내피 성장 인자(VEGF)인 방법.
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4201428A4 (en) * 2020-09-11 2024-09-11 Sumitomo Pharma Co., Ltd. MEDIUM FOR TISSUE INTENDED FOR TRANSPLANTATION

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3449738B2 (ja) * 1991-07-10 2003-09-22 武田薬品工業株式会社 水溶性組成物
CA2130762C (en) * 1994-08-24 1999-07-06 Eva Anne Turley Treatment of disease and conditions associated with macrophage infiltration
US5820879A (en) * 1993-02-12 1998-10-13 Access Pharmaceuticals, Inc. Method of delivering a lipid-coated condensed-phase microparticle composition
AU5624500A (en) * 1999-06-18 2001-01-09 Collaborative Group, Ltd., The Hyaluronic acid microspheres for sustained gene transfer
US20040191225A1 (en) * 2002-08-06 2004-09-30 Dinsmore Jonathan H. Injection system
US20140287004A1 (en) * 2005-11-14 2014-09-25 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Use of an Omega-3 Lipid-Based Emulsion Following Ischemic Injury to Provide Protection and Recovery in Human Organs
US20070149617A1 (en) * 2005-11-14 2007-06-28 Deckelbaum Richard J Use of an omega-3 lipid-based emulsion following ischemic injury to provide protection and recovery in human organs
FR2962040B3 (fr) * 2010-07-05 2012-08-10 Alain Villette Composition injectable comprenant un medicament injectable et un gel
US20120208757A1 (en) * 2010-10-07 2012-08-16 Excel Med, Llc Use of hyaluronan for promoting angiogenesis
JP2012125180A (ja) * 2010-12-15 2012-07-05 Kowa Co 下肢虚血モデル動物
TWI607760B (zh) * 2014-07-29 2017-12-11 國立成功大學 含膠原蛋白與透明質酸的細胞組織膠體
KR20150030682A (ko) * 2015-02-04 2015-03-20 (주)웰빙해피팜 항염증과 항혈액응고 성분들을 함유한 히알루론산(ha) 유착 억제 생체 소재

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