PL182903B1 - Gen, mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia oraz sposób wytwarzania L-lizyny - Google Patents

Gen, mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia oraz sposób wytwarzania L-lizyny

Info

Publication number
PL182903B1
PL182903B1 PL95320645A PL32064595A PL182903B1 PL 182903 B1 PL182903 B1 PL 182903B1 PL 95320645 A PL95320645 A PL 95320645A PL 32064595 A PL32064595 A PL 32064595A PL 182903 B1 PL182903 B1 PL 182903B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
wild
type
lysine decarboxylase
leu
microorganism
Prior art date
Application number
PL95320645A
Other languages
English (en)
Other versions
PL320645A1 (en
Inventor
Yoshimi Kikuchi
Tomoko Suzuki
Hiroyuki Kojima
Original Assignee
Ajinomoto Kk
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=17956402&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL182903(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ajinomoto Kk filed Critical Ajinomoto Kk
Publication of PL320645A1 publication Critical patent/PL320645A1/xx
Publication of PL182903B1 publication Critical patent/PL182903B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

1 . Gen, znamienny tym, ze koduje dekarboksylaze lizynowa obejmujaca sekwencje aminokwasowa oznaczona nr 4 w Liscie Sekwencji. 4. Mikroorganizm nalezacy do rodzaju Escherichia, znamienny tym, ze: posiada delecje genu typu dzikiego kodujacego dekarboksylaze lizynowa typu dzikiego oraz posiada zmutowany gen typu dzikiego kodujacy dekarboksylaze lizynowa typu dzikiego, który koduje zmutowana dekarboksylaze lizynowa typu dzikiego bez aktywnosci dekarboksylujacej, albo koduje zmutowana dekarboksylaze lizynowa typu dzikiego o zredukowanej aktywnosci dekarboksylujacej, albo posiada mutacje redukujaca wytwarzanie dekarboksylazy lizynowej typu dzikiego przez mikroorganizm, przy czym dekarboksylaza typu dzikiego obejmuje sekwencje aminokwasowa oznaczona nr 4 w Liscie Sekwencji. 14. Sposób wytwarzania L-lizyny, znamienny tym, ze obejmuje etapy, w których a) hoduje sie mikroorganizm nalezacy do rodzaju Escherichia w plynnej pozywce do wytworzenia L-lizyny, przy czym mikroorganizm ten posiada delecje genu typu dzikiego kodujacego dekarboksylaze lizynowa typu dzikiego, posiada zmutowany gen typu dzikiego kodujacy dekarboksylaze lizynowa typu dzikiego, który koduje dekarboksylaze lizynowa typu dzikiego bez aktywnosci dekarboksylujacej, albo koduje zmutowana dekarboksylaze lizynowa typu dzikiego o zredukowanej aktywnosci dekarboksylujacej, albo posiada mutacje redukujaca wytwarzanie dekarboksylazy lizynowej typu dzikiego przez mikroorganizm, przy czym dekarboksylaza lizynowa typu dzikiego obejmuje sekwencje aminokwasowa oznaczona nr 4 w Liscie Sek- wencji, i b) zbiera sie L-lizyne wytworzona w etapie a). PL PL PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest gen, mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia oraz sposób wytwarzania L-lizyny. Niniejszy wynalazek dotyczy nowego genu dekarboksylazy lizynowej Escherichia biorącej udział w rozkładzie L-lizyny, należącego do rodzaju Escherichia mikroorganizmu o zahamowanej ekspresji genu oraz sposobu wytwarzania L-lizyny przy użyciu mikroorganizmu.
Dekarboksylaza lizynowa, która katalizuje reakcję wytwarzania kadaweryny przez dekarboksylację L-lizyny, jest znana jako enzym rozkładający L-lizynę Escherichia coli. Opisano już sekwencję nukłeotydowąjej genu, nazwanego cadA, i kodowaną przez gen sekwencję aminokwasową(Meng, S. i Bennett, G. N., J. Bacteriol., 174, 2659 (1992)). Istnieją dwa doniesienia o dekarboksylazie kodowanej przez gen inny niż cadA Escherichia coli, które opisują, że w zmutowanym szczepie Escherichia coli wykryto słabą aktywność (Goldemberg, S.H., J. Bacteriol., 141, 1428 (1980); Wertheimer, S.J. i Leifer, Z., Biochem. Biophys. Res. Commun., 114, 882 (1983)). Jednakże, w odniesieniu do tej aktywności, Goldemberg, S.H. podawał, że aktywność enzymu ulegała obniżeniu o około 30% po ogrzewaniu w temperaturze 60°C w ciągu 4 minut, podczas gdy Wertheimer, S.J. i in. podawali, że nie obserwowano takiego zjawiska. A zatem, obecność drugiej dekarboksylazy lizynowej jest nieokreślona.
Natomiast, lizynę wytwarza się znanymi metodami z wykorzystaniem Escherichia coli, włącznie z metodą obejmującą hodowlę zmutowanego szczepu opornego na analog lizyny, bądź zrekombinowanego szczepu zawierającego wektor z wprowadzonym kwasem deoksyrybonukleinowym, który niesie informację genetyczną dotyczącą biosyntezy L-lizyny (japoński wyłożeniowy opis patentowy numer 56-18596). Jednakże, brak jest doniesień o wytwarzaniu L-lizyny przy wykorzystaniu mikroorganizmu należącego do rodzaju Escherichia o zahamowanej ekspresji genu dekarboksylazy lizynowej.
Celem niniejszego wynalazku jest otrzymanie nowego genu dekarboksylazy lizynowej Escherichia coli, utworzenie wytwarzającego L-lizynę mikroorganizmu należącego do rodzaju Escherichia o zahamowanej ekspresji genu i/lub genu cadA oraz zapewnienie metody wytwarzania L-lizyny przez hodowlę mikroorganizmu należącego do rodzaju Escherichia.
Gdy autorzy niniejszego wynalazku utworzyli szczep Escherichia coli, w którym zniszczono gen cadA jako znany gen dekarboksylazy lizynowej, stwierdzono, że kadaweryna, będąca produktem rozkładu L-lizyny przez dekarboksyłazę lizynową, była nadal wytwarzana przez ten szczep mikroorganizmu. A zatem, autorzy niniej szego wynalazku założyli, że w Escherichia coli powinien być obecny nowy gen dekarboksylazy lizynowej i może on znacznie wpływać na fermentacyjne wytwarzanie L-lizyny przy wykorzystaniu organizmu należącego do rodzaju Escherichia. W wyniku prób osiągnięcia sklonowania tego genu, autorom niniejszego wynalazku udało się otrzymać nowy gen dekarboksylazy lizynowej, różny od genu cadA. Stwierdzono również, że aktywność rozkładania L-lizyny znacznie obniżała się lub zanikała, a produktywność L-lizyny ulegała znaczącej poprawie w wyniku zahamowania ekspresji tego genu i zahamowania ekspresji genu cadA w wytwarzającym L-lizynę mikroorganizmie Escherichia coli. A zatem, zrealizowano niniejszy wynalazek.
182 903
Mianowicie, niniejszy wynalazek zapewnia nowy gen, który koduje dekarboksylazę lizynową, pochodzący z Escherichia coli. Gen ten oznaczono jako gen „Icd”.
W innym aspekcie, niniejszy wynalazek zapewnia wytwarzający L-lizynę mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia, o obniżonej lub zanikłej aktywności dekarboksylazy lizynowej w komórkach.
W jeszcze innym aspekcie, niniejszy wynalazek zapewnia metodę wytwarzania L-lizyny obejmującą etapy hodowli, w podłożu płynnym, opisanego powyżej mikroorganizmu należącego do rodzaju Escherichia w celu umożliwienia wytwarzania i akumulacji w płynie hodowlanym L-lizyny, oraz jej zbierania.
Opisany powyżej mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia obejmuje mikroorganizm, w komórkach którego aktywność dekarboksylazy lizynowej jest obniżona lub zanikła w wyniku zahamowania ekspresji Icd i/lub genu cadA.
Niniejszy wynalazek zostanie opisany szczegółowo poniżej.
<1> Przygotowanie fragmentu DNA zawierającego nowy gen dekarboksylazy lizynowej
Fragment DNA zawierający nowy gen dekarboksylazy lizynowej (Icd) według niniejszego wynalazku można otrzymać w opisany poniżej sposób z dostępnego szczepu Escherichia coli, na przykład szczepu K-12 lub szczepu od niego pochodzącego.
Najpierw otrzymuje się gen cadA, który jest genem znanej dekarboksylazy lizynowej, z chromosomalnego DNA szczepu W3110 pochodzącego od Escherichia coli K-12, przez zastosowanie metody reakcji łańcuchowej polimerazy (dalej w niniejszym opisie określanej jako „metoda PCR”). Sekwencję nukleotydowągenu cadA i kodowanąprzez nią sekwencję aminokwasową przedstawiono odpowiednio w sekwencjach o numerach identyfikacyjnych: 5 i 6. Fragmenty DNA posiadające sekwencje podobne do genu cadA klonuje się z biblioteki chromosomalnego DNA Escherichia coli zgodnie z metodą stosowania wektora plazmidowego lub wektora fagowego do potwierdzenia, czy nowy gen dekarboksylazy lizynowej zawarty jest we fragmentach DNA. Potwierdzenia faktu, że docelowy gen jest zawarty można dokonać zgodnie z metodą hybrydyzacji Southema przy użyciu sondy przygotowanej metodą PCR.
Sekwencję nukleotydowągenu zawartego w tak otrzymanym fragmencie DNA określa się w następujący sposób. Najpierw fragment DNA liguje się z wektorem plazmidowym zdolnym do autonomicznej replikacji w komórkach Escherichia coli w celu przygotowania zrekombinowanego DNA, który wprowadza się do kompetentnych komórek Escherichia coli. Otrzymane transformanty hoduje się w podłożu płynnym i z namnożonych komórek odzyskuje się zrekombinowany DNA. Pełną sekwencję nukleotydową fragmentu DNA zawartego w odzyskanym zrekombinowanym DNA określa się zgodnie z metodą wykorzystującą dideoksynukleotydy (Sanger, F. i in., Proc. Natl. Acad. Sci., 74, 5463 (1977)). W celu określenia istniejących pozycji promotora, operatora, sekwencji SD, kodonu inicjacji, kodonu terminacji, otwartej ramki odczytu i tak dalej analizuje się strukturę DNA.
Nowy gen dekarboksylazy lizynowej według niniejszego wynalazku posiada sekwencję od ATG w pozycjach 1005-1007 do GGA w pozycjach 3141-4143 pełnej sekwencji nukleotydowej fragmentu DNA przedstawionej w sekwencji o numerze identyfikacyjnym: 3 w Liście Sekwencji. Gen ten koduje dekarboksylazę lizynową posiadającą sekwencję aminokwasową przedstawioną w sekwencji o numerze identyfikacyjnym: 4 w Liście Sekwencji. Stwierdzono, że homologia pomiędzy nową dekarboksylazą lizynową a dekarboksylazą lizynową kodowaną przez gen cadA wynosi 69,4%.
Genem według niniejszego wynalazku może być ten, który koduje dekarboksylazę lizynową posiadającą sekwencję aminokwasową przedstawioną w sekwencji o numerze identyfikacyjnym: 4 w Liście Sekwencji, którego sekwencja nukleotydową nie jest ograniczona do sekwencji nukleotydowej opisanej powyżej. Dekarboksylazą lizynową kodowana przez gen według niniejszego wynalazku może posiadać w opisanej powyżej sekwencji aminokwasowej podstawienie, delecję lub insercję jednej lub wielu reszt aminokwasowych nie powodujących zasadniczego obniżenia aktywności dekarboksylazy lizynowej. Geny, które kodują dekarboksylazę lizynową posiadającą taką delecję, insercję lub podstawienie można otrzymać z wariantów,
182 903 szczepów ze spontaniczną mutacją lub szczepów ze sztuczną mutacją Escherichia coli lub z innych niż Escherichia coli mikroorganizmów należących do rodzaju Escherichia. Zmutowane geny, które kodujądekarboksylazę lizynowąposiadającądelecję, insercję lub podstawienie można także uzyskać przez przeprowadzenie mutagenezy lub ukierunkowanej mutagenezy in vitro genu kodującego dekarboksylazę lizynową posiadającą sekwencję aminokwasową przedstawionąw sekwencji o numerze identyfikacyjnym: 4. Te mutagenezy można przeprowadzić zgodnie z metodami dobrze znanymi specjalistom w tej dziedzinie, jak opisano poniżej.
Jednakże, gen, który koduje dekarboksylazę lizynową posiadającą podstawienie, delecję lub insercję jednej lub wielu reszt aminokwasowych, jak określono w niniejszym opisie, obejmuje te pochodzące od „genu Icd i może być uważany jako zasadniczo taki sam, jak gen Icd. Nie zamierza się rozciągać tego określenia na geny o odrębnym pochodzeniu. Nie jest możliwe konkretne określenie pewnego zakresu różnorodności”. Jednakże, dla specjalistów w tej dziedzinie będzie zrozumiałe, że na przykład, gen cadA kodujący białko różne od białka posiadającego sekwencję przedstawioną w sekwencji o numerze identyfikacyjnym: 3, pod względem nie mniej niż 200 reszt aminokwasowych, jest różny od genu według niniejszego wynalazku, a geny, które kodująbiałka posiadające równoważną aktywność dekarboksylazy lizynowej objęte są niniejszym wynalazkiem, nawet jeśli są one różne od białka posiadającego sekwencję aminokwasową przedstawioną w sekwencji o numerze identyfikacyjnym: 3, pod względem dwóch lub trzech reszt aminokwasowych.
<2> Tworzenie mikroorganizmu należącego do rodzaju Escherichia o zahamowanej ekspresji genu dekarboksylazy lizynowej
Należącym do rodzaju Escherichia mikroorganizmem według niniejszego wynalazku jest mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia, u którego w komórkach aktywność dekarboksylazy lizynowej jest obniżona lub zanikła. Mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia obejmuje Escherichia coli. Aktywność dekarboksylazy lizynowej w komórkach jest obniżona lub zanikła w wyniku, na przykład, zahamowania ekspresj i któregokolwiek lub obu spośród opisanych powyżej nowego genu dekarboksylazy lizynowej {Icd) i znanego genu cadA. Alternatywnie, aktywność dekarboksylazy lizynowej w komórkach można także obniżyć lub spowodować jej zaniknięcie przez obniżenie lub spowodowanie braku aktywności właściwych kodowanych przez te geny enzymów dekarboksylazy lizynowej poprzez zmodyfikowanie struktury enzymów.
Sposoby zahamowania ekspresji genu Icd i znanego genu cadA obejmują, na przykład, metodę hamowania ekspresji genów na poziomie transkrypcji przez spowodowanie podstawienia, delecji, insercji, addycji lub inwersji jednego lub wielu nukleotydów w sekwencjach promotorów tych genów i obniżenie aktywności promotorów (M. Rosenberg i D. Court, Ann. Rev. Genetics 13 (1979), str. 319 oraz P. Youderain, S. Bouvier i M. Susskind, Celi 30 (1982), str. 843-853).
Alternatywnie, ekspresję tych genów można zahamować na poziomie translacji przez spowodowanie podstawienia, delecji, insercji, addycji lub inwersji jednego lub wielu nukleotydów w regionie pomiędzy sekwencjąSD akodonem inicjacji (J. J. Dunn, E. Buzash-Pollert i F. W. Studier, Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 75 (1978), str. 2743). Ponadto, w celu obniżenia lub spowodowania zaniknięcie aktywności właściwej enzymu dekarboksylazy lizynowej dostępna jest metoda, w której region kodujący genu dekarboksylazy lizynowej modyfikuje się lub niszczy przez spowodowanie podstawienia, delecji, inwercji, addycji lub inwersji jednego lub wielu nukleotydów w regionie kodującym sekwencji nukleotydowej.
Poza genem /cć/lub genem cadA, genami, w których może występować podstawienie, delecja, insercja, addycja lub inwersja nukleotydowa, mogą być geny Icd lub geny cadA posiadające podstawienie, delecję lub insercję jednej lub wielu reszt aminokwasowych, które nie obniżają zasadniczo aktywności kodowanej dekarboksylazy lizynowej.
Metody dokonywania podstawienia, delecji, inwersji, addycji lub insercji nukleotydowej w genie, obejmują szczególnie metodę ukierunkowanej mutagenezy (Kramer, W. I. Frits, H.J., Methods in Enzymology, 154,350 (1987)) i metodę traktowania przy użyciu czynnika chemicz
182 903 nego, takiego jak podsiarczyn sodowy i hydroksyloamina (Shortle, D. I Nathans, D. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 75 270 (1978)).
Metoda ukierunkowanej mutagenezyjest metodą stosowania syntetycznego oligonukleotydu, co jest techniką umożliwiającą wprowadzanie dowolnego podstawienia, delecji, insercji, addycji lub inwersji do dowolnej i ograniczonej pary nukleotydowej. W celu wykorzystania tej metody najpierw przygotowuje się jedną nić przez denaturację plazmidu ze sklonowanym docelowym genem o określonej sekwencji nukleotydowej DNA.
Następnie syntetyzuje się syntetyczny oligonukleotyd komplementarny do części, w której zamierza się spowodować mutację. Jednakże, w procedurze tej syntetyczny nukleotyd nie może mieć sekwencji w pełni komplementarnej, ale jest zaprojektowany tak, aby posiadać dowolne podstawienie, delecję, insercję, addycję lub inwersję nukleotydową. Po tym łączy się jednoniciowy DNA z syntetycznym oligonukleotydem posiadającym dowolne podstawienie, delecję, insercję, addycję lub inwersję nukleotydową. Wykorzystując ligazę T4 i fragment Klenowa polimerazy DNA I syntetyzuje się pełny dwuniciowy plazmid, który wprowadza się do kompetentnych komórek Escherichia coli. Niektóre z tak otrzymanych transformantów posiada plazmid zawierający gen, w którym utrwaliło się dowolne podstawienie, delecja, insercja, addycja lub inwersja nukleotydową. Jako podobną metodę, odpowiednią do wprowadzania mutacji do genu w celu dokonania modyfikacji lub zniszczenia można wymienić metodę rekombinacyjnej PCR (PCR Technology, Stockton press (1989)).
Metoda stosowania czynnika chemicznego jest metodą, w której mutację podstawienia, delecji, insercji, addycji lub inwersji nukleotydowej wprowadza się losowo do fragmentu DNA, działając bezpośrednio na fragment DNA zawierający docelowy gen podsiarczynem sodowym, hydroksyloaminą lub podobnym.
Ekspresję genu led i/lub genu cadA w komórkach można zahamować przez podstawienie normalnego genu w chromosomie mikroorganizmu należącego do rodzaju Escherichia zmodyfikowanym lub zniszczonym genem otrzymanym przez wprowadzenie mutacj i, jak opisano powyżej. Metody zastępowania genów obejmują metody, które wykorzystują rekombinację homologiczną (Experiments in Molecular Genetics, Cold Spring Harbor Laboratory press (1972); Matsuyama, S. i Mizushima, S., J. Bacteriol., 162,1196 (1985)). Rekombinacja homologiczna opiera się na zdolności, którą na ogół posiada mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia. Jeśli do komórki wprowadzi się plazmid, lub podobną strukturę, posiadający homologię do sekwencji znajdującej się w chromosomie, to z pewną częstotliwością występuje rekombinacja w miejscu posiadającym homologię, i cały wprowadzony plazmid wbudowany zostaje do chromosomu.
Następnie, jeśli dalsza rekombinacja występuje w miejscu sekwencji posiadającej homologię na chromosomie, plazmid ponownie zostaje usunięty z chromosomu. Jednakże, niekiedy podczas tego procesu gen z wprowadzoną mutacją utrwala się w sposób uprzywilejowany w chromosomie, zależnie do pozycji w której zachodzi rekombinacja, a oryginalny normalny gen zostaje usunięty z chromosomu razem z plazmidem. Selekcja takich szczepów mikroorganizmu stwarza możliwość otrzymania szczepu mikroorganizmu, w którym normalny gen chromosomu zostaje podstawiony zmodyfikowanym lub zniszczonym genem otrzymanym przez wprowadzenie mutacji podstawienia, delecji, insercji, addycji lub inwersji nukleotydowej.
Mikroorganizmem należącym do rodzaju Escherichia, poddawanym podstawieniu genu jest mikroorganizm charakteryzujący się produktywnością L-lizyny. Należący do rodzaju Escherichia mikroorganizm charakteryzujący się produktywnością L-lizyny, na przykład szczep mikroorganizmu Escherichia coli, można otrzymać przez zastosowanie mutagenezy wobec szczepu charakteryzującego się produktywnością L-lizyny dla nadania mu oporności na analog niniejszym opisie określany jako „AEC”. Metody mutagenezy obejmują metody, w których komórki Escherichia coli poddaje się traktowaniu czynnikiem chemicznym, takim jak N-metylo-N'-nitro-N-nitrozoguanidyna i kwas azotowy, lub traktowaniu napromieniowaniem światłem ultrafioletowym, promieniowaniem lub podobnymi. Taki szczep mikroorganizmu specyficznie obejmuje Escherichia coli AJ 13069 (FERM P-14690). Szczep mikroorganizmu wyhodowano
182 903 przez nadanie oporności na AEC szczepowi W3110, pochodzącemu do Escherichia coli K-12. Escherichia coli AJ13069 zdeponowano w National Institute of Bioscience and Humań Technology (kod pocztowy: 305-1-3, Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, Japonia) pod numerem dostępu FERM P-14690 6 grudnia 1994 r., przeniesiono do depozytu międzynarodowego na warunkach Porozumienia Budapesztańskiego 29 września 1995 r. i nadano numer dostępu FERM BP-5252.
Szczep mikroorganizmu Escherichia coli charakteryzujący się produktywnością L-lizyny można także wyhodowań przez wprowadzenie i wzmocnienie, technologią rekombinacji genów, DNA zawierającego informację genetyczną dotyczącą biosyntezy L-lizyny. Genami przeznaczonymi do wprowadzania są geny, które kodują enzymy szlaku biosyntezy L-lizyny, takie jak kinaza asparaginianowa, syntetaza dihydropikolinianowa, reduktaza dihydropikolinianowa, transaminaza sukcynylodiaminopimelinianowa i deacylaza sukcynylodiaminopimelinianowa. W przypadku genu enzymu, który podlega hamowaniu na zasadzie sprzężenia zwrotnego przez L-lizynę, takiego jak kinaza asparaginianowa i syntetaza dihydropikolinianowa, pożądane jest zastosowanie zmutowanego genu, kodującego enzym, którego wrażliwość na takie hamowanie została zniesiona.
Do wprowadzania lub wzmacniania genu dostępna jest metoda, w której gen liguje się z wektorem zdolnym do autonomicznej replikacji w komórkach Escherichia coli w celu przygotowania zrekombinowanego DNA, którym transformuje się Escherichia coli. Alternatywnie, gen można także wprowadzić do chromosomu gospodarza, zgodnie z metodą stosowania transdukcji, transpozonu (Berg, D. E. i Berg, C. M., Bio/Technol., 1, 417 (1983)), faga Mu (japoński wyłożeniowy opis patentowy numer 2-109985) lub replikacji homologicznej (Experiments in Molecular Genetics, Cold Spring Harbor Lab. (1972)).
Inne metody otrzymywania mikroorganizmu należącego do rodzaju Escherichia posiadającego gen o zniszczonej funkcji obejmują metodę powodowania mutacji genetycznej przez zastosowanie traktowania czynnikiem chemicznym, takim jak N-metylo-N'-nitro-N-nitrozoguanidyna i kwas azotowy lub traktowania napromieniowaniem światłem ultrafioletowym, promieniowaniem lub podobnymi, komórek posiadającego gen mikroorganizmu należącego do rodzaju Escherichia.
W opisanym poniżej przykładzie, szczep Escherichia coli posiadający gen dekarboksylazy lizynowej o zniszczonej funkcji utworzono przez delecję części jego regionu kodującego i wstawienie zamiast niego genu oporności na lek w celu otrzymania genu dekarboksylazy lizynowej, który zastosowano do podstawienia genu dekarboksylazy lizynowej w chromosomie Escherichia coli zgodnie z opisaną powyżej metodą wykorzystania rekombinacji homologicznej.
Możliwe jest zahamowanie w szczepie mikroorganizmu ekspresji jakiegokolwiek nowego genu dekarboksylazy lizynowej według niniejszego wynalazku oraz genu cadA, bądź zahamowanie ekspresji obu z nich.
Zgodnie z opisanymi powyżej metodami, ekspresję genu dekarboksylazy lizynowej można zahamować w mikroorganizmie należącym do rodzaju Escherichia charakteryzującym się produktywnością L-lizyny, bądź produktywność L-lizyny można nadać należącemu do rodzaju Escherichia mikroorganizmowi charakteryzującemu się zahamowaną ekspresją genu dekarboksylazy lizynowej.
<3> Wytwarzanie L-lizyny z wykorzystaniem należącego do rodzaju Escherichia mikroorganizmu z zahamowaną ekspresją genu dekarboksylazy lizynowej
Znaczące ilości L-lizyny wytwarza się i akumuluje w płynie hodowlanym przez hodowlę należącego do rodzaju Escherichia mikroorganizmu z zahamowaną ekspresją otrzymanego jak opisano powyżej genu dekarboksylazy lizynowej. Ilość akumulowanej L-lizyny ulega zwiększeniu tylko przez zahamowanie ekspresji znanego genu cadA. Jednakże, ilość akumulowanej L-lizyny skuteczniej zwiększa zahamowanie ekspresji nowego genu dekarboksylazy lizynowej według niniejszego wynalazku. Najkorzystniejsze wyniki pod względem wytwarzania L-lizyny otrzymuje się przez zastosowanie szczepu mikroorganizmu, w którym zahamowano ekspresję zarówno genu cadA, jak i nowego genu według niniejszego wynalazku.
182 903
Podłożem używanym do wytwarzania L-lizyny jest zwykłe podłoże zawierające źródło węgla, źródło azotu, jony nieorganiczne i ewentualnie źródła innych śladowych substancji odżywczych. Jako źródło węgla można wykorzystać cukry, takie jak glukoza, laktoza, galaktoza, fruktoza i hydrolizat skrobiowy; alkohole, takie jak glicerol i sorbitol; oraz kwasy organiczne, takie jak kwas fumarowy, kwas cytrynowy i kwas bursztynowy. Jako źródło azotu można wykorzystać nieorganiczne sole amonowe, takie jak siarczan amonowy, chlorek amonowy i fosforan amonowy; organiczne źródła azotu, takie jak hydrolizat sojowy; amoniak w postaci gazowej i amoniak w postaci roztworu wodnego. Jako jony nieorganiczne, w małych ilościach dodaje się fosforan potasowy, siarczan magnezowy, jony żelaza, jony manganowe itd. Poza powyższymi, pożądane jest, aby podłoże zawierało w odpowiednich ilościach jako źródła organicznych śladowych substancji odżywczych witaminę Bb ekstrakt drożdżowy lub podobne.
Hodowlę korzystnie prowadzi się w warunkach tlenowych w ciągu około 16-72 godzin. Temperaturę hodowli utrzymuje się w zakresie od 30°C do 45°Ć, a pH podczas hodowli utrzymuje się w zakresie 5-7. Do doprowadzania pH można wykorzystać substancje nieorganiczne lub organiczne, kwaśne lub zasadowe lub amoniak w postaci gazu, bądź podobne.
Po zakończeniu hodowli, zbieranie L-lizyny z brzeczki fermentacyjnej można właściwie przeprowadzić przez połączenie zwykłej metody z zastosowaniem żywicy jonowymiennej, metody wytrącania i innych znanych metod.
Krótki opis rysunków
Figura 1 przedstawia strukturę plazmidu pUC6F5HH5 zawierającego nowy gen dekarboksylazy lizynowej.
Figura 2 przedstawia strukturę wrażliwego na temperaturę plazmidu pTS6F5HH5 zawierającego nowy gen dekarboksylazy lizynowej oraz konstrukcję plazmidu pTS6F5HH5Cm, w którym część genu podstawiono fragmentem zawierającym gen oporności na chloramfenikol.
Figura 3 przedstawia porównanie aktywności rozkładania L-lizyny w szczepie WC196 zawierającym normalny gen dekarboksylazy lizynowej oraz szczepach WC196C, WC196L i WC196LC ze zniszczonym genem dekarboksylazy lizynowej.
Najlepszy sposób przeprowadzenia wynalazku
Niniejszy wynalazek pozostanie bardziej szczegółowo wyjaśniony poniżej w odniesieniu do przykładów.
Przykład 1 (1) Klonowanie nowego genu dekarboksylazy lizynowej
Z komórek szczepu W3110 Escherichia coli K-12, otrzymanego z National Institute of Genetics (Yata 1111, Mishima-shi, Shizuoka-ken, Japonia) wydzielono chromosomalny DNA zgodnie ze zwykłą metodą. Z drugiej strony, zgodnie ze zwykłą metodą zsyntetyzowano dwa syntetyczne startery DNA, jak przedstawiono w sekwencjach o numerach identyfikacyjnych: 1 i 2 w Liście Sekwencji, na podstawie sekwencji nukleotydowej genu cadA (patrz sekwencja o numerze identyfikacyjnym: 5) opisanej w Meng, S. iBennett, G. N., J. Bacteriol., 174,2659 (1992). Posiadały one sekwencje homologiczne odpowiednio do 5'-końcowej części przed i 3'-końcowej części za genem cadA. Chromosomalny DNA i startery DNA zastosowano do przeprowadzenia metody PCR zgodnie z metodą Erlicha i in. (PCR Technology, Stockton press (1989)). W ten sposób otrzymano fragment o długości 2,1 kbp zawierający prawie wszystkie części genu cadA. Fragment ten wyznakowano stosując Random Primer Labeling Kit (produkowany przez Takara Shuzo) i [a-32P]dCTP (produkowaną przez Amersham Japan) w celu przygotowania sondy do hybrydyzacji.
Następnie przeprowadzono hybrydyzację zgodnie ze zwykłą metodą (Molecular Cloning (wyd. 2), Cold Spring Harbor Laboratory press (1989) przy wykorzystaniu przygotowanej sondy i Escherichia coli/Gene Mapping Membranę (produkowanej przez Takara Shuzo). Bibliotekę według Kohara i in. (biblioteka chromosomalnego DNA Escherichia coli w fagu lambda; patrz Kohara, Y. i in., Celi, 50, 495-508 (1987)) zaadsorbowano na Escherichia coli/Gene Mapping Membranę. Klony faga lambda posiadające sekwencje podobne do genu cadA przeszukiwano przez osłabienie warunków opłukiwania sondy (2 x SSC, 25°C, 30 minut) podczas przeprawa
182 903 dzania hybrydyzacji. W wyniku tego powiodło nam się wykrycie słabych sygnałów z trzech klonów, E2B8, 6F5H i 10F9, poza silnymi sygnałami z klonów zawierających region genu cadA (21Η11,5G7). Sekwencje wstawek trzech klonów faga lambda E2B8,6F5H i 10F9 ciągną się na chromosomie Escherichia coli zachodząc na siebie. Zgodnie ze zwykłą metodą, wydzielono zatem DNA faga lambda klonu 6F5H należącego do biblioteki według Kohara i in. (Kohara, Y. i in., Celi, 50,495-508) i strawiono różnymi enzymami restrykcyjnymi w celu przeprowadzanie hybrydyzacji Southema przy użyciu opisanej powyżej sondy, zgodnie z metodą podobną do opisanej powyżej. W wyniku, stwierdzono, że sekwencja podobna do genu cadA obecna była we fragmencie DNA o długości około 5 kbp otrzymanym przez trawienie HindHL
A zatem, fragment o długości około 5 kbp, otrzymany przez strawienie HindUI DNA faga lambda 6F5H, zligowano przy użyciu ligazy DNA T4 z produktem trawienia HindHA plazmidu pUC19 (produkowanego przez Takara Shuzo). Tę mieszaninę reakcyjną zastosowano do transformacji Escherichia coli JM 109 (produkowanej przez Takara Shuzo) w celu otrzymani opornych na ampicylinę szczepów rosnących na płytkach z podłożem pełnym (zawierającym 10 g polipeptonu, 5 g ekstraktu drożdżowego i 5 g chlorku sodowego w 1 litrze wody) z ampicylinądodanąw stężeniu 50 mg/ml. Otrzymano z nich szczepy bakteryjne, które zawierały plazmid ze wstawionym fragmentem o długości około 5 kbp otrzymanym przez strawienie HindAW DNA faga lambda 6F5H. Z komórek tych wyekstrahowano plazmid i uzyskano plazmid pUC6F5HH5. Strukturę plazmidu pUC6F5HH5 przedstawia fig. 1.
Escherichia coli JM 109/pUC6F5HH5 zawierający ten plazmid oznaczono AJ 13068, zdeponowano 6 grudnia 1994 r. w National Institute of Bioscience and Humań Technology of Agency of Industrial Science and Technology pod numerem dostępu FERM P-14689, przeniesiono do depozytu międzynarodowego na warunkach Porozumienia Budapesztańskiego 29 września 1995 r. i nadano numer dostępu RERM BP-5251.
(2) Określanie sekwencji nukleotydowej nowego genu dekarboksylazy lizynowej
Sekwencję nukleotydową regionu położonego pomiędzy miejscami rozpoznawanymi przez enzymy restrykcyjne Cla\ i Hindlll otrzymanego pUC6F5HH5 określono zgodnie z metodą opisanąw Molecular Cloning (wyd. 2), Cold Spring Harbor Laboratory press (1989). W wyniku tej analizy stwierdzono, że sekwencja nukleotydową była taka jak przedstawiona w sekwencji o numerze identyfikacyjnym: 3 w Liście Sekwencji. Ta sekwencja DNA obejmuje otwartą ramkę odczytu kodującąsekwencję aminokwasową przedstawioną w sekwencji o numerze identyfikacyjnym: 4 w Liście Sekwencji.
(3) Przygotowywanie Escherichia coli charakteryzującej się produktywnością L-lizyny
Escherichia coli W3110 hodowano w temperaturze 37°C w ciągu 4 godzin w pełnym podłożu (zawierającym 10 g polipeptonu, 5 g ekstraktu drożdżowego, 5 g chlorku sodowego w 1 litrze wody) w celu otrzymania komórek mikroorganizmu, które poddano mutagenezie w temperaturze 37°C w ciągu 30 minut w roztworze N-metylo-N'-nitro-N-nitrozoguanidyny o stężeniu 200 gg/ml, przemyto, a następnie wysiano na płytki z podłożem minimalnym (zawierającym 7 g wodorofosforanu dwusodowego, 3 g dwuwodorofosforanu potasowego, 1 g chlorku amonowego, 0,5 g chlorku sodowego, 5 g glukozy, 0,25 g heptawodzianu siarczanu magnezowego i 15 g agaru w 1 litrze wody) w AEC dodanym w stężeniu 5 g/litr. Szczepy oporne na AEC uzyskano przez wydzielenie kolonii pojawiających się po hodowli w temperaturze 37°C w ciągu 48 godzin. Wśród nich jeden szczep, WC196, wykazywał produktywność L-lizyny. Szczep WC196 oznaczono AJ13069, zdeponowano 6 grudnia 1994 r. w National Institute of Bioscience and Humań Technology of Agency of Industrial Science and Technology pod numerem dostępu FERM P-14690, przeniesiono do depozytu międzynarodowego na warunkach Porozumienia Budapesztańskiego 29 września 1995 r. i nadano numer dostępu FERM BP-5252.
(4) Tworzenie szczepu WC196 posiadającego nowy gen dekarboksylazy lizynowej w zniszczonej funkcji
Opisany powyżej fragment o długości około 5 kbp, otrzymany przez strawienie Hindlll DNA faga lambda 6F5H, zligowano przy użyciu ligazy DNA T4 z produktem trawienia Hindlll wrażliwego na temperaturę plazmidu pMAN031 (Yasueda, Η. I in., Appl. Microbiol. Biotech
182 903 nok, 36, 211 (1991)). Tę mieszaninę reakcyjną zastosowano do transformacji Escherichia coli JM 109, którą następnie hodowano w temperaturze 37°C w ciągu 24 godzin na płytkach z podłożem pełnym z ampicyliną dodaną w stężeniu 50 mg/litr dla wyhodowania szczepów opornych na ampicylinę. Otrzymano z nich szczep mikroorganizmu, który zawierał plazmid ze wstawionym fragmentem o długości 5 kbp, otrzymanym przez strawienie Hindill DNA faga 6F5H. Z komórek tego szczepu wyekstrahowano plazmid, i uzyskano plazmid pTS6F5HH5. Plazmid pTS6F5HH5 strawiono EcoRV w celu usunięcia fragmentu o długości około 1 kbp.
Następnie zastosowano ligazę T4 do wstawienia zawierającego gen oporności na chloramfenikol fragmentu o długości około 1 kbp, otrzymanego przez strawienie AccI plazmidu pHSG399 (produkowanego przez Takara Shuzo). W ten sposób skonstruowano plazmid pTS6F5HH5Cm. W wyniku opisanej powyżej operacji udało nam się skonstruować plazmid zawierający fragment DNA nowego genu dekarboksylazy lizynowej o zniszczonej funkcji. Strukturę plazmidu pTS6F5HH5 i plazmidu pTS6F5HH5Cm przedstawia fig. 2.
Następnie utworzono szczep, w którym nowy gen dekarboksylazy lizynowej w chromosomie szczepu WC196 podstawiono fragmentem DNA nowego genu dekarboksylazy lizynowej o zniszczonej funkcji, zgodnie z ogólną techniką rekombinacji homologicznej (Matsuyama, S. i Mizushima, S., J. Bacteriol., 162, 1196 (1985), wykorzystując właściwość wrażliwości na temperaturę plazmidu pTS6F5HH5Cm. Mianowicie, szczep WC196 transformowano plazmidem pTS6F5HH5Cm w celu otrzymania najpierw szczepu, który był oporny na ampicylinę i oporny na chloramfenikol w temperaturze 30°C. Następnie, szczep ten zastosowano do otrzymania szczepu, który był oporny na ampicylinę i oporny na chloramfenikol w temperaturze 42°C. Dalej, szczep ten zastosowano do otrzymania szczepu, który był wrażliwy na ampicylinę i oporny na chloramfenikol w temperaturze 30°C. A zatem, utworzono opisany powyżej szczep, w którym nowy gen dekarboksylazy lizynowej w chromosomie szczepu WC196 podstawiono fragmentem DNA nowego genu dekarboksylazy lizynowej o zniszczonej funkcji. Szczep ten oznaczono jako szczep WC196L.
(5) Tworzenie szczepu WC196 i szczepu WC196L pozbawionego genu cadA
Escherichia coli, u której zniszczony jest gen cadA - znany gen dekarboksylazy lizynowej, jestjuż znana, obejmując, na przykład, szczep GNB10181, pochodzący Escherichia coliK-Ώ. (patrz Auger, E.A. i in., Mol. Microbiol., 3, 609 (1989); ten szczep mikroorganizmu dostępny jest, na przykład, w E. coli Gentic Stock Center (Connecticut, USA). Stwierdzono, że u tego szczepu mikroorganizmu brak jest regionu genu cadA. A zatem właściwość braku genu cadA została drogą transdukcji przeniesiona na szczep WC 196 zgodnie z ogólną metodą przy użyciu faga PI (A Short Course in Bacterial Genetics, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1992)) w celu utworzenia szczepu WC196C. Brak genu cadA u szczepu WC196 potwierdzono przez hybrydyzację Southema. Ponadto, zgodnie z metodą opisaną powyżej utworzono ze szczepu WC196L szczep WC196L pozbawiony genu cadA.
Przykład 2 (1) Potwierdzenie aktywności rozkładania L-lizyny szczepów WC196, WC196L i WC196LC
Cztery opisane powyżej utworzone szczepy hodowano w temperaturze 37°C w ciągu 17 godzin przy użyciu podłoża do wytwarzania L-lizyny (zawierającego 40 g glukozy, 16 g siarczanu amonowego, 1 g dwuwodorofosforanu potasowego, 2 g ekstraktu drożdżowego, 10 mg tetrado pentawodzianu siarczanu manganowego i 10 mg heptawodzianu siarczanu żelazowego w 1 litrze wody; pH doprowadzano wodorotlenkiem potasowym do 7,0, a następnie dodawano 30 g osobno wyjaławianego węglanu wapniowego). Odzyskane komórki mikroorganizmów dwukrotnie przemywano roztworem soli fizjologicznej, zawieszano w podłożu do oznaczania rozkładu L-lizyny (zawierającym 19 g dodekawodzianu wodorofosforanu dwusodowego, 3 g dwuwodorofosforanu potasowego, 0,5 g chlorku sodowego i 10 g chlorowodorku L-lizyny w 1 litrze wody) i hodowano w temperaturze 37°C w ciągu 31 godzin.
Figura 3 przedstawia zmiany ilości pozostającej w płynach hodowlanych L-lizyny w miarę upływu czasu. Ilość L-lizyny oznaczano ilościowo stosując Biotech Analyzer AS-210 (produko
182 903 wany przez Ashai Chemical Industry). W przypadku szczepu WC196 obserwowano znaczący rozkład L-lizyny. Jednakże, w przypadku szczepu WC196C pozbawionego genu cadA - znanego genu dekarboksylazy lizynowej, aktywność rozkładania była trochę obniżona. Rozkładu L-lizyny nie obserwowano w przypadku szczepów WC196L i WC196LC posiadających nowy gen dekarboksylazy lizynowej o zniszczonej funkcji. Ilość L-lizyny pozostającej w płynie hodowlanym obniżała się podczas okresu do około 3 godzin hodowli, w przypadku każdego ze szczepów mikroorganizmów. Jednakże, zjawisko to spowodowane było przez wprowadzanie L-lizyny do komórek mikroorganizmów, a nie przez jej rozkład.
(2) Wytwarzanie L-lizyny przez szczepy WC196, WC196C, WC196L i WC196LC
Cztery opisane powyżej szczepy hodowano w temperaturze 37°C w ciągu 20 godzin w opisanym powyżej podłożu do wytwarzania L-lizyny. Mierzono ilości wytwarzanych i akumulowanych w płynach hodowlanych, L-lizyny i kadaweryny. Ilość L-lizyny oznaczano ilościowo jak opisano powyżej stosując Biotech Analyzer AS-210. Ilość kadaweryny oznaczano ilościowo stosując wysokosprawną chromatografię cieczową.
Wyniki przedstawiono w tabeli 1. Akumulacja L-lizyny wzrastała, a akumulacja kadaweryny jako produktu rozkładu L-lizyny ulegała obniżeniu w przypadku szczepu WC 196C z uszkodzonym genem cadA w porównaniu ze szczepem WC196, oraz w przypadku szczepu WC196L posiadającego nowy gen dekarboksylazy lizynowej o zniszczonej funkcji w porównaniu ze szczepami WC 196 i WC 196C. Akumulacja L-lizyny uległa dalszemu zwiększeniu, a akumulacji kadaweryny jako produktu rozkładu L-lizyny nie wykryto w przypadku szczepu WC196LC posiadającego oba geny dekarboksylazy lizynowej o zniszczonych funkcjach.
Tabela 1
Szczep mikroorganizmu Akumulacja L-lizyny (g/litr) Akumulacja kadaweryny (g/litr)
WC196 1,4 0,6
WC196C 1,9 0,4
WC196L 2,3 0,1
WC196LC 3,3 nie wykryto
Przykład 3
Escherichia coli WC196LC z zanikłą aktywnością rozkładania L-lizyny stransformowano pUC6F5HH5 zawierającym nowy gen dekarboksylazy lizynowej w celu uzyskania szczepu opornego na ampicylinę. Szczep WC196LC i szczep WC196LC/pUC6F5HH5 hodowano w temperaturze 37°C w ciągu 16 godzin w podłożu do wytwarzania L-lizyny z L-lizyną dodaną w stężeniu 5 g/litr i mierzono ilość wytwarzanej kadaweryny.
Wyniki przedstawiono w tabeli 2. Szczep WC 196LC nie przekształcał L-lizyny w kadawerynę, podczas gdy szczep WC196LC/pUC6F5HH5 posiadał zdolność przekształcania L-lizyny w kadawerynę.
Tabela 2
Szczep mikroorganizmu Ilość wytworzonej kadaweryny (g/litr)
WC196LC WC196LC/ pUC6F5HH5 nie wykryto 0,93
Nowy gen dekarboksylazy lizynowej według niniejszego wynalazku uczestniczy w rozkładzie L-lizyny w przypadku Escherichia coli. L-lizynę można niedrogo i wydajnie wytwarzać przez hodowanie charakteryzującej się produktywnością L-lizyny bakterii należącej do rodzaju Escherichia z zahamowaną ekspresją genu opisanego powyżej i/lub genu cadA.
182 903
LISTA SEKWENCJI (1) INFORMACJA OGÓLNA:
(i) ZGŁASZAJĄCY: AJINOMOTO CO., LTD.
(ii) TYTUŁ WYNALAZKU: NOWY GEN DEKARBOKSYLAZY
LIZYNOWEJ I METODA WYTWARZANIA L-LIZYNY (iii) LICZBA SEKWENCJI: 6 (iv) ADRES DO KRESPONDENCJI:
(A) ADRESAT:
(B) ULICA:
(C) MIASTO:
(D) KRAJ:
(E) KOD:
(iv) ZAPIS KOMPUTEROWY:
(A) TYP NOŚNIKA: dyskietka (B) KOMPUTER: PC kompatybilny z IBM (C) SYSTEM OPERACYJNY: PC-DOS/MS-DOS (D) OPROGRAMOWANIE: FastSEQ wersja 1.5 (vi) DANE DOTYCZĄCE AKTUALNEGO ZGŁOSZENIA:
(A) NUMER ZGŁOSZENIA:
(B) DATA ZŁOŻENIA:
(C) KLASYFIKACJA:
(vii) DANE DOTYCZĄCE UPRZEDNIEGO ZGŁOSZENIA:
(A) NUMER ZGŁOSZENIA:
(B) DATA ZŁOŻENIA:
(viii) INFORMACJE O PEŁNOMOCNIKU/PRZEDSTAWICIELU:
(A) NAZWISKO:
(B) NUMER REJESTRACYJNY:
(ix) INFORMACJE TELEKOMUNIKACYJNE:
(A) TELEFON:
182 903 (B) TELEFAX:
(2) INFORMACJA O SEKWENCJI O NUMERZE IDENTYFIKACYJNYM: 1:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 20 zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: jedna (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: inny kwas nukleinowy (A) OPIS: /opis= Syntetyczny DNA (iii) HIPOTETYCZNY: NIE (iv) ANTYSENSOWNY: NIE (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA O NUMERZE
IDENTYFIKACYJNYM: 1:
TGGATAACCA CACCGCGTCT 20 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI O NUMERZE IDENTYFIKACYJNYM: 2:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 20 zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: jedna (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: inny kwas nukleinowy (A) OPIS: /opis= Syntetyczny DNA (iii) HIPOTETYCZNY: NIE (iv) ANTYSENSOWNY: TAK (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA O NUMERZE
IDENTYFIKACYJNYM: 2:
GGAAGGATCA TATTGGCGTT 20
182 903 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI O NUMERZE IDENTYFIKACYJNYM: 3:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 3269 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: dwie (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: DNA genomowy (iii) HIPOTETYCZNY: NIE (iv) ANTYSENSOWNY: NIE (VI) ŹRÓDŁO ORYGINALNE:
(A) ORGANIZM: Escherichia coli (B) SZCZEP: W3110 (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: CDS (B) POŁOŻENIE: 1005..3143 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA O NUMERZE
IDENTYFIKACYJNYM: 3:
ATCGATTCTC TGACTGCGGT TAGCCGTCAG GATGAGAAAC TGGATATTAA CATCGATGAA60
GAAGTGCATC GTCTGCGTGA AAAAAGCGTA GAACTGACAC GTAAAATCTT CGCCGATCTC120
GGTGCATGGC AGATTGCGCA ACTGGCACGC CATCCACAGC GTCCTTATAC CCTGGATTAC180
GTTCGCCTGG CATTTGATGA ATTTGACGAA CTGGCTGGCG ACCGCGCGTA TGCAGACGAT240
AAAGCTATCG TCGGTGGTAT CGCCCGTCTC GATGGTCGTC CGGTGATGAT CATTGGTCAT300
CAAAAAGGTC GTGAAACCAA AGAAAAAATT CGCCGTAACT TTGGTATGCC AGCGCCAGAA360
GGTTACCGCA AAGCACTGCG TCTGATGCAA ATGGCTGAAC GCTTTAAGAT GCCTATCATC420
ACCTTTATCG ACACCCCGGG GGCTTATCCT GGCGTGGGCG CAGAAGAGCG TGGTCAGTCT480
GAAGCCATTG CACGCAACCT GCGTGAAATG TCTCGCCTCG GCGTACCGGT AGTTTGTACG540
GTTATCGGTG AAGGTGGTTC TGGCGGTGCG CTGGCGATTG GCGTGGGCGA TAAAGTGAAT600
ATGCTGCAAT ACAGCACCTA TTCCGTTATC TCGCCGGAAG GTTGTGCGTC CATTCTGTGG660
AAGAGCGCCG ACAAAGCGCC GCTGGCGGCT GAAGCGATGG GTATCATTGC TCCGCGTCTG720
AAAGAACTGA AACTGATCGA CTCCATCATC CCGGAACCAC TGGGTGGTGC TCACCGTAAC780
CCGGAAGCGA TGGCGGCATC GTTGAAAGCG CAACTGCTGG CGGATCTGGC CGATCTCGAC840
GTGTTAAGCA CTGAAGATTT AAAAAATCGT CGTTATCAGC GCCTGATGAG CTACGGTTAC900
GCGTAATTCG CAAAAGTTCT GAAAAAGGGT CACTTCGGTG GCCCTTTTTT ATCGCCACGG960
TTTGAGCAGG CTATGATTAA GGAAGGATTT TCCAGGAGGA ACAC ATG AAC ATC ATT 1016
Met Asn Ile Ile
GCC ATT ATG GGA CCG CAT GGC GTC TTT TAT AAA GAT GAG CCC ATC AAA1064
Ala Ile Met Gly Pro His Gly Val Phe Tyr Lys Asp Glu Pro IleLys
10 1520
GAA CTG GAG TCG GCG CTG GTG GCG CAA GGC TTT CAG ATT ATC TGG CCA1112
Glu Leu Glu Ser Ala Leu Val Ala Gin Gly Phe Gin Ile Ile TrpPro
3035
182 903
CAA AAC AGC GTT GAT TTG CTG AAA TTT ATC GAG CAT AAC CCT CGA ATT 1160 Gin Asn Ser Val Asp Leu Leu Lys Phe Ile Glu His Asn Pro Arg Ile
4550
TGC GGC GTG ATT TTT GAC TGG GAT GAG TAC AGT CTC GAT TTA TGT AGC1208
Cys Gly Val Ile Phe Asp Trp Asp Glu Tyr Ser Leu Asp Leu CysSer
6065
GAT ATC AAT CAG CTT AAT GAA TAT CTC CCG CTT TAT GCC TTC ATC AAC12 56
Asp Ile Asn Gin Leu Asn Glu Tyr Leu Pro Leu Tyr Ala Phe IleAsn
7580
ACC CAC TCG ACG ATG GAT GTC AGC GTG CAG GAT ATG CGG ATG GCG CTC1304
Thr His Ser Thr Met Asp Val Ser Val Gin Asp Met Arg Met AlaLeu
90 95100
TGG TTT TTT GAA TAT GCG CTG GGG CAG GCG GAA GAT ATC GCC ATT CGT1352
Trp Phe Phe Glu Tyr Ala Leu Gly Gin Ala Glu Asp Ile Ala IleArg
105 110115
ATG CGT CAG TAC ACC GAC GAA TAT CTT GAT AAC ATT ACA CCG CCG TTC1400
Met Arg Gin Tyr Thr Asp Glu Tyr Leu Asp Asn Ile Thr Pro ProPhe
120 125130
ACG AAA GCC TTG TTT ACC TAC GTC AAA GAG CGG AAG TAC ACC TTT TGT1448
Thr Lys Ala Leu Phe Thr Tyr Val Lys Glu Arg Lys Tyr Thr PheCys
135 140145
ACG CCG GGG CAT ATG GGC GGC ACC GCA TAT CAA AAA AGC CCG GTT GGC1496
Thr Pro Gly His Met Gly Gly Thr Ala Tyr Gin Lys Ser Pro ValGly
150 155160
TGT CTG TTT TAT GAT TTT TTC GGC GGG AAT ACT CTT AAG GCT GAT GTC1544
Cys Leu Phe Tyr Asp Phe Phe Gly Gly Asn Thr Leu Lys Ala AspVal
165 170 175180
TCT ATT TCG GTC ACC GAG CTT GGT TCG TTG CTC GAC CAC ACC GGG CCA15 92
Ser Ile Ser Val Thr Glu Leu Gly Ser Leu Leu Asp His Thr GlyPro
185 190195
CAC CTG GAA GCG GAA GAG TAC ATC GCG CGG ACT TTT GGC GCG GAA CAG1640
His Leu Glu Ala Glu Glu Tyr Ile Ala Arg Thr Phe Gly Ala GluGin
200 205210
AGT TAT ATC GTT ACC AAC GGA ACA TCG ACG TCG AAC AAA ATT GTG GGT1688
Ser Tyr Ile Val Thr Asn Gly Thr Ser Thr Ser Asn Lys Ile ValGly
215 220225
ATG TAC GCC GCG CCA TCC GGC AGT ACG CTG TTG ATC GAC CGC AAT TGT1736
Met Tyr Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Leu Leu Ile Asp Arg AsnCys
230 235240
CAT AAA TCG CTG GCG CAT CTG TTG ATG ATG AAC GAT GTA GTG CCA GTC1784
His Lys Ser Leu Ala His Leu Leu Met Met Asn Asp Val Val ProVal
245 250 255260
TGG CTG AAA CCG ACG CGT AAT GCG TTG GGG ATT CTT GGT GGG ATC CCG1832
Trp Leu Lys Pro Thr Arg Asn Ala Leu Gly Ile Leu Gly Gly IlePro
265 270275
CGC CGT GAA TTT ACT CGC GAC AGC ATC GAA GAG AAA GTC GCT GCT ACC1880
Arg Arg Glu Phe Thr Arg Asp Ser Ile Glu Glu Lys Val Ala AlaThr
280 285290
ACG CAA GCA CAA TGG CCG GTT CAT GCG GTG ATC ACC AAC TCC ACC TAT192 8
Thr Gin Ala Gin Trp Pro Val His Ala Val Ile Thr Asn Ser ThrTyr
295 300305
182 903
GAT GGC TTG CTC TAC AAC ACC GAC TGG ATC AAA CAG ACG CTG GAT GTC 1976 Asp Gly Leu Leu Tyr Asn Thr Asp Trp Ile Lys Gin Thr Leu Asp Val 310 315320
CCG TCG ATT CAC TTC GAT TCT GCC TGG GTG CCG TAC ACC CAT TTT CAT2024
Pro Ser Ile His Phe Asp Ser Ala Trp Val Pro Tyr Thr His PheHis
325 330 335340
CCG ATC TAC CAG GGT AAA AGT GGT ATG AGC GGC GAG CGT GTT GCG GGA2072
Pro Ile Tyr Gin Gly Lys Ser Gly Met Ser Gly Glu Arg Val AlaGly
345 350355
AAA GTG ATC TTC GAA ACG CAA TCG ACC CAC AAA ATG CTG GCG GCG TTA2120
Lys Val Ile Phe Glu Thr Gin Ser Thr His Lys Met Leu Ala AlaLeu
360 365370
TCG CAG GCT TCG CTG ATC CAC ATT AAA GGC GAG TAT GAC GAA GAG GCC2168
Ser Gin Ala Ser Leu Ile His Ile Lys Gly Glu Tyr Asp Glu GluAla
375 380385
TTT AAC GAA GCC TTT ATG ATG CAT ACC ACC ACC TCG CCC AGT TAT CCC2216
Phe Asn Glu Ala Phe Met Met His Thr Thr Thr Ser Pro Ser TyrPro
390 395400
ATT GTT GCT TCG GTT GAG ACG GCG GCG GCG ATG CTG CGT GGT AAT CCG2264
Ile Val Ala Ser Val Glu Thr Ala Ala Ala Met Leu Arg Gly AsnPro
405 410 415420
GGC AAA CGG CTG ATT AAC CGT TCA GTA GAA CGA GCT CTG CAT TTT CGC2312
Gly Lys Arg Leu Ile Asn Arg Ser Val Glu Arg Ala Leu His PheArg
425 430435
AAA GAG GTC CAG CGG CTG CGG GAA GAG TCT GAC GGT TGG TTT TTC GAT2360
Lys Glu Val Gin Arg Leu Arg Glu Glu Ser Asp Gly Trp Phe PheAsp
440 445450
ATC TGG CAA CCG CCG CAG GTG GAT GAA GCC GAA TGC TGG CCC GTT GCG2408
Ile Trp Gin Pro Pro Gin Val Asp Glu Ala Glu Cys Trp Pro ValAla
455 460465
CCT GGC GAA CAG TGG CAC GGC TTT AAC GAT GCG GAT GCC GAT CAT ATG2456
Pro Gly Glu Gin Trp His Gly Phe Asn Asp Ala Asp Ala Asp HisMet
470 475480
TTT CTC GAT CCG GTT AAA GTC ACT ATT TTG ACA CCG GGG ATG GAC GAG2504
Phe Leu Asp Pro Val Lys Val Thr Ile Leu Thr Pro Gly Met AspGlu
485 490 495500
CAG GGC AAT ATG AGC GAG GAG GGG ATC CCG GCG GCG CTG GTA GCA AAA2552
Gin Gly Asn Met Ser Glu Glu Gly Ile Pro Ala Ala Leu Val AlaLys
505 510515
TTC CTC GAC GAA CGT GGG ATC GTA GTA GAG AAA ACC GGC CCT TAT AAC2600
Phe Leu Asp Glu Arg Gly Ile Val Val Glu Lys Thr Gly Pro TyrAsn
520 525530
CTG CTG TTT CTC TTT AGT ATT GGC ATC GAT AAA ACC AAA GCA ATG GGA2648
Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ile Gly Ile Asp Lys Thr Lys Ala MetGly
535 540545
TTA TTG CGT GGG TTG ACG GAA TTC AAA CGC TCT TAC GAT CTC AAC CTG2696
Leu Leu Arg Gly Leu Thr Glu Phe Lys Arg Ser Tyr Asp Leu AsnLeu
550 555560
CGG ATC AAA AAT ATG CTA CCC GAT CTC TAT GCA GAA GAT CCC GAT TTC2744
Arg Ile Lys Asn Met Leu Pro Asp Leu Tyr Ala Glu Asp Pro AspPhe
565 570 575580
182 903
TAC CGC AAT ATG Met CAC His 600 CGT ATT CAG GAT CTG GCA CAA GGG Gly CGG Arg ATC CAT AAG Lys 595 GAT Asp CTG Leu ACT Thr 2792 2840
Tyr Arg ATT CGT Ile Arg Asn AAA Lys Arg 585 GAT Asp Ile Gin Asp Leu Ala Gin 590 Ile GCA Ala His TTC Phe 610
CTT CCC GGT TTG ATG TTG
Leu Pro Gly Leu 605 Met Leu
TTG CCG GAG ATG ATC ATG ACG CCA CAT CAG GCA TGG CAA CGA CAA ATT 2888
Leu Pro Glu Met Ile Met Thr Pro His Gin Ala Trp Gin Arg Gin Ile
615 620 625
AAA GGC GAA GTA GAA ACC ATT GCG CTG GAA CAA CTG GTC GGT AGA GTA 2936
Lys Gly Glu Val Glu Thr Ile Ala Leu Glu Gin Leu Val Gly Arg Val
630 635 640
TCG GCA AAT ATG ATC CTG CCT TAT CCA CCG GGC GTA CCG CTG TTG ATG 2984
Ser Ala Asn Met Ile Leu Pro Tyr Pro Pro Gly Val Pro Leu Leu Met
645 650 655 660
CCT GGA GAA ATG CTG ACC AAA GAG AGC CGC ACA GTA CTC GAT TTT CTA 3032
Pro Gly Glu Met Leu Thr Lys Glu Ser Arg Thr Val Leu Asp Phe Leu
665 670 675
CTG ATG CTT TGT TCC GTC GGG CAA CAT TAC CCC GGT TTT GAA ACG GAT 3080
Leu Met Leu Cys Ser Val Gly Gin His Tyr Pro Gly Phe Glu Thr Asp
680 685 690
ATT CAC GGC GCG AAA CAG GAC GAA GAC GGC GTT TAC CGC GTA CGA GTC 3128
Ile His Gly Ala Lys Gin Asp Glu Asp Gly Val Tyr Arg Val Arg Val
695 700 705
CTA AAA ATG GCG GGA TAACTTGCCA GAGCGGCTTC CGGGCGAGTA ACGTTCTGTT 3183 Leu Lys Met Ala Gly
710
AACAAATAAA GGAGACGTTA TGCTGGGTTT AAAACAGGTT CACCATATTG CGATTATTGC 3243
GACGGATTAT GCGGTGAGCA AAGCTT 3269 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI O NUMERZE IDENTYFIKACYJNYM: 4:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 713 aminokwasów (B) TYP: aminokwasowa (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA O NUMERZE
IDENTYFIKACYJNYM: 4:
Met Asn Ile Ile Ala Ile Met Gly Pro His Gly Val Phe Tyr Lys Asp
1015
Glu Pro Ile Lys Glu Leu Glu Ser Ala Leu Val Ala Gin Gly Phe Gin
2530
Ile Ile Trp Pro Gin Asn Ser Val Asp Leu Leu Lys Phe Ile Glu His
4045
182 903
Asn Pro Arg Ile 50 Cys Gly Val 55 Ile Phe Asp Trp Asp Glu Tyr 60 Ser Leu
Asp 65 Leu Cys Ser Asp Ile Asn 70 Gin Leu Asn Glu Tyr Leu Pro 75 Leu Tyr 80
Ala Phe Ile Asn Thr 85 His Ser Thr Met Asp Val Ser Val Gin 90 Asp 95 Met
Arg Met Ala Leu 100 Trp Phe Phe Glu Tyr 105 Ala Leu Gly Gin Ala 110 Glu Asp
Ile Ala Ile Arg 115 Met Arg Gin Tyr 120 Thr Asp Glu Tyr Leu Asp 125 Asn Ile
Thr Pro Pro Phe 130 Thr Lys Ala 135 Leu Phe Thr Tyr Val Lys Glu 140 Arg Lys
Tyr 145 Thr Phe Cys Thr Pro Gly 150 His Met Gly Gly Thr Ala Tyr 155 Gin Lys 160
Ser Pro Val Gly Cys 165 Leu Phe Tyr Asp Phe Phe Gly Gly Asn 170 Thr 175 Leu
Lys Ala Asp Val 180 Ser Ile Ser Val Thr 185 Glu Leu Gly Ser Leu 190 Leu Asp
His Thr Gly Pro 195 ' His Leu Glu Ala 200 Glu Glu Tyr Ile Ala Arg 205 Thr Phe
Gly Ala Glu Gin Ser Tyr Ile Val Thr Asn Gly Thr Ser Thr Ser Asn 210 215220
Lys Ile Val Gly Met Tyr Ala Ala Pro Ser Gly Ser Thr Leu LeuIle
225 230 235240
Asp Arg Asn Cys His Lys Ser Leu Ala His Leu Leu Met Met AsnAsp
245 250255
Val Val Pro Val Trp Leu Lys Pro Thr Arg Asn Ala Leu Gly Ile Leu 260 265270
Gly Gly Ile Pro Arg Arg Glu Phe Thr Arg Asp Ser Ile Glu Glu Lys 275 280285
Val Ala Ala Thr Thr Gin Ala Gin Trp Pro Val His Ala Val Ile Thr 290 295300
Asn Ser Thr Tyr Asp Gly Leu Leu Tyr Asn Thr Asp Trp Ile LysGin
305 310 315320
Thr Leu Asp Val Pro Ser Ile His Phe Asp Ser Ala Trp Val ProTyr
325 330335
Thr His Phe His Pro Ile Tyr Gin Gly Lys Ser Gly Met Ser Gly Glu 340 345350
Arg Val Ala Gly Lys Val Ile Phe Glu Thr Gin Ser Thr His Lys Met 355 360365
Leu Ala Ala Leu Ser Gin Ala Ser Leu Ile His Ile Lys Gly Glu Tyr 370 375380
Asp Glu Glu Ala Phe Asn Glu Ala Phe Met Met His Thr Thr ThrSer
385 390 395400
Pro Ser Tyr Pro Ile Val Ala Ser Val Glu .Thr Ala Ala Ala MetLeu
405 410415
Arg Gly Asn Pro Gly Lys Arg Leu Ile Asn Arg Ser Val Glu Arg Ala 420 425430
Leu His Phe Arg Lys Glu Val Gin Arg Leu Arg Glu Glu Ser Asp Gly 435 440445
Trp Phe Phe Asp Ile Trp Gin Pro Pro Gin Val Asp Glu Ala Glu Cys 450 455460
Trp Pro Val Ala Pro Gly Glu Gin Trp His Gly Phe Asn Asp Ala Asp 465 470 475480
182 903
Ala Asp His Met Phe Leu Asp Pro 485
Gly Met Asp Glu Gin Gly Asn Met 500
Leu Val Ala Lys Phe Leu Asp Glu
515520
Gly Pro Tyr Asn Leu Leu Phe Leu 530535
Lys Ala Met Gly Leu Leu Arg Gly 545550
Asp Leu Asn Leu Arg Ile Lys Asn 565
Asp Pro Asp Phe Tyr Arg Asn Met 580
Ile His Lys Leu Ile Arg Lys His 595600
Ala Phe Asp Thr Leu Pro Glu Met 610615
Gin Arg Gin Ile Lys Gly Glu Val 625630
Val Gly Arg Val Ser Ala Asn Met 645
Pro Leu Leu Met Pro Gly Glu Met 660
Leu Asp Phe Leu Leu Met Leu Cys 675680
Phe Glu Thr Asp Ile His Gly Ala 690695
Arg Val Arg Val Leu Lys Met Ala 705710
Val Lys Val Thr Ile Leu Thr Pro 490495
Ser Glu Glu Gly Ile Pro Ala Ala 505510
Arg Gly Ile Val Val Glu Lys Thr 525
Phe Ser Ile Gly Ile Asp Lys Thr 540
Leu Thr Glu Phe Lys Arg Ser Tyr 555560
Met Leu Pro Asp Leu Tyr Ala Glu 570575
Arg Ile Gin Asp Leu Ala Gin Gly 585590
Asp Leu Pro Gly Leu Met Leu Arg 605
Ile Met Thr Pro His Gin Ala Trp 620
Glu Thr Ile Ala Leu Glu Gin Leu 635640
Ile Leu Pro Tyr Pro Pro Gly Val 650655
Leu Thr Lys Glu Ser Arg Thr Val
665670
Ser Val Gly Gin His Tyr Pro Gly 685
Lys Gin Asp Glu Asp Gly Val Tyr 700
Gly (2) INFORMACJA O SEKWENCJI O NUMERZE IDENTYFIKACYJNYM: 5:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 2145 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) ILOŚĆ NICI: dwie (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: DNA genomowy (iii) HIPOTETYCZNY: NIE (iv) ANTYSENSOWNY: NIE (vi) ŹRÓDŁO ORYGINALNE:
182 903 (A) ORGANIZM: Escherichia coli (B) SZCZEP: CS520 (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: CDS (B) POŁOŻENIE: 1..2145 (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA O NUMERZE
IDENTYFIKACYJNYM: 5:
ATG AAC GTT ATT GCA ATA TTG AAT CAC ATG GGG GTT TAT TTT AAA GAA 48
Met Asn Val Ile Ala Ile Leu Asn His Met Gly Val Tyr Phe Lys Glu
1 5 10 15
GAA CCC ATC CGT GAA CTT CAT CGC GCG CTT GAA CGT CTG AAC TTC CAG 96
Glu Pro Ile Arg Glu Leu His Arg Ala Leu Glu Arg Leu Asn Phe Gin
20 25 30
ATT GTT TAC CCG AAC GAC CGT GAC GAC TTA TTA AAA CTG ATC GAA AAC 144
Ile Val Tyr Pro Asn Asp Arg Asp Asp Leu Leu Lys Leu Ile Glu Asn
35 40 45
AAT GCG CGT CTG TGC GGC GTT ATT TTT GAC TGG GAT AAA TAT AAT CTC 192
Asn Ala Arg Leu Cys Gly Val Ile Phe Asp Trp Asp Lys Tyr Asn Leu
50 55 60
GAG CTG TGC GAA GAA ATT AGC AAA ATG AAC GAG AAC CTG CCG TTG TAC 240
Glu Leu Cys Glu G1U Ile Ser Lys Met Asn Glu Asn Leu Pro Leu Tyr
65 70 75 80
GCG TTC GCT AAT ACG TAT TCC ACT CTC GAT GTA AGC CTG AAT GAC CTG 288
Ala Phe Ala Asn Thr Tyr Ser Thr Leu Asp Val Ser Leu Asn Asp Leu
85 90 95
CGT TTA CAG ATT AGC TTC TTT GAA TAT GCG CTG GGT GCT GCT GAA GAT 336
Arg Leu Gin Ile Ser Phe Phe Glu Tyr Ala Leu Gly Ala Ala Glu Asp
100 105 110
ATT GCT AAT AAG ATC AAG CAG ACC ACT GAC GAA TAT ATC AAC ACT ATT 384
Ile Ala Asn Lys Ile Lys Gin Thr Thr Asp Glu Tyr Ile Asn Thr Ile
115 120 125
CTG CCT CCG CTG ACT AAA GCA CTG TTT AAA TAT GTT CGT GAA GGT ΑΆΑ 432
Leu Pro Pro Leu Thr Lys Ala Leu Phe Lys Tyr Val Arg Glu Gly Lys
130 135 140
TAT ACT TTC TGT ACT CCT GGT CAC ATG GGC GGT ACT GCA TTC CAG AAA 480
Tyr Thr Phe Cys Thr Pro Gly His Met Gly Gly Thr Ala Phe Gin Lys
145 150 155 160
AGC CCG GTA GGT AGC CTG TTC TAT GAT TTC TTT GGT CCG AAT ACC ATG 528
Ser Pro Val Gly Ser Leu Phe Tyr Asp Phe Phe Gly Pro Asn Thr Met
165 17 0 175
AAA TCT GAT ATT TCC ATT TCA GTA TCT GAA CTG GGT TCT CTG CTG GAT 576
Lys Ser Asp Ile Ser Ile Ser Val Ser Glu Leu Gly Ser Leu Leu Asp
180 185 190
CAC AGT GGT CCA CAC AAA GAA GCA GAA CAG TAT ATC GCT CGC GTC TTT 624
His Ser Gly Pro His Lys Glu Ala Glu Gin Tyr Ile Ala Arg Val Phe
195 200 205
182 903
AAC GCA GAC CGC AGC TAC ATG GTG ACC AAC GGT ACT TCC ACT GCG AAC 672
Asn Ala Asp Arg Ser Tyr ' Met ' Val Thr Asn Gly Thr Ser Thr Ala . Asn
210 215 220
AAA ATT GTT GGT ATG TAC TCT GCT CCA GCA GGC AGC ACC ATT CTG ATT 720
Lys Ile Val Gly Met Tyr Ser Ala Pro Ala Gly Ser Thr Ile Leu Ile
225 230 235 240
GAC CGT AAC TGC CAC AAA TCG CTG ACC CAC CTG ATG ATG ATG AGC GAT 768
Asp Arg Asn Cys His Lys Ser Leu Thr His Leu Met Met Met Ser Asp
245 250 255
GTT ACG CCA ATC TAT TTC CGC CCG ACC CGT AAC GCT TAC GGT ATT CTT 816
Val Thr Pro Ile Tyr Phe Arg Pro Thr Arg Asn Ala Tyr Gly Ile Leu
260 265 270
GGT GGT ATC CCA CAG AGT GAA TTC CAG CAC GCT ACC ATT GCT AAG CGC 864
Gly Gly Ile Pro Gin Ser Glu Phe Gin His Ala Thr Ile Ala Lys Arg
275 280 285
GTG AAA GAA ACA CCA AAC GCA ACC TGG CCG GTA CAT GCT GTA ATT ACC 912
Val Lys Glu Thr Pro Asn Ala Thr Trp Pro Val His Ala Val Ile Thr
290 295 300
AAC TCT ACC TAT GAT GGT CTG CTG TAC AAC ACC GAC TTC ATC AAG AAA 960
Asn Ser Thr Tyr Asp Gly Leu Leu Tyr Asn Thr Asp Phe Ile Lys Lys
305 310 315 320
ACA CTG GAT GTG AAA TCC ATC CAC TTT GAC TCC GCG TGG GTG CCT TAC 1008
Thr Leu Asp Val Lys Ser Ile His Phe Asp Ser Ala Trp Val Pro Tyr
325 330 335
ACC AAC TTC TCA CCG ATT TAC GAA GGT AAA TGC GGT ATG AGC GGT GGC 1056
Thr Asn Phe Ser Pro Ile Tyr Glu Gly Lys Cys Gly Met Ser Gly Gly
340 345 350
CGT GTA GAA GGG AAA GTG ATT TAC GAA ACC CAG TCC ACT CAC AAA CTG 1104
Arg Val Glu Gly Lys Val Ile Tyr Glu Thr Gin Ser Thr His Lys Leu
355 360 365
CTG GCG GCG TTC TCT CAG GCT TCC ATG ATC CAC GTT AAA GGT GAC GTA 1152
Leu Ala Ala Phe Ser Gin Ala Ser Met Ile His Val Lys Gly Asp Val
370 375 380
AAC GAA GAA ACC TTT AAC GAA GCC TAC ATG ATG CAC ACC ACC ACT TCT 1200
Asn Glu Glu Thr Phe Asn Glu Ala Tyr Met Met His Thr Thr Thr Ser
385 390 395 400
CCG CAC TAC GGT ATC GTG GCG TCC ACT GAA ACC GCT GCG GCG ATG ATG 1248
Pro His Tyr Gly Ile Val Ala Ser Thr Glu Thr Ala Ala Ala Met Met
405 410 415
AAA GGC AAT GCA GGT AAG CGT CTG ATC AAC GGT TCT ATT GAA CGT GCG 1296
Lys Gly Asn Ala Gly Lys Arg Leu Ile Asn Gly Ser Ile Glu Arg Ala
420 425 430
ATC AAA TTC CGT AAA GAG ATC ΆΆΆ CGT CTG AGA ACG GAA TCT GAT GGC 1344
Ile Lys Phe Arg Lys Glu Ile Lys Arg Leu Arg Thr Glu Ser Asp Gly
435 440 445
TGG TTC TTT GAT GTA TGG CAG CCG GAT CAT ATC GAT ACG ACT GAA TGC 1392
Trp Phe Phe Asp Val Trp Gin Pro Asp His Ile Asp Thr Thr Glu Cys
450 455 460
TGG CCG CTG CGT TCT GAC AGC ACC TGG CAC GGC TTC AAA AAC ATC GAT 1440
Trp Pro Leu Arg Ser Asp Ser Thr Trp His Gly Phe Lys Asn Ile Asp
465 470 475 480
182 903
AAC GAG CAC ATG TAT CTT GAC CCG ATC AAA GTC ACC CTG CTG ACT CCG1488
Asn Glu His Met Tyr Leu Asp Pro Ile Lys Val Thr Leu Leu ThrPro
485 490495
GGG ATG GAA AAA GAC GGC ACC ATG AGC GAC TTT GGT ATT CCG GCC AGC153 6
Gly Met Glu Lys Asp Gly Thr Met Ser Asp Phe Gly Ile Pro AlaSer
500 505510
ATC GTG GCG AAA TAC CTC GAC GAA CAT GGC ATC GTT GTT GAG AAA ACC1584
Ile Val Ala Lys Tyr Leu Asp Glu His Gly Ile Val Val Glu LysThr
515 520525
GGT CCG TAT AAC CTG CTG TTC CTG TTC AGC ATC GGT ATC GAT AAG ACC1632
Gly Pro Tyr Asn Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ile Gly Ile Asp LysThr
530 535540
AAA GCA CTG AGC CTG CTG CGT GCT CTG ACT GAC TTT AAA CGT GCG TTC1680
Lys Ala Leu Ser Leu Leu Arg Ala Leu Thr Asp Phe Lys Arg AlaPhe
545 550 555560
GAC CTG AAC CTG CGT GTG AAA AAC ATG CTG CCG TCT CTG TAT CGT GAA1728
Asp Leu Asn Leu Arg Val Lys Asn Met Leu Pro Ser Leu Tyr ArgGlu
565 570575
GAT CCT GAA TTC TAT GAA AAC ATG CGT ATT CAG GAA CTG GCT CAG AAT1776
Asp Pro Glu Phe Tyr Glu Asn Met Arg Ile Gin Glu Leu Ala GinAsn
580 585590
ATC CAC AAA CTG ATT GTT CAC CAC AAT CTG CCG GAT CTG ATG TAT CGC1824
Ile His Lys Leu Ile Val His His Asn Leu Pro Asp Leu Met TyrArg
595 600605
GCA TTT GAA GTG CTG CCG ACG ATG GTA ATG ACT CCG TAT GCT GCA TTC1872
Ala Phe Glu Val Leu Pro Thr Met Val Met Thr Pro Tyr Ala AlaPhe
610 615620
CAG AAA GAG CTG CAC GGT ATG ACC GAA GAA GTT TAC CTC GAC GAA ATG1920
Gin Lys Glu Leu His Gly Met Thr Glu Glu Val Tyr Leu Asp GluMet
625 630 635640
GTA GGT CGT ATT AAC GCC AAT ATG ATC CTT CCG TAC CCG CCG GGA GTT1968
Val Gly Arg Ile Asn Ala Asn Met Ile Leu Pro Tyr Pro Pro GlyVal
645 650655
CCT CTG GTA ATG CCG GGT GAA ATG ATC ACC GAA GAA AGC CGT CCG GTT2016
Pro Leu Val Met Pro Gly Glu Met Ile Thr Glu Glu Ser Arg ProVal
660 665670
CTG GAG TTC CTG CAG ATG CTG TGT GAA ATC GGC GCT CAC TAT CCG GGC2064
Leu Glu Phe Leu Gin Met Leu Cys Glu Ile Gly Ala His Tyr ProGly
675 680685
TTT GAA ACC GAT ATT CAC GGT GCA TAC CGT CAG GCT GAT GGC CGC TAT2112
Phe Glu Thr Asp Ile His Gly Ala Tyr Arg Gin Ala Asp Gly ArgTyr
690 695700
ACC GTT AAG GTA TTG AAA GAA GAA AGC AAA AAA2145
Thr Val Lys Val Leu Lys Glu Glu Ser Lys Lys 705 710715
182 903 (2) INFORMACJA O SEKWENCJI O NUMERZE IDENTYFIKACYJNYM: 6:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 715 aminokwasów (B) TYP: aminokwasowa (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKWENCJA O NUMERZE
IDENTYFIKACYJNYM: 6:
Met 1 Asn Val Ile Ala 5 Ile Leu Asn His Met 10 Gly Val Tyr Phe Lys 15 Glu
Glu Pro Ile Arg Glu Leu His Arg Ala Leu Glu Arg Leu Asn Phe Gin
20 25 30
Ile Val Tyr Pro Asn Asp Arg Asp Asp Leu Leu Lys Leu Ile Glu Asn
35 40 45
Asn Ala Arg Leu Cys Gly Val Ile Phe Asp Trp Asp Lys Tyr Asn Leu
50 55 60
Glu Leu Cys Glu Glu Ile Ser Lys Met Asn Glu Asn Leu Pro Leu Tyr
65 70 75 80
Ala Phe Ala Asn Thr Tyr Ser Thr Leu Asp Val Ser Leu Asn Asp Leu
85 90 95
Arg Leu Gin Ile Ser Phe Phe Glu Tyr Ala Leu Gly Ala Ala Glu Asp
100 105 110
Ile Ala Asn Lys Ile Lys Gin Thr Thr Asp Glu Tyr Ile Asn Thr Ile
115 120 125
Leu Pro Pro Leu Thr Lys Ala Leu Phe Lys Tyr Val Arg Glu Gly Lys
130 135 140
Tyr Thr Phe Cys Thr Pro Gly His Met Gly Gly Thr Ala Phe Gin Lys
145 150 155 160
Ser Pro Val Gly Ser Leu Phe Tyr Asp Phe Phe Gly Pro Asn Thr Met
165 170 175
Lys Ser Asp Ile Ser Ile Ser Val Ser Glu Leu Gly Ser Leu Leu Asp
180 185 190
His Ser Gly Pro His Lys Glu Ala Glu Gin Tyr Ile Ala Arg Val Phe
195 200 205
Asn Ala Asp Arg Ser Tyr Met Val Thr Asn Gly Thr Ser Thr Ala Asn
210 215 220
Lys Ile Val Gly Met Tyr Ser Ala Pro Ala Gly Ser Thr Ile Leu Ile
225 230 235 240
Asp Arg Asn Cys His Lys Ser Leu Thr His Leu Met Met Met Ser Asp
245 250 255
Val Thr Pro Ile Tyr Phe Arg Pro Thr Arg Asn Ala Tyr Gly Ile Leu
260 265 270
Gly Gly Ile Pro Gin Ser Glu Phe Gin His Ala Thr Ile Ala Ly Arg
275 280 285
Val Lys Glu Thr Pro Asn Ala Thr Trp Pro Val His Ala Val Ile Thr
290 295 300
182 903
Asn Ser Thr Tyr Asp Gly Leu Leu Tyr Asn Thr Asp Phe Ile Lys Lys
305 310 315 320
Thr Leu . Asp Val Lys 325 Ser Ile His Phe . Asp 330 Ser . Ala Trp Val Pro 335 Tyr
Thr Asn Phe Ser 340 Pro Ile Tyr Glu Gly 345 Lys Cys Gly Met Ser 350 Gly Gly
Arg Val Glu 355 Gly Lys Val Ile Tyr 360 Glu Thr Gin Ser Thr 365 His Lys Leu
Leu Ala 370 Ala Phe Ser Gin Ala 375 Ser Met Ile His Val 380 Lys Gly Asp Val
Asn 385 Glu Glu Thr Phe Asn 390 Glu Ala Tyr Met Met 395 His Thr Thr Thr Ser 400
Pro His Tyr Gly Ile 405 Val Ala Ser Thr Glu 410 Thr Ala Ala Ala Met 415 Met
Lys Gly Asn Ala 420 Gly Lys Arg Leu Ile 425 Asn Gly Ser Ile Glu 430 Arg Ala
Ile Lys Phe 435 Arg Lys Glu Ile Lys 440 Arg Leu Arg Thr Glu 445 Ser Asp Gly
Trp Phe 450 Phe Asp Val Trp Gin 455 Pro Asp His Ile Asp 460 Thr Thr Glu Cys
Trp 465 Pro Leu Arg Ser Asp 470 Ser Thr Trp His Gly 475 Phe Lys Asn Ile Asp 480
Asn Glu His Met Tyr 485 Leu Asp Pro Ile Lys 490 Val Thr Leu Leu Thr 495 Pro
Gly Met Glu Lys 500 Asp Gly Thr Met Ser 505 Asp Phe Gly Ile Pro 510 Ala Ser
Ile Val Ala 515 Lys Tyr Leu Asp Glu 520 His Gly Ile Val Val 525 Glu Lys Thr
Gly Pro 530 Tyr Asn Leu Leu Phe 535 Leu Phe Ser Ile Gly 540 Ile Asp Lys Thr
Lys 545 Ala Leu Ser Leu Leu 550 Arg Ala Leu Thr Asp 555 Phe Lys Arg Ala Phe 560
Asp Leu Asn Leu Arg 565 Val Lys Asn Met Leu 570 Pro Ser Leu Tyr Arg 575 Glu
Asp Pro Glu Phe 580 Tyr Glu Asn Met Arg 585 Ile Gin Glu Leu Ala 590 Gin Asn
Ile His Lys 595 Leu Ile Val His His 600 Asn Leu Pro Asp Leu 605 Met Tyr Arg
Ala Phe 610 Glu Val Leu Pro Thr 615 Met Val Met Thr Pro 620 Tyr Ala Ala Phe
Gin 625 Lys Glu Leu His Gly 630 Met Thr Glu Glu Val 635 Tyr Leu Asp Glu Met 640
Val Gly Arg Ile Asn 645 Ala Asn Met Ile Leu 650 Pro Tyr Pro Pro Gly 655 Val
Pro Leu Val Met 660 Pro Gly Glu Met Ile 665 Thr Glu Glu Ser Arg 67 0 Pro Val
Leu Glu Phe 675 Leu Gin Met Leu Cys 680 Glu Ile Gly Ala His 685 Tyr Pro Gly
Phe Thr 705 Glu 690 Val Thr Lys Asp Val Ile Leu His Lys 710 Gly 695 Glu Ala Glu Tyr Ser Arg Lys Gin Lys 715 Ala 700 Asp Gly Arg Tyr
182 903
182 903
FIG.3
Η— WC196LC
WC196L «— WC196C
WC196
O 10 20 30 40
Czas hodowli (godziny)
182 903
FIG.l
Region o określonej sekwencji nukieotydowej
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 60 egz. Cena 4,00 zł.

Claims (23)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Gen, znamienny tym, że koduje dekarboksylazę lizynowąobejmującąsekwencję aminokwasową oznaczoną nr 4 w Liście Sekwencji.
  2. 2. Gen według zastrz. 1, znamienny tym, że obejmuje sekwencję nukleotydowąod kodu w pozycji 1005 do kodu w pozycji 3143 oznaczoną nr 3 w Liście Sekwencji.
  3. 3. Gen według zastrz. 1, znamienny tym, że koduje sekwencję aminokwasową posiadającąpodstawienie, delecję lub insercję jednej lub wielu reszt aminokwasowych przy zachowaniu aktywności dekarboksylazy lizynowej.
  4. 4. Mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia, znamienny tym, że:
    posiada delecję genu typu dzikiego kodującego dekarboksylazę lizynowątypu dzikiego oraz posiada zmutowany gen typu dzikiego kodujący dekarboksylazę lizynową typu dzikiego, który koduje zmutowanądekarboksylazę lizynowątypu dzikiego bez aktywności dekarboksylującej, albo koduje zmutowanądekarboksylazę lizynowątypu dzikiego o zredukowanej aktywności dekarboksylującej, albo posiada mutację redukującą wytwarzanie dekarboksylazy lizynowej typu dzikiego przez mikroorganizm, przy czym dekarboksyłaza typu dzikiego obejmuje sekwencję aminokwasową oznaczoną nr 4 w Liście Sekwencji.
  5. 5. Mikroorganizm według zastrz. 4, znamienny tym, że posiada zmutowany gen typu dzikiego, który posiada mutację redukującą wytwarzanie dekarboksylazy lizynowej typu dzikiego przez mikroorganizm.
  6. 6. Mikroorganizm według zastrz. 4, znamienny tym, że jest nim Escherichia coli.
  7. 7. Mikroorganizm według zastrz. 4, znamienny tym, że gen typu dzikiego obejmuje sekwencję nukleotydowąod kodu w pozycji 1005 do kodu w pozycji 3143 oznaczoną nr 3 w Liście Sekwencji.
  8. 8. Mikroorganizm według zastrz. 4, znamienny tym, że posiada zmutowany gen, który koduje zmutowanądekarboksylazę lizynowątypu dzikiego bez aktywności dekarboksylującej.
  9. 9. Mikroorganizm według zastrz. 4, znamienny tym, że posiada zmutowany gen, który koduje zmutowanądekarboksylazę lizynowątypu dzikiego o zredukowanej aktywności dekarboksylującej.
  10. 10. Mikroorganizm według zastrz. 4, znamienny tym, że dodatkowo posiada delecję drugiego genu typu dzikiego kodującego drugą dekarboksylazę lizynową typu dzikiego posiada drugi zmutowany gen typu dzikiego kodujący drugą dekarboksylazę lizynową typu dzikiego, który koduje drugądekarboksylazę lizynowątypu dzikiego bez aktywności dekarboksylującej, albo koduje drugą zmutowaną dekarboksylazę lizynowątypu dzikiego o zredukowanej aktywności dekarboksylującej, albo posiada mutację redukującą wytwarzanie drugiej dekarboksylazy lizynowej typu dzikiego przez mikroorganizm, przy czym druga dekarboksyłaza lizynowa typu dzikiego obejmuje sekwencję aminokwasową oznaczoną nr 6 w Liście Sekwencji.
    182 903
  11. 11. Mikroorganizm według zastrz. 10, znamienny tym, że posiada drugi zmutowany gen, który posiada mutację redukującą wytwrzanie drugiej dekarboksylazy lizynowej typu dzikiego przez mikroorganizm.
  12. 12. Mikroorganizm według zastrz. 10, znamienny tym, że posiada drugi zmutowany gen, który koduje drugądekarboksylazę lizynowątypu dzikiego bez aktywności dekarboksylującej.
  13. 13. Mikroorganizm według zastrz. 10, znamienny tym, że posiada drugi zmutowany gen, który koduje drugą zmutowaną dekarboksylazę lizynowątypu dzikiego o zredukowanej aktywności dekarboksylującej.
  14. 14. Sposób wytwarzania L-lizyny, znamienny tym, że obejmuje etapy, w których a) hoduje się mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia w płynnej pożywce do wytworzenia L-lizyny, przy czym mikroorganizm ten posiada delecję genu typu dzikiego kodującego dekarboksylazę lizynowątypu dzikiego, posiada zmutowany gen typu dzikiego kodujący dekarboksylazę lizynową typu dzikiego, który koduje dekarboksylazę lizynowątypu dzikiego bez aktywności dekarboksylującej, albo koduje zmutowanądekarboksylazę lizynowątypu dzikiego o zredukowanej aktywności dekarboksylującej, albo posiada mutację redukującą wytwarzanie dekarboksylazy lizynowej typu dzikiego przez mikroorganizm, przy czym dekarboksylaza lizynową typu dzikiego obejmuje sekwencję aminokwasową oznaczoną nr 4 w Liście Sekwencji, i b) zbiera się L-lizynę wytworzoną w etapie a).
  15. 15. Sposób według zastrz. 14, znamienny tym, że hoduje się mikroorganizm, który posiada zmutowany gen typu dzikiego kodujący dekarboksylazę lizynowątypu dzikiego posiadający mutację redukującą wytwarzanie dekarboksylazy lizynowej typu dzikiego przez mikroorganizm.
  16. 16. Sposób według zastrz. 14, znamienny tym, że hoduje się mikroorganizm, który jest Escherichia coli.
  17. 17. Sposób według zastrz. 14, znamienny tym, że hoduje się mikroorganizm, w którym gen typu dzikiego obejmuje sekwencję nukleotydowąod kodu w pozycji 1005 do kodu w pozycji 3143 oznaczoną nr 3 w Liście Sekwencji.
  18. 18. Sposób według zastrz. 14, znamienny tym, że hoduje się mikroorganizm, który posiada zmutowany gen kodujący zmutowanądekarboksylazę lizynowątypu dzikiego bez aktywności dekarboksylującej.
  19. 19. Sposób według zastrz. 14, znamienny tym, że hoduje się mikroorganizm, który posiada zmutowany gen kodujący zmutowanądekarboksylazę lizynowątypu dzikiego o zredukowanej aktywność dekarboksylującej.
  20. 20. Sposób według zastrz. 14, znamienny tym, że hoduje się mikroorganizm, który dodatkowo posiada delecję drugiego gnu typu dzikiego kodującego drugądekarboksylazę lizynową typu dzikiego posiada drugi zmutowany gen typu dzikiego kodujący drugądekarboksylazę lizynową typu dzikiego, który koduje drugądekarboksylazę lizynowątypu dzikiego bez aktywności dekarboksylującej, albo koduje drugą zmutowaną dekarboksylazę lizynowątypu dzikiego o zredukowanej aktywności dekarboksylującej, albo posiada mutację redukującą wytwarzanie drugiej dekarboksylazy lizynowej typu dzikiego przez mikroorganizm, przy czym druga dekarboksylaza lizynową typu dzikiego obejmuje sekwencję aminokwasową oznaczoną nr 6 w Liście Sekwencji.
    182 903
  21. 21. Sposób według zastrz. 20, znamienny tym, że hoduje się mikroorganizm, który posiada drugi zmutowany gen posiadający mutację redukującą wytwarzanie drugiej dekarboksylazy lizynowej typu dzikiego przez mikroorganizm.
  22. 22. Sposób według zastrz. 20, znamienny tym, że hoduje się mikroorganizm, który posiada drugi zmutowany gen kodujący drugą dekarboksyłazę lizynowątypu dzikiego bez aktywności dekarboksylującej.
  23. 23. Sposób według zastrz. 20, znamienny tym, że hoduje się mikroorganizm, który posiada drugi zmutowany gen kodujący drugą zmutowaną dekarboksyłazę lizynowątypu dzikiego o zredukowanej aktywności dekarboksylującej.
    * * *
PL95320645A 1994-12-09 1995-12-05 Gen, mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia oraz sposób wytwarzania L-lizyny PL182903B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP30638694 1994-12-09
PCT/JP1995/002481 WO1996017930A1 (en) 1994-12-09 1995-12-05 Novel lysine decarboxylase gene and process for producing l-lysine

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL320645A1 PL320645A1 (en) 1997-10-13
PL182903B1 true PL182903B1 (pl) 2002-03-29

Family

ID=17956402

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL95320645A PL182903B1 (pl) 1994-12-09 1995-12-05 Gen, mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia oraz sposób wytwarzania L-lizyny

Country Status (21)

Country Link
US (1) US5827698A (pl)
EP (1) EP0796912B9 (pl)
JP (1) JP3692538B2 (pl)
KR (1) KR100420743B1 (pl)
CN (2) CN100357431C (pl)
AU (1) AU703308B2 (pl)
BR (1) BR9509896A (pl)
CA (1) CA2207271C (pl)
CZ (1) CZ290070B6 (pl)
DE (1) DE69534801T3 (pl)
DK (1) DK0796912T4 (pl)
ES (1) ES2256850T5 (pl)
HU (1) HU223706B1 (pl)
MX (1) MX9704236A (pl)
MY (1) MY113738A (pl)
PE (1) PE59996A1 (pl)
PL (1) PL182903B1 (pl)
RU (1) RU2188235C2 (pl)
SK (1) SK283478B6 (pl)
WO (1) WO1996017930A1 (pl)
ZA (1) ZA9510442B (pl)

Families Citing this family (126)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL182903B1 (pl) * 1994-12-09 2002-03-29 Ajinomoto Kk Gen, mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia oraz sposób wytwarzania L-lizyny
JP4207426B2 (ja) * 2000-01-21 2009-01-14 味の素株式会社 Ｌ−リジンの製造法
US7329514B2 (en) * 2002-02-28 2008-02-12 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing n-acetylneuraminic acid
BR0304860A (pt) * 2002-11-11 2004-08-31 Ajinomoto Kk Método para produzir uma substância alvo pela utilização de uma-bactéria pertencente ao gênero escherichia
DE60335774D1 (de) 2002-11-26 2011-03-03 Ajinomoto Kk Methode für die Produktion von L-Glutamin und L-Glutamin-produzierendes Bakterium
EP2471930A1 (de) * 2002-12-20 2012-07-04 Metanomics GmbH & Co. KGaA Verfahren zur Herstellung von Aminosäuren
JP2004254544A (ja) * 2003-02-25 2004-09-16 Ajinomoto Co Inc 新規リジンデカルボキシラーゼ遺伝子及びｌ−リジンの製造法
CN103088080B (zh) 2004-10-07 2016-02-17 味之素株式会社 生产碱性物质的方法
RU2004137719A (ru) * 2004-12-23 2006-06-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae
WO2006078039A1 (en) * 2005-01-18 2006-07-27 Ajinomoto Co., Inc. L-amino acid producing microorganism and a method for producing l-amino acid
JP2007185184A (ja) * 2005-12-16 2007-07-26 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
WO2007086618A1 (en) 2006-01-30 2007-08-02 Ajinomoto Co., Inc. L-amino acid producing bacterium and method of producing l-amino acid
JP2009095237A (ja) 2006-02-02 2009-05-07 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2009118740A (ja) 2006-03-03 2009-06-04 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
EP2351830B1 (en) 2006-03-23 2014-04-23 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an L-amino acid using bacterium of the Enterobacteriaceae family with attenuated expression of a gene coding for small RNA
JP2009060791A (ja) 2006-03-30 2009-03-26 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
WO2007119890A1 (en) 2006-04-18 2007-10-25 Ajinomoto Co., Inc. A METHOD FOR PRODUCING AN L-AMINO ACID USING A BACTERIUM OF THE ENTEROBACTERIACEAE FAMILY WITH ATTENUATED EXPRESSION OF THE sfmACDFH-fimZ CLUSTER OR THE fimZ GENE
JP2009165355A (ja) * 2006-04-28 2009-07-30 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸を生産する微生物及びｌ−アミノ酸の製造法
EP2021458A1 (en) 2006-05-23 2009-02-11 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family
CN101490251B (zh) * 2006-07-19 2016-06-29 味之素株式会社 使用肠杆菌科细菌产生l-氨基酸的方法
JP2010017081A (ja) * 2006-10-10 2010-01-28 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
EP2101811A2 (en) * 2006-12-08 2009-09-23 The Board Of Rengents Of The University Of Oklahoma Vaccine for periodontitis and methods of use
EP2094858B1 (en) * 2006-12-11 2015-02-18 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing an l-amino acid
RU2006143864A (ru) 2006-12-12 2008-06-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ cynT, cynS, cynX, ИЛИ cynR, ИЛИ ИХ КОМБИНАЦИИ
JP2010041920A (ja) 2006-12-19 2010-02-25 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
RU2006145712A (ru) * 2006-12-22 2008-06-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ получения l-аминокислот методом ферментации с использованием бактерий, обладающих повышенной способностью к утилизации глицерина
BRPI0703692B1 (pt) 2006-12-25 2016-12-27 Ajinomoto Kk método para se obter os cristais de um hidrocloreto de aminoácido básico compreendendo gerar um aminoácido básico usando células microbianas por fermentação em um caldo de fermentação ou por um método enzimático em uma solução de reação de enzima usando as células como catalisadores
WO2008090770A1 (ja) 2007-01-22 2008-07-31 Ajinomoto Co., Inc. Ｌ－アミノ酸を生産する微生物及びｌ－アミノ酸の製造法
DE102007005072A1 (de) 2007-02-01 2008-08-07 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur fermentativen Herstellung von Cadaverin
JP2010088301A (ja) * 2007-02-01 2010-04-22 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2010110217A (ja) 2007-02-22 2010-05-20 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
JP2010263790A (ja) * 2007-09-04 2010-11-25 Ajinomoto Co Inc アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法
RU2395579C2 (ru) * 2007-12-21 2010-07-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia
CN101939412B (zh) 2007-09-04 2016-01-20 味之素株式会社 生产氨基酸的微生物以及氨基酸的生产方法
EP2222693A4 (en) * 2007-12-07 2011-03-09 Univ Oklahoma State MUTANTS OF LYSINDECARBOXYLASE, VACCINES AGAINST PERIODONTITIS AND METHOD OF USE
JP2011067095A (ja) 2008-01-10 2011-04-07 Ajinomoto Co Inc 発酵法による目的物質の製造法
WO2009093703A1 (ja) 2008-01-23 2009-07-30 Ajinomoto Co., Inc. Ｌ-アミノ酸の製造法
RU2008105793A (ru) 2008-02-19 2009-08-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ конструирования оперонов, содержащих трансляционно сопряженные гены, бактерия, содержащая такой оперон, способ продукции полезного метаболита и способ мониторинга экспрессии гена
ES2510865T3 (es) 2008-03-03 2014-10-21 Global Bio-Chem Technology Group Company Limited Microorganismo recombinante y procedimiento para producir L-lisina
CN102177246B (zh) 2008-09-08 2015-02-11 味之素株式会社 生产l-氨基酸的微生物和l-氨基酸的生产方法
JP2012029565A (ja) 2008-11-27 2012-02-16 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2010142200A (ja) 2008-12-22 2010-07-01 Ajinomoto Co Inc Ｌ−リジンの製造法
WO2010084995A2 (en) 2009-01-23 2010-07-29 Ajinomoto Co.,Inc. A method for producing an l-amino acid
JP5521347B2 (ja) 2009-02-16 2014-06-11 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
DE102009030342A1 (de) 2009-06-25 2010-12-30 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur fermentativen Herstellung von organisch chemischen Verbindungen
JPWO2011013707A1 (ja) 2009-07-29 2013-01-10 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2012196144A (ja) 2009-08-03 2012-10-18 Ajinomoto Co Inc ビブリオ属細菌を用いたｌ−リジンの製造法
JP2012223092A (ja) 2009-08-28 2012-11-15 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2013013329A (ja) 2009-11-06 2013-01-24 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
RU2460793C2 (ru) 2010-01-15 2012-09-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae
RU2010101135A (ru) 2010-01-15 2011-07-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Бактерия семейства enterobacteriaceae - продуцент l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата, и способ получения l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата
JP2013074795A (ja) 2010-02-08 2013-04-25 Ajinomoto Co Inc 変異型ｒｐｓＡ遺伝子及びＬ−アミノ酸の製造法
RU2471868C2 (ru) 2010-02-18 2013-01-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) Мутантная аденилатциклаза, днк, кодирующая ее, бактерия семейства enterobacteriaceae, содержащая указанную днк, и способ получения l-аминокислот
CN102844440A (zh) * 2010-04-12 2012-12-26 东丽株式会社 1,5-戊二胺的制造方法
DE102010019059A1 (de) 2010-05-03 2011-11-03 Forschungszentrum Jülich GmbH Sensoren zur intrazellulären Metabolit-Detektion
RU2010122646A (ru) 2010-06-03 2011-12-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия генов, кодирующих транспортер лизина/аргинина/орнитина
RU2471870C2 (ru) 2010-06-03 2013-01-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА И L-ЦИТРУЛЛИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА pepA
RU2501858C2 (ru) 2010-07-21 2013-12-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae
RU2482188C2 (ru) 2010-07-21 2013-05-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ РОДА Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ОПЕРОН astCADBE
JP2014036576A (ja) 2010-12-10 2014-02-27 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
CN103492553B (zh) * 2011-02-22 2018-06-12 巴斯夫欧洲公司 用于生产尸胺的方法和重组微生物
DE102011006716A1 (de) 2011-04-04 2012-10-04 Evonik Degussa Gmbh Mikroorganismus und Verfahren zur fermentativen Herstellung einer organisch-chemischen Verbindung
BR112013027845A2 (pt) 2011-05-18 2017-01-03 Ajinomoto Kk Imunoestimulante, ração, método para produzir um imunoestimulante, e, método para imunoestimulação
DE102011118019A1 (de) 2011-06-28 2013-01-03 Evonik Degussa Gmbh Varianten des Promotors des für die Glyzerinaldehyd-3-phosphat-Dehydrogenase kodierenden gap-Gens
RU2011134436A (ru) 2011-08-18 2013-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, обладающей повышенной экспрессией генов каскада образования флагелл и клеточной подвижности
JP2015013812A (ja) 2011-11-01 2015-01-22 味の素株式会社 植物ウイルスの感染抑制剤およびそれを用いた植物ウイルス感染抑制方法
MY171302A (en) * 2011-12-21 2019-10-08 Cj Cheiljedang Corp Method for producing l-lysine using microorganisms having ability to produce l-lysine
CN104302765B (zh) 2012-04-27 2018-09-11 赢创工业化学有限公司 反馈抗性α-异丙基苹果酸合酶
DE102012024435A1 (de) 2012-12-14 2014-07-10 Forschungszentrum Jülich GmbH Verfahren zur Identifizierung einer Zelle mit gegenüber ihrem Wildtyp erhöhten intrazellulären Konzentration eines bestimmten Metaboliten, wobei die Veränderung der Zelle durch Rekombi-neering erreicht wird, sowie ein Verfahren zur Herstellung einer gegenüber ihrem Wildtyp genetisch veränderten Produktionszelle mit optimierter Produktion eines bestimmten Metaboliten, ein Verfahren zur Herstellung dieses Metaboliten, sowie dafür geeignete Nukleinsäuren
EP2762571A1 (de) 2013-01-30 2014-08-06 Evonik Industries AG Mikroorganismus und Verfahren zur fermentativen Herstellung von Aminosäuren
RU2013118637A (ru) 2013-04-23 2014-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ РАЗРЕГУЛИРОВАН ГЕН yjjK
JP5831669B2 (ja) 2013-05-13 2015-12-09 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造法
DK2811028T3 (en) 2013-06-03 2017-05-01 Evonik Degussa Gmbh Process for Preparation of L-Valine Using Recombinant Coryn Bacteria Containing the Propionate Inducible IlvBN Operon
RU2013140115A (ru) 2013-08-30 2015-03-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ НАРУШЕНА ЭКСПРЕССИЯ КЛАСТЕРА ГЕНОВ znuACB
JP2016192903A (ja) 2013-09-17 2016-11-17 味の素株式会社 海藻由来バイオマスからのｌ−アミノ酸の製造方法
RU2013144250A (ru) 2013-10-02 2015-04-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА, КОДИРУЮЩЕГО ФОСФАТНЫЙ ТРАНСПОРТЕР
RU2628696C1 (ru) 2013-10-02 2017-08-21 Адзиномото Ко., Инк. Способ получения основной аминокислоты (варианты)
EP2886651B1 (en) 2013-10-21 2018-08-22 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing l-amino acid
WO2015060391A1 (ja) 2013-10-23 2015-04-30 味の素株式会社 目的物質の製造法
RU2014105547A (ru) 2014-02-14 2015-08-20 Адзиномото Ко., Инк. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, ИМЕЮЩЕЙ СВЕРХЭКСПРЕССИРУЕМЫЙ ГЕН yajL
RU2015120052A (ru) 2015-05-28 2016-12-20 Аджиномото Ко., Инк. Способ получения L-аминокислоты с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия гена gshA
KR101791837B1 (ko) * 2015-08-06 2017-10-31 서울대학교산학협력단 라이신 디카르복실라아제의 변이주 개발 방법 및 그의 응용
US9988624B2 (en) 2015-12-07 2018-06-05 Zymergen Inc. Microbial strain improvement by a HTP genomic engineering platform
US11208649B2 (en) 2015-12-07 2021-12-28 Zymergen Inc. HTP genomic engineering platform
JP6821598B2 (ja) 2015-12-07 2021-01-27 ザイマージェン インコーポレイテッド Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ由来のプロモーター
CN109121422B (zh) 2016-02-25 2021-12-21 味之素株式会社 使用过表达编码铁输出蛋白基因的肠杆菌科的细菌生产l-氨基酸的方法
EP3478833A4 (en) 2016-06-30 2019-10-02 Zymergen, Inc. METHOD FOR PRODUCING A BACTERIAL HEMOGLOBIN LIBRARY AND ITS USE
JP2019519241A (ja) 2016-06-30 2019-07-11 ザイマージェン インコーポレイテッド グルコース透過酵素ライブラリーを生成するための方法およびその使用
CN106222231A (zh) * 2016-07-12 2016-12-14 南京工业大学 一种快速生产高光学纯度d‑赖氨酸的方法
JP2019165635A (ja) * 2016-08-10 2019-10-03 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造法
EP3562938A4 (en) * 2016-12-30 2020-11-11 Cathay Biotech Inc. LYSINE DECARBOXYLASES WITH CHANGES IN THE LEVELS OF TITRABLE AMINO ACIDS
EP3562837A4 (en) 2016-12-30 2020-12-30 Cathay Biotech Inc. MODIFIED LYSINE DECARBOXYLASE ENZYMES
EP3562953A1 (en) 2016-12-30 2019-11-06 Quidel Corporation Phage-mediated immunoassay and methods for determining susceptibility of bacteria to antibiotic or probiotic agents
JP7066977B2 (ja) 2017-04-03 2022-05-16 味の素株式会社 Ｌ－アミノ酸の製造法
CN108795912B (zh) * 2017-05-05 2022-08-02 上海凯赛生物技术股份有限公司 赖氨酸脱羧酶突变体及其应用
DE102017004566A1 (de) 2017-05-11 2018-11-15 Forschungszentrum Jülich GmbH Pyruvatcarboxylase und für die Pyruvatcarboxylase kodierende DNA, Plasmid enthaltend die DNA, sowie Mikroorganismus zur Produktion und Verfahren zur Herstellung von Produkten, deren Biosynthese Oxalacetat als Vorstufe beinhaltet, Chromosom und Screeningverfahren
CN107164352B (zh) * 2017-05-16 2020-11-13 中国科学院天津工业生物技术研究所 新的赖氨酸脱羧酶突变体及其应用
DE102017004751A1 (de) 2017-05-18 2018-11-22 Forschungszentrum Jülich GmbH Pyruvatcarboxylase und für die Pyruvatcarboxylase kodierende DNA, Plasmid enthaltend die DNA, sowie Mikroorganismus zur Produktion und verfahren zur Herstellung von Produkten, deren Bioynthese Oxalacetat als Vorstufe beeinhaltet und Chromosom
DE102017004750A1 (de) 2017-05-18 2018-11-22 Forschungszentrum Jülich GmbH Pyruvvatcarboxylase und für die Pyrovatcarboxylase kodierende DNA, Plasmid enthaltend die DNA, sowie Mikroorganismen zur Produktion und Verfahren zur Herstellung von Produkten, deren Biosynthese Oxalacetat als Vorstufe beeinhaltet und Chromsom
CA3064777A1 (en) 2017-06-07 2018-12-13 Zach Serber Promoters from corynebacterium glutamicum and uses thereof in regulating ancillary gene expression
WO2019070612A1 (en) 2017-10-02 2019-04-11 Quidel Corporation PHAGE-BASED DETECTION METHOD FOR ANTIMICROBIAL SUSCEPTIBILITY TESTING AND IDENTIFICATION OF BACTERIAL SPECIES
WO2020071538A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing target substance by bacterial fermentation
WO2020081958A2 (en) * 2018-10-18 2020-04-23 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Compositions and methods for identifying mutations of genes of multi-gene systems having improved function
JP7491312B2 (ja) 2018-12-27 2024-05-28 味の素株式会社 腸内細菌科の細菌の発酵による塩基性ｌ－アミノ酸またはその塩の製造方法
WO2020171227A1 (en) 2019-02-22 2020-08-27 Ajinomoto Co., Inc. METHOD FOR PRODUCING L-AMINO ACIDS USING A BACTERIUM BELONGING TO THE FAMILY Enterobacteriaceae HAVING OVEREXPRESSED ydiJ GENE
JP7524909B2 (ja) 2019-04-05 2024-07-30 味の素株式会社 Ｌ－アミノ酸の製造方法
JP7655312B2 (ja) 2019-09-25 2025-04-02 味の素株式会社 細菌の発酵によるｌ－アミノ酸の製造方法
CN111117940B (zh) * 2019-12-04 2022-06-28 天津大学 一种高产戊二胺的大肠杆菌工程菌与方法
TWI748408B (zh) * 2020-04-14 2021-12-01 中國石油化學工業開發股份有限公司 用於生產1,5-戊二胺之重組微生物及方法
CN113881657B (zh) * 2020-07-02 2024-02-02 中国科学院过程工程研究所 一种用于合成戊二胺的赖氨酸脱羧酶及其应用
US20230340428A1 (en) 2020-07-15 2023-10-26 Evonik Operations Gmbh Polynucleotide encoding an amino acid sequence, encoding an oxidoreductase
JP7696228B2 (ja) * 2021-04-30 2025-06-20 旭化成株式会社 組換え微生物及び化合物の製造方法
US20240343780A1 (en) 2021-08-09 2024-10-17 Evonik Operations Gmbh Polynucleotide encoding a bacterial collagen-like protein
CN117836314A (zh) 2021-08-09 2024-04-05 赢创运营有限公司 用于生产重组细菌胶原样蛋白(clp)的方法
CN117813315A (zh) 2021-08-09 2024-04-02 赢创运营有限公司 用于生产重组细菌胶原样蛋白(clp)的方法
CN117999103A (zh) 2021-09-20 2024-05-07 赢创运营有限公司 非粘附性胶原蛋白样水凝胶
EP4482541A1 (en) 2022-02-25 2025-01-01 Evonik Operations GmbH Sponges based on collagen-like proteins
EP4486759A1 (en) 2022-03-01 2025-01-08 Evonik Operations GmbH Biotechnological production of collagen proteins and bacterial collagen-like proteins by recombinant microorganisms
CN119012914A (zh) 2022-04-04 2024-11-22 味之素株式会社 防治寄生植物的方法
CN115089733B (zh) * 2022-06-28 2024-05-24 滨州医学院 用于治疗高赖氨酸血症的组合物及应用
CN114990043B (zh) * 2022-06-28 2024-04-30 滨州医学院 代谢赖氨酸的工程菌及其构建方法与应用
WO2024251576A1 (en) 2023-06-06 2024-12-12 Evonik Operations Gmbh Hydrogel patch made from a collagen-like protein (clp)
CN121548436A (zh) 2023-07-20 2026-02-17 赢创运营有限公司 包含重组胶原样肽(clp)和生物活性玻璃的海绵
WO2025186007A1 (en) 2024-03-08 2025-09-12 Evonik Operations Gmbh Collagen-like protein coated medical devices and coating method thereof
WO2026052373A1 (en) 2024-09-05 2026-03-12 Evonik Operations Gmbh Non-woven article comprising collagen-like protein fibers and a production process thereof
WO2026052478A1 (en) 2024-09-05 2026-03-12 Evonik Operations Gmbh Hybrid scaffolds comprising collagen-like protein and resorbable polymers for medical applications

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB820268A (en) * 1955-12-09 1959-09-16 Pfizer & Co C Preparation of lysine
JPS519393B2 (pl) * 1973-09-22 1976-03-26
SU1433981A1 (ru) * 1986-11-04 1988-10-30 Научно-производственное объединение "Фермент" Способ получени ферментного препарата L-лизиндекарбоксилазы
GB8725333D0 (en) * 1987-10-29 1987-12-02 Monsanto Europe Sa Immobilised enzymes
RU2081108C1 (ru) * 1991-10-16 1997-06-10 Циба-Гейги АГ Аддитивные соли кислот с основанием и фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью
PL182903B1 (pl) * 1994-12-09 2002-03-29 Ajinomoto Kk Gen, mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia oraz sposób wytwarzania L-lizyny

Also Published As

Publication number Publication date
AU703308C (en) 1996-06-26
PE59996A1 (es) 1996-12-26
ES2256850T5 (es) 2013-04-15
ZA9510442B (en) 1996-06-19
CN100357431C (zh) 2007-12-26
CN101220366B (zh) 2011-10-05
DE69534801T8 (de) 2008-09-04
MY113738A (en) 2002-05-31
US5827698A (en) 1998-10-27
EP0796912B2 (en) 2012-12-12
EP0796912A4 (en) 2001-03-21
CN101220366A (zh) 2008-07-16
CA2207271A1 (en) 1996-06-13
DK0796912T4 (da) 2013-03-25
SK70297A3 (en) 1998-01-14
PL320645A1 (en) 1997-10-13
CA2207271C (en) 2010-09-21
DK0796912T3 (da) 2006-04-10
ES2256850T3 (es) 2006-07-16
EP0796912B1 (en) 2006-02-22
DE69534801T2 (de) 2006-10-05
MX9704236A (es) 1998-01-31
HU223706B1 (hu) 2004-12-28
CZ174697A3 (en) 1997-11-12
EP0796912A1 (en) 1997-09-24
RU2188235C2 (ru) 2002-08-27
JP3692538B2 (ja) 2005-09-07
CZ290070B6 (cs) 2002-05-15
SK283478B6 (sk) 2003-08-05
CN1175280A (zh) 1998-03-04
KR100420743B1 (ko) 2004-05-24
DE69534801D1 (de) 2006-04-27
AU3994895A (en) 1996-06-26
HUT77752A (hu) 1998-07-28
BR9509896A (pt) 1997-12-30
AU703308B2 (en) 1999-03-25
WO1996017930A1 (en) 1996-06-13
DE69534801T3 (de) 2013-05-08
EP0796912B9 (en) 2013-08-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL182903B1 (pl) Gen, mikroorganizm należący do rodzaju Escherichia oraz sposób wytwarzania L-lizyny
KR101208480B1 (ko) 말산 효소 활성이 감쇠된 에스케리키아 세균을 사용하는ｌ-라이신 또는 ｌ-트레오닌의 생산방법
CA2178589C (en) Process for producing l-lysine by fermentation
EP0685555B1 (en) L-Isoleucine producing bacterium and method for preparing L-Isoleucine through fermentation
JP2817400B2 (ja) 物質の製造法
CN101386841B (zh) 突变乙酰乳酸合酶和用于产生支链l-氨基酸的方法
JP3473042B2 (ja) 変異型アスパルトキナーゼ遺伝子
JPWO1996017930A1 (ja) 新規リジンデカルボキシラーゼ遺伝子及びｌ−リジンの製造法
HU225538B1 (en) Process for producing l-amino acid through fermentation
JP2001037494A (ja) 変異型イソプロピルマレートシンターゼをコードするｄｎａ、ｌ−ロイシン生産性微生物、および、ｌ−ロイシンの製造法
EP0834559B1 (en) Process for producing l-lysine by fermentation
US20040229311A1 (en) Novel lysine decarboxylase gene and method for producing L-lysine
CN105143440B (zh) 具有l-色氨酸生产力的微生物以及使用所述微生物生产l-色氨酸的方法
US6599732B1 (en) Regulation of carbon assimilation
AU2020426558B2 (en) Novel Modified Polypeptide With Attenuated Activity Of Citrate Synthase And Method For Producing L-Amino Acid Using The Same
US20130184448A1 (en) Modified ethylenediamine-n, n&#39;-disuccinate: ethylenediamine lyase
AU4720999A (en) Regulation of carbon assimilation
MXPA97010044A (en) Method to produce l-lysine by means of fermentation