PL243706B1 - 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]-thiosemicarbazide, method of its preparation and its first medical use - Google Patents

4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]-thiosemicarbazide, method of its preparation and its first medical use Download PDF

Info

Publication number
PL243706B1
PL243706B1 PL439884A PL43988421A PL243706B1 PL 243706 B1 PL243706 B1 PL 243706B1 PL 439884 A PL439884 A PL 439884A PL 43988421 A PL43988421 A PL 43988421A PL 243706 B1 PL243706 B1 PL 243706B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
thiosemicarbazide
naphth
diisopropyl
phenyl
general formula
Prior art date
Application number
PL439884A
Other languages
Polish (pl)
Other versions
PL439884A1 (en
Inventor
Barbara Kaproń
Tomasz Plech
Janusz Kocki
Original Assignee
Univ Medyczny W Lublinie
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univ Medyczny W Lublinie filed Critical Univ Medyczny W Lublinie
Priority to PL439884A priority Critical patent/PL243706B1/en
Publication of PL439884A1 publication Critical patent/PL439884A1/en
Publication of PL243706B1 publication Critical patent/PL243706B1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C337/00—Derivatives of thiocarbonic acids containing functional groups covered by groups C07C333/00 or C07C335/00 in which at least one nitrogen atom of these functional groups is further bound to another nitrogen atom not being part of a nitro or nitroso group
    • C07C337/06—Compounds containing any of the groups, e.g. thiosemicarbazides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest nowa pochodna tiosemikarbazydu, o wzorze ogólnym (1) przedstawionym na rysunku, będąca jednoczesnym inhibitorem ludzkiej topoizomerazy II oraz indoloamino-2,3-dioksygenazy 1 (IDO 1) Zgłoszenie obejmuje także sposób wytwarzania nowej pochodnej tiosemikarbazydu o wzorze ogólnym (1), oraz jej zastosowanie w leczeniu chorób nowotworowych.The subject of the application is a new thiosemicarbazide derivative, with the general formula (1) shown in the figure, which is a simultaneous inhibitor of human topoisomerase II and indoleamine-2,3-dioxygenase 1 (IDO 1). The application also covers a method for producing a new thiosemicarbazide derivative with the general formula (1) , and its use in the treatment of cancer.

Description

Przedmiotem wynalazku jest nowa pochodna tiosemikarbazydu o wzorze ogólnym 1, przedstawionym na rysunku, charakteryzująca się jednoczesnym działaniem inhibitującym aktywność topoizomerazy IIa i indoloamino-2,3-dioksygenazy 1, wykazująca aktywność przeciwnowotworową, sposób jej wytwarzania oraz jej pierwsze zastosowanie medyczne.The subject of the invention is a new thiosemicarbazide derivative with the general formula 1, shown in the figure, characterized by simultaneous inhibiting activity of topoisomerase IIa and indoleamine-2,3-dioxygenase 1, exhibiting anticancer activity, a method of its preparation and its first medical application.

Znane są z literatury naukowej pochodne tiosemikarbazydu, inne niż wskazana w wynalazku, wykazujące aktywność przeciwnowotworową (Anticancer Agents Med Chem 2016, 16, 1288-1300; Anticancer Agents Med Chem 2018, 18, 529-540; Molecules 2019, 24, 2065; Molecules 2020, 25, 2980). Dla pojedynczych pochodnych tiosemikarbazydu wykazano, że aktywność przeciwnowotworową wynika, przynajmniej częściowo, z zahamowania aktywności ludzkiej topo izomerazy IIa (Anticancer Agents Med Chem 2018, 18, 529-540). Istnieje również pojedyncze doniesienie naukowe stwierdzające, że niektóre pochodne tiosemikarbazydu, lecz podstawione wyłącznie w pozycji 1 i nie zawierające podstawników w pozycji 4, mogą hamować aktywność enzymu - indoloamino-2,3-dioksygenazy 1 (Eur J Med Chem 2014, 82, 96-105). Dla związków wskazanych w powyższym źródle (Eur J Med Chem 2014, 82, 96-105) brak jest jednak danych potwierdzających ich aktywność przeciwnowotworową. Brak jest również dotychczas jakichkolwiek doniesień literaturowych, w tym opisów patentowych, dotyczących pochodnych tiosemikarbazydu charakteryzujących się jednoczesną zdolnością do hamowania obu wskazanych wcześniej enzymów, tj. topoizomerazy IIa i indoloamino-2,3-dioksygenazy 1. Tym bardziej brak jest doniesień naukowych na temat aktywności przeciwnowotworowej takich pochodnych.Thiosemicarbazide derivatives, other than those indicated in the invention, are known from the scientific literature and exhibit anticancer activity (Anticancer Agents Med Chem 2016, 16, 1288-1300; Anticancer Agents Med Chem 2018, 18, 529-540; Molecules 2019, 24, 2065; Molecules 2020, 25, 2980). For single thiosemicarbazide derivatives, it has been shown that the anticancer activity is due, at least in part, to the inhibition of human topo isomerase IIa activity (Anticancer Agents Med Chem 2018, 18, 529-540). There is also a single scientific report stating that some thiosemicarbazide derivatives, but substituted only in position 1 and not containing substituents in position 4, can inhibit the activity of the enzyme - indoleamine-2,3-dioxygenase 1 (Eur J Med Chem 2014, 82, 96- 105). However, for the compounds indicated in the above source (Eur J Med Chem 2014, 82, 96-105), there is no data confirming their anticancer activity. There are also no literature reports, including patent descriptions, regarding thiosemicarbazide derivatives characterized by the simultaneous ability to inhibit both previously indicated enzymes, i.e. topoisomerase IIa and indoleamine-2,3-dioxygenase 1. Moreover, there are no scientific reports on the activity anticancer properties of such derivatives.

Zahamowanie obu wspomnianych enzymów jest korz ystne z klinicznego punktu widzenia, gdyż inhibicja topoizomerazy IIa prowadzi do zahamowania proliferacji komórek nowotworowych a inhibicja indoloamino-2,3-dioksygenazy 1 - zwiększa skuteczność ludzkiego układu immunologicznego w walce z nowotworem. Zgodnie z danymi Światowej Organizacji Zdrowia (WHO) rocznie stwierdza się blisko 20 milionów nowych przypadków zachorowań na nowotwory a ryzyko rozwoju nowotworów u osób w przedziale wiekowym 0-74 lat wynosi 20,2%. Choroby nowotworowe są drugą w kolejności przyczyną śmierci, lecz zgodnie z przewidywaniami WHO - w roku 2060 staną się podstawową przyczyną śmierci ludzi na całym świecie (J Epidemiol Glob Health 2019, 9, 217 222). W związku z tych istotne jest wprowadzenie do praktyki klinicznej nowych leków skutec znie hamujących rozwój chorób nowotworowych.Inhibition of both mentioned enzymes is beneficial from a clinical point of view, because inhibition of topoisomerase IIa leads to inhibition of cancer cell proliferation, and inhibition of indoleamine-2,3-dioxygenase 1 increases the effectiveness of the human immune system in the fight against cancer. According to data from the World Health Organization (WHO), nearly 20 million new cases of cancer are diagnosed annually and the risk of cancer development in people aged 0-74 is 20.2%. Cancer is the second leading cause of death, but according to WHO predictions, in 2060 it will become the primary cause of death for people around the world (J Epidemiol Glob Health 2019, 9, 217 222). Therefore, it is important to introduce new drugs into clinical practice that effectively inhibit the development of cancer diseases.

Zgłaszający prowadzili badania mające na celu uzyskanie pochodnych tiosemikarbazydu łączących zdolność hamowania topoizomerazy IIa i indoloamino-2,3-dioksygenazy 1, które są enzymami istotnymi z punktu widzenia skutecznego działania przeciwnowotworowego. Uzyskane wyniki wskazują na silną aktywność przeciwnowotworową pochodnej tiosemikarbazydu, będącej przedmiotem wynalazku, wobec badanych linii komórek nowotworowych. Działanie to jest wynikiem jednoczesnego zahamowania w komórkach nowotworowych aktywności enzymów topoizomerazy IIa i indoloamino-2,3-dioksygenazy 1. Co istotne, pochodna tiosemikarbazydu, będąca przedmiotem wynalazku, wykazywała działanie silniejsze od leku przeciwnowotworowego - etopozydu, względem zastosowanych w badaniu linii komórek nowotworowych. Otrzymane wyniki pozwalają oczekiwać, że będąca przedmiotem wynalazku pochodna tiosemikarbazydu może stać się obiecującym kandydatem na lek przeciwnowotworowy.The applicants conducted research aimed at obtaining thiosemicarbazide derivatives combining the ability to inhibit topoisomerase IIa and indoleamine-2,3-dioxygenase 1, which are enzymes important from the point of view of effective anticancer activity. The obtained results indicate strong anticancer activity of the thiosemicarbazide derivative, which is the subject of the invention, against the tested cancer cell lines. This effect is the result of simultaneous inhibition of the activity of topoisomerase IIa and indoleamine-2,3-dioxygenase 1 enzymes in cancer cells. Importantly, the thiosemicarbazide derivative, which is the subject of the invention, showed a stronger effect than the anticancer drug - etoposide, in relation to the cancer cell lines used in the study. The obtained results allow us to expect that the thiosemicarbazide derivative subject to the invention may become a promising candidate for an anticancer drug.

Istotą wynalazku jest 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]-tiosemikarbazyd, o wzorze ogólnym 1 przedstawionym na rysunku.The essence of the invention is 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]-thiosemicarbazide, with the general formula 1 shown in the drawing.

Pochodna o wzorze ogólnym 1 wykazuje hamującą aktywność ludzkiej topoizomerazy IIa, co prowadzi do zahamowania proliferacji komórek nowotworowych a inhibicja indo loamino-2,3-dioksygenazy 1 zwiększa skuteczność ludzkiego układu immunologicznego w walce z nowotworem. Ta dualna aktywność pochodnej według wynalazku względem enzymów komórkowych tj. topoizomerazy IIa i IDO1 wpływa na jej silną aktywność przeciwnowotworową.The derivative of general formula 1 shows the inhibitory activity of human topoisomerase IIa, which leads to the inhibition of cancer cell proliferation, and the inhibition of indole amino-2,3-dioxygenase 1 increases the effectiveness of the human immune system in the fight against cancer. This dual activity of the derivative according to the invention towards cellular enzymes, i.e. topoisomerase IIa and IDO1, influences its strong anticancer activity.

Istotą sposobu wytwarzania nowej pochodnej tiosemikarbazydu o wzorze ogólnym 1, według wynalazku, jest to, że hydrazyd kwasu naftaleno-1-octowego (o wzorze ogólnym 2) poddaje się reakcji z izotiocyjanianem 2,6-diizopropylofenylu (o wzorze ogólnym 3), przy czym reakcję prowadzi się w rozpuszczalnikach organicznych, eterze dietylowym, metanolu, korzystnie we wrzącym bezwodnym etanolu, przez 10-30 minut. Postęp reakcji kontroluje się w oparciu o wyniki chromatografii cienkowarstwowej. Po zakończeniu reakcji mieszaninę reakcyjną schładza się a powstały osad odsącza się, suszy a następnie krystalizuje z rozpuszczalników polarnych, korzystnie z etanolu.The essence of the method for preparing a new thiosemicarbazide derivative of general formula 1, according to the invention, is that naphthalene-1-acetic acid hydrazide (general formula 2) is reacted with 2,6-diisopropylphenyl isothiocyanate (general formula 3), wherein the reaction is carried out in organic solvents, diethyl ether, methanol, preferably boiling anhydrous ethanol, for 10-30 minutes. The progress of the reaction is monitored based on the results of thin layer chromatography. After the reaction is completed, the reaction mixture is cooled and the resulting precipitate is filtered off, dried and then crystallized from polar solvents, preferably ethanol.

Istotą wynalazku jest również 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]-tiosemikarbazyd do zastosowania w leczeniu chorób nowotworowych.The essence of the invention is also 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]-thiosemicarbazide for use in the treatment of cancer.

Związek według wynalazku wykazuje silne działanie przeciwnowotworowe, w związku z czym może znaleźć zastosowanie do wytwarzania nowych leków mających zastosowanie w terapii chorób nowotworowych.The compound according to the invention has a strong anticancer effect, therefore it may be used in the production of new drugs for the treatment of cancer.

Przykład 1:Example 1:

0,01 Mola hydrazydu kwasu naftaleno-1-octowego rozpuszczono w 20 mL bezwodnego etanolu, po czym do otrzymanego roztworu dodano 0,01 mola izotiocyjanianu 2,6-diizopropylofenylu. Całość ogrzewano w temperaturze wrzenia rozpuszczalnika w kolbce okrągłodennej pod chłodnicą zwrotną wodną przez 20 minut, po czym mieszaninę reakcyjną schłodzono a wytrącony osad odsączono, wysuszono i przekrystalizowano z etanolu.0.01 mole of naphthalene-1-acetic acid hydrazide was dissolved in 20 mL of anhydrous ethanol, and then 0.01 mole of 2,6-diisopropylphenyl isothiocyanate was added to the obtained solution. The whole was heated at the boiling point of the solvent in a round-bottomed flask under a water reflux condenser for 20 minutes, then the reaction mixture was cooled and the precipitate was filtered off, dried and recrystallized from ethanol.

Otrzymano 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]tiosemikarbazyd (o wzorze ogólnym 1) z wydajnością 74%. Strukturę chemiczną związku określono w oparciu o wyniki analizy widm 1H-NMR, IR oraz MS. Postęp reakcji kontrolowano przy użyciu chromatografii cienkowarstwowej.4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]thiosemicarbazide (of general formula 1) was obtained with a yield of 74%. The chemical structure of the compound was determined based on the results of the analysis of 1H -NMR, IR and MS spectra. The progress of the reaction was monitored using thin layer chromatography.

Parametry fizykochemiczne i spektralne pochodnej tiosemikarbazydu o wzorze ogólnym 1:Physicochemical and spectral parameters of the thiosemicarbazide derivative of general formula 1:

Wydajność reakcji: 74%; temp. topnienia: 140-142°C; 1H-NMR (600 MHz): 1.12 (d, 6H,Reaction yield: 74%; melting point: 140-142°C; 1H-NMR (600 MHz): 1.12 (d, 6H,

2xCH3), 1.17 (d, 6H, 2xCH3), 3.05-3.12 (m, 2H, 2xCH), 4.06 (s, 2H, CH2), 7.12-8.16 (m, 10H, ArH), 9.19 (s, 1H, NH), 9.49 (s, 1H, NH), 10.30 (s, 1H, NH). IR (ν, cm-1): 3340 (NH), 1665 (C=O), 1342 (C=S); EI-MS (m/z): 419 [M+].2xCH3), 1.17 (d, 6H, 2xCH3), 3.05-3.12 (m, 2H, 2xCH), 4.06 (s, 2H, CH2), 7.12-8.16 (m, 10H, ArH), 9.19 (s, 1H, NH ), 9.49 (s, 1H, NH), 10.30 (s, 1H, NH). IR (ν, cm -1 ): 3340 (NH), 1665 (C=O), 1342 (C=S); EI-MS (m/z): 419 [M + ].

Badanie właściwości przeciwnowotworowych 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]tiosemikarbazydu przeprowadzono przy zastosowaniu dwóch niezależnych metod: testu MTT oraz testu BrdU. W badaniach wykorzystano następujące linie komórek nowotworowych: MCF-7 (komórki raka sutka), MDA-MB-231 (komórki raka sutka), SCC-25 (komórki raka języka), FaDu (komórki raka przełyku), A549 (komórki raka płuc), AGS (komórki raka żołądka), T98G (komórki glejaka), FS180 (komórki raka jelita grubego), HT29 (komórki raka jelita grubego), A375 (komórki czerniaka). Hodowle komórek nowotworowych prowadzono na płytkach 96 -dołkowych stosując podłoża hodowlane dedykowane do danego typu linii komórkowej. Na płytki zawierające dany typ komórek dodawano wzrastające stężenia 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]tiosemikarbazydu (od 1 do 100 μg/ml), prowadzono 24-godzinną inkubację, po czym aktywność przeciwnowotworową oceniano na podstawie stopnia zahamowania aktywności metabolicznej (test MTT) lub zahamowania biosyntezy DNA (test BrdU). Jako kontroli dodatniej użyto leku przeciwnowotworowego - etopozydu.The study of the anticancer properties of 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]thiosemicarbazide was performed using two independent methods: the MTT test and the BrdU test. The following cancer cell lines were used in the research: MCF-7 (breast cancer cells), MDA-MB-231 (breast cancer cells), SCC-25 (tongue cancer cells), FaDu (esophageal cancer cells), A549 (lung cancer cells) , AGS (stomach cancer cells), T98G (glioma cells), FS180 (colorectal cancer cells), HT29 (colorectal cancer cells), A375 (melanoma cells). Cancer cell cultures were performed in 96-well plates using culture media dedicated to a given type of cell line. Increasing concentrations of 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]thiosemicarbazide (from 1 to 100 μg/ml) were added to plates containing a given type of cells, and a 24-hour incubation was carried out , and then the anticancer activity was assessed based on the degree of inhibition of metabolic activity (MTT test) or inhibition of DNA biosynthesis (BrdU test). The anticancer drug etoposide was used as a positive control.

Przykład 2:Example 2:

Linie komórek nowotworowych (MCF-7, MDA-MB-231, SCC-25, FaDu, A549, AGS, T98G, LS180, HT29, A375), zakupione od certyfikowanego dostawcy (ATCC), hodowano w rekomendowanych do tego celu pożywkach wzbogaconych w 10% FBS, penicylinę (100 U/mL) and streptomycynę (100 μg/mL). Hodowlę prowadzono w atmosferze zawierającej 5% CO 2, w temperaturze 37°C. Zawiesinę komórek nowotworowych przenoszono do dołków na płytkach 96 -dołkowych (100 μl/dołek), stosując gęstość zawiesiny 1 x 105 komórek/ml. Po 24 godzinach wymaganych do całkowitego przyklejenia się komórek do podłoża, na płytki dodawano roztwory zawierające wzrastające od 1 do 100 μg/ml stężenia 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]tiosemikarbazydu lub etopozydu (kontrola dodatnia), całość inkubowano przez kolejne 24 godziny, po czym dodawano roztwór odczynnika MTT. Po trwającej kolejne 3 godziny inkubacji, do dołków dodawano roztwór 10% SDS. Po całonocnej inkubacji odczytywano absorbancję roztworów w dołkach przy długości fali 570 nm, stosując czytnik mikropłytek (Epoch, BioTek). Wyniki przedstawiono w postaci wartości IC 50, określających stężenie związku niezbędne do zahamowania wzrostu komórek o 50%. Wyniki zestawiono w Tabeli 1.Cancer cell lines (MCF-7, MDA-MB-231, SCC-25, FaDu, A549, AGS, T98G, LS180, HT29, A375), purchased from a certified supplier (ATCC), were cultured in the recommended for this purpose media enriched with 10% FBS, penicillin (100 U/mL) and streptomycin (100 μg/mL). The culture was carried out in an atmosphere containing 5% CO 2 at a temperature of 37°C. The tumor cell suspension was transferred to wells in 96-well plates (100 μl/well) using a suspension density of 1 x 105 cells/ml. After 24 hours required for the cells to completely stick to the substrate, solutions containing increasing concentrations of 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl from 1 to 100 μg/ml were added to the plates thiosemicarbazide or etoposide (positive control), the whole was incubated for another 24 hours, after which the MTT reagent solution was added. After another 3 hours of incubation, a 10% SDS solution was added to the wells. After overnight incubation, the absorbance of the solutions in the wells was read at a wavelength of 570 nm using a microplate reader (Epoch, BioTek). The results are presented as IC 50 values, determining the concentration of the compound necessary to inhibit cell growth by 50%. The results are summarized in Table 1.

PL 243706 BIPL 243706 BI

Tabela 1. Aktywność przeciwnowotworową 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]tiosemikarbazydu i etopozydu (kontrola dodatnia), wyrażona w postaci wartości ICso (pg/ml), określona na podstawie testu MTT.Table 1. Antitumor activity of 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]thiosemicarbazide and etoposide (positive control), expressed as ICso values (pg/ml), determined based on the MTT test.

IC50 (pg/ml) ± SD IC50 (pg/ml) ± SD Linie nowotworowe Cancer lines 4-(2,6- (diizopropy lo)feny loj-1 - [(naft-1 ylo)metyloj-tiosemikarbazyd 4-(2,6-(diisopropyl)phenyl-1-[(naphth-1yl)methylj-thiosemicarbazide Etopozyd Etoposide MDA-MB-231 MDA-MB-231 9.20 ± 0.06 9.20 ± 0.06 >100 >100 MCF-7 MCF-7 9.82 ± 0.67 9.82 ± 0.67 >100 >100 SCC-25 SCC-25 7.05 ± 0.22 7.05 ± 0.22 59.06 ±4.49 59/06 ±4.49 A549 A549 3.86 ±0.07 3.86 ±0.07 > 100 > 100 AGS AGS 5.91 ±0.04 5.91 ±0.04 50.79 ±3.13 50.79 ±3.13 T98G T98G 6.98 ±0.11 6.98 ±0.11 >100 >100 LS180 LS180 4.57 ± 0.40 4.57 ± 0.40 >100 >100 FaDu FaDu 7.25 ± 0.63 7.25 ± 0.63 12.54 ±0.86 12.54 ±0.86 A375 A375 4.57 ± 0.46 4.57 ± 0.46 10.20 ±0.83 10.20 ±0.83 HT29 HT29 8.95 ±0.76 8.95 ±0.76 94.49 ±6.64 94.49 ±6.64

Przykład 3:Example 3:

Zawiesinę komórek nowotworowych, hodowanych jak w przykładzie 2, nanoszono na płytkę 96-dołkową w objętości 100 μΙ/dołek przy zachowaniu gęstości 1 χ 104 komórek/ml. Po 24 godzinach wymaganych do całkowitego przyklejenia się komórek do podłoża, na płytki dodawano roztwory zawierające 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]tiosemikarbazyd lub etopozyd (kontrola dodatnia) w stężeniu 25 pg/ml, całość inkubowano przez kolejne 24 godziny, po czym dodawano roztwór odczynnika BrdU. Po 2 godzinach inkubacji odczytywano absorbancję roztworów w dołkach przy długości fali 450 nm, stosując czytnik mikropłytek (Epoch, BioTek). Wyniki przedstawiono w postaci procentowej wartości przeżywalności komórek nowotworowych w porównaniu do hodowli nie poddanej ekspozycji na działanie 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]tiosemikarbazydu lub etopozydu. Wyniki zestawiono w Tabeli 2.A suspension of cancer cells, cultured as in example 2, was placed on a 96-well plate in a volume of 100 μΙ/well while maintaining a density of 1 χ 10 4 cells/ml. After 24 hours required for the cells to completely adhere to the substrate, solutions containing 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]thiosemicarbazide or etoposide (positive control) in concentration of 25 pg/ml, the whole was incubated for another 24 hours, after which the BrdU reagent solution was added. After 2 hours of incubation, the absorbance of the solutions in the wells was read at a wavelength of 450 nm using a microplate reader (Epoch, BioTek). The results were presented as the percentage of cancer cell survival compared to the culture not exposed to 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]thiosemicarbazide or etoposide. The results are summarized in Table 2.

Tabela 2. Przeżywalność komórek nowotworowych poddanych ekspozycji na 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]tiosemikarbazyd i etopozyd w stężeniu 25 pg/ml.Table 2. Survival of cancer cells exposed to 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]thiosemicarbazide and etoposide at a concentration of 25 pg/ml.

% przeżywalności komórek nowotworowych % survival of cancer cells Linie nowotworowe Cancer lines 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-l-[(naft-lylo)metylo|-tiosemikarbazyd (25 pg/ml) 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-lyl)methyl|-thiosemicarbazide (25 pg/ml) Etopozyd (25 pg/ml) Etoposide (25 pg/ml) MDA-MB-231 MDA-MB-231 59.74±5.17 59.74±5.17 97.98±8.11 97.98±8.11 MCF-7 MCF-7 3.69±0.23 3.69±0.23 81.24±7.28 81.24±7.28 SCC-25 SCC-25 3.72±0,27 3.72±0.27 45.71±0.16 45.71±0.16 A549 A549 0.43±0,05 0.43±0.05 5.60±0.25 5.60±0.25 AGS AGS 2.16±0.15 2.16±0.15 51.78±5.49 51.78±5.49 T98G T98G 3.27±0.33 3.27±0.33 52.83±4.70 52.83±4.70 LSI 80 LSI 80 7.43±0.79 7.43±0.79 91.67±3.07 91.67±3.07 FaDu FaDu 2.46±0.19 2.46±0.19 31.75±1.65 31.75±1.65 A375 A375 2.29±0.56 2.29±0.56 17.87±2,36 17.87±2.36 HT29 HT29 1.00 ±0.08 1.00 ±0.08 42.61 ±5.65 42.61 ±5.65

PL 243706 BIPL 243706 BI

Zdolność 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]tiosemikarbazydu do hamowania aktywności ludzkiej topoizomerazy Hot i indoloamino-2,3-dioksygenazy 1 (IDO1) określono przy zastosowaniu komercyjnie dostępnych zestawów do oznaczania aktywności enzymatycznej: Topoisomerase II Drug Screening Kit (TopoGEN) (dla oznaczenia stopnia inhibicji topoizomerazy Ha) oraz Universal IDO1/IDO2/TDO Inhibitor Screening Assay Kit (Biosciences) (dla oznaczenia stopnia inhibicji indoloamino-2,3-dioksygenazy 1).The ability of 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]thiosemicarbazide to inhibit the activity of human Hot topoisomerase and indoleamine-2,3-dioxygenase 1 (IDO1) was determined using commercially available kits for determining enzymatic activity: Topoisomerase II Drug Screening Kit (TopoGEN) (to determine the degree of inhibition of topoisomerase Ha) and Universal IDO1/IDO2/TDO Inhibitor Screening Assay Kit (Biosciences) (to determine the degree of inhibition of indoleamine-2,3-dioxygenase 1) .

Przykład 4:Example 4:

Mieszaninę zawierającą DNA, topoizomerazę II, bufor i 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1 -[(naft-1 -ylo)metylo]tiosemikarbazyd w stężeniu 50 pg/ml inkubowano przez 30 minut w 37°C. Po dodaniu 10% SDS, proteinazy K i buforu obciążającego przeprowadzono elektroforezę w 1% żelu agarozowym. Po zakończeniu rozdziału elektroforetycznego DNA wybarwiano bromkiem etydyny i analizowano w świetle UV, stosując system dokumentacji żeli (Syngene G:BOX). Wyniki przedstawiono w postaci procentowej wartości zahamowania aktywności enzymu w porównaniu do próby nie zawierającej 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]tiosemikarbazydu.The mixture containing DNA, topoisomerase II, buffer and 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]thiosemicarbazide at a concentration of 50 pg/ml was incubated for 30 minutes at 37°C. After adding 10% SDS, proteinase K and loading buffer, electrophoresis was performed on a 1% agarose gel. After electrophoretic separation, DNA was stained with ethidium bromide and analyzed under UV light using a gel documentation system (Syngene G:BOX). The results were presented as the percentage of enzyme activity inhibition compared to the sample not containing 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]thiosemicarbazide.

Poziom zahamowania aktywności topoizomerazy Ha przez 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1 -[(naft-1 -ylo)metylo]tiosemikarbazyd (50 pg/ml) przedstawiono w Tabeli 3.The level of inhibition of Ha topoisomerase activity by 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]thiosemicarbazide (50 pg/ml) is shown in Table 3.

Przykład 5:Example 5:

Przygotowywano mieszaninę reakcyjną zawierającą bufor, 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1 -[(naft-1 -ylo)metylo]tiosemikarbazyd w stężeniu 50 pg/ml oraz indoloamino-2,3-dioksygenazę 1 (IDO1) w stężeniu 40 ng/pl. Całość inkubowano przez 3 godziny w temperaturze pokojowej. Po inkubacji odczytywano poziom absorbancji roztworu przy długości fali 320 nm, stosując czytnik mikropłytek (Epoch, BioTek). Wyniki przedstawiono w postaci procentowej wartości zahamowania aktywności enzymu w porównaniu do próby nie zawierającej 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]tiosemikarbazydu.A reaction mixture containing buffer, 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]thiosemicarbazide at a concentration of 50 pg/ml and indoleamine-2,3-dioxygenase 1 (IDO1) was prepared. at a concentration of 40 ng/pl. The whole thing was incubated for 3 hours at room temperature. After incubation, the absorbance level of the solution was read at a wavelength of 320 nm using a microplate reader (Epoch, BioTek). The results were presented as the percentage of enzyme activity inhibition compared to the sample not containing 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]thiosemicarbazide.

Poziom zahamowania aktywności indoloamino-2,3-dioksygenazy 1 (IDO1) przez 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]tiosemikarbazyd (50 pg/ml) przedstawiono w Tabeli 3.The level of inhibition of indoleamino-2,3-dioxygenase 1 (IDO1) activity by 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]thiosemicarbazide (50 pg/ml) is shown in Table 3.

Tabela 3. Stopień zahamowania aktywności topoizomerazy Ha oraz indoloamino-2,3-dioksygenazy 1 (IDO1) przez 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]tiosemikarbazyd w stężeniu 50 pg/mlTable 3. Degree of inhibition of topoisomerase Ha and indoleamine-2,3-dioxygenase 1 (IDO1) activity by 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]thiosemicarbazide at a concentration of 50 pg/ml

% hamowania aktywności enzymatycznej % inhibition of enzymatic activity kontrola ujemna negative control 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1- [(naft-1ylo)metylo]tiosemikarbazyd 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1yl)methyl]thiosemicarbazide topoizomeraza 11« topoisomerase 11« 0% 0% 52,63% 52.63% indoloamino-2,3-dioksygenaza indoleamine-2,3-dioxygenase 0% 0% 91,37% 91.37%

Zastrzeżenia patentowePatent claims

Claims (5)

1. Nowa pochodna tiosemikarbazydu, o wzorze ogólnym 1 przedstawionym na rysunku, będąca jednoczesnym inhibitorem ludzkiej topoizomerazy II oraz indoloamino-2,3-dioksygenazy 1 (IDO1).1. A new derivative of thiosemicarbazide, with the general formula 1 shown in the figure, which is a simultaneous inhibitor of human topoisomerase II and indoleamine-2,3-dioxygenase 1 (IDO1). Wzór 1Pattern 1 PL 243706 BIPL 243706 BI 2. Sposób wytwarzania nowej pochodnej tiosemikarbazydu o wzorze ogólnym 1, przedstawionym na rysunku, znamienny tym, że hydrazyd kwasu naftaleno-1-octowego poddaje się reakcji z izotiocyjanianem 2,6-diizopropylofenylu, prowadząc reakcję w rozpuszczalnikach organicznych, gdzie postęp reakcji kontroluje się przy użyciu chromatografii cienkowarstwowej zaś po zakończeniu reakcji mieszaninę reakcyjną schładza się a powstały osad odsącza, suszy a następnie krystalizuje z rozpuszczalników polarnych.2. A method for preparing a new thiosemicarbazide derivative of the general formula 1, shown in the figure, characterized in that naphthalene-1-acetic acid hydrazide is reacted with 2,6-diisopropylphenyl isothiocyanate, conducting the reaction in organic solvents, where the reaction progress is controlled by using thin layer chromatography, and after the reaction is completed, the reaction mixture is cooled and the resulting precipitate is filtered off, dried and then crystallized from polar solvents. 3. Sposób, według zastrz. 2, znamienny tym, że reakcję w rozpuszczalnikach organicznych prowadzi się we wrzącym bezwodnym etanolu, korzystnie w czasie przez 10-30 minut.3. The method according to claim 2, characterized in that the reaction in organic solvents is carried out in boiling anhydrous ethanol, preferably for 10-30 minutes. 4. Sposób, według zastrz. 2, znamienny tym, że otrzymaną mieszaninę krystalizuje się z etanolu.4. The method according to claim 2, characterized in that the obtained mixture is crystallized from ethanol. 5. Nowa pochodna tiosemikarbazydu o wzorze ogólnym 1 przedstawionym na rysunku, będąca jednoczesnym inhibitorem ludzkiej topoizomerazy II oraz indoloamino-2,3-dioksygenazy 1 (IDO1), o wzorze ogólnym 1, do zastosowania w leczeniu chorób nowotworowych.5. A new thiosemicarbazide derivative of the general formula 1 shown in the figure, which is a simultaneous inhibitor of human topoisomerase II and indoleamine-2,3-dioxygenase 1 (IDO1), of the general formula 1, for use in the treatment of cancer.
PL439884A 2021-12-17 2021-12-17 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]-thiosemicarbazide, method of its preparation and its first medical use PL243706B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL439884A PL243706B1 (en) 2021-12-17 2021-12-17 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]-thiosemicarbazide, method of its preparation and its first medical use

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL439884A PL243706B1 (en) 2021-12-17 2021-12-17 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]-thiosemicarbazide, method of its preparation and its first medical use

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL439884A1 PL439884A1 (en) 2023-06-19
PL243706B1 true PL243706B1 (en) 2023-10-02

Family

ID=86944916

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL439884A PL243706B1 (en) 2021-12-17 2021-12-17 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]-thiosemicarbazide, method of its preparation and its first medical use

Country Status (1)

Country Link
PL (1) PL243706B1 (en)

Also Published As

Publication number Publication date
PL439884A1 (en) 2023-06-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Mavrova et al. Antihelminthic activity of some newly synthesized 5 (6)-(un) substituted-1H-benzimidazol-2-ylthioacetylpiperazine derivatives
Taha et al. Synthesis of 6-chloro-2-Aryl-1H-imidazo [4, 5-b] pyridine derivatives: antidiabetic, antioxidant, β-glucuronidase inhibiton and their molecular docking studies
Zhang et al. Synthesis, molecular modeling and biological evaluation of chalcone thiosemicarbazide derivatives as novel anticancer agents
JP6064079B2 (en) CDC7 inhibitor
CN117069698B (en) Double-functional molecule targeting SHP2 degradation and preparation and application thereof
WO2018086547A1 (en) 2-substituted aromatic ring-pyrimidine derivative, and preparation and application thereof
Thakur et al. Novel 3, 5-bis (arylidiene)-4-piperidone based monocarbonyl analogs of curcumin: anticancer activity evaluation and mode of action study
Rakesh et al. Xanthone conjugated amino acids as potential anticancer and DNA binding agents: molecular docking, cytotoxicity and SAR studies
CN113480530A (en) Aromatic hydrocarbon receptor modulators
Godlewska et al. Biological evaluation of ω-(dialkylamino) alkyl derivatives of 6H-indolo [2, 3-b] quinoline-novel cytotoxic DNA topoisomerase II inhibitors
Liu et al. Design, synthesis and antitumor activity evaluation of trifluoromethyl-substituted pyrimidine derivatives
Liao et al. Design and optimization of novel 4-(2-fluorophenoxy) quinoline derivatives bearing a hydrazone moiety as c-Met kinase inhibitors
Zhao et al. Harmine-inspired design and synthesis of benzo [d] imidazo [2, 1-b] thiazole derivatives bearing 1, 3, 4-oxadiazole moiety as potential tumor suppressors
Jin et al. Synthesis and antitumor activity of ureas containing pyrimidinyl group
Nagalakshmamma et al. A study on MAPK/ERK and CDK2-Cyclin-E signal switch “on and off” in cell proliferation by bis urea derivatives of 1, 4-Diisocyanatobenzene
CN107501279B (en) Furanoquinoline dione compound and medical application thereof
US11786520B2 (en) Method for producing benzazoloquinolium (BQs) salts and using the biological activity of the composition
PL243706B1 (en) 4-[2,6-(diisopropyl)phenyl]-1-[(naphth-1-yl)methyl]-thiosemicarbazide, method of its preparation and its first medical use
PL243705B1 (en) 4-(4-phenylazophenyl)-1-[(naphth-1-yl)methyl]-thiosemicarbazide, method of its preparation and its first medical use
PL243704B1 (en) 4-(4-phenylazophenyl)-1-(2-nitrobenzyl)-thiosemicarbazide, method of its preparation and its first medical use
Priolkar et al. Design, synthesis, and characterization of novel linomide analogues and their evaluation for anticancer activity
CN103626769B (en) The hexa-atomic fragrant heterocycle of substituted sulfhydryl imidazole derivative and preparation method thereof and application
CN102746307B (en) 1-N-benzyl allopurinol derivative as well as preparation method and application thereof
Błaszczak-Świątkiewicz et al. Antiproliferative activity of new benzimidazole derivatives.
CN117800953A (en) A kind of 2-aromatic aminopyrimidine compound and its preparation method and application