PT1102776E - Profármacos solúveis em água de fenóis impedidos. - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "PROFÁRMACOS SOLÚVEIS EM ÁGUA DE FENÓIS IMPEDIDOS"

Antecedentes da invenção 1. Âmbito da invenção A presente invenção diz respeito aos novos profármacos solúveis em água do grupo hidroxilo impedido alifático ou aromático que contêm substâncias farmacêuticas. Nomeadamente, a presente invenção está relacionada com os novos éteres fosfonooximetílicos de álcool e fenol impedidos solúveis em água que contêm substâncias farmacêuticas, tais como a camptotecina, o propofol, a etoposida, a vitamina E e a ciclosporina A. Igualmente está relacionada com os intermediários utilizados para produzir os profármacos finais, bem como os preparados farmacêuticos que contêm os mencionados compostos. 2 . Antecedentes na área A administração bem sucedida de uma substância farmacêutica a um doente é de crítica importância no tratamento das diversas perturbações. No entanto, o uso de muitos fármacos com propriedades conhecidas vê-se limitado pela sua baixa solubilidade em água. Como resultado desta baixa solubilidade, estes fármacos devem ser formulados em veículos farmacêuticos co-solventes, incluindo 2 surfactantes. Ficou demonstrado que estes surfactantes provocam severos efeitos secundários nos humanos, limitando assim a segurança clinica destes fármacos e, consequentemente, o tratamento de muitas doenças.

Por exemplo, a camptotecina é um produto natural isolado da casca da árvore chinesa do género camptotheca chamada Camptotheca Accuminata. Observou-se que possui uma forte actividade anti-tumoral em muitos modelos animais in vivo, incluindo os principais tipos de tumores tais como nos cancros de pulmões, mamas, ovários, pâncreas, cólon e estômago e no melanoma maligno. A camptotecina inibe a enzima celular ADN-topoisomerase I e desencadeia uma série de reacções que conduzem à apoptose e à morte celular. A topoisomerase I é uma enzima nuclear essencial responsável pela organização e modulação das caracteristicas estruturais do ADN para que uma célula possa replicar-se e transcrever e reparar a informação genética.

Figura 1 - Camptotecina 0 inconveniente principal da camptotecina é a sua solubilidade em água limitada. Para fins de estudos biológicos torna-se necessário dissolver o composto num solvente orgânico forte (DMSO) ou formular o fármaco como uma suspensão em Tween 80 (solução salina que constitui uma 3 formulação farmacológica indesejável para terapia humana). Recentemente foram aprovados nos Estados Unidos da América dois análogos da camptotecina com solubilidade em água moderada para fins de tratamento do cancro avançado nos ovários (Hycamtin) e o cancro avançado colorectal (Camptosar).

Outros fármacos, como por exemplo a camptotecina, que apresentam problemas semelhantes são a Ciclosporina A (CsA), o propofol, a etoposida e a Vitamina E (alfa-tocoferol). Da mesma forma que a camptotecina, a CsA possui na sua estrutura um álcool estericamente impedido, um álcool secundário neste caso. A CsA é formulada numa mistura cremofor EL/etanol.

Exemplo de um fenol estericamente impedido e com pouca solubilidade em água é o propofol, um anestésico. 4

Propofol (2,6-di-isopropilfenol) 0 propofol é formulado para uso clinico intravenoso ou como emulsão. 0 propofol não somente é pouco solúvel em água mas também produz dor no local da injecção. Esta dor pode ser aliviada através da utilização de lidocaina. Por causa do facto de que também é formulado como emulsão, torna-se dificil e questionável acrescentar outros fármacos à formulação, assim como realizar alterações fisicas na mesma, uma vez que, por exemplo, o aumento do tamanho da gota de óleo pode provocar embolismo pulmonar, etc.

Um profármaco do propofol solúvel em água e quimicamente estável proporcionaria diversas vantagens. Este tipo de formulação poderia consistir numa simples solução aquosa que se poderia misturar com outros fármacos. Se o próprio fármaco fosse indolor, tornar-se-ia de mais fácil utilização para o doente e finalmente não existiria a toxicidade produzida pelo veiculo. Outros fenóis estericamente impedidos com pouca solubilidade em água são o fármaco anticancerigeno etoposida e a Vitamina E (alfa-tocoferol). A presente invenção fornece uma forma de álcool e fenol solúvel em água que contém fármacos tais como o 5 propofol. Todos os profármacos de acordo com a presente invenção revelam uma solubilidade em água superior quando comparados com os respectivos fármacos parentais. Os métodos desenvolvidos para a elaboração dos compostos da presente invenção podem ser úteis para a conversão de muitos outros agentes medicinais insolúveis, que possuam grupos hidroxilo impedidos alifáticos ou aromáticos, em derivados solúveis em água.

Resumo da invenção A invenção até aqui descrita compreende novas composições de matéria. A invenção está relacionada com os derivados fosfonooximetílicos do fenol solúveis em água que contêm substâncias farmacêuticas, representados pela fórmula geral I: κ

ι m em que, R-0- é um resíduo de um composto farmacêutico que contém fenol; R1 é um hidrogénio ou um ião metálico alcalino ou uma amina protonada ou um aminoácido protonado; R2 é um hidrogénio ou um ião metálico alcalino ou uma amina protonada ou um aminoácido protonado, e n é um número inteiro igual a 1 ou 2; m é um número inteiro igual a pelo menos 1; 6 e os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. A fórmula anterior mostra um derivado do ROH, em que ROH representa um fármaco que contém fenol, tal como o propofol, a etoposida e a Vitamina E. Quando n é igual a 2, ROH é de preferência uma substância farmacêutica que contém fenol, como por exemplo o propofol. Também se incluem alguns fármacos para os que não é possível elaborar formas injectáveis por causa da sua inerente falta de solubilidade em água. Entre estes encontram-se o danazol, a metiltestosterona, o iodoquinol e a atovaquona. R1 é um hidrogénio ou um ião metálico alcalino, incluindo sódio, potássio ou lítio, ou uma amina protonada ou um aminoácido protonado ou qualquer outro catião farmaceuticamente aceitável. R2 é um hidrogénio ou um ião metálico alcalino, incluindo sódio, potássio ou lítio, ou uma amina protonada ou um aminoácido protonado ou qualquer outro catião farmaceuticamente aceitável. Após administração intravenosa ou oral, os derivados de acordo com a fórmula I são convertidos novamente nos fármacos parentais por hidrólise e/ou fosfatase.

Consequentemente, é também objecto da presente invenção desenvolver derivados de fármacos insolúveis em água que revelem boa actividade e solubilidade em água.

Um outro objecto da presente invenção consiste em desenvolver preparados farmacêuticos destes compostos solúveis em água que contenham uma certa quantidade do composto da fórmula I e um veículo farmaceuticamente aceitável. 7 É igualmente objecto da presente invenção desenvolver derivados de fármacos que manifestem boa estabilidade a niveis de pH adequados para elaborar formulações farmacêuticas, mas que também se decomponham rapidamente in vivo sob condições fisiológicas para actuar potencialmente como profármacos.

Breve descrição dos desenhos

Os desenhos da presente invenção são descritos como se segue: A Figura 1 mostra uma conversão enzimática in vitro do profármaco do propofol em propofol. A Figura 2 mostra a mudança na concentração sanguínea do propofol relativamente ao tempo decorrido desde a administração do profármaco do propofol ou Diprivan® num estudo canino.

Descrição pormenorizada da invenção

Na presente especificação, a menos que de outra forma especificado ou indicado pelo contexto, aplicam-se as seguintes definições: "Fosfono-" refere-se ao grupo -P(0)(OH)2 e "fosfonooximetoxi" ou "éter fosfonooximetílico" refere-se genericamente ao grupo -0CH20P(0) (0H)2. "Metiltiometilo" faz referência ao grupo -CH2SCH3. A presente invenção compreende igualmente compostos em que n=2, tais que um "éter fosfonodi(oximetilíco)" se refere genericamente ao grupo -OCH2OCH2OP (0) (OH) 2. 8

Entende-se portanto que a presente invenção pode ser aplicada a mais do que um grupo hidroxilo, o qual se consegue através da protecção do grupo hidroxilo adicional prévia à derivatização. "Grupos protectores fosfono" refere-se às porções que podem ser utilizadas para bloquear ou proteger o grupo funcional fosfono. De preferência, tais grupos protectores são aqueles que podem ser removidos através de métodos que não afectam de maneira apreciável o resto da molécula. Os grupos protectores fosfonooxi apropriados incluem, por exemplo, o grupo benzilo (designado por "Bn"), o grupo t-butilo e os grupos alilo. 0 termo "sal farmaceuticamente aceitável" faz referência a um metal ou sal de amina do grupo fosfono-acídico em que o catião não contribui significativamente para a toxicidade ou actividade biológica do princípio activo. Os sais metálicos adequados incluem sais de lítio, potássio, sódio, cálcio, bário, magnésio, zinco e alumínio. Os sais metálicos preferidos são os de sódio e potássio. Os sais de amina adequados são, por exemplo, os de amónia, trometamina, trietanolamina, etilenediamina, glucamina, N-metilglucamina, glicina, lisina, ornitina, arginina, etanolamina, só para nomear alguns. Os sais de amina preferidos são os de lisina, arginina, N-metilglucamina e trometamina.

Ao longo da especificação e nas reivindicações pretende-se que o grupo -OCH2OP(CO)(OH)2 faça referência tanto ao ácido livre como aos seus sais farmaceuticamente aceitáveis, a menos que o contexto indique especificamente que se refere ao ácido livre. 9

Um outro aspecto da invenção está relacionado com a obtenção de derivados do álcool e fenol que contenham substâncias farmacêuticas como as incluídas na fórmula I anteriormente definida.

Os derivados, de acordo com a fórmula I, podem ser preparados segundo a sequência de reacção mostrada no Esquema 1:

Esquema 1 0—OH --► -*► φ—θ'^Ν”0Ρ(0Χ0% m (£y~D^OP{OZ)<OZ) ♦ s em que ROH representa um fármaco que contém fenol como por exemplo o propofol, a etoposida ou a vitamina E. Entende-se que a progressão acima exposta é somente uma das várias progressões alternativas. Estas progressões alternativas tornar-se-ão evidentes após a análise da seguinte divulgação e exemplos correspondentes.

No esquema 2 exemplifica-se o processo geral para a preparação de um composto da fórmula I, sendo utilizado o composto de referência camptotecina como exemplo. 10 Esquema 2

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No primeiro passo, o grupo hidroxilo livre da camptotecina é convertido no correspondente grupo de éter metiltiometilico (-OCH2SCH3) . Pode-se obter esta conversão através da reacção com dimetilsulfóxido em presença de anidrido acético e ácido acético. Este método, normalmente conhecido como a reacção de Pummer, foi implementado com sucesso pela Bristol Myers Squibb para a metiltiometilação do Taxol (Pat. Europ. 0604910A1, Bioorg. Med. Chem. Lett., 6, 1837, 1996; ver também a Pat. Europ. 0639577A). A reacção desenvolve-se habitualmente à temperatura ambiente e durante 24-72 horas para produzir o éter metiltiometilico.

Na segunda fase da sequência de reacção, o éter metiltiometilico é convertido no correspondente éter fosfonooximetilico protegido. Esta bem conhecida conversão foi realizada com sucesso pela Bristol Myers Squibb para a fosfonooximetilação do Taxol (Pat. Europ. 0604910A1, Bioorg. Med. Chem. Lett., 6, 1837, 1996). Desta forma, um composto da fórmula III é tratado com N-iodosuccinimida e ácido fosfórico protegido como por exemplo fosfato de dibenzilo. A reacção desenvolve-se num solvente orgânico inerte como por exemplo tetrahidrofurano, um hidrocarboneto halogenado como por exemplo cloreto de metileno e em presença de peneiros moleculares.

Na terceira fase da sequência de reacção, os grupos protectores fosfono são removidos. 0 desbloqueio é obtido por métodos convencionais bem conhecidos na área tais como hidrólise catalisada por ácido ou por base, hidrogenólise, redução e semelhantes. Por exemplo, a hidrogenólise 12 catalítica pode ser utilizada para remover o grupo protector fosfono de benzilo. Podem-se encontrar metodologias desprotectoras em textos Standard tais como no de T.W. Green e P.G.M. Wutz "Protective Groups in Organic Synthesis", J. Wiley Publishers, Nova Iorque, NY, 1991, pp. 47-67.

Os sais de base de um composto da fórmula II podem ser elaborados através de técnicas convencionais que envolvem o contacto entre um composto do ácido livre da fórmula II e uma base metálica ou uma amina. As bases metálicas apropriadas incluem hidróxidos, carbonatos e bicarbonatos de sódio, potássio, lítio, cálcio, bário, magnésio, zinco e alumínio; e as aminas adequadas incluem trietilamina, amónia, lisina, arginina, N-metilglucamina, etanolamina, procaína, benzatina, dibenzilamina, trometamina (TRIS), cloroprocaína, colina, dietanolamina, trietanolamina e semelhantes. Os sais de base podem ser ainda purificados por cromatografia seguida de liofilização ou cristalização.

Os compostos da presente invenção são substâncias farmacêuticas que contêm éter fosfonooximetílico, como por exemplo a camptotecina, o propofol, a etoposida, o tocoferol, etc. Os sais farmaceuticamente aceitáveis apresentam uma solubilidade em água melhorada relativamente aos compostos parentais, permitindo assim a elaboração de formulações farmacêuticas mais convenientes. Sem ficar limitados pela teoria, acredita-se que os éteres fosfonooximetílicos da presente invenção são profármacos das substâncias farmacêuticas parentais, onde a porção fosfonooxietílica se divide após conjugação com fosfatase 13 in vivo para subsequentemente produzir o composto parental. Conforme acima indicado, os compostos da invenção instantânea são agentes farmacêuticos ou terapêuticos activos.

Por exemplo, os compostos da fórmula II da presente invenção podem ser utilizados de uma forma similar à da camptotecina. A estrutura do profármaco da camptotecina é mostrada acima. Por conseguinte, o oncologista especializado no tratamento do cancro será capaz de estabelecer, sem experimentação indevida, um protocolo de tratamento adequado para administrar um composto da presente invenção. A dosagem, forma e programação da administração dos compostos desta invenção não estão especialmente limitados e variarão em função do composto especifico a ser utilizado. Deste modo, um composto da fórmula II pode ser fornecido através de qualquer via de administração, preferivelmente por via parentérica. A dose poderá estar compreendida, por exemplo, entre 0,1 e cerca de 100 mg/kg de peso corporal ou entre aproximadamente 5 e 500 mg/m2 de superfície corporal. Os compostos da fórmula II também podem ser administrados oralmente. A dose oral poderá estar compreendida entre 5 e cerca de 500 mg/kg de peso corporal. A dose efectiva utilizada variará em função da composição específica do preparado, a via de administração e a localização, órgão hospedeiro e tipo de tumor a ser tratado. Para estabelecer a dosagem deverão ser tidos em consideração muitos factores que modificam a acção do fármaco, incluindo idade, sexo, regime alimentar e condições físicas do doente. 14

Um outro exemplo é o profármaco do propofol de acordo com a fórmula I da presente invenção. A seguir mostra-se a estrutura do profármaco do propofol:

Na fórmula do profármaco do propofol acima especificada, Z corresponde ao mesmo que foi definido anteriormente na fórmula II. Portanto, o anestesista especializado na aplicação da anestesia será capaz de estabelecer, sem experimentação indevida, um protocolo de tratamento adequado para administrar um composto da presente invenção. A dosagem, forma e programação da administração dos compostos desta invenção não estão especialmente limitados e variarão em função do composto especifico a ser utilizado. Deste modo, um composto da fórmula I como por exemplo o profármaco do propofol pode ser fornecido através de qualquer via de administração, preferivelmente por via parentérica. A dose poderá estar compreendida, por exemplo, entre 0,5 e 10 mg/kg de peso corporal, administrada de acordo com os procedimentos para a indução da anestesia geral ou manutenção da mesma. Alternativamente, o composto da fórmula I poderá ser administrado por infusão parentérica e a dose poderá estar 15 compreendida entre, por exemplo, 2pg/kg/min e 800pg/kg/min, administrada de acordo com os procedimentos para a manutenção da anestesia geral, iniciação e manutenção da sedação por CAM (Concentração Alveolar Minima) ou iniciação e manutenção da sedação em UCI (Unidade de Cuidados Intensivos). A presente invenção também inclui preparados farmacêuticos que contêm uma quantidade farmacologicamente activa do composto da fórmula I em combinação com um ou mais veículos, excipientes, diluentes ou adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis. Por exemplo, os compostos da presente invenção podem ser formulados sob a forma de pastilhas, comprimidos, misturas de pós, cápsulas, injectáveis, soluções, supositórios, emulsões, dispersões, complexos alimentares e outras formas apropriadas. Também podem ser produzidos sob a forma de preparações sólidas estéreis, por exemplo através da secagem por congelamento (liofilização), e, se desejado, combinados com outros excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Estas preparações sólidas podem ser reconstituídas com água estéril, soro fisiológico ou uma mistura de água e um solvente orgânico como por exemplo propileno, glicol, etanol e semelhantes ou qualquer outro meio estéril injectável, imediatamente antes da administração parentérica. Entre os veículos farmaceuticamente aceitáveis típicos destacam-se, por exemplo, manitol, dextranos, lactose, açúcares não redutores, amidos de batata e milho, estearato de magnésio, talco, óleos vegetais, glicóis polialcalinos, etilcelulose, polivinilpirrolidona, carbonato de cálcio, oleato de etilo, miristato de isopropilo, benzoato de benzilo, carbonato de 16 sódio, gelatina, carbonato de potássio e ácido silicico. A preparação farmacêutica também pode conter substâncias auxiliares não tóxicas tais como agentes emulsionantes, conservantes, humectantes e semelhantes, como por exemplo monolaurato de sorbitano, oleato de trietanolamina, monoestearato de polioxietileno, tripalmitato de glicerilo, dioctilsulfosuccinato de sódio, etc.

Nos procedimentos experimentais que se detalham a seguir, entende-se que todas as temperaturas indicadas estão em graus centígrados (C) quando não for especificado. As características espectrais da Ressonância Magnética Nuclear (NMR) referem-se às permutas químicas (δ) expressadas em partes por milhão (ppm) versus o tetrametilsilano (TMS) como Standard de referência. A área relativa referida para as várias permutas nos dados espectrais da NMR de protão corresponde ao número de átomos de hidrogénio de um tipo funcional específico na molécula. A natureza das permutas quanto à multiplicidade é referida como singleto largo (bd) , dupleto largo (bd), tripleto largo (bt), quarteto largo (bq), singleto (s) , multipleto (m), dupleto (d), quarteto (q), tripleto (t), duplo dupleto (dd), duplo tripleto (dt) e duplo quarteto (dq). Os solventes utilizados para registar os espectros NMR são a acetona-d6 (acetona deuterada), DMS0-d6 (dimetilsulfóxido deuterado), D20 (água deuterada), CDCI3 (clorofórmio deuterado) e outros solventes deuterados convencionais.

As abreviaturas utilizadas são abreviaturas convencionais de uso comum na área. Algumas delas são: MS (Espectrometria de Massa); HRMS (Espectrometria de Massa de 17

Alta Resolução); Ac (acetilo); Ph (fenilo), FAB (Bombardeamento Atómico Rápido); min (minuto); h ou hs (hora(s)); NIS (N-iodosuccinimida) ; DMSO (dimetilsulfóxido); THF (tetrahidrofurano).

Os seguintes exemplos são apresentados para efeitos de ilustração da síntese dos compostos representativos da invenção instantânea e não devem ser interpretados de forma alguma como limitadores do âmbito da invenção. 0 indivíduo qualificado nesta área será capaz de adaptar estes métodos, sem experimentação indevida, à síntese dos compostos incluídos no âmbito da presente invenção mas não especificamente divulgados. Nos seguintes exemplos são utilizados sais específicos como amostra. Porém, estes sais não devem ser interpretados como limitadores. Um exemplo desta situação é o uso repetido de um sal de dibenzilfosfato de prata. Podem ser utilizados sais de tetraalquilamónio, bem como sais de tetrametilamónio e outros sais metálicos alcalinos em lugar do sal de prata. Os exemplos I, II, IV e V estão relacionados com os compostos da invenção, enquanto que os restantes exemplos são unicamente exemplos de referência.

EXEMPLOS I. Síntese do 0-(fosfonooximetil)propofol 18

Ia. Sintese do 0-(metiltiometil)propofol:

A uma suspensão agitada de hidreto de sódio (150 mg, 6,2 mmol) em HMPA seca (10 ml), sob uma atmosfera de árgon, foi adicionado propofol (1,1 ml de 97%, 5,7 mmol) às gotas durante 15 minutos. A mistura reaccional foi depois agitada à temperatura ambiente durante mais 30 minutos. A esta mistura foi adicionado sulfureto de clorometil-metilo (550 μΐ de 95%, 6,2 mmol) às gotas e depois foi agitada à temperatura ambiente. Após 20 horas a mistura reaccional foi fraccionada com agitação entre água (10 ml) e benzeno (20 ml) . A camada aquosa foi separada e extraída com benzeno (10 ml) . As fracções de benzeno foram combinadas, lavadas com água (2x3 ml), secadas sobre sulfato de sódio e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo oleoso resultante foi submetido a cromatografia em coluna (sílica gel, hexano, depois 4:1 hexano/clorofórmio) para produzir 19 1,15 g (rendimento de 85%) do composto acima referido na forma de um óleo incolor. EIMS: [M+], m/s 238. *h mm mo mhz, cdci,, δ): i,24 ca, j * §.9 hz, um, 2.3? (s, 3H}, 3.37 {hept, J = €.9 Hz, 2H), 4,86 (s, 2H), 7.12 ts, 3Ή} .i3C (75 MH2, CDC13í S) : 15,40, 23,98, 26.68, 73.12, 124.04, 125.05, 141.74, 152,20.

Ib. Síntese do O-(clorometil)propofol:

(3,00 g, 12,5 mmol) em cloreto de metileno seco (30 ml), sob uma atmosfera de árgon, foi adicionada uma solução de 1 M de SO2CI2 em cloreto de metileno seco (12,2 ml, 12,2 mmol) a 5°C durante cinco minutos. A mistura reaccional foi agitada durante 10 minutos à mesma temperatura e depois durante três horas à temperatura ambiente. 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o óleo castanho residual foi purificado por cromatografia em coluna flash com sílica gel (1:20 hexano/acetato de etilo) para produzir 2,36 g (rendimento de 83%) do composto acima referido na forma de um óleo amarelo. 20 CXMS (NHj); ÍM?% m/z 226, ί3Η3]\ m/z 244. % HMR (300 MHz, CDC13, δ): 1.22 {d, J ~ 6.9 Hz, 12H), 3.35 (hepfc, J ~ 6.9 Hz, 2HJ, 5,76 (s, 2H}, 7.15 (τη, 3H} ,iJC NHR (75 Mlz, CDCI3, 5t23.93, 26.84, 83.34, 124.34, 125.95, 141.34, 150,93.

Ic. Síntese do éster dibenzílico do O-(fosfonooximetil)propofol (rota 1):

Uma mistura de 0-(clorometil)propofol (2,20 g, 9,7 mmol), dibenzilfosfato de prata (3,85 g, 10,0 mmol) e tolueno seco (50 ml) foi ref luxada sob uma atmosfera de árgon durante 45 minutos. A mistura foi arrefecida à temperatura ambiente e filtrada. Após a evaporação do solvente em vácuo, o resíduo oleoso foi purificado por cromatografia em coluna flash com sílica gel (9:1 hexano/acetato de etilo e depois 1:1 hexano/ acetato de etilo) para produzir 4,43 g (rendimento de 98%) do composto acima referido na forma de um óleo amarelo.

Ic. Síntese do éster dibenzílico do 0-(fosfonooximetil)propofol (rota alternativa 1): 21

A uma solução agitada de 0-(metiltiometil)propofol (1,45 g, 6,08 mmol) em cloreto de metileno seco (15 ml), sob uma atmosfera de árgon e a uma temperatura entre 0 e 5°C, foi adicionada uma solução de 1 M de SO2CI2 em cloreto de metileno seco (6,5 ml, 6,5 mmol) durante cinco minutos. A mistura reaccional foi agitada durante 10 minutos a 5°C e durante três horas à temperatura ambiente. Depois o solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o óleo residual foi dissolvido em tolueno (categoria ACS, 20 ml) . Foi adicionado dibenzilfosfato de prata (3,50 g, 9,1 mmol) e a mistura resultante foi refluxada durante 45 minutos. A mistura reaccional castanha foi arrefecida à temperatura ambiente e filtrada. Após a evaporação do solvente em vácuo, o residuo oleoso foi purificado por cromatografia em coluna flash com silica gel (9:1 hexano/acetato de etilo e depois 1:1 hexano/ acetato de etilo) para produzir 2,41 g (rendimento de 85%) do composto acima referido na forma de um óleo amarelo. Este produto tinha o mesmo valor de Rf (TLC) e espectro de ΧΗ NMR (300 MHz, CDCI3) que uma amostra autêntica.

Ic. Sintese do éster dibenzilico do O-(fosfonooximetil)propofol (rota alternativa 2): 22

A uma solução agitada de hidreto de sódio (41 mg de uma dispersão a 60% em óleo mineral, 1,02 mmol) em dimetoxietano seco (1,5 ml), sob uma atmosfera de árgon, foi adicionado propofol às gotas (200 μΐ de 97%, 1,04 mmol) durante cinco minutos e a mistura resultante foi agitada durante mais 15 minutos. A solução homogénea resultante foi adicionada às gotas a uma solução agitada de cloroiodometano (4,0 ml, 53 mmol) em dimetoxietano seco (4 ml) durante 15 minutos. Esta mistura reaccional foi agitada durante duas horas, filtrada e depois o solvente e o excesso de cloroiodometano foram evaporados. O óleo residual foi dissolvido em tolueno (categoria HPLC, 10 ml). A esta solução foi adicionado dibenzilfosfato de prata (400 mg, 1,04 mmol) e a mistura resultante foi refluxada durante 10 minutos. Depois de que a mistura reaccional fosse arrefecida à temperatura ambiente e filtrada, o solvente foi evaporado em vácuo. O resíduo oleoso foi purificado por cromatografia em coluna flash com sílica gel (9:1 hexano/acetato de etilo e depois 1:1 hexano/acetato de etilo) para produzir 205 mg (rendimento de 42%) do composto acima referido na forma de um óleo amarelo. Este produto tinha o mesmo valor de Rf (TLC) e espectro de ΧΗ NMR (300 MHz, CDCI3) que uma amostra autêntica. 23

Na reacção Ic (rota alternativa 2) acima apresentada, entende-se que podem ser utilizados outros reagentes em função do composto final desejado. Por exemplo, quando se desejar obter um composto da fórmula I em que n=2, o cloroiodometano pode ser substituído por um composto como por exemplo X-CH2-O-CH2-CI, em que X é um grupo abandonante bom.

Ic. Sintese do éster dibenzilico do O-(fosfonooximetil)propofol (rota alternativa 3):

A uma solução agitada de 0-(metiltiometil)propofol (91 mg, 0,38 mmol) em cloreto de metileno seco (2 ml), sob uma atmosfera de árgon, foram adicionados peneiros moleculares activados de 4 Â em pó (100 mg) e a seguir uma solução de fosfato de dibenzilo (127 mg, 0,45 mmol) e N-iodosuccinimida (102 mg de 95%, 0,43 mmol) em tetrahidrofurano (2 ml). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora, filtrada e diluída com cloreto de metileno (30 ml) . A solução resultante foi lavada com uma outra solução de tiosulfato de sódio (2 ml de uma solução de 1 M) e uma solução saturada de bicarbonato de sódio (3 ml) e salmoura (5 ml), secada sobre uma mistura de sulfato de sódio e magnésio, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo oleoso foi purificado por cromatografia em coluna flash com sílica gel (1:1 24 hexano/acetato de etilo) para produzir 120 mg (rendimento de 67%) do composto acima referido na forma de um óleo amarelo. Este produto tinha o mesmo valor de Rf (TLC) e espectro de 2Η NMR (300 MHz, CDC13) que uma amostra autêntica.

Ic. Sintese do éster dibenzilico do O-(fosfonooximetil)propofol (rota alternativa 4):

A uma solução de propofol (38 mg de 97%, 0,21 mmol) em cloreto de metileno (1 ml) foi adicionado brometo de tetrabutilamónio (10 mg, 0,03 mmol) e uma solução de

hidróxido de sódio (40 mg, 1 mmol) em água (0,2 ml) . A mistura heterogénea foi agitada durante 15 minutos. A seguir foi adicionada uma solução de fosfato de clorometil-dibenzilo (104 mg, 0,32 mmol) em cloreto de metileno (1 ml) e a mistura reaccional foi agitada vigorosamente durante oito horas. Depois a mistura foi diluída com cloreto de metileno (10 ml), lavada com água (2 ml), secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada em vácuo. O resíduo oleoso foi purificado por cromatografia em coluna flash com sílica gel (hexano, 20:1 hexano/acetato de etilo e 10:1 hexano/acetato de etilo) para produzir 44 mg (rendimento de 45%) do composto acima referido na forma de um óleo amarelo. Este produto tinha o mesmo valor de Rf (TLC) e 25 espectro de 1H NMR (300 MHz, CDC13) que uma amostra autêntica.

Na reacção Ic (rota alternativa 4) acima apresentada, entende-se que o reagente

O

F—OBn OBn pode ser genericamente representado pela fórmula seguinte:

em que X representa um grupo abandonante, R3 e R4 são ambos um átomo de hidrogénio, um grupo orgânico ou um grupo inorgânico e Y é um grupo protector fosfato. Os exemplos de grupos abandonantes incluem cloro, bromo, iodo, tosilato ou qualquer outro grupo abandonante apropriado. Os exemplos de grupos protectores fosfato abrangem aqueles que bloqueiam temporariamente a reactividade do grupo fosfato e permitem a permuta selectiva através da reacção de substituição nucleofilica. Os exemplos destes grupos bloqueadores compreendem mas não estão limitados ao benzilo, alilo, butilo e isopropilo terciários, etilo e β-cianoetilo.

Ic. Síntese do éster dibenzílico do 0-(fosfonooximetil)propofol (rota alternativa 5): 26

A uma suspensão agitada de hidreto de sódio (36 mg de uma dispersão a 60% em óleo mineral, 0,91 mmol) em dimetoxietano seco (2 ml) , sob uma atmosfera de árgon, foi adicionado propofol às gotas (172 μΐ de 97%, 0,90 mmol) durante cinco minutos. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante mais 20 minutos. A seguir adicionou-se à mistura uma solução do formaldeido bis-(dibenzil-fosfono)acetal (500 mg, 0,88 mmol) em dimetoxietano seco (3 ml). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas e depois a 70°C durante 2,5 horas. Em seguida a mistura foi filtrada e o solvente foi evaporado em vácuo. 0 resíduo oleoso foi purificado por cromatografia em coluna flash com sílica gel (hexano, 10:1 hexano/acetato de etilo e depois 1:1 hexano/acetato de etilo) para produzir 29 mg (rendimento de 7%) do composto acima referido na forma de um óleo amarelo. Este produto tinha o mesmo valor de Rf (TLC) e espectro de ’ή NMR (300 MHz, CDCI3) que uma amostra autêntica.

Id. Síntese do O-(fosfonooximetil)propofol: 27

A uma solução de éster dibenzílico do 0-(fosfonooximetil)propofol (115 mg, 0,245 mmol) em metanol (10 ml) foi adicionado paládio sobre carbono (10%, 20 mg) . Esta mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio (1 atm) durante 1,5 horas. O catalisador foi removido por filtração através de Celite e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida para produzir 70,5 mg (rendimento de 100%) do composto acima referido na forma de um óleo incolor, instável quando mantido à temperatura ambiente. FABMS-(GLY): [M-H]", m/z 287 XH NMR (300 MHz, acetona-d6, δ): 1,19 (d, J = 6,8 Hz, 12H) , 3,46 (sext, J = 6,8 Hz, 2H), 5,45 (d, J = 9,7 Hz, 2H), 7,15 (m, 3H) . 13C NMR (75 MHz, acetona-d6, δ): 24,2178; 27,1496; 94,63; 94,65; 124,08; 126,30; 142,46; 152,32.

Ie. Síntese do sal dissódico do O- (fosfonooximetil)propofol: 28

A uma solução de éster dibenzílico do 0- (fosfonooximetil)propofol (1,05 g, 2,24 mmol) em tetrahidrofurano (100 ml) foram adicionados água (5 ml) e paládio sobre carbono (10%, 300 mg) . Esta mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio (1 atm) durante uma hora. O catalisador foi removido por filtração através de Celite e o filtrado foi tratado com uma solução de carbonato hidrato de sódio (263 mg em 3 ml de água, 2,12 mmol). 0 THF foi evaporado sob pressão reduzida e a solução aquosa residual foi extraída com éter (3x3 ml). A camada aquosa foi evaporada até à secura (corrente de árgon ou evaporador rotativo) e o sólido resultante foi deixado secar durante a noite em vácuo, lavado com éter (4x4 ml) e hexano (2x4 ml) e secado novamente em vácuo para produzir 655 mg (rendimento de 93%) do composto acima referido na forma de um pó branco. FASMS-iGV£): [M~2Na+H3~, m/z 287, lB NHR (300 MHz, OaO, d); 1,22 {â, J - 7.0 Hzt 12H), 3,46 ttiept, J = 6.9 Hz, 2H), 5.27 (d, J * 7.5 Hz, 2H), 7.28 (ffi, 3H). II. Síntese do O-(fosfonooximetil)alfa-tocoferol 29 29

Me lia. Síntese do éster dibenzílico do 0-(fosfonooximetil)alfa-tocoferol:

A uma solução de fosfato de clorometil-dibenzilo (323 mg, 0,98 mmol), alfa-tocoferol (409 mg de 97%, 0,92 mmol) e brometo de tetrabutilamónio (301 mg, 0,92 mmol) em benzeno (5 ml) foi adicionada uma solução aquosa de hidróxido de sódio (150 mg em 0,2 ml de água, 3,7 mmol) . A mistura reaccional resultante foi agitada vigorosamente à temperatura ambiente durante duas horas sob uma atmosfera de árgon. A seguir a mistura foi diluída com benzeno (10 ml) , lavada com água (3x3 ml) , secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo oleoso castanho foi purificado por cromatografia em coluna flash com sílica gel (10:1 hexano/acetato de etilo) para produzir 336 mg (rendimento de 51%) do composto acima referido na forma de um óleo amarelo. 30 FAEMS+ {MBA} : ]Μ]\ m/z 720. *H Wm í 500 HHz, CDClj, δ): 0.85 (m, 12H), 1.21 (s, 3H) , 1.27 {m, 24HJ, 1.75 {», 2H), 2.06 {s, 3H) , 2.11 (s, 3H) , 2.14 (s, 3Hh 2.54 (t, J- 6.8 Hz, 2H), 4,97 {m, 4H) , 5.20 Cd, J « 9.3 Hz, 2S), 7.31 (ra, lOHJ.

Ilb. Síntese do O-(fosfonooximetil)alfa-tocoferol:

A uma solução de éster dibenzílico do 0-(fosfonooximetil)alfa-tocoferol (88 mg, 0,12 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) foi adicionado páládio sobre carbono (10%, 15 mg). A mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio (1 atm) durante 10 minutos (a reacção completou-se após 5 minutos conforme determinado por TLC) . O catalisador foi removido por filtração através de Celite, o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e depois secado em vácuo. Obteve-se o composto acima indicado numa quantidade de 70 mg (rendimento de 100%) na forma de óleo acastanhado, o qual era instável à temperatura ambiente. FABMS+ÍMBA) : fM]\ m/z 540, [M + Ma]*, m/z 563; {MBA + íd) : ÍM 4- Li]*, m/z 547 31 IIc. Síntese do sal dissódico do 0-(fosfonooximetil)alfa-tocoferol: 31

í.fkftS/C 89%.....*

O

A uma solução de éster dibenzílico do 0- (fosfonooximetil)alfa-tocoferol (100 mg, 0,14 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) foi adicionado paládio sobre carbono (10%, 18 mg). A mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio (1 atm) durante 5 minutos. 0 catalisador foi removido por filtração através de Celite, o filtrado foi evaporado à temperatura ambiente sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi dissolvido em éter (2 ml) . A solução de éter foi depois tratada com uma solução aquosa de hidróxido de sódio (11,2 mg em 100 ml de água, 0,28 mmol) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. A fase do éter foi removida e a fase aquosa foi lavada com éter (3 x 3 ml) e de seguida secada em vácuo durante 20 horas para produzir 73 mg (rendimento de 89%) do composto acima indicado na forma de sólido cinzento. FÁBMS+(TG/G); [ΗΗ]+. m/z 585, (M + Ma]*, m/z 607 A síntese dos derivados da camptotecina solúveis em água é também detalhada como se segue: 32 III- Sintese da 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina 32

Illa. Sintese da 20-0-(metiltiometil)camptotecina:O O

A uma suspensão de camptotecina (5,0 g, 14,3 mmol) em dimetilsulfóxido (250 ml) foram adicionados anidrido acético (125 ml) e ácido acético (35 ml). A mistura heterogénea foi agitada vigorosamente à temperatura ambiente durante 24 horas, vertida em gelo (800 ml) , agitada durante 30 minutos e depois extraída com cloreto de metileno (4 x 100 ml) . Os extractos combinados de cloreto de metileno foram lavados com água (2 x 100 ml) e secados sobre sulfato de magnésio. O cloreto de metileno foi removido sob pressão reduzida para produzir um sólido acastanhado. 0 sólido foi dissolvido num volume mínimo de cloreto de metileno. Esta solução foi filtrada e diluída 33 com um excesso de 10 vezes de hexano e depois guardada no refrigerador durante a noite. O sólido precipitado foi totalmente filtrado, lavado várias vezes com hexano e secado para produzir 5,38 g (rendimento de 92%) do composto acima indicado na forma de um pó castanho claro. aD20 -123,6° (c 0,55, CHC13) . FABMS+(NBA): [MH}*, m/z4G9, % KMR {400 MHz, CDC13j δ): 0.93 {t, J - 7.2 Hz, 3K), 2.11 (sext, J ~ 7.6 Hz, 1H) , 2.29 {sext, J ~ 7.6 Hz, 1H}. 2.30 (s, 3H), 4.58 ia, 2H), 5.33 {s, 2H), 5.40 {d, J * 17.2 Hz, 1H), 5.62 (d, 17.3 Ha, 1H}, 7.48 is, 1H}, 7.69 tt, <7= 7.1 Hz, 1HJ, 7.86 {t, J~ 7.1 Hz, 1Η), 7.96 {d, J ® 8.1 Ha, 1H) , 8.25 {d, 8.5 Ha, 1H), 8.42 (s, 1H>, i3C Í©£R f75 MHs, CDC1S, 6): 7.76, 14.89, 33.90, 49.92, 66.68, 71.02, 76.57, 97.51, 122,63, 128.02, 128.09, 128.30, 129.71, 130.64, 131.11, 145.14, 146.10, 148.88, 152.27, 157.43, 169.34, 169.73,

Illb. Síntese do éster dibenzílico da 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina:

34 A uma suspensão bem agitada de 20-0-(metiltiometil)camptotecina (1,00 g, 2,44 mmol) e peneiros moleculares activados de 4 Â em pó (5 g) em tetrahidrofurano (20 ml) foi adicionada uma suspensão de N-iodosuccinimida (2,00 g de 95%, 8,44 mmol) e fosfato de dibenzilo (2,20 g, 7,83 mmol) em cloreto de metileno (12 ml). A mistura resultante foi agitada vigorosamente à temperatura ambiente durante 30 minutos, filtrada e diluída com acetato de etilo (300 ml) . A solução foi lavada com tiosulfato de sódio aquoso (10%, 2 x 15 ml) , água (2 x 20 ml), salmoura (50 ml) e secada sobre sulfato de magnésio. A mistura foi filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo oleoso castanho foi purificado por cromatografia em coluna flash com sílica gel (98:2 acetato de etilo/metanol) e secado em vácuo durante a noite para produzir 1,19 g (rendimento de 7 6%) do composto acima referido na forma de uma espuma amarela. aD2o -43,1° (c 0,55, CHC13) - 35 FABKS-MNB&) : [MHJ\ m/z 639. 1H mm (400 MHz, CDCI3, i 5); 0,91 (t, 7 .4 Hz, 3H), 2 i .09 (sext, J~ 7.4 Hz, 1H), 2. 26' (3£3tt, J* 7.4 Hz, 1H) , 5.06 (m, 4H) , 5. 28 (m, 3H) , 5,35 (d, jfe 17. ,0 Hz, 1H), 5.48 (2xd, 10. 5 Ha , 1H) , 5.64 (d, J * 17.3 Hz , 1H>, 7 .59 (s, 1HJ. 1 '.67 Çt, J « 7.0 Hz, ; LH}, 7.80 (t, J * 7.1 Hz, XH) , 7. 94 (d, «7* o 00 Hz, 1H>, 8.13 (d, * 8. 5 Hz, 1H), 8.35 £s, 1H) . i5C NMR (100 Μϊζ, CDCI3, 8) !: 7.73, 29.53, 32. 49, 49.86, 66. 74, 69. 37, 69,44, 78 .48, 88. 99, 89.04 , 98.09, 121.55 , 127. 65, 127 .70, 127.90, 128.01, 128.25, 128.35, 128.36, 129. 62, 130 .48, 130.97, 135.45, 135.55, 145.47, 145.82, 148. 76, 152 ,15, 157.18, 168.67. IIIc. Síntese da 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina:

4h A uma solução de éster dibenzílico da 20-0- (fosfonooximetil)camptotecina (500 mg, 0,78 mmol) em tetrahidrofurano (100 ml) e água (5 ml) foi adicionado paládio sobre carbono (10%, 500 mg). Esta mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio (1 atm) durante 35 minutos. 0 catalisador foi removido por filtração através de Celite, sendo esta depois lavada com tetrahidrofurano (300 ml) e os filtrados combinados foram evaporados sob 36 pressão reduzida. 0 sólido verde resultante foi lavado com éter (2 x 20 ml) e hexano, secado em vácuo e de seguida dissolvido em metanol quente (60 ml). A solução foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida num volume de ~10 ml. Após permanecer à temperatura ambiente durante uma hora, a solução foi colocada no refrigerador durante a noite. O precipitado cristalino formado durante a noite foi totalmente filtrado e secado em vácuo para produzir 155 mg do composto acima referido na forma de um sólido amarelo. O filtrado foi concentrado num volume de ~1 ml e guardado no refrigerador durante uma hora para serem obtidos 28 mg adicionais do produto. Rendimento total: 183 mg (51%). FABMS+CMBA): (Mí]\ m/z 459, [H + Na]\ m/z 481, XH NMR (400 MHz, D20, δ}: 0.95 {t, J ~ 7.5 Hz, 3H), 2.25 (m, 2H>, 4.98 (d, J - S.O Hz, 2H) , 5,14 {2xâ, J * 9,3 Hz, 1H), 5.22 (2xd, J - 8,9 Hz, 1H>, 5,48 (d, J * 17,0 Hz, 1H), 5.60 (d, σ = 16.9 H2, 1H}, 7.54 (s, 1H), 7.56 ít, J - 7.7 Hz, 1H), 7.77 (t, J « 7.2 Hz, 1H), 7.86 [â, J - 8.2 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H). A estrutura química e pureza do produto também foram confirmadas por espectroscopia de 1H NMR do seu sal dissódico, formado a partir do ácido e dois equivalentes molares do bicarbonato de sódio em D20. 37 IIIc. Síntese da 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina (variante alternativa):

A uma solução de éster dibenzílico da 20-0- (fosfonooximetil)camptotecina (500 mg, 0,78 mmol) em tetrahidrofurano (100 ml) e água (5 ml) foi adicionado paládio sobre carbono (10%, 500 mg). A mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio (1 atm) durante 30 minutos. 0 catalisador foi removido por filtração através de Celite, sendo esta depois lavada com tetrahidrofurano (2 x 100 ml), e os filtrados combinados foram tratados com uma solução aquosa de carbonato hidrato de sódio (97 mg em 2 ml de água, 0,78 mmol). O THF foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo aquoso heterogéneo foi diluído com água (10 ml) e extraído com acetato de etilo (2 x 3 ml) . A solução homogénea amarela resultante foi acidificada com ácido hidroclórico (10%) a pH 1. O precipitado resultante foi totalmente filtrado e secado em vácuo durante a noite para produzir 145 mg (rendimento de 41%) do composto acima indicado na forma de um sólido amarelo.

Illd. Síntese do sal dissódico da 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina: 38

A uma suspensão de 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina (5 mg, 10,9 pmol) em óxido de deutério (0,5 ml) foi adicionada uma solução óxido de deutério de bicarbonato de sódio (50 μΐ de solução a 0,44 M = 22 pmol) . A mistura heterogénea foi sonicada durante alguns minutos para produzir uma solução homogénea amarela do composto acima indicado. 1H NMR (400 MHz, D2O, após 10 min. , 96% lactona, 4% carboxilato, δ): 1,05 (t, J = 7,2 Hz, 3H) ; 2,27 (m, 2H) ; 4,57 (d, J = 18,8 Hz, 1H); 4,70 (d, J = 18,9 Hz, 1H); 5,06 (dd, J = 8,3; J = 5,4 Hz, 1H) ; 5,18 (dd, J = 7,6; J = 5,5 Hz, 1H) ; 5,45 (d, J = 16,7 Hz, 1H) ; 5,59 (d, J = 16,8 Hz, 1H); 7,34 (t, J = 7,1 Hz, 1H); 7,41 (s, 1H); 7,60 (m, 2H); 7,81 (d, J = 8,3 Hz, 1H); 8,17 (s, 1H).

Illd. Síntese do sal dissódico da 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina (variante alternativa 1):

39 A uma solução de éster dibenzílico da 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina (78 mg, 0,122 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) e água (3 ml) foi adicionado paládio sobre carbono (10%, 80 mg) . A mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio (1 atm) durante 30 minutos. O catalisador foi removido por filtração através de Celite e o filtrado foi tratado com uma solução aquosa de bicarbonato de sódio (20 mg em 0,5 ml de água, 0,238 mmol). O precipitado amarelo foi totalmente filtrado, lavado com cloreto de metileno e secado em vácuo para produzir 35 mg (rendimento de 57%) do composto acima referido (sólido castanho claro) como uma mistura da sua forma lactona (82%) e da sua forma carboxilato (18%) (por 1H NMR) .

Illd. Sintese do sal dissódico da 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina (variante alternativa 2):

A uma solução de éster dibenzilico da 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina (500 mg, 0,78 mmol) em tetrahidrofurano (100 ml) e água (5 ml) foi adicionado paládio sobre carbono (10%, 500 mg). Esta mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio (1 atm) durante 30 minutos. O catalisador foi removido por filtração através de Celite, sendo esta depois lavada com tetrahidrofurano (50 ml) e os filtrados combinados foram tratados com uma 40 solução aquosa de carbonato hidrato de sódio (90 mg em 2 ml de água, 0,72 mmol) . O tetrahidrofurano foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em água (15 ml) . A mistura heterogénea foi extraída com acetato de etilo (2 x 15 ml) e éter (20 ml), e a solução aquosa homogénea resultante foi evaporada até à secura em corrente de árgon à temperatura ambiente. O resíduo foi secado em vácuo durante a noite para produzir 290 mg (rendimento de 80%) do composto acima indicado (sólido laranja) como uma mistura da sua forma lactona (60%), a sua forma carboxilato (40%) e uma pequena quantidade de subprodutos (por 1H NMR) .

Ille. Síntese do sal monosódico da 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina:

A uma suspensão continuamente sonicada de 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina (5 mg, 10 pmol) em óxido de deutério (0,5 ml) foi adicionada às gotas uma solução óxido de deutério de bicarbonato de sódio (21 μΐ de solução a 0,44 M = 9,2 pmol) até alcançar uma homogeneização completa. Obteve-se uma solução homogénea amarela do composto acima indicado. 41 % mk (400 MHz» D*0, δ): 1.00 (t, J = 7.2 Hz, 3H) , 2.23 (κι, 2H) ( 4.40 {a, J * IS.8 Hz, 1H) , 4.50 (d, J = 18.8 Hz, 1H> , 5.10 (dá, J » 9.7, J = 5.9 Hz, 1H! , 5.26 ídd, J a 9.0, J » 6.1 Hz, 1H5, 5.39 fd, J= 16.7 Hz, 1H), 5,50 (ô, J =- 1S.7 Hz, 1H} , 7,20 (t, J = 7,3 Hz, 1H) , 7.28 (s, 1H} , 7.46 |m, 2H), 7.66 (d, 8.4 Hz, 1HJ, 8.02 {s, 1H) .

Illf. Síntese do sal de lisina da 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina:

A uma suspensão continuamente sonicada de 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina (5 mg, 10 pmol) em óxido de deutério (0,5 ml) foi adicionada às gotas uma solução óxido de deutério de L-lisina (25 μΐ de solução a 0,43 M = 10,7 pmol) até alcançar uma homogeneização completa. Obteve-se uma solução homogénea amarela do composto acima indicado. 1H NMR (400 MHz, D20, 94% lactona, 6% carboxilato, δ): 1,02 (t, J = 7,2 Hz, 1H); 1,49 (m, 2H); 1,73 (m, 2H); 1,88 (m, 2H); 2,25 (m, 2H); 3,03 (t, J = 7,5 Hz, 2H); 3,76 (t, J = 6,0 Hz, 1H) ; 4,43 (d, J = 19,0 Hz, 1H) ; 4,52 (d, J = 18,9 42

Hz, 1H) ; 5,11 (dd, J = 9,7; J = 5,8 Hz, 1H) ; 5,27 (dd, J =

9,2; J= 5,8 Hz, 1H); 5,41 (d, J = 16,7 Hz, 1H); 5,53 (d, J = 16,7 Hz, 1H) ; 7,23 (t, J = 7,4 Hz, 1H) ; 7,30 (s, 1H) ; 7,49 (m, 2H); 7,68 (d, J= 8,4 Hz, 1H); 7,04 (s, 1H).

Illg. Síntese do sal de arginina da 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina:

A uma suspensão continuamente sonicada de 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina (5 mg, 10 pmol) em óxido de deutério (0,5 ml) foi adicionada às gotas uma solução óxido de deutério de L-arginina (27 μΐ de solução a 0,40 M = 10,8 pmol) até alcançar uma homogeneização completa. Obteve-se uma solução homogénea amarela do composto acima indicado. 43 hí NMR {400 MHz, D20, S) ! .· 1.02 ít, 3 = 7.1 Hz, 1H) , 1 .66 ím< 2) , 1.89 ím, 2HÍ , 2,25 {!», 2H) , 3, 20 ít , J= 6,8 Hz, 2HJ, 3.7? ít , J s 6,0 Hz, 1H}, 4 .40 (d. J- 19 .0 Hz, 1H) , 4 ,49 (d, J= 18 .8 Hz, 1H) , 5, 12 (dd. J= 9,7, J» = 6, ,0 Hz, 1H), 5, 29 ídd, J» 8, 8, J* 6.1 Hz, 1H), 5, 40 (d, J 16, .7 Kz, 1H) , 5. 51 Cd, J - 16, 7 Hz, 1H5, 7.20 (t, J = 7,3 Hz, 1H) , 7.29 (s, 1H), 7,4? {m, 2H), 7.66 (d, J * 8.3 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H).

Illh. Síntese do sal de N-metilglucamina da 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina:

A uma suspensão continuamente sonicada de 20-0-(fosfonooximetil)camptotecina (5 mg, 10,9 pmol) em óxido de deutério (0,5 ml) foi adicionada às gotas uma solução óxido de deutério de (D)-N-metilglucamina (21 μΐ de solução a 0,51 M = 10,7 pmol) até alcançar uma homogeneização completa. Obteve-se uma solução homogénea amarela do composto acima indicado. 44 *H NMR {400 ΚΗζ, PaO, $) ; 1.02 {t, J - 7.3 Hz, 3H) , 2.25 (®, 2H) , 2.78 (s, SE), 3.20 (m, 2H), 3.65 (m, 2H) , 3.80 Cm, 3H), 4. il (m, 1H) , 4.44 (d, J = 18.9 Hz, 1H) , 4.53 (d, J ~ 19.0 Hz, IH), 5,12 {dd, j - 9.8, J ~ 5,9 Hz, 1H) , 5.27 {dd, J » 9.2, J ~ 5.9 r \z, IH), 5. 41 {d, J - 16 , 7 Hz , 1H) , 5.53 (á, J « 16.7 Hs, 1H) , 7.23 (t, J ® 7.4 Hz, 1H5 , 7.49 (m, 2H), 7,69 (d, J = 8 .4 Hz , IBS , 8.05 (s, 1H) IV. Síntese da 4'-O-(fosfonooximetil)etoposida

OH IVa. Síntese do éster dibenzílico da 4' -ΟΙ fosfonooximetil) etoposida: 45

ΟΒη A uma solução de fosfato de clorometil-dibenzilo (670 mg, 2,05 mmol), etoposida (300 mg, 0,51 mmol) e brometo de tetrabutilamónio (164,4 mg, 0.51 mmol) em tetrahidrofurano (0,5 ml) foi adicionado carbonato de potássio em pó (352,4 mg, 2,55 mmol). A mistura reaccional resultante foi agitada vigorosamente à temperatura ambiente durante 35 minutos. Depois a mistura foi directamente purificada por cromatografia em coluna flash com sílica gel (30:1 cloreto de metileno/metanol) para produzir 272 mg (rendimento de 61%) do composto acima referido na forma de um sólido branco, com uma retenção da estereoquímica trans superior a 95í 46 FABMS-MNBA} : [ΜΗΓ, m/z 879. !H HMR (400 MHz, CDC13, $) ; 1.41 (d, J ® 5.0 Ha, 3H) , 2.79 (br s, 1H), 2.86 (ia, 1H) , 2.9' 7 (br s, Iffi, 3.30 {dd, J = 14.: 2, J * s i.3 Hz, 1H), 3. .35 ím, í !H> , 3.45 {t, J = 8.5, J ^ 8.0 Hz, 1H> , 3. 59 (m, 1HJ , 3. €6 {s 3, 5H), 3,74 (πί, 1H), 4 .19 (ffl. 1H) , 4.20 (t J - 8.5, J ’ = 8. ( ) Hz, 1H) , 4 .42 {dd, J e 10,3, J = $.1 Hz, 1H) , 4.60 (d, J ~ 5.2 Hz, XH). 4.64{d, J » 7.6 Hz, 1H) , 4.76 (q J * 5.0 Hz, ; im, 4,92 (d, J * 3.4 Hz, 1H), 5 ,03 (dd. J = 7.: i, J ~ = 4.3 Hz, 4H} , 5.5 4 {dd, J » 11.7, J = 5.1 Hs, 1HJ , 5. 53 (dd, J » 11,3, J = ! 5.1 Hz, 1H), 5.99 (d. J * 3.5 Hz, 2H) , €.26 (s, 2H) , 6. 51 (s , 1H} , 6.84 {s, 1H), 7.33 {ffl, 10H) . °C NMR (75 MHz, CDClj , δ) : 20,21, 37,49, 41.00, 43.78 , 56 .07, 66. 32, 67.87 , 67 '.97, 69 .06, 69.14, 73.01, 73 :.29, 74 .47, 79. 70, 92.55, 92. 62, 99.70, 101.57, 101,72, 107 .89, 109 .13, 110 .55, 127. 82, 127 .97, 128. 15, 128.35, 128. 43, 132 .40, 133 .08, 135. 68, 135 ,78, 136- 49, 147.14, 148. 73, 152 .18, 174 .90. IVb. Síntese da 4'-O-(fosfonooximetil)etoposida: 47

A uma solução de éster dibenzílico da 4'-0-(fosfonooximetil)etoposida (20,5 mg, 0,023 mmol) em tetrahidrofurano (2 ml) foi adicionado paládio sobre carbono (10%, 5 mg). A mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio (1 atm) durante 10 minutos. O catalisador foi removido por filtração através de Celite e o tetrahidrofurano foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi secado em vácuo para produzir 16 mg (rendimento de 100%) do composto acima indicado na forma de um sólido branco. 48 FABMS+(NBA) : Π4ΗΓ, m/z 699. % M4E (400 MHz, CDClj / DHSO~ds, 5); 1.29 (d, J = 5-0 Hz, 3H) , 2.78 (m, IH) , 3,21 {a, 2H) , 3.29 (t, J = 8.6, J » 7.8 Hz, 1H> , 3.37 (dd, J = 14.0, J = 5.3 Hz, IH), 3.52 (m, 2H), 3.62

(s, 6HJ, 4.09 {w, IH), 4.17 (t, J - 8.1 Hz. IH), 4.38 {dd, J = 8.8', J = 8.7 Hz, IH) , 4.44 {d, J ~ 7.6 Hz, 1HJ, 4.48 (d, J ® 5.3 Hz, IH), 4.66 (q, J ~ 5.0 Hz, IH), 4.88 (d, J ~ 3.3 Hz, IH), 5,05 íbr s, 7H), 5.40 (dd, j = 10.7, J « 7.8 Hz, IH), 5,43 (dd, J - 10.4, J - 7.5 Hz, IH), 5,89 (dd, J = 8.8 Hz, IH), 6.18 (s, 2H), 6.41 (s, IH), 6.78 (S, IH). IVc. Síntese do sal dissódico da 4' -O-(fosfonooximetil)etoposida:

49 A uma solução de éster dibenzílico da 4'-0-(fosfonooximetil)etoposida (200 mg, 0,023 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) foi adicionado paládio sobre carbono (10%, 45 mg). A mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio (1 atm) durante 25 minutos. O catalisador foi removido por filtração através de Celite. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi secado em vácuo. O sólido branco obtido foi dissolvido numa solução aquosa de bicarbonato de sódio (2,9 ml de solução a 0,136 M = 0,394 mmol). A mistura heterogénea resultante foi combinada com carbono activado, agitada durante alguns minutos e depois filtrada através de uma unidade de filtragem de 40 pm. O filtrado incolor homogéneo foi liofilizado para produzir 140 mg (rendimento de 96%) do composto acima indicado na forma de um sólido branco, com uma retenção da estereoquímica bans superior a 95%. 50 FÂBMS+ {NBA) ; (ΜΗΓ, ffi/z 743, [Μ - Na + 2Hj% m/z 721, [M - 2Na + 3H}+, m/z 699. lH ] NMH Í400 MHz, D20, 5): 1.37 {d, J « 5.1 . Hz, 3H) , 3.10 {m, 1H) , 3. 37 (dd, J - 8. 9, J r = S, .0 H2 , 1H), 3.48 Cm, 2H) , 3.65 ím, 3H) , 3,75 fs. 6íí) , 4, 29 (dd, J - 10.4 , J = = 4.5 Hz, 1H), 4.41 (t ,, J ~ 8.3, J * = 8. C ) He, IH), 4.49 {dd, J - 10.5, J s 8.9 Hz, 1H) , 4,68 íd, J - 5.7 Hz, lH), 4. 74 Cd, j = 7.8 Hz, 1H) . 4. 91 {q, J = 5.0 Hz, IHJ , 5.13 (d, J = = 3.0 Hz, 1H) , 5,26 {2xd, J- = 5.3, J - 3, 3 He , 1H) , 5.28 (2xd , J * * 5.3 , J * 3.3 Hz, 1H) , 5.98 (d. J = = 10 ,5 Hz , 2H), 6.40 {s. 2Hi , 6.58 {s, 1K} , 7. 00 £s, 1H), NNR {125 MHs, d2o, S) : 22.13, 40,74, 43.56, 46.11, 59 ,12, 68, 70, 70.41, 72 .40, 75 .46, 75,95, 76, 95, 82.46, 94 .87, 102 .88, 103.66, 194. ,62, 111. 14, 112.82. , 113.23, 130 ,73, 135 ,45, 135,74, 140, .2:2, 149, 56, 151.43 , 154.94, 166 , 36, 181 ,61, S1P HMR (200 MHz, D2Q, δ) : s ¢2. 19) . V. Síntese dos agentes fosfonooximetilantes Va. Síntese do fosfato de clorometil-dibenzilo: A uma solução refluxada de cloroiodometano (25 g de 97%, 0,14 mol) em tolueno (categoria HPLC, 30 ml) foi adicionado dibenzilfosfato de prata (7,0 g, 0,018 mol) em

O Cí-CHa-í 62%

O α-ΟΒ-0-Ρ(ΟΒίΐ>2 51 várias porções durante 20 minutos. Manteve-se o refluxo durante uma hora, após o qual a mistura reaccional foi arrefecida à temperatura ambiente e filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. 0 resíduo oleoso foi purificado por cromatografia em coluna flash com sílica gel (7:3 hexano /acetato de etilo) para produzir 3,63 g (rendimento de 62%) do composto acima referido na forma de um óleo amarelo. FABMS+ (MBA) : + , m/z 32? 5H NMR {300 rnz, CDClj, $}x 5,10 iã, J a 8.0 Hz, 4H), 5.63 {d, J a 15.7 Hz, 2H), 7.36 (8, 10K). 13, ’C HMR (75 MHz, CDClj, δ): 69.68, 69.75, 73.33, 73.42, 127.93, 128.51, 128.63, 135.07.

Vb. Síntese do fosfato dibenzílico do p-tolueno sulfonato de metilo:

A uma solução agitada de p-tolueno sulfonato de prata (600 mg, 2,15 mmol) em acetonitrila seca (3 ml) foi adicionado fosfato de clorometil-dibenzilo (150 mg, 0,46 mmol) sob uma atmosfera de árgon. Após a agitação da mistura reaccional durante 21 horas à temperatura ambiente, o solvente foi removido e o resíduo extraído com éter (3 x 3 ml) . Os extractos combinados foram filtrados, evaporados 52 e secados em vácuo para produzir 210 mg (rendimento de 99%) do composto acima referido na forma de um sólido branco. EIBS: {ΜΗΓ, «/a 463. 1H KMR QOÔ MH2, CDC13í S): 2.37 ís, 38}, 4.91 {2 x d, J * 7.9 Hz, 4H), 5.61 {d, J~ 14.2 Hz, 2H), 7.29 (ί«, 12H}, 7.78 (d, J ~ 8,4 82, 2H).

Relativamente à reacção Vb acima exposta, como também foi explicado anteriormente no exemplo Ic, o reagente: 1?

Cl 0¾ 0“P(0Bn>2 pode ser representado genericamente pela fórmula seguinte:

R3 O

, _ -P~0—Y x em que todos os simbolos são os mesmos que os anteriormente definidos.

Vc. Sintese do formaldeido bis(dibenzil-oxifosfono)acetal:

O 0 lí ii (ΒηΟ>2Ρ·0-σ%-Ρ(ΟΒη)2 A uma solução de diiodometano (4 ml, 50 mmol) em tolueno seco (15 ml) foi adicionado dibenzilfosfato de prata (3,0 g, 7,8 mmol). A mistura resultante foi refluxada 53 durante 15 minutos sob uma atmosfera de árgon. A mistura foi depois arrefecida à temperatura ambiente e filtrada. A seguir o solvente foi evaporado em vácuo. 0 resíduo oleoso foi purificado por cromatografia em coluna flash com sílica gel (1:1 hexano/ acetato de etilo e depois acetato de etilo), obtendo-se um óleo amarelado que iria cristalizar para produzir 1,97 g (rendimento de 90%) do composto acima referido na forma de um sólido branco; ponto de fusão: 39 -42°C. CIMS {HH3): ÍMH]+, mfZ 569. HMR (300 MH2, CDC3, S): 5.03 (d, J « 7.9 Hz, 8H),5.49 {t, J * 14,3 Hz, 2H), 7.30 (m, 20H). ISC HMS (75 HHz, CDC13, 5): 69.54, 69.61, 86.48, 127.88, 128.48, 128.55, 135,10, 135.20.

VI. Sintese da O-(fosfonooximetil)ciclosporina A

Ciclosporina A 54

Via. Síntese da 0-(metiltiometil)ciclosporina A: 54

DMSO AcjO -....-

A uma suspensão de ciclosporina A em dimetilsulfóxido (250 ml) são adicionados anidrido acético (125 ml) e ácido acético (35 ml). A mistura heterogénea é agitada vigorosamente à temperatura ambiente durante 24 horas, vertida em gelo (800 ml) , agitada durante 30 minutos e depois extraída com cloreto de metileno (4 x 100 ml) . Os extractos combinados de cloreto de metileno são lavados com água (2 x 100) e secados sobre sulfato de magnésio. O cloreto de metileno é removido sob pressão reduzida para produzir um produto, o qual é depois purificado por cromatografia com sílica gel. VIb. Síntese do éster díbenzílíco da 0-(fosfonooximetil)ciclosporina Ά: 55

Ciclosporina A

A uma suspensão bem agitada de 0-(metiltiometil)ciclosporina A e peneiros moleculares activados de 4 Â em pó (5 g) em tetrahidrofurano (20 ml) é adicionada uma suspensão de N-iodosuccinimida (2,00 g de 95%, 8,44 mmol) e fosfato de dibenzilo (2,20 g, 7,83 mmol) em cloreto de metileno (12 ml) . A mistura resultante é agitada vigorosamente à temperatura ambiente durante 30 minutos, filtrada e diluída com acetato de etilo (300 ml) . A solução é lavada com tiosulfato de sódio aquoso (10%, 2 x 15 ml) , água (2 x 20 ml), salmoura (50 ml) e secada sobre sulfato de magnésio. A mistura é filtrada e o solvente é evaporado sob pressão reduzida. O resíduo é purificado por cromatografia em coluna flash com sílica gel. VIc. Síntese da O-(fosfonooximetil)ciclosporina A: 56

A uma solução de éster dibenzílico da 0-(fosfonooximetil)ciclosporina A em tetrahidrofurano (100 ml) e água (5 ml) é adicionado paládio sobre carbono (10%, 500 mg) . Esta mistura é agitada sob uma atmosfera de hidrogénio (1 atm) durante 35 minutos. 0 catalisador é removido por filtração através de Celite, sendo esta depois lavada com tetrahidrofurano (300 ml) e os filtrados combinados são evaporados sob pressão reduzida. O sólido resultante é lavado com éter (2 x 20 ml) e hexano (50 ml) , secado em vácuo e posteriormente dissolvido em metanol quente (60 ml) . A solução é filtrada, concentrada sob pressão reduzida num volume de ~10 ml. Após ficar à temperatura ambiente durante uma hora, a solução é colocada num refrigerador durante a noite. O precipitado cristalino formado durante a noite é totalmente filtrado e secado em vácuo para produzir o composto acima indicado na forma de um sólido. O filtrado é concentrado num volume de ~1 ml e guardado no refrigerador durante uma hora para obter produto adicional. 57

AVALIAÇÃO BIOLÓGICA

Os compostos da presente invenção são substâncias farmacêuticas novas: os compostos representativos da fórmula I foram avaliados em estudos de conversão in vitro e in vivo. Em todos estes estudos os profármacos foram convertidos nos respectivos compostos parentais farmacologicamente activos. (1) Estimativa da solubilidade do profármaco do propofol em água A solubilidade em água do profármaco do propofol é de aproximadamente 500 mg /ml, de acordo com a análise HPLC de uma solução aquosa saturada. (2) Conversão in vitro do profármaco do propofol em propofol A conversão in vitro do profármaco do propofol em propofol foi realizada utilizando fosfatase alcalina em tampão glicina com pH médio de 10,4. Foram preparados 25 ml de uma solução com 100 pg/ml do profármaco do propofol em tampão glicina. Um mililitro foi reservado para o ponto de tempo zero e os restantes 24 ml foram colocados num banho de água a 37°C. Foram adicionados 960 μΐ de uma solução com 0,1 mg/ml de fosfatase alcalina em tampão glicina à solução com 24 ml do profármaco do propofol, misturados e colocados novamente no banho de água. Foram retiradas amostras de 1,5 ml aos 5, 10 , 20, 30, 40, 60, 90, 120, 180, 240, 300 e 360 minutos. Foram adicionados de imediato 10 μΐ de ácido acético glacial a cada amostra para parar a reacção enzimática. As amostras foram analisadas por HPLC para quantificar a concentração de profármaco do propofol e 58 propofol. Estes resultados evidenciam que o profármaco do propofol é substrato para a fosfatase alcalina. (3) Avaliação da toxicidade aguda em ratos 0 profármaco do propofol foi preparado para injecção intravenosa com uma concentração de 68 mg /ml numa injecção de cloreto de sódio a 0,9% (especificações da USP) . Esta concentração equivale a 36 mg /ml de propofol. A solução de profármaco do propofol foi filtrada através de uma membrana de nylon de 0,22 pm antes da administração. A avaliação da utilização do profármaco do propofol em ratos foi realizada com dois ratos Harlen Sprague-Dawley com pesos de 820 g e 650 g respectivamente. O rato de 820 g recebeu 200 μΐ da formulação intravenosa do profármaco do propofol (equivalente a 9 mg/kg de propofol) na veia da cauda. Decorridos aproximadamente 12 minutos, colheu-se uma amostra de sangue da veia da cauda (com seringa heparinizada). O rato de 650 g foi injectado com 125 μΐ da formulação de profármaco do propofol na veia da cauda, sendo-lhe retirada uma amostra sanguínea também da veia da cauda (com seringa heparinizada) decorridos aproximadamente seis minutos. As amostras de sangue de ambos os ratos foram analisadas quanto ao conteúdo em propofol por HPLC.

Os efeitos da injecção do profármaco do propofol foram semelhantes em ambos os ratos, os quais ficaram instáveis após alguns minutos mas nunca perderam o reflexo miotático. As observações visuais revelaram que os ratos se recuperaram completamente das injecções do profármaco do 59 propofol. A presença de propofol no sangue de ambos os ratos foi confirmada por análise HPLC. (4) Avaliação farmacocinética em cães

Foi realizado um estudo num cão, o qual incluiu a utilização de Diprivan® ou profármaco do propofol com um período de lavagem suficiente entre os exames. As concentrações no sangue foram determinadas através de HPLC com detecção por fluorescência, enquanto que a actividade cerebral foi monitorizada por electroencefalografia (EEG) de dois eléctrodos. Antes da administração da dose, os olhos do cão foram vendados, sendo-lhe introduzido algodão nos ouvidos e atadas as patas para minimizar a movimentação e outros estímulos externos, com o intuito de poder monitorizar de uma forma mais eficaz o efeito do propofol na actividade das ondas cerebrais do animal. A avaliação da concentração do propofol no sangue ao longo do tempo foi realizada num cão Beagle com um peso de ~13 Kg. Foram colhidos aproximadamente 8 ml de sangue antes da injecção para serem utilizados na preparação do padrão (curva Standard) e no nível sanguíneo de tempo zero. 0 cão recebeu um volume de Diprivan® ou formulação de profármaco do propofol equivalente a 7 mg/kg de propofol através de injecção na veia cefálica.

Foram retiradas amostras sanguíneas de dois mililitros da veia cefálica (não a mesma veia que no local onde foi aplicada a injecção da formulação) ou jugular ou safena (com seringa heparinizada) aos 1, 3, 5, 10, 15, 20 e 30 60 minutos após a administração da injecção. Também se obtiveram amostras de sangue aos 60, 90, 120, 180, 240, 300, 360, 480 e 1.440 minutos. As amostras foram colhidas a fim de remover o propofol logo após serem retiradas do cão. O cão ficou em jejum durante aproximadamente 20 horas antes da administração do Diprivan® ou formulação de profármaco do propofol. Após a recolha da amostra de 120 minutos, permitiu-se que o cão bebesse água, sendo-lhe fornecido alimento após a obtenção da amostra de 480 minutos. O regime alimentar do cão baseava-se no produto "Science Diet Maintenance" da marca Hills' . O cão foi igualmente submetido a um ciclo de luz/ escuridão de 12 horas de luz diárias. A concentração de propofol nas amostras de sangue foi determinada através de HPLC com detecção por fluorescência. Na Figura 2 mostram-se os resultados. Os métodos de extracção sanguínea e HPLC utilizados focaram-se no trabalho divulgado por Plummer (1987) com ligeiras alterações. A preparação das amostras e os procedimentos de análise foram como se segue: A uma amostra sanguínea de 1 ml foram adicionados 10 μΐ de Standard interno de timol (20 pg/ml) e 1 ml de tampão fosfato, vortexando para misturar após cada adição. A seguir foram adicionados 5 ml de ciclohexano e as amostras foram misturadas a 75 rpm durante 20 - 30 minutos. A camada orgânica foi separada por centrifugação a aproximadamente 2.0 00 rpm durante 1 minuto. Em torno de 4,5 ml da camada orgânica foram transferidos ao tubo que continha 50 μΐ de solução diluída de hidróxido de tetrametilamónio (TMAH) a 61 aproximadamente 1,8% (p/v). 0 solvente foi evaporado até à secura em corrente de nitrogénio e reconstituído com 200 μΐ de fase móvel A. As amostras foram centrifugadas a 15.000 rpm durante 30 segundos para remover quaisquer partículas e o sobrenadante foi injectado no HPLC. As amostras-padrão foram preparadas adicionando propofol às partes aliquotas de 1 ml do sangue inicial a concentrações de 5; 1; 0,5; 0,1 e 0,01 pg/ml. Estes standards foram tratados da mesma forma que as amostras. 0 sistema HPLC era constituído pelos seguintes componentes Shimadzu: Bombas LC-10AT, controlador de sistema SCL-10A, detector fluorescente RF 353 e autosampler SIL-10A. Os parâmetros de HPLC foram os seguintes: espectro de excitação a 275 nm e de emissão a 320 nm; taxa de fluxo a 1 ml/min; volume de injecção compreendido entre 3 e 30 μΐ dependendo da concentração de propofol. A coluna HPLC foi uma Zorbax RX-C181 com 15 cm x 4,6 mm de diâmetro interno e 5 pm de tamanho de partícula. A fase móvel A foi de acetonitrila: tampão fosfato 25 mM, TBAP 15 mM, pH 7,1 numa proporção 60:40 (v/v). A fase móvel B foi de acetonitrila: água: THF numa proporção de 80:10:10 (v/v/v). Esta última fase foi empregue para lavar a coluna após a eluição do timol e propofol utilizando a fase móvel A (durante 4,2 e 7,4 minutos respectivamente).

As observações visuais e padrões de EEG permitiram concluir que o cão mostrou sinais de anestesia após a injecção de ambas as formulações, tendo-se recuperado da anestesia de ambas as formulações em 20 - 30 minutos. Os níveis de propofol no sangue resultantes da injecção do profármaco do propofol aproximam-se aos da injecção de Diprivan®.

Lisboa, 07-09-2006

Claims (33)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto de acordo com a fórmula I:

em que, R-0 é um resíduo de um composto farmacêutico que contém fenol; R1 é um hidrogénio ou um ião metálico alcalino ou uma amina protonada ou um aminoácido protonado; R2 é um hidrogénio ou um ião metálico alcalino ou uma amina protonada ou um aminoácido protonado, e n é um número inteiro igual a 1 ou 2; m é um número inteiro igual a pelo menos 1; e os sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o mencionado composto que contém fenol é seleccionado do grupo constituído por propofol, etoposida e vitamina E.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o ião metálico alcalino de R1 e R2 é independentemente seleccionado cada um do grupo constituído por sódio, potássio e lítio. 2

4. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é seleccionado do grupo constituído por:

em que Z é seleccionado do grupo constituído por hidrogénio, ião metálico alcalino e amina; e os sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

5. Composto de acordo com a reivindicação 4, em que cada Z é independentemente seleccionado do grupo constituído por sódio, trometamina, trietanolamina, trietilamina, arginina, lisina, etanolamina e N-metilglucamina.

6. Composto de acordo com a fórmula III: 3 R-O^S-CHs (III) em que, R-0 é um resíduo de um composto farmacêutico que contém fenol; e os sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

7. Composto de acordo com a reivindicação 6, em que o mencionado composto é seleccionado do grupo constituído por:

8. Composto de acordo com a fórmula IV:

em que, R-0 é um resíduo de um composto farmacêutico que contém fenol; Y é um grupo protector fosfono, e n é um número inteiro igual a 1 ou 2; 4 e os sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

9. Composto de acordo com a reivindicação 8, em que o mencionado composto é seleccionado do grupo constituído por:

em que Y é um grupo protector fosfono.

10. Composto de acordo com a reivindicação 8, em que o mencionado grupo protector fosfono é seleccionado do grupo constituído por um grupo benzilo, um grupo t-butilo, um grupo alilo e outros grupos protectores fosfato aceitáveis.

11. Composição farmacêutica que contém: 5 Uma quantidade efectiva de um composto de acordo com a reivindicação 1; e um veiculo farmaceuticamente aceitável.

12. Processo para a preparação de um composto da reivindicação 4 que inclui: Remover um grupo protector fosfono do composto de acordo com uma das seguintes fórmulas:

I OY em que Y é o grupo protector fosfono. E recuperar o produto.

13. Processo para preparar um composto da reivindicação 6 que inclui: Fazer reagir um composto de fórmula R-O-H, em que, 6 R-0- é um resíduo de um composto farmacêutico que contém fenol, e os sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, com dimetilsulfóxido na presença de anidrido acético e ácido acético. E recuperar o produto.

14. Processo para preparar um composto da reivindicação 8 que inclui: Fazer reagir um composto de acordo com a fórmula III: Rh/N-CB, (III) em que, R-0 é um resíduo de um composto farmacêutico que contém fenol; e os sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, com N-iodosuccinimida e um ácido fosfórico protegido de fórmula HOP(O) (0Y)2, em que Y é um grupo protector fosfono. E recuperar o produto.

15. Processo de acordo com a reivindicação 14, em que o grupo protector fosfono é seleccionado do grupo constituído por um grupo benzilo, um grupo t-butilo e um grupo alilo.

16. Composição de acordo com a reivindicação 11 para uso como medicamento. 7

17. Uso de um composto de acordo com a fórmula I, conforme definido na reivindicação 1, para a preparação de um medicamento.

18. Uso segundo a reivindicação 17, em que o mencionado medicamento é elaborado para administração oral.

19. Uso segundo a reivindicação 17, em que o mencionado medicamento é elaborado para administração parentérica.

20. Uso segundo a reivindicação 17, em que o mencionado composto é um derivado do propofol, tendo o medicamento um efeito anestésico.

21. Uso segundo a reivindicação 17, em que o mencionado medicamento possui actividade anti-tumoral.

22. Composto de acordo com a reivindicação 1 da fórmula I,

em que, R-0 é um resíduo do propofol; R1 é um hidrogénio ou um ião metálico alcalino ou uma amina protonada ou um aminoácido protonado; R2 é um hidrogénio ou um ião metálico alcalino ou uma amina protonada ou um aminoácido protonado, e n é um número inteiro igual a 1 ou 2; m é um número inteiro igual a pelo menos 1; 8 e os sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

23. Composto segundo a reivindicação 22, em que o ião metálico alcalino de R1 e R2 é independentemente seleccionado cada um do grupo constituído por sódio, potássio e lítio.

24. Composto segundo a reivindicação 1 de fórmula:

em que Z é seleccionado do grupo formado por hidrogénio, ião metálico alcalino e amina protonada; e os sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

25. Composto segundo a reivindicação 24, em que n é igual a 1 e Z é independentemente seleccionado do grupo formado por sódio, trometamina, trietanolamina, trietilamina, arginina, lisina, etanolamina e N-metilaglucamina.

26. Composto segundo a reivindicação 8 da fórmula IV, em que R-0 é um resíduo do propofol; Y é um grupo protector fosfono, e n é um número inteiro igual a 1 ou 2; e os sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

27. Composto segundo a reivindicação 26 de fórmula: 9

em que Y é um grupo protector fosfono.

28. Composto segundo a reivindicação 27, em que o mencionado grupo protector fosfono é seleccionado do grupo formado por um grupo benzilo, um grupo t-butilo, um grupo alilo e outros grupos protectores fosfato aceitáveis.

29. Composição farmacêutica que contém uma quantidade activa de um composto de acordo com a reivindicação 22 e um veiculo farmaceuticamente aceitável.

30. Composto de fórmula: R-0-{CH2-0-)n-P-0‘ Z+ //_ + 0 z+ em que R é seleccionado do grupo formado por etoposida e vitamina E e Z é seleccionado do grupo formado por hidrogénio, ião metálico alcalino e amina protonada; e os sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

31. Composto de fórmula: 10 Ο R-0-(CHz-0-)n-P-0Y ΟΥ em que R é seleccionado do grupo formado por etoposida e Vitamina E, e Y é um grupo protector fosfono.

32. Composto segundo a reivindicação 1 da fórmula I:

em que R-0- é um resíduo da etoposida, R1 é um hidrogénio ou um ião metálico alcalino ou uma amina protonada ou um aminoácido protonado; R2 é um hidrogénio ou um ião metálico alcalino ou uma amina protonada ou um aminoácido protonado, e n é um número inteiro igual a 1 ou 2; m é um número inteiro igual a pelo menos 1; e os sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

33. Uso do composto da reivindicação 32 para preparar uma composição farmacêutica com actividade anti-tumoral. Lisboa, 07-09-2006