PT631776E - Utilizacao de derivados da beta-naftoquinona para a aceleracao da proliferacao de celulas endoteliais e da inibicao das no sintases - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "UTILIZAÇÃO DE DERIVADOS DA BETA-NAFTOQUINONA PARA A ACELERAÇÃO DA PROLIFERAÇÃO DE CÉLULAS ENDOTELIAIS E DA INIBIÇÃO DAS NO SINTASES" A presente invenção refere-se a uma nova utilização de derivados da beta-naftoquinona assim como aos seus sais. A patente Especial de Medicamento 924 M descreve a aplicação, a titulo de medicamentos, de derivados da beta-naftoquinona. De acordo com esta invenção, estes derivados são apresentados como possuindo propriedades hemostáticas e propriedades vitamínicas. É sabido que o endotélio é constituído por uma monocamada de células de origem mesodérmica que cobre o interior de todo o sistema vascular. Ele constitui portanto a interface entre o sangue e os tecidos vizinhos. Esta localização confere-lhe um papel importante na manutenção da integridade vascular e sanguínea. A separação da monocamada de células endoteliais não trombogéneas conduz à exposição do sub-endotélio trombogéneo (adesão plaquetária e leucocitária). A exposição do sub-endotélio é uma situação patológica que se encontra em certas intervenções cirúrgicas: embolectomias, angioplastias, endarteriectomia e enxertos de próteses vasculares ou em certas situações de patologia médica (aterosclerose, vascularites). Todas estas situações têm um interesse comum que é a reconstituição rápida de uma superfície endotelial intacta e funcional. Foi demonstrado recentemente que os factores de crescimento polipeptídico (FGF : fibrofactor de crescimento de fibroblastos; PDGF : factor de crescimento 1 derivado de plaquetas ou EGF : factor de crescimento epidérmico) desempenham um papel importante na reparação de lesões vasculares ou cutâneas: úlceras, escamação e queimaduras.

Prosseguindo os seus estudos sobre os derivados da beta-naftoquinona acima citados, a requerente acaba de verificar de forma inesperada que estes últimos apresentavam uma notável actividade permitindo acelerar a proliferação de células endoteliais e inibir as NO sintases constitutivas e induzidas. 0 presente pedido tem assim por objecto uma nova utilização de derivados da beta-naftoquinona com a fórmula geral (I):

(I) em que R representa um grupo com a fórmula -NH-CO-NH2, ou um grupo com a fórmula -NH-CO-CH3, ou um grupo hidroxilo, assim como os seus sais de adição formados com os ácidos minerais ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis, para o fabrico de um medicamento que permite a aceleração da proliferação das células endoteliais e inibir as NO sintases.

Os sais de adição formados com os ácidos minerais ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis podem ser, por exemplo, os sais formados com os ácidos clorídrico, bromídrico, iodídrico, nítrico, sulfúrico, fosfórico, propiónico, fórmico, benzóico, maleico, fumárico, succínico, tartárico, cítrico, oxálico, glioxílico, aspártico, alcanossulfónicos tais como os ácidos metano e etanossulfónicos e arilsulfónicos, por exemplo o ácido benzenossulfónico.

De entre os derivados da beta-naftoquinona com a fórmula geral (I), interessam essencialmente: 2 Γ \ "t - ο produto com a fórmula (I) em que R representa um grupo com a fórmula -NH-C0-NH2/ assim como os seus sais de adição formados com os ácidos minerais ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis, - o produto com a fórmula (I) em que R representa um grupo com a fórmula -NH-CO-CH3, assim como os seus sais de adição formados com os ácidos minerais ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis, - o produto com a fórmula (I) em que R representa um grupo hidroxilo, assim como os seus sais de adição formados com os ácidos minerais ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis.

De entre os produtos preferidos da invenção, utilizados para o fabrico de um medicamento que permite acelerar a proliferação das células endoteliais e de inibir as NO sintases, interessam particularmente a 2-semicarbazona da 1,2-naftoquinona mais conhecida pela denominação comum internacional de naftazona. Na parte experimental, este produto figura segundo a sua DCI (denominação comum internacional).

Devido a estas notáveis propriedades que permitem acelerar a proliferação das células endoteliais e de inibir as NO sintases, posteriormente ilustradas na parte experimental, os derivados da beta-naftoquinona com a fórmula (I), tal como acima definidos, assim como os seus sais de adição formados com os ácidos minerais ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis, podem ser utilizados em enxertos e próteses vasculares, e no tratamento do conjunto de processos de cicatrização e reparação dos tecidos. A dose usual, variável de acordo com o produto utilizado, o paciente tratado e a afecção em causa, pode ser por exemplo de 1 mg a 100 mg por dia, por via oral ou por via injectável. 3 A invenção tem igualmente por objecto as composições farmacêuticas que contêm α titulo dc princípio activo pelo um dos medicamentos acima definidos.

Estas composições farmacêuticas podem ser, por exemplo, sólidas ou líquidas e apresentarem-se sob as formas farmacêuticas correntemente utilizadas em medicina humana, como por exemplo, os comprimidos, simples ou drageificados, os geles, as cápsulas, os granulados, os supositórios, as preparações injectáveis; elas são preparadas de acordo com os processos usuais. 0 ou os princípios activos podem ser nelas incorporados com os excipientes habitualmente utilizados nestas composições farmacêuticas, por exemplo o talco, a goma arábica, a lactose, o amido, o estearato de magnésio, a manteiga de cacau, os veículos aquosos ou não aquosos, as gorduras de origem animal ou vegetal, os diversos agentes molhantes, dispersantes ou emulsionantes, os conservantes.

Os processos de preparação de derivados da beta-naftoquinona com a fórmula (I) assim como os seus sais foram descritos na literatura. Podem citar-se os processos descritos na patente especial de medicamento 924M acima citada, ou na patente francesa n.° 2 103 504. Vão agora dar-se a título não limitativo exemplos de composições farmacêuticas que podem ser utilizadas na realização da invenção. EXEMPLO 1:

Prepararam-se comprimidos que obedecem à formulação seguinte: - Naftazona ................................................................................................................ 10 mg - Excipiente q. b. para um comprimido terminado a 150 mg (pormenor do excipiente : lactose, amido, talco, estearato de magnésio).

K EXEMPLO 2 :

Preparou-se um soluto injectável que obedece a formulação seguinte: - Naftazona ................................................................................................................... 5 mg - Excipiente aquoso estéril q. b. p........................................ 2 ml EXEMPLO 3 :

Introduziram-se 8,6 g de Naftazona em 200 ml de anidrido acético. Após 10 horas de aquecimento a 140°C/ em seguida arrefecimento, filtração, extracção do precipitado pelo clorofórmio, evaporação à secura, retoma pelo etanol, passagem sobre carvão activado, filtração e cristalização lenta, obtiveram-se 5,1 g do produto que obedece a fórmula (I) com R = -NH-CO-CH3 (pó microcristalino amarelo ocre, F = 137-138°C).

ESTUDO FARMACOLÓGICO 5

Em conclusão, nas condições de ensaio, o efeito da naftazona permanece em geral inferior ou igual ao induzido pelos FGFs mas, na confluência, a densidade celular na presença de factores FGFs é claramente superior à obtida com naftazona, em comparação com o testemunho. II - Estudo da inibição da NO sintase constitutiva das células endoteliais vasculares A naftazona foi o objecto de estudos realizados sobre anéis (3 a 4 mm de comprimento) da aorta abdominal do rato CD (200-250 g, Charles River, França) e da veia femoral do coelho da Nova Zelândia (2-2,5 kg, Charles River, França).

Os anéis são colocados em câmara de órgão (25 ml, Phymep, França) numa solução de Krebs-Ringer. Esta solução é tonometrada na permanência de uma mistura gasosa com 95 % de 02 - 5 % de CO2, a pH 7,40 e termostatada com 37°C. A força isométrica desenvolvida pelos anéis é medida com sondas de tensão (Phymep, França). Os anéis são conduzidos ao seu ponto óptimo da relação tensão-comprimento por estimulações repetidas com a ajuda de KC1 a 40 mM. São realizados os estudos farmacológicos após lavagens e um periodo de equilíbrio de 45 minutos. Quando a resposta farmacológica do vaso é estudada sem endotélio, este é eliminado por fricção do interior do vaso com a ajuda de uma pinça de dissecação. A ausência de endotélio é verificada pela ausência de relaxação do vaso induzida pelo Ach a IO-6 M após contracção com NAD a 1CT1 M. As contracções são expressas em % da concentração máxima com KC1 a 60 mM, as relaxações são expressas em % da concentração com NAD a 10~5 M ou PGF2cc a 10"7 M.

Foram observadas as propriedades farmacológicas seguintes: 1 - a naftazona (10"s M - 10~4 M) aumenta significativamente 0 tónus basal dos anéis aórticos do rato e da veia femoral do coelho. 6 2 - a naftazona (10 6 Μ - 10-4 M) potência as contrações obtidas com a NAD (10~9 Μ IO"5 M) e com a 5HT (10~9 M - 10 5 M) de forma significativa e dependente da dose sobre a aorta do rato. Esta potenciação desaparece na ausência de endotélio. 3 - Em anéis aórticos contraídos com a NAD (10"s M), a naftazona (ΙΟ'1 Μ - IO-4 M) inibe de forma significativa e dependente da dose a relaxação com Ach (ΙΟ-9 Μ - 10"2 3 M) . A inibição atinge 60 a 80 % para a naftazona (10"5 M) para uma relaxação obtida com Ach (10~5 M) . Esta inibição é comparável em cinética, em amplitude, à obtida com a Nro-Nitro-L-Arginina (10-6 M) (inibidor potente das NO sintases) .

Sobre anéis aórticos contraídos com PGF2qc (2.10-6 M) na presença de Indometacina (10"5 M) e cetanserina (10"5 M) , a naftazona (10“1 Μ - 10"2 M) inibe a relaxação obtida com 5HT (ΙΟ"4 Μ - 10"5 M) de forma significativa e dependente da dose (ΙΟ"1 Μ - 10"2 M) . 4 - Sobre anéis aórticos contraídos com a NAD (IO-7 M) ou com PGF2oc (2. IO"1 M) na presença de Indometacina a naftazona inibe a relaxação obtida com o cálcio ionoforo A23187 (ΙΟ"4 Μ - IO"1 M), isto de forma significativa e dependente da dose (IO*2 M -IO"4 M) . 5 - A inibição da relaxação do endotélio dependente do Ach, da 5HT e do A23187 obtida com a naftazona (10-5 M) é suprimida totalmente com a L-Arginina (9.10"4 M) . 1 - A naftazona (IO"5 M) inibe de forma significativa a 2 hiporreactividade com a NAD (10‘4 Μ - IO"5 M) obtida após 3 3 horas de incubação de anéis aórticos de rato na presença de Lipopolissacáridos de E. coli 011B4 (10 μιη/mL) . Este efeito é 4 comparável ao obtido com a Nm-Nitro-L-Arginina (10“5 M). 7 - A naftazona (10'5 M) potência a contracção com a NAD (10 9 M ~ 10-5 M) obtida sobre anéis da veia fcmoral dc coelho c inibe a relaxação com a Ach (10-9 Μ - 10-5 M) .

Em conclusão, o aumento do tónus basal, a potenciação dos efeitos vasoactivos da Noradrenalina, da Serotonina, a inibição das relaxações de endotélio dependentes da

Acetilcolina, a Serotonina e com Cálcio ionoforo A23187, a eliminação da inibição das relaxações do endotélio dependentes pela L-Arginina, a inibição da hiporreactividade com a Noradrenalina induzida pela endotoxina bacteriana, fazem classificar a naftazona como inibidor de NO sintase constitutiva e de NO sintase induzida.

Lisboa, 21 de Fevereiro de 2001

O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL

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Claims (5)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de derivados da beta-naftoquinona com a fórmula geral (I) :

   N-R (D em que R representa um grupo com a fórmula -NH-CO-NH2, ou um grupo com a fórmula -NH-CO-CH3, ou um grupo hidroxilo, assim como os seus sais de adição formados com os ácidos minerais ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis, para o fabrico de um medicamento que permite a aceleração da proliferação das células endoteliais em enxertos e próteses vasculares, no tratamento do conjunto de processos de cicatrização e reparação de tecidos.
2. 2. Utilização de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o derivado da beta-naftoquinona ser um produto com a fórmula geral (I) em que R representa um grupo com a fórmula -NH-CO-NH2, assim como os seus sais de adição formados com os ácidos minerais ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis.
3. 3. Utilização de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o derivado da beta-naftoquinona ser um produto com a fórmula geral (I) em que R representa um grupo com a fórmula -NH-CO-CH3, assim como os seus sais de adição com os ácidos minerais ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis. 1
4. 4. Utilização de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o derivado da beta-naftoquinona 3er um produto com a fórmula geral (I) em que R representa um grupo hidroxilo, assim como os seus sais de adição formados com os ácidos minerais ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis.
5. 5. Utilização de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada por o derivado da beta-naftoquinona ser a 2-semicarbazona da 1,2-naftoquinona. Lisboa, 21 de Fevereiro de 2001 O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAI ♦

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