RS64078B1 - Jonizujući katjonski lipid za isporuku rnk - Google Patents

Jonizujući katjonski lipid za isporuku rnk

Info

Publication number
RS64078B1
RS64078B1 RS20230231A RSP20230231A RS64078B1 RS 64078 B1 RS64078 B1 RS 64078B1 RS 20230231 A RS20230231 A RS 20230231A RS P20230231 A RSP20230231 A RS P20230231A RS 64078 B1 RS64078 B1 RS 64078B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mol
lipid
compound
consist
carbon atoms
Prior art date
Application number
RS20230231A
Other languages
English (en)
Inventor
Joseph E Payne
Padmanabh Chivukula
Original Assignee
Arcturus Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US14/546,105 external-priority patent/US9593077B2/en
Priority claimed from US14/707,876 external-priority patent/US9365610B2/en
Application filed by Arcturus Therapeutics Inc filed Critical Arcturus Therapeutics Inc
Publication of RS64078B1 publication Critical patent/RS64078B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/60—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxyl groups bound to nitrogen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
    • A61K48/0033—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being non-polymeric
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0043—Nose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/12—Aerosols; Foams
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
    • A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers comprising non-phosphatidyl surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids or non-phosphatidyl liposomes coated or grafted with polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C333/00—Derivatives of thiocarbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C333/02—Monothiocarbamic acids; Derivatives thereof
    • C07C333/04—Monothiocarbamic acids; Derivatives thereof having nitrogen atoms of thiocarbamic groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C333/00—Derivatives of thiocarbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C333/02—Monothiocarbamic acids; Derivatives thereof
    • C07C333/10—Monothiocarbamic acids; Derivatives thereof having nitrogen atoms of thiocarbamic groups being part of any of the groups, X being a hetero atom, Y being any atom, e.g., N-acyl-thiocarbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
    • C07J1/0003—Androstane derivatives
    • C07J1/0007—Androstane derivatives not substituted in position 17
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J31/00—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J31/006—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J31/003
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0055—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering nucleic acids [NA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

STANJE TEHNIKE
[0001] Trenutno se razvija više razliþitih tipova nukleinskih kiselina kao terapeutika za leþenje brojnih bolesti. Ove nukleinske kiseline ukljuþuju DNK u genskoj terapiji, interferirajuće nukleinske kiseline zasnovane na plazmidima, male interferirajuće nukleinske kiseline za upotrebu u interferenciji RNK (RNKi), ukljuþujući siRNK, miRNK, antisens molekule, ribozime i aptamere. Kako se ovi molekuli razvijaju, pojavila se potreba da se proizvedu u obliku koji je stabilan i ima dug vek trajanja i koji se lako može ugraditi u anhidrovani organski ili anhidrovani polarni aprotiþni rastvaraþ kako bi se omogućila inkapsulacija nukleinskih kiselina bez sporednih reakcija koje se mogu javiti u polarnom vodenom rastvoru ili nepolarnim rastvaraþima.
[0002] Predmetni pronalazak se odnosi na nove lipidne kompozicije koje olakšavaju intraćelijsku isporuku biološki aktivnih i terapeutskih molekula. Predmetni pronalazak se takođe odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže takve lipidne kompozicije i koje su korisne za isporuku terapeutski efikasnih koliþina biološki aktivnih molekula u ćelije pacijenata.
[0003] Isporuka terapeutskog jedinjenja subjektu je važna zbog njegovih terapeutskih efekata i obiþno se može spreþiti ograniþenom sposobnošću jedinjenja da dopre do ciljanih ćelija i tkiva. Poboljšanje ovih jedinjenja da uđu u ciljane ćelije tkiva razliþitim naþinima isporuke, je kljuþno. Predmetni pronalazak se odnosi na nove lipide, u kompozicijama i postupke za pripremu koji olakšavaju ciljanu intraćelijsku isporuku biološki aktivnih molekula.
[0004] Primeri biološki aktivnih molekula za koje se þesto ne postiže efikasno ciljanje na tkiva pacijenta ukljuþuju: (1) brojne proteine ukljuþujući proteine imunoglobina, (2) polinukleotide kao što su genomska DNK, cDNK ili mRNK (3) antisens polinukleotidi; i (4) mnoga jedinjenja male molekulske težine, sintetiþka ili prirodna, kao što su peptidni hormoni i antibiotici.
[0005] Jedan od fundamentalnih izazova sa kojima se sada suoþavaju lekari je to što se veliki broj razliþitih tipova nukleinskih kiselina trenutno razvija kao terapeutici za leþenje brojnih bolesti. Ove nukleinske kiseline ukljuþuju DNK u genskoj terapiji, plazmide, male interferirajuće nukleinske kiseline (siNK), siRNK i mikroRNK (miRNK) za upotrebu u interferenciji RNK (RNKi), antisens molekule, ribozime, antagomire i aptamere. Kako se ovi nukleici razvijaju, postoji potreba da se proizvedu formulacije lipida koje se lako prave i koje se mogu lako isporuþiti u ciljano tkivo.
WO 2013/086373 opisuje lipide za isporuku aktivnih agenasa. WO 2013/185116 opisuje lipide za formulacije za isporuku terapeutskog agensa.
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0006] Zahtevani pronalazak se odnosi na jedinjenja formule III
u kojoj
R1se sastoji od razgranatog alkila sa 12 do 20 atoma ugljenika; R2sastoji od razgranatog alkila sa 12 do 20 atoma ugljenika; L1i L2se svaki sastoji od veze ili linearnog alkila koji ima 1 do 3 atoma ugljenika; X se sastoji od S ili O; L3sastoji od veze; R3je odabran između etilena, n-propilena ili izopropilena, i R4i R5su isti ili razliþiti, svaki se sastoji od lineranog ili razgranatog alkila koji se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0007] U jednom izvođenju jedinjenja formule III, X je S. U drugom izvođenju jedinjenja formule III, R3je etilen. U drugom izvođenju jedinjenja formule III, R3je n-propilen ili izopropilen. U drugom izvođenju jedinjenja formule III, R4i R5su odvojeno metil, etil, ili izopropil. U drugom izvođenju jedinjenja formule III, L1i L2svaki se sastoji od veze. U drugom izvođenju jedinjenja formule III, L1i L2svaki se sastoji od metilena. U drugom izvođenju jedinjenja formule III, R1i R2svaki se sastoji od 19 ili 20 atoma ugljenika. U drugom izvođenju jedinjenja formule III, R1ili R2svaki se sastoji od 13 ili 14 atoma ugljenika. U drugom izvođenju jedinjenja formule III, u kojoj se L3sastoji od veze, R3je etilen, X je S, i R4i R5su svaki metil. U drugom izvođenju jedinjenja formule III ili IV, L3sastoji se od veze, R3sastoji se od n-propilena, X sastoji se od S, a R4i R5svaki se sastoji od metila. U drugom izvođenju jedinjenja formule III, L3sastoji se od veze, R3sastoji se od izopropilena, X sastoji se od S, a R4i R5svaki sastoji se od metila.
Ovde su opisana jedinjenja formule I, II, III, IV, i V. Opisano, ali nije zahtevano, je jedinjenje formule I
u kojoj
R1i R2svaki se sastoji od linearnog alkila koji se sastoji od 1 do 9 atoma ugljenika, alkenila ili alkinila koji se sastoji od 2 do 11 atoma ugljenika; L1i L2svaki se sastoji od linearnog alkilena ili alkenilena koji se sastoji od 5 do 18 atoma ugljenika, ili obrazuje heterocikl sa N; X1i ɏ3oba se sastoje od -CO-O-; X2se sastoji od S ili O; L3se sastoji od veze ili linearnog alkilena koji se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika, ili obrazuje heteroccikl sa N; R3se sastoji od linearnog ili razgranatog alkilena koji se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika; i R4i R5su isti ili razliþiti, svaki sadrži vodonik ili linearni ili razgranati alkil koji se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0008] Ono što je takođe opisano ali nije zahtevano ovde jeste jedinjenje Formule II
u kojoj
R1i R2oba se sastoje od linearnog alkila koji se sastoji od 1 do 12 atoma ugljenika, alkenila ili alkinila koji se sastoje od 2 do 12 atoma ugljenika; L1i L2oba se sastoje od linearnog alkilena ili alkenilena koji se sastoje od 5 do 18 atoma ugljenika, ili obrazuje heterocikl sa N; X sastoji se od S; L3sastoji se od veze ili linearnog alkilena koji se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika, ili obrazuje heterocikl sa N; R3sastoji se od linearnog ili razgranatog alkilena koji se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika; i R4i R5su isti ili razliþiti, svaki se sastoji od vodonika ili linearnog ili razgranatog alkila koji se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0009] U jedinjenju formule II, L1i L2mogu oba da se sastoje od linearnog alkilena koji se sastoji od pet atoma ugljenika. U jedinjenju formule I, R3može biti ili etilen ili propilen. U jedinjenju formule I, R4i R5mogu biti isti ili razliþiti, svaki vodonik, metil, ili etil. U jedinjenju formule I, L3može biti veza. U jedinjenju formule I, R1i R2mogu se oba sastojati od linearnog alkenila koji se sastoji od deset atoma ugljenika.
[0010] Ono što je takođe opisano ali nije zahtevano ovde jeste jedinjenje formule IV
u kojoj
R1se sastoji od razgranatog alkila sa 12 do 20 atoma ugljenika; R2se sastoji od linearnog alkila sa 5 do 10 atoma ugljenika ili razgranatog alkila sa 12 do 20 atoma ugljenika; L1i L2svaki se sastoji od veze ili lineranog alkila koji ima 1 do 3 atoma ugljenika; X se sastoji od S ili O; L3se sastoji od veze ili nižeg alkila; R3je niži alkil, a
R4i R5su isti ili razliþiti, svaki se sastoji od nižeg alkila; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0011] U jedinjenju formule IV, L3se može sastojati od veze. U jedinjenju formule IV, X može biti S. U jedinjenju formule IV, R3može biti etilen. U jedinjenju formule IV, R3može biti n-propilen ili izopropilen. U jedinjenju formule IV, R4i R5može biti odvojeno metil, etil, ili izopropil. U jedinjenju formule IV, L1i L2može svaki da se sastoji od veze. U jedinjenju formule IV, L1i L2može da se sastoji od metilena. U jedinjenju formule IV, R1i R2može svaki da se sastoji od razgranatog alkila. U jedinjenju formule IV, R2može da se sastoji od alkila. U jedinjenju formule IV, R1i R2može svaki da se sastoji od 19 ili 20 atoma ugljenika. U jedinjenju formule III ili IV, R1ili R2može savki da se sastoji od 13 ili 14 atoma ugljenika. U jedinjenju formule III ili IV, L3može da se sastoji od metilena, R3može biti etilen, X2može biti S, a R4i R5svaki može biti metil. U jedinjenju formule IV, gde L3može da se sastoji od veze, R3može biti etilen, X može biti S, a R4i R5svaki može biti metil. U jedinjenju formule IV, L3može da se sastoji od, R3može da se sastoji od n-propilena, X može da se sastoji od S, a R4i R5svaki može da se sastoji od metila. U jedinjenju formule IV, L3 može da se sastoji od veze, R3 može da se sastoji od izopropilena, X može da se sastoji od S, a R4 i R5 svaki može da se sastoji od metila.
[0012] Ono što je takođe opisano ali nije zahtevano ovde jeste jedinjenje formule V
u kojoj
R1se sastoji od linearnog ili razgranatog alkila koji se sastoji od 1-18 atoma ugljenika, alkenila ili alkinila koji se sastoji od 2 do 12 atoma ugljenika, ili holesteril; R2se sastoji od linearnog ili razgranatog alkila ili alkenila koji se sastoji od 1 do 18 atoma ugljenika; L1se sastoji od linearnog alkila koji se sastoji od 5 do 9 atoma ugljenika ili, kada se R1se sastoji od holesterila, onda se L1sastoji od linearnog alkilena ili alkenila koji se sastoji od 3 do 4 atoma ugljenika; X1se sastoji od -O-(CO)- ili -(CO)-O-; X2se sastoji od S ili O; L2se sastoji od veze ili linearnog alkilena od 1 do 6 atoma ugljenika; R3se sastoji od linearnog ili razgranatog alkilena sa 1 do 6 atoma ugljenika; i R4i R5su isti ili razliþiti, svaki se sastoji od linearnog ili razgranatog alkila od 1 do 6 atoma ugljenika;
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0013] U jedinjenju formule V, L2se može sastojati od veze. U jedinjenju formule V, X2se može sastojati od S. U jedinjenju formule V, X1može biti -O-(CO)-. U jedinjenju formule V, R3može biti etilen. U jedinjenju formule V, R3može biti n-propilen ili izopropilen. U jedinjenju formule V, R4i R5mogu biti odvojeno metil, etil, ili izopropil. U jedinjenju formule V, L2se može sastojati od metilena. U jedinjenju formule V, R1i R2svaki se može sastojati od razgranatog alkila. U jedinjenju formule V, R2se može sastojati od alkila. U jedinjenju formule V, R1i R2svaki se može sastojati od 19 ili 20 atoma ugljenika. U jedinjenju formule V, R1ili R2svaki se može sastojati od 13 ili 14 atoma ugljenika. U jedinjenju formule V, L2se može sastojati od metilena, R3može biti etilen, X1je -O-(CO)-, X2može biti S, a R4i R5mogu oba biti metil. U jedinjenju formule V, L2se može sastojati od veze, R3može biti etilen, X1može biti -O-(CO)-, X2može biti S, a R4i R5oba mogu biti metil. U jedinjenju formule V, L2se može sastojati od veze, R3može biti n-propilen, X1može biti -O-(CO)-, X2može biti S, a R4i R5mogu oba biti metil. U jedinjenju formule V, L2se može sastojati od veze, R3može biti izopropilen, X1može biti -O-(CO)-, X2može biti S, a R4i R5oba mogu biti metil.
[0014] Nukleinska kiselina poželjno ima aktivnost supresije ekspresije ciljanog gena. Ciljani gen je poželjno gen povezan sa upalom.
[0015] Ono što je takođe opisano, ali nije zahtevano ovde, jeste metoda za uvođenje nukleinske kiseline u ćeliju sisara korišćenjem bilo koje od gore navedenih kompozicija. ûelija može biti u jetri, plućima, bubrezima, mozgu, krvi, slezini ili kosti. Kompozicija se poželjno primenjuje intravenozno, subkutano, intraperitonealno ili intratekalno. Poželjno, kompozicije opisane ovde se koriste u metodi za leþenje raka ili inflamatorne bolesti. Bolest može biti izabrana iz grupe koju þine imuni poremećaj, rak, bubrežna bolest, fibrotiþna bolest, genetska abnormalnost, zapaljenje i kardiovaskularni poremećaj.
KRATAK OPIS SLIKA
Otkrivanje koje se odnosi na jedinjenja van obima predmetnog pronalaska dato je samo za referencu.
[0016] Fig.1 pokazuje aktivnost obaranja siRNK inkapsulirane razliþitim katjonskim lipidima. Lipidi ukljuþuju MC3 (0,3 mg/kg), NCI (0,3 rag/kg), ATX-547 (0,3 mg/kg), ATX-001 (0,3 i 1,0 rag/kg), ATX-002 (0,3 i 1,0 mg/ kg), i ATX-003 (0,3 i 1,0 mg/kg). Koliþina srušenog Faktora VII u plazmi miša prikazana je nakon primene formulacije siRNK miševima C57BL6, u poređenju sa injekcijom samog nosaþa. Koliþina Faktora VII u abnormalnoj i normalnoj ljudskoj plazmi je ukljuþena kao kontrola. Statistiþki znaþajno smanjenje nivoa Faktora VII (p<0,01) prikazano je zvezdicom (*). ;[0017] Fig.2 prikazuje procenu efekta siRNK na aktivnost Faktora VII na osnovu rezultata prikazanih na Fig.2, i normalizovanih na procentualno smanjenje u poređenju sa samim nosaþem. ;[0018] Fig.3 pokazuje aktivnost obaranja siRNK inkapsulirane razliþitim katjonskim lipidima. Lipidi ukljuþuju MC3 (0,3 i 1,5 mg/kg), NCI (0,3 mg/kg), AT547 (0,1 i 0,3 mg/kg), AT004 (0,3), AT006 (0,3 i 1,0 mg/kg), ATX-010 ( 0,3 mg/kg) i AT001 (0,3 i 1,5 mg/kg). ;Koliþina srušenog Faktora VII u plazmi miša prikazana je nakon primene formulacije siRNK miševima C57BL6, u poređenju sa injekcijom samog nosaþa. Koliþina Faktora VH u abnormalnoj i normalnoj ljudskoj plazmi je ukljuþena kao kontrola. Statistiþki znaþajno smanjenje nivoa faktora VII (p<0,01) prikazano je zvezdicom (*).
[0019] Fig.4 prikazuje procenu efekta siRNK na aktivnost Faktora VH na osnovu rezultata prikazanih na Fig.2, i normalizovanih na procentualno rušenje u poređenju sa samim nosaþem.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0020] "Bar jedan" oznaþava jedan ili više (npr., 1-3, 1-2, ili 1).
[0021] "Kompozicija" obuhvata proizvod koji sadrži navedene sastojke u određenim koliþinama, kao i svaki proizvod koji je rezultat, direktno ili indirektno, kombinacijom navedenih sastojaka u određenim koliþinama.
[0022] "U kombinaciji sa" kako se koristi da opiše davanje jedinjenja formula 1, I i II sa drugim lekovima u metodama leþenja, znaþi da se jedinjenja formule 1, I i II i drugi lekovi primenjuju uzastopno ili istovremeno u odvojenim dozama oblicima, ili se daju istovremeno u istom doznom obliku.
[0023] "Sisar" oznaþava þoveka ili drugog sisara, ili oznaþava ljudsko biće.
[0024] "Pacijent" ukljuþuje i ljude i druge sisare, poželjno ljude.
[0025] "Alkil" oznaþava zasićeni, ravan ili razgranati, ugljovodoniþni lanac. U razliþitim izvođenjima, alkil grupa ima 1-18 atoma ugljenika, odn. je C1-C18grupa, ili je C1-C12grupa, C1-C6grupa, ili C1-C4grupa. Nezavisno, u razliþitim izvođenjima, alkil grupa ima nula grana (odn. je ravan lanac), jednu granu, dve grane ili više od dve grane. "Alkenil" oznaþava nezasićeni alkil koji može imati jednu dvostruku vezu, dve dvostruke veze, više od dve dvostruke veze.
"Alkinil" oznaþava nezasićeni alkil koji može imati jednu trostruku vezu, dve trostruke veze ili više od dve trostruke veze. Alkilni lanci mogu biti opciono supstituisani sa 1 supstituentom (odn., alkil grupa je mono-supstituisana), ili 1-2 supstituenta, ili 1-3 supstituenta, ili 1-4 supstituenta, itd. Supstituenti se mogu izabrati iz grupe koju þine hidroksi, amino, alkilamino, boronil, karboksi, nitro, cijano ili halo. Kada alkil grupa ukljuþuje jedan ili više heteroatoma, alkil grupa se ovde naziva heteroalkil grupa. Kada su supstituenti na alkil grupi ugljovodonici, onda se rezultujuća grupa jednostavno naziva supstituisanim alkilom. U razliþitim aspektima, alkil grupa ukljuþujući supstituente ima manje od 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, ili 7 atoma ugljenika.
[0026] "Niži alkil" oznaþava grupu koja ima jedan do šest atoma ugljenika u lancu þiji lanac može biti ravan ili razgranat. Neograniþavajući primeri pogodnih alkil grupa ukljuþuju metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, t-butil, n-pentil, i heksil.
[0027] "Alkoksi" oznaþava alkil-O-grupu u kojoj je alkil kao što je gore definisano. Neograniþavajući primeri alkoksi grupa ukljuþuju: metoksi, etoksi, n-propoksi, izopropoksi, nbutoksi i heptoksi. Veza za roditeljski deo je preko eterskog kiseonika.
[0028] "Alkoksialkil" oznaþava alkoksi-alkil-grupu u kojoj su alkoksi i alkil kao što je prethodno opisano. Poželjni alkoksialkil obuhvata nižu alkil grupu. Veza za roditeljski deo je preko alkila.
[0029] "Alkilaril" oznaþava alkil-aril-grupu u kojoj su alkil i aril kao što je prethodno opisano. Poželjni alkilarili sadrže nižu alkil grupu. Veza za roditeljski deo je preko arila.
[0030] "Aminoalkil'' oznaþava NH-alkil-grupu, gde je alkil kao što je gore definisano, vezan za roditeljski deo preko alkil grupe.
[0031] "Karboksialkil" oznaþava HOOC-alkil-grupu, u kojoj alkil je kao što je gore definisano, vezan za roditeljski deo preko alkil grupe.
[0032] "Komercijalno dostupne hemikalije" i hemikalije koje se koriste u Primerima navedenim ovde mogu se dobiti iz standardnih komercijalnih izvora, gde takvi izvori ukljuþuju npr., Acros Organics (Pittsburgh, Pa.), Sigma-Adrich Chemical (Milwaukee, Wis.), Avocado Research (Lancashire, U.K.), Bionet (Cornwall, U.K.), Boron Molecular (Research Triangle Park, N.C.), Combi-Blocks (San Diego, Calif.), Eastman Organic Chemicals, Eastman Kodak Company (Rochester, N.Y.), Fisher Scientific Co. (Pittsburgh, Pa.), Frontier Scientific (Logan, Utah), ICN Biomedicals, Inc. (Costa Mesa, Calif.), Lancaster Sinteza (Windham, N.H.), Maybridge Chemical Co. (Cornwall, U.K), Pierce Chemical Co. (Rockford, Dl), Riedel de Haen (Hannover, Germany), Spectrum Quality Product, Inc. (New Brunswick, NJ.), TCI America (Portland, Oreg.), and Wako Chemicals USA, Inc. (Richmond, Va.).
[0033] "Jedinjenja opisana u hemijskoj literaturi" mogu se identifikovati preko referentnih knjiga i baza podataka usmerenih na hemijska jedinjenja i hemijske reakcije, kao što je poznato proseþnom struþnjaku u ovoj oblasti. Pogodne referentne knjige i rasprave koje detaljno opisuju sintezu reaktanata korisnih u pripremi jedinjenja koja su ovde otkrivena, ili daju reference na þlanke koji opisuju pripremu jedinjenja koja su ovde otkrivena, ukljuþuju npr., "Synthetic Organic Chemistry", John Wiley and Sons, Inc. New York; S. R. Sandler et al, "Organic Functional Grupa Preparations," 2<nd>Ed., Academic Press, New York, 1983; H. O. House, "Modern Synthetic Reactions," 2<nd>Ed., W. A. Benjamin, Inc. Menlo Park, Calif., 1972; T. L. Glichrist, "Heterocyclic Chemistry," 2<nd>Ed. John Wiley and Sons, New York, 1992; J. March, "Advanced Organic Chemistry: reactions, Mechanisms and Structure," 5<th>Ed., Wiley Interscience, New York, 2001; Specific and analogous reactants may also be identified through the indices of known chemicals prepared by the Chemical Abstract Service of the American Chemical Society, which are available in most public and university libraries, as well as through online databases (e.g., the American Chemical Society, Washington, D.C.). Hemikalije koje su poznate, ali nisu komercijalno dostupne u katalozima, mogu biti pripremljene od strane kuća za hemijsku sintezu po narudžbi, gde mnoge od standardnih kuća za snabdevanje hemikalijama (kao što su one gore navedene) pružaju usluge sinteze po meri.
[0034] "Halo" oznaþava fluoro, hloro, bromo, ili jodo grupe. Poželjne su fluoro, hloro ili bromo, a naroþito poželjne su fluoro i hloro.
[0035] "Halogen" oznaþava fluorin, hlorin, bromin, ili jodin. Poželjni su fluorin, hlorin i bromin.
[0036] "Heteroalkil" je zasićen ili nezasićen, ravan ili razgranat, lanac koji sadrži ugljenik i najmanje jedan heteroatom. Heteroalkil grupa može, u razliþitim izvođenjima, imati na heteroatomu, ili 1-2 heteroatoma, ili 1-3 heteroatoma, ili 1-4 heteroatoma. U jednom aspektu, heteroalkilni lanac sadrži od 1 do 18 (odn., 1-18) atoma þlanova (ugljenika i heteroatoma), au razliþitim realizacijama sadrži 1-12, ili 1-6, ili 1-4 atoma þlanova.
Nezavisno, u razliþitim realizacijama, heteroalkil grupa ima nula grana (odn., je ravan lanac), jednu granu, dve grane ili više od dve grane. Nezavisno, u jednom izvođenju, heteroalkil grupa je zasićena. U drugom izvođenju, heteroalkil grupa je nezasićena. U razliþitim izvođenjima, nezasićeni heteroalkil može imati jednu dvostruku vezu, dve dvostruke veze, više od dve dvostruke veze, i/ili jednu trostruku vezu, dve trostruke veze, ili više od dve trostruke veze. Heteroalkil lanci mogu biti supstituisani ili nesupstituisani. U jednom aspektu, heteroalkil lanac je nesupstituisan. U drugom izvođenju, heteroalkil lanac je supstituisan. Supstituisani heteroalkil lanac može imati 1 supstituent (odn., sa monosupstituisanim), ili može imati, na primer, 1-2 supstituenta, ili 1-3 supstituenta, ili 1-4 supstituenta. Primeri heteroalkil supstituenata ukljuþuju estre (—C(O)—O—R) i karbonile (—C(O)—).
[0037] "Hidroksialkil" oznaþava HO-alkil-grupu, u kojoj je alkil prethodno definisan. Poželjni hidroksialkili sadrže niži alkil. Neograniþavajući primeri odgovarajućih hidroksialkil grupa ukljuþuju hidroksimetil i 2-hidroksietil.
[0038] "Hidrat" je rastvaraþ u kome je molekul rastvaraþa H2O.
[0039] "Lipid" oznaþava organsko jedinjenje koje sadrži estar masne kiseline i karakteriše ga nerastvorljivo u vodi, ali rastvorljivo u mnogim organskim rastvaraþima. Lipidi se obiþno dele u najmanje tri klase: (1) "jednostavni lipidi", koji ukljuþuju masti i ulja kao i voskove; (2) "složeni lipidi", koji ukljuþuju fosfolipide i glikolipide; i (3) "izvedeni lipidi" kao što su steroidi.
[0040] "Lipidna þestica" oznaþava formulaciju lipida koja se može koristiti za isporuku terapeutske nukleinske kiseline (npr., mRNK) na ciljano mesto od interesa (npr., ćelija, tkivo, organ i sliþno). Poželjno, lipidna þestica je þestica nukleinske kiseline, koja se tipiþno formira od katjonskog lipida, nekatjonskog lipida (npr., fosfolipida), konjugovanog lipida koji spreþava agregaciju þestice (npr., PEG-lipida), i opciono holesterol. Tipiþno, terapeutska nukleinska kiselina (npr., mRNK) može biti inkapsulisana u lipidnom delu þestice, þime se štiti od enzimske degradacije.
[0041] Lipidne þestice obiþno imaju srednji preþnik od 30 nm do 150 nm, od 40 nm do 150 nm, od 50 nm do 150 nm, od 60 nm do 130 nm, od 70 nm do 110 nm, od 70 nm do 70 nm. od 80 nm do 100 nm, od 90 nm do 100 nm, od 70 do 90 nm, od 80 do 90 nm, od 70 nm do 80 nm, ili 30 nm, 35 nm, 40 nm, 45 nm, 55 nm, 60 nm, 65 nm, 70 nm, 75 nm, 80 nm, 85 nm, 90 nm, 95 nm, 100 nm, 105 nm, 110 nm, 115 nm, 120 nm, 125 nm, 130 nm, 135 nm, 140 nm, 145 nm ili 150 nm, i u suštini su netoksiþni. Pored toga, nukleinske kiseline, kada su prisutne u lipidnim þesticama predmetnog pronalaska, otporne su u vodenom rastvoru na degradaciju sa nukleazom.
[0042] "Rastvaraþ" oznaþava fiziþku povezanost jedinjenja iz ovog pronalaska sa jednim ili više molekula rastvaraþa. Ova fiziþka povezanost ukljuþuje razliþite stepene jonske i kovalentne veze, ukljuþujući vodoniþnu vezu. U određenim sluþajevima, rastvaraþ će biti sposoban za izolaciju, na primer kada je jedan ili više molekula rastvaraþa ugrađeno u kristalnu rešetku kristalne þvrste supstance. "Rastvaraþ" obuhvata i rastvaraþe u fazi rastvora i rastvaraþe koji se mogu izolovati. Neograniþavajući primeri pogodnih rastvaraþa ukljuþuju etanolate, metanolate i sliþno.
[0043] "Lipid inkapsuliran" može znaþiti lipidnu þesticu koja obezbeđuje terapeutsku nukleinsku kiselinu kao što je mRNK sa potpunom inkapsulacijom, delimiþnom inkapsulacijom ili oboje. U poželjnom izvođenju, nukleinska kiselina (npr., mRNK) je potpuno inkapsulirana u lipidnoj þestici.
[0044] "Lipidni konjugat" oznaþava konjugovani lipid koji inhibira agregaciju lipidnih þestica. Takvi lipidni konjugati ukljuþuju, ali nisu ograniþeni na, konjugate PEG-lipida kao što je, npr. diacilgliceroli (npr., PEG-DAG konjugati), PEG spojen sa holesterolom, PEG spojen sa fosfatidiletanolaminima i PEG konjugovan sa ceramidima, katjonski PEG lipidi, polioksazolin (POZ)-lipid konjugati, poliamidni oligomeri (npr., ATTA-lipidni konjugati) i njihove smeše. PEG ili POZ mogu biti konjugovani direktno na lipid ili mogu biti povezani sa lipidima preko veznog dela. Može se koristiti bilo koji vezni deo pogodan za kuplovanje PEG ili POZ za lipid ukljuþujući, na primer, vezne delove koji ne sadrže estar i vezne delove koji sadrže estar. Poželjno, koriste se vezni delovi koji ne sadrže estar, kao što su amidi ili karbamati.
1
[0045] "Amfipatski lipid" oznaþava materijal u kome se hidrofobni deo lipidnog materijala orijentiše u hidrofobnu fazu, dok je hidrofilni deo orijentisan ka vodenoj fazi.
Hidrofilne karakteristike proizilaze iz prisustva polarnih ili naelektrisanih grupa kao što su ugljeni hidrati, fosfati, karboksilni, sulfato, amino, sulfhidril, nitro, hidroksil i druge sliþne grupe. Hidrofobnost se može dodeliti ukljuþivanjem apolarnih grupa koje ukljuþuju, ali nisu ograniþene na, dugolanþane zasićene i nezasićene alifatiþne ugljovodoniþke grupe i takve grupe supstituisane jednim ili više aromatiþnih, cikloalifatiþnih ili heterocikliþnih grupe(a). Primeri amfipatskih jedinjenja ukljuþuju, ali nisu ograniþeni na, fosfolipide, aminolipide i sfingolipide.
[0046] Reprezentativni primeri fosfolipida ukljuþuju, ali nisu ograniþeni na, fosfatidilholin, fosfatidilemanolamin, fosfatidilserin, fosfatidilinositol, fosfatidna kiselina, palmitoiloleoil fosfatidilholin, lizofosfatidilholin, lizofosfatidiletanolamin, dipalmitoilfosfatidil holin, dioleoilfosfatidilholin, distearoilfosfatidilholin, i dilinoleoilfosfatidil holin. Druga jedinjenja koja nemaju fosfor, kao naprimer sfingolipid, familije glikosfingolipida, diacilglikerols, i ȕaciloksikiseline, su takođe unutar grupe oznaþene kao amfipatski lipidi. Pored toga, gore opisani amfipatski lipidi mogu se mešati sa drugim lipidima ukljuþujući trigliceride i sterole.
[0047] "Neutralni lipid" oznaþava vrstu lipida koja postoji ili u nenaelektrisanom ili neutralnom cviterjonskom obliku pri izabranom pH. Pri fiziološkom pH, takvi lipidi ukljuþuju, na primer, diacilfosfatidilholin, diacilfosfatidiletanolamin, ceramid, sfingomielin, cefalin, holesterol, cerebrozide, i diacilglicerole.
[0048] "Nekatjonski lipid" oznaþava amfipatski lipid ili neutralni lipid ili anjonski lipid, i detaljnije je opisan u nastavku.
[0049] "Anjonski lipid" oznaþava lipid koji je negativno naelektrisan pri fiziološkom pH. Ovi lipidi obuhvataju, ali nisu ograniþeni na, fosfatidilglicerole, kardiolipine, diacilfosfatidilserine, diacilfosfatidne kiseline, N-dodekanoil fosfatidiletanolamine, N-sukcinil fosfatidiletanolamine, N-glutarilfosfatidiletanolamine, lizilfosfatidilglicerole, palmitoilolejol fosfatidilglicerol (POPG), i druge anjonske modifikacione grupe spojene sa neutralnim lipidima.
[0050] Termin "hidrofobni lipid" oznaþava jedinjenje koje ima apolarne grupe koje ukljuþuju, ali nisu ograniþene na, dugolanþane zasićene i nezasićene alifatiþne ugljovodoniþne grupe i takve grupe opciono supstituisane jednom ili više aromatiþnih, cikloalifatiþnih ili heterocikliþnih grupa. Pogodni primeri ukljuþuju, ali nisu ograniþeni na, diacilglicerol, dialkilglicerol, N-N-dialkilamino, 1,2-diaciloksi-3-aminopropan, i 1,2-dialkil-3-aminopropan.
[0051] Termini "katjonski lipid" i "amino lipid" se ovde koriste naizmeniþno kako bi ukljuþili one lipide i njihove soli koji imaju jedan, dva, tri ili više lanaca masnih kiselina ili masnih alkil lanaca i pH-titrirajuću amino glavnu grupu (npr., alkilamino ili dialkilamino glavna grupa). Katjonski lipid je tipiþno protoniran (odn., pozitivno naelektrisan) pri pH ispod pKa katjonskog lipida i suštinski je neutralan pri pH iznad pKa. Katjonski lipidi pronalaska se takođe mogu nazvati titracionim katjonskim lipidima. U nekim izvođenjima, katjonski lipidi obuhvataju: protonabilni tercijarni amin (npr., pH-titracionu) glavnu grupu; C18alkil lance, pri þemu svaki alkilni lanac nezavisno ima 0 do 3 (npr., 0, 1, 2, ili 3) dvostruke veze; i etar, estar, ili ketalne veze između glavne grupe i alkil lanaca. Takvi katjonski lipidi ukljuþuju, ali nisu ograniþeni na, DSDMA, DODMA, DLinDMA, DLenDMA, Ȗ- DLenDMA, DLin-K-DMA, DLin-K-C2-DMA (also known as DLin-C2K-DMA, XTC2, and C2K), DLin-K-C3 -DM A, DLin-K-C4-DMA, DLen-C2K-DMA, y-DLen-C2K-DMA, DLin- M-C2-DMA (takođe poznat kao MC2), DLin-M-C3 -DMA (takođe poznat kao MC3) i (DLin-MP- DMA) (takođe poznat kao 1-B11).
[0052] Termin "supstituisan" oznaþava supstituciju sa određenim grupama koje nisu vodonik, ili sa jednom ili više grupa, ostataka, ili radikala koji mogu biti isti ili razliþiti, pri þemu je svaka, na primer, nezavisno odabrana.
[0053] Pod "antisens nukleinskom kiselinom" podrazumeva se neenzimski molekul nukleinske kiseline koji se vezuje za ciljanu RNK pomoću RNK-RNK ili RNK-DNK ili RNK-PNK (proteinska nukleinska kiselina; Egholm et al., 1993 Nature 365, 566) interakcije i menja aktivnost ciljane RNK (za pregled, videti Stein and Cheng, 1993 Science 261, 1004 and Woolf et al., U.S. Pat. No.5,849,902). Tipiþno, antisens molekuli su komplementarni ciljanoj sekvenci duž jedne susedne sekvence antisens molekula. Međutim, antisens molekul se može vezati za supstrat tako da molekul supstrata formira petlju, i/ili antisens molekul može da se veže tako da antisens molekul formira petlju. Prema tome, antisens molekul može biti komplementaran sa dve (ili þak više) nesusedne supstratne sekvence ili dva (ili þak više) dela nesusednih sekvenci antisens molekula mogu biti komplementarna ciljanoj sekvenci ili oboje. Pored toga, antisens DNK se može koristiti za ciljanje RNK pomoću interakcija DNK-RNK, þime se aktivira RNaza H, koja razgrađuje ciljanu RNK u dupleksu. Antisens oligonukleotidi mogu sadržati jedan ili više regiona koji aktivira RNKazu H, koji je sposoban da aktivira cepanje RNKaze H ciljane RNK. Antisens DNK se može sintetizovati hemijski ili eksprimirati upotrebom jednolanþanog DNK ekspresionog vektora ili njegovog ekvivalenta. Antisens RNK je RNK lanac koji ima sekvencu komplementarnu iRNK ciljanog gena. Sense RNK ima sekvencu komplementarnu antisens RNK, i zapaljenu sa njenom komplementarnom antisens RNK da bi se formirala iNA. Ove antisens i sensne RNKs su konvencionalno sintetizovane pomoću RNK sintetizatora.
[0054] "Nukleinska kiselina" se odnosi na deoksiribonukleotide ili ribonukleotide i njihove polimere u jednolanþanom ili dvolanþanom obliku. Termin obuhvata nukleinske kiseline koje sadrže poznate analoge nukleotida ili modifikovane ostatke ili veze u osnovi, koje su sintetiþke, koje se javljaju u prirodi, i koje se ne javljaju u prirodi, koje imaju sliþna svojstva vezivanja kao referentna nukleinska kiselina, i koje se metabolišu na sliþan naþin kao i referentni nukleotidi. Primeri takvih analoga ukljuþuju, bez ograniþenja, fosforotioate, fosforamidate, metil fosfonate, hiral-metil fosfonate, 2'-O-metil ribonukleotide, peptidnukleinske kiseline (PNKs).
[0055] Pod "RNA" se podrazumeva molekul koji sadrži najmanje jedan ribonukleotidni ostatak. Pod "ribonukleotidom" se podrazumeva nukleotid sa hidroksil grupom na 2' poziciji ȕ-D-ribo-furanoznog ostatka. Termini ukljuþuju dvolanþanu RNK, jednolanþanu RNK, izolovanu RNK kao što je delimiþno preþišćena RNK, suštinski þista RNK, sintetiþka RNK, rekombinantno proizvedena RNK, kao i izmenjenu RNK koja se razlikuje od RNK koja se javlja u prirodi dodavanjem, brisanjem, supstitucijom i/ili promenom jednog ili više nukleotida. Takve promene mogu ukljuþiti dodavanje ne-nukleotidnog materijala, kao što je kraj(eve) interferentne RNK ili interno, na primer na jednom ili više nukleotida RNK. Nukleotidi u molekulima RNK takođe mogu da sadrže nestandardne nukleotide, kao što su nukleotidi koji se ne pojavljuju u prirodi, ili hemijski sintetisani nukleotidi ili deoksinukleotidi. Ove izmenjene RNK se mogu nazvati analozima ili analozima RNK koje se javljaju u prirodi. Kao što je ovde korišćeno, termini "ribonukleinska kiselina" i "RNK" odnose se na molekul koji sadrži najmanje jedan ribonukleotidni ostatak, ukljuþujući siRNK, antisens RNK, jednolanþanu RNK, mikroRNK, mRNK, nekodirajuću RNK i multivalentnu RNK. Ribonukleotid je nukleotid sa hidroksilnom grupom na 2' poziciji ȕ-D-ribo-furanoznog ostatka. Ovi termini ukljuþuju dvolanþanu RNK (dsRNK), jednolanþanu RNK (ssRNK), izolovanu RNK kao što je delimiþno preþišćena RNK, suštinski þista RNK, sintetiþka RNK, rekombinantno proizvedena RNK, kao i modifikovana i izmenjena RNK koja se razlikuje od prirodne RNK dodavanjem, brisanjem, supstitucijom, modifikacijom i/ili izmenom jednog ili više nukleotida. Promene RNK mogu ukljuþivati dodavanje nenukleotidnog materijala, kao što je kraj(eve) interferentne RNK ili interferno, na primer na jednom ili više nukleotida RNK nukleotida u RNK molekulu ukljuþuju nestandardne nukleotide, kao što je nukleotidi koji se ne pojavljuju u prirodi ili hemijski sintetisani nukleotidi ili deoksinukleotidi. Ove izmenjene RNK se mogu nazvati analozima.
[0056] Pod "nukleotidom" kako se ovde koristi, kao što je poznato u struci, ukljuþuje prirodne baze (standardne) i modifikovane baze dobro poznate u tehnici. Takve baze se generalno nalaze na 1' poziciji nukleotidnog šećera. Nukleotidi uglavnom sadrže bazu, šećer i fosfatnu grupu. Nukleotidi mogu biti nemodifikovani ili modifikovani na šećernoj, fosfatnoj i/ili baznoj grupi (takođe se naizmeniþno nazivaju analozi nukleotida, modifikovani nukleotidi, ne-prirodni nukleotidi, nestandardni nukleotidi i drugo; vidi, na primer, Usman and McSwiggen, supra; Eckstein, et al., Međunarodnu PCT Objavu Br. WO 92/07065; Usman, et al, International PCT Publication No. WO 93/15187; Uhlroan & Peyman, supra). Postoji nekoliko primera modifikovanih baza nukleinskih kiselina poznatih u tehnici kao što su
1
sumirani od strane Limbach, et al, Nucleic Acids Res.22:2183, 1994. Neki od neograniþavajućih primera modifikacija baze koje se mogu uvesti u molekule nukleinske kiseline ukljuþuju: inozin, purin, piridin-4-on, piridin-2-on, fenil, pseudouracil, 2,4,6-trimetoksi benzen, 3-metil uracil, dihidrouridin, naftil, aminofenil, 5-alkilcitidine (npr., 5-metilcitidin), 5-alkiluridine (npr., ribotimidin), 5-halouridin (npr., 5-bromouridin) ili 6-azapirimidini ili 6-alkilpirimidini (npr., 6-metiluridin), propin, i drugi (Burgin, et al., Biochemistry 35:14090,1996; Uhlman & Peyman, supra). Pod "modifikovanim bazama" u ovom aspektu se podrazumevaju nukleotidne baze osim adenina, guanina, citozina i uracila na 1’ poziciji ili njihovih ekvivalenata.
[0057] Kako se ovde koristi, komplementarne nukleotidne baze su par nukleotidnih baza koje formiraju vodoniþne veze jedna sa drugom. Adenin (A) se uparuje sa miminom (T) ili sa uracilom (U) u RNK, a gvanin (G) se uparuje sa citozinom (C). Komplementarni segmenti ili lanci nukleinske kiseline koji se međusobno hibridizuju (pridružuju se vodoniþnim vezom). Pod "komplementarnim" se podrazumeva da nukleinska kiselina može da formira vodoniþnu vezu(e) sa drugom sekvencom nukleinske kiseline bilo tradicionalnim Watson-Crick-ovim ili drugim netradicionalnim naþinima vezivanja.
[0058] MikroRNKs (miRNK) su jednolanþani RNK molekuli dužine 21-23 nukleotida, koji regulišu ekspresiju gena. miRNK su kodirane sa genima koji su transkribovani iz DNK, ali nisu prevedeni u protein (nekodirajuća RNK); umesto toga oni se obrađuju od primarnih transkripata poznatih kao pri-miRNK do kratkih struktura petlje stabla koje se nazivaju premiRNK i konaþno do funkcionalne miRNK. Zreli molekuli miRNK su delimiþno komplementarni jednom ili više molekula RNK (mRNK) i njihova glavna funkcija je smanjenje ekspresije gena.
[0059] Kao što se koristi ovde termin "mala interferirajuća RNK (siRNK)", ponekad poznata kao kratka interferirajuća RNK ili RNK za utišavanje, koristi se za oznaþavanje klase dsRNK molekula, dužine 16-40 nukleotida, koji igraju razliþite uloge u biologiji. Najvažnije, siRNK je ukljuþena u put interferencije RNK (RNKi), gde ometa ekspresiju specifiþnog gena. Pored svoje uloge u RNKi putu, siRNK takođe deluju u putevima povezanim sa RNKi, na primer, kao antivirusni mehanizam ili u oblikovanju hromatinske strukture genoma; složenost ovih puteva se tek sada razjašnjava.
[0060] Kao što je ovde korišćeno, termin RNKi se odnosi na proces utišavanja gena zavisan od RNK koji je kontrolisan kompleksom za utišavanje indukovanog RNK (RISC) i koji je pokrenut kratkim molekulima dsRNK u ćeliji, gde oni stupaju u interakciju sa katalitiþkom RISC komponentom zvanom argonaut belanþevina. Kada je dsRNK ili RNK sliþna iNA ili siRNK egzogena (dolazi od infekcije virusom sa RNK genomom ili iz transfektovane iNA ili siRNK), RNK ili iNA se uvoze direktno u citoplazmu i cepaju na kratke fragmente enzimom pod nazivom Dicer. Poþetna dsRNK takođe može biti endogena (potiþe u ćeliji), kao u pre-miRNK eksprimiranim iz gena koji kodiraju RNK u genomu. Primarni transkripti iz takvih gena se prvo obrađuju da bi se formirala karakteristiþna struktura matiþne petlje pre-miRNK u jezgru, a zatim se izvoze u citoplazmu da bi ih Dicer cepao. Dakle, dva puta dsRNK, egzogeni i endogeni, konvergiraju u RISC kompleksu. Aktivne komponente RISC, proteini argonauta, cepaju ciljani lanac mRNK komplementarno njihovoj vezanoj siRNK ili iNA. Pošto su fragmenti koje proizvodi Dicer dvolanþani, svaki od njih bi u teoriji mogao da proizvede funkcionalnu siRNK ili iNA. Međutim, samo jedan od dva lanca, nazvan vodeći lanac, vezuje protein argonauta i usmerava utišavanje gena. Drugi anti-vodiþ ili putniþki lanac se degradira tokom RISC aktivacije.
[0061] Ono što je ovde opisano su jedinjenja formule I, II, III, IV, i V. Ono što je ovde opisano je jedinjenje Formule I
u kojoj
R1i R2oba se sastoje od lineranog alkila koji se sastoji od 1 do 9 atoma ugljenika, alkenila ili alkinila koji se sastoje od 2 do 11 atoma ugljenika;
L1i L2oba se sastoje od lineranog alkilena ili alkenilena koji se sastoje od 5 do 18 atoma ugljenika, ili obrazuju heterocikl sa N;
X1i X3oba se sastoje od -CO-O-;
X2je S ili O;
L3se sastoji od veze ili linearnog alkilena koji se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika, ili obrazuje heterocikl sa N;
R3se sastoji od linearnog ili razgranatog alkilena koji se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika; i R4i R5su isti ili razliþiti, koji se sastoje od vodonika ili linearnog ili razgranog alkila koji se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika,
ili njegove farmaceutski prihvaljive soli.
[0062] Ono što je takođe opisano ovde su bilo koja jedinjenja navedena u ATX-001 do ATX-017, ATX-021 do ATX-023, i ATX-026 do ATX-030 navedeni u Tabeli 1, u nastavku, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0063] Ono što je takođe opisano ovde je jedinjenje Formule II
1
u kojoj
R1i R2oba se sastoje od linearnog alkila koji se sastoji od 1 do 12 atoma ugljenika, alkenila ili alkinila koji se sastoje od 2 do 12 atoma ugljenika,
L1i L2oba se sastoje od linearnog alkilena ili alkenilena koji se sastoji od 5 do 18 atoma ugljenika, ili obrazuju heterocikl sa N,
X je S,
L3je veza ili linearni alkilen koji se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika, ili formira heterocikl sa N, R3je linearni ili razgranati alkilen koji se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika, i
R4i R5su isti ili razliþiti, svaki je vodonik ili linearni ili razgranati alkil koji se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika; ili farmaceutski prihvatljiva so.
[0064] U jedinjenju formule II, L1i L2oba mogu da se sastoje od linearnog alkilena koji se sastoji od pet atoma ugljenika. U jedinjenju formule I, R3je etilen ili propilen. U jedinjenju formule I, R4i R5mogu biti isti ili razliþiti, svaki je vodonik, metil, ili etil. U jedinjenju formule I, L3može biti veza. U jedinjenju formule I, R1i R2mogu oba da se sastoje od linearnog alkenila koji se sastoji od deset atoma ugljenika.
[0065] U jedinjenjima formule I i II, jedinjenje se može sastojati od jedinjenja odabranog između jedinjenja navedenih u ATX-001 do ATX-017, ATX-021 do ATX-023, i ATX-026 do ATX-030 navedenih u Tabeli 1, u nastavku, ili formule 1) do 12), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
1
�
[0066] Ono što je takođe opisano ovde je jedinjenje formule III ili IV
u kojoj
R1se sastoji od razgranatog alkila sa 12 do 20 atoma ugljenika,
R2se sastoji od linearnog alkila sa 5 do 10 atoma ugljenika ili razgranatog alkila sa 12 do 20 atoma ugljenika,
L1i L2svaki se sastoji od veze ili linearnog alkila koji ima 1 do 3 atoma ugljenika,
X se sastoji od S ili O,
L3se sastoji od veze ili nižeg alkila,
R3se sastoji od alkila, i
R4i R5su isti ili razliþiti, svaki se sastoji od nižeg alkila; ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0067] U jedinjenju formule III ili IV, L3se može sastojati od veze. U jedinjenju formule III ili IV, X može biti S. U jedinjenju formule III ili IV, R3može biti etilen. U jedinjenju formule III ili IV, R3može biti n-propilen ili izopropilen. U jedinjenju formule III ili IV, R4i R5
1
može biti odvojeno metil, etil, ili izopropil. U jedinjenju formule III ili IV, L1i L2mogu se oba sastojati od veze. U jedinjenju formule III ili IV, L1i L2mogu se oba sastojati od metilena. U jedinjenju formule III ili IV, R1i R2mogu se oba sastojati od razgranatog alkila. U jedinjenju formule III ili IV, R2može se sastojati od alkila. U jedinjenju formule III ili IV, R1i R2mogu se oba sastojati od 19 ili 20 atoma ugljenika. U jedinjenju formule III ili IV, R1i R2mogu se oba sastojati od 13 ili 14 atoma ugljenika. U jedinjenju formule III ili IV, L3može se sastojati od metilena, R3se sastoji od etilena, X2može se sastojati od S, i R4i R5mogu se oba sastojati od metila. U jedinjenju formule III ili IV, pri þemu L3se sastoji od veze, može R3da se sastoji od etilena, X može se sastojati od S, i R4i R5mogu se oba sastojati od metila. U jedinjenju formule III ili IV, L3mogu se sastojati od veze, R3mogu se sastojati od n-propilena, X mogu se sastojati od S, i R4i R5mogu se oba sastojati od metila. U jedinjenju formule III ili IV, L3može se sastojati od veze, R3se može sastojati od izopropilena, X se može sastojati od S, i R4i R5mogu se oba sastojati od metila. Jedinjenje zahtevanog pronalaska je jedinjenje formule III u kojoj R1se sastoji od razgranatog alkila sa 12 do 20 atoma ugljenika; R2se sastoji od razgranatog alkila sa 12 do 20 atoma ugljenika; L1i L2svaki se sastoji od veze ili linerarnog alkila koji ima 1 do 3 atoma ugljenika; X se sastoji od S ili O; L3se sastoji od veze; R3je odabran između etilena, n-propilena ili izopropilena, i R4i R5su isti ili razliþiti, svaki se sastoji od linearnog ili razgranatog alkila koji se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. Jedinjenje formule III ili IV, može biti odabran između grupe koja se sastoji od jedinjenja formule ATX-B-1 do ATX-B-12 kao što sledi.
1
�
Ono što je takođe opisano u jedinjenju formule V
u kojoj
R1se sastoji od linearnog ili razgranatog alkila koji se sastoji od 1-18 atoma ugljenika, alkenila ili alkinila koji se sastoje od 2 do 12 atoma ugljenika, ili holesteril; R2se sastoji od lineranog ili razgranatog alkila ili alkenila koji se sastoje od 1 do 18 atoma ugljenika; L1se sastoji od linearnog alkila koji se sastoji od 5 do 9 atoma ugljenika ili, kada R1se sastoji od holesterila onda L1se sastoji od linearnog alkilena ili alkenila koji se sastoji od 3 do 4 atoma ugljenika; X1se sastoji od -O-(CO)— ili – (CO)-O —
X2se sastoji od S ili O;
L2se sastoji od veze ili linearnog alkilena od 1 do 6 atoma ugljenika;
R3se sastoji od linearnog ili razgranatog alkilena sa 1 do 6 atoma ugljenika; i R4i R5su isti ili razliþiti, svaki se sastoji od linearnog ili razgranatog alikila od 1 do 6 atoma ugljenika;
Ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0068] U jedinjenju formule V, L2se može sastojati od veze. U jedinjenju formule V, X2se može sastojati od S. U jedinjenju formule V, X1može biti -O-(CO) --. U jedinjenju formule V, R3može se sastojati od etilena. U jedinjenju formule V, R3se može sastojati od n-propilena ili izopropilena. U jedinjenju formule V, R4i R5mogu se svaki sastojati od metila, etila, ili izopropila. U jedinjenju formule V, L2se može sastojati od metilena. U jedinjenju formule V, R1i R2mogu se svaki sastojati od razgranatog alkila. U jedinjenju formule V, R2se može sastojati od alkila. U jedinjenju formule V, R1i R2može se svaki sastojati od 19 ili 20 atoma ugljenika. U jedinjenju formule V, R1ili R2mogu se svaki sastojati od 13 ili 14 atoma ugljenika. U jedinjenju formule V, L2se može sastojati od metilena, R3se može sastojati od etilena, X1se može sastojati od -O-(CO) —, X2se može sastojati od S, i R4i R5mogu se oba sastojati od metila. U jedinjenju formule V, L2se može sastojati od veze, R3može biti etilen, X1se može sastojati od -O-(CO) —, X2se može sastojati od S, i R4i R5se mogu oba sastojati od metila. U jedinjenju formule V, L2may consist of a bond, R3may consist of n-propilene, X1may consist of -O-(CO) —, X2se može sastojati od S, i R4i R5 se mogu oba sastojati od metila. U jedinjenju formule V, L2se može sastojati od veze, R3se može sastojati od izopropilena, X1se može sastojati od -O-(CO) —, X2se može sastojati od S, i R4i R5se mogu oba sastojati od metial. U jedinjenju formule V, jedinjenje može biti odabrano između jedinjenja formule ATX-A-1 do ATX-A-22.
�
[0069] Jedinjenja formula I, II, III, IV i V mogu biti njihove farmaceutski prihvatljive soli, u lipidnoj kompoziciji, koja sadrži nanoþesticu ili dvosloj lipidnih molekula. Dvosloj lipida poželjno dalje sadrži neutralni lipid ili polimer. Lipidna kompozicija poželjno sadrži teþni medijum. Kompozicija poželjno dalje inkapsulira nukleinsku kiselinu. Nukleinska kiselina poželjno ima aktivnost supresije ekspresije ciljanog gena korišćenjem RNK interferencije (RNKi). Lipidna kompozicija poželjno dalje sadrži nukleinsku kiselinu i neutralni lipid ili polimer. Lipidna kompozicija poželjno inkapsulira nukleinsku kiselinu.
[0070] Jedinjenja formula I, II, III, IV i V formiraju soli koje su takođe u okviru ovog otkrića. Podrazumeva se da pozivanje na jedinjenje formula I, II, III, IV ili V ovde ukljuþuje referencu na njegove soli, osim ako nije drugaþije naznaþeno. Termin "so(li)" kao što je ovde korišćeno oznaþava kisele soli formirane sa neorganskim i/ili organskim kiselinama, kao i baziþne soli formirane sa neorganskim i/ili organskim bazama. Pored toga, takve soli jedinjenja sa formulama I, II, III, IV ili V mogu sadržati bazni deo, kao što je, ali bez ograniþenja na, piridin ili imidazol, ili kiseli deo, kao što je, ali bez ograniþenja na, karboksilnu kiselinu i cviterjone („unutrašnje soli“). Soli mogu biti farmaceutski prihvatljive (odn., netoksiþne, fiziološki prihvatljive) soli, iako su druge soli takođe korisne. Soli jedinjenja formule I, II, III, IV ili V se mogu formirati, na primer, reakcijom jedinjenja formule I, II, III, IV ili V sa koliþinom kiseline ili baze, kao što je ekvivalentna koliþina, u medijumu kao što je onaj u kome se so taloži ili u vodenom medijumu nakon þega sledi liofilizacija.
[0071] Primeri kiselinskih adicionih soli ukljuþuju acetate, adipate, alginate, askorbate, aspartate, benzoate, benzensulfonate, bisulfate, borate, butirate, citrate, kamforate, kamforsulfonate, ciklopentanpropionate, diglukonate, dodecilsulfate, etansulfonate, fumarate, glukobeptanoate, glikerofosfate, hemisulfate, heptanoate, heksanoate, hidrohloride, hidrobromide, hidrojodide, 2-hidroksietansulfonate, laktate, maleate, metansulfonate, 2-naftaleneulfonate, nikotinate, nitrate, oksalate, pektinate, persulfate, 3-fenilpropionate, fosfate, picrate, pivalate, propionate, salicilate, sukcinate, sulfate, sulfonate (kao što su oni navedeni ovde), tartarate, tiocijanate, toluensulfonate (takođe poznati kao tosilate) undekanoate, i sliþno. Pored toga, o kiselinama koje se uopšteno smatraju pogodnim za formiranje farmaceutski korisnih soli iz baznih farmaceutskih jedinjenja razmatrene su, na primer, od strane S. Berge et al, J.
Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1)1-19; P. Gould, International J. Pharmaceutics (1986) 33 201-217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press,
2
New York; and in The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. on their website).
[0072] Primeri baznih soli ukljuþuju soli amonijuma, soli alkalnih metala kao što su natrijumove, litijumove i kalijumove soli, soli zemnoalkalnih metala kao što su soli kalcijuma i magnezijuma, soli sa organskim bazama (na primer, organski amini) kao što su benzatini, dicikloheksilamini, hidrabamini (obrazovanio sa N,N-bis(dehidroabietil) emilendiamin), N-metil-D-glukamini, N-metil-D-glukamidi, t-butil amini, i soli sa amino kiselinama kao što su arginin ili lizin. Osnovne grupe koje sadrže azot mogu biti kvartemizovane agensima kao što su niži alkil halogenidi (npr., metil, etil, propil, i butil hloridi, bromidi, i jodidi), dialkil sulfati (npr., dimetil, dietil, dibutil, i diamil sulfati), halide dugaþkog lanca (npr., decil, lauril, miristil, i stearil hloridi, bromidi, i jodidi), arilalkil halidi (npr., benzil and fenetil bromidi), i drugi.
[0073] Sve takve kisele i bazne soli su namenjene da budu farmaceutski prihvatljive soli unutar obima otkrića i sve kisele i bazne soli se smatraju ekvivalentnim slobodnim oblicima odgovarajućih jedinjenja formule I za svrhe otkrivanja.
[0074] Jedinjenja formula I, II, III, IV i V mogu postojati u nesolvatovanim i rastvorenim oblicima, ukljuþujući hidratizovane oblike. Generalno, rastvoreni oblici, sa farmaceutski prihvatljivim rastvaraþima kao što su voda, etanol i sliþno, su ekvivalentni nerastvorenim oblicima za potrebe ovog otkrića.
[0075] Jedinjenja formula I, II, III, IV i V i njihove soli, njihovi solvati, mogu postojati u svom tautomernom obliku (na primer, kao amid ili imino etar). Svi takvi tautomerni oblici su ovde razmatrani kao deo ovog otkrića.
[0076] Takođe u okviru ovog otkrića su polimorfi jedinjenja iz ovog otkrića (odn., polimorfi jedinjenja formule I su u okviru ovog otkrića).
[0077] Svi stereoizomeri (na primer, geometrijski izomeri, optiþki izomeri i sliþno) ovih jedinjenja (ukljuþujući one soli, solvata i prolekova jedinjenja, kao i soli i solvate prolekova), kao što su oni koji mogu postojati zbog asimetriþnih ugljenika na razliþitim supstituentima, ukljuþujući enantiomerne oblike (koji mogu postojati þak i u odsustvu asimetriþnih ugljenika), rotamerne forme, atropizore i dijastereomerne oblike, razmatrani su u okviru ovog otkrića. Pojedinaþni stereoizomeri jedinjenja prema ovom pronalasku mogu, na primer, biti suštinski slobodni od drugih izomera, ili mogu biti pomešani, na primer, kao racemati ili sa svim drugim, ili drugim odabranim, stereoizomerima. Hiralni centri jedinjenja ovde mogu imati S ili R konfiguraciju kao što je definisano u preporukama IURAS 1974. Upotreba termina "sol", "solvat" i sliþno je namenjena da se podjednako primeni na so i solvat enantiomera, stereoizomera, rotamera, tautomera, racemata ili prolekova otkrivenih jedinjenja.
[0078] Klase jedinjenja koja se mogu koristiti kao hemoterapeutski agensi (antineoplastiþni agensi) ukljuþuju: alkilirajuće agense, antimetabolite, prirodne proizvode i
2
njihove derivate, hormone i steroide (ukljuþujući sintetiþke analoge) i sintetike. Primeri jedinjenja u okviru ovih klasa su dati u nastavku.
Lipidne ýestice
[0079] Opis pruža lipidne þestice koje sadrže jedan ili više terapeutskih mRNK molekula inkapsuliranih unutar lipidnih þestica.
[0080] mRNK može biti potpuno inkapsulirana unutar lipidnog dela lipidnih þestica tako da je mRNK u lipidnoj þestici otporna u vodenom rastvoru na degradaciju nukleaze. U drugim izvođenjima, lipidne þestice, opisane ovde, mogu biti suštinski netoksiþne za sisare, kao što su ljudi. Lipidne þestice obiþno imaju srednji preþnik od 30 nm do 150 nm, od 40 nm do 150 nm, od 50 nm do 150 nm, od 60 nm do 130 nm, od 70 nm do 110 run, ili od 070 nm . Lipidne þestice takođe obiþno imaju odnos lipid:RNK (odnos masa/mase) od 1:1 do 100:1, od 1:1 do 50:1, od 2:1 do 25,1, od 3:1 do 20: 1, od 5.T do 15:1, ili od 5:1 do 10,1, ili od 10:1 do 14:1, ili od 9:1 do 20:1. Lipidne þestice mogu imati odnos lipid:RNK (odnos masa/mase) od 12:1. Lipidne þestice mogu imati odnos lipid:mRNK (odnos masa/mase) 13:1.
[0081] Lipidne þestice mogu sadržati mRNK, katjonski lipid (npr., jedan ili više katjonskih lipida ili njihovih soli opisanih ovde), fosfolipid i konjugovani lipid koji inhibira agregaciju þestica (npr., jedan ili više konjugata PEG-lipida). Lipidne þestice takođe mogu ukljuþivati holesterol. Lipidne þestice mogu sadržati najmanje 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ili više mRNK koje eksprimiraju jedan ili više polipeptida.
[0082] U þesticama nukleinska kiselina-lipid mRNK može biti potpuno inkapsulirana unutar lipidnog dela þestice, þime se nukleinska kiselina štiti od razgradnje nukleaze. Lipidna þestica koja sadrži mRNK može biti potpuno inkapsulirana unutar lipidnog dela þestice, þime se nukleinska kiselina štiti od razgradnje nukleaze. U određenim sluþajevima, mRNK u lipidnoj þestici nije znaþajno degradirana nakon izlaganja þestice nukleazi na 37°C u trajanju od najmanje 20, 30, 45 ili 60 minuta. U nekim drugim sluþajevima, mRNK u lipidnoj þestici nije znaþajno degradirana nakon inkubacije þestice u serumu na 37°C u trajanju od najmanje 30, 45 ili 60 minuta ili najmanje 2, 3, 4, 5, 6, 7 , 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34 ili 36 sati. mRNK može biti u kompleksu sa lipidnim delom þestice. Jedna od prednosti formulacija ovog otkrića je da su kompozicije þestica nukleinske kiseline i lipida u suštini netoksiþne za sisare kao što su ljudi.
[0083] "Potpuno inkapsulirana" znaþi da nukleinska kiselina (npr., mRNK) u þesticama nukleinske kiseline-lipida nije znaþajno degradirana nakon izlaganja serumu ili testu nukleaze koji bi znaþajno razgradio slobodnu RNK. Kada je potpuno inkapsulirana, poželjno manje od 25% nukleinska kiselina u þestici se razgrađuje u tretmanu koji bi normalno razgradio 100% slobodne nukleinske kiseline, poželjnije manje od 10%, a najpoželjnije manje od 5% nukleinske kiseline u þestici je razgrađeno. "Potpuno
2
inkapsulirano" takođe znaþi da se þestice nukleinske kiseline i lipida ne razlažu brzo na svoje sastavne delove nakon primene in vivo.
[0084] U kontekstu nukleinskih kiselina, potpuna inkapsulacija se može odrediti izvođenjem testa iskljuþivanja fluorescentne boje nepropustljive za membranu, koji koristi boju koja ima pojaþanu fluorescenciju kada je povezana sa nukleinskom kiselinom.
Inkapsulacija se određuje dodavanjem boje lipozomalnoj formulaciji, merenjem rezultujuće fluorescencije i upoređivanjem sa fluorescencijom primećenom dodavanjem male koliþine nejonskog deterdženta. Poremećaj lipozomalnog dvosloja posredovan deterdžentom oslobađa inkapsuliranu nukleinsku kiselinu, omogućavajući joj da stupi u interakciju sa bojom nepropusnom za membranu. Inkapsulacija nukleinske kiseline može se izraþunati kao E = (Io- I)/Io, gde se/i Ioodnosi na intenzitet fluorescencije pre i posle dodavanja deterdženta.
[0085] Takođe je opisana kompozicija þestica nukleinske kiseline i lipida koja sadrži više þestica nukleinske kiseline i lipida.
[0086] Lipidna þestica sadrži mRNK koja je u potpunosti inkapsulirana unutar lipidnog dela þestica, tako da od 30% do 100%, od 40% do 100%, od 50% do 100%, od 60% do 100%, od 70% do 100%, od 80% do 100%, od 90% do 100%, od 30% do 95%, od 40% do 95%, od 50% do 95%, od 60% do 95%, od 70% do 95%, od 80% do 95%, od 85% do 95%, od 90% do 95%, od 30% do 90%, od 40% do 90%, od 50% do 90%, od 60% do 90 %, od 70% do 90%, od 80% do 90%, ili najmanje 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80 %, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ili 99% (ili bilo koji njihov deo ili opseg) þestica imaju mRNK u njemu inkapsuliran.
[0087] U zavisnosti od nameravane upotrebe lipidnih þestica, proporcije komponenti mogu da variraju i efikasnost isporuke određene formulacije se može meriti korišćenjem testova poznatih u tehnici.
Katjonski lipidi
[0088] Opis ukljuþuje sintezu određenih katjonskih lipidnih jedinjenja. Jedinjenja su posebno pogodna za isporuku polinukleotida u ćelije i tkiva, kao što je pokazano u narednim odeljcima. Ovde opisano jedinjenje lipomakrocikla može se koristiti u druge svrhe, kao i, na primer, primaoci i aditivi.
[0089] Sintetiþke metode za katjonska lipidna jedinjenja se mogu sintetizovati sa veštinama u struci. Struþnjak će prepoznati druge metode za proizvodnju ovih jedinjenja, kao i za proizvodnju drugih jedinjenja iz opisa.
[0090] Katjonska lipidna jedinjenja se mogu kombinovati sa agensom da bi se formirale mikroþestice, nanoþestice, lipozomi ili micele. Agens koji treba da isporuþi þestice, lipozomi ili micele može biti u obliku gasa, teþnosti ili þvrste supstance, a agens može biti
2
polinukleotid, protein, peptid ili mali molekul. Jedinjenja lipomakrociklusa mogu se kombinovati sa drugim katjonskim lipidnim jedinjenjima, polimerima (sintetiþkim ili prirodnim), surfaktantima, holesterolom, ugljenim hidratima, proteinima ili lipidima, da bi se formirale þestice. Ove þestice se zatim mogu opciono kombinovati sa farmaceutskim ekscipijensom da bi se formirala farmaceutska kompozicija.
[0091] Predmetni opis daje nova katjonska lipidna jedinjenja i sisteme za isporuku leka zasnovane na upotrebi takvih katjonskih lipidnih jedinjenja. Sistem se može koristiti u oblasti farmaceutske/isporuke leka za isporuku polinukleotida, proteina, malih molekula, peptida, antigena ili dražeja, pacijentu, tkivu, organu ili ćeliji. Ova nova jedinjenja se takođe mogu koristiti kao materijali za premazivanje, aditivi, ekscipijenti, materijali ili bioinženjering.
[0092] Katjonska lipidna jedinjenja ovog opisa obezbeđuju nekoliko razliþitih upotreba u naþinu isporuke lekova. Deo katjonskih lipidnih jedinjenja koji sadrži amin može se koristiti za stvaranje kompleksa polinukleotida, þime se poboljšava isporuka polinukleotida i spreþava njihova degradacija. Katjonska lipidna jedinjenja se takođe mogu koristiti u formiranju pikoþestica, nanoþestica, mikroþestica, lipozoma i micela koji sadrže agens koji se isporuþuje. Poželjno je da su katjonska lipidna jedinjenja biokompatibilna i biorazgradiva, a formirane þestice su takođe biorazgradive i biokompatibilne i mogu se koristiti da obezbede kontrolisano, produženo oslobađanje agensa koji se isporuþuje. Ove i njihove odgovarajuće þestice takođe mogu reagovati na promene pH s obzirom da su protonirane pri nižem pH. Oni takođe mogu delovati kao protonski sunđeri u isporuci agensa u ćeliju da izazovu lizu endozoma.
[0093] Katjonska lipidna jedinjenja mogu biti relativno necitotoksiþna. Katjonska lipidna jedinjenja mogu biti biokompatibilna i biorazgradiva. Katjonski lipid može imati pKau opsegu od približno 5.5 do približno 7.5, poželjnije između približno 6.0 i približno 7.0. Može biti dizajniran tako da ima željeni pKaizmeđu približno 3.0 i približno 9.0, ili između približno 5.0 i približno 8.0. Ovde opisana katjonska lipidna jedinjenja su posebno privlaþna za isporuku lekova iz nekoliko razloga: sadrže amino grupe za interakciju sa DNK, RNK, drugim polinukleotidima i drugim negativno naelektrisanim agensima, za puferovanje pH, za izazivanje endo-osmolize, za zaštitu agens koji se isporuþuje, mogu se sintetizovati iz komercijalno dostupnih poþetnih materijala; i/ili su osetljivi na pH i mogu se konstruisati sa željenim pKa.
[0094] Kompozicija koja sadrži katjonsko lipidno jedinjenje može biti 30-70% katjonskog lipida, 0-60% holesterola, 0-30% fosfolipida i 1-10% polietilen glikola (PEG). Poželjno, kompozicija je 30-40% katjonskog lipida, 40-50% holesterola i 10-20% PEG. U drugim poželjnim realizacijama, kompozicija je 50-75% katjonskog lipida, 20-40% holesterola i 5-10% fosfolipida i 1-10% PEG. Kompozicija može da sadrži 60-70%
2
katjonskog lipidnog jedinjenja, 25-35% holesterola i 5-10% PEG. Kompozicija može da sadrži do 90% katjonskog lipidnog jedinjenja i 2-15% pomoćnog lipida.
[0095] Formulacija može biti formulacija lipidnih þestica, na primer koja sadrži 8-30% jedinjenja, 5-30% pomoćnog lipida i 0-20% holesterola; 4-25% katjonski lipid, 4-25% pomoćni lipid, 2-25% holesterol, 10-35% holesterol-PEG i 5% holesterol-amin; ili 2-30% katjonski lipid, 2-30% pomoćni lipid, 1-15% holesterol, 2-35% holesterol-PEG i 1-20% holesterol-amin; ili do 90% katjonskog lipida i 2-10% pomoćnih lipida, ili þak 100% katjonskog lipida.
Ne-katjonski Lipidi
[0096] Ne-katjonski lipidi koji se koriste u lipidnim þesticama mogu biti bilo koji od niza neutralnih nenaelektrisanih, cviterjonskih ili anjonskih lipida koji mogu da proizvedu stabilan kompleks.
[0097] Neograniþavajući primeri nekatjonskih lipida ukljuþuju fosfolipide kao što su lecitin, fosfatidiletanolamin, lizolecitin, lizofosfatidiletanolamin, fosfatidilserin, fosfatidilinositol, sfingomielin, egg sfingomielin (ESM), cefalin, kardiolipin, fosfatidna kiselina, cerebrozidi, dicetilfosfat, distearoil fosfatidilholin (DSPC), dioleoilfosfatidilholin (DOPC), dipalmitoilfosfatidil holin (DPPC), dioleoilfosfatidilglicerol (DOPG), dipalmitoil fosfatidilglicerol (DPPG), dioleoilfosfatidilemanolamin (DOPE), palmitoiloleoil-fosfatidilholin (POPC), palraitoiloleoil-fosfatidilemanolamin (POPE), palmitoiloleiol-fosfatidil glicerol (POPG), dioleoilfosfatidiletanolamin 4-(N-maleimidometil)-cikloheksan-1-karboksilat (DOPE-mal), dipalmitoil-fosfatidil etanolamin (DPPE), dimiristoil-fosfatidilemanolamin (DMPE), distearoilfosfatidilemanolamin (DSPE), monometil-fosfatidilemanolamin, dimetil-fosfatidiletanolamin, dielaidoil-fosfatidiletanolamin (DEPE), stearoiloleoil-fosfatidiletanolamin (SOPE), lizofosfatidilholine, dilinoleoilfosfatidilholin, i njihove smeše. Drugi diacilfosfatidilholin i diacilfosfatidiletanolamin fosfofidi se takođe mogu koristiti. Acil grupe u ovim lipidima su poželjno acil grupe izvedene iz masnih kiselina koje imaju ɋ10-C24lance ugljenika, npr., lauroil, miristoil, palmitoil, stearoil, ili oleoil.
[0098] Dodatni primeri nekatjonskih lipida ukljuþuju sterole kao što je holesterol i njihove derivate. Neograniþavajući primeri derivata holesterola ukljuþuju polarne analoge kao što su 5Į-holestanol, 5Į-koprostanol, holesteril-(2'-hidroksi)-etil etar, holesteril-(4'-hidroksi)-butiI etar, i 6-ketoholestanoI; ne-polarni analozi kao što su 5Į-holestan, holestenon, Į-holestanon, 5Į-holestanon, i holesteril dekanoat; i nihove smeše. U poželjnom izvođenju, derivat holesterola je polarni analog kao što je holesteril-(4'-hidroksi)-butil etar.
[0099] Nekatjonski lipid prisutan u lipidnim þesticama može da sadrži ili se sastoji od mešavine jednog ili više fosfolipida i holesterola ili njihovog derivata. Nekatjonski lipid prisutan u lipidnim þesticama može sadržati ili se sastojati od jednog ili više fosfolipida, npr.
formulacija lipidnih þestica bez holesterola. Nekatjonski lipid prisutan u lipidnim þesticama može sadržati ili se sastojati od holesterola ili njegovog derivata, npr., formulacija lipidnih þestica bez fosfolipida.
[0100] Drugi primeri nekatjonskih lipida obuhvataju lipide koji ne sadrže fosfore kao što su, na primer, stearilamin, dodecilamin, heksadecilamin, acetil palmitat, glicerolricinoleat, heksadecil stereat, izopropil miristat, amfoterni akrilni polimeri, trietansulfat-sulfat-sulfattrietanil-akiselmi trietanoalkil, dioktadecildimetil amonijum bromid, ceramid i sfingomijelin.
[0101] Nekatjonski lipid može da sadrži od 10 mol % do 60 mol %, od 20 mol % do 55 mol %, od 20 mol % do 45 mol %, 20 mol % do 40 mol %, od 25 mol % do 50 mol %, od 25 mol % do 45 mol %, od 30 mol % do 50 mol %, od 30 mol % do 45 mol %, od 30 mol % do 40 mol %, od 35 mol % do 45 mol %, od 37 mol % do 42 mol %, ili 35 mol %, 36 mol %, 37 mol %, 38 mol %, 39 mol %, 40 mol %, 41 mol %, 42 mol %, 43 mol %, 44 mol %, ili 45 mol % (ili bilo koji njegov deo ili opseg) ukupnog lipida prisutnog u þestici.
[0102] Tamo gde lipidne þestice sadrže mešavinu fosfolipida i holesterola ili derivate holesterola, smeša može sadržati do 40 mol %, 45 mol %, 50 mol %, 55 mol % ili 60 mol % ukupnog lipida prisutnog u þestici.
[0103] Fosfolipidna komponenta u smeši može da sadrži od 2 mol % do 20 mol %, od 2 mol % do 15 mol %, od 2 mol % do 12 mol %, od 4 mol % do 15 mol % ili od 4 mol % do 10 mol% (ili bilo koja njegova frakcija ili opseg) ukupnog lipida prisutnog u þestici.
Fosfolipidna komponenta u smeši može da sadrži od 5 mol % do 10 mol %, od 5 mol % do 9 mol %, od 5 mol % do 8 mol %, od 6 mol % do 9 mol %, od 6 mol % do 8 mol %, ili 5 mol %, 6 mol %, 7 mol %, 8 mol %, 9 mol % ili 10 mol % (ili bilo koja njegova frakcija ili opseg) ukupnog lipida prisutnog u þestici.
[0104] Komponenta holesterola u smeši može da sadrži od 25 mol % do 45 mol %, od 25 mol % do 40 mol %, od 30 mol % do 45 mol %, od 30 mol % do 40 mol %, od 27 mol % do 37 mol %, od 25 mol % do 30 mol %, ili od 35 mol % do 40 mol % (ili bilo koja njegova frakcija ili opseg) ukupnog lipida prisutnog u þestici. Komponenta holesterola u smeši može da sadrži od 25 mol % do 35 mol %, od 27 mol % do 35 mol %, od 29 mol % do 35 mol %, od 30 mol % do 35 mol %, od 30 mol % do 34 mol %, od 31 mol % do 33 mol %, ili 30 mol %, 31 mol %, 32 mol %, 33 mol %, 34 mol % ili 35 mol % (ili bilo koja njegova frakcija ili opseg) ukupnog lipida prisutna u þestici.
[0105] Tamo gde su þestice lipida bez fosfolipida, holesterol ili njegov derivat može sadržati do 25 mol %, 30 mol %, 35 mol %, 40 mol %, 45 mol %, 50 mol %, 55 mol %, ili 60 mol % ukupnog lipida prisutnog u þestici.
[0106] Holesterol ili njegov derivat u formulaciji lipidnih þestica bez fosfolipida može sadržati od 25 mol % do 45 mol %, od 25 mol % do 40 mol %, od 30 mol % do 45 mol %, od 30 mol % do 40 mol % , od 31 mol % do 39 mol %, od 32 mol % do 38 mol %, od 33 mol %
1
do 37 mol %, od 35 mol % do 45 mol %, od 30 mol % do 35 mol %, od 35 mol % do 40 mol %, ili 30 mol %, 31 mol %, 32 mol %, 33 mol %, 34 mol %, 35 mol %, 36 mol %, 37 mol %, 38 mol %, 39 mol %, ili 40 mol % (ili bilo koji njegov deo ili opseg) ukupnog lipida prisutnog u þestici.
[0107] Nekatjonski lipid može da sadrži od 5 mol % do 90 mol %, od 10 mol % do 85 mol %, od 20 mol % do 80 mol %, 10 mol % (npr. samo fosfolipid) ili 60 mol % (npr. , fosfolipidi i holesterol ili njihov derivat) (ili bilo koji njihov deo ili opseg) ukupnog lipida prisutnog u þestici.
[0108] Procenat nekatjonskog lipida prisutnog u lipidnim þesticama je ciljana koliþina, i da stvarna koliþina nekatjonskog lipida prisutnog u formulaciji može da varira, na primer, za ± 5 mol %.
Lipidni Konjugati
[0109] Pored katjonskih, lipidne þestice opisane ovde mogu dalje da sadrže lipidni konjugat. Konjugovani lipid je koristan po tome što spreþava agregaciju þestica. Pogodni konjugovani lipidi ukljuþuju, ali nisu ograniþeni, katjonski polimer-lipidne konjugate, i njihove smeše.
[0110] Poželjno, lipidni konjugat je PEG-lipid. Primeri PEG-lipida ukljuþuju, ali nisu ograniþeni na, PEG spojen sa dialkiloksipropila (PEG-DAA), PEG spojen sa diacilglicerolom (PEG-DAG), PEG spojen sa fosfolipidima kao što je fosfatidiletan (PEG-PE), PEG konjugovan sa ceramidima, PEG konjugovan sa holesterolom ili njegovim derivatom i njihove mešavine.
[0111] PEG je linearni, u vodi rastvorljiv polimer etilen PEG ponavljajućih jedinica sa dve krajnje hidroksilne grupe. PEG se klasifikuju prema njihovoj molekulskoj težini; i ukljuþuju sledeće: monometoksipolietilen glikol (MePEG-OH), monometoksipolietilen glikolsukcinat (MePEG-S), monometoksipolietilen glikol-sukcinimidil sukcinat (MePEG-S-NHS), monometoksipolietilen glikol-amin (MePEG-NH2), monometoksipolietilen glikol-tresilat (MePEG-TRES), monometoksipolietilen glikol-imidazolil-karbonil (MePEG-IM), kao i takva jedinjenja koja sadrže krajnju hidroksil grupu umesto krajnje metoksi grupe (npr., HO-PEG-S, HO-PEG-S-NHS, HO-PEG-NH2).
[0112] PEG deo konjugata PEG-lipida koji je ovde opisan može da sadrži proseþnu molekulsku težinu u rasponu od 550 daltona do 10,000 daltona. U određenim sluþajevima, PEG grupa ima proseþnu molekulsku težinu od 750 daltona do 5,000 daltona (npr. od 1,000 daltona do 5,000 daltona, od 1,500 daltona do 3,000 daltona, od 750 daltona do 3,000 daltona, do 750 daltona do 2,000 daltona). Poželjno, PEG grupa ima proseþnu molekulsku težinu od 2,000 daltona ili 750 daltona.
2
[0113] U određenim sluþajevima, PEG može biti opciono supstituisan sa alkil, alkoksi, acil ili aril grupom. PEG može biti konjugovan direktno sa lipidom ili može biti vezan za lipid preko veznog dela. Može se koristiti bilo koja vezna grupa pogodna za kuplovanje PEG-a sa lipidom, ukljuþujući, na primer, vezne delove koji ne sadrže estar i vezne delove koji sadrže estar. U poželjnom izvođenju, vezni deo je vezni deo koji ne sadrži estar.
Pogodni vezni delovi koji ne sadrže estar ukljuþuju, ali nisu ograniþeni na, amido (-C(O)NH-), amino (-NR-), karbonil (-C(O)-), karbamat (-NHC(O)O-), urea (-NHC(O)NH-), disulfid (-S-S-), etar (-O-), sukcinil (- (O)CCH2CH2C(O)-), sukcinamidil (-NHC(O)CH2CH2C(O)NH-), etar, disulfid, kao i njihove kombinacije (kao što je linker koji sadrži i karbamatni vezni deo i amido vezni deo). Poželjno, karbamatni linker se koristi za spajanje PEG-a sa lipidom.
[0114] Vezni deo koji sadrži estar može se koristiti za spajanje PEG-a sa lipidom. Pogodni vezni delovi koji sadrže estar ukljuþuju, npr., karbonat (-OC(O)O-), sukcinoil, fosfatne estre (-O-(O)POH-O-), sulfonatne estre i njihove kombinacije.
[0115] Fosfatidiletanolamini koji imaju razliþite grupe acil lanaca razliþitih dužina lanca i stepena zasićenosti mogu biti konjugovani sa PEG da bi se formirao lipidni konjugat. Takvi fosfatidiletanolamini su komercijalno dostupni, ili mogu biti izolovani ili sintetizovani korišćenjem konvencionalnih tehnika poznatih struþnjacima u ovoj oblasti. Fosfatidil etanolamini koji sadrže zasićene ili nezasićene masne kiseline sa dužinama ugljeniþnog lanca u opsegu od C10do C20su poželjni. Mogu se koristiti i fosfatidiletanolamini sa mono- ili di-nezasićenim masnim kiselinama i mešavine zasićenih i nezasićenih masnih kiselina. Pogodni fosfatidiletanolamini ukljuþuju, ali nisu ograniþeni na, dimiristoil-fosfatidiletanolamin (DMPE), dipalmitoil-fosfatidiletanolamin (DPPE), dioleoil-fosfatidiletanolamin (DOPE), i distearoil-fosfatidiletanolamin (DSPE).
[0116] Izraz "diacilglicerol" ili "DAG" obuhvata jedinjenje koje ima 2 masna acilna lanca, R<1>i R<2>, od kojih oba imaju nezavisno između 2 i 30 ugljenika vezanih za 1- i 2-položaj glicerola putem estarskih veza. Acil grupe mogu biti zasićene ili imaju razliþite stepene nezasićenosti. Pogodne acil grupe ukljuþuju, ali nisu ograniþene na, lauroil (C12), miristoil (C14), palmitoil (ɋ16), stearoil (C18), i ikozoil (C20). U poželjnim izvođenjima, R<1>and R<2>su isti, odn., R<1>i R<2>su oba miristoil (odn., dimiristoil), R<1>i R<2>su oba stearoil (odn., distearoil).
[0117] Izraz "dialkiloksipropil" ili "DAA" ukljuþuje jedinjenje koje ima 2 alkil lanca, R i R, od kojih oba imaju nezavisno između 2 i 30 ugljenika. Alkil grupe mogu biti zasićene ili imaju razliþite stepene nezasićenosti.
[0118] Poželjno, the PEG-DAA konjugat je PEG-dideciloksipropil (C10) konjugat, PEG-dilauriloksipropil (C12) konjugat, PEG-dimiristiloksipropil (C14) konjugat, PEG-dipalmitiloksipropil (C16) konjugat, ili PEG-disteariloksipropil (C18) konjugat. PEG poželjno ima proseþnu molekulsku težinu od 750 ili 2,000 daltona. Poželjno, terminalna hidroksilna grupa PEG je supstituisana sa metil grupom.
[0119] Pored prethodno navedenog, drugi hidrofilni polimeri se mogu koristiti umesto PEG. Primeri pogodnih polimera koji se mogu koristiti umesto PEG ukljuþuju, ali nisu ograniþeni na, polivinilpirodon, polimetiloksazolin, polietiloksazolin, polihidroksipropil metakrilamid, polimetakrilamid i polidimetilakrilamid, polimleþnu kiselinu, poliglikolnu kiselinu, i derivatizovane celuloze kao što je hidroksimetilceluloza ili hidroksietilceluloza.
[0120] Lipidni konjugat (npr., PEG-lipid) može da sadrži od 0,1 mol % do 2 mol %, od 0,5 mol % do 2 mol %, od 1 mol % do 2 mol %, od 0,6 mol % do 1,9 mol %, od 0,7 mol % do 1,8 mol %, od 0,8 mol % do 1,7 mol %, od 0,9 mol % do 1,6 mol %, od 0,9 mol % do 1,8 mol %, od 1 mol % do 1,8 mol %, od 1 mol % do 1,7 mol %, od 1,2 mol % do 1,8 mol %, od 1,2 mol % do 1,7 mol %, od 1,3 mol % do 1,6 mol % ili od 1,4 mol % do 1,5 mol % (ili bilo koja njegova frakcija ili opseg) od ukupne koliþine lipid prisutan u þestici. Lipidni konjugat (npr. PEG-lipid) može da sadrži od 0 mol % do 20 mol %, od 0,5 mol % do 20 mol %, od 2 mol % do 20 mol %, od 1,5 mol % do 18 mol %, od 2 mol % do 15 mol %, od 4 mol % do 15 mol %, od 2 mol % do 12 mol %, od 5 mol % do 12 mol % ili 2 mol % (ili bilo koja njegova frakcija ili opseg) od ukupne koliþine lipida prisutnog u þestici.
[0121] Lipidni konjugat (npr., PEG-lipid) može sadržati od 4 mol % do 10 mol %, od 5 mol % do 10 mol %, od 5 mol % do 9 mol %, od 5 mol % do 8 mol %, od 6 mol % mol % do 9 mol %, od 6 mol % do 8 mol %, ili 5 mol %, 6 mol %, 7 mol %, 8 mol %, 9 mol % ili 10 mol % (ili bilo koja njegova frakcija ili opseg u njima) ukupnog lipida prisutnog u þestici.
[0122] Procenat lipidnog konjugata (npr., PEG-lipida) prisutnog u lipidnim þesticama pronalaska je ciljana koliþina, a stvarna koliþina lipidnog konjugata prisutnog u formulaciji može da varira, na primer, za ± 2 mol %. Struþnjak u ovoj oblasti će shvatiti da koncentracija lipidnog konjugata može da varira u zavisnosti od upotrebljenog lipidnog konjugata i brzine kojom će lipidna þestica postati fuzogena.
[0123] Kontrolisanjem kompozicije i koncentracije lipidnog konjugata, može se kontrolisati brzina kojom se lipidni konjugat razmenjuje iz lipidnih þestica i, zauzvrat, brzina kojom lipidna þestica postaje fuzogena. Pored toga, druge varijable, ukljuþujući, na primer, pH, temperaturu ili jonsku snagu, mogu da se koriste za variranje i/ili kontrolu brzine kojom lipidna þestica postaje fuzogeni. Druge metode koje se mogu koristiti za kontrolu brzine kojom lipidna þestica postaje fuzogena postaće oþigledne struþnjacima nakon þitanja ovog otkrića. Takođe, kontrolisanjem kompozicije i koncentracije lipidnog konjugata, može se kontrolisati veliþina þestica lipida.
Kompozicije i Formulacije za Primenu
[0124] Kompozicije nukleinske kiseline i lipida iz ovog otkrića mogu se primenjivati razliþitim putevima, na primer, da bi se izvršila sistemska isporuka intravenskim, parenteralnim, intraperitonealnim ili lokalnim putevima. SiRNK može biti isporuþena
4
intracelularno, na primer, u ćelije ciljanog tkiva kao što su pluća ili jetra, ili u zapaljena tkiva. Ovo otkriće obezbeđuje metod za isporuku siRNK in vivo. Kompozicija nukleinske kiseline i lipida se može davati subjektu intravenozno, subkutano ili intraperitonealno. U nekim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje metode za in vivo isporuku interferirajuće RNK u pluća subjekta sisara.
[0125] Ovaj pronalazak obezbeđuje metod leþenja bolesti ili poremećaja kod sisara. Terapeutski efikasna koliþina kompozicije ovog otkrića koja sadrži nukleinski, katjonski lipid, amfifil, fosfolipid, holesterol i PEG-vezan holesterol može se davati subjektu koji ima bolest ili poremećaj povezan sa ekspresijom ili prekomernom ekspresijom gena koji se kompozicijom može smanjiti, umanjiti, regulisati smanjenjem, ili utišati.
[0126] Kompozicije i metode pronalaska se mogu davati subjektima razliþitim naþinima davanja na sluzokoži, ukljuþujući oralno, rektalno, vaginalno, intranazalno, intrapulmonalno, transdermalno ili dermalno davanje, ili lokalno davanje u oþi, uši, kožu, ili druge površine sluzokože. U nekim aspektima ovog otkrića, sloj tkiva sluzokože ukljuþuje sloj epitelnih ćelija. Epitelna ćelija može biti plućna, trahealna, bronhijalna, alveolarna, nazalna, bukalna, epidermalna ili gastrointestinalna. Kompozicije ovog otkrića mogu se davati korišćenjem konvencionalnih aktuatora kao što su mehaniþki uređaji za raspršivanje, kao i pod pritiskom, elektriþno aktivirani ili drugi tipovi aktuatora.
[0127] Kompozicije ovog pronalaska mogu se davati u vodenom rastvoru kao sprej za nos ili plućni sprej i mogu se davati u obliku spreja razliþitim metodama poznatim struþnjacima u ovoj oblasti. Plućno davanje kompozicije ovog otkrića je postignuto davanjem kompozicije u obliku kapi, þestica ili spreja, koji mogu biti, na primer, aerosolno raspršeni, atomizovani ili raspršeni. ýestice kompozicije, spreja, ili aerosola mogu biti u teþnom ili þvrstom obliku. Poželjni sistemi za doziranje teþnosti kao spreja za nos su otkriveni u US patentu br.4,511,069. Takve formulacije se mogu pogodno pripremiti rastvaranjem kompozicija prema ovom pronalasku u vodi da bi se proizveo vodeni rastvor, i uþinio navedeni rastvor sterilnim. Formulacije mogu biti predstavljene u kontejnerima za više doza, na primer u zapeþDćenom sistemu za doziranje otkrivenom u US patentu br.4,511,069. Drugi pogodni sistemi za isporuku spreja za nos su opisani u Transdermal Systemic Medication, Y. W. Chien ed., Elsevier Publishers, New York, 1985; i u U.S. Pat br.
4,778,810. Dodatni oblici za isporuku aerosola mogu ukljuþivati, na primer, komprimovane vazdušne, mlazne, ultrazvuþne i piezoelektriþne raspršivaþe, koji isporuþuju biološki aktivni agens rastvoren ili suspendovan u farmaceutskom rastvaraþu, na primer, vodi, etanolu ili njihovim smešama.
[0128] Rastvori za nazalni i plućni sprej predmetnog pronalaska tipiþno sadrže lek ili lek koji treba da se isporuþi, opciono formulisan sa površinski aktivnim agensom, kao što je nejonski surfaktant (npr. polisorbat-80), i jedan ili više pufera. U nekim izvođenjima predmetnog pronalaska, rastvor spreja za nos dalje sadrži potisni gas. pH rastvora spreja za nos može biti od pH 6.8 do 7.2. Farmaceutski rastvaraþi koji se koriste mogu takođe biti slabo kiseli vodeni pufer pH 4-6. Druge komponente se mogu dodati da bi se poboljšala ili održala hemijska stabilnost, ukljuþujući konzervanse, surfaktante, disperzante ili gasove.
[0129] U nekim izvođenjima, ovaj pronalazak je farmaceutski proizvod koji ukljuþuje rastvor koji sadrži kompoziciju ovog pronalaska i aktuator za plućni, mukozni ili intranazalni sprej ili aerosol.
[0130] Dozni oblik kompozicije ovog pronalaska može biti teþan, u obliku kapljica ili emulzije, ili u obliku aerosola.
[0131] Dozni oblik kompozicije ovog pronalaska može biti þvrst supstanca, koji se može rekonstituisati u teþnost pre primene. ývrsta supstanca se može primeniti kao prah. ývrsta supstanca može biti u obliku kapsule, tablete ili gela.
[0132] Da bi se formulisale kompozicije za plućno oslobađanje u okviru predmetnog otkrića, biološki aktivni agens se može kombinovati sa razliþitim farmaceutski prihvatljivim aditivima, kao i bazom ili nosaþem za disperziju aktivnog(ih) agensa(a). Primeri aditiva ukljuþuju agense za kontrolu pH kao što su arginin, natrijum hidroksid, glicin, hlorovodoniþna kiselina, limunska kiselina i njihove smeše. Ostali aditivi ukljuþuju lokalne anestetike (npr., benzil alkohol), sredstva za izotonizaciju (npr., natrijum hlorid, manitol, sorbitol), inhibitore adsorpcije (npr., Tween 80), sredstva za poboljšanje rastvorljivosti (npr., ciklodekstrini i njihovi derivati), stabilizatori (npr., serumski albumin) i redukcioni agensi (npr., glutation). Kada je kompozicija za mukozalno davanje teþna, toniþnost formulacije, merena u odnosu na toniþnost od 0.9% (t/zap) fiziološkog slanog rastvora uzetog kao jedinica, obiþno se podešava na vrednost pri kojoj nema znaþajnog, ireverzibilnog oštećenja tkiva će biti indukovana u sluzokožu na mestu primene. Uopšteno, toniþnost rastvora se podešava na vrednost od 1/3 do 3, obiþno od 1/2 do 2, a najþešće od 3/4 do 1.7.
[0133] Biološki aktivni agens može biti dispergovan u bazi ili nosaþu, koji može da sadrži hidrofilno jedinjenje koje ima kapacitet da disperguje aktivni agens i bilo koje željene aditive. Baza se može izabrati iz širokog spektra pogodnih nosaþa, ukljuþujući, ali ne ograniþavajući se na, kopolimere polikarboksilnih kiselina ili njihove soli, karboksilne anhidride (npr., anhidrid maleinske kiseline) sa drugim monomerima (npr., metil(met)akrilat, akrilna kiselina, itd.), hidrofilni vinil polimeri kao što su polivinil acetat, polivinil alkohol, polivinilpirolidon, derivati celuloze kao što su hidroksimetilceluloza, hidroksipropilceluloza, itd., i prirodni polimeri kao što su hitozan, kolagen, natrijum alginat, želatin, hijalurnska kiselina, i njihove netoksiþne soli metala. ýesto je biorazgradivi polimer biran kao baza ili nosaþ, na primer, polimleþna kiselina, poli (mleþna kiselina-glikolna kiselina) kopolimer, polihidroksibuterna kiselina, poli(hidroksibuterna kiselina-glikolna kiselina) kopolimer, i njihove smeše. Alternativno ili dodatno, sintetiþki estri masnih kiselina kao što su estri poliglicerina masnih kiselina, estri saharoze masnih kiselina, itd., mogu se koristiti kao nosaþi. Hidrofilni polimeri i drugi nosaþi mogu se koristiti sami ili u kombinaciji, a poboljšani strukturni integritet može se dati nosaþu delimiþnom kristalizacijom, jonskim vezivanjem, umrežavanjem i sliþno. Nosaþ se može obezbediti u razliþitim oblicima, ukljuþujući teþne ili viskozne rastvore, gelove, paste, prahove, mikrosfere i filmove za direktnu primenu na nazalnu sluzokožu. Upotreba odabranog nosaþa u ovom kontekstu može dovesti do unapređenja apsorpcije biološki aktivnog agensa.
[0134] Formulacije za mukoznu, nazalnu ili plućnu isporuku mogu sadržati hidrofilno jedinjenje male molekulske težine kao baza ili ekscipijens. Takva hidrofilna jedinjenja male molekulske težine obezbeđuju prolazni medijum kroz koji aktivni agens rastvorljiv u vodi, kao što je fiziološki aktivan peptid ili protein, može da difunduje kroz bazu do površine tela gde se aktivni agens apsorbuje. Hidrofilno jedinjenje male molekulske težine opciono apsorbuje vlagu iz sluzokože ili atmosfere za davanje i rastvara aktivni peptid rastvorljiv u vodi.
Molekularna težina hidrofilnog jedinjenja male molekulske težine generalno nije veća od 10,000 i poželjno ne veća od 3,000. Primeri hidrofilnih jedinjenja male molekulske težine ukljuþuju poliolna jedinjenja, kao što su oligo-, di- i monosaharide ukljuþujući saharozu, manitol, laktozu, L-arabinozu, D-eritrozu, D-ribozu, D-ksilozu, D-manozu, D-galaktozu , laktuloza, celobioza, gentibioza, glicerin, polietilen glikol, i njihove smeše. Dalji primeri hidrofilnih jedinjenja male molekulske težine ukljuþuju N-metilpirolidon, alkohole (npr., oligovinil alkohol, etanol, etilen glikol, propilen glikol, itd.) i njihove smeše.
[0135] Kompozicije ovog pronalaska mogu alternativno sadržati kao farmaceutski prihvatljive nosaþe supstance koje su potrebne za aproksimaciju fizioloških uslova, kao što su agensi za podešavanje pH i puferovanje, agensi za podešavanje toniþnosti, i agensi za vlaženje, na primer, natrijum acetat, natrijum laktat, natrijum hlorid, kalijum hlorid, kalcijum hlorid, sorbitan monolaurat, trietanolamin oleat i njihove smeše. Za þvrste kompozicije, mogu se koristiti konvencionalni netoksiþni farmaceutski prihvatljivi nosaþi koji ukljuþuju, na primer, farmaceutske vrste manitola, laktoze, skroba, magnezijum stearata, natrijum saharina, talka, celuloze, glukoze, saharoze, magnezijum karbonata i sliþno.
[0136] Biološki aktivni agens se može primeniti u formulaciji sa vremenskim oslobađanjem, na primer u kompoziciji koja ukljuþuje polimer sa sporim oslobađanjem.
Aktivni agens se može pripremiti sa nosaþima koji će zaštititi od brzog oslobađanja, na primer nosaþem sa kontrolisanim oslobađanjem kao što je polimer, mikrokapsulirani sistem za oslobađanje ili bioadhezivni gel. Produžena isporuka aktivnog agensa, u razliþitim kompozicijama prema pronalasku, se može postići ukljuþivanjem u kompoziciju agenasa koji odlažu apsorpciju, na primer, hidrogelove aluminijum monosterata i želatina.
Primeri
Primer 1
[0138] Otkrivanje jedinjenja van obima predmetnog pronalaska je dato samo za referencu.
Primerna jedinjenja formule I su navedeni u Tabeli 1.
Tabela 1
Tabela 1 prikazuje naziv i strukturu svakog jedinjenja, njegovu molekulsku težinu, njegov pKa, i njegovu oborivu bioaktivnost (KD) u analizi opisanoj u nastavku u Primeru 19.
[0139] Primeri jedinjenja formule II i III dati su u Tabelama 2 i 3. Opet, otkrivanje jedinjenja van obima predmetnog pronalaska je dato samo za referencu.
Tabela 2
4
Tabela 3
Ċ
[0140] Primeri jedinjenja formule V dati su u Tabeli 4. Opet, otkrivanje jedinjenja van obima predmetnog pronalaska je dato samo za referencu.
Tabela 4
4
Tabela 1 prikazuje naziv i strukturu svakog jedinjenja, njegovu molekulsku težinu, njegov pKa, i njegovu oborivu bioaktivnost (KD) u analizi opisanoj u nastavku u Primeru 19.
Primer 2. Sinteza metil 8-bromooktanoata
[0141] U atmosferi N2, 8-bromooktanska kiselina je rastvorena u suvom metanolu. U kapima je dodata koncentrovana H2SO4i reakciona smeša je mešana pod refluksom tri sata.
4
[0142] Reakcija je praćena sa tanko slojnom hromatografijom do završetka.
Rastvaraþ je potpuno uklonjen pod vakuumom. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom i isprana vodom. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa etil acetatom. Ukupni organski sloj je ispran sa zasićenim rastvorom NaHCO3. Organski sloj je ponovo ispran sa vodom i na kraju ispran sa slanim rastvorom. Proizvod je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan.
Primer 3. Sinteza dimetil 8,8'-(benzanediil)dioktanoata
[0143] Suvi K2CO3je uzet i dodat suvom dimetilformamidu pod N2. Polako je dodavan benzil amin u dimetilformamidu. Metil 8-bromooktanoat rastvoren u dimetilformamidu je zatim dodat na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zagrejana do 80°C i reakcija je održavana 36 sati uz mešanje.
[0144] Reakcija je praćena tanko slojnom hromatografijom do završetka. Reakcioni proizvod je ohlađen do sobne temperature i dodata je voda. Jedinjenje je ekstrahovano sa etil acetatom. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa etil acetatom. Ukupni organski sloj je ispran sa vodom i konaþno sa slanim rastvorom. Proizvod je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan.
[0145] Reakcioni proizvod je preþišćen hromatografijom na koloni silika gela u 3% metanolu u hloroformu. Dobijeno je 44 g þistog proizvoda.
[0146] Koristeći TLC sistem od 10% metanola u hloroformu, proizvod je migrirao sa Rf: 0.8, vizuelizujući ugljenisanjem u ninhidrinu. Ukupan prinos je bio 82%. Jedinjenje je bilo svetlo braon teþnost. Struktura je potvrđena sa<1>H-NMR.
Primer 4. Sinteza dimetil 8,8'-azanediiIdioktanoata
4
[0147] Dimetil 8,8'-(benzandiil)dioktanoat je prebaþen u staklenu posudu za hidrogenizaciju, i dodat je etanol i 10% Pd/C. Reakciona smeša je mućkana u Parr-šejker aparatu ispod 50 funti po kvadratnom inþu [psi] atmosferskog pritiska H2tokom dva sata na sobnoj temperaturi.
[0148] Reakcioni proizvod je filtriran kroz filtracionu pogaþu i ispran vrućim etil acetatom. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom.
Primer 5. Sinteza dimetil 8,8'-((tercbutoksikarbonil)azanedil) dioktanoata
[0149] Dimetil 8,8'-azanediildioktanoat je prebaþen u DCM i Et3N u reakcionu masu i ohlađen na 0°C. Boc anhidrid razblažen u DCM je dodat u kapima u gornju reakciju. Nakon što je dodavanje završeno, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tri sata.
[0150] Reakcija je ugašena sa vodom i DCM sloj je odvojen. Vodena faza je ponovo ekstrahovana sa DCM i kombinovani slojevi DCM su isprani slanim rastvorom i osušeni sa Na2SO4. Posle koncentracije, sakupljeno je 40 mg sirovog jedinjenja.
[0151] Sirovi proizvod reakcije je preþišćen sa hromatografijom na koloni korišćenjem 0-12% etil acetata u heksanu. Dobijeni prinos je bio 48%. Jedan proizvod je migriran sa tanko slojnom hromatografijom u 20% etil acetatu u heksanu sa Rf od 0.5, ugljenisanjem sa ninhidrinom.
Primer 6. Sinteza 8,8'-((tercbutoksikarboniI)azanediil) dioktanske kiseline
[0152] Dimetil 8,8'-((tercbutoksikarbonil)azanediI) dioktanoat je prebaþen u THF. Dodat je 6N rastvor natrijum hidroksida na sobnoj temperaturi. Reakcija je održavana uz mešanje preko noći na sobnoj temperaturi.
4
[0153] Reakciona masa je uparena pod vakuumom na 25°C da bi se uklonio THF. Reakcioni proizvod je zakiseljen sa 5N HCl. Etil acetat je dodat u vodeni sloj. Odvojeni organski sloj je ispran vodom i vodeni sloj je ponovo ekstrahovan etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4.
Koncentrovanjem rastvora dobijeno je 18 g sirove mase.
Primer 7. Sinteza di((Z)-non-2-en-1-il) 8,8’(tercbutoksikarboniI)azanediil)
[0154] 8,8'-((tertbutoksikarbonil)azandiil) dioktanske kiseline je rastvoreno u suvom DCM. Ovom rastvoru je dodat HATU. Di-izopropil etil amin je polako dodavan u reakcionu smešu na sobnoj temperaturi. Unutrašnja temperatura je porasla na 40°C i formiran je rastvor bledo žute boje. DMAP je dodat u reakcionu smešu, a zatim rastvor cis-2-nonen-1-ola u suvom DCM. Reakcija se promenila u braon boju. Reakcija je mešana pet sati na sobnoj temperaturi.
[0155] Reakcija je proverena tanko slojnom hromatografijom do kraja. Reakcionom proizvodu je dodata voda, koji je ekstrahovan sa DCM. DCM sloj je ispran vodom, a zatim slanim rastvorom. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan kako bi se dobilo 35 g sirovog jedinjenja.
Referentni Primer 8. Sinteza ATX-001
[0156] Di((Z)-non-2-en-1-il) 8,8'((tercbutoksikarbonil)azanediil) dioktanoat (0.023 mol, 15 g) je rastvoren u suvom dihlorometanu (DCM) (200 ml). Trifluorosirćetna kiselina (TFA) je dodat na 0°C kako bi se zapoþela reakcija. Reakciona temperatura je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature tokom 30 minuta uz mešanje. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. Reakcioni proizvod je koncentrovan pod
4
vakuumom na 40°C i sirovi ostatak je razblažen sa DCM, i ispran sa 10% rastvorom NaHCO3. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani. Sakupljeni sirovi proizvod (12 grama) je rastvoren u suvom DCM (85 ml) pod gasom azota. Dodat je trifosgen i reakciona smeša je ohlađena na 0°C, a Et3N je dodat u kapima. Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. DCM rastvaraþ je uklonjen iz reakcione mase destilacijom pod N2.
Reakcioni proizvod je ohlađen na 0°C, razblažen sa DCM (50 ml), i 2-((2-(dimemilamo)etil) tio) sirćetnom kiselinom (0.039 mol, 6.4 g) i karbodiimidom (EDC HCl) (0.054 mol, 10.4 g). Reakciona smeša je zatim mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. Reakcioni proizvod je razblažen sa 0.3M rastvorom HCl (75 ml), a organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su isprani sa 10% vodenim rastvorom K2CO3(75 ml) i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Koncentracija rastvaraþa je dala sirovu masu od 10 grama. Sirovo jedinjenje je preþišćeno na koloni silika gela (100-200 mesh) korišćenjem 3% MeOH/DCM. Prinos je bio 10.5 g (68%).
Referentni Primer 9. Sinteza ATX-002
[0157] Di((Z)-non-2-en-1-il) 8,8'((tercbutoksikarbonil)azanediil) dioktanoat (13.85 mmol, 9 grams) je rastvoren u suvom DCM (150 ml). TFA je dodat na 0°C da bi se pokrenula reakcija. Reakciona temperatura je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature tokom 30 minuta uz mešanje. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. Reakcioni proizvod je koncentrovan pod vakuumom na 40°C i sirovi ostatak je razblažen sa DCM, i ispran sa 10% rastvorom NaHCO3. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani. Sakupljeni sirovi proizvod je rastvoren u suvom DCM (85 ml) pod gasom azota. Dodat je trifosgen i reakciona smeša je ohlađena na 0°C, a Et3N je dodat u kapima. Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. DCM rastvaraþ je uklonjen iz reakcione mase destilacijom pod N2. Reakcioni proizvod je ohlađen na 0°C, razblažen sa DCM (50 ml)
4
i dodat je 2-(dimetilamino)etanetiol HCI (0.063 mol, 8.3 g), a zatim Et3N (suv). Reakciona smeša je zatim mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. Reakcioni proizvod je razblažen sa 0.3M rastvorom HCl (75 ml), a organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su isprani sa 10% vodenim rastvorom K2CO3(75 ml) i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Koncentracija rastvaraþa je dala sirovu masu od 10 grama. Sirovo jedinjenje je preþišćeno na koloni silika gela (100-200 mesh) korišćenjem 3% MeOH/DCM. Prinos je bio 3.1 gram.
Referentni Primer 10. Sinteza ATX-003
[0158] Di((Z)-non-2-en-1-il) 8,8'((tercbutoksikarbonil)azanediil) dioktanoat (0.00337 mol, 2.2 g) je rastvoren u suvom DCM (20 ml). TFA je dodat na 0° C kako bi se zapoþela reakcija. Reakciona temperatura je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature tokom 30 minuta uz mešanje. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. Reakcioni proizvod je koncentrovan pod vakuumom na 40°C i sirovi ostatak je razblažen sa DCM, i ispran sa 10% rastvorom NaHCO3. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sakupljeni sirovi proizvod je rastvoren u suvom DCM (10 ml) pod gasom azota. Dodat je trifosgen (0.0182 mol, 5.4 g) i reakciona smeša je ohlađena na 0°C, a Et3N je dodat u kapima. Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. DCM rastvaraþ je uklonjen iz reakcione mase destilacijom pod N2. Reakcioni proizvod je ohlađen na 0°C, razblažen sa DCM (15 ml) i dodat je 2-(dimetilarmino)propanetiol HCI (0.0182 mol, 2.82 g), a zatim Et3N (suv). Reakciona smeša je zatim mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. Reakcioni proizvod je razblažen sa 0.3 M vodenim rastvorom HCl (20 ml), a organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su isprani sa 10% vodenim rastvorom K2CO3(50 ml) i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Koncentracija rastvaraþa je dala sirovu masu od 5 grama. Sirovo jedinjenje je preþišćeno na koloni silika gela (100-200 mesh) korišćenjem 3% MeOH/DCM. Prinos je bio 0.9 grama.
Reference Primer 11. Sinteza ATX-004
[0159] Di((Z)-non-2-en-1-il) 8,8'((tercbutoksikarbonil)azanediil) dioktanoat (0.023 mol, 15 g) je rastvoren u DCM (200 ml). TFA je dodat na 0° C kako bi se zapoþela reakcija.
Reakciona temperatura je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature tokom 30 minuta uz mešanje. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena.
Reakcioni proizvod je koncentrovan pod vakuumom na 40°C i sirovi ostatak je razblažen sa DCM, i ispran sa 10% rastvorom NaHCO3. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani. Sakupljeni sirovi proizvod, di((Z)-non-2-en-1-il) 8,8'-azanediil dioktanoat (5.853 mmola, 3.2 g) rastvoren je u suvom dimetilformamidu (DMF) pod azotom, i dodati su 2-((3-(dimetilamino)propil)tio)sirćetna kiselina (10.48 mmol, 1.85 g) i EDC HCl (14.56 mmol, 2.78 g). Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena vodom (30 ml) i razblažena sa DCM (30 ml), a organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su isprani sa 10% vodenim rastvorom K2CO3i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Sirovo jedinjenje je preþišćeno na koloni silika gela (100-200 mesh) korišćenjem 3% MeOH/DCM. Prinos je bio 1 gram (24.2%).
Referentni Primer 12. Sinteza ATX-005
[0160] Di((Z)-non-2-en-1-il) 8,8'((tercbutoksikarbonil)azanediil) dioktanoat (0.023 mol, 15 g) je rastvoren u suvom DCM (200 ml). TFA je dodat na 0°C kako bi se zapoþela reakcija. Reakciona temperatura je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature tokom 30 minuta uz mešanje. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena.
Reakcioni proizvod je koncentrovan pod vakuumom na 40°C i sirovi ostatak je razblažen sa
1
DCM, i ispran sa 10% rastvorom NaHCO3. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani. Sirovi proizvod reakcije, di((Z)-non-2-en-1-il) 8,8'-azanediil dioktanoat (5.853 mmol, 3.2 g) rastvoren je u dimetilformamidu (DMF) pod gasovitim azotom. Dodati su 2-((3-(dimetilamino)propil)tio)sirćetna kiselina (10.48 mmol, 1.85 g) i EDC HCl (14.56 mmol, 2.78 g) i reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. Reakcioni proizvod je ugašen vodom (30 ml) i razblažen sa DCM (30 ml). Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su isprani sa 10% vodenim rastvorom K2CO3(75 ml) i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Koncentracija rastvaraþa je dala sirovu masu od 5 grama. Sirovo jedinjenje je preþišćeno na koloni silika gela (100-200 mesh) korišćenjem 3% MeOH/DCM. Prinos je bio 1 gram (24.2%).
Referentni Primer 13. Sinteza ATX-006
2-((2-(dietilamino)etil)tio)sirćetna kiselina
[0161] Di((Z)-non-2-en-1-il) 8,8'((tercbutoksikarbonil)azanediil) dioktanoat je rastvoren u suvom DCM (150 ml). TFA je dodat na 0° C kako bi se zapoþela reakcija.
Reakciona temperatura je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature tokom 30 minuta uz mešanje. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena.
Reakcioni proizvod je koncentrovan pod vakuumom na 40°C i sirovi ostatak je razblažen sa DCM, i ispran sa 10% rastvorom NaHCO3. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani. Sakupljeni sirovi proizvod je rastvoren u suvom DCM (85 ml) pod gasom azota. Dodat je trifosgen i reakciona smeša je ohlađena na 0°C, a Et3N je dodat u kapima. Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. Sirovi reakcioni proizvod je rastvoren u suvom DMF u atmosferi azota, pa su dodati 2-((2-(dietilamino)etil)tio)sirćetna kiselina (3.93 mmol, 751 mg) i EDC HCl (5.45 mmol, 1.0 g). Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena vodom (3 ml) i višak DMF je uklonjen pod vakuumom na 25°C. Reakcioni proizvod je razblažen vodom i vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa DCM (20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom i osušeni preko
2
anhidrovanog Na2SO4. Koncentracija rastvaraþa je dala sirovu masu od 2 grama. Posle preþišćavanja na koloni silika gela (100-200 mesh) korišćenjem 3% MeOH/DCM, prinos je bio 1.2 grama (76%).
Referentni Primer 14. Sinteza ATX-009
[0162] Di((Z)-non-2-en-1-il) 8,8'((tercbutoksikarbonil)azanediil) dioktanoat (13.85 mmol, 9 grams) je rastvoren u suvom DCM (20 ml). TFA je dodat na 0°C kako bi se zapoþela reakcija. Reakciona temperatura je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature tokom 30 minuta uz mešanje. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. Reakcioni proizvod je koncentrovan pod vakuumom na 40°C i sirovi ostatak je razblažen sa DCM, i ispran sa 10% rastvorom NaHCO3. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su isprani rastvorom soli, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani. Di((Z)-non-2-en-1-il) 8,8'-azandiildioktanoat (0,909 mmol, 500 mg) je rastvoren u suvom DCM (20 ml) u atmosferi azota. Dodat je trifosgen i reakciona smeša je ohlađena na 0°C, a Et3N je dodat u kapima. Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. DCM rastvaraþ je uklonjen iz reakcione mase destilacijom u atmosferi azota.2-(etil(metil)amino)etan-1-tiol hidrohlorid (4.575 mmol, 715 mg) rastvoren je u DMF (7 ml) i tetnihidrofuranu (THF) (5 ml) i dodat je u kapima u suspenziju natrijum hidrida u THF na 0°C. Reakciona smeša je zatim mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. Reakcioni proizvod je razblažen sa etil acetatom i hladnom vodom. Reakcija je neutralizovana sa 5% HCl (9 ml), a organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa etil acetatom (EtOAc) (20 ml), ispran hladnom vodom i slanim rastvorom, a kombinovani organski slojevi su isprani i osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4. Koncentrovanje rastvaraþa dalo je 1 gram ili sirov proizvod. Jedinjenje je preþišćeno na koloni silika gela (100-200 mesh) korišćenjem 3% MeOH/DCM da bi se dobilo 100 mg.
Referentni Primer 15. Sinteza ATX-010
[0163] Di((Z)-non-2-en-1-il) 8,8'((tercbutoksikarbonil)azanediil) dioktanoat (3.079 mmol, 2 g) je rastvoren u suvom DCM (20 ml). TFA je dodat na 0° C kako bi se zapoþela reakcija. Reakciona temperatura je ostavljena da se polako zagreje do sobne temperature tokom 30 minuta uz mešanje. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. Reakcioni proizvod je koncentrovan pod vakuumom na 40°C i sirovi ostatak je razblažen sa DCM, i ispran sa 10% rastvorom NaHCO3. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani. Sakupljeni sirovi proizvod je rastvoren u suvom DCM (20 ml) pod gasovitim azotom. Dodat je trifosgen (14.55 mmol, 4.32 g) i reakciona smeša je ohlađena na 0°C, a Et3N je dodat u kapima. Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. DCM rastvaraþ je uklonjen iz reakcione mase destilacijom pod N2. Reakcioni proizvod je ohlađen na 0°C, razblažen sa DCM (20 ml) i dodat je 2-(dimetilamino)etanetiol HCI (0.063 mol, 8.3 g), a zatim Et3N (suv). Reakciona smeša je zatim mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Tanko slojna hromatografija je pokazala da je reakcija završena. Reakcioni proizvod je razblažen sa 0.3 M rastvorom HCl (20 ml), a organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa DCM, a kombinovani organski slojevi su isprani sa 10% K2CO3(vodeni rastvor 20 ml) i osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Koncentracija rastvaraþa je dala sirovu masu od 10 grama. Sirovo jedinjenje je preþišćen kolonom silika gela (100-200 mesh) koristeći 3% MeOH/DCM. Prinos je bio 1.4 g (75%).
Referentni Primer 16. Sinteza ATX-A-4 (odnosi se ATX-031 u nastavku)
4
Primer 17. Sinteza ATX-011 do ATX-017, ATX-021 do ATX-023, i ATX-026 do ATX-030 iz Tabele 1, i jedinjenja iz Tabela 2, 3, i 4
[0165] Sinteza ATX-011 do ATX-017, ATX-021 do ATX-023, i ATX-026 do ATX-030, ATX-A-1 do ATX-A-22 i jedinjenja iz Tebela 2, 3, i 4 prati sintezu Primera 1-15, supstitucijom odgovarajućih polaznih sastojaka za reakcije sinteze opisane ovde. Otkrivanje koje se odnosi na jedinjenja van obima predmetnog pronalaska dato je samo za referencu.
Primer 18. In vivo mišiji Faktor VII utišavanja
[0166] Koristeći in vivo pregled biblioteka lipozoma usmeren na jetru, testiran je niz jedinjenja koja omogućavaju visoke nivoe utišavanja gena posredovanog siRNK u bepatocitima, ćelijama koje þine parenhim jetre. Faktor VII, faktor zgrušavanja krvi, je pogodan ciljani gen za ispitivanje funkcionalne isporuke siRNK u jetru. Pošto se ovaj faktor proizvodi specifiþno u hepatocitima, utišavanje gena ukazuje na uspešnu isporuku u parenhim, za razliku od isporuke ćelijama retikulo-endotelnog sistema (npr., Kupferove ćelije). Štaviše, Faktor VII je izluþeni protein koji se lako može meriti u serumu, þime se eliminiše potreba za eutanazom životinja. Utišavanje na nivou mRNK može se lako odrediti merenjem nivoa proteina. To je zbog kratkog poluživota proteina (2-5 sati). C57BL/6 miševi (Charles River Labs) primili su fiziološki rastvor ili siRNK u formulacijama lipozoma putem injekcije u repnu venu u zapremini od 0.006 ml/g. Na 48 h nakon primene, životinje su anestezirane inhalacijom izofluorana i krv je sakupljena u epruvete za odvajanje seruma retroorbitalnim krvarenjem. Nivoi proteina Faktora VII u serumu su određeni u uzorcima korišćenjem hromogenog testa (Biofen FVII, Aniara Corporation) prema protokolima proizvođDþa. Standardna kriva je generisana korišćenjem seruma sakupljenog od životinja tretiranih slanim rastvorom.
[0167] Kompozicije sa siRNK usmerene na Faktor VIII su formulisane sa ATX-001, ATX-002, ATX-003, i ATX-547, i poredbenim uzorcima NC1 i MC3 (Alnylam). Oni su ubrizgani u životinje na 0.3 mg/kg i na 1 mg/kg. siRNK enkapsulirana sa MC3 (0.3 mg/kg), NCI (0.3 mg/kg), ATX-547 (0.3 mg/kg), ATX-001 (0.3 and 1.0 mg/kg), ATX-002 (0.3 and 1.0 mg/kg), i ATX-003 (0.3 i 1.0 mg/kg) su izmerene za sposobnost da obore Faktor VII u mišijoj plazmi praćeno primenom siRNA formulacije na C57BL6 miša. Rezultati su to pokazali da su ATX-001 i ATX-002 najefikasniji na 0.3 mg/kg, u poređenju sa kontrolnima (Fig.1 i 2).
[0168] siRNK enkapsulacija MC3 (0.3 i 1.5 mg/kg), NC1 (0.3 mg/kg), ATX-547 (0.1 i 0.3 mg/kg), ATX-004 (0.3), ATX-006 (0.3 i 1.0 mg/kg), ATX-010 (0.3 mg/kg), i
ATX-001 (0.3 i 1.5 mg/kg), je izmerena za obaranje Faktora u mišijoj plazmi praćen primenom siRNK formulacije na C57BL6 miša. Rezultati pokazuju da su ATX-001 i ATX-010 najefikasniji (Fig.3 i 4). Obaranje aktivnosti primernih jedinjenja je prikazano za 0.3 mg/kg ili na 0.05 mg/kg za ATX-018, ATX-019, i ATX-020 (Tabela 1). Otkrivanje koje se odnosi na jedinjenja van obima predmetnog pronalaska dato je samo za referencu.

Claims (10)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule III:
    u kojoj R1se sastoji od razgranatog alkila sa 12 do 20 atoma ugljenika, R2se sastoji od razgranatog alkila sa 12 do 20 atoma ugljenika, L1i L2se svaki sastoji od veze ili linearnog alkila koji ima 1 do 3 atoma ugljenika, X se sastoji od S ili O, L3se sastoji od veze, R3je odabran između etilena, n-propilena ili izopropilena, i R4i R5su isti ili razliþiti, svaki se sastoji od linearnog ili razgranatog alkila koji se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  2. 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri þemu X se sastoji od S.
  3. 3. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri þemu L1i L2se oba sastoje od linearnog alkila koji ima 1 do 3 atoma ugljenika.
  4. 4. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri þemu R3je etilen.
  5. 5. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri þemu R3je n-propilen ili izopropilen.
  6. 6. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri þemu R4i R5se svaki sastoji od metila, etila ili izopropila.
  7. 7. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri þemu L1i L2se oba sastoje od veze.
  8. 8. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri þemu L1i L2se oba sastoje od metilena.
  9. 9. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri þemu R1i R2se oba sastoje od razgranatog alkila od 19 do 20 atoma ugljenika.
  10. 10. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri þemu R1i R2se oba sastoje od razgranatog alkila od 13 do 14 atoma ugljenika.
RS20230231A 2014-11-18 2015-05-11 Jonizujući katjonski lipid za isporuku rnk RS64078B1 (sr)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14/546,105 US9593077B2 (en) 2013-11-18 2014-11-18 Ionizable cationic lipid for RNA delivery
US14/707,876 US9365610B2 (en) 2013-11-18 2015-05-08 Asymmetric ionizable cationic lipid for RNA delivery
US14/707,796 US9567296B2 (en) 2013-11-18 2015-05-08 Ionizable cationic lipid for RNA delivery
PCT/US2015/030218 WO2016081029A1 (en) 2014-11-18 2015-05-11 Ionizable cationic lipid for rna delivery
EP15724466.6A EP3221293B1 (en) 2014-11-18 2015-05-11 Ionizable cationic lipid for rna delivery

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64078B1 true RS64078B1 (sr) 2023-04-28

Family

ID=56014367

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20230231A RS64078B1 (sr) 2014-11-18 2015-05-11 Jonizujući katjonski lipid za isporuku rnk

Country Status (20)

Country Link
EP (1) EP3221293B1 (sr)
JP (1) JP6637988B2 (sr)
KR (1) KR102380363B1 (sr)
CN (1) CN107207428A (sr)
AU (1) AU2015350561B2 (sr)
CA (1) CA2968060C (sr)
DK (1) DK3221293T3 (sr)
ES (1) ES2946110T3 (sr)
FI (1) FI3221293T3 (sr)
HK (1) HK1244479A1 (sr)
HR (1) HRP20230342T1 (sr)
HU (1) HUE062130T2 (sr)
IL (1) IL252291B (sr)
LT (1) LT3221293T (sr)
NZ (1) NZ732777A (sr)
PL (1) PL3221293T3 (sr)
PT (1) PT3221293T (sr)
RS (1) RS64078B1 (sr)
SI (1) SI3221293T1 (sr)
WO (1) WO2016081029A1 (sr)

Families Citing this family (66)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9593077B2 (en) 2013-11-18 2017-03-14 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery
WO2015134812A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating usher syndrome and retinitis pigmentosa
US12460231B2 (en) 2014-04-02 2025-11-04 Editas Medicine, Inc. Crispr/CAS-related methods and compositions for treating primary open angle glaucoma
CN110582301A (zh) 2016-12-14 2019-12-17 利甘达尔股份有限公司 用于核酸和蛋白质有效负载递送的方法和组合物
WO2018119163A1 (en) * 2016-12-21 2018-06-28 Payne Joseph E Ionizable cationic lipid for rna delivery
US10526284B2 (en) 2016-12-21 2020-01-07 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery
US10383952B2 (en) * 2016-12-21 2019-08-20 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery
WO2018183901A1 (en) * 2017-03-30 2018-10-04 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Nucleic acid vaccine composition comprising a lipid formulation, and method of increasing the potency of nucleic acid vaccines
ES3039647T3 (en) * 2017-05-31 2025-10-23 Arcturus Therapeutics Inc Synthesis and structure of high potency rna therapeutics
US12083224B2 (en) 2018-03-30 2024-09-10 Arcturus Therapeutics, Inc. Lipid particles for nucleic acid delivery
MX2020011166A (es) 2018-04-25 2022-10-19 Ethris Gmbh Agentes crioprotectores para formulaciones en forma de particulas.
KR20190127277A (ko) * 2018-05-04 2019-11-13 주식회사 삼양바이오팜 mRNA 전달용 고분자 나노입자 조성물 및 그 제조방법
PL3805198T3 (pl) * 2018-06-08 2024-02-12 Fujifilm Corporation Związek, jego sól i cząstki lipidowe
JP7445657B2 (ja) 2018-12-06 2024-03-07 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッド オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症を処置するための組成物および方法
EP3942050A4 (en) * 2019-03-19 2023-02-22 Arcturus Therapeutics, Inc. PROCEDURE FOR THE PRODUCTION OF LIPID-COATED RNA NANOPARTICLES
WO2020246581A1 (ja) 2019-06-07 2020-12-10 富士フイルム株式会社 脂質組成物
US12544437B2 (en) 2019-10-04 2026-02-10 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Methods for improved therapeutic use of recombinant AAV
EP4059505B1 (en) 2019-11-15 2024-02-21 FUJIFILM Corporation Lipid composition
JP7832114B2 (ja) 2020-03-03 2026-03-17 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッド オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症の治療のための組成物及び方法
AU2021244559A1 (en) 2020-03-24 2022-11-17 Generation Bio Co. Non-viral DNA vectors and uses thereof for expressing Gaucher therapeutics
MX2022011805A (es) 2020-03-24 2023-01-11 Generation Bio Co Vectores de adn no virales y usos de estos para expresar agentes terapéuticos con factor ix.
US20230227826A1 (en) * 2020-06-18 2023-07-20 Arcturus Therapeutics, Inc. Una oligomers for the treatment of polyglutamine diseases
CN116234917A (zh) 2020-07-27 2023-06-06 安杰瑞姆生物科学公司 Dna分子组合物及其制备方法和使用方法
WO2022056413A1 (en) 2020-09-13 2022-03-17 Arcturus Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticles encapsulation of large rna
MX2023009345A (es) * 2021-02-10 2023-10-24 Oncorus Inc Compuestos, composiciones y metodos de uso de estos.
AU2022260111A1 (en) 2021-04-20 2023-11-30 Anjarium Biosciences Ag Compositions of dna molecules encoding amylo-alpha-1, 6-glucosidase, 4-alpha-glucanotransferase, methods of making thereof, and methods of use thereof
CN117881786A (zh) 2021-04-27 2024-04-12 世代生物公司 表达治疗性抗体的非病毒dna载体及其用途
EP4329884A1 (en) 2021-04-27 2024-03-06 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
MX2024002726A (es) 2021-09-03 2024-03-20 CureVac SE Nuevas nanoparticulas lipidicas para la administracion de acidos nucleicos.
WO2023073228A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 CureVac SE Improved circular rna for expressing therapeutic proteins
EP4430024A1 (en) 2021-11-08 2024-09-18 Orna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions for delivering circular polynucleotides
JP2025504404A (ja) 2022-01-14 2025-02-12 アンジャリウム バイオサイエンシズ エージー Ｖｉｉｉ因子をコードするｄｎａ分子の組成物、それを作製する方法、及びその使用方法
US20250099614A1 (en) 2022-01-28 2025-03-27 CureVac SE Nucleic acid encoded transcription factor inhibitors
CN114213295B (zh) * 2022-02-22 2022-05-20 中国科学院基础医学与肿瘤研究所(筹) 一种阳离子化合物、制备方法及其复合物和用途
WO2023177655A1 (en) 2022-03-14 2023-09-21 Generation Bio Co. Heterologous prime boost vaccine compositions and methods of use
WO2023227608A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Glaxosmithkline Biologicals Sa Nucleic acid based vaccine encoding an escherichia coli fimh antigenic polypeptide
EP4536197A1 (en) 2022-06-07 2025-04-16 Generation Bio Co. Lipid nanoparticle compositions and uses thereof
WO2024040222A1 (en) 2022-08-19 2024-02-22 Generation Bio Co. Cleavable closed-ended dna (cedna) and methods of use thereof
KR20250110209A (ko) 2022-09-23 2025-07-18 엔크로마 바이오, 인크. Hbv 유전자 발현의 에피제네틱 조절을 위한 조성물 및 방법
WO2024089638A1 (en) 2022-10-28 2024-05-02 Glaxosmithkline Biologicals Sa Nucleic acid based vaccine
CN120390656A (zh) 2022-11-08 2025-07-29 欧纳医疗公司 环状rna组合物
WO2024102762A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Orna Therapeutics, Inc. Lipids and lipid nanoparticle compositions for delivering polynucleotides
TW202425959A (zh) 2022-11-08 2024-07-01 美商歐納醫療公司 遞送多核苷酸的脂質及奈米顆粒組合物
JP2025540076A (ja) 2022-12-01 2025-12-11 ジェネレーション バイオ カンパニー 核酸、イオン化可能な脂質、ステロール、脂質アンカーポリマー、及びヘルパー脂質を含む脂質ナノ粒子、それらの使用
KR20250131271A (ko) 2022-12-01 2025-09-02 제너레이션 바이오 컴퍼니 신규한 폴리글리세롤-접합된 지질 및 이를 포함하는 지질 나노입자 조성물
KR20250114116A (ko) 2022-12-01 2025-07-28 제너레이션 바이오 컴퍼니 세포 표적화를 위한 스텔스 지질 나노입자 조성물
WO2024119103A1 (en) 2022-12-01 2024-06-06 Generation Bio Co. Lipid nanoparticles comprising nucleic acids and lipid-anchored polymers
KR20250153298A (ko) 2023-03-08 2025-10-24 큐어백 에스이 핵산 전달을 위한 신규의 지질 나노입자 제형
WO2024205657A2 (en) 2023-03-29 2024-10-03 Orna Therapeutics, Inc. Lipids and lipid nanoparticle compositions for delivering polynucleotides
WO2024233308A2 (en) 2023-05-05 2024-11-14 Orna Therapeutics, Inc. Circular rna compositions and methods
WO2024230934A1 (en) 2023-05-11 2024-11-14 CureVac SE Therapeutic nucleic acid for the treatment of ophthalmic diseases
IL324634A (en) 2023-05-15 2026-01-01 Nchroma Bio Inc Compositions and methods for epigenetic regulation of hbv gene expression
CN116270543B (zh) * 2023-05-19 2023-09-26 清华大学 脂质纳米颗粒在制备通过雾吸或鼻滴给药递送核酸的药物中的用途
US12311033B2 (en) 2023-05-31 2025-05-27 Capstan Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulations and compositions
WO2025049690A1 (en) 2023-08-29 2025-03-06 Orna Therapeutics, Inc. Circular polyethylene glycol lipids
WO2025052180A2 (en) 2023-09-07 2025-03-13 Axelyf ehf. Lipids and lipid nanoparticles
WO2025080939A1 (en) 2023-10-13 2025-04-17 Ultragenyx Pharmaceutical, Inc. Compositions and methods for treating conditions associated with cartilage oligomeric matrix protein (comp) mutations
WO2025101501A1 (en) 2023-11-07 2025-05-15 Orna Therapeutics, Inc. Circular rna compositions
WO2025128853A2 (en) 2023-12-13 2025-06-19 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Compositions and methods for treating conditions associated with ube3a overexpression
WO2025129201A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 Capstan Therapeutics, Inc. Humanized anti-cd8 antibodies and uses thereof
WO2025166323A2 (en) 2024-02-02 2025-08-07 Editas Medicine, Inc. Crispr-related methods and compositions targeting lipoprotein (a) expression
WO2025189064A1 (en) 2024-03-08 2025-09-12 Genzyme Corporation Lipid nanoparticles
WO2025213138A1 (en) 2024-04-05 2025-10-09 Editas Medicine, Inc. Crispr/rna-guided nuclease related methods and compositions for treating primary open angle glaucoma
WO2026003582A2 (en) 2024-06-27 2026-01-02 Axelyf ehf. Lipids and lipid nanoparticles
WO2026030375A2 (en) 2024-07-30 2026-02-05 Genzyme Corporation Lipid nanoparticles and methods of manufacture and use thereof
WO2026064512A1 (en) 2024-09-18 2026-03-26 Generation Bio Co. Polyglycerol-conjugated lipids and lipid nanoparticle compositions comprising the same

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4511069A (en) 1981-06-04 1985-04-16 The Pharmasol Corporation Dispensing system
US4778810A (en) 1987-01-08 1988-10-18 Nastech Pharmaceutical Co., Inc. Nasal delivery of caffeine
JP3257675B2 (ja) 1990-10-12 2002-02-18 マックス−プランク−ゲゼルシャフト ツール フェルデルング デル ビッセンシャフテン エー．ファウ． 修飾リボザイム
US5652094A (en) 1992-01-31 1997-07-29 University Of Montreal Nucleozymes
US5849902A (en) 1996-09-26 1998-12-15 Oligos Etc. Inc. Three component chimeric antisense oligonucleotides
JP5902616B2 (ja) * 2010-04-28 2016-04-13 協和発酵キリン株式会社 カチオン性脂質
CN107043334B (zh) * 2011-06-08 2020-06-16 日东电工株式会社 用于定向药物输送和增强siRNA活性的化合物
US20140308304A1 (en) * 2011-12-07 2014-10-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids for the delivery of active agents
SI2858974T1 (sl) * 2012-06-08 2019-01-31 Nitto Denko Corporation Lipidi za formulacije za dostavo terapevtskega sredstva
US9593077B2 (en) * 2013-11-18 2017-03-14 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery

Also Published As

Publication number Publication date
JP6637988B2 (ja) 2020-01-29
ES2946110T3 (es) 2023-07-12
AU2015350561A1 (en) 2017-07-06
HK1244479A1 (zh) 2018-08-10
IL252291A0 (en) 2017-07-31
JP2017535610A (ja) 2017-11-30
PL3221293T3 (pl) 2023-07-10
HRP20230342T1 (hr) 2023-06-09
HUE062130T2 (hu) 2023-09-28
DK3221293T3 (da) 2023-04-03
CN107207428A (zh) 2017-09-26
CA2968060C (en) 2023-06-20
EP3221293A1 (en) 2017-09-27
LT3221293T (lt) 2023-03-27
KR102380363B1 (ko) 2022-03-29
PT3221293T (pt) 2023-03-16
AU2015350561B2 (en) 2020-01-30
FI3221293T3 (fi) 2023-04-05
CA2968060A1 (en) 2016-05-26
KR20170095241A (ko) 2017-08-22
IL252291B (en) 2021-08-31
SI3221293T1 (sl) 2023-05-31
WO2016081029A1 (en) 2016-05-26
NZ732777A (en) 2023-06-30
EP3221293B1 (en) 2023-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7641308B2 (ja) Ｒｎａ送達のためのイオン化可能なカチオン性脂質
EP3221293B1 (en) Ionizable cationic lipid for rna delivery
US9896413B2 (en) Ionizable cationic lipid for RNA delivery
US9834510B2 (en) Aromatic ionizable cationic lipid
US9580711B2 (en) Lipid particles with asymmetric cationic lipids for RNA delivery
WO2018119163A1 (en) Ionizable cationic lipid for rna delivery