TW201438581A - 使用多烯殺真菌劑以控制真菌病原之方法 - Google Patents

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Abstract

本發明關於控制植物的真菌病原，諸如引起猝死症候群之病原，該控制係藉由將一或多種多烯殺真菌劑施予植物種子、土壤及/或植物根部。

Description

使用多烯殺真菌劑以控制真菌病原之方法
本申請案主張在2012年11月29日申請之美國臨時專利申請案第61/731,160號及在2012年11月29日申請之美國臨時專利申請案第61/731,468號之優先權，將二者之揭示內容特此併入以供參考。
本發明關於藉由施予一或多種多烯殺真菌劑來控制植物的真菌病原，諸如引起猝死症候群之病原，且治療及/或預防植物的猝死症候群。
殺真菌劑具有許多用途，包括作物防護及食物、飼料和化妝品中的保存劑。多烯殺真菌劑為已於該等領域中使用的抗真菌抗生素。該等可經由常在土壤中發現的鏈黴菌屬(Streptomyces)種類(諸如納塔爾鏈黴菌(Streptomyces natalensis))發酵而獲得。多烯殺真菌劑之活性部分衍生自彼等破壞細胞膜的能力，其與真菌或酵母中的細胞壁之建構組元(building block)的麥角甾醇形成複合物。許多研究已證實發展對多烯殺真菌劑之真菌抗性的可 能性非常低。
暴露於真菌病原可引起許多不同的疾病，包括根腐病。引起根腐病的特定疾病包括猝死症候群、褐根病和萎凋病(fusarium wilt)。
猝死症候群(SDS)為影響大豆的疾病，引起落葉及莢發育不全。SDS之致病原為土壤傳播之真菌，包括在美國：北美大豆猝死症候群病菌(F.virguliforme)(先前分類為茄鐮孢菌屬甘胺酸(F.solani sp.glycine))；在南美洲：巴西大豆猝死症候群病菌(F.brasiliense)、楔鉤型大豆猝死症候群病菌(F.cuneirostrum)、南美大豆猝死症候群病菌(F.tucumaniae)和北美大豆猝死症候群病菌。該等凋萎病菌屬真菌係以厚膜孢子於冬季存活於殘留作物中或自由存活於土壤內。厚膜孢子在土壤中及植物根部上發育且可禁得起大的土壤溫度波動及抵抗乾燥。當土壤溫度上升時，刺激厚膜孢子發芽及接著感染任何附近植物的根部。
SDS係在1971年最早在阿肯色州發現且延續了好幾年。據報導SDS影響遍及美國大部分的中北部各州，包括伊利諾伊州、印第安納州、愛荷華州、堪薩斯州、肯塔基州、明尼蘇達州、密西西比州、密蘇里州、內布拉斯加州、俄亥俄州和田納西州。SDS亦影響加拿大、阿根廷和巴西之作物。
SDS已對農耕工業造成很大的問題。致病真菌在可識別已滲入大豆作物之前可在附近植物上存活一段 期間。因為初期的根部徵候為主根及莖下部變色，所以在仍生長的植物中不可輕易觀察到初期的發病。然而，疾病最終在上部的葉子上引起黃斑點，其最終可導致脫皮/嵌紋(mosaic)外觀。一旦可看見葉子的徵候(例如，葉斑點)，則作物已暴露於真菌一段較長的期間了，且有可能已經歷根腐病。
目前的SDS處理是有限的。已假定許多處理方法，包括早期種植、耕地、作物輪種和抵抗性大豆品種。參見在http：//www3.ag.purdue.edu/counties/montgomery/Documents/BP-58-W.pdf取得之Andreas Westphal等人之“Sudden Death Syndrome”,Purdue Extension Publication BP-58-W(2010年8月26日)。嘗試以化學處理作為使用殺真菌劑之替代法。例如，WO 2012/071520說明施予吡啶基乙基苯甲醯胺衍生物來降低猝死症候群的發生。
特別是使用殺真菌劑的效果非常有限。參見例如Japheth Drew Weems之專題論文：“Effect of Fungicide Seed Treatments on Fusarium virguliforme and Development of Sudden Death Syndrome in Soybean,”University of Illinois at Urbana-Champaign,2011。在Weems的研究中，將各種環境中的大豆植物(實驗室、溫室和田地)以先前對抗凋萎病菌顯示出一些成效的殺真菌劑處理。雖然在實驗室檢定中許多種子處理降低病變長度及疾病嚴重性，但是研究顯示對田地及溫室試驗之SDS嚴重性沒有顯著的種子處理效果。作者的結論是〝沒有任 何經評估之種子處理證明對北美大豆猝死症候群病菌或SDS有一致的效果〞。
總之，SDS對農耕工業的負面影響超過了30年。處理方法很少成功。特別是迄今已發現殺真菌劑是無效的。參見例如Dan Hershman,“Kentucky：Soybean Sudden Death Syndrome Showing Up”,CropLife(2013年8月27日)，http：//www.croplife.com/crop-inputs/fungicides/kentucky-soybean-sudden-death-syndrome-showing-up/(“For sure,applying a fungicide WILL NOT HELP”)。
本發明關於藉由施予有效量的多烯殺真菌劑來控制真菌病原，諸如引起猝死症候群(SDS)之病原。真菌病原可為土壤傳播的真菌，諸如北美大豆猝死症候群病菌、南美大豆猝死症候群病菌、巴西大豆猝死症候群病菌和楔鉤型大豆猝死症候群病菌。在一個具體實例中，土壤傳播的真菌為北美大豆猝死症候群病菌或南美大豆猝死症候群病菌。在另一具體實例中，土壤傳播的真菌為北美大豆猝死症候群病菌。
殺真菌劑可施予植物、種子、植物生長之土壤、即將種植植物或種子之土壤、植物根部、或彼等之組合。在特別的具體實例中，植物或種子為大豆。
在另一具體實例中，本發明提供以多烯殺真菌劑包覆之大豆種子。
在該等具體實例之任一者中，多烯殺真菌劑可為鏈黴菌素(natamycin)、耐絲菌素(nystatin)、雙性黴素B、金色制黴素(aureofungin)、菲律賓菌素(filipin)、光明黴素(lucensomycin)或彼等之組合。在特別的具體實例中，多烯殺真菌劑為鏈黴菌素。多烯殺真菌劑可以約5ppm至約50ppm之濃度或約25ppm至約50ppm之濃度施予。
在上述具體實例之任一者中，多烯殺真菌劑可包括在具有農業上可接受之載劑的組成物中。
在該等具體實例之任一者中，組成物不包含吡啶基乙基苯甲醯胺衍生物。
圖1顯示實施例3的第一實驗之結果，比較未受侵擾之對照(UIC)植物、受侵擾之對照(IC)植物及以五種不同濃度的鏈黴菌素處理之大豆根部的根腐病等級。
圖2顯示實施例3的第一實驗之根部活力等級。
圖3顯示實施例3的第二實驗之結果，比較UIC植物、IC植物及以五種不同濃度的鏈黴菌素處理之大豆根部的根腐病等級。
圖4顯示實施例3的第二實驗之根部活力等級。
本發明的具體實例之詳細說明
將所有的發表案、專利及專利申請案(包括任何圖形及附錄)以如同每一個別的發表案或專利申請案係明確地且個別地指出欲併入以供參考的相同程度併入本文以供參考。
以下的說明包括可用於瞭解本發明的資訊。這不是承認本文所提供的資訊中之任一者為先前技術或與目前主張之本發明有關，或任何明確地或暗示地提及之發表案為先前技術。
本發明關於藉由施予有效量的多烯殺真菌劑來控制真菌病原且治療及/或預防由該等真菌病原所引起的疾病，例如猝死症候群。根腐病為從暴露於真菌病原而發生之疾病類型的實例。引起根腐病徵候的特定疾病包括猝死症候群、褐根病和萎凋病。可將多烯殺真菌劑以有效控制病原之量施予需要處理之場地。可將多烯殺真菌劑特別施予植物種子、土壤(例如，預備種植的土壤)、植物根部、或彼等之組合。本發明者驚訝地發現投予多烯殺真菌劑(例如，鏈黴菌素)有效控制此等真菌病原，且尤其有效治療及/或預防猝死症候群。
定義
術語〝控制〞意指殺死或抑制真菌病原之生長，諸如引起猝死症候群之真菌。
用語〝有效量〞係指多烯殺真菌劑足以控制真菌病原或降低猝死症候群發生的量。此量可取決於欲控制之真菌、植物類型、氣候和環境(亦即土壤類型)條件、施予方法及多烯殺真菌劑的類型而在有效量範圍內改變。
多烯殺真菌劑
多烯殺真菌劑為具有巨環內酯環之抗真菌抗生素，該環具有(i)剛性親脂性多烯部分和撓性親水性羥基化部分，及(ii)與大部分的真菌之細胞膜中的甾醇(主要為麥角甾醇)結合之能力。巨環內酯環可具有12-40個碳、6-14個羥基且可能與或可能不與碳水化合物連結。環可能與一或多種糖連結，諸如具有5或更多個碳單元之簡單的糖、去氧糖、胺糖及類似者，該糖含有與環連接的取代基，包括含氧鍵聯。
本發明的多烯殺真菌劑可從鏈黴菌屬細菌種類獲得。此等殺真菌劑包括鏈黴菌素、耐絲菌素、雙性黴素B、金色制黴素、菲律賓菌素和光明黴素，以及彼等之衍生物。衍生物的實例包括例如在美國專利案號5,606,038中所述之雙性黴素B衍生物，或在Bruheim等人之Antimicrobial Agents and Chemotherapy,Nov.2004,pp.4120-4129中所述之耐絲菌素衍生物/類似物，諸如S44HP、NYST1068和辛烷耐絲菌素。衍生物為母體分子天然生成之類似物或衍生自母體分子的合成或半合成化合物，其保留至少一些與母體分子相比的殺真菌活性。在一 些具體實例中，衍生物具有與母體分子相比而至少相同或更大的殺真菌活性。衍生物包括鹽類和溶劑合物及其他的改質形式，其具有與母體分子相比而提高的溶解度。
多烯殺真菌劑可以至少1ppm，至少5ppm，至少10ppm，至少15ppm，至少20ppm，更佳為至少25ppm，更佳為至少30ppm，更佳為至少35ppm，更佳為至少40ppm，更佳為至少45ppm，更佳為至少50ppm，至少55ppm，至少60ppm，至少65ppm，至少70ppm，至少75ppm，至少80ppm，至少85ppm，至少90ppm，或至少95ppm，或至少5，至少10，至少12.5，至少15，至少20，更佳為至少25，更佳為至少30，更佳為至少35，更佳為至少40，更佳為至少45，更佳為至少50，至少55，至少60，至少65，至少70，至少75，至少80，至少85，至少90，或至少95磅/英畝(lb/A)之濃度供撒播方式施予，或以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19磅/英畝之濃度供帶狀方式施予，或每一容器或每一植物根部0.93、1.86、2.32、2.79、3.72、4.65、5.58、6.51、7.44、8.37、9.3、10.23、11.16、12.09、13.02、13.95、14.88、15.81、16.74、17.67毫克之濃度施予。應瞭解的是多烯殺真菌劑(例如，鏈黴菌素)可在特定的該等濃度範圍內施予(例如，20-70ppm，25-50ppm等等)。
如本文所述之多烯殺真菌劑可與其他的添加劑包括在組成物中。多烯殺真菌劑可佔組成物的至少1 %，至少2%，至少5%，至少10%，至少15%，至少20%，至少25%，至少30%，至少35%，至少40%，至少45%，至少50%，至少55%，至少60%，至少65%，至少70%，至少75%，至少80%，至少85%，至少90%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%或至少99%。
真菌病原/SDS之處理
本發明提供藉由施予有效量的多烯殺真菌劑來控制植物病原真菌之方法。可處理之真菌包括北美大豆猝死症候群病菌、南美大豆猝死症候群病菌、巴西大豆猝死症候群病菌及/或楔鉤型大豆猝死症候群病菌。
該等真菌引起疾病，諸如SDS。本發明提供藉由施予有效量的多烯殺真菌劑(例如，鏈黴菌素)來處理植物之方法，包括植物根部、種子或土壤，以降低SDS的發生及/或改善SDS。多烯殺真菌劑的有效性可藉由分析根腐病及/或植物活力來評估。
如以下實施例中所示，以鏈黴菌素處理具有與受侵擾之對照樣品相比而顯著較低的根腐病等級及顯著較高的植物活力等級。與未處理的受侵擾之對照樣品相比而降低經處理之組成物中的根腐病證明經處理之組成物有效地阻止全部或絕大部分的真菌進入大豆植物的根部。與未處理的受侵擾之對照樣品相比而在經處理之組成物中較高的根部活力證明鏈黴菌素處理能使種子在以真菌侵擾之 土壤中比能夠生長的未經處理之種子更有活力地生長。
將根腐病以1-5之級別測量，等級1=在主根和側根上0%之感染，2=<25%之感染，3=25-50%之感染，4=51-90%之感染，及5=>90%之感染。將根部活力分級，使得等級4=健康的主根及許多側根，3=較少的側根且一些發育遲緩，2=較少或成串的側根且更多的發育遲緩，1=細的主根及僅少數的側根，及0=具有0-3個側根的細且發育遲緩之主根。
在一個具體實例中，與未處理的受侵擾之對照樣品相比，根腐病降低至少5%，更佳為10%，更佳為15%，更佳為20%，更佳為25%，更佳為30%，更佳為35%，更佳為40%，更佳為45%，更佳為50%，更佳為55%，更佳為60%，更佳為65%，更佳為70%，更佳為75%，更佳為80%，更佳為85%，更佳為90%，更佳為95%。
在另一具體實例中，與未處理的受侵擾之對照樣品相比，根部活力增加至少5%，更佳為10%，更佳為15%，更佳為20%，更佳為25%，更佳為30%，更佳為35%，更佳為40%，更佳為45%，更佳為50%，更佳為55%，更佳為60%，更佳為65%，更佳為70%，更佳為75%，更佳為80%，更佳為85%，更佳為90%，更佳為95%。
植物及種子類型
本文所述之方法可用於處理多種植物及種子。該等植物及種子包括但不限於大豆、草莓、蕃茄、朝鮮薊、球莖類蔬菜、油菜、穀物、柑橘、棉花、瓜類、食用豆、果類蔬菜、草藥和香料、蛇麻草、葉菜類蔬菜、豆類蔬菜、花生、漿果、根和塊莖類蔬菜、向日葵、堅果樹和玉米。在較佳的具體實例中，該方法係用於處理大豆的猝死症候群。
調配物
多烯殺真菌劑可以有效控制病原之量施予需要處理之場地。在一個具體實例中，多烯殺真菌劑可施予植物種子、植物生長的土壤、即將種植植物或種子的土壤、植物(尤其為植物根部)、或彼等之組合。在特別的具體實例中，多烯殺真菌劑係施予大豆種子、大豆根部、或大豆生長或即將種植大豆的土壤、或彼等之組合。
在進一步的具體實例中，多烯殺真菌劑係以適合的調配物形式施予。此等調配物可藉由將多烯殺真菌劑與農業上可接受之載劑及/或添加劑混合而製得，例如增量劑、溶劑、稀釋劑、染料、濕潤劑、分散劑、乳化劑、消泡劑、保存劑、輔助增稠劑、黏著劑及/或水。本發明的調配物可包括農業上可接受之載劑，其為添加至調配物中的惰性調配成分，以改進採收率、功效或物理性質，及/或有助於包裝和施予。載劑可包括抗結塊劑、抗氧化劑、增積劑及/或防護劑。有用的載劑實例包括多醣 類(澱粉、麥芽糊精、甲基纖維素、蛋白質(諸如乳清蛋白)、肽、膠)、糖類(乳糖、海藻糖、蔗糖)、脂質類(卵磷脂、植物油、礦物油)、鹽類(氯化鈉、碳酸鈣、檸檬酸鈉)、矽酸鹽類(黏土、非晶形二氧化矽、發煙/沉澱二氧化矽、矽酸鹽)、蠟類、油類、醇和界面活性劑類。
多烯殺真菌劑施予土壤可藉由將多烯殺真菌劑澆淋在土壤上、併入土壤中及在灌溉系統中以滴液施予土壤上來進行。多烯殺真菌劑亦可直接施予植物根部或種子(例如，經由浸濕、撒粉或噴霧)。為了幫助施予，亦可將多烯殺真菌劑轉變成調配物，包括但不限於溶液、乳液、可濕性粉末、懸浮液、粉末、粉劑、糊劑、可溶性粉末、顆粒和懸浮液-乳液濃縮物。
就本發明的目的而言，本發明組成物係單獨或在適合的調配物中施予種子。種子較佳地在其為穩定的條件下處理，使得在處理過程中不會發生破壞。一般而言，種子可在收穫與播種之間的任何時間點處理。典型地使用已自植物分離且已除去穗軸、殼、莖、莢、毛或果肉之種子。因此，例如可使用已收穫、清理且乾燥至少於15重量%之水分含量之種子。另一選擇地，亦可使用在乾燥之後經例如水處理及接著再乾燥之種子。
當處理種子時，一般而言，必須確保施予種子之本發明化合物及/或其他添加劑之量的選擇，使得對種子的發芽沒有不利的影響及/或不損害從種子冒出的植物。此為特別在特定的施予率下可顯出植物毒害效果之活 性成分的情況。
本發明組成物可直接施予，換言之，不包含更多組份且不經稀釋。總體來說，較佳的是施予適合於種子的調配物形式之組成物。適合於種子處理之調配物及方法為熟諳此項技術者已知且說明於例如以下文件中：美國專利案號4,272,417、4,245,432、4,808,430、5,876,739；美國專利發表案號2003/0176428；WO 2002/080675；WO 2002/028186。
可依照本發明使用的組合可轉變成習知的拌種調配物，諸如溶液、乳液、懸浮液、粉末、泡沫、漿液或其他用於種子的包覆組成物，且亦為ULV調配物。
該等調配物係藉由將組成物與習知的佐劑混合的已知方式製備，諸如與習知的增量劑及亦與溶劑或稀釋劑、著色劑、濕潤劑、分散劑、乳化劑、消泡劑、保存劑、輔助增稠劑、黏著劑、激勃素(gibberellin)及亦與水混合。
可存於可依照本發明使用之拌種調配物中的著色劑包括所有就此目的而習知的著色劑。在此上下文中，不僅有可能使用在水中具有低溶解度的顏料，亦可能使用水溶性染料。實例包括以Rhodamin B、C.I.紅顏料112和C.I.紅溶劑1命名之已知的著色劑。
可存於可依照本發明使用之拌種調配物中的濕潤劑包括所有促進濕潤且在活性農化成分之調配物中習知的物質。較佳地可使用萘磺酸烷酯，諸如萘磺酸二異丙 酯或二異丁酯。
可存於可依照本發明使用之拌種調配物中的分散劑及/或乳化劑包括所有在活性農化成分之調配物中習知的非離子、陰離子和陽離子分散劑。較佳地可使用非離子或陰離子分散劑或非離子或陰離子分散劑之混合物。適合的非離子分散劑特別為環氧乙烷-環氧丙烷嵌段聚合物、烷基酚聚乙二醇醚，及亦為三苯乙烯基酚聚乙二醇醚，及該等之磷酸化或硫酸化衍生物。適合的陰離子分散劑特別為木質磺酸鹽、聚丙烯酸之鹽和芳基磺酸鹽-甲醛濃縮物。
可存於可依照本發明使用之拌種調配物中的消泡劑包括所有在活性農化成分之調配物中習知的泡沫抑制劑。較佳地可使用聚矽氧消泡劑和硬脂酸鎂。
可存於可依照本發明使用之拌種調配物中的保存劑包括所有可就此目的而用於農化組成物中的物質。實例包括二氯酚(dichlorophen)和苯甲醇半甲醛。
可存於可依照本發明使用之拌種調配物中的輔助增稠劑包括所有可就此目的而用於農化組成物中的物質。那些優先選擇考慮者包括纖維素衍生物、丙烯酸衍生物、黃原膠(xanthan)，改質黏土和高分散二氧化矽。
可存於可依照本發明使用之拌種調配物中的黏著劑包括所有可用於拌種產物中的習用之黏合劑。較佳的述及者可為聚乙烯基吡咯啶酮、聚乙酸乙烯酯、聚乙烯醇及填充體(tylose)。
可依照本發明使用之拌種調配物可直接或在先以水稀釋之後使用，以處理各種廣泛類型中之任一者的種子。因此，濃縮物或藉由將該等以水稀釋可獲得的製劑可用於以下種子的拌種：穀物種子，諸如小麥、大麥、黑麥、燕麥和黑小麥，及亦用於大豆、玉米、稻、油菜籽、豌豆、豆類、棉花、向日葵和甜菜之種子，或還用於各種非常廣泛的蔬菜中任一者之種子。可依照本發明使用的拌種調配物或該等經稀釋之製劑亦可用於轉殖基因植物之拌種。在該情況中，額外的增效效果可以與經由壓榨所形成之物質的交互作用而發生。
用於以可依照本發明使用之拌種調配物或由該等添加水所製得的製劑處理種子之適合的混合設備包括所有通常可用於拌種的此等設備。更特定言之，當進行種子時，程序是將種子放入混合機中，添加特定的所欲量之拌種調配物(以其原樣子或事先以水稀釋之後)及進行混合，直到調配物均勻分布在種子上為止。隨後可進行乾燥操作。
可依照本發明使用之拌種調配物的施予率可在相對寬的範圍內改變。其係由調配物中之特定量的至少一種生物控制劑及至少一種殺真菌劑(I)以及由種子來操縱。在組成物例子中的施予率通常位於以每公斤種子計介於0.001與50公克之間，較佳為以每公斤種子計介於0.01與15公克之間。
在一些具體實例中，將組成物與至少一種下 列者混合或另外包含至少一種下列者：肥料、養分、礦物質、植物生長素、生長刺激劑、增進植物健康之微生物及類似者，在下文稱為植物健康組成物。在一些具體實例中，將本發明的多烯殺真菌劑與植物健康組成物以增效有效量在種植之前、之後及/或之時組合或依序(其中先施予一種組成物及接著稍後施予另一種)施予大豆植物，諸如根部(例如，經由根部浸濕或土壤澆淋)及/或植物生長場地(例如，土壤)。根據本發明的〝增效有效量〞代表比單獨施予多烯殺真菌劑及植物健康組成物之效果的總和更有效增加根部活力及/或降低根腐病之多烯殺真菌劑與植物健康組成物之組合量。各種公式(諸如高威氏公式(Gowing’s equation))能以其測定兩種組份的效果是否為增效。高威氏公式：Exp=X+[Y *(100-X)]/100。若Eob>>Exp，則有增效性存在。
植物健康組成物/化合物為包含能夠維持及/或促進植物健康的一或多種天然或合成物質或生物有機體之組成物/化合物。此一組成物/化合物可改進植物健康、活力、生產量、花和果實的品質，及/或刺激、維持或增進對生物及/或非生物壓力源/壓力之抗性。
傳統的植物健康組成物及/或化合物包括但不限於植物生長調節劑(又稱為植物生長刺激劑、植物生長調節組成物、植物生長調節劑(plant growth regulating agent、plant growth regulant))及植物活化劑(又稱為植物活化劑、植物增強劑、害蟲防治劑)。在本發明中的植物 健康組成物可為天然或合成的。
植物生長調節劑包括但不限於肥料、除草劑、植物激素、細菌接種劑及彼等之衍生物。
肥料為一種組成物，其典型地提供不同比例之三種主要的植物養分：氮、磷、鉀(已知縮寫為N-P-K)；或次要的植物養分(鈣、硫、鎂)或在植物或動物養分中作用的微量元素(或微量養分)：硼、氯、錳、鐵、鋅、銅、鉬和(在一些國家中)硒。肥料可為有機物或非有機物。天然生成之有機肥料包括但不限於糞便、蚯蚓糞土、泥炭土、海藻、污水和鳥糞。覆蓋作物亦以根部上的根瘤菌經由來自大氣的固氮作用，以及土壤的磷(經由養分活化)含量而長成為綠肥，使土壤豐富。來自天然來源的經加工之有機肥料包括堆肥(來自綠色廢物)、血粉和骨粉(來自有機肉品生產工廠)及海藻萃取物(藻酸鹽和其他者)。肥料亦可基於其在植物乾物質中的濃度而區分成多量養分和微量養分。多量養分係以較大的量消耗且通常總體以數或數十百分比存在於植物組織中(以乾物質重量為基準計)，包括氮(N)、磷(P)和鉀(K)的三種主要成分(已知為N-P-K肥料或當元素故意混合時之複合肥料)。有許多以質量計之濃度範圍從5至100份/百萬份(ppm)之必要的微量養分。植物微量養分包括鐵(Fe)、錳(Mn)、硼(B)、銅(Cu)、鉬(Mo)、鎳(Ni)、氯(Cl)和鋅(Zn)。
植物激素(plant hormone)(又稱為植物激素(phytohormone))及彼等之衍生物包括但不限於脫落酸、植 物生長素、細胞激素、激勃素、蕓薹素內酯(brassinolide)、水楊酸、茉莉酮酸酯(jasmonate)、植物肽激素、多胺、氧化氮和巫婆醇內酯(strigolactone)。
植物活化劑為天然或合成物質，其可刺激、維持或增進植物對生物及/或非生物壓力源/壓力之抗性，其包括但不限於噻二唑素(acibenzolar)、烯丙苯噻唑(probenazole)、異噻菌胺(isotianil)、水楊酸、壬二酸、噁黴靈(hymexazol)、蕓薹素內酯、氯吡脲(forchlorfenuron)、苯並噻二唑(例如，ACTIGARD® 50WG)、微生物或源自微生物之激發子。微生物或衍生自微生物之化學化合物及肽/蛋白質(例如，激發子)亦可用來作為植物活化劑。非限制性例示之激發子為：分支-β-聚葡萄糖、幾丁質寡聚體、果膠分解酵素、活性與酵素活性無關的激發子(例如，聚木醣內切酶(endoxylanase)、激發素、PaNie)、avr基因產物(例如，AVR4、AVR9)、病毒蛋白質(例如，病毒外套蛋白、過敏蛋白(Harpin))、鞭毛素、蛋白質或肽毒素(例如，維多利素(victorin))、糖蛋白、轉化酶之糖肽片段、丁香交酯(syringolid)、Nod因子(脂質幾丁寡糖)、FAC(脂肪酸胺基酸共軛物)、麥角甾醇、細菌毒素(例如，冠菌素(coronatine))和二氫神經鞘胺醇(sphinganine)類似物黴菌毒素(例如，伏馬毒素(fumonisin)B1)。更多的激發子說明在Howe等人之Plant Immunity to Insect Herbivores,Annual Review of Plant Biology,2008,vol.59,pp.41-66；Stergiopoulos之Fungal Effector Proteins Annual Review of Phytopathology,2009,vol.47,pp.233-263；及Bent等人之Elicitors,Effectors,and R Genes：The New Paragigm and a Lifetime Supply of Questions,Annual Review of Plant Biology,2007,vol.45,pp.399-436中。
促進植物健康之微生物包括桿菌屬菌株，諸如枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、液化澱粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliqeufaciens)和短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)。特定的實例包括枯草芽孢桿菌QST713。枯草芽孢桿菌QST713、其突變株、其上清液、其脂肽代謝物及使用彼等控制植物病原和昆蟲之方法完整說明於美國專利案號6,060,051、6,103,228、6,291,426、6,417,163和6,638,910中。在該等美國專利中，將菌株稱為AQ713，其與QST713同義。枯草芽孢桿菌株QST713已於1997年5月7日根據布達佩斯條約對國際承認以專利程序為目的之微生物保存的規定(Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purpose of Patent Procedure)以寄存標號B-21661寄存於NRRL。NRRL為美國農業研究菌種保藏中心(Agricultural Research Service Culture Collection)之縮寫，該中心為根據布達佩斯條約以保存微生物菌株為目的之國際寄存機構(international depositary authority)，其地址位於美國農業部(U.S.Department of Agriculture)的美國國家農業應用研究中心(National Center for Agricultural Utilization Research)之農業研究所(Agricultural Research Service)，美國伊利諾斯州61604，皮奧裏亞市(Peoria)北大學街(North University Street)1815號。枯草芽孢桿菌株QST713之適合的調配物在市場上係以商標SERENADE®、SERENADE® ASO、SERENADE SOIL®和SERENADE® MAX取自美國北卡羅來納州之Bayer CropScience LP。SERENADE®產品(美國國家環境保護局(U.S.EPA)登記編號69592-12)為枯草芽孢桿菌株QST713之發酵產品，其含有菌株之孢子，以及其代謝物。
促進植物健康的微生物亦包括短小芽孢桿菌株，諸如短小芽孢桿菌QST2808。在一些具體實例中，短小芽孢桿菌株為短小芽孢桿菌QST2808，其說明於美國專利案號6,245,551和6,586,231，及國際專利發表案號WO 2000/058442中。短小芽孢桿菌株2808之適合的調配物係以商標SONATA®取自美國北卡羅來納州之Bayer CropScience LP。短小芽孢桿菌株QST2808(亦稱為AQ2808)已於1999年1月14日根據布達佩斯條約對國際承認以專利程序為目的之微生物保存的規定以寄存標號B-30087寄存於NRRL。
促進植物健康的微生物亦包括液化澱粉芽孢桿菌FZB42(以RhizoVital®取自德拉瓦州之ABiTEP)。FZB42亦說明於歐洲專利發表案號EP2179652及亦於Chen等人之“Comparative Analysis of the Complete Genome Sequence of the Plant Growth-Promoting Bacterium Bacillus amyloliquefaciens FZB42,”Nature Biotechnology Volume 25,Number 9(2007年9月)中。
促進植物健康的微生物亦包括上述菌株之突變株。術語〝突變株〞係指自QST713、QST2808或FZB42衍生之基因變種。在一個具體實例中，突變株具有母株的一個或多個或全部的鑑定(功能性)特徵。在另一具體實例中，突變株或其發酵產物至少與母株一樣好地增加植物或植物部分的健康及/或生長(作為鑑定功能性特徵)。此等突變株可為對母株具有大於約85%，大於約90%，大於約95%，大於約98%或大於約99%之序列一致性的基因體序列之基因變體。突變株可藉由將母株細胞以化學品或照射處理或選自母株細胞群之自發性突變株(諸如噬菌體抗性或抗生素抗性突變株)或由那些熟練此項技術者熟知的其他方式而獲得。
具有增進之促進植物健康及/或生長之能力的枯草芽孢桿菌QST713之突變株說明於國際專利發表案號WO 2012/087980中。此等突變株具有在swrA-基因之突變。例示之swrA-突變株已根據布達佩斯條約對國際承認以專利程序為目的之微生物保存的規定寄存於NRRL。特定言之，枯草芽孢桿菌QST30002係在2010年10月5日寄存且分配到寄存標號B-50421。此外，枯草芽孢桿菌QST30004係在2010年12月6日寄存且分配到寄存標號B-50455。
FZB42之突變株說明於包括液化澱粉芽孢桿 菌ABI01之國際申請發表案號WO 2012/130221中，該突變株係由DSMZ-德國微生物及細胞培養物保藏中心(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures)分配到寄存標號DSM 10-1092。
在其中將多烯殺真菌劑與增進植物健康之微生物的增效組合依序或同時施予大豆種子、大豆根部或大豆生長或即將種植大豆之土壤(諸如經由兩種組份的桶混合或預混合)的一個具體實例中，多烯殺真菌劑為鏈黴菌素，及增進植物健康之微生物為枯草芽孢桿菌QST713或其突變株、短小芽孢桿菌QST2808或其突變株、或液化澱粉芽孢桿菌FZB42或其突變株。在其中將多烯殺真菌劑與增進植物健康之微生物的增效組合依序或同時施予大豆種子、大豆根部或大豆生長或即將種植大豆之土壤(諸如經由兩種組份的桶混合或預混合)的另一具體實例中，多烯殺真菌劑為耐絲菌素，及增進植物健康之微生物為枯草芽孢桿菌QST713或其突變株、短小芽孢桿菌QST2808或其突變株、或液化澱粉芽孢桿菌FZB42或其突變株。在其中將多烯殺真菌劑與增進植物健康之微生物的增效組合依序或同時施予大豆種子、大豆根部或大豆生長或即將種植大豆之土壤(諸如經由兩種組份的桶混合或預混合)的另一具體實例中，多烯殺真菌劑為雙性黴素B，及增進植物健康之微生物為枯草芽孢桿菌QST713或其突變株、短小芽孢桿菌QST2808或其突變株、或液化澱粉芽孢桿菌FZB42或其突變株。在其中將多烯殺真菌劑與增進植物健 康之微生物的增效組合依序或同時施予大豆種子、大豆根部或大豆生長或即將種植大豆之土壤(諸如經由兩種組份的桶混合或預混合)的另一具體實例中，多烯殺真菌劑為金色制黴素，及增進植物健康之微生物為枯草芽孢桿菌QST713或其突變株、短小芽孢桿菌QST2808或其突變株、或液化澱粉芽孢桿菌FZB42或其突變株。在其中將多烯殺真菌劑與增進植物健康之微生物的增效組合依序或同時施予大豆種子、大豆根部或大豆生長或即將種植大豆之土壤(諸如經由兩種組份的桶混合或預混合)的另一具體實例中，多烯殺真菌劑為菲律賓菌素，及增進植物健康之微生物為枯草芽孢桿菌QST713或其突變株、短小芽孢桿菌QST2808或其突變株、或液化澱粉芽孢桿菌FZB42或其突變株。在其中將多烯殺真菌劑與增進植物健康之微生物的增效組合依序或同時施予大豆種子、大豆根部或大豆生長或即將種植大豆之土壤(諸如經由兩種組份的桶混合或預混合)的另一具體實例中，多烯殺真菌劑為光明黴素，及增進植物健康之微生物為枯草芽孢桿菌QST713或其突變株、短小芽孢桿菌QST2808或其突變株、或液化澱粉芽孢桿菌FZB42或其突變株。
在較佳的具體實例中，上述增進植物健康之微生物係以經惰性物及/或載劑調配或未經調配之發酵產物提供，具有每公克製劑計至少105個集落形成單位之濃度(例如，細胞/公克製劑，孢子/公克製劑)，諸如105-1012cfu/公克，106-1011cfu/公克，107-1010cfu/公克及 109-1010cfu/公克。
多烯殺真菌劑及增進植物健康之微生物係以增效重量比使用。熟諳此項技術者能夠以慣例的方法找出用於本發明之增效重量比。熟諳此項技術者瞭解該等比值係指在組合之調配物內的比值以及當兩種組份以單一調配物施予欲處理之植物、種子或生長場地(例如，土壤或混合盆栽土(potting mix))時的多烯殺真菌劑及增進植物健康之微生物的計算比值。熟諳此項技術者可以簡單的數學計算此比值，因為已知在單獨施予時的兩種組份之體積及量。在本文提供單獨施予之多烯殺真菌劑的施予率。以特定的上述微生物菌株(枯草芽孢桿菌QST713、短小芽孢桿菌QST2808和液化澱粉芽孢桿菌FZB42)為基礎之市售產品的標籤是可利用的且提供在單獨施予時的各菌株經調配之發酵產物的例示之施予率。當用作為種子處理時，本發明的增進植物健康之微生物組成物(諸如那些以枯草芽孢桿菌QST713、短小芽孢桿菌QST2808和液化澱粉芽孢桿菌FZB42為基礎者)通常係取決於種子大小而以約1×102至約1×1010個集落形成單位(〝cfu〞)/種子之施予率施予。本發明的增進植物健康之微生物組成物(諸如那些以枯草芽孢桿菌QST713、短小芽孢桿菌QST2808和液化澱粉芽孢桿菌FZB42為基礎者)亦可用作為土壤表面澆淋、長柄插入(shanked-in)、注射及/或施予畦間或以與灌溉水之混合物施予。可在種植時，播種期間或之後，或移植之後及植物生長的任何階段以澆淋土壤處理之施予率為 約4×107至約8×1014cfu/英畝，或約4×109至約8×1013cfu/英畝，或約4×1011至約8×1012cfu/英畝，或約2×1012至約6×1013cfu/英畝，或約2×1012至約3×1013cfu/英畝。
細菌接種劑為包含常在種植時用於接種土壤之有益菌的組成物。該等細菌接種劑包括固氮細菌或根瘤菌。大豆慢生型根瘤菌(Bradyrhizobia japonicum)常用於大豆接種，及慢生型根瘤菌屬(豇豆慢生型根瘤菌(Bradyrhizobia Vigna))或(花生慢生型根瘤菌(Bradyrhizobia Arachis))常用於花生。其他的根瘤菌係用於其他作物：豌豆根瘤菌(Rhizobium leguminosarum)用於豌豆、扁豆和豆類及苜蓿和三葉草，及百脈根根瘤菌(Rhizobium loti)、豌豆根瘤菌和慢生型根瘤菌屬係用於各種豆科植物。在一個具體實例中，將本發明組成物與至少一種細菌接種劑混合或另外包含至少一種細菌接種劑，且接著施予土壤或種子。在另一具體實例中，將組成物與細菌接種劑同時或依序施予植物、植物部分或該植物或植物部分的場地。
在本文所述的具體實例之任一者中，本發明的方法及組成物排除吡啶基乙基苯甲醯胺衍生物的使用或納入。參見WO 2012/071520，以其全文特此併入以供參考。在特定的具體實例中，本發明的方法及組成物排除具有通式(I)組成之化合物的使用或納入：
其中：p等於1、2、3或4之整數；q等於1、2、3、4或5之整數；各個X係獨立選自由下列者所組成之群組：鹵素、烷基和鹵烷基，惟至少一個X為鹵烷基；各個Y係獨立選自由下列者所組成之群組：鹵素、烷基、烯基、炔基、鹵烷基、烷氧基、胺基、苯氧基、烷硫基、二烷基胺基、醯基、氰基、酯、羥基、胺基烷基、苯甲基、鹵烷氧基、鹵磺醯基、鹵硫烷基、烷氧基烯基、胺基烷基、苯甲基、鹵烷氧基、鹵磺醯基、苯磺醯基和苯甲基磺醯基。
以下的實施例為例證而非限制。
實施例 實施例1：在瓊脂擴散檢定法中評定不同濃度的鏈黴菌素對抗北美大豆猝死症候群病菌之抑制區
將含有兩週齡的北美大豆猝死症候群病菌的PDA盤注滿無菌蒸餾水且以L形棒刮落而釋出孢子。將孢子溶液經由約四層乳酪布倒入50毫升錐形管中。將孢子使用血球計定量，接著稀釋成1×105個孢子/毫升。(將1×104個孢子散布於盤上。)為了製得北美大豆猝死症候 群病菌之麻布盤(lawn plate)，將100微升孢子懸浮液散布在市售PDA盤上。使用草桿-柱塞(straw-plunger)製得北美大豆猝死症候群病菌之麻布盤的槽孔。
將鏈黴菌素儲液在無菌蒸餾水中稀釋成500ppm、250ppm、100ppm、50ppm、25ppm、12.5ppm、6.25ppm、3.13ppm、1.56ppm、0.78ppm和0.4ppm之濃度。將各100微升稀釋液放入麻布盤上的槽孔中。對照盤係由1000ppm盤、水對照盤及70%之乙醇(EtOH)對照盤所組成。
在4-5天之後，評估盤的抑制區。在3天之後，1000ppm盤幾乎已完全控制北美大豆猝死症候群病菌。以500ppm、250ppm、100ppm觀察到實質的控制。在50ppm之控制開始略微下降及在12.5ppm明顯下降。這在一天之後以約25ppm和12.5ppm盤生長更多的凋萎病菌時更明顯。低於12.5ppm之稀釋液沒有效果。在7天之後，在50ppm之北美大豆猝死症候群病菌的鏈黴菌素控制開始下降。而且在12.5ppm之活性非常有限。水及EtOH對照盤對北美大豆猝死症候群病菌同樣未顯示出效果。
實施例2：使用植物體內(in planta)檢定法評定鏈黴菌素對大豆猝死症候群之控制
準備用於接種的高粱。將1至2公升高粱種子放入菌種袋中、經熱壓處理，接著以30-45毫升SDA 孢子懸浮液接種。將菌種袋留置在室溫下的櫃子內，接著每隔幾天搖動且混合，經3週，直到準備好為止。以血球計測得之每公克種子的孢子數來評定高粱接種體。高粱生長至4.57×105個孢子/公克。
在土壤接種之前，先計算北美大豆猝死症候群病菌孢子。先將25毫升在水中的無菌0.1% Tween 80添加至50毫升無菌錐形管中。將試管秤重。接著以無菌添加來自菌種袋的數粒選殖之高粱。將試管再秤重，得到添加至試管中的選殖之孢子的精確質量。將試管在28-30℃下以約250rpm搖動2-4小時，從高粱種子釋出孢子。接著將樣品移出試管且使用血球計定量孢子。北美大豆猝死症候群病菌孢子係藉由在PDA盤上以100ppm氯黴素抗生素製得各試管的稀釋系列來進行定量。
土壤接種係藉由將高粱粒接種體以小批量在瓦林(Waring)粉碎機中以低速設定研磨10-20秒而開始。接著將研磨之高粱以2×105個孢子/錐形管與8.9公克/公升砂所組成的〝2%之低接種率〞或由5×105個孢子/錐形管與22.5公克/公升砂所組成的〝5%之高接種率〞混合至蒙特瑞(Monterey)細砂#60(Lapis Luster,RMC pacific materials)中。蒙特瑞砂未事先殺菌。在與建立實驗的同一天添加研磨之高粱接種體。在稍後的實驗中，研磨之高粱接種體係以每公克接種體所計算之孢子為基準混合至砂中。
以四種不同濃度的鏈黴菌素溶液添加至以〝2 %之低接種率〞侵擾之土壤錐形管中的四種不同的未經處理之種子群組中。四種不同的濃度為250ppm、100ppm、50ppm和25ppm。每一錐形管使用50毫升鏈黴菌素溶液。
將受侵擾之砂先以每公升砂150毫升水弄濕且混合，以種植檢定物。將錐形狀容器在底部以Sunshine #3混合盆栽土堵塞物填充1-2英吋，以保持砂在試管中。接著將容器以弄濕且受侵擾之砂填充至頂端的1-1.5英吋內，平均各容器填充120-125毫升。接著對容器澆水。將兩個大豆種子種植在各容器中。接著將容器放在光架下，使其發芽。種植後一週，大部分的種子發芽了。在此時拔除發芽的幼苗，各容器只留下一支幼苗。
允許植物生長18-21天。接著將植物輕輕地取出且評定根腐病徵候，以等級1=在主根和側根上0%之感染，2=<25%之感染，3=25-50%之感染，4=51-90%之感染，及5=>90%之感染。將根部活力分級，使得等級4=健康的主根及許多側根，3=較少的側根且一些發育遲緩，2=較少或成串的側根且更多的發育遲緩，1=細的主根及僅少數的側根，及0=具有0-3個側根的細且發育遲緩之主根。
較高濃度的鏈黴菌素(250ppm和100ppm鏈黴菌素/錐形管)對植物具有植物毒性且植物顯出低的發芽性及/或嚴重的發育遲緩。較低的鏈黴菌素濃度(50ppm和25ppm/容器)是有效的，與受感染之對照物相比而顯著地 降低根腐病等級及改進根部活力。
實施例3：測試較低濃度的鏈黴菌素作為對幼苗之澆淋處理，以控制植物體內之SDS
使用類似於實施例2中所述之模式，評定較低濃度的鏈黴菌素(50ppm、25ppm、10ppm、5ppm和1ppm)對SDS之處理。進行兩個實驗。
使用鏈黴菌素溶液作為澆淋處理，以50毫升溶液施予各容器。將大豆幼苗移植到具有1×107個孢子/容器的接種率之SDS孢子的受SDS侵擾之土壤中。將鏈黴菌素溶液在移植後當日施予容器。在18天之後清洗大豆根部。
圖1和2顯示第一實驗之結果，及圖3和4顯示第二實驗之結果。數據特別顯示每一容器經50ppm、25ppm和10ppm之鏈黴菌素處理之植物的根腐病等級明顯比受侵擾之對照(IC)植物更低(亦即更好)及根部活力等級比IC植物更高(亦即更好)。因此，數據顯示可使用50ppm、25ppm和10ppm之鏈黴菌素以澆淋施予來控制SDS根腐病。
實施例4：測試低濃度的鏈黴菌素作為對幼苗之澆淋處理，以控制植物體內之SDS
使用類似於實施例2中所述之模式，以兩個相同的實驗評定以50ppm、25ppm、10ppm、5ppm和1 ppm濃度的鏈黴菌素對SDS之處理。
在該等實驗中，在每一錐形管約1×107個SDS北美大豆猝死症候群病菌孢子下以孢子/錐形管測量接種比率。
先使大豆植物發芽及接著移植至受侵擾之土壤中。大豆種子係在純淨的砂/土壤中經12天發芽及接著將幼苗移植至受侵擾之土壤中經18天。在移植之後24小時施予鏈黴菌素澆淋。在2.5週評定鏈黴菌素處理。
表1顯示在兩個實驗中以50ppm和25ppm之鏈黴菌素處理的根部具有最低的根腐病等級，而那些以10ppm和5ppm處理的根部具有較高的等級，但仍比受感染且未處理之對照植物低。在一個實驗中，以1ppm之鏈黴菌素處理的根部在與受感染且未處理之對照植物相比時顯示較低的根腐病等級。在以下表中，UIC係指未受侵擾之對照植物及IC係指受侵擾之對照植物。
表2顯示在兩個實驗中以50ppm和25ppm之鏈黴菌素處理的根部具有最高的根部活力等級，而那些以10ppm、5ppm和1ppm處理的根部具有較低的等級，但仍比受感染且未處理之對照植物高。
因此，數據顯示可使用5ppm、10ppm、25ppm和50ppm之鏈黴菌素以澆淋施予來控制SDS根腐病，以25ppm和50ppm呈現最好的結果。
實施例5：測試低濃度的鏈黴菌素作為種子處理，以控制植物體內之SDS
使用類似於實施例2中所述之模式，以每一種子50微克、25微克、10微克、5微克和1微克鏈黴菌素測試經鏈黴菌素處理之種子。簡言之，將種子以鏈黴菌素漿液包覆且接著允許以空氣乾燥。將各10個樣品種植在受侵擾之土壤中，及各5個樣品種植在未受侵擾之土壤 中，比較發芽及可能的植物毒性。
在此實驗中的接種率以每公升砂/土壤為25公克接種體。此相當於每一錐形管有8.5×104個孢子
表3顯示所有以鏈黴菌素種子處理之植物在受侵擾之土壤中導致與未經處理之對照植物相同或更差的根腐病徵候。以50微克鏈黴菌素/種子處理之植物具有最多的根腐病，而以1微克鏈黴菌素/種子處理之植物具有最少的根腐病。該等結果表明負的劑量反應，以較低的鏈黴菌素濃度比較高的鏈黴菌素濃度更好。在以下的表中〝IC鏈黴菌素25ppm〞係指在未經處理之種子種植至受侵擾之土壤中之後2天以作為澆淋施予的25ppm之鏈黴菌素處理的受侵擾之對照植物。
在所有的鏈黴菌素濃度下的所有植物皆在未受侵擾(亦即純淨)之土壤中發芽，證明以所有濃度的鏈黴 菌素處理對種子沒有植物毒性。在未受侵擾之土壤中，以5微克鏈黴菌素/種子之處理為所有在純淨或受侵擾之土壤中的鏈黴菌素處理中最具有活力的根部。以25微克鏈黴菌素/種子處理之根部在受侵擾之土壤中具有最低的根部活力，再次表明較低濃度的鏈黴菌素比較高濃度的鏈黴菌素更好。參見表4中的數據。
實施例6：對經處理之種子比較接種率，以控制植物體內之SDS
使用類似於實施例5中所述之模式，評定用於SDS處理的50微克、25微克、10微克、5微克和1微克濃度之鏈黴菌素。
因為該等為化學種子處理，所以將種子直接種植在受侵擾之土壤中。比較25公克接種體/公升和8公 克接種體/公升之接種率，分別對應於每一容器約105個SDS孢子及每一容器約104-105個SDS孢子。在18及22天之後進行評定。
表5顯示以25公克接種體/公升之根腐病平均值比8公克接種體/公升之該平均值更高。表5亦顯示以25公克/公升之根部活力平均值類似於8公克/公升之該平均值。
種子處理實驗的結果不與澆淋實驗一樣一致。在兩個種子處理實驗及兩個SDS接種率中，未觀察到一致下降的根腐病徵候。
將所有的發表案、專利及專利申請案(包括其中的任何圖形及附錄)以如同每一個別的發表案、專利或專利申請案係明確地且個別地指出欲併入以供參考的相同程度併入以供參考。

Claims (18)

  1. 一種治療及/或預防猝死症候群之方法，其包含將有效量的多烯殺真菌劑施予植物種子、植物生長之土壤、即將種植植物或種子之土壤、植物根部、或彼等之組合。
  2. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中該施予係施至大豆種子、大豆根部、或大豆生長或即將種植大豆的土壤、或彼等之組合。
  3. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中該多烯殺真菌劑為鏈黴菌素(natamycin)、耐絲菌素(nystatin)、雙性黴素B、金色制黴素(aureofungin)、菲律賓菌素(filipin)、光明黴素(lucensomycin)或彼等之組合。
  4. 根據申請專利範圍第3項之方法，其中該多烯殺真菌劑為鏈黴菌素。
  5. 根據申請專利範圍第1-4項中任一項之方法，其中該多烯殺真菌劑係以25ppm至50ppm之濃度施予。
  6. 根據申請專利範圍第1-4項中任一項之方法，其中該多烯殺真菌劑係包括在包含該殺真菌劑及農業上可接受之載劑的組成物中。
  7. 根據申請專利範圍第1-4項中任一項之方法，其中該組成物不包含通式(I)組成之化合物： 其中： p等於1、2、3或4之整數；q等於1、2、3、4或5之整數；各個X係獨立選自由下列者所組成之群組：鹵素、烷基和鹵烷基，惟至少一個X為鹵烷基；各個Y係獨立選自由下列者所組成之群組：鹵素、烷基、烯基、炔基、鹵烷基、烷氧基、胺基、苯氧基、烷硫基、二烷基胺基、醯基、氰基、酯、羥基、胺基烷基、苯甲基、鹵烷氧基、鹵磺醯基、鹵硫烷基、烷氧基烯基、胺基烷基、苯甲基、鹵烷氧基、鹵磺醯基、苯磺醯基和苯甲基磺醯基。
  8. 一種控制北美大豆猝死症候群病菌(Fusarium virguliforme)或南美大豆猝死症候群病菌(Fusarium tucumaniae)之真菌的方法，其包含將有效量的多烯殺真菌劑施予植物種子、即將種植植物或種子之土壤、植物根部、或彼等之組合。
  9. 根據申請專利範圍第8項之方法，其中該多烯殺真菌劑為鏈黴菌素、耐絲菌素、雙性黴素B、金色制黴素、菲律賓菌素、光明黴素或彼等之組合。
  10. 根據申請專利範圍第9項之方法，其中該多烯殺真菌劑為鏈黴菌素。
  11. 根據申請專利範圍第8-10項中任一項之方法，其中該施予係施至大豆種子、大豆根部、或大豆生長或即將種植大豆的土壤、或彼等之組合。
  12. 根據申請專利範圍第8-10項中任一項之方法，其 中該多烯殺真菌劑係以25ppm至50ppm之濃度施予。
  13. 根據申請專利範圍第8-10項中任一項之方法，其中該多烯殺真菌劑係包括在包含該殺真菌劑及農業上可接受之載劑的組成物中。
  14. 根據申請專利範圍第8-10項中任一項之方法，其中該多烯殺真菌劑不包含通式(I)組成之化合物： 其中：p等於1、2、3或4之整數；q等於1、2、3、4或5之整數；各個X係獨立選自由下列者所組成之群組：鹵素、烷基和鹵烷基，惟至少一個X為鹵烷基；各個Y係獨立選自由下列者所組成之群組：鹵素、烷基、烯基、炔基、鹵烷基、烷氧基、胺基、苯氧基、烷硫基、二烷基胺基、醯基、氰基、酯、羥基、胺基烷基、苯甲基、鹵烷氧基、鹵磺醯基、鹵硫烷基、烷氧基烯基、胺基烷基、苯甲基、鹵烷氧基、鹵磺醯基、苯磺醯基和苯甲基磺醯基。
  15. 一種經處理之大豆種子，其包含以多烯殺真菌劑包覆之大豆種子。
  16. 根據申請專利範圍第15項的經處理之大豆種子，其中該多烯殺真菌劑為鏈黴菌素、耐絲菌素、雙性黴素 B、金色制黴素、菲律賓菌素、光明黴素或彼等之組合。
  17. 根據申請專利範圍第16項的經處理之大豆種子，其中該大豆種子係以鏈黴菌素包覆。
  18. 根據申請專利範圍第15-17項中任一項的經處理之大豆種子，其中該大豆種子不包含通式(I)組成之化合物： 其中：p等於1、2、3或4之整數；q等於1、2、3、4或5之整數；各個X係獨立選自由下列者所組成之群組：鹵素、烷基和鹵烷基，惟至少一個X為鹵烷基；各個Y係獨立選自由下列者所組成之群組：鹵素、烷基、烯基、炔基、鹵烷基、烷氧基、胺基、苯氧基、烷硫基、二烷基胺基、醯基、氰基、酯、羥基、胺基烷基、苯甲基、鹵烷氧基、鹵磺醯基、鹵硫烷基、烷氧基烯基、胺基烷基、苯甲基、鹵烷氧基、鹵磺醯基、苯磺醯基和苯甲基磺醯基。
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