TWI295294B

TWI295294B - Process for producing high 2-o-α-d-glucopyranosyl-l-ascorbic acid content product

Info

Publication number: TWI295294B
Application number: TW090113958A
Authority: TW
Inventors: Yamazaki Hiroshi; Toshio Miyake
Original assignee: Hayashibara Biochem Lab
Priority date: 2000-06-08
Filing date: 2001-06-08
Publication date: 2008-04-01
Also published as: EP1162205A3; KR100776895B1; DE60100642T2; US20010051711A1; KR20010111053A; EP1162205B1; DE60100642D1; US6576446B2; EP1162205A2

Description

1295294 Α? Β7 五、發明説明（1 ) 本發明的背景本發明的節圍本發明關於一種用於生產高含量2 — ◦一 0 — D — 口比喃葡糖基- L -抗壞血酸（除非另外指明，以下縮寫爲' aG-ΑΑ〃），一種安定人之L一抗壞血酸，之產物的新穎方法。先前技藝的說明如曰本專利公開公報案號1 8 3，4 9 2 / 9 1中所揭示的，已知a G - A Α具有下列令人滿意之物理化學性質： . (1 )其大體上不會顯示出直接的可還原性，但具有相當高的穩定性，且不像L -抗壞血酸般，即使是與胺基酸、肽類、蛋白質、脂類、醣類、或生理學上活性物質共同存在時，它也不會引起 '米勒"（ millard)反應及不必要的反應，或者，甚至是可穩定這些物質； (2 )當水解的，它會形成L -抗壞血酸，然後呈現出大體上與L -抗壞血酸相同之還原和抗氧化作用； (3 ) 其可由體內酵素很容易地水解成L -抗壞血酸和D -葡萄糖以呈現出L -抗壞血酸固有的生理活性，並且能加強維他命E和P (當一起使用時）的生理學性質； (4 ) 其安全性很高，因爲雖然它可經天然方式形成少量 C請先聞讀背面之注意事項存填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0x297公釐） Μ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1295294 A7 ___B7 _ 五、發明説明（2 ) ’但當口服時，它可在體內代謝成L -抗壞血酸及如：α -葡糖基醣化合物類的物質； (5 )雖然結晶型之a G — ΑΑ係非一或大體上非—收濕性的’但其在水中具相當高之溶解速率和溶解度，且因此其具有做爲維他命C -增濃劑，口味改良劑，酸加入劑，或粉末型顆粒型或錠劑型維他命製劑中之安定劑等優點；且可用於食物和飮料，如：奶油夾心餅巧克力，口香糖，即溶果汁和即溶調味料中；及 (6 ) 其具令人滿意之處理能力，因爲結晶型之a G - A Α係非-或大體上非-收濕性的，且可維持其自由流動的能力，而不會在貯存期間固化。與非結晶型a G — A A相比，結晶型a G — A A可以減少很多在其包裝，運送和貯存過程中所需之物質和勞力的花費。 a G - A A現已廣泛地用於主要是化妝品的領域中，並且被認爲可在其它不同領域，如：食品，藥學，飼料，寵物食品，和工業物質中大量使用。在日本專利公開公報案號1 8 3，4 9 2 / 9 1中揭示了一種用來製備a G - AA之工業方法的代表性實例。此方法，如第1圖中所示，包含了下列步驟：將含L 一抗壞血酸和α -葡糖基醣化合物的溶液與一醣一轉移酶或葡糖澱粉酶（E C 3 . 2 . 1 . 3 )進行接觸以形成a G〜 ΑΑ，來取得含有a G — AA，完整的L 一抗壞血酸，α (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁〕 -訂線秦本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X297公釐） -5 - 1295294 A7 B7 五、發明説明（3 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -葡糖基醣化合物，及其它從α -葡糖基醣化合物製造出之醣類的溶液；過濾所產生之溶液；將濾液利用陽離子交換樹脂（Η -型）來進行管柱色層分析法以藉此將礦物質從濾液中移除；將去礦物質化的溶液利用陰離子交換樹脂來進行管柱色層分析法以將a G - A Α和L -抗壞血酸吸附在陰離子交換樹脂上；以水淸洗陰離子交換樹脂來將醣類從管柱中移除；將a G - AA和L -抗壞血酸從陰離子交換樹脂中洗提出；濃縮該溶離液；將濃縮物利用一強酸的陽離子交換樹脂進行管柱分析以使之分餾成富含a G -A Α之分液和富含L -抗壞血酸之分液；將前種分液濃縮成局含重之aG — AA產物。在上述利用陰離子交換樹脂的管柱色層分析法中， a G - A A和L -抗壞血酸會從同時樹脂中去吸附，這產生了該與L 一抗壞血酸一起在混合物型式中的α G — AA 。爲了得到高含量之a G - ΑΑ產物，一定要先將含a G - A Α和L -抗壞血酸的溶液濃縮後再分餾成富含α G -A Α的分液及富含L -抗壞血酸的分液。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製如上述，在傳統之製備高含量a G — A A產物的方法中，一定需要利用該包含陰離子交換樹脂和陽離子交換樹脂的二步驟管柱色層分析法，而且，利用陰離子交換樹脂從管柱色層分析中所得來的溶離液必須先濃縮後才能再送入利用陽離子交換樹脂的管柱色層分析中，而，其缺點爲，這些複雜的a G - AA製備過程會降低高含量之a G-A Α產物的產量並增加製造成本。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） ' 1295294 A7 B7 五、發明説明（4 ) 在這些環境下’長久以來人們對於能製造具有相當高之品質的高含量，G - A A產物，並且有令人滿意之可行度，製造成本和產量的工業規模製造方法一直有很大的需求。本發明的摘沭本發明的目的是提供一種能製造出具相當高之品質的咼含量a G - AA產物，並具有令人滿意之可行度，製造成本，和產量的工業規模製造方法。本發明中，、、高含量 aG — AA之產物’ 一詞是指含有至少8 〇% (w/w) (% ( w / w ) 〃以下可縮寫爲％ )之^ G — a A (以車乙燥固體基質（d · s · b ·)計）的高含量- AA 產物，以含至少9 0 %者較佳，而此產物可爲液體、糊狀、固體或粉末之任何型式。考慮到前述問題，本發明者持續硏究一種較簡單之用於製造高含量之產物的方法，此方法係經由將含α G -A Α和L -抗壌血酸之溶液與塡裝在管柱中之離子交換樹脂接觸來進行的。結果，他們發現經由下列步驟可達到此目的：使用陰離子交換樹脂來做爲欲塡裝在管柱中之離子交換樹脂；讓a G - AA和L 一抗壞血酸吸附在陰離子交換樹脂上；將一種做爲流洗液之酸性及/或鹽的水溶液（濃度低於0 . 5 N )送入管柱中以分餾成一種富含α g -A Α的分液及一種富含L -抗壞血酸的分液；然後，再收集前項分液。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1295294 Α7 Β7 五、發明説明（5 ) 如第二圖中所示，根據本發明之用於製造高含量a G 一 A Α之產物的方法，其特徵在於其含有下列步驟：讓一帶有或不帶有葡糖澱粉酶的醣-轉移酶作用在一含L -抗壞血酸及α -葡糖基醣化合物的溶液上以取得一含^ G -A A ’ L -抗壞血酸，及醣類的溶液；將濾液去礦物質化 ;將去礦物質化的溶液（做爲一種物質溶液）與塡裝在管柱中之陰離子交換樹脂接觸以將a G - A A和L -抗壞血酸吸附於樹脂上；以水淸洗樹脂以將醣類從管柱中移除；將一帶有低於0 . 5 N之濃度的酸及/或鹽水溶液送入管柱中以分餾出一富含a G - AA的分液及一富含L 一抗壞血酸的分液；將前種分液枷以濃縮以取得高含量a G -A Α之產物。根據本發明，α G - A Α和L —抗壞血酸可以利用陰離子交換樹脂經由管柱色層分析法而被分開，這使得在如第1圖中所示之傳統製備方法中所必須使用的強酸陽離子交換樹脂管柱色層分析法可以不必再使用了。結果，此方法可製出相當高品質之高含量a G - A A產物，，且此方法具有方便的可處理性，經濟效益，並可製出工業規模的產量。附圖的簡單說明第1圖是種用於製造高含量a G - A A之產物的傳統方法的流程圖。第2圖是種用於製造高含量a G - AA產物之本發明方法的流程圖。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） -8 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1295294 A7 B7 五、發明説明（6 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 第3圖是種關於濃度分佈的洗提曲線，其係經由標繪從管柱中洗提出之a G - AA或L -抗壞血酸的各成分之固體濃度來繪成的，該管柱中裝塡了一種由'Rohm和Haas 公司，美國〃所販售之陰離子交換樹脂 > 安伯來特（ AMBERLITE) I R A 4 1 1 S (〇 Η —型）”，並利用 0 . 1 Ν氫氯酸水溶液來做爲流洗液。第4圖是種關於濃度分佈的洗提曲線，其係經由標繪從管柱中洗提出之a G- ΑΑ或L -抗壞血酸的各成分之固體濃度來繪成的，該管柱中裝塡了一種由vv Rohm和Haas 公司，美國〃所販售之陰離子交換樹脂 ''安伯來特IRA41 IS (〇Η -型）〃，並利用0 . 5 Ν氫氯酸水溶液來做爲流洗液。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製第5圖是種關於濃度分佈的洗提曲線，其係經由標繪從管柱中洗提出之a G - A Α或L -抗壞血酸的各成分之固體濃度來繪成的，該管柱中裝塡了一種由'"Rohm和Haas 公司，美國〃所販售之陰離子交換樹脂 '安伯來特IRA41 IS (〇Η -型）〃，並利用0 . 2 5 Ν氫氯酸水溶液來做爲流洗液。第6圖是種關於濃度分佈的洗提曲線，其係經由標繪從管柱中洗提出之a G - ΑΑ或L -抗壞血酸的各成分之固體濃度來繪成的，該管柱中裝塡了一種由〜三菱化學公司，日本東京〃所販售之陰離子交換樹脂〜廸安（DIAION) (〇Η -型）〃，並利用0 . 2 5 Ν氫氯酸水溶液來做爲流洗液。

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公羞) TgT 1295294 Α7 Β7 五、發明説明（7 ) 符號的說明符號、、—〇—"，、、— _—，，係各指、、 a G - A A " ，v' L· —抗壞血酸〃，及、、醣類〃。本發明的詳細說明用於本發明之物質溶液爲含有a G - A A，L -抗壞血酸’及糖的水溶液。用於製備溶液的方法不應侷限於特定種類，不論是酵素的或合成的方法，只要它們能提供含 a G - A A，L 一抗壞血酸，及醣類的溶液即可使用。這類方法的代表性實例係一種包含了讓醣一轉移酶（加上或不加上葡糖澱粉酶）作用在含L-抗壞血酸和α-葡糖基醣化合物之溶液上的步驟的方法，如：在日本專利公開公報案號1 8 4，4 9 2 / 9 1中所揭示的方法。較合適的情況是本發明中所使用之物質溶液的固體濃度通常爲 1 一 75%(w/w)，以 10 — 70% ( w/w )較佳，以2 0 - 6 0 % ( w/w )更佳，而以 3 0 - 4 0 % ( w/w )最佳。由於L 一抗壞血酸在鹼性環境下很容易分解，此物質溶液最好是設定在酸性的p Η 値，通常是低於7，以ρ Η値爲1 . 〇 - 6 · 5之間較佳，更佳的爲ρ. Η値在1 . 5 - 6 . 0之間。在將物質溶液與陰離子-交換樹脂接觸之前，由於使用到陰離子-交換樹脂（◦ Η -型），因此必須將共同存在於物質溶液中的雜質（如：陰離子，有機酸，及胺基酸）儘可能移除或減本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1295294 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（8 ) 少。 ★ L -抗壞血酸〃一詞在本發明中通常是指游離的l -抗壞血酸並可包含L -抗壞血酸，如L -抗壞血酸之鹼金屬鹽類和鹼土金屬鹽類。在本發明之醣-轉移反應中所使用的L -抗壞血酸不僅包括游離L -抗壞血酸也包括L -抗壞血酸鹽，如：L -抗壞血酸鈉，L -抗壞血酸鈣，及其混合物，只要它們不會防礙本發明。還有，本發明、、 a G - A A 〃一詞不僅是指那些以游離酸型態存在者也包括其鹽類，只要它們不會防礙本發明。本發明中，* α -葡糖基醣化合物〃一詞是指那些可以形成α -葡糖基一 L 一抗壞血酸（包括a G - ΑΑ)者 ’及由等莫耳或更多之a -D -葡糖基殘質連接至L -抗壞血酸上（此連接作用係經由醣-轉移酶之作用來進行的 )所組成之化合物。這類α -葡糖基醣化合物之實例爲“ 麥芽寡糖類，如：麥芽糖、麥芽丙糖，麥芽丁糖，麥芽戊糖’麥芽己糖，麥芽庚糖，及麥芽辛糖；部分澱粉水解產物’如：糊精，環糊精，和直鏈澱粉；及其它，如：液化激粉’膠狀澱粉，和可溶的澱粉。爲了促進a G - A Α的形成’最好是選擇適合所使用之醣-轉移酶的α -葡糖基醣化合物。例如，當使用α 一葡萄糖苷酶（EC3 . 2 . 1 · 20 )做爲醣-轉移酶時，較適合做爲α 一葡糖基醣化合物者爲麥芽寡糖類，如：麥芽糖，麥芽丙糖，麥芽丁糖，麥芽戊糖，麥芽己糖，麥芽庚糖，和麥芽辛糖；DE (右旋糖胃胃）爲約5 〇 - 6 0的糊精及部分澱粉水解產物。當使本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) α4規格（210X 297公釐） -11 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 1295294 A7 B7 五、發明説明（9 ) 用環麥芽糊精右旋糖酐轉移酶（EC2 . 4 · 1.19 )做爲醣一轉移酶時，最好是使用環糊精和部分澱粉水解上產物，如 :膠化澱粉和D E係從低於1至約6 0的糊精。當使用α 一澱粉酶（E C 3 · 2 · 1 · 1 )做爲醣一轉移酶時，較適合使用部分澱粉水解產物，如：膠化澱粉和D Ε從低於 1至約3 0的糊精。在上述醣-轉移酶作用中所使用之L -抗壞血酸的濃度（％ ( w/ w ))通常至少爲1 % ( w/w )，較佳的爲約2 — 3 0 % ( w/w )，而α —葡糖基醣化合物之較佳濃度通常爲約所使用之L -抗壞血酸濃度的〇 . 5 -3 0倍。不管其性質，特性和來源爲何，任何醣-轉移酶都可用於本發明中，只要當它們作用在含L -抗壞血酸和α -葡糖基醣化合物的水溶液上時，能夠形成α -葡糖基- L 一抗壞血酸（如：a G - ΑΑ，其中至少有一 α —葡糖基殘質轉移至L-抗壞血酸之C-2處的醇基團上），而不會將L -抗壞血酸分解即可。例如，α -糖苷酶可做爲本發明中之醣-轉移酶，包括那些：來自動物來源者，如：來自鼠科的腎，老鼠小腸黏膜，及狗和豬的小腸者；來自植物來源者，如：來自稻米種籽和玉米種籽者；和來自細菌來源者，如··來自毛黴屬和青黴菌屬的黴菌和釀母菌屬的酵母菌。其它醣-轉移酶（也就是環麥芽糊精右旋糖酐轉移酶）的實例包括那些來自桿菌屬和克雷伯屬之細菌來源者，而其它醣-轉移酶（也就是α -澱粉酶）的實例爲本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、?τ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1295294 Α7 Β7 五、發明説明（彳〇) 那些來自桿菌屬之細菌來源者。這些醣-轉移酶不必一定要是純化的型式，且那些爲未經加工型式者也可用於本發明中。然而，這些未經加工的酵素最好在使用前先經由傳統方法來純化。在本發明中，可使用商品化的醣-轉移酶。使用時，上述之酵素可以任意地以一固定的型式來使用。任何用於醣-轉移酶反應的P Η値和溫度皆可用於本發明中只要該醣-轉移酶能作用在L -抗壞血酸和α -葡糖基醣化合物上來形成a G -A A :通常，ρ Η値係在從3 — 9之間，以在4 一 7之間較佳，而溫度約爲2 0 °C至約8 0 °C。由於所使用之酵素量和酵素反應所需的時間彼此密切相關，因此，從經濟觀點看，酵素的量通常係從上述範圍中選出，以在約3 -8 0小時之間完成該酵素反應。當以固定型式使用時，該醣-轉移酶可以很方便地以一批批的方式使用或以連續的方式使用。在酵素反應的期間，L -抗壞血酸很容易被共同存在於反應系統中的氧所分解，因此，反應最好是維持在減少氧或無氧的情況或是還原的情況下，且，如需要時，最好可有硫脲和亞硫酸鹽共同存在。由於L -抗壞血酸易被光分解，因此最好是在黑暗的或光遮蔽的情況下進行反應。如需要時，可讓具有醣-轉移力的微生物與L -抗壞血酸和α -葡糖基醣化合物共同存在於生長介質中，以藉此形成含a G - ΑΑ和α -葡糖基一 L 一抗壞血酸。經由醣-轉移酶之作用所形成的α —葡糖基- L -抗 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） _巧3 1295294 A7 B7 五、發明説明（11 ) 壞血酸是一種由一或多個連接至L -抗壞血酸之C - 2處的醇基團的α — D -葡糖基殘質所組成的。經由、、α - 1 ，4連接〃所連接之L -抗壞血酸α — D —葡糖基殘質的數目通常爲約2至7。這類α -葡糖基一 L -抗壞血酸的實例中：aG — ΑΑ，2 —〇一a— D —麥芽糖基—L — 抗壞血酸，2 —〇—α — D —麥芽丙糖基—L —抗壞血酸，2 —〇一α — D—麥芽丁糖基—L —抗壞血酸，2 —〇一 a — D —麥牙戊糖基—L 一抗壞血酸’ 2 —〇—a — D —麥芽己糖基—L —抗壞血酸，及2 - 〇 — a— D -麥芽庚糖基- L -抗壞血酸。當利用α -葡萄糖苷酶來形成α —葡糖基一 L 一抗壞血酸時，通常僅有a G-AA形成。根據所使用的醣-轉移酶和反應條件，^ -葡糖基-L -抗壞血酸（如·· 2 — 0 - α - D -麥芽糖基—L 一抗壞血酸及2 - 〇 - a — D -麥芽丙糖基一 L 一抗壞血酸）可與 a G — ΑΑ —起形成。在利用環麥芽糊精右旋糖酐轉移酶或^ -澱粉酶來形成α —葡糖基—L —杭壞血酸的情況中，α —葡糖基一 L -抗壞血酸（其較那些以α -葡萄糖苷酶製出者具較多的 α — D -葡糖基殘質）通常可與a G - ΑΑ —起形成。一般而言，當使用環麥芽糊精右旋糖酐轉移酶時，可形成由約1至7個α — D -葡糖基殘質所組成之連接至L -抗壞血酸的^ -葡糖基-L -抗壞血酸’而當使用α -激粉酶時，則有形成較少型式之^ _葡糖基—L 一抗壞血酸的趨勢。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -14 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •續| 、?! 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1295294 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（12) 合倂使用醣-轉移酶和葡糖澱粉酶以形成a G - A A 時可增加a G - A A的產量。——般而言，爲了增加醣一轉移反應的效率，最好讓醣-轉移酶先作用在L -抗壞血酸和α-葡糖基醣化合物上以將等莫耳或更多之α—D-葡糖基殘質轉移至L -抗壞血酸以形成α 一葡糖基- L -抗壞血酸和a G - A Α的混合物，然後，讓葡糖澱粉酶作用在所產生的混合物上以水解連接在除a G - A A外之α -蔔糖基-L -抗壞血酸上的α — D -葡糖基殘質，並形成和累積a G — A Α。用於本發明中之葡糖澱粉酶包括那些來自微生物、植物和動物來源者。通常，來自麯菌屬和根黴菌屬之細菌的葡糖澱粉酶商品在使用上很方便。在此情況中，-殿粉酶（E C 3 · 2 . 1 · 2 )可任意地與這類葡糖澱粉酶一起使用。在本發明中所使用的陰離子交換樹脂方面，任何以凝膠，巨-網狀（MR-型），或巨大多孔型式之構造爲母構造者皆可使用，且任何一種強一或弱鹼性苯乙烯（苯乙烯-二乙烯苯共聚物）和丙烯酸陰離子交換樹脂皆可做爲基礎物質。任何爲強鹼（I和I I型），中性，或弱鹼型式之陰離子-交換樹脂都可用於本發明中，只要它們具有陰離子-吸附的能力。現在可購得之這類陰離子交換劑的實例有：、安伯來特I R A 6 7 〃，、安伯來特IRA96SB 夕，Λ、安伯來特I R A 4 0 0 〃，〜安伯來特IRA401B" ，〜安伯來特I R A 4 0 2 "，安伯來特IRA402B"， (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ·!· 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） _ 5 - 1295294 Α7 Β7 五、發明説明（13)

、、安伯來特IRA410” ，、、安伯來特〗RA411S 夕，、、安伯來特I R A 4 4 Ο B "，、、安伯來特A45 8RF "，、、安伯來特I R A 4 7 3 "，、、安伯來特IRA478RF" ，、、安伯來特I R A 9 0 0安伯來特1RA904"，、、安伯來特I R A 9 1 0 C T "，、、安伯來特IRA958 "，、、安伯來特I R A 5 0 0 7，，，、、安伯來特1RA6050RF"， "安伯來特X E 5 8 3 "及、、安伯來特c G 4 〇〇〃，它們全都是由、、Rohm和Haas公司，美國賓州〃所販售；及、、狄安（DIAION)SA10A"，、、狄安 S A 1 1 A "，、、狄安 S A 1 2 A "，、、狄安 2 0 A "，、、狄安 S A 2 1 A "，、、狄安 N S A 1 〇〇 " ，v、狄安 P A 3 0 8 "，、、狄安 P A 3 1 2 r/ ，、、狄安 P A 3 1 6 " ， v、狄安 P A 4 0 8 "，、、狄安 P A 4 1 2 "，、、狄安 P A 4 1 8 "，、、狄安 Η P A 2 5 "，、、狄安 Η P A 7 5 "，狄安 W A 1 0 " ，、、狄安 W A 2 0 〃，、、狄安 w A 2 1 J 〃，、、狄安 WA30〃，及、、狄安DCA11〃，它們全都由三菱化學工業股份有限公司，日本東京〃，所販售，★都威克士 (DOWEX)SBR"，、、都威克士 SBR — P — C" ，、、都威克士 SAR〃，、、都威克士 MSA - 1〃 ’ v都威克士 M S A — 2 "，、、都威克士 M S A - 2 2 β ，、、都威克士 M S A . — 6 6 〃，、、都威克士 M W a — 1 " ， a 都威克士 MONOSPHERE550A"，、、都威克士 M AR AS 〇N A "，、、都威克士 MARAS0NA2"，、、都威克士 1 X 2 "，都威克士 1X4〃，、、都威克士 1χ8〃，、、都威克士 2X8 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） _，6 _ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、τ Τ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1295294 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（14) 〃，它們都是由、、道化學公司’美國，密西根州〃所販售。在這些陰離子交換劑間，、安伯來特IRA411S〃，、迪安 W A 3 0 〃，、、安伯來特I R A 4 7 8 R F 〃，和、、安伯來特I RA9 1 0 CT 〃較適合用於本發明中因爲它們有相當高之a G - A A和L -抗壞血酸的吸收力和可分離性。關於陰離子交換樹脂的離子型式方面’適合使用的爲那些以〇H，C 1和CH30型式存在者。在本發明中，考慮到其吸收力，較有利的爲以〇Η型存在者。本發明中所使用的流洗液包括一或多種酸類’如：氫氯酸，硫酸，硝酸，和檸檬酸，以及其水溶液；和一或多種鹽類，如：氯化鈉，氯化鉀，硫酸鈉，硝酸鈉，硝酸鉀，檸檬酸鈉，和檸檬酸鉀，及其水溶液。可將一或多種上述之酸類和鹽類以合適的組合來使用。當使用水溶性鹽溶液做爲流洗液時，含在溶離液中，已從裝塡了陰離子交換劑之管柱中去吸附並洗提出之^ G - A Α通常爲鹽的型式。如需要時，可將這類^ G - A A去礦物質化並利用陽離子交換劑（H-型）轉化成aG-AA的游離酸型式。當使用水溶性酸溶液做爲流洗液時，含在洗提液中，已經去吸附並從裝塡了陽離子交換劑之管柱中洗提出來之a G -A Α通常爲游離酸的型式。在做爲本發明中之流洗液的7jc 溶性酸性溶液中，考慮到經濟方面的問題及陰離子交換樹脂之再生作用的容易性時，氫氯酸的水溶液較好用。做爲流洗液之酸類或鹽類的水溶液之濃度不必一定要設定在固定的濃度，且如需要時，可以以階度洗提的方式來一步步 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） _ 17 - 1295294 A7 B7 ____ 五、發明説明（15) 地或線性改變。曾用來去吸附和溶離a G - A A和L -抗壞血酸的流洗液可以回收並重覆使用以降低生產成本。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 利用前述之物質溶液，陰離子交換樹脂，和溶離液來製造高含量a G - A A之產物的方法如下：如上述，用於本發明中之物質溶液通常含有aG - AA，L -抗壞血酸，及α -葡糖基醣化合物，還有來自α -葡糖基醣化合物之D -葡萄糖，如α -葡糖基醣化合物之水解產物的醣類，及鹽類。因此，首先將物質溶液進行過濾，然後利用帶有或不帶有活性碳之陽離子交換樹脂（Η -型）來將其去礦物質化。將該去礦物質化溶液與塡裝在管柱中之陰離子交換樹脂進行接觸以將a G - A Α和L 一抗壞血酸吸附於其上，再以水淸洗管柱以移除醣類，將濃度低於0 . 5 N 的酸及/或鹽水溶液做爲流洗液送入管柱中以分餾成富含 a G - A A的分液及富含L -抗壞血酸的分液，並收集前項分液。在此情況中，從經濟觀點來看，分離出來之完整 L -抗壞血酸和α -葡糖基醣化合物可以重覆做爲下一個醣-轉移反應中的物質。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明.中所使用的管柱可以以一或多個具有合適形狀、大小，和長度之管柱，以連續串聯或並行連接的方式來建構。當使用複合管柱時，它們可以經連續串聯來產生合適之管柱床-深度。物質溶液送進陰離子交換樹脂之流連以S V (空間速度）5或更低較佳，以S V 1 - 3更佳。流洗液送進陰離子交換樹脂的流速以S V 1或更低較佳，以S V 〇 . 3 — 0 · 7更佳。富含a G — A Α之分液和富 ^紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨〇><297公釐） 77rT" 1295294 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（16) 含L -抗壞血酸之分液從管柱中洗提出的次序可以經由改變所使用之陰離子交換樹脂來改變，尤其是，可經由變化陰離子交換樹脂之母構造和官能基來改變。在管柱色層分析法進行期間中的溫度若考慮到溫度對a G - A A之分解作用的影響時，通常係在0 - 8 0 °C之間，以1 0 - 4 0 °C較佳，而以1 5 - 2 5 °C更佳。當使用濃度至少爲 0 . 5 N的酸及/或鹽水溶液時，a G — A A會很快且容易地從陰離子交換樹脂中去吸附並從管柱中洗提出來，然而，L 一抗壞血酸也會去吸附並與aG — AA —起洗提出來，而導致其分離不完全，因此，較難取得具相當高純度和產量之富含a G - A A的分液。當使用其全部濃度低於 0 . 5 N (以 0 · 1 — 0 . 4 5 N 較佳，以 0 · 2 — 0 . 3 N更佳）之酸和/或鹽的水溶液來做爲流洗液時， a G - A A和L -抗壞血酸會各自從裝塡在管柱中之陰離子交換樹脂，以其各自之增濃分液型式去吸附並洗提出來，而產生充份的分離作用，並可收集到其令人滿意之高產量的增濃分液。在這種管柱色層分析法中，即使是使用濃度低於0.1N之酸及/或鹽的水溶液也可以產生富含 a G - AA之分液和富含L 一抗壞血酸之分液，然而， a G - A Α和L -抗壞血酸從陰離子交換樹脂洗提和去吸附所需的時間有延長的趨勢，且所產生之a G - A A濃度有降低的趨勢。將已從裝塡在管柱中之陰離子交換樹脂去吸附和洗提出來之富含a G - A A的分液純化並濃縮成超飽和溶液之 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -- 1295294 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 _ B7 _五、發明説明（17 ) 後，可幫助其形成α G 一 A A結晶並產生結晶型之高含量 a G - AA的產物。而富含L -抗壞血酸的分液可重新使用來做爲下一個酵素反應中的物質’以形成a G - ΑΑ。重覆使用不完全分離之a G - A Α和L 一抗壞血酸的混合分液來做爲本發明中的物質溶液可以有助於產生高產量之高含量a G - AA產物和高含量L 一抗壞血酸產物。用於製造a G - A Α的本發明之方法在可處理性和製造成本上有令人滿意的優點，並可製出具有令人滿意之高品質的高含量a G - A A產物，其純度至少約9 0 % (以乾燥固體基質（d . s _ b ·計），可產生之aG — AA 的產量至少爲物質溶液中之^ G — AA的8 5%，而以至少9 0 %較佳。由此所得之高含量a G - AA產物爲安定之高含量L -抗壞血酸產物，其可任意做爲維他命C -增濃劑，安定劑，品質改良劑，抗氧化劑，生理學上的活性物質，及紫外線吸收劑，.以用於食品製造、化粧品、藥品、飼料、寵物食品、工業材料等廣大的領域中。下列實驗詳細說明本發明：實驗流洗液之濃度對吸附在陰離子交換樹脂上之j G - A Α和 L -抗壞血酸的分離和洗揋作用的影響經由加熱，將二份重之糊精（D E約6 )溶於6份重之水中，並在還原條件下，將溶液與一份重之L -抗壞血本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -20 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂線屬 1295294 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（18) 酸混合在一起。將混合物保持在P Η 5 · 5和6 0 °C ’並與4 0單位/克糊精之環麥芽糊精右旋糖酐轉移酶（由曰本，岡山，Hayashibara生化實驗室公司所販售）混合在一起，進行酵素反應2 4小時。以U F膜來過濾反應混合物以移除剩餘的酵素，並將瀘液調整爲5 5 °C，P Η 5 . 0 ，然後，將濾液與1 0單位/克糊精之葡糖澱粉酶（由曰本，東京，Seikagaku-Kogyo公司所販售）混合在一起，進行酵素反應2 4小時。將所產生之反應混合物加熱以使剩餘的酵素去活化並脫色，然後，以活性碳進行過濾，再濃縮所產生的濾液以產生約4 0 %的濃度。以高效液態色層分析法（Η P L C )，於下列條件下分析該濃縮物的固體組成物：使用的Η P L C儀器是、L C — 6 Α 〃，由曰本東京Shimadzu分司所販售，使用的管柱是〜S T R管柱〇D S — ΙΓ ，由日本東京Shimadzu Techno硏究公司所販售；流洗液是0.02M NaH2P〇4-H3P〇4( PH2.0);流速是0·5毫升/分；而差示折射計是使用由日本東京Tosho公司所販售之〜R I - 8 0 2 0 " 。結果，濃縮物之固體組成物含有的3 1 %之a G - A A ，約2 1 %之L -抗壞血酸，約3 1 %之D -葡萄糖，和約1 7 %之α -葡糖基醣化合物。上述濾液係藉著將其以 S V 2的速度送入一強酸性陽離子交換樹脂的管柱（內部直徑爲2 0毫米，長度爲3 5 0毫米，內部管柱溫度爲 25t：，裝塡有100毫升之、迪安SK1B〃（Η -型 )中來去礦物質化，而該管柱係由日本東京三菱化學公司本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） " (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、τ 1295294 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（19) 所販售，且內部管柱的溫度係維持在2 5 °C。將所產生之濃度爲3 0%，每份3 3 0克的溶離液各在SV 2的速度下送入7個管柱中，此7個管柱各具有2 0毫米之內部直徑，6 5 0毫米之長度，且內部管柱溫度爲2 5 °C，其中裝塡有200毫升之 >安伯來特IRA411S (H -型 )〃（此係由美國賓州& Rohm & Haas公司〃所販售之陰離子交換劑）。然後，將1 0 0 0毫升水在S V 2的速度下送入各管柱中來淸洗該陰離子交換劑，以將未被吸附之成分從各管柱中洗提出來。在S V 〇 . 5的速度下，將 0_1Ν，〇.15Ν，〇.2Ν，〇.3Ν，〇·4Ν ，0 4 5 Ν和〇 · 5 Ν之水溶性氫氯酸溶液各送入七個管柱中，當從各管柱出口洗提出來之溶離液的固體濃度達到 .0 · 2 %或更高之後便開始進行溶離液的分餾。此分餾作用持續進行，直到各溶離液各自完全被下列濃度之水溶性氫氯酸溶液所取代：〇 · 1 Ν，〇 . 1 5 Ν，〇 · 2 Ν， 0 · 3Ν，〇 · 4Ν，045Ν 或〇 · 5Ν。各分餾係於每2 0分鐘的間隔期，利用分液收集器來進行，並採取樣本’在類似於上述之Η P L C上分析各分液之固體組成物。第3圖和第4圖各顯示濃度分佈的洗提曲線，此曲線係根據結果，經由標於各溶離液中之各成分的固體濃度來製成的，其中使用0 . 1 Ν或0 . 5 Ν水溶性氫氯酸溶液來做爲流洗液。在第3或第4圖中，縱軸爲各溶離液中之各成分的固體濃度（％ ( w / w ) ) ，d · s . b );橫軸爲來自管柱的洗提容積（毫升）；標幟、、一〇一〃，、、— 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) ^99 " (請先閎讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂線- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1295294 A7 B7 __五、發明説明（20) φ --，和、、—△一"各表示aG — AA，L 一抗壞血酸，和醣類。從第3圖中可知’在使用〇 · 1 N水溶性氫氯酸溶液的情況下，令人滿意地將α G 一 A A和L 一抗壞血酸分離開，從管柱出來之a G - A A和L 一抗壞血酸的洗提速度有降低的趨勢，且所產生之富含α G__AA的分液及富含L -抗壞血酸的分液之濃度有點減低的傾向。從第 4圖中可知，當使用0 · 5 N水溶性氫氯酸溶液來進行去吸附時，與使用具相當低濃度之氫氯酸水溶液的情況相比，來自管柱之a G - AA和L —抗壞血酸的洗提速度會增加，因而導致a G - ΑΑ和L 一抗壞血酸的分離不完全，而使高含量a G - A Α分液的產量降低。從第3圖和第4 圖中的結果可淸楚得知：大部分的醣類均未吸附在陰離子交換樹脂上，而僅有一點吸附於其上，且由此與流洗液一起洗提出來。雖然圖中未具體地顯示出來，但從圖中可知在使用 0 · 1 - 0 . 4 5 N之水溶性氫氯酸溶液的情況下，^ G - ΑΑ和L -抗壞血酸可以令人滿意地被分離並從管柱中洗提出來，尤其是，在使用0 . 2 - 0 · 3 Ν之水溶性氫氯酸溶液的條件下，其分離和洗提作用會更有效率。從使用水溶性氫氯酸溶液來做爲流洗液的情況中所得到的結果可應用到那些以它種酸類、鹽類或其組合體之水溶液來取代上述水溶性氫氯酸溶液的情況中；也可應用到那些使用其它型態之陰離子交換樹脂的情況中。下列實例詳細說明用於製造本發明之高含量α G - i紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） - 23: — (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T % 1295294 A7 __ B7 五、發明説明（21) A A產物的方法：實例1 肢於製備高含量a G- AA之產物的方法在與上述實驗中的使用的相同條件下（但以0 . 2 5 Ν水溶性氫氯酸溶液做爲流洗液），取得高含量a G -A Α產物。將此實例中之來自陰離子交換劑的溶離液依類似的上述實驗的方法進行分餾，並採取樣本以在Η P L C 上分析該固體組成物。第5圖是種濃度分佈的洗提曲線，其係根據分析數據，經由標繪在各溶離液中之各成分的固體濃度而繪成的。在第5圖中，縱座標顯示出在各溶離液中，各成分對固體內容物的固體濃度（％ ( w /w ))， d · s . b .，橫座標顯示出來自管柱之洗提體積（毫升 );標幟；、—〇—"爲a G - A A ;標幟、、—φ —"爲 L —抗壞血酸；而標幟△一〃爲醣類。此實例中，在所得之局含量a G - AA產物中所含有的a G - AA純度約9 3 %，d · s · b ·，而產量爲約物質溶液中之α G - A Α含量的9 2 %。從第5圖中可明顯得知大部分的醣類並未吸附在陰離子交換劑上，而僅有一點吸附於其上，並從此跟著流洗液洗提出來。實例2_ 用於製備高含量a G - AA之產物的方法經由加熱以將二份重之糊精（D Ε約6 )溶於6份重本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（210X297公釐） 24 -' 雄~ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1295294 A7 _____ B7 _ 五、發明説明（22) 的水中，並在還原的情況下，將溶液與一份重的L -抗壞血酸混合在一起並進一步與4 0 0單位/克糊精之環麥芽糊精右旋糖酐轉移酶（由日本岡山Hayashibara生化實驗室公司所販售）混合在一起，然後，在pH5 . 5和60 °C 下，進行酵素反應2 4小時。以U F膜來過濾反應混合物以移除剩餘的酵素，並將濾液調整爲5 5 °C，p Η 5 . 0 ，然後，將濾液與1 0單位/克糊精之葡糖澱粉酶（由日本，東京，Seikagaku-Kogyo公司所販售）混合在一起，再進行酵素反應2 4小時。將所產生之反應混合物加熱以使剩餘的酵素去活化並脫色，然後，以活性碳進行過濾，再濃縮所產生的濾液以產生約4 0 %的固體濃度。在相同於上述實驗所使甩之Η P L C條件下分析該濃縮物之固體組成物，結果，該固體組成物含有的3 1 %之a G - A A，約2 1 %之L —抗壞血酸，約3 1 %之D —葡萄糖，和約 1 7%之α -葡糖基醣化合物。而上述已藉著活性碳來脫色並過濾好的瀘液係經由在S V 2的速度下送入一裝塡有 100毫升〜迪安8仄16(11型）〃（一種強酸性陽離子交換劑，由日本東京三菱化學公司所販售）的管柱（內部直徑2 0毫米，長度爲6 5 0毫米，內部管柱溫度爲 2 5 °C )中，來進行去礦物質的作用，然後再將1 〇〇〇毫升水，在S. V 2的速度下送入管柱中以淸洗之，以將未吸附的成分從交換劑中去吸附並洗提出來。然後，將做爲流洗液之0 . 2 5 N水溶性氫氯酸溶液在S V 〇 . 5的速度下送入管柱中，當從各管柱出口洗提出來之溶離液的濃本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ~25 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 線·- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1295294 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7 五、發明説明（23) 度達到0 · 2 %或更高後，便開始收集溶離液；並持續進行到溶離液被水溶性0 . 2 5 N氫氯酸溶液所取代。利用分液收集器，將溶離液於每2 0分鐘的間隔期進行分餾和採樣，並將各樣本之固體組成物在類似於上述實驗之 Η P L C上進行分析。第6圖顯示出一濃度分佈的洗提曲線，其係藉由標繪各溶離液中之各成分的固體濃度來繪成的。從第6圖中明白得知，a G — A Α和L 一抗壞血酸之洗提順序與實例1中的相反，這是因爲本實例中使用了與實例1不同的陰離子交換劑，而類似於實例1，a G -A Α和L -抗壞血酸的分離令人滿意，並可經由收集所需要之富含a G - AA的分液得到高a G — AA含量之產物在第6圖中，縱軸爲各成分對各溶離液中之固體含量的固體濃度（％ ( w / w )，橫軸來自管柱的洗提容積（毫升 );標幟ν "爲a G — A A ;標幟—❿—〃爲L -抗壞血酸；標幟、—△一〃爲醣類。從第6圖中明白得知，a G - AA和L -抗壞血酸可令人滿意地從陰離子交換中去吸附並洗提出來，且經由收集所需要之富含a G -ΑΑ的分液可產生高含量aG — ΑΑ之產物。含aG -A A之產物的純度約爲9 3 %，s . d · b .，且其產量約爲物質溶液中之a G — A A含量的9 0 %。從第6圖中可明白得知，大部分的醣類均未吸附在陰離子交換樹脂上 ’而僅有一點吸附於其上，且由此與流流液一起洗提出來 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 場—

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -26- 1295294 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（24) 實例3 用於製備高含量a G - A A之產物的方在實例2中所使用的類似條件下來製造高含量α ^ 一 A Α之產物，但··使用裝塡有、、迪安s κ 1 B ( Η -型） r/ (一種由日本東京三菱化學公司所販售之強酸性陽離子交換劑）的管柱（內部直徑爲4 0 0毫米，長度爲 1 0 0 0毫米）來進行去礦物質化作用；以裝塡有、、安伯來特I R A 9 1 0 C T (〇Η —型）"（由美國賓州Rohm & H a a s公司所販售之陰離子交換劑）的管柱（內部直徑爲 5 6 0毫米’長度爲10 0 0毫米，內部管柱溫度爲2 5 °C )來做爲陰離子交換劑；且以〇 . 3 N水溶性硝酸溶液做爲流洗液。該高含量a G - A A之產物爲液態，純度約爲9 2% ’且a G — AA之產量約爲物質溶液中之a G -A A含量的9 0%。將液態局含量a G — A A之產物在真空器中濃縮成其固體濃度約爲7 6 %的溶液，將其置於一結晶器中，與做成晶種之1 % d . s . b .的a G — A A 結晶混合在一起，並將溫度維持在4 0 °C下，然後，於二天的期間內，在溫和的攪拌條件下適度地將其冷卻至2 5 t，再利用藍型離心機來將之進行分離。經由噴灑少量水來淸洗所產物的結果，再接著收集結晶型的a G - A A，以取得約度約9 9 % . d . s . b ·之高含量a G — A A 的產物。實例4 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 27 1295294 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（25) 用於製備高含量a G-AA之產物的方法在類似於實例2中所使用的條件下製造高含量a G -A Α之產物，但使用0 . 4 5 Ν水溶性氫氯酸溶液做爲流洗液。類似於實例2中，a G - A A和L 一抗壞血酸可以以令人滿意的方式從裝塡在管柱中之陰離子交換劑中洗提出來。該於此實例中所得之高含量^ G — A A產物含有純度約 90%，d · s · b 之 aG — AA，且 aG — AA 之產量約爲在物質溶液中的a G -八、含量之91%。實例5 用於製備高含量a G - ΑΑ之產物的方法於在實例2中所使用的類似條件下製造高含量a G -ΑΑ之產物，但：使用裝塡有ν'迪安SKIS (Η —型）〃（一種由日本東京三菱化學公司所販售的強酸性陽離子交換樹脂的管柱（內部直徑8 0 0毫米，長度16 0 0毫米）來進行去礦物質化作用；以裝塡有v'安伯來特 IRA47 8RF〃（一種由美國賓州，Rohm & Haas公司所販售之陰離子交換劑）的管柱（內部直徑1 2 0 0毫米，長度 1 6 0 0毫米，內部管柱溫度爲2 )來做爲陰離子交換劑；且以0 . 2 N水溶性氯化鈉溶液做爲流洗液。該高含量a G — AA產物爲α G — AA的鈉鹽型（a G — AA -N a )，含有約aG — AA — Na純度約爲90%，且 a G - A A — N a的產量約爲物質溶液中之α G — A A -N a的含量之9 0 % (此爲莫耳比例）。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -28- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 線一 1295294 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 __ 五、發明説明（26) 〔本發明的效果）如上述，本發明能經由包含下列步驟的方法來製造出產量相當高之高含量a G - A A的產物及高含量丄-抗壞血酸的產物：將做爲物質溶液之含有a G - A A，L 一抗壞血酸，和醣類的溶液與裝塡在管柱中之陰離子交換樹脂進行接觸，以將a G - A A和L -抗壞血酸吸附在陰離子交換劑上；以水淸洗交換劑便從該處移除醣類；將做爲流洗液之酸性及/或鹽水溶液（濃度低於0 · 5 N )送入管柱中以分餾出富含a G - A A之分液和富含L -抗壞血酸的分液；並收集前項分液。在傳統之製備高含量a G -A Α產物的方法中，必須使用到利用強酸陽離子交換劑的管柱色層分析法，及利用陰離子交換劑的前一管柱色層分析法二者，而根據本發明，該利用陽離子交換劑之管柱色層分析法來預先處理的濃縮步驟則可以省略掉，因此，可將a G - A A之製造方法簡化，降低製成本，並產生相當高產量之高含量a G - AA產物。不像傳統方法，本發明之方法並不需要該使用強酸性陽離子交換樹脂的管柱色層分析法，而這使得a G - A Α的產量可從利甩傳統方法所得到之約爲物質溶液中之a G — A A的7 5 - 8 0 %上升至約8 5 %或更高，而以9 0 %或更高較佳。因此，本發明可提供一用於製造高含量α G — AA產物的方法，此方法具有令人滿意之處理能力、製造成本、產量、及品質。該高含量a G - A Α產物可任意做爲安定本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -29 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 線一 1295294 A7 B7 五、發明説明（27) 之高含量L -抗壞血酸產物，維他命C增濃劑、安定劑、品質改良劑、抗氧化劑、生理學上的活性物質，紫外線吸收劑，等，並可用於食品、化妝品、藥品、飼料、寵物食品、工業材料，等不同的領域中。本發明具有如傑出的功能和效果，對於本領域將有極大的貢獻。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂線扇經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） -30 -

Claims

1295294 ψ A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 ..第jpi 1 395 8號專利申請案 |公告_申請專利範圍修正本補充民國96年10月23日修正經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1 · 一種用於製備含有至少80%(w/w)之2 -〇一α -D -吡喃葡糖基-L-抗壞血酸的產物之方法，其係包含下列步驟：將作爲物質溶液之包含2 -〇一 α - D -吡喃葡糖基一 L 一抗壞血酸、L 一抗壞血酸及醣（類）的溶液與裝塡在管柱中之OH-型陰離子交換樹脂接觸以將該2-0- α 一 D -吡喃葡糖基一 L 一抗壞血酸及該L 一抗壞血酸吸附在該陰離子交換樹脂上；以水清洗該陰離子交換樹脂以自其移除該醣（類）；將作爲流洗液之酸及/或鹽的水溶液（濃度低於 0 · 5Ν)送入該管柱中以分級分離富含2 — 〇 - a_D -吡喃葡糖基- L -抗壞血酸的分級液及富含L -抗壞血酸的分級液；及收集該富含2 — Ο — α - D —吡喃葡糖基一 L 一抗壞血酸的分級液以生成含有至少80%(w/w)之2 — 〇 — ^ — D 一吡喃蔔糖基一 L 一抗壞血酸的產物。 2 .如申請專利範圍第1項之方法，其中該物質溶液係經由倂有或不倂有葡糖澱粉酶之醣轉移酶作用於含有L -抗壞血酸及α -葡糖基醣化合物的溶液所獲得的。 3 .如申請專利範圍第1項之方法，其中該物質溶液係經由與Η型陽離子交換樹脂接觸以移除礦物質後所取得 (請先閲讀背面之注意」 —49—, _事項再填寫本頁) 訂本紙張又度逋用中國國家摞準（CNS ) A4規格（210X297公釐）-1 - 1295294 A8 B8 C8 D8 Jr 或 N 六、申請專利範圍的。 4 ·如申請專利範圍第1項之方法’其中該酸係^ $ 多種選自如下群體的酸：氫氯酸、硫酸、硝酸及檸檬酸。 5 .如申請專利範圍第1項之方法，其中該鹽係^ ^ 多種選自如下群體的鹽：氯化鈉、氯化鉀、硫酸鈉、5肖_ 鈉、硝酸鉀、檸檬酸鈉及檸檬酸鉀° 6 ·如申請專利範圍第1項之方法，其中該酸及/_ 該鹽之水溶液濃度爲0·1—0·45N。 7 ·如申請專利範圍第6項之方法，其中該酸及該鹽之水溶液濃度爲0 . 2 — 0 · 8 ·如申請專利範圍第1項之方法，其另包含濃縮及結晶的步驟。 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁} 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）-2 -