WO1995005840A1 - Periodontal disease remedy - Google Patents

Description

明 糸田 歯周組織疾患治療剤 技 ί¾ 分野

本発明 は、 塩基性線維芽細胞成長因子を有効成分 と し て含有す る 歯周組織疾患治療剤な ら び に そ れを用 い る 歯 周組織疾患の治療方法 に 関す る 。 さ ら に詳 し く は、 歯根 膜、 歯槽骨お よ びセ メ ン ト 質な どの歯周組織 に お こ る 疾 患を、 治療の最終 目 標で あ る 再生治癒 ま た は新付着治癒 に導 く こ と を 目 的 と し て用 い る 薬剤 お よ び そ れを用 い る 治療方法 に 関す る 。 技術

歯周 組織疾患の う ち 、 歯周炎 は お も に歯根面 に 集落を 形成す に よ つ て引 き 起 こ さ れ る こ と が明確 に さ れ つ つ め る 現在、 そ の治療 と し て は、 主 と し て ス ケ ー リ ン グ に よ り 機械的 に歯面 に付着 し た プ ラ，ー ク を 除去 し 、 プ ラ ー ク フ リ ー の状態 に 保つ こ と に 重点がお かれて い る 。

ま た、 重篤な歯周炎 に対 し て行な わ れ る 歯周外科療法 は、 同様 に 歯周 ボ ケ ッ ト 内 の歯根面 に付着 し た プ ラ ー ク お よ び歯石 な どの 原因因子な ら び に病的組織を除去す る こ と に よ り 、 口腔清掃を よ り 効果的 にす る 環境 に 改善す る こ と を 目 的 に行な わ れて い る O さ ら に 、 最近で は こ れ ら の療法 に加え て抗生物質 に よ る 化学療法 も 試み ら れて い る ο

し か し、 こ れ ら の療法 は病巣を な く し 歯周炎の進行を 阻止す る が、 破壊 さ れた歯周組織を積極的 に 修復 ま た は 再生 さ せ る も の で は な く 、 術後の治癒形態 は 自 己の 治癒 能力 に依存す る も の で あ る 。

治癒形態 と し て は、 再生 （r e g ene f a t i o n)治癒 ま た は新 付着 (n ew a t t a chmen t)治癒 と 再付着 （r e a t t a chmen t)治癒 に分 け ら れ る 。 再生治癒 と は、 術後 に露出 し た歯根面 に コ ラ ー ゲ ン繊維の埋入 し た セ メ ン ト 質形成 （新付着治癒） が起 き る と と も に、 歯槽骨の再生を と も な う 治癒形態で め る 。

一方、 再付着 と は、 歯根面 に認め ら れ る 長い上皮性付 着あ る い は機能的回復の望 め な い コ ラ ー ゲ ン線維束の歯 根面への集積像を示す治癒形態で あ る 。

従来 よ り 多数の基礎的、 臨床的研究がな さ れて き た が、 術後の治癒形態の多 く は再付着治癒であ り 、 病理組織学 的研究で は再付着の多 く が歯齦縁か ら 根端側方向への上 皮性細胞の侵入 （"wn g rowt h) に よ る 上皮性付着 に よ る も の であ り 、 新付着の起 こ り に く い こ と が示 さ れて い る 。

と く に進行 し た歯周炎で は、 複雑な ポ ケ ッ ト 形成 と さ ま ざ ま な タ イ プの骨破壊を と も な つ て お り 、 高度の 骨吸 収がみ ら れ る ば あ い の骨再生 は不可能であ る 。 ま た、 メ ル ヒ ヤ ー （Me l ch e r) ( メ ル ヒ ャ ー エ ー ェ イ チ ： ジ ャ ー ナ ル ォ プ ペ リ オ ド ン ト ロ ジ ー （ M e 1 c h e r , A . H . ：

J. Pe r i odon t o 1. ) 、 4 7 巻、 2 5 6 〜 2 6 0 頁、 1 9 7 6 ) は、 露出 し た歯根面への新付着を と も な う 歯周組織 の 回復の た め に は歯根膜由 来細胞の増殖が必要で あ り 、 歯根面へ到達す る 細胞が上皮細胞、 歯肉 由来細胞 ま た は 骨由来細胞で あ る ばあ い に は、 長 い接合上皮形成、 歯根 吸収や膝着 （a nky l o s i s) が起 こ る と 報告 し て い る 。

こ れ ら の こ と か ら 、 再生治癒を う る こ と を 目 的 と し て、 ( 1 ) ク ェ ン酸 に よ る 歯根表面の処理、

( 2 ) フ ィ ブ ロ ネ ク チ ン の 局所投与、

( 3 ) 生体適合性の高 い フ ィ ル タ ー を用 い て上皮性細 胞 の 侵入を 阻止 し 、 歯根膜細胞を歯根表面に誘導 す る 「組織再生誘導法 （ G T R 法） J 、

( 4 歯槽骨の 吸収 に対す る 、 種 々 の移植材料を用 い る 骨欠損部位への移植お よ び

( 5 ) 骨形成因子 (B on e Mo r p ho g e n e t i c P r o t e i n) の局 所投与

な どが基礎 も し く は臨床で研究 さ れて い る

し か し 、 （ 1 ) は細胞 に対す る 為害性、 ( 2 ) は高分 子であ る フ ィ ブ ロ ネ ク チ ン の安定性お よ び抗原性、 （ 3 ) は前記 フ ィ ル 夕 一 の摘出 の た め の再手術の必要性、 ま た、 ( 4 ) は移植材料の採取、 保存、 滅菌の繁雑 さ お よ び吸 収性、 ( 5 ) は膠着が生 じ やす い な どの 種 々 の 問題点を 有 し て お り 、 安全性、 剤型化の 容易性お よ び有効性を兼 ね 備 え た歯周組織再生を促進す る 薬剤の 開発が望 ま れて い る 。

本発明 は、 前記安全性お よ び有効性 に す ぐ れた歯周組 織疾患治療剤、 そ れを用 い る 歯周組織疾患の治療方法、 イ ン プ ラ ン 卜 材定着促進剤な ら び に象牙質再生治療剤を 提供す る こ と を 目 的 と す る 。 発明の 開示

本発明 は、 塩基性線維芽細胞成長因子を 有効成分 と し て含有 し て な る 歯周組織疾患治療剤 に 関す る 。

前記課題 に鑑み て、 本発明者 ら は、 塩基性線維芽細胞 成長因子を用 い た ばあ い に歯周組織疾患治療剤 と し て有 効性、 安全性 に す ぐ れ る こ と を見 い 出 し /*- o 本発明 に用 い ら れ る ¾基性線維芽細胞成長因子 （以下 Γ b F G F 」 と い う ） は、 脳下垂体、 脳、 網膜、 黄体、

、 » - 霄 - 副腎、 腎、 胎盤 、 刖 立腺、 胸腺な どの臓器 よ り 抽出 さ れ る も の 、 組換え D N A 技術な どの遺伝子工学的手法で製 造 さ れ る も の、 ま た は臓器 よ り 抽 出 さ れ る b F G F や組 換え D N A 技術な どの遺伝子ェ学的手法で製造 さ れ る b F G F の ァ ミ ノ 酸配列 に お い て ァ ミ ノ 酸が付加 さ れた、 ア ミ ノ 酸の一部が他の ア ミ ノ 酸で置換 さ れ た ま た は ア ミ ノ 酸 の 一部が欠損 し た ム テ ィ ン体で、 線維芽細胞成長因 子 と し て作用 し ラ る ち の を含む o れ ら は単一ま た は そ れ ら の混合物 と し て用 い て も よ い o

前記 b F G F と し て は、 好ま し く は た と え ば W 0 8 7 / 0 1 7 2 8 (特表昭 6 3 - 5 0 0 8 4 3 号公報 ) W 0 8 9 / 0 4 8 3 2 (特表平 2 - 5 0 4 4 6 8 号公報） W 0 8 6 / 0 7 5 9 5 (特表昭 6 3 - 5 0 0 0 3 6 号公 報） 、 W 0 8 7 / 0 3 8 8 5 (特表昭 6 3 - 5 0 1 9 5 3 号公報 ) 、 欧州特許 出願公開第 2 3 7 9 6 6 号明細書 (特開昭 6 3 - 2 2 6 2 8 7 号公報） 、 欧州特許出願公 開第 2 8 1 8 2 2 号明細書 （特開平 2 一 1 9 3 号公報） 欧州特許出願公開第 3 2 6 9 0 7 号明細書 （特開平 2 — 2 0 9 8 9 4 号公報） 、 欧州特許出願公開第 3 9 4 9 5 1 号明細書 （特開平 3 - 6 1 4 9 4 号公報） 、 欧州特許 出願公開第 4 9 3 7 3 7 号明細書 （特開平 5 — 1 2 4 9 7 5 号公報） な ど に 記載の b F G F があ げ ら れ る

こ れ ら の b F G F の う ち 、 W 0 8 7 0 1 7 2 8 に記 載の遺伝子工学的手法で製造 し た配列番号 1 の 1 5 4 個 の ァ ミ ノ 酸配列 を有す る ポ リ ぺ プチ ド お よ び配列番号 2 の 1 5 3 個の ア ミ ノ 酸配列 を有す る ポ リ べ プチ ドが、 安 定性お よ び材料 と し て必要な 量を常 に供給す る こ と が容 易であ る と い う 点か ら と く に好 ま し い。 具体的 に は特表 昭 6 3 - 5 0 0 8 4 3 号公報の実施例 に記載 さ れた よ う に、 ヒ ト の 腎臓の m R N A か ら 調製 さ れた ； l _{g t} 1 0 c D N A ラ イ プ ラ リ ー か ら ゥ シ の 1 . 4 k b 塩基性副断片を 用 い て ヒ ト の塩基性 F G F の c D N A ク ロ ー ン を調製 し 発現ベ ク タ ー を構築 し て前記 ク ロ ー ン を発現す る こ と に よ っ て、 配列番号 1 の 1 5 4 個の ア ミ ノ 酸配列を有す る ポ リ ペ プチ ド は遺伝子工学的手法を用 い て え ら れ る 。

本明細書 に記載 さ れ る 「歯周組織」 と は、 歯の 周 囲の 組織で あ り 、 歯の支持装置で あ り 、 歯根膜、 歯槽骨、 セ メ ン ト 質、 歯肉、 口 腔粘膜で構成 さ れて い る 組織を意味 す る 。

「歯根膜」 と は、 歯を歯槽窩 に連結 し て い る 通常、 厚 さ 約 2 0 0 〜 2 5 0 ju mの結合組織で あ り 、 咬合力 な ど が直接的 に歯槽骨 に及ば な い よ う に緩衝作用 を果た し て い る 。 そ の た め歯根膜 に は、 歯 と 歯槽骨を結ぶ線維群 ( シ ヤ ー ピ ー線維） と そ の あ い だ に リ ン パ管、 血管、 神 経が豊富 に分布 し て、 歯根膜の栄養 と 強 い衝撃か ら 歯 と 歯周組織を守 っ て い る 。 細胞成分 と し て は、 線維芽細胞 セ メ ン ト 芽細胞、 骨芽細胞 な どか ら な る 。

「歯槽骨」 と は、 歯根膜を介 し て歯を支持 し て い る 顎 骨を意味す る 。 歯槽骨 は、 リ モ デ リ ン グを繰 り 返 し な が ら 支持器官 と し て の役割を果 た し て い る が、 歯周 炎 な ど の歯周組織疾患 に よ り リ モ デ リ ン グ の バ ラ ン ス が く ずれ る と 、 骨芽細胞 と 破骨細胞の変化 に と も な っ て骨吸収が ひ き 起 こ さ れ る 。 「 セ メ ン ト 質」 と は、 歯根の 周囲を覆 う 明黄色の骨様 結合織であ り 、 歯根膜の シ ヤ ー ピ ー線維を包埋 し て歯槽 骨 と 歯を結合 さ せて い る 組織を意味す る 。 セ メ ン ト 質 は 歯根膜よ り 栄養を受 けて い る こ と か ら 、 歯根膜の消失 に と も な っ て壊死、 感染の の ち 異物化す る 。

本発明の歯周組織疾患治療剤 は、 前記セ メ ン ト 質、 歯 根膜お よ び歯槽骨な どの歯周組織に対す る す ぐ れた再生 促進作用 を有 し てお り 、 歯周炎の進行に よ り 喪失 ま た は 損傷を受 け た前記歯周組織を治療の最終 目 標で あ る 再生 治癒 ま た は新付着治癒 に導 く の み な ら ず、 関連す る 諸疾 患、 た と え ば、 抜歯後お よ び嚢胞 ま た は 口腔癌摘出後の 歯周組織の修復、 イ ン プ ラ ン ト 材の 定着促進お よ び う 触 に よ り 欠損 し た象牙質の再生な ど に も 有効で あ り 、 種々 の歯周疾患治療に用 い ら れ る 。

本発明の歯周組織疾患治療剤 は、 通常の製剤技術 に従 つ て前記 b F G F を薬理学的 に許容 さ れ る 添加剤、 た と え ば溶剤、 等張化剤、 乳化剤、 懸濁化剤、 安定剤 ま た は 歯科領域で使用 さ れ る 充填剤 と 組み 合わせて、 液剤、 乳 剤、 ゲル化剤、 粉剤、 凍結乾燥製剤、 マ イ ク ロ カ プ セ ル 剤 ま た は マ イ ク ロ ス フ ェ ア剤な どの剤形 に調製す る こ と がで き る 。

ま た、 目 的 に応 じ て徐放剤を調製す る こ と も で き る 。 歯周組織疾患治療剤 に b F G F を含有せ し め る 方法 と し て は、 た と え ば混和、 混捏、 溶解、 浸漬、 浸透、 散布 塗布、 注入な どの公知の方法が適宜選ばれ る 。 溶剤 と す る ばあ い、 b F G F の安定性を考慮 し て p H は 4 . 0 〜 8 . 0 、 な かんづ く 4 . 5 〜 7 . 0 と す る こ と が好ま し い。 製剤化に 際 し て温度 は 3 0 °C な かんづ く 1 5 °C以下 に制御す る こ と が好 ま し い。

前記剤形に調製 し た b F G F を外用剤、 注入剤、 貼付 剤、 塗布剤、 注射剤、 埋込み剤な どの形態 と し て投与す る こ と がで き る 。

前記製剤中 に お け る b F G F の含有量 は 0 . 0 0 0 1 〜 2 0 %が好 ま し く 、 有効成分以外の前記添加剤の使用 量は 8 0 〜 9 9 . 9 9 9 9 %が好ま し い。

投与す る b F G F は、 0 . 1 〜 ： L O O O /i g 、 好 ま し く は 1 〜 5 0 0 β g を含有す る よ う に調製す る と よ い。

本発明の歯周組織疾患治療剤 は、 歯周病患部な ら び に 抜歯や歯周外科処置 ま た は滑面滑沢処理後の歯根面、 剥 離歯肉面、 歯槽骨面 も し く は そ の近傍 に投与す る こ と に よ り 使用 で き る 。

本発明の歯周組織疾患の治療法 は、 前記剤形 に調製 さ れた b F G F を かか る 患部な ど、 ま た は そ の近傍 に、 投 与部位の形態、 症状お よ び投与すべ き 量 に 応 じ た適用形 態 と し て投与す る こ と に よ り 行な わ れ る 。

本発明 の歯周組織疾患の治療法 に お い て、 前記治療剤 の投与量 は治療すべ き 症状、 部位に よ り 適宜増減で き る 力 、 b F G F の使用量 と し て ヒ ト に 1 回 0 . 1 〜 ； L 0 0 0 // g 、 好 ま し く は l 〜 5 0 0 〃 g を 1 日 1 〜 3 回患部 ま た は そ の近傍 に適用す る と 、 歯槽骨、 歯根膜、 セ メ ン ト 質な どの歯周組織の再生促進効果が発揮 さ れ、 所望の 歯周組織疾患の治療効果が発揮 さ れ る 。 図面の簡単な説明

第 1 図 は、 実施例 1 の歯周組織再生試験 に よ っ て え ら れ る ィ ヌ 人工歯周組織欠損術後の病理標本の光学顕微鏡 写真であ る 。

第 2 図 は、 比較例 1 の歯周組織再生試験に よ っ て ^ ら れ る ィ ヌ 人工歯周組織欠損術後 Φ病理標本の光学顕微鏡 写真であ る 。

第 3 図 は、 実施例 2 の歯周組織再生試験 に よ っ てえ ら れ る ィ ヌ 人工歯周組織欠損術後 2 週の病理標本の光学顕 微鏡写真であ る O

第 4 図 は比較例 2 の歯周組織再生試験 に よ つ てえ ら れ る ィ ヌ 人工歯周組織欠損術後 2 週の病理標本の光学顕微 鏡写真であ る 。

第 5 図 は実施例 2 の歯周組織再生試験 に よ つ てえ ら れ る ィ ヌ 人工歯周組織欠損術後 4 週の病理標本の光学顕微 鏡写真であ る 。

第 6 図 は比較例 2 の歯周組織再生試験に よ つ てえ ら れ る ィ ヌ 人工歯周組織欠損術後 4 週の病理標本の光学顕微 鏡写真であ る 。

第 7 図 は実施例 2 の歯周組織再生試験 に よ つ て れ る ィ ヌ 人工歯周組織欠損術後 4 週の病理標本の一部を拡 大 し た光学顕微 la ¾ "真でめ o 発明 を実施す る た め の最良の形態 以下に、 実施例お よ び比較例を あ げて本発明を さ ら に 詳 し く 説明す る が、 本発明 は も と よ り かか る 実施例 に の み 限定 さ れ る も の で は な い。

以下の試験 に用 い た b F G F は W 0 8 7 / 0 1 7 2 8 に記載の遺伝子工学的手法で製造 し た配列番号 1 の 1 5 4 個の ア ミ ノ 酸配列を有す る ポ リ べ プチ ドであ る 。 製剤例 1

配列番号 1 で示 さ れ る b F G F 含有水剤の調製

配列番号 1 で示 さ れ る b F G F 2 . 7 7 5 m g に生 理食塩水を加え て全量が 0 . 5 5 5 m 1 と な る よ う に水 剤を調製 し た。

前記 b F G F 含有水剤を用 い歯周組織再生促進作用 を 試験 し た。 以下に、 そ の試験方法お よ びそ の結果を示す 実施例 1 お よ び比較例 1

歯周組織欠損術後の再生 に及ぼす b F G F の影響

ビー グル犬 （ n = 3 ) を用 い人工的歯周組織欠損術後 の各歯周組織再生 に対す る 配列番号 1 で示 さ れ る b F G F 含有水剤の作用 を、 病理組織学的 に検討 し た。

ビ一 ダル犬の 口腔内 に ブ ラ ッ シ ン グな どを行な っ て健 常な歯周組織を維持 し た。 常法に よ り 上顎左右前歯部位 の粘膜骨膜弁を剥離 し て骨を裸出 し 、 歯根部に相当す る 頦側骨面 よ り 歯槽骨お よ び歯根膜を貫 き 象牙質に ま で到 達す る 人工的歯周組織の欠損 （直径 3 m m、 奥行 き 2 m m ) 形態を作製 し た。 な お欠損部の 窩底は チ ゼルな どを 用 い てセ メ ン ト 質を除去 し 、 象牙質を裸出 し た。

そ の後、 右側 （実施例 1 ) に 5 0 g の配列番号 1 で 示 さ れ る b F G F を含有す る 水剤 1 0 // 〖 を、 左側 （比 較例 1 ) に配列番号 1 で示 さ れ る b F G F を含 ま な い生 理食塩水 1 O ju 1 を注入投与 し 、 粘膜骨膜弁を も と の位 置 に 戻 し 縫合 し た。 手術 1 週後に抜糸を行な い、 4 週後 に 屠殺 し ァ ザ ン染色法に よ り 病理標本を作製 し 、 光学顕 微鏡に て観察 し た。

図 1 に実施例 1 の観察結果を、 図 2 に比較例 1 の観察 結果を示す。 いずれ も 1 0 倍の倍率で観察 し た。

図 1 に示 さ れ る よ う に実施例 1 に お い て は、

( 1 ) 歯冠側 （図 1 左側） お よ び根尖側 （図 1 右側） の 歯槽骨切断部 よ り 新生歯槽骨 a が、 欠損窩洞中央部に 向かい増殖、 侵入す る 像がみ ら れた。 骨梁辺縁 に は骨 芽細胞 b が並び、 ま た破骨細胞 も 認め ら れ、 骨の活発 な リ モ デ リ ン グの傾向がみ ら れた。

( 2 ) 新生歯槽骨 と 歯根面 と の 間 に新生 さ れた歯根膜 c は、 既存の歯根膜 に比べて そ の 幅 は広 く 、 毛細血管 に 富んでお り 、 そ の線維 （ シ ヤ ー ピ ー線維） d の走行は 歯根面に斜走あ る い は垂直 に配列 し つ つ あ り 、 新生セ メ ン ト 質 e に埋入す る 像がみ ら れた。

( 3 ) 新生セ メ ン ト 質 e は、 既存の セ メ ン ト 質表面か ら 裸出 さ れた歯根面上に形成 さ れ、 歯根面象牙質の 吸収 窩 に も 新生セ メ ン ト 質 e が ほ ぼ一様 に形成 さ れて い た 新生歯槽骨 a と 歯根面 と の 間の新生歯根膜 c は、 既存 の歯根膜 と 類似す る 像を呈 し て い た。

こ れに対 し 、 図 2 に 示 さ れ る よ う に比較例 1 に お い て は、

( 4 ) 実施例 1 と 同様 に、 歯冠側 （図 2 左側） お よ び根 尖側 （図 2 右側） の歯槽骨切断部よ り 骨梁辺縁に骨芽 細胞 b が並ぶ新生歯槽骨 a が欠損窩洞中央部に 向かい 増殖、 侵入す る 像がみ ら れた も の の、 実施例 1 に比べ て そ の形成程度 は低か つ た。

( 5 ) 新生歯槽骨 a と 歯根面の 間 に生 じ た新生歯根膜 c の線維の増生程度 も 低か つ た。

( 6 ) 新生セ メ ン ト 質 e も 、 既存の セ メ ン ト 質表面か ら 歯根面上に か け て形成 さ れ る も の の、 欠損窩洞中央部 に 向か つ に つ れて そ の厚み は減少 し 、 そ の形成程度 は 実施例 1 の も の に比べて低か つ た。

( 7 ) 内縁上皮細胞の侵入 に よ る 長い接合上皮の形成、 根吸収ま た は膠着 は、 実施例 1 、 比較例 1 と も に認め ら れな カヽつ た

こ れ ら の結果 よ り 、 比較例 1 に比べて実施例 1 の欠損 が大 き い に も かかわ ら ず、 配列番号 1 で示 さ れ る b F G F を付 し た実施例 1 に お い て、 よ り 歯周組織の再生ま た は修復が顕著 に認め ら れ る こ と か ら配列番号 1 で示 さ れ る b F G F は、 破壌 さ れた歯周組織、 す な わ ち歯根膜、 歯槽骨お よ びセ メ ン ト 質な どの再生に対 し て明 ら か に良 好な促進作用 を有 し 、 歯周組織疾患治療に と っ て有用 で あ る こ と が示 さ 製剤例 2

配列番号 1 で示 さ れ る b F G F 含有 フ ィ プ リ ン ゲル剤の 調製

0 . 1 M リ ン酸緩衝液 （ p H 6 . 5 ) 中 に配列番号 1 で示 さ れ る b F G F 1 . 7 7 m g / m l 、 フ イ ブ リ ノ — ゲ ン （ベ ー リ ン グべルケ社製） 4 1 . 6 m g Z m 1 、 ァ プ ロ チ ニ ン （ベ 一 リ ン グべ ル ケ 社製） 0 . 4 1 m g Z m 1 お よ び ドロ ン ビ ン （ベ ー リ ン グべ ル ケ 社製） 3 3 . 3 U Z m 1 と な る よ う に加え、 ゲル化物を調製 し た。 実施例 2 お よ び比較例 2

b F G F の歯周組織再生促進作用

ビー グ ル犬 （ n = 3 ) を用 い、 人工的歯周組織欠損形 成術後の 各歯周組織再生に対す る 配列番号 1 で示 さ れ る b F G F 含有 フ ィ プ リ ン ゲル剤の作用 を病理組織学的 に 検討 し た

実験 に い た ビ一 グル犬 は ブ ラ ッ シ ン グ な どを行な つ て健常な歯歯用麻浸小近露去組察図びででへをゥ 322し 5 周組織の状態を維持 し た o ぺ ン ト バル ビ タ ー ルナ 卜 リ ム （ナ カ ラ イ テ ス ク 株式会社製） に よ る 全身 麻酔わ よ キ シ ロ カ ィ ン （藤 ロロ丄： 5f 株式 社製） に よ る 局 fiff 酔下 に て下顎第 4 小臼歯の抜歯を行な い、 1 ケ 月 後抜 窩が治癒 し 口腔内 に異常の認め ら れな い両側 の下顎第 小臼歯を実験部位 と し た。 全身麻酔お よ び実 験部位の 潤麻酔下に て粘膜骨膜弁を剥離 し 骨を裸出 し

1 第 3 臼歯遠 、部 に 3 壁性の人工的骨欠損 (頰舌幅

3 m m X 遠心幅 3 m m X 深 さ 4 m m 形態を作製 し、 さ ら に 、 出歯根面の セ メ ン ト 質を チ ゼルな どを用 い て 兀全 に除 し 象牙質を裸出 し ^ o 左側 （比較例 2 ) に配 列番号 1 示 さ れ る b F G F を含 ま な い フ イ ブ リ ン ゲル 剤 2 8 . 5 μ 1 を、 右側 (実施例 2 ) に 5 0 i g の配 列番号 1 示 さ れ る b F G F を含有す る フ イ ブ リ ン ゲル 剤 2 8 . 5 1 を充填 し 、 粘膜骨膜弁を も と の位置 に 戻 し縫合 τ乙 。 手 後 2 お よ び 4 週 に屠殺 し 、 常法に 従 つ て病理 織標本を作製 し て光学顕微鏡 に て観察 し た。

3 お よ び 7 に実施例 2 の病理標本の光学顕微鏡 観察 口 、 図 4 お よ び 6 に比較例 2 の病理標本の光学 顕微鏡観 結果を示す。 図 3 お よ び 4 は術後 2 週の結果 であ «9 、 5 、 6 お よ び 7 は術後 4 週の結果を示す。 図 3 〜 6 は マ ト キ シ リ ン 一 ェ ォ ジ ン 染色を施 し 1 0 倍の 倍率で観 し た も の で あ り 、 図 7 は ァ ザ ン染色を施 し た 図 5 の一部を 2 5 倍の 倍率 ま で拡大 し た も の でめ る 。

3 に示 さ れ る よ う に 、 実施例 2 の術後 2 週 に お い て は、

( 1 ) 根尖側 （図 3 右側） 骨切断面か ら 欠損窩洞内 を歯 冠側 （図 3 左側） に 向か い、 サ ン ゴ様の著 し い新生歯 槽骨 a の増生が見 ら れた。 骨梁辺縁 に は骨芽細胞 b が 並び、 ま た破骨細胞 も 認め ら れた。

( 2 ) 根尖側か ら 歯冠側 に 向か い新生歯槽骨 a と 歯根面 の 間 に新生 さ れた歯根膜 c は毛細血管 に富んでお り 、 線維 d の走行 は根面 に平行 し て配列 し て い た。 と く に 骨切断部に近 い歯根膜 は よ く 発達 し て お り 、 歯根 に面 し て斜走す る 部位 も 認め ら れた。

( 3 ) 1 例で は あ る が、 新生セ メ ン ト 質 e が、 既存セ メ ン ト 質表面か ら 裸出 さ れた歯根面上に形成 さ れた像が s to れ た o

こ れに対 し て、 図 4 に示 さ れ る よ う に比較例 2 の術後 2 週 に お い て は、

( 4 ) 実施例 2 と 同様に根尖側 （図 4 左側） 骨切断面か ら 欠損窩洞内 を歯冠側 （図 4 右側） に 向か い新生歯槽 骨 a の增生が認め ら れ る も の の新生歯槽骨形成程度 は 低 く 、 細 い骨梁間 は細胞成分 に富む線維性結合組織で あ っ た o

( 5 ) 新生歯根膜 c の線維增生程度 は低 く 、 線維束 は細 い も の で あ っ た。

( 6 ) 新生セ メ ン ト 質が形成 さ れた例 は認め ら れな か つ

7«- o

図 5 お よ び 7 に 示 さ れ る よ う に 実施例 2 の術後 4 週 に お い て は、

( 1 ) 根尖側 （図 5 左側、 図 7 下側） か ら の新生歯槽骨 a の増殖傾向 は術後 2 週の増殖 と 比べて一層強 ま り 、 活発な リ モ デ リ ン グが認め ら れ骨欠損部の大部分を 占 め て い た。

( 2 ) 新生歯槽骨 a と 歯根面の 間の新生歯根膜 c は さ ら に成熟 し 、 そ の線維 d の走行は歯根面に斜走あ る い は 垂直に配列 し つ つ あ り 、 シ ヤ ー ピ ー線維化 し て新生セ メ ン ト 質 e に埋入す る 像がみ ら れ、 既存の歯根膜 と 類 似す る 像を呈 し て い た。

( 3 ) すべての例 に お い て、 新生セ メ ン ト 質 e が既存の セ メ ン ト 質表面か ら 裸出 さ れた歯根面上 に形成 さ れ、 根面象牙質の吸収窩 に も 新生セ メ ン ト 質 e が ほ ぼ一様 に形成 さ れて お り 、 術後 2 週の新生セ メ ン ト 質 と 比較 す る と 厚みが増 し て い た。

こ れに対 し 、 図 6 に示 さ れ る よ う に比較例 2 の術後 4 週で は、

( 4 ) 比較例 2 の術後 2 週の組織 と 比較す る と 新生歯槽 骨の リ モ デ リ ン グ は認め ら れ る も の の、 依然 と し て欠 損部を 占 め る 新生歯槽骨形成量 は実施例 2 に比 し て軽 度であ っ た。

( 5 ) 新生歯根膜 c は比較例 2 の術後 2 週の も の と 同程 度であ り 、 新生歯根膜 c の線維密度 は低 く 、 線維束 は 細い も の が多か っ た。

( 6 ) 新生セ メ ン ト 質 e も 既存の セ メ ン ト 質表面か ら 歯 根面上に か け て形成 さ れて い た も の の、 そ の形成量の 程度 は実施例 2 に比べて軽度であ っ た。

( 7 ) 内縁上皮細胞の侵入 に よ る 長い接合上皮 h の形成 が 1 例認め ら れた。

( 8 ) 根吸収や膠着は、 実施例 2 お よ び比較例 2 と も に 認め ら れな か っ た。 表 1 に、 え ら れた組織観察の結果を示す。 病理学的所 見を評価点数 （分類値） で表わ し 、 ウ ィ ル コ ク ソ ン （W I L C O X O N ) 検定法 （片側検定法） に よ り 統計学的 処理を行な っ た。 図 3 〜 7 お よ び表 1 か ら 明 ら かな よ う に、 配列番号 1 で示 さ れ る b F G F の歯周組織再生に対 す る 促進効果 は、 歯槽骨再生 に 関 し て は術後 2 週か ら 明 瞭に認め ら れ、 歯根膜お よ びセ メ ン ト 質の再生に 関 し て は術後 4 週経過で よ り 顕著 と な っ た。

以上の結果か ら 、 b F G F は、 破壊お よ び損傷を受 け た歯周組織の改善を著明 に促進す る と い う 歯周組織疾患 治療に と っ て重要な作用 を有す る こ と が明 ら か と な っ た

[以下余白 ]

実施例 2 (投薬群） 比較例 2 (無投薬群）

HC 曰

ΡΆ 兒

評 価 平均点 ±標 評 価 平均点土標

/Ξ ^fe.

(点数） 準 偏 差 (点数） 準 m - E 歯槽骨 ：

*

1 Λ 新 生 2、 2. 2.3土 0.58 1、 1、 1 1 ± ϋ 術 *

骨密度 1、 2、 2 1.7土 0.58 0.5、 1、 1 0.8 ± 0.29 後

^ET ud. ffs ·

EEI IK Λ¾ ·

2

* 八 「 八 __ι_ 八 週 再 生 2、 0.5、 0.5 1 土 0.87 0.5、 0.5、 0 0.3士 0.29 セメ ン ト質 ：

*

再 生 2、 0、 0 0.7 ± 1.15 0.5、 0、 0 0.2士 0.29 歯槽骨 ： 新 生 3、 2、 3 2.7土 0.58 0.5、 2、 2 1.5土 0.87 術

骨密度 2、 3、 3 2.7土 0.58 1、 2、 2 1.7土 0.58 後

歯根膜 ：

4

週 再 生 2、 2、 2 2 ± 0 * 0.5、 0.5、 0.5 0.5 ± 0 セメ ン ト質 ： 再 生 2、 2、 2 2 ± 0 * 0.5、 1、 0.5 0.67土 0.29

* ： ρ < 0. 0 5 (対照群と比較して）

評価 （点数） ：なし （0) 、 ごく軽度 （0 5) 、 軽度 （1 ) 、 中程度

(2) 、 顕著 （3) 実施例 3

b F G F の生体 に対す る 安全性

本発明の活性成分の安全性を配列番号 1 で示 さ れ る b F G F につ い て検討 し た。 単回投与毒性試験で、 雌雄 ラ ッ ト に対す る 皮下お よ び経 口投与 に よ る 配列番号 1 で示 さ れ る b F G F の L D _{5 ()}値 は、 いずれ も 7 5 m g / k g 以上であ っ た。 雌雄ィ ヌ に対す る 皮下お よ び経皮投与に よ る 配列番号 1 で示 さ れ る b F G F の L D _{5 Q}値 は、 そ れ ぞれ 5 お よ び 3 . 3 6 m g / k g 以上で あ っ た。 上記の ご と く ラ ッ ト お よ びィ ヌ に対 し て投与可能な最大量を投 与 し たが、 雌雄 と も に死亡例 は 1 例 も認め ら れな か っ た 産業上の利用可能性

本発明 に よ れば、 b F G F を用 い る こ と に よ り 、 す ぐ れた歯周組織の再生作用 を有す る 歯周組織疾患治療剤、 そ れを用 い る 歯周組織疾患の治療方法、 イ ン プ ラ ン ト 材 定着促進剤な ら び に象牙質再生治療剤を提供 し う る 。

すな わ ち 、 本発明 に よ り 歯周炎の進行に よ り 喪失 し た 歯周組織すな わ ち セ メ ン ト 質、 歯根膜お よ び歯槽骨な ど の組織全体の、 バ ラ ン ス を適正に維持 し た状態への再生 治癒 に対す る 適用、 さ ら に は抜歯後お よ び囊胞 ま た は 口 腔癌摘出後の歯周組織の 修復、 イ ン プ ラ ン ト 材の 定着促 進、 う 触に よ り 欠損 し た象牙質の再生な ど に 応用 し う る 歯周組織疾患治療剤が提供 さ れ る 。 さ ら に前記治療剤を 用 い た副作用 がな く 有効性の高 い歯周組織疾患の治療法 力 確立 さ れ る 。 配 列 表

配列番号 1 ：

配列の性質：

配列の長さ ： 1 5 4アミノ酸

配列の型：アミノ酸

起源

生物名：ホモ サピエンス （Homo sapiens ) 配列

Ala Ala Glv Ser l ie Thr Thr Leu Pro Ala Leu Pro Glu ASD Gly Gly 1 5 10 15

Ser Gly Ala Phe Pro Pro Gly His Phe Lys Asp Pro Lys Arg Leu Tyr

20 25 30

Cys Lys Asn Gly Gly Phe Phe Leu Arg l ie His Pro Asp Gly Arg Val

35 40 45

Asp Gly Val Arg Glu Lys Ser Asp Pro His l ie Lys Leu Gin Leu Gin 50 55 60

Ala Glu Glu Arg Gly Val Val Ser l ie Lys Gly Val Cys Ala Asn Arg 65 70 75 80

Tyr Leu Ala Met Lys Glu Asp Gly Arg Leu Leu Ala Ser Lys Cys Val

85 90 95

Thr Asp Glu Cys Phe Phe Phe Glu Arg Leu Glu Ser Asn Asn Tyr Asn

100 105 110

Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Tyr Thr Ser Trp Tyr Val Ala Leu Lys Arg

115 120 125

Thr Gly Gin Tyr Lys Leu Gly Ser Lys Thr Gly Pro Gly Gin Lys Ala 130 135 140 l ie Leu Phe Leu Pro Met Ser Ala Lys Ser

145 150 配列番号 2 ：

配列の性質：

配列の長さ ： 1 5 3アミノ酸

配列の型：アミノ酸

起源

生物名：ホモ サピエンス （Homo sapiens ) 配列

Ala Gly Ser l ie Thr Thr Leu Pro Ala Leu Pro Glu ASD Gly Gly Ser 1 5 10 15

Gly Ala Phe Pro Pro Gly His Phe Lys Asp Pro Lys Arg Leu Tyr Cys

20 25 30

Lys Asn Gly Gly Phe Phe Leu Arg l ie His Pro Asp Gly Arg Val Asp

35 40 45

Gly Val Arg Glu Lys Ser Asp Pro His l ie Lys Leu Gin Leu Gin Ala 50 55 60

Glu Glu Arg Gly Val Val Ser ,I le Lys Gly Val Cys Ala Asn Arg Tyr 65 70 75 80

Leu Ala Met Lys Glu Asp Gly Arg Leu Leu Ala Ser Lys Cys Val Thr

85 90 95

Asp Glu Cys Phe Phe Phe Glu Arg Leu Glu Ser Asn Asn Tyr Asn Thr

100 105 110

Tyr Arg Ser Arg Lys Tyr Thr Ser Trp Tyr Val Ala Leu Lys Arg Thr

115 120 125

Gly Gin Tyr Lys Leu Gly Ser Lys Thr Gly Pro Gly Gin Lys Ala l ie 130 135 140

Leu Phe Leu Pro Met Ser Ala Lys Ser

145 150

Claims

請 求 の 範 囲

1 . 塩基性線維芽細胞成長因子を有効成分 と し て含有 し てな る 歯周組織疾患治療剤。

2 . 適用 さ れ る 歯周組織が歯根膜、 歯槽骨お よ び Zま た は セ メ ン ト 質であ る 請求項 1 記載の歯周組織疾患治療 剤 0

3. 適用 さ れ る 歯周組織が歯根膜であ る 請求項 1 記載の 歯周組織疾患治療剤。

4. 適用 さ れ る 歯周組織が歯槽骨であ る 請求項 1 記載の 歯周組織疾患治療剤。

5 . 適用 さ れ る 歯周組織がセ メ ン ト 質で あ る 請求項 1 記 載の歯周組織疾患治療剤。

6 . 該塩基性線維芽細胞成長因子が遺伝子工学的手法で 製造 さ れた も の であ る 請求項 1 、 2 、 3 、 4 ま た は 5 記載の歯周組織疾患治療剤。

7 . 該塩基性線維芽細胞成長因子が配列番号 1 で示 さ れ る 1 5 4 個の ァ ミ ノ 酸配列を有す る ポ リ べ プチ ドであ る 請求項 1 、 2 、 3 、 4 ま た は 5 記載の歯周組織疾患 治療剤。

8 . 該塩基性線維芽細胞成長因子が配列番号 2 で示 さ れ る 1 5 3 個の ア ミ ノ 酸配列を有す る ポ リ べ プチ ドで あ る 請求項 1 、 2 、 3 、 4 ま た は 5 記載の歯周組織疾患 治療剤。

9 . 再生治癒を促進す る 請求項 1 、 2 、 3 、 4 ま た は 5 記載の歯周組織疾患治療剤。

1 0 . 新付着治癒を促進す る 請求項 1 、 2 、 3 、 4 ま た は

5 記載の歯周組織疾患治療剤。

11. 該塩基性線維芽細胞成長因子を 0 . 1 〜 ： L 0 0 0 g 含有す る 請求項 1 、 2 、 3 、 4 ま た は 5 記載の歯周 組織疾患治療剤。

12. 該塩基性線維芽細胞成長因子を 1 〜 5 0 0 jw g 含有 す る 請求項 1 、 2 、 3 、 4 ま た は 5 記載の歯周組織疾 患治療剤。

13. 塩基性線維芽細胞成長因子を用 い る 歯周組織疾患の 治療方法。

14. 再生治癒を促進す る 請求項 1 3 記載の歯周組織疾患 の 治療方法。

15. 新付着治癒を促進す る 請求項 1 3 記載の歯周組織疾 患の治療方法。

16. 該塩基性線維芽細胞成長因子を 1 回 あ た り 0 . 1 〜 1 0 0 0 /z g、 1 日 1 〜 3 回投与す る 請求項 1 3 記載 の歯周組織疾患の治療方法。

17. 該塩基性線維芽細胞成長因子を 1 回あ た り 1 〜 5 0 0 β s , 1 日 1 〜 3 回投与す る 請求項 1 3 記載の歯周 組織疾患の治療方法。

Π. 塩基性線維芽細胞成長因子を有効成分 と し て含有 し て な る イ ン プ ラ ン ト 材定着促進剤。

19. 塩基性線維芽細胞成長因子を有効成分 と し て含有 し て な る 象牙質再生治療剤。