WO1998055627A1 - Mutant measles virus antigens and genes encoding the same - Google Patents

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Shigeharu Ueda
Michiko Watanabe
Hitomi Kawanishi
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Research Foundation for Microbial Diseases of Osaka University BIKEN
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    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18411—Morbillivirus, e.g. Measles virus, canine distemper
    • C12N2760/18422—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Definitions

  • the present invention relates to a mutant measles virus antigen and a gene encoding the same. More specifically, a mutant measles virus antigen containing at least one protein antigen selected from the H protein antigen and the F protein antigen of the mutant measles virus strain, and each of the mutant measles virus antigens About the gene to be loaded.
  • a mutant measles virus antigen of the present invention or the mutant measles virus gene encoding the same is used, a live attenuated measles virus or a gene vaccine compatible with an epidemic strain measles virus, and a measles virus flowing out of the strain may be used. Diagnostic agents that can accurately detect infection can be provided efficiently and economically.
  • Conventional technology Conventional technology
  • Measles virus is a measles pathogen and is widely distributed throughout the world. The virus is highly contagious and, when splashed to humans, primarily affects the respiratory system and reticuloendothelial tissue, causing acute illness. When affected, it causes systemic symptoms such as high fever, catarrh, and rash, and in severe cases, bacterial pneumonia, otitis media, and acute encephalitis. In addition, measles in the world of 1996 The estimated number of patients is about 4.2 million, and the estimated number of deaths is about 110,000. ["The World Health Report 1997", p. 15, WHO (World Health Organization) ion) published in 1997].
  • measles is a very important infectious disease, and eradication of measles by vaccines is now desired worldwide.
  • WHO World Health Organization
  • EPI Expanded Program on Immunization
  • the measles virus belongs to the genus Morbilivirus, belonging to the order Paramyxoviridae, Mononegavirus.
  • the virion has a substantially spherical shape with a diameter of about 150 nm and an envelope composed of a lipid bilayer membrane. H on the entire surface of the envelope
  • the (hemagglutinin) protein and the F (fusion) protein protrude like spikes, and the base is supported by the Matrix membrane protein on the lower surface of the envelope.
  • the nucleocapsid present inside the envelope consists of a measles virus genomic approximately 16 kb long linear single-stranded (one) -sense (so-called mononega) gene RNA and protein.
  • the RNA of the gene is N (nucleocaps id-associated protein ins), PZC / V (phosphoprotein in / C protein / V protein in) around 3 ′ terminal force to 5 ′ terminal direction.
  • tr ic ist ron ic gene M (ma tr ix prot e in), F (fus ion prot e in), H (hemagg lut in in prote in) and L (large put at ive polymerase prote in), respectively, and report them (i rus Taxonomy: Sixth Repor tof The International 1 Community of Taxonomy of Viruses ", Archives of Violology, Supplement 10, 268-270, and 271-227, 1995).
  • the host cell used for subculturing the isolate wild measles virus
  • the culture temperature were used.
  • the virus of the host range mutant strain or the temperature mutant strain is attenuated. You.
  • Measles prevention vaccines have been put into practical use since the early 1960s. In these early days, inactivated vaccines containing inactivated measles virus as an active ingredient (K; "ki 1- Led virus vacc ine ”) was mainly used. The vaccine had a poor immune effect and induced severe atypical measles, In the latter half of the year, live vaccines (L; abbreviation for "live virus vaccine”) using attenuated measles virus as an active ingredient began to be widely used, and KL was sometimes used during this period. , since 1 9 7 1990s, these further attenuated highly attenuated live vaccines. (FL: f ur ther at tenuated l ive vacc ine) force s are widely commercially available in the world, has been put to practical use in addition, All of these live vaccines are described above.
  • the live attenuated measles vaccine strain virus of (3) is used as an active ingredient.
  • the inventor of the present invention has been involved in research on clinical, epidemiological and vaccinological studies of measles for more than 30 years, as well as various measles viruses such as vaccine strains, epidemic strains and fresh isolates.
  • the researchers confirmed the differences in antigenicity or immunogenicity between the conventional virulent strains and the mutant virulent strains and epidemic strains, and conducted intensive research to identify the factors of such differences.
  • the mutant strain had a mutation involving amino acid substitution in a specific region of the gene encoding each of the H protein and the F protein.
  • the present inventors have found that the mutated regions of the H protein and the F protein are useful as mutant measles virus antigens.
  • the present invention has been completed based on this new finding.
  • one of the main objects of the present invention is to provide at least one selected from a mutant measles virus H protein antigen and a mutant measles virus F protein antigen which are effective for preparing an epidemic measles virus vaccine and a diagnostic agent.
  • Another object of the present invention is to provide a mutant measles virus antigen containing the same protein antigen.
  • Another object of the present invention is to address the epidemic measles virus.
  • the purpose of the present invention is to provide a mutant measles virus gene.
  • the left end is the N-terminus and the right end is the C-terminus.
  • SEQ ID NO: 1 shows the nucleotide sequence of cDNA corresponding to the RNA encoding the H protein of attenuated measles virus CAM-70 strain, and the full-length amino acid sequence of the H protein encoded by the sequence.
  • SEQ ID NO: 2 is the full-length amino acid sequence of the H protein of attenuated measles virus CAM-70 strain
  • SEQ ID NO: 3 is an amino acid sequence of a fragment peptide consisting of amino acids 93 to 61 of SEQ ID NO: 2;
  • SEQ ID NO: 4 is the amino acid sequence of a fragment peptide consisting of amino acids 176 to 316 of SEQ ID NO: 2;
  • SEQ ID NO: 5 is SEQ ID NO: 2
  • SEQ ID NO: 6 is the amino acid sequence of a fragment peptide consisting of amino acids Nos. 172 to 178;
  • SEQ ID NO: 6 is SEQ ID NO: 238 to 238 of SEQ ID NO: 2 Amino acid sequence of a fragment peptide consisting of amino acid No. 4;
  • SEQ ID NO: 7 is composed of amino acids Nos.
  • SEQ ID NO: 8 is the amino acid sequence of the fragment peptide consisting of amino acids Nos. 301-307 of SEQ ID NO: 2.
  • SEQ ID NO: 9 is a nucleotide sequence of cDNA corresponding to gene RNA encoding H protein of virulent measles virus NA strain, and a full-length amino acid sequence of H protein encoded by the sequence.
  • SEQ ID NO: 10 is the full-length amino acid sequence of H protein of the virulent measles virus NA strain,
  • SEQ ID NO: 11 is the amino acid sequence of a peptide fragment consisting of amino acids 93 to 61 of SEQ ID NO: 10;
  • SEQ ID NO: 12 is SEQ ID NO: 10
  • SEQ ID NO: 13 is the amino acid sequence of the amino acid sequence of the 176th to 316th amino acids of SEQ ID NO: 10;
  • 78 is the amino acid sequence of a fragment peptide consisting of the amino acid No. 8;
  • SEQ ID NO: 14 is the amino acid Nos. 238 to 244 of SEQ ID NO.
  • SEQ ID NO: 15 is the amino acid sequence of a peptide fragment consisting of amino acids 277 to 282 of SEQ ID NO: 10
  • SEQ ID NO: 16 is SEQ ID NO:
  • SEQ ID NO: 17 is the amino acid sequence of a peptide fragment consisting of amino acids Nos. 301 to 307 of No. 10
  • SEQ ID NO: 17 is an attenuated measles virus CAM-70 strain
  • SEQ ID NO: 18 is a full-length amino acid sequence of F protein of attenuated measles vinoles CAM-70 strain
  • SEQ ID NO: 19 is the nucleotide sequence of cDNA corresponding to the gene RNA encoding the F protein of the virulent measles virus NA strain, and the full-length amino acid sequence of the F protein encoded by the sequence;
  • SEQ ID NO: 20 is the full-length amino acid sequence of F protein of highly virulent measles virus NA strain.
  • At least one mutant measles virus F protein antigen selected from the group consisting of fragments comprising at least six amino acid sequences adjacent to the amino acid.
  • (h) Contains No. 11, No. 52, No. 107, No. 165, No. 398, No. 417, or No. 523 amino acid And at least one mutant measles virus F protein antigen selected from the group consisting of genes encoding fragments comprising at least six amino acid sequences adjacent to the amino acid. Code gene.
  • a in the DNA base sequence indicates adenine
  • C indicates cytosine
  • G indicates guanine
  • T indicates thymine
  • a 1 a in the amino acid sequence is alanine, Arg is arginine, A sn is asno, ° argin, Asp is aspartic acid, Cys is cystine, G 1n is glutamine, G1u is glutamic acid, G1y is glycine, His is histidine, I1e is isoleucine, Leu is lysine, and Lys is lysine.
  • Met is methionine
  • Phe ferulanine
  • Pro is proline
  • Ser is serine
  • Thr threonine
  • Trp is triptophan
  • Tyr Tyrosine and Val are balins.
  • H and F protein genes involved in the adsorption and invasion of pirions into cells to establish viral infection. confirmed.
  • a mutation in the H protein gene results in a substitution of 17 to 19 amino acids in a specific region of the sequence of all 6 17 amino acids constituting the protein.
  • antigenic mutations antigenic variations have occurred due to changes in the three-dimensional structure of proteins. Such an antigenic mutation is determined to be as large and severe as an antigenic shift of the H protein.
  • a recombinant virus is produced in which the H protein gene of the conventional live vaccine strain virus is replaced with the: H protein gene of the epidemic strain virus.
  • an attenuated virus strain for a live vaccine suitable for the antigenicity of the epidemic strain can be quickly obtained.
  • such a recombinant virus can be used as an active ingredient of a qualifying vaccine that is excellent in preventing epidemic strain infection.
  • a further advantage of this method is that It is economical. That is, the time and labor required for attenuating the virus can be significantly reduced and saved.
  • Conventional methods for attenuating viruses are mainly based on the passage of the virus, since there is no fixed method as described above.Therefore, there are few methods for establishing an attenuated strain for live vaccines. It took several years to about 10 years.
  • a non-propagating recombinant virus produced by inserting and linking the cDNAs of the H protein gene and the F protein gene into a non-proliferating virus genome, as an active ingredient of the gene vaccine or DNA protein Induces both humoral and cellular immunity, similar to conventional live measles vaccines. Notably, such vaccines can be given intranasally.
  • naked DNA is prepared by inserting and linking a cDNA fragment containing a mutant region of the H protein gene of the epidemic virus, for example, into plasmid vector.
  • DNA can be used as an active ingredient of a measles-preventing DNA vaccine or gene vaccine.
  • PCR primers are synthesized in consideration of mutations in H protein gene and F protein gene of epidemic strain virus. Such a primer can be used as a genetic diagnostic agent for identifying an epidemic measles virus strain and for distinguishing a highly virulent strain from an attenuated strain.
  • mutant antigen full-length protein or its fragment peptide encoded by the gene is prepared, and the epitope is chemically synthesized. These are provided as optimal diagnostic antigens for epidemic measles.
  • Antigen analysis of various measles virus antigens For antigen analysis, neutralization test, HI (hemagglutinat ion inhi ion) test, PA (passive agglutinat ion) method, enzyme immunization using monoclonal antibody A measuring method or a fluorescent antibody method can be employed. Of these, analysis based on the measurement of antibody titer by neutralization reaction is particularly essential, and is performed in accordance with Ueda's modified method using microplates (Biken Journal, 14, 155-160, 1971). I can.
  • serum for example, measles patient serum, mouse immune serum against measles virus shown below, and the like are used.
  • Tanabe and Edmonston are representative of epidemic strains in the 1950s to 1960s (past virulent strains), etc., and the above-mentioned raw water was established by attenuating such strains.
  • the Kuching strains include CAM_70 and Edmonston B, and the recent epidemic strains (strongly virulent strains) have been around the world since the 1990s. Can be used.
  • F-t separated in 1991 from the throat swab of a re-infected person
  • F-b blood of a re-infected person
  • U—t isolated from throat swa in non-vaccinated patients
  • U—b obtained from blood in non-vaccinated patients
  • Tanabe Tanabe
  • Edmons ton Edmo
  • CAM CAM
  • the analysis software DNASIS-Mac is used to analyze the hydrophobic pattern and to determine the secondary structure of the protein (Chou-Fasman analysis).
  • Mutant measles virus antigen and gene encoding the same The present inventors have considered the recent measles virus outbreak based on the antigen analysis of (1) and the analysis of base and amino acid sequences of (2) above. In comparison with past highly virulent strains and conventional attenuated measles live vaccine strains, we found that amino acid-substituted regions were present in H proteins and proteins. Vaccinated strains and antigens useful for diagnosis were identified.
  • the mutant measles virus antigen of the present invention is the full-length or fragment of H-protein and F-protein of CAM-70 which is an attenuated measles virus strain or NA strain which is an epidemic measles virus strain. All amino acid sequences were first disclosed by the present inventors.
  • the measles virus nores antigen of the present invention is at least selected from the group consisting of the following (I) mutant measles virus H protein antigen and (II) mutant measles virus F protein antigen. It is an antigen containing a kind of protein antigen.
  • (e) contains the No. 174, No. 176, No. 243, No. 279, or No. 302 amino acid and is adjacent to the amino acid A fragment consisting of a sequence of at least six amino acids;
  • (h) Contains No. 11, No. 52, No. 107, No. 165, No. 398, No. 417, or No. 523 amino acid And at least one mutated measles virus F protein antigen selected from the group consisting of fragments comprising at least six amino acid sequences adjacent to the amino acid.
  • the protein antigens contained in the mutant measles virus antigen of the present invention are H protein and protein, respectively, and (b) to (f) and (h) are It is a peptide (fragment).
  • the four fragments described in (d), that is, the 17th fragment specified by the amino acid number of the amino acid sequence having a total length of 6 17 amino acids described in SEQ ID NO: 2 or 10 Nos. 2 to 178, 238 to 244, 277 to 282, and 301 to 307 are H proteins disclosed by the present inventors. It is an epitop.
  • the mutant measles virus antigen of the present invention contains at least one protein antigen selected from the above-mentioned full-length protein and its fragment peptides, and the protein antigen is appropriately selected according to the purpose of use. Can be. Also, a plurality of antigens can be used in combination.
  • a gene encoding the above mutant measles virus antigen Specifically, at least one selected from the group consisting of (I) a gene coding for the mutant measles virus H protein antigen and (II) a gene coding for the mutant measles virus F protein antigen shown below. Also provided is a mutant measles virus gene containing a gene.
  • the gene encoding the mutant measles virus antigen of the present invention is not particularly limited as long as it encodes a full-length protein or a fragment peptide thereof, which is a mutant measles virus antigen. It is not limited to the nucleotide sequence of the genomic RNA of the NA strain. As the mutant measles virus gene, the cDNAs shown in SEQ ID NOs: 1, 9, 17 and 19 can be used, or based on the amino acid sequence of the mutant measles virus antigen. Nucleotide sequences can also be synthesized.
  • the mutant measles virus gene of the present invention contains at least one gene selected from the above-mentioned genes coding for the mutant measles virus antigen, and the gene contained is appropriately determined according to the purpose of use. You can choose.
  • the mutant measles virus gene of the present invention includes attenuated strain genes and epidemic strain genes. Based on the disclosure of the present invention, for example, it becomes possible to prepare a live vaccine that is effective against epidemic strains (see [II] (1) below and Examples 2 and 3). When multiple genes are used in combination, the genes are linked together. (See [ ⁇ ] (2) below and Example 4).
  • the antigen of the present invention comprising the above sequence and the gene encoding the same are useful as differential markers for virulence / attenuation, and are extremely useful for improving conventional vaccines and developing diagnostic agents. Important and useful.
  • a recombinant virus in which the gene is replaced between a live vaccine strain virus and an epidemic strain virus is created.
  • the raw vaccine strain various strains described in the prior art can be used, but at least for a long term of at least 10 years, and as an active ingredient of the raw vaccine. Preference is given to using strains that are used worldwide and whose safety and effectiveness are certified, for example, CA II-70.
  • the epidemic strain is appropriately selected from a widespread strain virus in which the antigenic mutation based on the gene mutation is remarkable when compared with the antigenicity of the live-acting strain virus.
  • the frequency of isolation is high, and the area of the epidemic is wide, and the antigenic mutation is not special but universal.
  • MO or NA strains isolated in the year It is preferable to adopt MO or NA strains isolated in the year.
  • the gene to be replaced can be appropriately selected from the genes encoding the antigens listed in the above [1] (3) and used alone or in combination.
  • the H protein fragment of No considering prevention of reversion from attenuated to virulent by recombination, simplification of the recombination process, etc., the H protein fragment of No.
  • a cDNA of the (+) sense RNA of the full-length genomic DNA of the CAM-70 virus was prepared, and the region encoding amino acid substitution described above was excised from the cDNA with a restriction enzyme.
  • Corresponding region prepared from the viral genome of the strain MO or NA at the cleavage site was prepared, and the region encoding amino acid substitution described above was excised from the cDNA with a restriction enzyme.
  • the resulting recombinant cDNA is linked to the busmids pBluescript SK and KS (manufactured by Stratagene Ltd., UK), and the recombinant cDNA is transferred to T7 fur Construct a vector (hereinafter referred to as "Vo") prepared to be transcribed by the diRNA polymerase. After co-transfection of Vo and VI into the helper cell described above, the cells are cultured, whereby a recombinant virus can be obtained.
  • Propagation of the recombinant virus in infected cells can be determined by determining CPE (cytopathic effect) that produces syncytia, or by using a fluorescent antibody method using a monoclonal antibody to a protein epitope whose substitution region encodes. Can be confirmed with a microscope.
  • CPE cytopathic effect
  • the gene encoding amino acid number 176 to 316 (SEQ ID NO: 4) of the H-protein of CAM-70 can be expressed as MO or NA.
  • a recombinant attenuated measles virus of the CAM-70 strain was obtained, which was replaced with a gene encoding amino acid number 176 to 316 (SEQ ID NO: 12) of the H protein of the strain.
  • each of the N, P, and L protein genes of CAM-70 is individually inserted into pcDNA3.1 (-) and linked to the restriction site of pcDNA3.1 (-) to construct each expression vector.
  • recMVA recomb inant MVA
  • the three expression vectors and the above-mentioned expression vector Vo were co-transfected into MRC-5 or WI-38 cells transfected with recMVA in advance, and then about 35 Culture at ⁇ 38 ° C yields the desired recombinant attenuated measles virus.
  • the propagation of such a virus can be confirmed by microscopy using CPE determination or the monoclonal immunofluorescence method as described above. The eligibility of the obtained virus for antigenicity or immunogenicity is
  • This non-proliferative virus is derived from human adenovirus type 5 and lacks the genes E1A and E1B essential for its growth, so that it grows in cells other than the 293 cells that constantly produce these genes. Can not. Furthermore, this virus is also deficient in the gene encoding the E3 protein, which antagonizes the recognition of viral antigens by CTL (Cytotoxic T Lymphocyte), so that CTL can be expected to establish cell-mediated immunity. It is devised.
  • the measles virus gene used can be appropriately selected from the genes encoding the antigens listed in the above [I] (3), and can be used alone or in combination.
  • the full-length H protein (SEQ ID NO: 2 or 10) described in (a) and the The full-length F protein (SEQ ID NO: 18 or 20) was It is preferable to use a combination of the genes to be coded.
  • the H protein gene and the F protein gene cDNA are prepared (the combination for linking in the 5 'to 3' direction is HF Or FH), which is inserted into the E1A.E1B-deficient site of the cosmid cassette pAdexl to obtain pAdexl / HF or pAdexl / FH.
  • DNA-TPC was extracted from the parent adenovirus and digested with the restriction enzyme Eco T22I (Takara Shuzo Co., Ltd., Japan) to digest the DNA-TPC / Obtain EcoT22I. next,
  • pAdexl / HF or pAdexl / FH and DNA-TPC / EcoT22I are subjected to c0-ans Iecti0 ⁇ in 2993 cells by the calcium phosphate method, homologous recombination occurs.
  • a non-proliferating recombinant adenovirus having the measles virus ⁇ protein gene and the F protein gene can be obtained.
  • the fact that this virus carries both the measles virus ⁇ and F protein genes means, for example, that the HeLa cells infected with this virus can be detected by a fluorescent antibody method using a monoclonal antibody against the protein. You can check it.
  • the recombinant attenuated measles virus of [1] (1) can be used as a seed virus to produce a live attenuated measles vaccine.
  • the recombinant virus is cultured in a susceptible cell, for example, a nitrile embryo cell, and the virus is suspended. After obtaining the liquid, centrifuge it at a low speed, and remove the cells by filtration to prepare a vaccine stock solution.
  • a suitable medium for example, a BME medium (Eagle's
  • a virus stabilizer can be added and mixed.
  • the prepared vaccine solution is dispensed into a vial having an appropriate volume, for example, about 1 to 20 ml, and sealed and sealed, and then used as a vaccine.
  • a vaccine can be used not only as a liquid but also as a dry preparation after freeze-drying after dispensing. In order to guarantee the quality of manufactured vaccine preparations, it is necessary to carry out various tests for safety and efficacy before use. This test is based on the Pharmaceutical Affairs Law (Act No. 1945 of 1958) and 1993 ⁇ Ministry of Health, Labor and Welfare No. 2117 “Biological Drug Standards” Perform according to the rules.
  • Vaccines are, for example, doses of about 0.25 to
  • 0.5 ml is inoculated subcutaneously.
  • the non-proliferating recombinant virus of [H] (2) can be mass-produced in 2993 cells.
  • PFU / ml PFU- Forming Unit
  • the preparation can be used at a dose of about 0.25 to 0.5 ml subcutaneously, intramuscularly or intranasally, but in view of simplification of inoculation, nasal inoculation is particularly preferred. I like it.
  • the diagnostic antigen As the diagnostic antigen, the antigens (full-length protein or its fragment peptide) listed in the above [1] (3) can be used alone or in combination. As a combination, it is preferable to combine antigens containing different epitopes in order to broaden the antigen spectrum.
  • the diagnostic antigen of the present invention can be provided, for example, as an antigen such as a sedimentation reaction, an agglutination reaction, a neutralization reaction, a fluorescent antibody method, an enzyme immunoassay, and a radioimmunoassay.
  • immune serum antibodies and the like.
  • This antibody can be provided, for example, as an antibody for antigen detection in various diagnostic methods.
  • the diagnostic antigen or antibody according to the present invention is used after being diluted so that the content in the diagnostic agent is an amount necessary for causing an antigen-antibody reaction.
  • genes encoding the antigens listed in the above [I] (3) can be used alone or in combination, for example, as a probe reagent or an identification reagent in genetic diagnosis.
  • H- and F-protein sequences of attenuated and endemic strains disclosed in this application (E.g., SEQ ID NOs: 2, 10, 18, and 20) or the gene encoding them (e.g., SEQ ID NOs: 1, 9, 17, and 19) to design PCR primers be able to.
  • the obtained PCR primer can be provided as a reagent for diagnosis using PCR.
  • Example 1
  • Antigen analysis and gene analysis were performed as follows, to show past epidemic strains (virulent strains), conventional live vaccine strains (attenuated strains) and recent epidemic strains
  • the difference between the base sequence and the amino acid sequence among the three (virulent strains) is determined.
  • the amino acid sequence of the mutant antigen is specified, and its epitope is also determined.
  • Measurement of neutralizing antibody titer (1) Measure by a modified Ueda method using microplate. Vaccin strain CAM-70 and epidemic strain Momo are used for the attacking virus, and B95a cells are used for virus culture. Specimens included sera from children who had been vaccinated with measles CAM-70 vaccine during the period of 1994 to 1996, before vaccination and 1 to 2 months after vaccination. One sample was obtained using 11 samples of serum (Group A) with 8 times higher HI antibody titer and 14 samples of serum (Group B) with 64 times higher HI antibody titer measured with HI antigen of Toshima strain (separated in 1995). Use two rows of gels each.
  • the antibody titer against the endemic strain is less than 0 (the numerical value is 10 g 2 ) and is not detected.
  • the relative antibody titer of the remaining two cases is 1.
  • Group B Out of a total of 14 specimens, the relative antibody titer (endemic strain Z vaccine strain) of 10 cases (10 Z14; 71.4%) was as low as 12 to 1-8, and the remaining In four cases it is about one. As a result, cases in which the relative antibody titer (epidemic vaccine strain) was 1 to 2 or less were frequently detected, and the antigens (H and F) involved in the neutralization or infection of recent epidemic measles virus were frequently detected. Both proteins are judged to have a mutation.
  • the relative antibody titer endemic strain Z vaccine strain
  • the neutralizing antibody titer against the mouse immune serum of the NA strain H protein is measured in the same manner as (1) above, except for the following items.
  • Three strains of CAM-70, Tanabe, and NA are used as the attacking virus.
  • a mouse immune serum is prepared as follows. NA for each of 10 4-week-old BALB / C mice The strain H protein expression vector pcDNA3.1 (-) / H (naked DNA) is intramuscularly inoculated in 100 ⁇ l portions, and two weeks later, the same inoculation is performed again for booster immunization. Five mice are inoculated with saline as control.
  • each mouse is bled individually and used as immunized mouse serum.
  • the naked DNA described above was attached to Example 3 described below, and the plasmid pcDNA3.1 (_) / H constructed as an expression vector for the NA strain H protein was amplified with Escherichia coli and the culture solution thereof was used. It is prepared by purification from
  • Determination of the nucleotide sequences of both H protein and F protein genes The determination is performed according to the method of Isegawa et al. (Mol. Cell. Prob., 6, 467-475, 1992). After extracting the RNA from the 95a cells infected with each of the measles viruses listed in Tables 2 and 3 by the GTC / CsCl method of Chirgwin et al. (Biochemistry, 18, 5294-5299, 1979), Prepare cDNA using 6 mer random primer. Next, referring to the nucleotide sequence of the cDNA of the gene of Edmons n strain (Viology, vol. 173, no. 2, pp. 415-425, 1989).
  • the nucleotide sequence is determined by the direct sequence method using PCR, and the amino acid sequence is read based on Universal Code, and the amino acid sequence is determined by gene mutation. Identify replacements for The results are shown in Tables 2 and 3, and SEQ ID NOS: 1, 2, 9, 10 and 17 to 20, respectively.
  • Substituted amino acids are described based on the amino acid number and amino acid of Edmonston strain gene cDNA, and the portions not described are the same as the standard amino acids.
  • H protein secondary structure The secondary structure of H protein was determined by performing a combinatorial analysis on the amino acid sequence obtained above.
  • DNASIS-Mac version 3.6 [manufactured by S-Ritsu Software Engineering Co., Ltd., Japan] is used as the analysis software, and hydrophobic pattern analysis and Chou-Fasman analysis are performed.
  • epitope Advisor Japan, manufactured by Fujitsu Kyushu System Engineering (FQS) Co., Ltd.
  • FQS Fujitsu Kyushu System Engineering
  • cDNA is prepared by RT-PCR (reverse transcript-PCR), and the primer is used from the cDNA by using a primer.
  • Clones genes encoding the N, P and L proteins of the AM-70 strain virus. are referred to as pcDNA3.1 (-) / N, pcDNA3.1 (-) / P, and pcDNA3.1 (-) / L). These are amplified in E. coli, stored, and used for the next step.
  • the NA strain corresponding to a part of the H protein gene in the cDNA of the CAM-70 strain full-length genomic RNA was obtained in the same manner as described above. Clones the gene cDNA that has been replaced with the above sequence. The obtained clone is hereinafter referred to as pB1uescript / MV, and is cultured and stored, and is provided for the next step.
  • the sequence to be substituted is the nucleotide sequence of the CAM-70 strain H protein gene described in SEQ ID NO: 1 from No. 52 to No. 948 (432 bases; amino acid No. 1). (No. 76 to No. 316) and the corresponding region of the NA strain shown in SEQ ID NO: 9 (No. 526 to No. 948 bases).
  • a non-replicating recombinant adenovirus is produced according to the method of Saito et al.
  • the gene that is inserted and linked to the viral genome is used in combination with the gene cDNA that encodes each of the H and F proteins of the NA strain described in SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 19, respectively.
  • Coordination was performed in the order of F-H in the direction from 5 'to 3' so that F and H were expressed as fusion proteins, and this cDNA was cleaved with the restriction enzyme SwaI to obtain a cosmid cassette. Insert and link to the E1A and E1B deletion sites of pAdexl to obtain pAdexl / FH.
  • the cDNAs of the H and F genes are each prepared from the NA strain genomic RNA by RT_PCR using primers corresponding to each gene. Also, pAdexl / FH is packaged with ⁇ phage, amplified and stored in E. coli, and used for the next step. Next, the parental adenovirus DNA-TPC is extracted and purified from the infected cells by CsC1 ultracentrifugation, and then digested with the restriction enzyme Eco T22I to obtain a cleavage product DNA-TPC / Eco T22I.
  • the pAdexl / FH and DNA-TPC / Eco T22I were cultured by the calcium phosphate method in co-transfection with 2293 cells, and cultured at 37 ° C for 18 hours. Cause homologous recombination.
  • a non-recombinant recombinant adenovirus carrying both the H and F protein genes of the NA strain is produced. The virus and its growth were confirmed by the NA strain H And F. Select and confirm by fluorescent antibody method using monoclonal antibody against each protein.
  • mutant measles virus antigen of the present invention or the mutant measles virus gene encoding the same is used, a live attenuated measles vaccine or a gene vaccine compatible with the epidemic measles virus, and further, infection by the epidemic measles virus can be detected accurately. Diagnostic agents can be provided efficiently and economically.
  • Sequence Listing SEQ ID NO: 1 Sequence length: 18 5 4 Sequence type: Number of nucleic acid strands: Single-stranded topology: Linear type of linear sequence: cDNA to genomic RNA encoding H Protein Origin Organism name: Meas les vi rus Strain name: Attenuated measles virus CAM—70 shares
  • AAA ATC ATC GGT GAT GAA GTG GGC CTG AGG ACA CCT CAG AGA TTC ACT 336 Lys lie He Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro Gin Arg Phe Thi
  • GAG CTC ATG AAT GCA TTG GTG AAC TCA ACT CTA CTG GAG ACC AAA ACA 528 Glu Leu Met Asn Ala Leu Val Asn Ser Thr Leu Leu Glu Thr Lys Thr
  • AGC AAA AGG TCA GAG TTG TCA CAA CTG AGC ATG TAC CGA GTG TTT GAA 768 Ser Lys Arg Ser Glu Leu Ser Gin Leu Ser Met Tyr Arg Val Phe Glu
  • GTC TCC TTA TCA ACG GAT GAT CCA GTG ATA GAC AGG CTT TAC CTC TCA 1056
  • GCG TGT AAG GGT AAA ATC CAA GCA CTC TGC GAG AAT CCC GAG TGG GCA 1200
  • Pro Leu Lys Asp Asn Arg lie Pro Ser Tyr Gly Val Leu Ser Val Asp
  • Organism name Goenjin winores (measles virus)
  • Strain name Attenuated measles virus CAM—70 strain Sequence
  • Lys lie He Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro Gin Arg Phe Thr
  • Arg lie Lys Leu Asp Tyr Asp Gin Tyr Cys Ala Asp Ala Ala Ala Glu 145 150 155 160
  • Organism name Measles virus (measles virus)
  • Strain name Attenuated measles vinoles CAM—70 strain Sequence
  • Pro Glu Trp Ala Pro Leu Lys Asp Asn Arg lie Pro Ser Tyr Gly Val 305 310 315 320
  • Organism name measles vis virus
  • Strain name Attenuated measles vineless CAM—70 strain Sequence
  • Organism name measles vinoles
  • Strain name attenuated measles virus CAM—70 strains Array
  • Organism name Gonochin ⁇ inoresu (meas les vi rus)
  • Strain name Attenuated measles virus CAM—70 strain Sequence
  • Organism name measles virus
  • Strain name Attenuated measles virus CAM—70 strain Sequence is Gly Glu Asp Serlie Thr
  • Sequence length 18 5 4
  • Sequence type Nucleic acid number of strands: Single strand Topology: Linear arrangement
  • Lj class cDNA to genomic RNA encoding H rotein Origin Organism name: Measles Vinoles (meas les vi rus)
  • Strain name Poisonous measles virus NA strain Sequence
  • AGA ATC AAA TTG GAT TAT GAT CAA TAC TGT GCA GAT GTG GCT GCT GAA 480 Arg lie Lys Leu Asp Tyr Asp Gin Tyr Cys Ala Asp Ala Ala Ala Glu 145 150 155 160
  • GAA CTC ATG AAT GCA TTG GTG AAC GCA ACT CTA CTG GAG GCC AGG GCA 528 Glu Leu Met Asn Ala Leu Val Asn Ala Thr Leu Leu Glu Ala Lys Ala
  • GGG GTC CCC ATC GAA TTA CAA GTG GAA TGC TTC ACA TGG GAC CAA AAA 1728
  • Organism name gonorrhea (measles virus)
  • Strain name Poisonous measles virus NA strain
  • Lys lie lie lie Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro Gin Arg Phe Thr
  • Arg lie Lys Leu Asp Tyr Asp Gin Tyr Cys Ala Asp Val Ala Ala Glu 145 150 155 160
  • Pro Leu Lys Asp Asn Arg lie Pro Ser Tyr Gly Val Leu Ser Val Asn
  • Pro Glu Trp Ala Pro Leu Lys Asp Asn Arg lie Pro Ser Tyr Gly Val 305 310 315 320
  • Type of sequence Number of amino acid chains: Single-chain Topology: Linear Sequence type: Peptide Origin Organism name: Machina vinoles. (Measles vi rus) Strain name: NA strain of virulent measles virus Array
  • Organism name Goenzin Winores (measles virus)
  • Strain name Poisonous measles virus NA strain strain IJ
  • Organism name measles virus
  • Strain name NA strain of virulent measles virus
  • Organism name measles virus (measles virus)
  • Strain name Virulent measles virus NA sequence
  • Gly Pro Pro lie Ser Leu Glu Arg Leu Asp Val Gly Thr Asn Leu Gly
  • Organism name measles virus (measles virus)
  • Strain name attenuated measles virus CAM—70 strain Sequence
  • Tyr Tyr Thr Glu lie Leu Ser Leu Phe Gly Pro Ser Leu Arg Asp Pro
  • Asn Leu lie Ala Asn Cys Ala Ser He Leu Cys Lys Cys His Thr Thr 385 390 395 400
  • Gly Thr lie lie Asn Gin Asp Pro Asp Lys lie Leu Thr Tyr lie Ala
  • Gly Pro Pro lie Ser Leu Glu Arg Leu Asp Val Gly Thr Asn Leu Gly
  • Gly Thr lie lie Asn Gin Asp Pro Asp Lys lie Leu Thr Tyr lie Ala
  • Organism name Hemp Winores (measles virus)
  • Strain name Poisonous measles virus NA sequence
  • Gin Ala lie Asp Asn Leu Arg Ala Ser Leu Glu Thr Thr Asn Gin Ala 145 150 155 160 lie Glu Ala He Arg Gin Ala Gly Gin Glu Met He Leu Ala Val Gin

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Description

W 明 細 書 変異麻疹ウィルス抗原及びそれをコー ドする遺伝子 技術分野
本発明は、 変異麻疹ウィルス抗原及びそれをコー ドする遺 伝子に関する。 更に詳細には、 変異麻疹ウィルス株の Hタ ン パク抗原及び F タンパク抗原から選ばれる少な く と も 1 種の タンパク抗原を含有する変異麻疹ウィルス抗原、 ならびにそ れら変異麻疹ウィルス抗原をそれぞれコ ー ドする遺伝子に関 する。 本発明の変異麻疹ウィルス抗原又はこれをコー ドする 変異麻疹ウィ ルス遺伝子を用いる と 、 流行株麻疹ウィルス に 適合した弱毒生麻疹ワ ク チン又は遺伝子ワ ク チン、 さ らに流 行株麻疹ウィルスによる感染を的確に検出でき る診断剤を、 効率的且つ経済的に提供する こ と が可能である。 従来技術
( 1 ) 病原性 ： 麻疹ウィ ルスは、 麻疹の病原体でぁ リ 、 全 世界に広く 分布している。 こ のウィルスは伝染性が極めて高 く 、 ヒ トに飛沫感染する と 、 主に呼吸器系 と細網内皮組織を 犯し、 急性疾患を生じる。 罹患する と、 高熱、 カタル、 発疹 など全身にわたる症状を呈し、 重症例では細菌性肺炎、 中耳 炎、 急性脳炎を合併する。 尚、 1 9 9 6年の世界での麻疹の 推計患者数は約 4 2 0 0万人、 推計死亡者数は約 1 0 1 万人 である [ "The Wor ld Hea l th Repor t 1997 " ， p. 15， WHO (Wor l d Hea l th Organizat ion) 1997年発行] 。 こ の様に麻疹 は極めて重視すべき伝染病であ リ 、 ワ ク チンによる麻疹根絶 は今や全世界で望まれている。 こ の様な状況に呼応し、 世界 保健機構 （WH O ) による予防接種拡大計画 （EPI : Expanded Program on Immunizat ion) の一環と して、 麻疹の制圧を 2 0 1 0年とする 目標の下で、 麻疹根絶計画は既に着手され ている。
( 2 ) 形態とゲノ ム構造 ： 国際ウィルス分類委員会の第 6 回報告によれば、 麻疹ウィルスはモ ノネガウィルス 目パラ ミ ク ソ ウィルス科モル ビ リ ウィ ルス属に属する。 ビ リ オンは、 直径が約 1 5 0 n mのほぼ球形でぁ リ 、 脂質二重膜からなる エンベロープを有する。 そのエンベロープの全面には H
(hemagglut inin) タンパク と F (f us ion) タンパク とがス パイ ク状に突起し、 その基底はエンベロープ下面の Mat r ix 膜タンパク で支持されている。 エンベロープ内側に存在する ヌク レオキヤプシ ドは、 麻疹ウィルスゲノ ムである全長約 1 6 k b の線状単鎖 （一） セ ンス （いわゆる mononega) の遺 伝子 R N Aと タ ンパク からなる。 該遺伝子 R N Aは、 3 ' 末 端力 ら 5 ' 末端方向に）頃に、 N (nuc l eocaps id-asso ic i ated prot e ins) , P Z C / V (phosphopro t e in/C p r o t e i n/V prote in: t r ic i s t ron i c gene) , M (ma t r ix prot e in) , F ( f us ion prot e in) , H (hemagg lut in in p ro t e in) 及び L (l arge put at ive po l ymerase prote in) をそれぞれコー ドし てレヽる ( i rus Taxonomy： Sixth Repor t o f the Inter- n a t i o n a 1 Commi t t ee of Taxonomy of Vi ruses" , Archives o f Vi ro logy, Supp l ement 10, pp. 268 - 270 ,及び pp.271-27 2, 1995) 。
(.3 ) 従来の弱毒生麻疹ワ ク チン株ウィ ルス ： 従来の弱毒 麻疹ウィルス株と しては、 例えば、 次の株が知 られている ： C AM- 7 0 , Schwarz FF8 , A I Κ - C , A I K - H D C , T D 9 7 , Mo r a t e n , Connaught , Schwarz , Edmons ton B, E dmo n s ton-Zagreb, Leningrad-16, Shangha i-191, Chang- chum- 47， 及び Be i j ing ("Vacc ines" 、第 2版， pp. 238-239,
S. A. Plotokin 及び E. A. Mor t imer著， W. B. Saunders Company, 1994年発行） 。 尚、 ワ ク チン株ウィルスはいずれ も、 生ワクチンの有効成分と しての安全性と有効性と を確保 するために、 分離株 （野生の麻疹ウィルス） の継代に用いる 宿主細胞、 培養温度、 培地の p Hや組成等の条件を多様にェ 夫し、 これ等の諸条件を組合せて継代を重ねる こ とによ り 弱 毒化された宿主域変異株あるいは温度変異株のウィルスであ る。
( 4 ) 予防 ： 麻疹予防のワ ク チンは、 1 9 6 0年代前半か ら実用に供され始めた。 かかる初期の頃には、 不活化麻疹ゥ ィルスを有効成分して含有する不活化ワクチン （K ； " k i 1 - l ed v i rus vacc ine" の略） が主に使用 されていた。 し力 し、 該ワ ク チンは、 免疫効果が不十分な上に、 重症の異型麻疹を 誘発したため、 1 9 6 0年代後半に入リ 、 弱毒麻疹ウィルス を有効成分と して用いる生ワクチン （ L ； " l ive v i rus vaccine" の略） が次第に広く 使用され始めた。 この間、 K L併用が行われたこ と もあるが、 1 9 7 0年代以降は、 これ らを一層弱毒化した高度弱毒生ワクチン （FL : f ur ther at tenuated l ive vacc ine) 力 s世界で広く 市販され、 実用に 供されている。 尚、 これ等の生ワクチンはいずれも、 前述
( 3 ) の弱毒生麻疹ワクチン株ウィルスを有効成分と して用 いる ものである。
( 5 ) 麻疹のワクチンと診断に関する課題 ： 従来の弱毒生 麻疹ワ ク チンによる免疫持続につき、 1 9 7 0年代前半頃か ら疑義が生じていた。 これは、 いわゆる二次ワ クチン免疫不 全 (secondary vacc ine f a i lure) や修飾麻疼 (mod i f i ed meas les) に関する報告でぁ リ 、 ワ ク チン接種を受けている にも拘らず麻疹に再感染し、 自然感染と は異なる症状 （通常 は自然感染に比べ軽症であるが、 稀に重症例） が観察されて いる。 この様な再感染例は、 1 9 8 0年代後半から世界各地 で散発し、 1 9 9 0年代には頻繁に報告されている。 従って、 再感染の予防と感染ウィルスの鑑別は、 世界各国の国民のみ ならず、 前述の WH Oによる世界の麻疹根絶計画の上からも， 急務且つ必須の検討課題である。 しかし、 現在流行している 麻疹ウィルスの予防に有効なワ ク チンや診断剤は未だ知られ ていない。 発明の概要
本発明の筆頭発明者は、 3 0余年に渡リ 、 麻疹の臨床、 疫 学及びワ ク チン学の研究のみならず、 ワ ク チン株、 流行株、 新鮮分離株等の多様な麻疹ウィルスに関 して、 ウィルス学及 び免疫学の観点から研究を進める と共に、 これ等の各ウィル ス株の遺伝子を解析した。 そ して、 従来の強毒株と 、 変異株 である強毒株及び流行株と の間の抗原性又は免疫原性の差異 を確認し、 かかる差異の要因を特定すべく 鋭意研究を行った, その結果、 変異株は、 Hタ ンパク と F タ ンパク の各タ ンパク をコー ドする遺伝子の特定領域において、 ア ミ ノ酸置換を伴 う変異を有する とい う驚く べき知見を得た。 更に本発明者ら は、 Hタンパク及び F タンパクそれぞれの変異領域が変異麻 疹ウィルス抗原と して有用である こ と を知見した。 本発明は この新規な知見に基いて完成されたものである。
従って、 本発明の主なる 1 つの 目的は、 流行株麻疹ウィル スワクチンや診断剤の作成に有効な変異麻疹ウィルス Hタン パク抗原及び変異麻疹ウィ ルス F タ ンパク抗原から選ばれる 少なく と も 1 種のタ ンパク抗原を含有する変異麻疹ウィルス 抗原を提供する こ と にある。
本発明の他の 1 つの目的は、 流行株麻疹ウィルスに对する 遺伝子ワ ク チンや診断剤の作成に有効な変異麻疹ウィ ルス H タ ンパク抗原をコ一 ドする遺伝子及び変異麻疹ウィルス F タ ンパク抗原をコー ドする遺伝子から選ばれる少なく と も 1種 の遺伝子を含有する変異麻疹ウィルス遺伝子を提供する こ と にある。
本発明の上記及び他の諸目的、 諸特徴並びに諸利益は、 添 付の配列表を参照しながら述べる次の詳細な説明及び請求の 範囲の記載から明 らかになる。
次に、 本発明の基本的特徴を更に明 らかにするために、 本 発明の完成に至る経緯を追いなが ら、 本発明に包含される技 術的諸特徴について説明する。 配列表の簡単な説明
以下に述べる各配列番号のア ミ ノ酸配列において、 左側端 部が N—末端でぁ リ 、 右側端部が C 一末端である。
配列番号 1 は、 弱毒麻疹ウィルス C A M— 7 0株の Hタン パク をコー ドする遺伝子 R N Aに対応する c D N Aの塩基配 列と、 該配列がコ ー ドする Hタンパク の全長ァ ミ ノ酸配列で あ り ；
配列番号 2 は、 弱毒麻疹ウィルス C A M— 7 0株の Hタ ン パク の全長ア ミ ノ酸配列でぁ リ ；
配列番号 3 は、 配列番号 2 の第 9 3番〜第 6 1 6番のア ミ ノ酸からなる断片ペプチ ドのア ミ ノ酸配列でぁ リ ； 配列番号 4 は、 配列番号 2 の第 1 7 6番〜第 3 1 6番のァ ミ ノ酸からなる断片べプチ ドのア ミ ノ酸配列であ り ； 配列番号 5 は、 配列番号 2 の第 1 7 2番〜第 1 7 8 番のァ ミ ノ酸からなる断片べプチ ドのァ ミ ノ酸配列であ リ ； 配列番号 6 は、 配列番号 2 の第 2 3 8番〜第 2 4 4番のァ ミ ノ酸からなる断片べプチ ドのア ミ ノ酸配列であ り ； 配列番号 7 は、 配列番号 2 の第 2 7 7番〜第 2 8 2番のァ ミ ノ酸からなる断片べプチ ドのア ミ ノ酸配列でぁ リ ； 配列番号 8 は、 配列番号 2 の第 3 0 1 番〜第 3 0 7番のァ ミ ノ酸からなる断片べプチ ドのア ミ ノ酸配列でぁ リ ； 配列番号 9 は、 強毒麻疹ウィルス N A株の H タ ンパク をコ 一ドする遺伝子 R N Aに対応する c D N Aの塩基配列と、 該 配列がコ一ドする Hタンパク の全長ア ミ ノ酸配列でぁ リ ； 配列番号 1 0 は、 強毒麻疹ウィ ルス N A株の Hタンパク の 全長ァ ミ ノ酸配列であ リ 、
配列番号 1 1 は、 配列番号 1 0 の第 9 3番〜第 6 1 6番の アミ ノ酸からなる断片ペプチ ドのア ミ ノ酸配列でぁ リ ； 配列番号 1 2 は、 配列番号 1 0 の第 1 7 6番〜第 3 1 6番 のアミ ノ酸からなる断片ペプチ ドのア ミ ノ酸配列でぁ リ ； 配列番号 1 3 は、 配列番号 1 0 の第 1 7 2番〜第 1 7 8番 のアミ ノ酸からなる断片べプチ ドのア ミ ノ酸配列であ り ； 配列番号 1 4 は、 配列番号 1 0 の第 2 3 8番〜第 2 4 4番 のア ミ ノ酸からなる断片べプチ ドのア ミ ノ酸配列でぁ リ ； 配列番号 1 5 は、 配列番号 1 0 の第 2 7 7番〜第 2 8 2番 のアミ ノ酸からなる断片べプチ ドのア ミ ノ酸配列でぁ リ ； 配列番号 1 6 は、 配列番号 1 0の第 3 0 1番〜第 3 0 7番 のアミ ノ酸からなる断片ペプチ ドのア ミ ノ酸配列でぁ リ ； 配列番号 1 7は、 弱毒麻疹ウィ ルス C AM— 7 0株の Fタ ンパク をコー ドする遺伝子 R N Aに対応する c D N Aの塩基 配列と 、 該配列がコ ー ドする Fタ ンパク の全長ア ミ ノ酸配列 であ リ ；
配列番号 1 8 は、 弱毒麻疹ウイノレ ス C AM— 7 0株の Fタ ンパク の全長ア ミ ノ酸配列であ り ；
配列番号 1 9 は、 強毒麻疹ウィルス N A株の Fタンパク を コー ドする遺伝子 R N Aに対応する c D N Aの塩基配列と、 該配列がコー ドする Fタンパクの全長ア ミ ノ酸配列でぁ リ ； 配列番号 2 0は、 強毒麻疹ウィルス N A株の Fタンパクの 全長ア ミ ノ酸配列である。 発明の詳細な発明
本発明の 1つの態様によれば、 下記の （ I ) 変異麻疹ウイ ルス Hタ ンパク抗原及び （ I I ) 変異麻疹ウィ ルス F タ ンパ ク抗原よ リ なる群から選ばれる少なく と も 1種のタンパク抗 原を含有する変異麻疹ウィルス抗原が提供される。
( I ) 配列番号 2又は配列番号 1 0 に記載の全長 6 1 7個の ア ミ ノ酸の配列のア ミ ノ酸番号で特定される、 ( a ) 第 ：！ 〜 6 1 7番の全長 ；
( b ) 第 9 3 〜 6 1 6番の断片 ；
( c ) 第 1 7 6 〜 3 1 6番の断片 ；
( d ) 第 1 7 2〜 1 7 8番、 第 2 3 8〜 2 4 4番、 第 2 7 7〜 2 8 2番、 又は第 3 0 1 〜 3 0 7番の断片 ；
( e ) 第 1 7 4番、 第 1 7 6番、 第 2 4 3番、 第 2 7 9番、 又は第 3 0 2番のア ミ ノ酸を含み、 かつ該ア ミ ノ酸に隣接す る少なく と も 6 個のア ミ ノ酸の配列からなる断片 ； 及び
( f ) 第 9 3番、 第 1 5 7番、 第 1 6 9番、 第 1 7 5番、 第 2 1 1番、 第 2 5 2番、 第 2 7 6番、 第 2 8 4番、 第 2 8 5番、 第 2 9 6番、 第 3 1 6番、 第 3 3 8番、 第 3 8 7番、 第 4 1 6番、 第 4 5 5番、 第 4 8 1 番、 第 4 8 4番、 第 5 0 5番、 第 5 4 6番、 第 5 9 2番、 第 6 0 0番、 第 6 0 3番、 又は第 6 1 6番のア ミ ノ酸を含み、 かつ該ァ ミ ノ酸に隣接す る少な く と も 6 個のア ミ ノ酸の配列からなる断片よ リ なる群 から選ばれる少なく と も 1 種の変異麻疹ウィルス Hタ ンパク 抗原。
( I I ) 配列番号 1 8又は配列番号 2 0 に記載の全長 5 5 0 個のア ミ ノ酸の配列のアミ ノ酸番号で特定される、
( g ) 第 ：！ 〜 5 5 0番の全長 ； 及び
( h ) 第 1 1番、 第 5 2番、 第 1 0 7番、 第 1 6 5番、 第 3 9 8番、 第 4 1 7番、 又は第 5 2 3番のア ミ ノ酸を含み、 かつ該アミ ノ酸に隣接する少なく と も 6個のア ミ ノ酸の配列 からなる断片よ リ なる群ら選ばれる少な く と も 1種の変異麻 疹ウィルス Fタ ンパク抗原。
次に、 本発明の理解を容易にするために、 まず本発明の基 本的特徴及び好ま しい態様を列挙する。
1 . 下記の （ I ) 変異麻疹ウィルス Hタ ンパク抗原及び （ I I ) 変異麻疹ウィルス Fタ ンパク抗原よ リ なる群から選ばれ る少な く と も 1種のタンパク抗原を含有する変異麻疹ウィル ス抗原。
( I ) 配列番号 2又は配列番号 1 0に記載の全長 6 1 7個の ア ミ ノ酸の配列のァ ミ ノ酸番号で特定される、
( a ) 第 1 〜 6 1 7番の全長 ；
( b ) 第 9 3〜 6 1 6番の断片 ；
( c ) 第 1 7 6〜 3 1 6番の断片 ；
( d ) 第 1 7 2〜 1 7 8番、 第 2 3 8〜 2 4 4番、 第 2 7 7〜 2 8 2番、 又は第 3 0 1 〜 3 0 7番の断片 ；
( e ) 第 1 7 4番、 第 1 7 6番、 第 2 4 3番、 第 2 7 9番、 又は第 3 0 2番のア ミ ノ酸を含み、 かつ該ア ミ ノ酸に隣接す る少なく と も 6個のア ミ ノ酸の配列からなる断片 ； 及び
( f ) 第 9 3番、 第 1 5 7番、 第 1 6 9番、 第 1 7 5番、 第 2 1 1番、 第 2 5 2番、 第 2 7 6番、 第 2 8 4番、 第 2 8 5番、 第 2 9 6番、 第 3 1 6番、 第 3 3 8番、 第 3 8 7番、 第 4 1 6番、 第 4 5 5番、 第 4 8 1番、 第 4 8 4番、 第 5 0 5番、 第 5 4 6番、 第 5 9 2番、 第 6 0 0番、 第 6 0 3番、 又は第 6 1 6番のア ミ ノ酸を含み、 かつ該ァ ミ ノ酸に隣接す る少な く と も 6個のア ミ ノ酸の配列からなる断片よ り なる群 から選ばれる少なく と も 1 種の変異麻疹ウィルス Hタ ンパク 抗原。
( I I ) 配列番号 1 8又は配列番号 2 0 に記載の全長 5 5 0 個のァ ミ ノ酸の配列のア ミ ノ酸番号で特定される、
( g ) 第 ：！ 〜 5 5 0番の全長 ； 及び
( h ) 第 1 1番、 第 5 2番、 第 1 0 7番、 第 1 6 5番、 第 3 9 8番、 第 4 1 7番、 又は第 5 2 3番ア ミ ノ酸を含み、 力、 っ該ァ ミ ノ酸に隣接する少なく と も 6個のァ ミ ノ酸の配列か らなる断片よ リ なる群ら選ばれる少なく と も 1 種の変異麻疹 ウィルス F タ ンパク抗原。
2 . 下記の （ I ) 変異麻疹ウィルス Hタ ンパク抗原をコー ド する遺伝子及び （ I I ) 変異麻疹ウィルス F タ ンパク抗原を コー ドする遺伝子よ り なる群から選ばれる少なく と も 1種の 遺伝子を含有する変異麻疹ウィ ルス遺伝子。
( I ) 配列番号 2又は配列番号 1 0 に記載の全長 6 1 7個の ア ミ ノ酸の配列のア ミ ノ酸番号で特定される、
( a ) 第 1 〜 6 1 7番の全長をコー ドする遺伝子 ；
( b ) 第 9 3 〜 6 1 6番の断片をコー ドする遺伝子 ； ( c ) 第 1 7 6 〜 3 1 6番の断片をコー ドする遺伝子 ； ( d ) 第 1 7 2 〜 1 7 8番、 第 2 3 8 〜 2 4 4番、 第 2 7 7〜 2 8 2番、 又は第 3 0 1 〜 3 0 7番の断片をコー ドする 遺伝子 ；
( e ) 第 1 7 4番、 第 1 7 6番、 第 2 4 3番、 第 2 7 9番、 又は第 3 0 2番のア ミ ノ酸を含み、 かつ該ア ミ ノ酸に隣接す る少な く と も 6 個のア ミ ノ酸の配列からなる断片をコー ドす る遺伝子 ； 及び
( f ) 第 9 3番、 第 1 5 7番、 第 1 6 9番、 第 1 7 5番、 第 2 1 1番、 第 2 5 2番、 第 2 7 6番、 第 2 8 4番、 第 2 8 5番、 第 2 9 6番、 第 3 1 6番、 第 3 3 8番、 第 3 8 7番、 第 4 1 6番、 第 4 5 5番、 第 4 8 1 番、 第 4 8 4番、 第 5 0 5番、 第 5 4 6番、 第 5 9 2番、 第 6 0 0番、 第 6 0 3番、 又は第 6 1 6番のア ミ ノ酸を含み、 かつ該ア ミ ノ酸に隣接す る少なく と も 6個のア ミ ノ酸の配列からなる断片をコー ドす る遺伝子よ り なる群ら選ばれる少なく と も 1種の変異麻疹ゥ ィルス Hタ ンパク抗原をコー ドする遺伝子。
( I I ) 配列番号 1 8又は配列番号 2 0 に記載の全長 5 5 0 個のア ミ ノ酸の配列のア ミ ノ酸番号で特定される、
( g ) 第 1 〜 5 5 0番の全長をコー ドする遺伝子 ； 及び
( h ) 第 1 1 番、 第 5 2番、 第 1 0 7番、 第 1 6 5番、 第 3 9 8番、 第 4 1 7番、 又は第 5 2 3番のア ミ ノ酸を含み、 かつ該アミ ノ酸に隣接する少なく と も 6 個のア ミ ノ酸の配列 からなる断片をコー ドする遺伝子よ り なる群ら選ばれる少な く と も 1種の変異麻疹ウィルス F タ ンパク抗原をコー ドする 遺伝子。
以下、 本発明について具体的に説明する。
尚、 本発明において、 D N A塩基配列中の Aはアデニン、 Cはシ トシン、 Gはグァニン、 Tはチミ ンを示す。
また、 本発明において、 ア ミ ノ酸配列中の A 1 a はァラニ ン、 A r gはアルギニン、 A s nはァ ス ノ、°ラ ギン、 A s p は ァスパラ ギン酸、 C y s はシスティ ン、 G 1 nはグルタ ミ ン、 G 1 uはグルタ ミ ン酸、 G 1 yはグリ シン、 H i s はヒ スチ ジン、 I 1 e はイ ソ ロイ シン、 L e uはロ ィ シン、 L y s は リ ジン、 M e t はメ チォニ ン、 P h e はフ エュルァラ ニン、 P r o はプロ リ ン、 S e r はセ リ ン、 T h r はス レオニン、 T r p は ト リ プ ト フ ァ ン、 T y r はチロ シン、 V a l はバリ ンである。
初めに、 本発明の基本的特徴を更に明 らかにするために、 本発明の完成に至る経緯を追いなが ら、 本発明に包含される 技術的諸特徴について説明する。
従来の生ワクチンは全て、 1 9 5 0〜 1 9 6 0年代に流行 したウィルスを弱毒化した株で製造されている。 従って、 従 来のワ クチン株ウィルスの抗原性は、 約半世紀前の流行株の ものである。
一方、 近年及び最近の流行株ウィルスは、 ウィルス感染が 成立するための細胞へのピ リ オンの吸着 · 侵入に関与する H タンパク遺伝子及び Fタンパク遺伝子に変異を有する こ とが 確認された。 特に、 Hタ ンパク遺伝子の変異は、 該タ ンパク を構成する全 6 1 7個のア ミ ノ酸の配列の特定領域における 1 7〜 1 9個のア ミ ノ酸の置換をもた ら し、 タ ンパク の立体 構造を変化させるため、 抗原変異 （ant igenic variat ion) が生じている。 かかる抗原変異は、 Hタ ンパク の抗原不連続 変異 （ant igenic shi f t) に匹敵するほど大き く 重大だと判 断される。
そ して、 流行株の抗原変異 (ant igenic variat ion) は、 前述の二次ワ ク チン免疫不全や修飾麻疹をもた らす重視すベ き因子であるこ と を知見した。
上記の知見に基づき、 変異した麻疹ウィルスのゲノ ム、 特 に Hタ ンパク遺伝子及び F タンパク遺伝子、 並びにこれ等が コ ー ドする変異抗原 （全長タンパク又はその断片べプチ ド） を提供する こ と に成功した。
更に、 上記の遺伝子、 変異抗原、 そのェピ トープ等の、 次 の （ i ) 〜 （ iii ) の用途を開発する こ と に成功した。
( i ) 生ワクチン株ウィルスゲノ ムの改造 ： 従来の生ワク チン株ウィルスの Hタ ンパク遺伝子を、 流行株ウィルスの : H タンパク遺伝子と置換した組換えウィルスを作出する。 これ によ リ 、 流行株の抗原性に見合った生ワクチン用の弱毒ウイ ルス株が迅速に得られる。 換言すれば、 かかる組換えウィル スは、 流行株感染の予防に優れた適格なワ ク チンの有効成分 と して用いる こ とができ る。 こ の方法の更なる利点は、 その 経済性にある。 即ち、 ウィ ルス の弱毒化に要する時間 · 労力 経費等が大幅に短縮且つ節減でき る こ と である。 尚、 従来の ウィルスの弱毒化方法は、 前述の通 リ 定まった方法がないた め、 主にウィルス継代によ る ものでぁ リ 、 生ワクチン用の弱 毒株を確立するまでに少な く と も数年〜約 1 0年を要してい た。
( ii ) 遺伝子ワ ク チン （gene vaccine)用の有効成分の作 出 ： 流行株ウィルス の Hタ ンパク遺伝子及び Fタ ンパク遺伝 子を、 種々 のベク ター、 例えば、 プラス ミ ドベク ター、 コス ミ ドベク ター、 フ ァ ージベク ター、 シャ トノレベク ター、 非增 殖型のウィルスベク ター等に挿入連係する こ と によ リ 作出す る。
例えば、 非増殖型ウィルスゲノ ムに上記 Hタンパク遺伝子 及び F タンパク遺伝子の c D N Aを挿入連係して作出 した非 増殖型組換えウィルスは、 遺伝子ワ ク チンあるいは D N Aヮ ク チンの有効成分と して、 従来の生麻疹ワクチンと 同様に体 液性及び細胞性の両免疫を誘導する。 特筆すべき こ と に、 こ のよ う なワクチンは経鼻接種が可能である。
また、 流行株ウィ ルスの Hタ ンパク遺伝子の変異領域を含 む c D N A断片を、 例えはプラス ミ ドベク ターに挿入連係す るこ と によ リ 、 naked DNA を調製する。 かかる D N Aは、 麻 疹予防の D N Aワクチンないしは遺伝子ワクチンの有効成分 と して使用でき る。 ( Mi ) 流行株に最適な診断剤の調製 ： 流行株ウィルスの H タンパク遺伝子及び F タンパク遺伝子の変異を考慮して P C Rプライマ ーを合成する。 かかるプライマ ーは、 流行麻疹ゥ ィルス株を同定する と共に、 強毒株と弱毒株と を鑑別するた めの遺伝子診断剤と して使用でき る。
また、 該遺伝子がコー ドする変異抗原 （全長タ ンパク又は その断片ペプチ ド） を調製する と共に、 そのェピ トープを化 学合成する。 これ等は、 流行麻疹の最適な診断用抗原と して 提供される。
次に、 本発明の変異麻疹ウィルス抗原及び変異麻疹ウィル ス遺伝子の調製、 調製された抗原と遺伝子のワ ク チンや診断 剤と しての利用について説明する。
[ I ] 変異麻疹ウィルス抗原及び変異麻疹ウィルス遺伝子の 調製
( 1 ) 種々の麻疹ウィルス抗原の抗原解析 ： 抗原解析には 中和試験、 H I (hemagglut inat ion inhi i t ion) 試験、 P A (pass ive agglut inat ion) 法、 モノ ク ローナノレ抗体を用 いる酵素免疫測定法や蛍光抗体法等が採用でき る。 これ等の う ち、 特に中和反応による抗体価の測定結果に基づく 解析は 必須でぁ リ 、 マイ ク ロプレー ト を用いる U edaの変法 （Biken Journal, 14， 155- 160 , 1971 ) に従って行 う こ とができ る。 抗原解析に用いる抗体と しては、 血清、 例えば、 麻疹患者 血清、 以下に示す麻疹ウィルスに対するマウス免疫血清等を 用いる。
抗原 （攻撃ウィルス） を選択する際に特に留意すべき点は、 過去から現在にいたる様々 な麻疹ウィルス株を使用する こ と である。 例えば、 1 9 5 0〜 1 9 6 0代の流行株 （過去の強 毒株） の代表と して田辺、 Edmonston 等、 かかる株を弱毒化 するこ とによ リ確立された前述の生ワ クチン株 （従来の弱毒 株） と しては、 C AM_ 7 0、 Edmonston B 等、 更に、 最近 の流行株 （強毒株） と しては、 1 9 9 0年代に入り世界各地 で分離されている麻疹ウィルス株を用いる こ とができ る。 例 えば、 本発明者らが多様な材料から分離した F — t [再感染 者の咽喉拭い液 （throat swab) から 1 9 9 1 年に分離] 、 F - b [再感染者の血液 （blood) から 1 9 9 1 年に分離] 、 U— t (ワ クチン未接種患者の throat swa から 1 9 9 1 年に分離） 、 U— b (ワ ク チン未接種患者の blood から 1
9 9 1 年に分離） 、 M o m o (患者から 1 9 9 5年に分離） 、 N A (患者から 1 9 9 6年に分離） 等が挙げられる。
尚、 上記のウィルス株について以下、 屡々 、 （ ） 内のよ う に略記する ： 田辺 （Tana)、 Edmons ton (Edmo)、 C AM—
7 0 (CAM) , 及び M o m o (MO) 。
( 2 ) 遺伝子の塩基配列に基づく 変異領域の検出と遺伝子 がコー ドするア ミ ノ酸配列の解読 ： 上述 （ 1 ) の各麻疹ウイ ルス株のゲノ ムを用いて行う。 先ず、 ウィルスゲノ ム R N A を抽出の後、 プライマーを用いて c D N Aを作成し、 その塩 基配列を P C Rを用いる直接シーク ェンス法によ り決定する。 シーク ェンス と共にホモロ ジ一検索を行い、 変異領域を特定 する。
次に、 上記の変異領域から、 Univeral Code に基づきア ミ ノ酸配列を判読し、 そのア ミ ノ酸配列について演繹的解析を 行う。 疎水性パターンの解析、 及びタ ンパク の二次構造の決 定 （Chou-Fasman 解析） には、 解析ソ フ ト DNASIS- Mac
(version 3.6) [ 日 本国、 日 立ソ フ ト ウ ェアエンジニア リ ン グ （株） 社製] を用いる こ と ができ る。 また、 ェピ ト ープの 決定には、 解析ソ フ ト Epitope Advisor [ 日本国、 （株） 富 士通九州システムエンジニア リ ング （ F Q S ) 社製] を用レヽ る こ と ができ る。
( 3 ) 変異麻疹ウィルス抗原及びそれをコー ドする遺伝子 ： 本発明者等は、 上記 （ 1 ) の抗原解析や （ 2 ) の塩基及びァ ミ ノ酸配列の分析に基づき、 近年の麻疹ウィルス流行株にお いて、 過去の強毒株や従来の弱毒麻疹生ワ クチン株と の比較 から、 ア ミ ノ酸置換が存在する領域を Hタ ンパク及び タ ン パク に見出 し、 更に、 麻疹ウィルス流行株のワ ク チンや診断 に有用な抗原を特定した。 本発明の変異麻疹ウィルス抗原は、 弱毒麻疹ウィルス株である C AM— 7 0又は流行麻疹ウィル ス株である N A株の Hタンパク及び Fタ ンパク の全長又は断 片である。 いずれのア ミ ノ 酸配列も本願発明者らによって初 めて開示されたものである。 具体的には、 本発明の麻疹ウイ ノレス抗原は、 次に示す （ I ) 変異麻疹ウィ ルス Hタ ンパク抗 原及び （ I I ) 変異麻疹ウィルス Fタ ンパク抗原よ リ なる群 から選ばれる少なく と も一種のタ ンパク抗原を含有する抗原 である。
( I ) 配列番号 2又は配列番号 1 0に記載の全長 6 1 7個の アミ ノ酸の配列のア ミ ノ酸番号で特定される、
( a ) 第 ：！ 〜 6 1 7番の全長 ；
( b ) 第 9 3〜 6 1 6番の断片 ； ( c ) 第 1 7 6 〜 3 1 6番の断片 ；
( d ) 第 1 7 2 〜 1 7 8番、 第 2 3 8 〜 2 4 4番、 第 2 7 7〜 2 8 2番、 又は第 3 0 1 〜 3 0 7番の断片 ；
( e ) 第 1 7 4番、 第 1 7 6番、 第 2 4 3番、 第 2 7 9番、 又は第 3 0 2番のア ミ ノ酸を含み、 且つ該ア ミ ノ酸に隣接す る少な く と も 6個のア ミ ノ酸の配列からなる断片 ； 及び
( f ) 第 9 3番、 第 1 5 7番、 第 1 6 9番、 第 1 7 5番、 第 2 1 1番、 第 2 5 2番、 第 2 7 6番、 第 2 8 4番、 第 2 8 5番、 第 2 9 6番、 第 3 1 6番、 第 3 3 8番、 第 3 8 7番、 第 4 1 6番、 第 4 5 5番、 第 4 8 1 番、 第 4 8 4番、 第 5 0 5番、 第 5 4 6番、 第 5 9 2番、 第 6 0 0番、 第 6 0 3番、 又は第 6 1 6番のア ミ ノ酸を含み、 且つ該ア ミ ノ酸に隣接す る少な く と も 6個のア ミ ノ酸の配列からなる断片よ り なる群 から選ばれる少なく と も 1 種の変異麻疹ウィルス Hタ ンパク 抗原。
( I I ) 配列番号 1 8又は配列番号 2 0 に記載の全長 5 5 0 個のア ミ ノ酸の配列のア ミ ノ酸番号で特定される、
( g ) 第 ：！ 〜 5 5 0番の全長 ； 及び
( h ) 第 1 1 番、 第 5 2番、 第 1 0 7番、 第 1 6 5番、 第 3 9 8番、 第 4 1 7番、 又は第 5 2 3番のア ミ ノ酸を含み、 且つ該アミ ノ酸に隣接する少なく と も 6 個のア ミ ノ酸の配列 からなる断片よ リ なる群から選ばれる少なく と も 1 種の変異 麻疹ウィルス F タ ンパク抗原。 本発明の変異麻疹ウィルス抗原に含有されるタンパク抗原 の う ち、 （ a ) 及び （ g ) はそれぞれ Hタ ンパク及ぴ タ ン パクであ り 、 （ b ) 〜 （ f ) 及び （ h ) はペプチ ド （断片） である。 更に、 （ d ) に記載した 4種の断片、 即ち、 配列番 号 2又は 1 0に記載の全長 6 1 7個のア ミ ノ酸の配列のア ミ ノ酸番号で特定される第 1 7 2〜 1 7 8番、 第 2 3 8〜 2 4 4番、 第 2 7 7〜 2 8 2番、 及び第 3 0 1 〜 3 0 7番は、 本 発明者らによって開示された Hタ ンパク のェピ トープである。
( a ) 〜 （ d ) 及び （ g ) については、 具体的な配列を配列 表に示した。 いずれの抗原も、 配列表のア ミ ノ酸配列を基に 化学合成するこ とができる （実施例 5 を参照） 。
本発明の変異麻疹ウィルス抗原は、 上記の全長タンパク及 びその断片べプチ ドから選ばれるタ ンパク抗原を少なく と も 1種含有する ものでぁ リ 、 タンパク抗原は使用 目的に応じて 適宜選択する こ とができる。 又、 複数の抗原を組み合わせて 使用するこ と もでき る。
更に、 本発明の他の 1つの態様によれば、 上記の変異麻疹 ウィルス抗原をコー ドする遺伝子が提供される。 具体的には、 次に示す （ I ) 変異麻疹ウィルス Hタ ンパク抗原をコー ドす る遺伝子及び （ I I ) 変異麻疹ウィルス Fタ ンパク抗原をコ ー ドする遺伝子よ リ なる群から選ばれる少なく と も一種の遺 伝子を含有する変異麻疹ウィルス遺伝子が提供される。
( I ) 配列番号 2又は配列番号 1 0 に記載の全長 6 1 7個の ア ミ ノ酸の配列のア ミ ノ酸番号で特定される、
( a ) 第 1 〜 6 1 7番の全長をコー ドする遺伝子 ；
( b ) 第 9 3〜 6 1 6番の断片をコー ドする遺伝子 ； ( c ) 第 1 7 6〜 3 1 6番の断片をコー ドする遺伝子 ； ( d ) 第 1 7 2〜 1 7 8番、 第 2 3 8〜 2 4 4番、 第 2 7
7〜 2 8 2番、 又は第 3 0 1 〜 3 0 7番の断片をコー ドする 退 十 ；
( e ) 第 1 7 4番、 第 1 7 6番、 第 2 4 3番、 第 2 7 9番、 又は第 3 0 2番のア ミ ノ酸を含み、 かつ該ア ミ ノ酸に隣接す る少な く と も 6個のア ミ ノ酸の配列からなる断片をコー ドす る遺伝子 ； 及び
( f ) 第 9 3番、 第 1 5 7番、 第 1 6 9番、 第 1 7 5番、 第 2 1 1番、 第 2 5 2番、 第 2 7 6番、 第 2 8 4番、 第 2 8 5番、 第 2 9 6番、 第 3 1 6番、 第 3 3 8番、 第 3 8 7番、 第 4 1 6番、 第 4 5 5番、 第 4 8 1番、 第 4 8 4番、 第 5 0 5番、 第 5 4 6番、 第 5 9 2番、 第 6 0 0番、 第 6 0 3番、 又は第 6 1 6番のア ミ ノ酸を含み、 且つ該ア ミ ノ酸に隣接す る少なく と も 6個のア ミ ノ酸の配列からなる断片をコー ドす る遺伝子よ リ なる群ら選ばれる少なく と も 1種の変異麻疹ゥ ィルス Hタ ンパク抗原をコー ドする遺伝子。
( I I ) 配列番号 1 8又は配列番号 2 0に記載の全長 5 5 0 個のァ ミ ノ酸の配列のア ミ ノ酸番号で特定される、
( ) 第 1 〜 5 5 0番の全長をコー ドする遺伝子 ； 及び ( h ) 第 1 1番、 第 5 2番、 第 1 0 7番、 第 1 6 5番、 第 3 9 8番、 第 4 1 7番、 又は第 5 2 3番のア ミ ノ酸を含み、 かつ該ア ミ ノ酸に隣接する少なく と も 6個のァ ミ ノ酸の配列 からなる断片をコー ドする遺伝子よ リ なる群ら選ばれる少な く と も 1種の変異麻疹ウィ ルス Fタ ンパク抗原をコー ドする 退ィ: κ子。
本発明の変異麻疹ウィルス抗原をコー ドする遺伝子は、 変 異麻疹ウィルス抗原である全長タ ンパク又はその断片べプチ ドをコ一ドする遺伝子であれば特に限定されず、 C AM— 7 0又は N A株のゲノ ム R N Aの塩基配列に限定される もので はない。 変異麻疹ウィルス遺伝子と しては、 配列番号 1、 9、 1 7及び 1 9 に記載の c D N Aを使用する こ と もでき る し、 又、 変異麻疹ウィルス抗原のア ミ ノ酸配列を基に塩基配列を 合成するこ と もでき る。
本発明の変異麻疹ウィルス遺伝子は、 上記の変異麻疹ウイ ルス抗原をコー ドする遺伝子から選ばれる遺伝子を少なく と も 1種含有する ものでぁ リ 、 含有される遺伝子は、 使用 目的 に応じて適宜選択するこ と ができ る。 本発明の変異麻疹ウイ ルス抗原と 同様に、 本発明の変異麻疹ウィルス遺伝子は、 弱 毒株の遺伝子及び流行株の遺伝子を包含する。 本発明の開示 を基に、 例えば、 流行株に有効な生ワクチンの作成が可能に なる {後述の [ Π]( 1 ) 及び実施例 2 と 3 を参照 } 。 又、 複 数の遺伝子を組み合わせて用いる場合には、 遺伝子を連係し て用いるこ と もでき る {後述の [ Π ] ( 2 ) 及び実施例 4 を参 照） 。
上記の配列からなる本発明の抗原及びそれをコー ドする遺 伝子は、 強毒 · 弱毒の鑑別マーカーと して有用であ り 、 更に 従来のワ ク チンの改良及び診断剤の開発に極めて重要、 且つ 有用である。
[ Π ] 本発明の変異麻疹ウィルス抗原及び変異麻疹ウィルス 遺伝子のワ ク チンや診断剤と しての用途
( 1 ) 流行株に対して有効な生ワクチンの作成 ： 生ワ クチ ン株ウィルス と流行株ウィルス と の間で遺伝子を置換した組 換え体ウィルスを作成する。 生ワ ク チン株と しては、 従来技 術に記載した種々の株を用いるこ とができ るが、 少な く と も 1 0年以上の長期にわたリ 、 生ワ クチンの有効成分と して世 界各地で使用 され、 その安全性と有効性が公認されている株、 例えば C A Μ— 7 0 の使用が好ま しい。
流行株と しては、 その遺伝子変異に基づく 抗原変異が生ヮ クチン株ウィルスの抗原性と比較した際に顕著で広い流行株 ウィルスから適宜選択して用いる。 詳しく は、 分離頻度が高 く 、 且つ、 流行している地域範囲が広く 、 抗原変異が特殊で はなく 普遍的な最近の流行株、 例えば本発明者らが 1 9 9 5 〜 1 9 9 6年に分離した M O株又は N A株の採用が好ま しレ、。 置換する遺伝子と しては、 上記 [ 1 ] ( 3 ) に列記した抗原 をコー ドする遺伝子から適宜選択し、 単独又はこれ等を組合 せて用いる こ とができ る。 しかし、 組換えによ る弱毒から強 毒への復帰の防止、 組換え工程の簡易化等を考慮する と、 （c) に記載の第 1 7 6〜 3 1 6番の Hタ ンパク断片 （即ち、 配列 番号 4 のペプチ ドと配列番号 1 2 のペプチ ド） をコー ドする 遺伝子の採用が好ま しい。 この領域におけるア ミ ノ酸置換は 流行株に固有のものでぁ リ 、 弱毒株には存在しない。 従って、 この領域を用いる こ とによ リ 、 弱毒株に固有の配列 （即ち、 弱毒化の要因とな り う る配列） を変化させる こ と なく 、 弱毒 ウィルスに流行株のェピ トープを導入する こ とが可能である。 組換えウィルスの作成には、 単鎖 （一） セ ンスの R N Aゥ ィルス （モノネガウィルス） ゲノ ムの遺伝子組換えに係る Radeckeらの方法 （EMBO Journa l , Vo l . 14， No. 23, pp. 57 73-5784 , 1995 ) 、 又は本発明者らによるその変法に従って 行う こ とができ る。
Radecke らの方法 ( reverse genet i cs) を次に示す。 初 めに、 株化細胞 2 9 3 (Amer ican Type Cu l ture Co l lect ion 寄託番号 ATCC C L- 1573 ) に T7 RNA ポ リ メ ラーゼ及び麻 疹ウィルスの Nと P両タンパクの各遺伝子をべク ターを用い て移入し、 これ等の各遺伝子を発現する形質転換体 （即ち、 he lper cel l) を作出する。 次に、 T 7 プロ モーターの支配 下で麻疹ウィルスの L タンパク （PQ me rase) を発現する発 現ベク ター （以下、 "V1" と呼ぶ） を構築する。 更に、
C AM— 7 0 ウィルスの全長ゲノ ムの （ + ) セ ンス R N Aの c D N Aを調製し、 該 c D N Aから前述したア ミ ノ酸置換を コー ドする領域を制限酵素によ り切除し、 その切断部位に流 行株 M O又は N Aのウィルスゲノ ムから調製した対応領域
( D N A) を揷入連係の後、 得られる組換え c D N Aをブス ミ ド pBluescr ipt SK 及び KS (英国、 Stratagene Ltd. 社 製） に揷入連係する と共に、 該組換え c D N Aが T 7 ファー ジ R N Aポリ メ ラーゼによ り 転写される よ う調製したベク タ 一 （以下、 "Vo" と呼ぶ） を構築する。 Voと VI と を前記の helper cel l に同時感染導入 （co- transf ect ion) させた後、 該細胞を培養すれば、 組換え体ウィルスを得る こ とができ る。 感染細胞内での組換え体ウィルス の増殖は、 シンシチ ウムを 生じる CPE (cytopathic ef f ect) の判定や、 置換領域がコ 一ドするタンパク のェピ トープに対するモノ クーナル抗体を 用いた蛍光抗体法による検鏡にて確認する こ と ができ る。
上述の方法を用いる こ と によ り 、 C AM— 7 0 の Hタンパ クのア ミ ノ酸番号第 1 7 6〜 3 1 6番 （配列番号 4 ) をコー ドする遺伝子が、 MO又は N A株の Hタンパク のアミ ノ酸番 号第 1 7 6〜 3 1 6番 （配列番号 1 2 ) をコー ドする遺伝子 と置換された、 C AM— 7 0株の組換え体弱毒麻疹ウィルス が得られる。
更に、 Radeckeらの方法の変法について述べる。 こ の変法 は、 he l per ce l l を要しないよ う 工夫されているので、 培養 宿主と して任意の感受性細胞を使用する こ とができ る。 使用 する細胞と しては、 未確認因子や癌原性等の迷入を避けるた め、 生ワクチン株ウィルス の培養宿主と して安全性が確認且 つ公認されている細胞、 例えば、 M R C — 5 、 \ 1 — 3 8 の 採用が好ま しい。 先ず、 C AM— 7 0 の N、 P、 及び L タ ン パク各遺伝子の発現ベク ターを、 プラス ミ ド pcDNA3.1 ( + ) 及び pcDNA3.1 (- ) (カナダ国、 Inv i t rogen 社製）を用いて予 め作成 しておく 。 例えば、 pcDNA3.1 (- )に C A M— 7 0 の N、 P、 及び L タ ンパク各遺伝子をそれぞれ個別に pcDNA3.1 ( -） の制限酵素サイ トに挿入連係し各発現ベク ターを構築する。 T7 RNA po lymerase を発現させるには recomb inant MVA (以 下 "recMVA" と略記する ； FEBS Let t er, vo l . 371， no. 1,
PP. 9 - 12, 1995 ) を用いる こ とができ る。 そ して、 この 3 種の発現ベク ターと前述の発現ベク ター Vo と を、 予め r ecMVA を感染させた M R C — 5又は W I — 3 8細胞に co- t r a n s f e c t i 0 nさせた後、 約 3 5〜 3 8 °Cで培養すれば、 目的 とする組換え弱毒麻疹ウィルスが得られる。 かかる ウィルス の増殖は、 前述と 同様に CPE 判定や monoc lona l 蛍光抗体 法等を用いる検鏡にょ リ確認する こ とができ る。 また、 得ら れたウィルス の抗原性あるいは免疫原性の適格性は、 前述
( 1 ) の抗原解析によ り確認する こ とができ る。
( 2 ) 遺伝子免疫用の有効成分の作出 ： 非増殖型アデノ ウ ィルスのゲノ ムに、 流行株ウィルスの遺伝子を挿入連係する こ とによ リ 、 非増殖型組換えアデノ ウイルスを作成する こ と ができ る。 このよ う な組換えウィルスは、 遺伝子免疫の有効 成分と して有用である。 組換えウィルスの作成には、 斉藤ら が開発した COS- TPC 法 [細胞工学 （Ce l l Techno logy) , vo l .
13, no. 8, pp. 757 -763 , 1994 ] を用いる こ とができる。 この方法では、 ヒ ト アデノ ウイルス 5型ゲノ ム DNA- TPC
(v i ra l DNA- Termina l Prot e in Compl ex) と 、 その非増殖型 アデノ ウイルスゲノ ムのほぼ全長を有する コス ミ ドカセッ ト
(pAdexl ； 米国特許第 5， 7 0 0， 4 7 0号） と を使用する。 この非増殖型ウィルスは、 ヒ トアデノ ウイルス 5型に由来し、 その増殖に必須の遺伝子 E1Aと E1Bと を欠損 しているため、 これ等の遺伝子を恒常的に産生する 2 9 3細胞以外では增殖 できない。 更にこのウィルスは、 CTL (Cytotox i c T Lymphocyte)による ウィルス抗原の認識を拮抗抑制する E3タ ンパク をコー ドする遺伝子をも欠損されていて、 CTL による細胞性 免疫の成立が期待でき るよ う に工夫されている。
用いる麻疹ウィルス遺伝子と しては、 上記 [ I ] ( 3 ) に列 記した抗原をコー ドする遺伝子から適宜選択し、 単独又はこ れ等を組合せて用いるこ とができ る。 しかし、 感染 （ウィル スの細胞への吸着と侵入） 防御に係る免疫原性を高める上で は、 （a)に記載の全長 Hタンパク （配列番号 2又は 1 0 ) と (g)に記載の全長 F タ ンパク （配列番号 1 8 又は 2 0 ) をそ れぞれコー ドする遺伝子を組合わせて使用する こ とが好ま し レヽ o
具体的には、 上記 Hタ ンパク遺伝子と F タ ンパク遺伝子 cDNA (例えば、 配列番号 9 と配列番号 1 9 の塩基配列） を調 製し （5'から 3'方向に連係する際の組合せは H F又は F H ) 、 これをコス ミ ドカセ ッ ト pAdexl の E1A . E1B欠損サイ トに 揷入連係し、 pAdexl/HF 又は pAdexl/FH とする。 一方、 ァ デノ親株ウィルスから DNA-TPCを抽出 した後、 これを制限酵 素 Eco T22I (日本国、 Takar a Shuz o Co. , Ltd. , 社製） で 消化して切断産物 DNA- TPC/EcoT22I を得る。 次に、
pAdexl/HF 又は pAdexl/FHと、 DNA— TP C/E c oT 22 I と を リ ン酸 カルシウム法によ り 2 9 3細胞に c 0 - a n s ί e c t i 0 η させる と、 相同組換えが生じ、 麻疹ウィルス Ηタ ンパク遺伝子及び F タンパク遺伝子を有する非増殖型組換えアデノ ウイルスが 得られる。 こ のウィルスが麻疹ウィ ルス の Η及び F両タ ンパ ク遺伝子を保有する こ とは、 例えば、 こ の ウィルスを感染さ せた He l a 細胞について、 かかるタンパク に対する monoc lona l 抗体を用いる蛍光抗体法にょ リ確認する こ とができ る。
( 3 ) 麻疹ワ ク チンの製造 ： 前述 [ Π ] ( 1 ) の組換え弱毒 麻疹ウィルスをシー ドウィルス と して用い、 弱毒生麻疹ワク チンを製造する こ とができ る。 例えば、 該組換えウィルスを、 感受性細胞、 例えばニヮ ト リ 胚細胞で培養して ウィルス浮遊 液を得た後、 これを低速遠心にかけ、 更に、 濾過する こ と に ょ リ細胞を除去し、 ワ ク チン原液を調製する。 かかる ヮクチ ン原液を、 適当な培地、 例えば、 B M E培地 （Eagle' s
Basal Medium) で希釈し、 ワ ク チン中のウィルス含量が抗体 産生に必要な量、 例えば、 5 , 000 TCIDso/0.5 ml (Median Tissue Cul ture Infect ive Dose) 以上 ίこな る よ う ίこ調整す る。 その際、 ウィルス安定化剤を添加混合するこ と もでき る。 次に、 適当な容積、 例えば、 約 1 〜 2 0 m 1 容のバイ アルに 調製したワ ク チン溶液を分注し、 密栓 · 密封の後、 ワ ク チン と して使用に供する。 かかる ワクチンは、 液状のみな らず、 分注後に凍結乾燥を行い、 乾燥製剤と して使用に供するこ と ができ る。 尚、 製造したワ クチン製剤は、 その品質を保証す るために、 使用前に安全性と有効性に関する種々 の検定を行 う必要がある。 かかる検定は、 薬事法 （昭和 3 5年法律第 1 4 5号） 及び平成 5年 · 厚生省告示第 2 1 7号 「生物学的製 剤基準」 に定める 「乾燥弱毒生麻疹ワ ク チン」 の規程に準拠 して行う。 ワクチンは、 例えば、 1 ドーズ約 0 . 2 5 〜
0 . 5 m 1 を皮下接種して用いる。
前記 [ H ] ( 2 ) の非増殖型組換えウィ ルスは、 2 9 3細胞 で量産するこ とができ る。 2 9 3細胞の培養液から、 上記の ワ クチン製剤と 同様にして、 最終ウィルス含量が 2 9 3細胞 において 1 06〜 1 08 P F U/m l (Plaque— Forming Unit) になる よ う調整した液状あるいは乾燥製剤を調製し、 遺伝子 ワクチンの有効成分と して提供する こ とができ る。 該製剤は、 1 ドーズ約 0 . 2 5 〜 0 . 5 m l を皮下、 筋肉内又は経鼻接 種して用いる こ とができ るが、 接種の簡易化を考慮する と、 特に経鼻接種が好ま しい。
( 4 ) 診断剤の調製 ： 診断用抗原と しては、 上述 [ 1 ] ( 3 ) に列記した抗原 （全長タンパク又はその断片ペプチ ド） を、 単独又は組合せて用いる こ とができ る。 組合せと しては、 抗 原スぺク トルを広げる意味で、 異なるェピ トープを包含する 抗原を組合せる方が好ま しい。 本発明の診断用抗原は、 例え ば、 沈降反応、 凝集反応、 中和反応、 蛍光抗体法、 酵素免疫 測定法、 ラジオィ ムノ アッセィ等の抗原と して提供でき る。 また、 これ等を動物、 例えば、 ゥサギ、 モルモッ ト、 マウス 等の腹腔内、 皮下や筋肉内に接種する こ と によ リ 、 免疫血清 や抗体等を作成する こ と もでき る。 この抗体は、 例えば、 各 種診断法において、 抗原検出用抗体と して提供するこ とがで きる。
尚、 この発明に係る診断用の抗原や抗体は、 診断剤中の含 量が、 抗原抗体反応を生じるに必要な量と なる よ う希釈調整 して使用する。
更に、 上述 [ I ] ( 3 ) に列記した抗原をコー ドする遺伝子 を単独又は組合せて、 例えば、 遺伝子診断におけるプローブ 試薬や同定試薬と して使用する こ と もでき る。 本願に開示し た弱毒株や流行株ウィルスの Hタ ンパクや F タ ンパクの配列 (例えば、 配列番号 2、 1 0、 1 8及び 2 0 ) 、 又はそれら をコー ドする遺伝子の配列 （例えば、 配列番号 1 、 9 、 1 7 及び 1 9 ) を基に P C Rプライマ ーを設計する こ とができ る。 得られた P C Rプライマ ーは P C Rを用いた診断用の試薬と して提供するこ とができる。
発明を実施するための最良の形態
以下、 実施例に基づいて本発明をよ り 詳細に説明するが、 本発明は、 これらの実施例に何ら限定される ものではない。 実施例 1
抗原解析と遺伝子解析を次の通 リ行い、 過去の流行株 （強 毒株） 、 従来の生ワクチン株 （弱毒株） 及び最近の流行株
(強毒株） の三者間における塩基配列と ア ミ ノ酸配列の相違 をそれぞれ判定する。 また、 変異抗原のア ミ ノ酸配列を特定 する と共に、 そのェピ トープを決定する。
( 1 ) 抗原解析
中和抗体価の測定 （ 1 ) ： マイ ク ロプレー ト を用いる U e d aの変法によ り測定する。 攻撃ウィルス にはワ ク チン株 C AM— 7 0 と流行株 M o m o を、 また、 ウィルスの培養に は B 9 5 a細胞を用いる。 検体には 1 9 9 4〜 1 9 9 6年の 間に麻疹 C A M— 7 0 ワ ク チンの接種を受けた小児から得た ワクチン接種前及び接種 1 〜 2か月後の血清の う ち、 豊島株 ( 1 9 5 9年分離） の H I 抗原で測定した H I 抗体価が 8倍 の血清 1 1検体 （A群） と 6 4倍の血清 1 4検体 （ B群） と を用い、 1検体につき 2列のゥエルを用いる。
ゥエル内に培地を分注し、 その培地を用いて血清を 2 0 μ 1 ずつ 2倍に段階希釈する。 これに 2 0 μ 1 の攻撃ウィルス (ウィ ルス感染価を 10
Figure imgf000035_0001
1に調整済） を添加混合 し、 3 7 °Cで 1 時間反応させる。 次に、 各ゥエルに B 9 5 a 細胞を 1 0 0 / l ずつ分注の後、 1週間培養する。 中和抗体 価の測定は、 C P Eの有無を判定する こ と によ リ行う。 その 結果を以下に記载する ：
A群 ： 合計 1 1検体の う ち、 9例 （ 9 / 1 1 ; 8 1 . 8 %) の相対抗体価 （流行株/ワ クチン株） は 1 / 2以下でぁ リ 、 特に、 これ等 9例の う ち 6例 （ 6 1 1 ； 5 4 . 5 % ) では、 ワクチン株に対する抗体価が 2. 6 〜 3 . 6 (数値は
1 o g 2)であるにも拘らず、 流行株に対する抗体価は 0 (数 値は 1 0 g 2 ) 未満でぁ リ検出されない。 尚、 残 リ 2例の相 対抗体価は 1 である。
B群 ： 合計 1 4検体中、 1 0例 （ 1 0 Z 1 4 ; 7 1 . 4 %) の相対抗体価 （流行株 Zワ クチン株） は 1 2〜 1ノ 8 と低 く 、 残 リ 4例のそれは約 1 である。 以上の結果、 相対抗体価 (流行株 ワ クチン株） が 1ノ 2以下の例が高頻度に検出さ れるため、 最近の流行株麻疹ウィルスの中和ないしは感染に 関与する抗原 （Hと Fの両タンパク） に変異がある と判定す る。
中和抗体価の測定 （ 2 ) ： N A株 Hタ ンパクのマウス免疫 血清に対する中和抗体価を、 次の記载以外は、 上記 （ 1 ) と 同様に して測定する。 攻撃ウィルスには、 C AM— 7 0、 田 辺、 及び N Aの 3株を用いる。 マウス免疫血清は次のよ う に 作成する。 4週齢 B A L B / Cマウス 1 0匹の各々 に、 NA 株 Hタ ンパク発現ベク ター pcDNA3.1 ( -）/ H (naked DNA)を 1 0 0 μ 1 ずつ筋肉内接種し、 その 2週間後に同 じ接種を再び 行い追加免疫する。 比較対照と しての 5 匹のマウスには生理 的食塩水を接種する。 追加免疫から 4週間後に、 各マ ウスか ら個別に採血し、 これ等を免疫マ ウス血清とする。 尚、 上記 naked DNAは、 後述の実施例 3 に付随し、 N A株 Hタ ンパク 発現ベク ターと して構築したプス ミ ド pcDNA3.1 (_)/Hを大腸 菌で增幅し、 その培養液から精製して調製する。
測定の結果、 各攻撃ウィ ルスによ る平均中和抗体価
( 1 0 g 2) は、 N A株では 4 . 0 、 C AM— 7 0株では 3 . 8 、 及び田辺株では 4 . 0 である。 この結果と前記 （ 1 ) の結果に基づき、 流行株 N Aの抗原スぺク トルは、 ワ ク チン 株及び過去の流行株のこれ等に比べて広く 、 且つ、 これ等を 包含する と判定する。
( 2 ) 遺伝子解析
Hタ ンパク及び F タ ンパクの両遺伝子の塩基配列の決定 ： I segawaらの方法 （Mol. Cel l. Prob. , 6， 467-475 , 1992 ) に従って行う。 表 2及び表 3 に記載の各麻疹ウィルスを感染 させた Β 9 5 a 細胞から C h i rgwinらの GTC/CsCl法 （Biochemistry, 18 , 5294-5299， 1979)によ リ R N Aを抽出の後、 6 m e r のラ ンダムプライマーを用いて c D N Aを作成する。 次いで、 E dmons n株の遺伝子 c D N Aの塩基配列 （Vi rology, vol . 173, no. 2, pp. 415-425， 1989 ) を参考にして 合成した特異的プライマー （表 1 ) を使用 し、 P C R を用い る直接シークェンス法によ リ塩基配列を決定する と共に、 Universal Co d eに基づきア ミ ノ酸配列を判読し、 遺伝子変異 によるアミ ノ酸の置換を特定する。 その結果を表 2 、 表 3 、 配列番号 1 ， 2 ， 9 ， 1 0 ， 1 7〜 2 0 にそれぞれ示す。
P C R直接シークェンシング用プライマー
,フ マー +¾".&甘miタリ r タンノヽク A (J- A A 1 し AA J Aし 丄 し A l しし 丄 G l C をコードす C F 7 T T G AG AG T T C A G C AT G G A C T G G T る ΙΕ子 C F 3 A C AAT G AA G T AG G A C T C T G T G T C
F 3 G G AA C C T AA T AG C C AA T T G T G C A
C F 2 C G A G G T C AA T T C T G T G C A AG T A C
F 4 A AA G G G AG AA C AA G T T G G T AT G T
C F 1 G AT A T T G T T C G G C C AG AG G G AAG
Ηタンパク M P 5 A T G T C A C C A C AA C G AG A C C G G AT をコードす M P 4 G AG AT T C A C T G A C C T AG T G AAAT る遺伝子 M P 2 T C G C T G T C C C T G T T A G A C T T G T A
H8 G AG C AA C C A G T C A G T AA T G AT C T
M P 3 AT G C C T G AT G T C T G G G T G A C AT C
Hタ ンパク のア ミ ノ 酸の置換
アミノ酸 麻疹ウィルス株
番号 Edmo Tana CAM - 70 F - b F-t U-b u-t MO N A
93 Thr 11 e
157 Val Ala
169 Se r Ala Ala Ala Ala Ala Ala
174 Tin Ala Ala Ala Ala Ala Ala
175 Ar g Lys Lys
176 Thr Ala Ala Ala Ala Ala Ala
211 Gly S e r Ser Sei S e r Ser Ser
243 Arg Gly Gly Gly Gly Gly Gly
252 Tyr His His His His His His
276 Leu Phe Phe Phe Phe Phe Phe
279 Pro Se r Ser Se r Ser Se r Ser
284 Leu Phe Phe Phe Phe Phe Phe
285 S e r As n Asn
296 Leu Phe Phe Phe Phe Phe Phe
302 Gly Arg Arg Arg Arg Arg Aig
316 Gly Sei Ser Ser Ser
338 Pro Ser
387 Leu Gin
416 Asp Asn Asn Asn Asn Asn Asn
455 Thr Asn
481 Tyr Asn As n Asn Asn Asn Asn
484 Asn Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr
505 Asp Gly
546 Se r Gly
592 Gly Glu Glu
600 Glu Val Val Val Val Val Val Val Val
603 Gly Glu
616 Arg Ser Ser Ser Ser Ser Ser
[註] (1) Edmoは Edmonston株； Tanaは Tanabe株； MOは Momo株-
(2) Edmonston株遺伝子 c DN Aのアミノ酸番号とァミノ酸を基準として置換 アミノ酸を記載し、 記載のない部分は基準のアミノ酸に同じ。 3 Fタンパクのアミ ノ酸の置換
アミノ酸 麻疹ウィルス株
番号 Edmo Tana CAM - 70 F-b F- U-b U-t MO N A
Figure imgf000041_0001
52 Gin His His
107 Ser Gly Gly
165 Arg Gly
398 Tyr His
417 Ala Asp Asp
523 Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg
[註] (1) Edmoは Edmonston株； Tanaは Tanabe株； MOは M。mo株.
(2) Edmonston株遺伝子 c DN Aのアミノ酸番号とァミノ酸を基準と して置換 ァミノ酸を記載し、 記載のない部分は基準のァミノ酸に同じ。
Hタ ンパクニ次構造の決定 ： 上記で得たア ミ ノ酸配列をコ ンビータ解析する こ と によ リ 、 Hタ ンパクの二次構造を決定 した。 解析ソフ トには DNASIS- Mac (vers ion 3.6) [ 日本国、 S立ソフ ト ウェアエンジニア リ ング（株）社製] を用い、 疎水 性パターンの解析及び Chou- F asman解析を行う。 その結果、 配列番号 2 に記載の Hタンパク全長ア ミ ノ酸配列のア ミ ノ酸 番号第 1番〜第 6 1 7番の う ち、 第 1 7 6番〜第 3 1 6番及 び第 3 1 7番〜第 6 1 6番の領域の二次構造においては、 ヮ クチン株と流行株と の間で、 ェピ トープの位置の逆転 （f l ip -f lop) している [即ち、 ワクチン株 （例えば C AM— 7 0 ) と流行株 （例えば MOや N A) の解析像を左右に並べる と、 両像は互いに鏡像（線対称）の関係になる様に大き く 変化して いる ] 。 一方、 F タ ンパク には、 上記した鏡像（線対称）の関 係にある様な変化は見られない。
Hタ ンパクの変異ェピ トープの解析 ： 更に、 ェピ トープ解 析ソフ ト Epitope Advisor [ 日本国、 （株） 富士通九州シス テムエンジニア リ ング（FQS)社製] を用い、 上記ワクチン株 と流行株の変異 （ア ミ ノ酸置換） が集中 している領域に着目 し、 そのェピ トープ解析を行う。 その結果から、 配列番号 2 及び 1 0 に記載のア ミ ノ酸番号、 第 1 7 2 〜 1 7 8番、 第 2 3 8〜 2 4 4番、 第 2 7 7 〜 2 8 2番、 及び第 3 0 1 〜 3 0 7番の 4領域が変異したェピ トープである と確認される。 実施例 2
弱毒生ワクチン株ウィルスゲノ ムの改造 ： 前述 Radeckeら の方法 （reverse genet ics) によ り 、 ワ ク チン株 C AM— 7 0の Hタンパクの一部を流行株 M o m o のそれと置換した組 換え体ウィルス C AM— 7 0 を作成する。 置換領域は、 配列 番号 1 に記載の塩基配列の第 5 2 6番から第 9 4 8番の塩基 (アミ ノ酸番号第 1 7 6番〜第 3 1 6番） からなる領域 （ 4 2 3塩基） を含む各ウィルス株ゲノ ム c D N Aの制限酵素 Hini I 断片とする。 得られた組換えウィ ルス の抗原性の確認 は、 C AM— 7 0及び M o m o 両株のモノ ク ローナル抗体を 用いる蛍光抗体法と酵素免疫測定法によ リ行う。 実施例 3
弱毒生ワクチン株ウイルスゲノ ムの改造 ： Radeckeらの方 法の変法を用いる以外は実施例 2 の方法と 同様に して、 ワク チン株 C AM— 7 0 の Hタ ンパク の一部を流行株 N Aの対応 する配列と置換した組換え体ウィルスを作成する。
先ず、 C AM— 7 0株ウィルスゲノ ム R N Aを抽出の後、 R T— P C R ( reverse transcript— PCR) によ り c D N Aを 調製し、 その c D N Aから、 プライマ ーを用いる こ と によ リ 、 C AM— 7 0株ウィルスの N、 P及び L各タンパク をコー ド する遺伝子をク ローニングする。 （以下、 これ等のク ローン をそれぞれ、 pcDNA3.1 (- )/N、 pcDNA3.1 (- )/P、 及び pcDNA3.1( -）/ Lと呼ぶ） 。 これ等は大腸菌で増幅の後、 保存 し、 次の工程に供する。
また、 プラス ミ ド pBluescr ipt SK 及び KS を用い、 上記 と同様の方法によって、 C AM— 7 0株ウィルス全長ゲノ ム R N Aの c D N Aの中で、 Hタンパク遺伝子の一部に対応す る N A株の配列と置換した遺伝子 c D N Aをク ローニングす る。 得られたク ローンは、 以下、 p B 1 u e s c r i p t /MVと呼び、 培 養 · 保存し、 次の工程に供する。 尚、 置換する配列は、 配列 番号 1 に記載の C AM— 7 0株 Hタ ンパク遺伝子の塩基配列 第 5 2 6番から第 9 4 8番 （ 4 2 3塩基 ； ア ミ ノ酸番号第 1 7 6番〜第 3 1 6番） からなる領域と、 配列番号 9 に記載の N A株の対応領域 （ 5 2 6番から第 9 4 8番の塩基） と の間 で行う。
上記の pcDNA3.1 ( -） /N， pcDNA3.1 (-)/?, p cDNA3 · 1 ( -）/ L，及 ぴ pBluescr ipt/MVを、 前述 r e cMVAを予め感染させた M R C 一 5 に c 0 - 1 r a n s f e c t i 0 nさせ、 3 7 °Cでの培養によ リ 、 組換 え体ウィルスを得る。 これよ リ得られた組みえ体ウィルスの 抗原性の確認は、 C AM— 7 0及び N A両株のモノ ク ローナ ル抗体を用いる蛍光抗体法と酵素免疫測定法にょ リ行う。 こ のウィルスは、 抗原性が流行株のそれと 同等でぁ リ 、 しかも、 弱毒株であるので、 弱毒生麻疹ワクチンの有効成分と して提 供する こ とができ る。 実施例 4
遺伝子免疫ワ ク チン用の有効成分の作出 ： 前述の斉藤らの 方法にょ リ 、 非増殖型組換えアデノ ウイルスを作出する。 該 ウィルスゲノ ムに挿入連係する遺伝子は、 配列番号 9 と配列 番号 1 9 にそれぞれ記載の N A株の H及び F各タ ンパク をコ 一 ドする遺伝子 c D N Aを組合わせて連係し用いる。 連係は、 F と Hが融合タ ンパク と して発現される よ う 、 5 ' 力 ら 3 ' 方向に F — Hの順に行い、 こ の c D N Aを制限酵素 Swa Iで 開裂したコス ミ ドカセッ ト pAdexlの E1A · E1B欠損サイ トに 挿入連係し、 pAdexl/FHを得る。
尚、 Hと F各遺伝子の c D N Aは、 N A株ゲノ ム R N Aカ ら、 各遺伝子に対応するプライマーを用いる R T _ P C Rに ょ リ各々調製する。 また、 pAdexl/FHは、 λ ファージでパッ ケージングし、 大腸菌で増幅 · 保存し、 次の工程に供する。 次に、 親株アデノ ウイルス D N A— T P Cを、 その感染細 胞から C s C 1 超遠心法によ り抽出精製の後、 制限酵素 Eco T22Iで消化し、 切断産物 DNA- TPC/Eco T22Iを得る。 次に、 リ ン酸カルシウム法によ り 、 上記の pAdexl/FHと DNA- TPC/ Eco T22Iと を培養した 2 9 3細胞に co-transfect ionさせ、 3 7 °Cで 1 8 時間培養し、 相同組換えを起こ させる。 これに ょ リ 、 N A株の H及び F両タンパク遺伝子を保有する非増殖 型組換えアデノ ウイルスを作出する。 該ウィルス とその増殖 は、 その感受性宿主である 2 9 3細胞において、 N A株の H 及び F各タンパク に対する monoclonal抗体を用いる蛍光抗 体法にょ リ選別且つ確認する。 実施例 5
診断剤の調製 ： 次のア ミ ノ酸配列、 「 L e u Glu Ala A r g Ala Th r Asn」 、 「Asn Leu Se r Se r Ly s G 1 y Ser」 、 「Glu Gin Se r Va 1 Se r Asn」 、 及び 「His Arg Glu Asp Se r l ie ThU をそれぞれ、 ペプチ ドシンセサイザー （米国、 モデル ABI 432A, Perk in-Elmer 社製） を用いて合成し、 麻疹ウイ ルス流行株の感染を鑑別し、 且つ同定するための抗原と して 使用する。
産業上の利用可能性
本発明の変異麻疹ウィルス抗原又はこれをコー ドする変異 麻疹ウィルス遺伝子を用いる と、 流行株麻疹ウィルス に適合 した弱毒生麻疹ワクチン又は遺伝子ワクチン、 さ らに流行株 麻疹ウィルスによる感染を的確に検出でき る診断剤を、 効率 的且つ経済的に提供する こ とが可能である。
配列表 配列番号 ： 1 配列の長さ ： 1 8 5 4 配列の型 ： 核酸 鎖の数 ： 一本鎖 トポロ ジー ： 直鎖状 酉己列の種類 ： cDNA to genomic RNA encoding H Protein 起源 生物名 ： 麻疼ウイノレス (meas les vi rus) 株名 ： 弱毒麻疹ウィルス C AM— 7 0株 配歹 IJ
ATG TCA CCA CAA CGA GAC CGG ATA AAT GCC TTC TAC AAA GAT AAC CCC 48
Met Ser Pro Gin Arg Asp Arg lie Asn Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Pro
1 5 10 15
CAT CCC AAG GGA AGT AGG ATA GTC ATT AAC AGA GAA CAT CTT ATG ATT 96
His Pro Lys Gly Ser Arg lie Val lie Asn Arg Glu His Leu Met He
20 25 30
GAT AGA CCT TAT GTT TTG CTG GCT GTT CTG TTT GTC ATG TTT CTG AGC 144
Asp Arg Pro Tyr Val Leu Leu Ala Val Leu Phe Val Met Phe Leu Ser
35 40 45
TTG ATC GGG TTG CTA GCC ATT GCA GGC ATT AGA CTT CAT CGG GCA GCC 192
Leu lie Gly Leu Leu Ala He Ala Gly lie Arg Leu His Arg Ala Ala
50 55 60
ATC TAC ACC GCA GAG ATC CAT AAA AGC CTC AGC ACC AAT CTA GAT GTA 240
He Tyr Thr Ala Glu lie His Lys Ser Leu Ser Thr Asn Leu Asp Val
65 70 75 80
ACT AAC TCA ATC GAG CAT CAG GTC AAG GAC GTG CTG ATA CCA CTC TTC 288 Thr Asn Ser lie Glu His Gin Val Lys Asp Val Leu lie Pro Leu Phe
85 90 95
AAA ATC ATC GGT GAT GAA GTG GGC CTG AGG ACA CCT CAG AGA TTC ACT 336 Lys lie He Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro Gin Arg Phe Thi
100 105 110
GAC CTA GTG AAA TTC ATC TCT GAC AAG ATT AAA TTC CTT AAT CCG GAT 384 Asp Leu Val Lys Phe lie Ser Asp Lys lie Lys Phe Leu Asn Pro Asp
115 120 125
AGG GAG TAC GAC TTC AGA GAT CTC ACT TGG TGT ATC AAC CCG CCA GAG 432 Aig Glu Tyr Asp Phe Arg Asp Leu Thr Trp Cys He Asn Pro Pro Glu
130 135 140
AGA ATC AAA TTG GAT TAT GAT CAA TAC TGT GCA GAT GCG GCT GCT GAA 480 Arg lie Lys Leu Asp Tyr Asp Gin Tyr Cys Ala Asp Ala Ala Ala Glu 145 150 155 160
GAG CTC ATG AAT GCA TTG GTG AAC TCA ACT CTA CTG GAG ACC AAA ACA 528 Glu Leu Met Asn Ala Leu Val Asn Ser Thr Leu Leu Glu Thr Lys Thr
165 170 175
ACC AAT CAG TTC CTA GCT GTC TCA AAG GGA AAC TGC TCA GGG CCC ACT 576 Thr Asn Gin Phe Leu Ala Val Ser Lys Gly Asn Cys Ser Gly Pro Thr
180 185 190
ACA ATC AGA GGT CAA TTC TCA AAC ATG TCG CTG TCC CTG TTA GAC TTG 624 Thr lie Arg Gly Gin Phe Ser Asn Met Ser Leu Ser Leu Leu Asp Leu
195 200 205
TAT TTA GGT CGA GGT TAC AAT GTG TCA TCT ATA GTC ACT ATG ACA TCC 672 Tyr Leu Gly Arg Gly Tyr Asn Val Ser Ser lie Val Thr Met Thr Ser
210 215 220
CAG GGA ATG TAT GGG GGA ACT TAC CTA GTG GAA AAG CCT AAT CTG AGC 720 Gin Gly Met Tyr Gly Gly Thr Tyr Leu Val Glu Lys Pro Asn Leu Ser 225 230 235 240
AGC AAA AGG TCA GAG TTG TCA CAA CTG AGC ATG TAC CGA GTG TTT GAA 768 Ser Lys Arg Ser Glu Leu Ser Gin Leu Ser Met Tyr Arg Val Phe Glu
245 250 255
GTA GGT GTT ATC AGA AAT CCG GGT TTG GGG GCT CCG GTG TTC CAT ATG 816 Val Gly Val lie Arg Asn Pro Gly Leu Gly Ala Pro Val Phe His Met
260 265 270
ACA AAC TAT CTT GAG CAA CCA GTC AGT AAT GAT CTC AGC AAC TGT ATG 864
Thr Asn Tyr Leu Glu Gin Pro Val Ser Asn Asp Leu Ser Asn Cys Met
275 280 285
GTG GCT TTG GGG GAG CTC AAA CTC GCA GCC CTT TGT CAC GGG GAA GAT 912
Val Ala Leu Gly Glu Leu Lys Leu Ala Ala Leu Cys His Gly Glu Asp
290 295 300
TCT ATC ACA ATT CCC TAT CAG GGA TCA GGG AAA GGT GTC AGC TTC CAG 960
Ser lie Thr lie Pro Tyr Gin Gly Ser Gly Lys Gly Val Ser Phe Gin 305 310 315 320
CTC GTC AAG CTA GGT GTC TGG AAA TCC CCA ACC GAC ATG CAA TCC TGG 1008
Leu Val Lys Leu Gly Val Trp Lys Ser Pro Thr Asp Met Gin Ser Trp
325 330 335
GTC TCC TTA TCA ACG GAT GAT CCA GTG ATA GAC AGG CTT TAC CTC TCA 1056
Val Ser Leu Ser Thr Asp Asp Pro Val lie Asp Arg Leu Tyr Leu Ser
340 345 350
TCT CAC AGA GGT GTT ATC GCT GAC AAT CAA GCA AAA TGG GCT GTC CCG 1104
Ser His Arg Gly Val lie Ala Asp Asn Gin Ala Lys Trp Ala Val Pro
355 360 365
ACA ACA CGA ACA GAT GAC AAG TTG CGA ATG GAG ACA TGC TTC CAA CAG 1152
Thr Thr Arg Thr Asp Asp Lys Leu Arg Met Glu Thr Cys Phe Gin Gin
370 375 380
GCG TGT AAG GGT AAA ATC CAA GCA CTC TGC GAG AAT CCC GAG TGG GCA 1200
Ala Cys Lys Gly Lys lie Gin Ala Leu Cys Glu Asn Pro Glu Trp Ala 385 390 395 400
CCA TTG AAG GAT AAC AGG ATT CCT TCA TAC GGG GTC TTG TCT GTT GAT 1248
Pro Leu Lys Asp Asn Arg lie Pro Ser Tyr Gly Val Leu Ser Val Asp
405 410 415
CTG AGT CTG ACA GTT GAG CTT AAA ATC AAA ATT GCT TCG GGA TTC GGG 1296
Leu Ser Leu Thr Val Glu Leu Lys lie Lys lie Ala Ser Gly Phe Gly
420 425 430
CCA TTG ATC ACA CAC GGT TCA GGG ATG GAC CTA TAC AAA TCC AAC CAC 1344 ^981 9VI VOV 303 IW OOV VOO 1V9 WO DDO DOV
909 009 969
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069 989 089
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9 ΖΓ VVD IOD 101 VVO VOX OVD ODD 113 010101 Oil OVO 1D3 3910910X3
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6 Thr Arg Glu Asp Gly Thr Asn Arg Arg ***
610 615
配列番号 ： 2
配列の長さ ： 6 1 7
配列の型 ： ア ミ ノ酸 鎖の数 ： 一本鎖 ト ポロ シ 直鎖状
配列の種類 ： ペプチ ド （ Hタンパク質）
起源
生物名 ： 淋珍ウイ ノレス （meas l es vi rus) 株名 ： 弱毒麻疹ウィルス C AM— 7 0株 配列
Met Ser Pro Gin Arg Asp Arg He Asn Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Pro
1 5 10 15
His Pro Lys Gly Ser Arg lie Val He Asn Arg Glu His Leu Met lie
20 25 30
Asp Arg Pro Tyr Val Leu Leu Ala Val Leu Phe Val Met Phe Leu Ser
35 40 45
Leu lie Gly Leu Leu Ala lie Ala Gly lie Arg Leu His Arg Ala Ala
50 55 60
lie Tyr Thr Ala Glu He His Lys Ser Leu Ser Thr Asn Leu Asp Val 65 70 75 80
Thr Asn Ser He Glu His Gin Val Lys Asp Val Leu lie Pro Leu Phe
85 90 95
Lys lie He Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro Gin Arg Phe Thr
100 105 110 Asp Leu Va I Lys Phe lie Ser Asp Lys lie Lys Phe Leu Asn Pro Asp
115 120 125
Arg Glu Tyr Asp Phe Arg Asp Leu Thr Trp Cys lie Asn Pro Pro Glu
130 135 140
Arg lie Lys Leu Asp Tyr Asp Gin Tyr Cys Ala Asp Ala Ala Ala Glu 145 150 155 160
Glu Leu Met Asn Ala Leu Val Asn Ser Thr Leu Leu Glu Thr Lys Thr
165 170 175
Thr Asn Gin Phe Leu Ala Val Ser Lys Gly Asn Cys Ser Gly Pro Thr
180 185 190
Thr lie Arg Gly Gin Phe Ser Asn Met Ser Leu Ser Leu Leu Asp Leu
195 200 205
Tyr Leu Gly Arg Gly Tyr Asn Val Ser Ser He Val Thr Met Thr Ser
210 215 220
Gin Gly Met Tyr Gly Gly Thr Tyr Leu Val Glu Lys Pro Asn Leu Ser 225 230 235 240
Ser Lys Arg Ser Glu Leu Ser Gin Leu Ser Met Tyr Arg Val Phe Glu
245 250 255
Val Gly Val lie Arg Asn Pro Gly Leu Gly Ala Pro Val Phe His Met
260 265 270
Thr Asn Tyr Leu Glu Gin Pro Val Ser Asn Asp Leu Ser Asn Cys Met
275 280 285
Va 1 Ala Leu Gly Glu Leu Lys Leu Ala Ala Leu Cys His Gly Glu Asp
290 295 300
Ser lie T r lie Pro Tyr Gin Gly Ser Gly Lys Gly Val Ser Phe Gin 305 310 315 320
Leu Val Lys Leu Gly Val Trp Lys Ser Pro Thr Asp Met Gin Ser Trp
325 330 335
Val Ser Leu Ser Thr Asp Asp Pro Val lie Asp Arg Leu Tyr Leu Ser
340 345 350
Ser His Arg Gly Val lie Ala Asp Asn Gin Ala Lys Trp Ala Val Pro
355 360 365
Thr Thr Arg Thr Asp Asp Lys Leu Arg Met Glu Thr Cys Phe Gin Gin 919 019
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2 S
lSPZ0/S6dT/lDd ム Z9SS/86 O 配列番号 ： 3
配列の長さ ： 5 2 4
配列の型 ： ア ミ ノ酸
鎖の数 ： 一本鎖
トポロ ジー ： 直鎖状
配列の種類 ： ペプチ ド
起源
生物名 ： 麻珍ウィルス (meas l es v i rus) 株名 ： 弱毒麻疹ウイノレス C AM— 7 0株 配列
He Pro Leu Phe Lys lie lie Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro
1 5 10 15
Gin Arg Phe Thr Asp Leu Val Lys Phe lie Ser Asp Lys He Lys Phe
20 25 30
Leu Asn Pro Asp Arg Glu Tyr Asp Phe Arg Asp Leu Thr Trp Cys lie
35 40 45
Asn Pro Pro Glu Arg He Lys Leu Asp Tyr Asp Gin Tyr Cys Ala Asp
50 55 60
Ala Ala Ala Glu Glu Leu Met Asn Ala Leu Val Asn Ser Thr Leu Leu 65 70 75 80
Glu Thr Lys T r Thr Asn Gin Phe Leu Ala Val Ser Lys Gly Asn Cys
85 90 95
Ser Gly Pro Thr Thr He Ar Gly Gin Phe Ser Asn Met Ser Leu Ser
100 105 110
Leu Leu Asp Leu Tyr Leu Gly Arg Gly Tyr Asn Val Ser Ser lie Val
115 120 125
Thr Met Thr Ser Gin Gly Met Tyr Gly Gly Thr Tyr Leu Val Glu Lys 130 135 140 Pro Asn Leu Ser Ser Lys Arg Ser Glu Leu Ser Gin Leu Ser Met Tyr 145 150 155 160
Arg Val Phe Glu Val Gly Val lie Arg Asn Pro Gly Leu Gly Ala Pro
165 170 175
Val Phe His Met Thr Asn Tyr Leu Glu Gin Pro Val Ser Asn Asp Leu
180 185 190
Ser Asn Cys Met Val Ala Leu Gly Glu Leu Lys Leu Ala Ala Leu Cys
195 200 205
His Gly Glu Asp Ser lie Thr lie Pro Tyr Gin Gly Ser Gly Lys Gly
210 215 220
Val Ser Phe Gin Leu Val Lys Leu Gly Val Trp Lys Ser Pro T r Asp 225 230 235 240
Met Gin Ser Trp Val Ser Leu Ser Thr Asp Asp Pro Val lie Asp Arg
245 250 255
Leu Tyr Leu Ser Ser His Arg Gly Val lie Ala Asp Asn Gin Ala Lys
260 265 270
Trp Ala Val Pro Thr Thr Arg Thr Asp Asp Lys Leu Arg Met Glu Thr
275 280 285
Cys Phe Gin Gin Ala Cys Lys Gly Lys He Gin Ala Leu Cys Glu Asn
290 295 300
Pro Glu Trp Ala Pro Leu Lys Asp Asn Arg lie Pro Ser Tyr Gly Val 305 310 315 320
Leu Ser Val Asp Leu Ser Leu Thr Val Glu Leu Lys lie Lys He Ala
325 330 335
Ser Gly Phe Gly Pro Leu lie Thr His Gly Ser Gly Met Asp Leu Tyr
340 345 350
Lys Ser Asn His Asn Asn Val Tyr Trp Leu Asn lie Pro Pro Met Lys
355 360 365
Asn Leu Ala Leu Gly Val lie Asn Thr Leu Glu Trp He Pro Arg Phe
370 375 380
Lys Val Ser Pro Tyr Leu Phe Thr Val Pro lie Lys Glu Ala Gly Glu 385 390 395 400
Asp Cys His Ala Pro Thr Tyr Leu Pro Ala Glu Val Gly Gly Asp Val
919
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019 S09 009
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5t^ 0 90^
9 S
l8^Z0/86dT/XDd Z-Z9SS/86 OW 配列番号 ： 4 配列の長さ ： 1 4 1 配列の型 ： ア ミ ノ酸 鎖の数 ： 一本鎖 トポロ ジー ： 直鎖状 配列の種類 ： ぺプチ ド 起源 生物名 ： 麻疼ウイノレス (meas les vi rus) 株名 ： 弱毒麻瘆ウィ ルス C AM— 7 0株 配列
Thr Thr Asn Gin Phe Leu Ala Val Ser Lys Gly Asn Cys Ser Gly Pro
1 5 10 15
Thr Thr lie Arg Gly Gin Phe Ser Asn Met Ser Leu Ser Leu Leu Asp
20 25 30
Leu Tyr Leu Gly Arg Gly Tyr Asn Val Ser Ser lie Val Thr Met Thr
35 40 45
Ser Gin Gly Met Tyr Gly Gly Thr Tyr Leu Val Glu Lys Pro Asn Leu
50 55 60
Ser Ser Lys Arg Ser Glu Leu Ser Gin Leu Ser Met Tyr Arg Val Phe 65 70 75 80
Glu Val Gly Val lie Arg Asn Pro Gly Leu Gly Ala Pro Val Phe His
85 90 95
Met Thr Asn Tyr Leu Glu Gin Pro Val Ser Asn Asp Leu Ser Asn Cys
100 105 110
Met Val Ala Leu Gly Glu Leu Lys Leu Ala Ala Leu Cys His Gly Glu
115 120 125
Asp Ser lie Thr lie Pro Tyr Gin Gly Ser Gly Lys Gly
130 135 140 配列番号 ： 5 配列の長さ ： 7 配列の型 ： ア ミ ノ酸
鎖の数 ： 一本鎖
トポロ ジー ： 直鎖状
配列の種類 ： ぺプチ ド
起源
生物名 ： 麻疼ウイノレス (meas l es v i rus) 株名 ： 弱毒麻疹ウイノレス C AM— 7 0株 配列
Leu Glu Thr Lys Thr Thr Asn
1 5
配列番号 ： 6 配列の長さ ： 7 配列の型 ： ア ミ ノ酸
鎖の数 ： 一本鎖
トポロジー ： 直鎖状
配列の種類 ： ぺプチ ド
起源
生物名 ： 麻疹ウイノレス （meas l es v i rus) 株名 ： 弱毒麻疹ウィルス C AM— 7 0株 配列
Asn Leu Ser Ser Lys Arg Sei
1 5
配列番号 ： 7 配列の長さ ： 6 配列の型 ： ア ミ ノ酸
鎖の数 ： 一本鎖
トポロ ジー ： 直鎖状
配列の種類 プチ ド
起源
生物名 ： 淋珍ゥイ ノレス (meas l es vi rus) 株名 ： 弱毒麻疹ウィルス C AM— 7 0株 配列
Glu Gin Pro Val Ser Asn
1 5
配列番号 ： 8 配列の長さ ： 7 配列の型 ： ア ミ ノ酸
鎖の数 ： 一本鎖
トポロジー ： 直鎖状
配列の種類 ： ぺプチ ド 起源
生物名 ： 麻疼ウイノレス (meas l es v i rus) 株名 ： 弱毒麻疹ウィ ルス C AM— 7 0株 配列 is Gly Glu Asp Ser lie Thr
1 5
配列番号 ： 9 配列の長さ ： 1 8 5 4 配列の型 ： 核酸 鎖の数 ： 一本鎖 トポロ ジー ： 直鎖状 配歹 ljの ¾類 ： cDNA to genomic RNA encoding H rotein 起源 生物名 ： 麻疹ウイノレス （meas les vi rus) 株名 ： 強毒麻疹ウィ ルス N A株 配列
ATG TCA CCA CAA CGA GAC CGA ATA AAT GCC TTC TAC AAA GAC AAC CCC 48 Met Ser Pro Gin Arg Asp Arg lie Asn Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Pro
1 5 10 15
CAT CCT AAG GGA AGT AGG ATA GTT ATT AAC AGA GAA CAT CTT ATG ATT 96 His Pro Lys Gly Ser Arg He Val lie Asn Arg Glu His Leu Met lie
20 25 30
GAT AGA CCT TAT GTT TTG CTG GCT GTT CTA TTC GTC ATG TTT CTG AGC 144 Asp Arg Pro Tyr Val Leu Leu Ala Val Leu Phe Val Met Phe Leu Ser
35 40 45
TTG ATC GGG TTG CTA GCC ATT GCA GGC ATT AGA CTT CAT CGG GCA GCC 192 Leu lie Gly Leu Leu Ala lie Ala Gly lie Arg Leu His Arg Ala Ala
50 55 60
ATC TAC ACT GCA GAG ATC CAT AAA AGC CTC AGC ACC AAT CTA GAT GTA 240 lie Tyr T r Ala Glu lie His Lys Ser Leu Ser Thr Asn Leu Asp Val 65 70 75 80
ACT AAC TCA ATC GAG CAT CAG GTC AAG GAC GTG CTG ACA CCA CTC TTC 288 Thr Asn Ser lie Glu His Gin Val Lys Asp Val Leu lie Pro Leu Phe
85 90 95 AAG ATC ATC GGT GAT GAA GTG GGC CTG AGG ACA CCT CAG AGA TTC ACT 336 Lys lie lie Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro Gin Arg Phe Thr
100 105 110
GAC CTA GTG AAA TTC ATC TCT GAC AAG ATT AAA TTC CTT AAT CCG GAT 384 Asp Leu Val Lys Phe lie Ser Asp Lys lie Lys Phe Leu Asn Pro Asp
115 120 125
AGG GAG TAC GAC TTC AGG GAT CTC ACT TGG TGT ATC AAC CCG CCA GAG 432 Arg Glu Tyr Asp Phe Arg Asp Leu Thr Trp Cys lie Asn Pro Pro Glu
130 135 140
AGA ATC AAA TTG GAT TAT GAT CAA TAC TGT GCA GAT GTG GCT GCT GAA 480 Arg lie Lys Leu Asp Tyr Asp Gin Tyr Cys Ala Asp Ala Ala Ala Glu 145 150 155 160
GAA CTC ATG AAT GCA TTG GTG AAC GCA ACT CTA CTG GAG GCC AGG GCA 528 Glu Leu Met Asn Ala Leu Val Asn Ala Thr Leu Leu Glu Ala Lys Ala
165 170 175
ACC AAT CAG TTC CTA GCT GTC TCA AAG GGA AAC TGC TCA GGG CCC ACT 576 Thr Asn Gin Phe Leu Ala Val Ser Lys Gly Asn Cys Ser Gly Pro Thr
180 185 190
ACA ATC AGA GGT CAA TTC TCA AAC ATG TCG CTG TCC CTG TTG GAC TTG 624 Thr lie Arg Gly Gin Phe Ser Asn Met Ser Leu Ser Leu Leu Asp Leu
195 200 205
TAC TTA AGT CGA GGT TAC AAT GTG TCA TCT ATA GTC ACT ATG ACA TCC 672 Tyr Leu Ser Arg Gly Tyr Asn Val Ser Ser lie Val Thr Met Thr Ser
210 215 220
CAG GGA ATG TAC GGG GGA ACT TAC CTA GTG GAA AAG CCT AAT CTG AGC 720 Gin Gly Met Tyr Gly Gly Thr Tyr Leu Val Glu Lys Pro Asn Leu Ser 225 230 235 240
AGT AAA GGG TCA GAG TTG TCA CAA CTG AGC ATG CAC CGA GTG TTT GAA 768 Ser Lys Gly Ser Glu Leu Ser Gin Leu Ser Met His Arg Val Phe Glu
245 250 255
GTA GGT GTG ATC AGA AAT CCG GGT TTG GGG GCT CCG GTG TTC CAT ATG 816 Val Gly Val lie Arg Asn Pro Gly Leu Gly Ala Pro Val Phe His Met
260 265 270 9^ 0 S^
S!H usy sX J na dsy 1 Ai J9 AID s!H I "91 OJJ
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S 0
lO 3qd ^IO J9S BIV 311 8I I s q na nig 八 η9Ί "s nsq Zl 000 Oil VDO V31 109 liV VW OIV WV 313 OVO IID VOV 010 10V 013
S 0 SO^
usy Λ n9l Λ 10 "1 J9S 01i 9I I 3】V USV dsV "Ί na OIJ H\ 環 IID 131 Oil DID 09D OVI VOX XOO IIV ODV OVV OVO DW 013 VDO
00 968 062 98S V nig OIJ usy n!3 s o na B[V «10 311 sX XiQ u]9 s o B IV
ΟΟΖΐ VOO 001 DVD 033 IVV OVO 301 010 VOO VV3 31V WV 300 OVO 101 939
08S S S OZC ui9 uiO SU s 3 j nig jayj Siy naq sX dsy dsy J i V jq Jqi
Ζ9Π OVO DVD 311 DDI VDV DVO OIV VOD Oil 9W DVD IVO VDV VOO VDV VDV
998 09S 958
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9 SOI VOl 013 OVl 113 DOV IVD VIV 010 VOO IVO 1V9 03V VOl VIO 033 319
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918 019 SOS
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096 OVD Oil 30V DID 100 WV DD9 VOl ODD DVO IVl ODD IXV VDV OIV IDl
OOS 62 062 dsy nig gjy S !H S Q na Β[γ BIV 9 j sXq na nj^ naq BIV ΙΒΛ
Z16 IVO WO OOV OVO 101 DID ODD VDO DII VW 013 DV9 009 OXI 100 010
98Z 08Z 9ZZ
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Z 9
l8fZ0/86cLr/XDd ム Z9SS/86 ΟΛ^ AAC AAT GTG TAT TGG CTG ACC ATC CCG CCA ATG AAG AAC CTA GCC TTA 1392
Asn Asn Val T r Trp Leu Asn lie Pro Pro Met Lys Asn Leu Ala Leu
450 455 460
GGT GTA ATC AAC ACA TTA GAG TGG ATA CCG AGA TTC AAG GTT AGT CCC 1440
Gly Val He Asn Thr Leu Glu Trp lie Pro Arg Phe Lys Val Ser Pro
465 470 475 480
AAC CTC TTC ACT GTT CCA ATC AAG GAA GCA GGC GAG GAC TGC CAT GCC 1488
Asn Leu Phe Thr Val Pro lie Lys Glu Ala Gly Glu Asp Cys His Ala
485 490 495
CCA ACA TAC CTG CCT GCG GAG GTG GAT GGT GAT GTC AAA CTC AGT TCC 1536
Pro Thr Tyr Leu Pro Ala Glu Val Gly Gly Asp Val Lys Leu Ser Ser
500 505 510
AAT CTG GTG ATT CTA CCT GGT CAA GAT CTC CAA TAT GTT TTG GCA ACC 1584
Asn Leu Val lie Leu Pro Gly Gin Asp Leu Gin Tyr Val Leu Ala Thr
515 520 525
TAC GAT ACT TCC AGG GTT GAA CAT GCT GTG GTT TAT TAT GTT TAC AGC 1632
Tyr Asp Thr Ser Arg Val Glu His Ala Val Val Tyr Tyr Val Tyr Ser
530 535 540
CCG AGC CGC TCA TTT TCT TAC TTT TAT CCC TTT AGG TTG CCT ATA AAG 1680
Pro Ser Aig Ser Phe Ser Tyr Phe Tyr Pro Phe Arg Leu Pro lie Lys
545 550 555 560
GGG GTC CCC ATC GAA TTA CAA GTG GAA TGC TTC ACA TGG GAC CAA AAA 1728
Gly Val Pro lie Glu Leu Gin Val Glu Cys Phe Thr Trp Asp Gin Lys
565 570 575
CTC TGG TGC CGT CAC TTC TGT GTG CTT GCG GAC TCA GAA TCT GGT GGA 1776
Leu Trp Cys Arg His Phe Cys Val Leu Ala Asp Ser Glu Ser Gly Glu
580 585 590
CAT ATC ACT CAC TCT GGA ATG GTG GGC ATG GGA GTC AGC TGC ACA GTC 1824
His lie Thr His Ser Gly Met Val Gly Met Glu Val Ser Cys Thr Val
595 600 605
ACT CGG GAA GAT GGA ACC AAT AGC AGA TAG 1854
Thr Arg Glu Asp Gly Thr Asn Ser Arg ***
610 615 配列番号 ： 1 0
配列の長さ ： 6 1 7
配列の型 ： ア ミ ノ酸
トポロジー ： 一本鎖
配列の種類 ： ペプチ ド （Hタ ンパク質）
起源
生物名 ： 淋疼ゥイ ノレス (meas l es v i rus) 株名 ： 強毒麻疹ウィ ルス N A株 配歹 U
Met Ser Pro Gin Arg Asp Arg lie Asn Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Pro
1 5 10 15
His Pro Lys Gly Ser Arg He Val lie Asn Arg Glu His Leu Met lie
20 25 30
Asp Arg Pro Tyr Val Leu Leu Ala Val Leu Phe Val Met Phe Leu Ser
35 40 45
Leu lie Gly Leu Leu Ala lie Ala Gly lie Arg Leu His Arg Ala Ala
50 55 60
He Tyr Thr Ala Glu lie His Lys Ser Leu Ser Thr Asn Leu Asp Val 65 70 75 80
Thr Asn Ser lie Glu His Gin Val Lys Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe
85 90 95
Lys lie lie Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro Gin Arg Phe Thr
100 105 110
Asp Leu Val Lys Phe lie Ser Asp Lys lie Lys Phe Leu Asn Pro Asp
115 120 125
Arg Glu Tyr Asp Phe Arg Asp Leu Thr Trp Cys lie Asn Pro Pro Glu
130 135 140
Arg lie Lys Leu Asp Tyr Asp Gin Tyr Cys Ala Asp Val Ala Ala Glu 145 150 155 160
Glu Leu Met Asn Ala Leu Val Asn Ala Thr Leu Leu Glu Ala Arg Ala
165 170 175
Thr Asn Gin Phe Leu Ala Val Ser Lys Gly Asn Cys Ser Gly Pro Thr
180 185 190
Thr lie Arg Gly Gin Phe Ser Asn Met Ser Leu Ser Leu Leu Asp Leu
195 200 205
Tyr Leu Ser Arg Gly Tyr Asn Val Ser Ser lie Val Thr Met Thr Ser
210 215 220
Gin Gly Met Tyr Gly Gly Thr Tyr Leu Val Glu Lys Pro Asn Leu Ser 225 230 235 240
Ser Lys Gly Ser Glu Leu Ser Gin Leu Ser Met His Arg Val Phe Glu
245 250 255
Val Gly Val He Arg Asn Pro Gly Leu Gly Ala Pro Val Phe His Met
260 265 270
Thr Asn Tyr Phe Glu Gin Ser Val Ser Asn Asp Phe Asn Asn Cys Met
275 280 285
Val Ala Leu Gly Glu Leu Lys Phe Ala Ala Leu Cys His Arg Glu Asp
290 295 300
Ser He Thr lie Pro Tyr Gin Gly Ser Gly Lys Gly Val Ser Phe Gin 305 310 315 320
Leu Val Lys Leu Gly Val Trp Lys Ser Pro Thr Asp Met Gin Ser Trp
325 330 335
Val Pro Leu Ser Thr Asp Asp Pro Val lie Asp Arg Leu Tyr Leu Ser
340 345 350
Ser His Arg Gly Val lie Ala Asp Asn Gin Ala Lys Trp Ala Val Pro
355 360 365
Thr Thr Arg Thr Asp Asp Lys Leu Arg Met Glu Thr Cys Phe Gin Gin
370 375 380
Ala Cys Gin Gly Lys He Gin Ala Leu Cys Glu Asn Pro Glu Trp Ala 385 390 395 400
Pro Leu Lys Asp Asn Arg lie Pro Ser Tyr Gly Val Leu Ser Val Asn
405 410 415 Leu Ser Leu Thr Val Glu Leu Lys lie Lys lie Ala Ser Gly Phe Gly
420 425 430
Pro Leu lie Thr His Gly Ser Gly Met Asp Leu Tyr Lys Ser Asn His
435 440 445
Asn Asn Val Tyr Trp Leu Thr lie Pro Pro Met Lys Asn Leu Ala Leu
450 455 460
Gly Val He Asn Thr Leu Glu Trp lie Pro Arg Phe Lys Val Ser Pro 465 470 475 480
Asn Leu Phe Thr Val Pro lie Lys Glu Ala Gly Glu Asp Cys His Ala
485 490 495
Pro Thr Tyr Leu Pro Ala Glu Val Asp Gly Asp Val Lys Leu Ser Ser
500 505 510
Asn Leu Val lie Leu Pro Gly Gin Asp Leu Gin Tyr Val Leu Ala Thr
515 520 525
Tyr Asp Thr Ser Arg Val Glu His Ala Val Val Tyr Tyr Val Tyr Ser
530 535 540
Pro Ser Arg Ser Phe Ser Tyr Phe Tyr Pro Phe Arg Leu Pro He Lys 545 550 555 560
Gly Val Pro lie Glu Leu Gin Val Glu Cys Phe Thr Trp Asp Gin Lys
565 570 575
Leu Trp Cys Arg His Phe Cys Val Leu Ala Asp Ser Glu Ser Gly Gly
580 585 590
His lie Thr His Ser Gly Met Val Gly Met Gly Val Ser Cys Thr Val
595 600 605
Thr Arg Glu Asp Gly Thr Asn Ser Arg
610 615 配列番号 ： 1 配列の長さ ： 5 2 4 配列の型 ： ア ミ ノ酸 鎖の数 ： 一本鎖 トポロ ジー ： 直鎖状 配列の種類 ： ぺプチ ド 起源 生物名 ： 麻诊ゥイ ノレス (meas les virus) 株名 ： 強毒麻疹ウィルス N A株 配列
Thr Pro Leu Phe Lys He lie Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro
1 5 10 15
Gin Arg Phe Thr Asp Leu Val Lys Phe lie Ser Asp Lys He Lys Phe
20 25 30
Leu Asn Pro Asp Arg Glu Tyr Asp Phe Arg Asp Leu Thr Trp Cys lie
35 40 45
Asn Pro Pro Glu Arg lie Lys Leu Asp Tyr Asp Gin Tyr Cys Ala Asp
50 55 60
Val Ala Ala Glu Glu Leu Met Asn Ala Leu Val Asn Ala Thr Leu Leu 65 70 75 80
Glu Ala Arg Ala Thr Asn Gin Phe Leu Ala Val Ser Lys Gly Asn Cys
85 90 95
Ser Gly Pro Thr Thr He Arg Gly Gin Phe Ser Asn Met Ser Leu Ser
100 105 110
Leu Leu Asp Leu Tyr Leu Ser Arg Gly Tyr Asn Val Ser Ser lie Val
115 120 125
Thr Met Thr Ser Gin Gly Met Tyr Gly Gly Thr Tyr Leu Val Glu Lys 130 135 140 Pro Asn Leu Ser Ser Lys Gly Ser Glu Leu Ser Gin Leu Ser Met His 145 150 155 160
Arg Val Phe Glu Val Gly Val lie Arg Asn Pro Gly Leu Gly Ala Pro
165 170 175
Val Phe His Met Thr Asn Tyr Phe Glu Gin Ser Val Ser Asn Asp Phe
180 185 190
Asn Asn Cys Met Val Ala Leu Gly Glu Leu Lys Phe Ala Ala Leu Cys
195 200 205
His Arg Glu Asp Ser lie Thr lie Pro Tyr Gin Gly Ser Gly Lys Gly
210 215 220
Val Ser Phe Gin Leu Val Lys Leu Gly Val Trp Lys Ser Pro Thr Asp 225 230 235 240
Met Gin Ser Trp Val Pro Leu Ser Thr Asp Asp Pro Val He Asp Arg
245 250 255
Leu Tyr Leu Ser Ser His Arg Gly Val He Ala Asp Asn Gin Ala Lys
260 265 270
Trp Ala Val Pro Thr Thr Arg Thr Asp Asp Lys Leu Arg Met Glu Thr
275 280 285
Cys Phe Gin Gin Ala Cys Gin Gly Lys lie Gin Ala Leu Cys Glu Asn
290 295 300
Pro Glu Trp Ala Pro Leu Lys Asp Asn Arg lie Pro Ser Tyr Gly Val 305 310 315 320
Leu Ser Val Asn Leu Ser Leu Thr Val Glu Leu Lys lie Lys lie Ala
325 330 335
Ser Gly Phe Gly Pro Leu lie Thr His Gly Ser Gly Met Asp Leu Tyr
340 345 350
Lys Ser Asn His Asn Asn Val Tyr Trp Leu Thr lie Pro Pro Met Lys
355 360 365
Asn Leu Ala Leu Gly Val lie Asn Thr Leu Glu Trp lie Pro Arg Phe
370 375 380
Lys Val Ser Pro Asn Leu Phe Thr Val Pro lie Lys Glu Ala Gly Glu 385 390 395 400
Asp Cys His Ala Pro Thr Tyr Leu Pro Ala Glu Val Asp Gly Asp Val oid io J9s S Q usy IO J8s i V «ID «SV V
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6 9
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Thr Thr lie Arg Gly Gin Phe Ser Asn Met Ser Leu Ser Leu Leu Asp
20 25 30
Leu Tyr Leu Ser Arg Gly Tyr Asn Val Ser Ser lie Val Thr Met Thr
35 40 45
Ser Gin Gly Met Tyr Gly Gly Thr Tyr Leu Val Glu Lys Pro Asn Leu
50 55 60
Ser Ser Lys Gly Ser Glu Leu Ser Gin Leu Ser Met His Arg Val Phe 65 70 75 80
Glu Val Gly Val lie Arg Asn Pro Gly Leu Gly Ala Pro Val Phe His
85 90 95
Met Thr Asn Tyr Phe Glu Gin Ser Val Ser Asn Asp Phe Asn Asn Cys
100 105 110
Met Val Ala Leu Gly Glu Leu Lys Phe Ala Ala Leu Cys His Arg Glu
115 120 125
Asp Ser He Thr lie Pro Tyr Gin Gly Ser Gly Lys Gly
130 135 140
配列番号 ： 1 3 配列の長さ ： 7
配列の型 ： ア ミ ノ酸 鎖の数 ： 一本鎖 トポロジー ： 直鎖状 配列の種類 ： ぺプチ ド 起源 生物名 ： 麻珍ウイノレス . (measles vi rus) 株名 ： 強毒麻疹ウィルス N A株 配列
Leu Glu Ala Arg Ala Thr Asn
1 5
配列番号 ： 1 4
配列の長さ ： 7
配列の型 ： ア ミ ノ酸
鎖の数 ： 一本鎖
トポロ ジー ： 直鎖状
配冽の種類 ： ペプチ ド
起源
生物名 ： 淋珍ウイノレス (meas l es v i rus) 株名 ： 強毒麻疹ウィルス N A株 配歹 IJ
Asn Leu Ser Ser Lys Gly Ser
1 5
配列番号 ： 1 5
配列の長さ ： 6
配列の型 ： ア ミ ノ酸
鎖の数 ： 一本鎖
トポロジー ： 直鎖状
配列の種類 ： ぺプチ ド
起源 生物名 ： 麻疼ウイノレス (meas l es v i rus) 株名 ： 強毒麻疹ウィルス N A株 配冽
Glu Gin Ser Va 1 Ser Asn
1 5
配列番号 ： 1 6
配列の長さ ： 7
配列の型 ： ア ミ ノ酸
鎖の数 ： 一本鎖
トポロジー ： 直鎖状
配列の種類 ： ぺプチ ド
起源
生物名 ： 麻疼ウィルス （meas l es i rus) 株名 ： 強毒麻疹ウィルス N A株 配列
His Arg Glu Asp Ser lie Thr
1 5 配列番号 ： 1 7 配列の長さ ： 1 6 5 3 配列の型 ： 核酸 鎖の数 ： 一本鎖 トポロ ジー ： 直鎖状 配歹 IJの種類 ： cDNA to genomic RNA encoding F Protein 起源 生物名 ： 麻疹ウィルス （meas les virus) 株名 ： 弱毒麻疹ウィルス C AM— 7 0株 配列
ATG GGT CTC AAG GTG AAC GTC TCT GCC ATA TTC ATG GCA GTA CTG TTA 48 Met Gly Leu Lys Val Asn Val Ser Ala lie Phe Met Ala Val Leu Leu
1 5 10 15
ACT CTC CAA ACA CCC ACC GGT CAA ATC CAT TGG GGC AAT CTC TCT AAG 96 Thr Leu Gin Thr Pro Thr Gly Gin lie His Trp Gly Asn Leu Ser Lys
20 25 30
ATA GGG GTG GTA GGA ATA GGA AGT GCA AGC TAC AAA GTT ATG ACT CGT 144 He Gly Val Val Gly lie Gly Ser Ala Ser Tyr Lys Val Met Thr Arg
35 40 45
TCC AGC CAT CAC TCA TTA GTC ATA AAA TTA ATG CCC AAT ATA ACT CTC 192 Ser Ser His His Ser Leu Val lie Lys Leu Met Pro Asn lie Thr Leu
50 55 60
CTC AAT AAC TGC ACG AGG GTA GAG ATT GCA GAA TAC AGG AGA CTA CTG 240 Leu Asn Asn Cys Thr Arg Val Glu He Ala Glu Tyr Arg Arg Leu Leu 65 70 75 80
AGA ACA GTT TTG GAA CCA ATT AGA GAT GCA CTT AAT GCA ATG ACC CAG 288 Arg Thr Val Leu Glu Pro He Arg Asp Ala Leu Asn Ala Met Thr Gin
85 90 95 AAT ATA AGA CCG GTT CAG AGT GTA GCT TCA GGT AGG AGA CAC AAG AGA 336 Asn lie Arg Pro Val Gin Ser Val Ala Ser Gly Arg Arg His Lys Arg
100 105 110
TTT GCG GGA GTA GTC CTG GCA GGT GCG GCC CTA GGC GTT GCC ACA GCT 384 Phe Ala Gly Val Val Leu Ala Gly Ala Ala Leu Gly Val Ala Thr Ala
115 120 125
GCT CAG ATA ACA GCC GGC ATT GCA CTT CAC CAG TCC ATG CTG AAC TCT 432 Ala Gin He Thr Ala Gly lie Ala Leu His Gin Ser Met Leu Asn Ser
130 135 140
CAA GCC ATC GAC AAT CTG AGA GCG AGC CTG GAA ACT ACT AAT CAG GCA 480 Gin Ala lie Asp Asn Leu Arg Ala Ser Leu Glu Thr Thr Asn Gin Ala 145 150 155 160
ATT GAG GCA ATC GGA CAA GCA GGG CAG GAG ATG ATA TTG GCT GTT CAG 528 He Glu Ala lie Gly Gin Ala Gly Gin Glu Met lie Leu Ala Val Gin
165 170 175
GGT GTC CAA GAC TAC ATC AAT AAT GAG CTG ATA CCG TCT ATG AAC CAA 576 Gly Val Gin Asp Tyr lie Asn Asn Glu Leu lie Pro Ser Met Asn Gin
180 185 190
CTA TCT TGT GAT TTA ATC GGC CAG AAG CTC GGG CTC AAA TTG CTC AGA 624 Leu Ser Cys Asp Leu lie Gly Gin Lys Leu Gly Leu Lys Leu Leu Arg
195 200 205
TAC TAT ACA GAA ATC CTG TCG TTA TTT GGC CCC AGC TTA CGG GAC CCC 672 Tyr Tyr Thr Glu lie Leu Ser Leu Phe Gly Pro Ser Leu Arg Asp Pro
210 215 220
ATA TCT GCG GAG ATA TCT ATC CAG GCT TTG AGC TAT GCG CTT GGA GGA 720 lie Ser Ala Glu lie Ser lie Gin Ala Leu Ser Tyr Ala Leu Gly Gly 225 230 235 240
GAC ATC AAT AAG GTG TTA GAA AAG CTC GGA TAC AGT GGA GGT GAT TTA 768 Asp lie Asn Lys Val Leu Glu Lys Leu Gly Tyr Ser Gly Gly Asp Leu
245 250 255
CTG GGC ATC TTA GAG AGC AGA GGA ATA AAG GCC CGG ATA ACT CAC GTC 816 Leu Gly lie Leu Glu Ser Arg Gly lie Lys Ala Arg lie Thr His Val
260 265 270 GAC ACA GAG TCC TAC TTC ATT GTC CTC AGT ATA GCC TAT CCG ACG CTG 864 Asp Thr Glu Ser Tyr Phe lie Val Leu Ser He Ala Tyr Pro Thr Leu
275 280 285
TCC GAG ATT AAG GGG GTG ATT GTC CAC CGG CTA GAG GGG GTC TCG TAC 912 Ser Glu He Lys Gly Val lie Val His Arg Leu Glu Gly Val Ser Tyr
290 295 300
AAC ATA GGC TCT CAA GAG TGG TAT ACC ACT GTG CCC AAG TAT GTT GCA 960 Asn lie Gly Ser Gin Glu Trp Tyr Thr T r Val Pro Lys Tyr Val Ala 305 310 315 320
ACC CAA GGG TAC CTT ATC TCG AAT TTT GAT GAG TCA TCG TGT ACT TTC 1008 Thr Gin Gly Tyr Leu lie Ser Asn Phe Asp Glu Ser Ser Cys Thr Phe
325 330 335
ATG CCA GAG GGG ACT GTG TGC AGC CAA AAT GCC TTG TAC CCG ATG AGT 1056 Met Pro Glu Gly Thr Val Cys Ser Gin Asn Ala Leu Tyr Pro Met Ser
340 345 350
CCT CTG CTC CAA GAA TGC CTC CGG GGG TTC ACC AAG TCC TGT GCT CGT 1104 Pro Leu Leu Gin Glu Cys Leu Arg Gly Phe Thr Lys Ser Cys Ala Arg
355 360 365
ACA CTC GTA TCC GGG TCT TTT GGG AAC CGG TTC ATT TTA TCA CAA GGG 1152 Thr Leu Val Ser Gly Ser Phe Gly Asn Arg Phe lie Leu Ser Gin Gly
370 375 380
AAC CTA ATA GCC AAT TGT GCA TCA ATC CTT TGC AAG TGT CAC ACA ACA 1200 Asn Leu lie Ala Asn Cys Ala Ser lie Leu Cys Lys Cys His Thr Thr 385 390 395 400
GGA ACG ATC ATT AAT CAA GAC CCT GAC AAG ATC CTA ACA TAC ATT GCT 1248 Gly Thr He lie Asn Gin Asp Pro Asp Lys He Leu Thr Tyr lie Ala
405 410 415
GAC GAT CAC TGC CCG GTA GTC GAG GTG AAC GGC GTG ACC ATC CAA GTC 1296 Asp Asp His Cys Pro Val Val Glu Val Asn Gly Val Thr He Gin Val
420 425 430
GGG AGC AGG AGG TAT CCA GAC GCT GTG TAC TTG CAC AGA ATT GAC CTC 1344 Gly Ser Arg Arg Tyr Pro Asp Ala Val Tyr Leu His Arg lie Asp Leu
435 440 445 GGT CCT CCC ATA TCA TTG GAG AGG TTG GAC GTA GGG ACA AAT CTG GGG 1392
Gly Pro Pro lie Ser Leu Glu Arg Leu Asp Val Gly Thr Asn Leu Gly
450 455 460
AAT GCA ATT GCT AAG TTG GAG GAT GCC AAG GAA TTG TTG GAG TCA TCG 1440
Asn Ala lie Ala Lys Leu Glu Asp Ala Lys Glu Leu Leu Glu Ser Ser
465 470 475 480
GAC CAG ATA TTG AGG AGT ATG AAA GGT TTA TCG AGC ACT AGC ATA GTC 1488
Asp Gin lie Leu Arg Ser Met Lys Gly Leu Ser Ser Thr Ser lie Val
485 490 495
TAC ATC CTG ATT GCA GTG TGT CTT GGA GGG TTG ATA GGG ATC CCC GCT 1536
Tyr lie Leu lie Ala Val Cys Leu Gly Gly Leu lie Gly lie Pro Ala
500 505 510
TTA ATA TGT TGC TGC AGG GGG CGT TGT AAC AAA AAG GGA GAA CAA GTT 1584
Leu lie Cys Cys Cys Arg Gly Arg Cys Asn Lys Lys Gly Glu Gin Val
515 520 525
GGT ATG TCA AGA CCA GGC CTA AAG CCT GAT CTT ACG GGA ACA TCA AAA 1632
Gly Met Ser Arg Pro Gly Leu Lys Pro Asp Leu Thr Gly Thr Ser Lys
530 535 540
TCC TAT GTA AGG TCG CTC TGA 1653
Ser Tyr Val Arg Ser Leu ***
545 550
配列番号 ： 1 8 配列の長さ ： 5 5 0 配列の型 ： ア ミ ノ酸
鎖の数 ： 一本鎖
配列の種類 ： ペプチ ド （ F タ ンパク質）
起源
生物名 ： 麻疹ウィルス （meas l es v i rus) 株名 ： 弱毒麻疹ウィルス C AM— 7 0株 配列
Met Gly Leu Lys Val Asn Val Ser Ala lie Phe Met Ala Val Leu Leu
1 5 10 15
Thr Leu Gin Thr Pro Thr Gly Gin lie His Trp Gly Asn Leu Ser Lys
20 25 30 lie Gly Val Val Gly lie Gly Ser Ala Ser Tyr Lys Val Met Thr Arg
35 40 45
Ser Ser His His Ser Leu Val lie Lys Leu Met Pro Asn lie Thr Leu
50 55 60
Leu Asn Asn Cys Thr Arg Val Glu lie Ala Glu Tyr Arg Arg Leu Leu 65 70 75 80
Arg Thr Val Leu Glu Pro lie Arg Asp Ala Leu Asn Ala Met Thr Gin
85 90 95
Asn lie Arg Pro Val Gin Ser Val Ala Ser Gly Arg Arg His Lys Arg
100 105 110
Phe Ala Gly Val Val Leu Ala Gly Ala Ala Leu Gly Val Ala Thr Ala
115 120 125
Ala Gin lie Thr Ala Gly lie Ala Leu His Gin Ser Met Leu Asn Ser
130 135 140
Gin Ala He Asp Asn Leu Arg Ala Ser Leu Glu Thr T r Asn Gin Ala 145 150 155 160 lie Glu Ala lie Gly Gin Ala Gly Gin Glu Met lie Leu Ala Val Gin
165 170 175
Gly Val Gin Asp Tyr lie Asn Asn Glu Leu lie Pro Ser Met Asn Gin
180 185 190
Leu Ser Cys Asp Leu lie Gly Gin Lys Leu Gly Leu Lys Leu Leu Arg
195 200 205
Tyr Tyr Thr Glu lie Leu Ser Leu Phe Gly Pro Ser Leu Arg Asp Pro
210 215 220
lie Ser Ala Glu lie Ser lie Gin Ala Leu Ser Tyr Ala Leu Gly Gly 225 230 235 240
Asp lie Asn Lys Val Leu Glu Lys Leu Gly Tyr Ser Gly Gly Asp Leu
245 250 255
Leu Gly lie Leu Glu Ser Arg Gly He Lys Ala Arg He Thr His Val
260 265 270
Asp Thr Glu Ser Tyr Phe He Val Leu Ser lie Ala Tyr Pro Thr Leu
275 280 285
Ser Glu He Lys Gly Val He Val His Arg Leu Glu Gly Val Ser Tyr
290 295 300
Asn lie Gly Ser Gin Glu Trp Tyr Thr Thr Val Pro Lys Tyr Val Ala 305 310 315 320
Thr Gin Gly Tyr Leu lie Ser Asn Phe Asp Glu Ser Ser Cys Thr Phe
325 330 335
Met Pro Glu Gly Thr Val Cys Ser Gin Asn Ala Leu Tyr Pro Met Ser
340 345 350
Pro Leu Leu Gin Glu Cys Leu Arg Gly Phe Thr Lys Ser Cys Ala Arg
355 360 365
Thr Leu Val Ser Gly Ser Phe Gly Asn Arg Phe lie Leu Ser Gin Gly
370 375 380
Asn Leu lie Ala Asn Cys Ala Ser He Leu Cys Lys Cys His Thr Thr 385 390 395 400
Gly Thr lie lie Asn Gin Asp Pro Asp Lys lie Leu Thr Tyr lie Ala
405 410 415 Asp Asp His Cys Pro Val Val Glu Val Asn Gly Val Thr lie Gin Val
420 425 430
Gly Ser Arg Arg Tyr Pro Asp Ala Val Tyr Leu His Arg lie Asp Leu
435 440 445
Gly Pro Pro lie Ser Leu Glu Arg Leu Asp Val Gly Thr Asn Leu Gly
450 455 460
Asn Ala lie Ala Lys Leu Glu Asp Ala Lys Glu Leu Leu Glu Ser Ser 465 470 475 480
Asp Gin lie Leu Arg Ser Met Lys Gly Leu Ser Ser Thr Ser lie Val
485 490 495
Tyr lie Leu He Ala Val Cys Leu Gly Gly Leu lie Gly lie Pro Ala
500 505 510
Leu lie Cys Cys Cys Arg Gly Arg Cys Asn Lys Lys Gly Glu Gin Val
515 520 525
Gly Met Ser Arg Pro Gly Leu Lys Pro Asp Leu Thr Gly Thr Ser Lys
530 535 540
Ser Tyr Val Arg Ser Leu
545 550
配列番号 ： 1 9 配列の長さ ： 1 6 5 3 配列の型 ： 核酸 鎖の数 ： 一本鎖 トポロジー ： 直鎖状 配歹 IJの種類 ： cDNA to genomic RNA encoding F Protein 起源 生物名 ： 麻疼ゥイ ノレス （meas les vi rus) 株名 ： 強毒麻疹ウィルス N A株 配列
ATG GGT CTC AAG GTG AAC GTC TCT GCC ATA CTC ATG GCA GTA CTG TTA 48 Met Gly Leu Lys Val Asn Val Ser Ala lie Leu Met Ala Val Leu Leu
1 5 10 15
ACT CTC CAA ACA CCC ACC GGT CAA ATC CAT TGG GGC AAT CTC TCT AAG 96 Thr Leu G n T r Pro Thr Gly Gin lie His Trp Gly Asn Leu Ser Lys
20 25 30
ATA GGG GTG GTA GGG ATA GGA AGT GCA AGC TAC AAA GTT ATG ACT CGT 144 lie Gly Val Val Gly lie Gly Ser Ala Ser Tyr Lys Val Met Thr Arg
35 40 45
TCC AGC CAT CAA TCA TTG GTC ATA AAA TTA ATG CCC AAT ATA ACT CTC 192 Ser Ser His His Ser Leu Val lie Lys Leu Met Pro Asn 11 e Thr Leu
50 55 60
CTC AAT AAC TGC ACG AGG GTA GAG ATT GCA GAA TAC AGG AGA CTA CTG 240 Leu Asn Asn Cys Thr Arg Val Glu lie Ala Glu Tyr Arg Arg Leu Leu 65 70 75 80
AGA ACA GTT TTG GAA CCA ATT AGA GAT GCA CTT AAT GCA ATG ACC CAG 288 Arg Thr Val Leu Glu Pro lie Arg Asp Ala Leu Asn Ala Met Thr Gin
85 90 95 AAT ATA AGA CCG GTT CAG AGT GTA GCC TCA AGT AGG AGA CAC AAG AGA 336 Asn lie Arg Pro Val Gin Ser Val Ala Ser Gly Arg Arg His Lys Arg
100 105 110
TTT GCG GGA GTT GTC CTG GCA GGT GCG GCC CTA GGC GTT GCC ACA GCT 384 Phe Ala Gly Val Val Leu Ala Gly Ala Ala Leu Gly Val Ala Thr Ala
115 120 125
GCT CAG ATA ACA GCC GGC ATT GCA CTT CAC CAG TCC ATG CTG AAC TCT 432 Ala Gin lie Thr Ala Gly lie Ala Leu His Gin Ser Met Leu Asn Ser
130 135 140
CAA GCC ATC GAC AAT CTG AGA GCA AGC CTG GAA ACT ACT AAT CAG GCG 480 Gin Ala lie Asp Asn Leu Arg Ala Ser Leu Glu Thr Thr Asn Gin Ala 145 150 155 160
ATT GAG GCA ATC AGA CAA GCA GGG CAG GAG ATG ATA TTG GCT GTT CAG 528 lie Glu Ala He Gly Gin Ala Gly Gin Glu Met lie Leu Ala Val Gin
165 170 175
GGT GTC CAA GAC TAC ATC AAT AAT GAG CTG ATA CCG TCT ATG AAC CAA 576 Gly Val Gin Asp Tyr lie Asn Asn Glu Leu lie Pro Ser Met Asn Gin
180 185 190
CTA TCT TGT GAT TTA ATC GGC CAG AAG CTA GGG CTC AAA TTG CTC AGA 624 Leu Ser Cys Asp Leu lie Gly Gin Lys Leu Gly Leu Lys Leu Leu Arg
195 200 205
TAC TAT ACA GAA ATC CTG TCA TTA TTT GGC CCC AGC CTA CGG GAC CCC 672 Tyr Tyr Thr Glu He Leu Ser Leu Phe Gly Pro Ser Leu Arg Asp Pro
210 215 220
ATA TCT GCG GAG ATA TCC ATC CAG GCT TTG AGC TAT GCG CTT GGA GGA 720 lie Ser Ala Glu lie Ser lie Gin Ala Leu Ser Tyr Ala Leu Gly Gly 225 230 235 240
GAT ATC AAT AAG GTG TTA GAA AAG CTC GGA TAC AGT GGA GGT GAT TTA 768 Asp lie Asn Lys Val Leu Glu Lys Leu Gly Tyr Ser Gly Gly Asp Leu
245 250 255
CTG GGC ATC TTA GAG AGC AGA GGA ATA AAG GCC CGG ATA ACT CAC GTC 816 Leu Gly lie Leu Glu Ser Arg Gly lie Lys Ala Arg lie Thr His Val
260 265 270 GAC ACA GAG TCC TAC TTC ATT GTA CTC AGT ATA GCC TAT CCG ACG CTG 864
Asp Thr Glu Ser Tyr Phe lie Val Leu Ser lie Ala Tyr Pro Thr Leu
275 280 285
TCC GAG ATT AAG GGG GTG ATT GTC CAC CGG CTA GAG GGG GTC TCG TAC 912
Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Arg Leu Glu Gly Val Ser Tyr
290 295 300
AAT ATA GGC TCT CAA GAG TGG TAT ACC ACT GTG CCC AAG TAT GTT GCA 960
Asn lie Gly Ser Gin Glu Trp Tyr Thr Thr Val Pro Lys Tyr Val Ala 305 310 315 320
ACC CAG GGG TAC CTT ATC TCG AAT TTT GAT GAG TCA TCG TGT ACT TTC 1008
Thr Gin Gly Tyr Leu lie Ser Asn Phe Asp Glu Ser Ser Cys Thr Phe
325 330 335
ATG CCA GAG GGG ACT GTG TGC AGC CAA AAT GCC TTG TAC CCG ATG AGT 1056
Met Pro Glu Gly Thr Val Cys Ser Gin Asn Ala Leu Tyr Pro Met Ser
340 345 350
CCT CTG CTC CAA GAA TGC CTC CGG GGG TCC ACC AAG TCC TGT GCT CGT 1104
Pro Leu Leu Gin Glu Cys Leu Arg Gly Phe Thr Lys Ser Cys Ala Arg
355 360 365
ACA CTC GTA TCC GGG TCT TTT GGG AAC CGG TTC ATT TTA TCA CAA GGG 1152
Thr Leu Val Ser Gly Ser Phe Gly Asn Arg Phe lie Leu Ser Gin Gly
370 375 380
AAC CTA ATA GCC AAT TGT GCA TCA ATC CTC TGC AAG TGT TAC ACA ACA 1200
Asn Leu lie Ala Asn Cys Ala Ser lie Leu Cys Lys Cys His Thr Thr 385 390 395 400
GGA ACG ATC ATT AAT CAA GAC CCT GAC AAG ATC CTA ACA TAC ATT GCT 1248
Gly Thr lie lie Asn Gin Asp Pro Asp Lys lie Leu Thr Tyr lie Ala
405 410 415
GCC GAT CAC TGC CCG GTG GTC GAG GTG AAC GGT GTG ACC ATC CAG GTC 1296
Asp Asp His Cys Pro Val Val Glu Val Asn Gly Val Thr lie Gin Val
420 425 430
GGG AGC AGG AGG TAT CCG GAC GCA GTG TAC TTG CAC AGA ATT GAC CTC 1344
Gly Ser Arg Arg Tyr Pro Asp Ala Val Tyr Leu His Arg lie Asp Leu
435 440 445 GGT CCT CCC ATA TCA TTG GAG AGG TTG GAC GTG GGG ACG AAT CTG GGG 1392 Gly Pro Pro lie Ser Leu Glu Arg Leu Asp Val Gly Thr Asn Leu Gly
450 455 460
AAT GCA ATT GCT AAG TTG GAG GAT GCC AAA GAA TTG TTG GAG TCA TCG 1440 Asn Ala lie Ala Lys Leu Glu Asp Ala Lys Glu Leu Leu Glu Ser Ser 465 470 475 480
GAC CAG ATA TTG AGG AGT ATG AAA GGT TTA TCG AGC ACT AGC ATA GTT 1488 Asp Gin lie Leu Arg Ser Met Lys Gly Leu Ser Ser Thr Ser lie Val
485 490 495
TAC ATC CTG ATT GCA GTG TGT CTT GGG GGG TTG ATA GGG ATC CCC GCT 1536 Tyr lie Leu lie Ala Val Cys Leu Gly Gly Leu lie Gly lie Pro Ala
500 505 510
TTA ATA TGT TGC TGC AGG GGG CGT TGT AAC AGA AAG GGA GAG C GTT 1584 Leu lie Cys Cys Cys Arg Gly Arg Cys Asn Arg Lys Gly Glu Gin Val
515 520 525
GGT ATG TCA AGA CCA GGC CTA AAG CCT GAT CTT ACA GGG ACA TCA AAA 1632 Gly Met Ser Arg Pro Gly Leu Lys Pro Asp Leu Thr Gly Thr Ser Lys
530 535 540
TCC TAT GTA AGG TCG CTC TGA 1653 Ser Tyr Val Arg Ser Leu ***
545 550
配列番号 ： 2 0
配列の長さ ： 5 5 0
配列の型：ア ミ ノ酸
トポロジー ： 一本鎖
配列の種類 ： ペプチ ド （ F タンパク）
起源
生物名 ： 麻 ウイノレス (meas l es v i rus) 株名 ： 強毒麻疹ウィルス N A株 配列
Met Gly Leu Lys Val Asn Val Ser Ala lie Leu Met Ala Val Leu Leu
1 5 10 15
Thr Leu Gin Thr Pro Thr Gly Gin He His Trp Gly Asn Leu Ser Lys
20 25 30 lie Gly Val Val Gly lie Gly Ser Ala Ser Tyr Lys Val Met Thr Arg
35 40 45
Ser Ser His Gin Ser Leu Val lie Lys Leu Met Pro Asn lie Thr Leu
50 55 60
Leu Asn Asn Cys Thr Arg Val Glu He Ala Glu Tyr Arg Arg Leu Leu 65 70 75 80
Arg Thr Val Leu Glu Pro lie Arg Asp Ala Leu Asn Ala Met Thr Gin
85 90 95
Asn lie Arg Pro Val Gin Ser Val Ala Ser Ser Arg Arg His Lys Arg
100 105 110
Phe Ala Gly Val Val Leu Ala Gly Ala Ala Leu Gly Val Ala Thr Ala
115 120 125
Ala Gin lie Thr Ala Gly lie Ala Leu His Gin Ser Met Leu Asn Ser
130 135 140
Gin Ala lie Asp Asn Leu Arg Ala Ser Leu Glu Thr Thr Asn Gin Ala 145 150 155 160 lie Glu Ala He Arg Gin Ala Gly Gin Glu Met He Leu Ala Val Gin
165 170 175
Gly Val Gin Asp Tyr lie Asn Asn Glu Leu lie Pro Ser Met Asn Gin
180 185 190
Leu Ser Cys Asp Leu lie Gly Gin Lys Leu Gly Leu Lys Leu Leu Arg
195 200 205
Tyr Tyr Thr Glu He Leu Ser Leu Phe Gly Pro Ser Leu Arg Asp Pro
210 215 220
lie Ser Ala Glu lie Ser He Gin Ala Leu Ser Tyr Ala Leu Gly Gly 225 230 235 240
Asp lie Asn Lys Val Leu Glu Lys Leu Gly Tyr Ser Gly Gly Asp Leu
245 250 255
Leu Gly lie Leu Glu Ser Arg Gly lie Lys Ala Arg lie Thr His Val
260 265 270
Asp Thr Glu Ser Tyr Phe He Val Leu Ser lie Ala Tyr Pro Thr Leu
275 280 285
Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Arg Leu Glu Gly Val Ser Tyr
290 295 300
Asn lie Gly Ser Gin Glu Trp Tyr Thr Thr Val Pro Lys Tyr Val Ala 305 310 315 320
Thr Gin Gly Tyr Leu lie Ser Asn Phe Asp Glu Ser Ser Cys Thr Phe
325 330 335
Met Pro Glu Gly Thr Val Cys Ser Gin Asn Ala Leu Tyr Pro Met Ser
340 345 350
Pro Leu Leu Gin Glu Cys Leu Arg Gly Phe Thr Lys Ser Cys Ala Arg
355 360 365
Thr Leu Val Ser Gly Ser Phe Gly Asn Arg Phe lie Leu Ser Gin Gly
370 375 380
Asn Leu lie Ala Asn Cys Ala Ser He Leu Cys Lys Cys Tyr T r Thr 385 390 395 400
Gly Thr He lie Asn Gin Asp Pro Asp Lys lie Leu T r Tyr lie Ala
405 410 415 Ala Asp His Cys Pro Val Val Glu Val Asn Gly Val Thr lie Gin Val
420 425 430
Gly Ser Arg Arg Tyr Pro Asp Ala Val Tyr Leu His Arg lie Asp Leu
435 440 445
Gly Pro Pro lie Ser Leu Glu Arg Leu Asp Val Gly Thr Asn Leu Gly
450 455 460
Asn Ala lie Ala Lys Leu Glu Asp Ala Lys Glu Leu Leu Glu Ser Ser 465 470 475 480
Asp Gin lie Leu Arg Ser Met Lys Gly Leu Ser Ser Thr Ser lie Val
485 490 495
Tyr lie Leu lie Ala Val Cys Leu Gly Gly Leu lie Gly lie Pro Ala
500 505 510
Leu lie Cys Cys Cys Arg Gly Arg Cys Asn Arg Lys Gly Glu Gin Val
515 520 525
Gly MET Ser Arg Pro Gly Leu Lys Pro Asp Leu Thr Gly Thr Ser Lys
530 535 540
Ser Tyr Val Arg Ser Leu
545 550

Claims

請 求 の 範 囲
1 . 下記の （ I ) 変異麻疹ウィルス Hタ ンパク抗原及び （ I I ) 変異麻疹ウィルス Fタ ンパク抗原よ り なる群から選ばれ る少な く と も 1種のタ ンパク抗原を含有する変異麻疹ウィル ス抗原。
( I ) 配列番号 2又は配列番号 1 0 に記載の全長 6 1 7個の アミ ノ酸の配列のァ ミ ノ酸番号で特定される、
( a ) 第 1 〜 6 1 7番の全長 ；
( b ) 第 9 3〜 6 1 6番の断片 ；
( c ) 第 1 7 6〜 3 1 6番の断片 ；
( d ) 第 1 7 2〜 1 7 8番、 第 2 3 8〜 2 4 4番、 第 2 7 7〜 2 8 2番、 又は第 3 0 1 〜 3 0 7番の断片 ；
( e ) 第 1 7 4番、 第 1 7 6番、 第 2 4 3番、 第 2 7 9番、 又は第 3 0 2番のア ミ ノ酸を含み、 且つ該ア ミ ノ酸に隣接す る少な く と も 6個のア ミ ノ酸の配列からなる断片 ； 及び
( f ) 第 9 3番、 第 1 5 7番、 第 1 6 9番、 第 1 7 5番、 第 2 1 1番、 第 2 5 2番、 第 2 7 6番、 第 2 8 4番、 第 2 8 5番、 第 2 9 6番、 第 3 1 6番、 第 3 3 8番、 第 3 8 7番、 第 4 1 6番、 第 4 5 5番、 第 4 8 1番、 第 4 8 4番、 第 5 0 5番、 第 5 4 6番、 第 5 9 2番、 第 6 0 0番、 第 6 0 3番、 又は第 6 1 6番のア ミ ノ酸を含み、 且つ該ア ミ ノ酸に隣接す る少なく と も 6個のア ミ ノ酸の配列からなる断片よ り なる群 から選ばれる少なく と も 1種の変異麻疹ウィルス Hタ ンパク 抗原。
( I I ) 配列番号 1 8又は配列番号 2 0 に記載の全長 5 5 0 個のァ ミ ノ酸の配列のアミ ノ酸番号で特定される、
( g ) 第 1 〜 5 5 0番の全長 ； 及び
( h ) 第 1 1番、 第 5 2番、 第 1 0 7番、 第 1 6 5番、 第 3 9 8番、 第 4 1 7番、 又は第 5 2 3番のア ミ ノ酸を含み、 且つ該ア ミ ノ酸に隣接する少なく と も 6個のア ミ ノ酸の配列 からなる断片よ リ なる群ら選ばれる少なく と も 1種の変異麻 疹ゥイノレス F タ ンパク抗原。
2. 下記の （ I ) 変異麻疹ウィルス Hタ ンパク抗原をコー ド する遺伝子及び （ I I ) 変異麻疹ウィルス Fタ ンパク抗原を コー ドする遺伝子よ リ なる群から選ばれる少な く と も 1種の 遺伝子を含有する変異麻疹ウィルス遺伝子。
( I ) 配列番号 2又は配列番号 1 0 に記載の全長 6 1 7個の ア ミ ノ酸の配列のア ミ ノ酸番号で特定される、
( a ) 第 1 〜 6 1 7番の全長をコー ドする遺伝子 ；
( b ) 第 9 3〜 6 1 6番の断片をコー ドする遺伝子 ； ( c ) 第 1 7 6〜 3 1 6番の断片をコー ドする遺伝子 ； ( d ) 第 1 7 2〜 1 7 8番、 第 2 3 8〜 2 4 4番、 第 2 7
7〜 2 8 2番、 又は第 3 0 ：! 〜 3 0 7番の断片をコー ドする 遺伝子 ； ( e ) 第 1 7 4番、 第 1 7 6番、 第 2 4 3番、 第 2 7 9番、 又は第 3 0 2番ア ミ ノ酸を含み、 且つ該ア ミ ノ酸に隣接する 少なく と も 6個のア ミ ノ酸の配列からなる断片をコー ドする 遺伝子 ； 及び
( f ) 第 9 3番、 第 1 5 7番、 第 1 6 9番、 第 1 7 5番、 第 2 1 1番、 第 2 5 2番、 第 2 7 6番、 第 2 8 4番、 第 2 8 5番、 第 2 9 6番、 第 3 1 6番、 第 3 3 8番、 第 3 8 7番、 第 4 1 6番、 第 4 5 5番、 第 4 8 1 番、 第 4 8 4番、 第 5 0 5番、 第 5 4 6番、 第 5 9 2番、 第 6 0 0番、 第 6 0 3番、 又は第 6 1 6番のア ミ ノ酸を含み、 且つ該ア ミ ノ酸に隣接す る少な く と も 6個のア ミ ノ酸の配列からなる断片をコー ドす る遺伝子よ り なる群ら選ばれる少なく と も 1 種の変異麻疹ゥ ィルス Hタ ンパク抗原をコー ドする遺伝子。
( I I ) 配列番号 1 8又は配列番号 2 0 に記載の全長 5 5 0 個のア ミ ノ酸の配列のア ミ ノ酸番号で特定される、
( g ) 第 1 5 5 0番の全長をコー ドする遺伝子 ； 及び ( h ) 第 1 1 番、 第 5 2番、 第 1 0 7番、 第 1 6 5番、 第 3 9 8番、 第 4 1 7番、 又は第 5 2 3番のア ミ ノ酸を含み、 且つ該ア ミ ノ酸に隣接する少なく と も 6個のア ミ ノ酸の配列 からなる断片をコー ドする遺伝子よ リ なる群ら選ばれる少な く と も 1種の変異麻疹ウィルス F タ ンパク抗原をコー ドする 退 fcナ。
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